Стерилизация насыщенным паром под давлением. Стерилизация насыщенным паром под давлением — автоклавирование. Смотреть что такое "Стерилизация паром." в других словарях

Дан­ный способ стерилизации питательных сред является наиболее надежным и чаще всего применяемым. Он основан на нагревании материала насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного. Известно, что темпера­тура пара возрастает при повышении его давления (табл. 4.1).

Совместное действие высокой тем­пературы и пара обеспечивает особую эффективность этого процесса. При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Установле­но, что споры большинства микроор­ганизмов не выдерживают и 5-минутную экспозицию в насыщенном паре при 121 °С. Лишь споры некоторых по­чвенных бактерий погибают при 1 ати только через 30 мин.

Таблица 4.1 Температура насыщенного пара при разных давлениях

ати* - избыточное атмосферное давление

Рис. 4.1. Схема автоклава:

1 - стерилизационная камера; 2 - кран для выхода воздуха; 3 - манометр; 4- предохранительный клапан; 5- водопаровая ка­мера; 6 - воронка для заполнения автоклава водой; 7 - водо­мерная трубка; 8 - отверстия для поступления пара в стерили-зационную камеру; 9 - защитный кожух; 10 - крышка автокла­ва; 11 - подставка для размещения стерилизуемых предметов

Стерилизацию паром под давлением осуществляют в специальных гермети­чески закрывающихся толстостенных аппаратах - автоклавах. Автоклавы раз­нообразны по форме, размерам, рабочему давлению, конструкции и другим показателям. Они могут быть с ручным управлением, полуавтоматические и автоматические, но, поскольку все автоклавы предназначены для выполнения одной и той же задачи - стерилизации, основной принцип их устройства один и тот же.

На рис. 4.1 показана схема вертикального автоклава с ручным у правлением. Автоклав представляет собой металлический двустенный резервуар, способный выдержать вы­сокое давление. Его внутренняя часть является стерилизационной камерой (7). В нее помещают стерилизуемый материал. Стерилизационная камера снабжена краном (2) для выхода воздуха, манометром (3) для определения давления пара и предохрани­тельным клапаном (4) для выхода пара при повышении давления сверх необходимого и для предотвращения разрыва автоклава. Пространство между стенками, называемое водопаровой камерой (5), заполняется через воронку (6) водой (лучше дистиллиро­ванной, чтобы не образовывалась накипь) до определенного уровня, который отме­чен на специальной водомерной трубке автоклава (7). Выше этого уровня воду нали­вать не следует, так как при бурном кипении вода может попасть в трубку, ведущую к манометру и исказить его показания. В верхней части внутренней стенки водопаровой камеры имеются отверстия (8), через которые пар поступает в стерилизационную ка­меру. Паровой котел сверху покрыт защитным кожухом (9). Он предохраняет котел от механических повреждений, а работающего около автоклава - от ожогов. Для созда­ния герметичности автоклав плотно закрывают массивной крышкой (10) с резиновой прокладкой. Стерилизуемые предметы помещают на специальную подставку (11).

Процесс автоклавирования.

Отдельные операции процесса стерилизации в автокла­вах разных типов могут быть несколько различными. Соответственно несколько разли­чается и техника работы с ними, однако общий принцип проведения стерилизации в разных автоклавах одинаковый.

Перед работой осматривают автоклав и контрольно-измерительную аппаратуру. При наличии любой неисправности (смещение стрелки манометра с нуля, трещина на во­домерной трубке и др.) работать с прибором нельзя. После осмотра автоклава в водопаровую камеру наливают воду до верхней отметки на водомерной трубке. В стерилиза­ционную камеру на специальную подставку из дерева помещают стерилизуемый мате­риал. Предметы следует размещать не слишком плотно, так как пар должен свободно проходить между ними, иначе они не нагреются до нужной температуры и могут остаться нестерильными. Загрузив стерилизационную камеру, устанавливают и плотно завинчивают крышку (дверь) автоклава. Затем открывают кран, соединяющий стери­лизационную камеру с наружным воздухом, и включают нагрев.

После начала парообразования удаляют воздух из стерилизационной камеры. Это необходимое условие стерилизации, так как при одном и том же давлении температура чистого пара выше температуры смеси пара и воздуха. Если в автоклаве останется воздух, материал может не простерилизоваться. Наиболее простой и очень распространенный способ освобождения автоклава от воздуха - вытеснение воздуха паром. Пар и конденсат отводят либо в сосуд с водой, либо в специальное устройство, соединенное с канализацией. В первом случае на кран (2) надевают резиновый шланг, который опускают в воду. Началом продувания считается появление устойчивой непрерывной струи чистого пара. Пока в автоклаве еще имеется воздух, смесь воздуха и пара, прохо­дя через воду, издает сильный треск. Чистый пар выходит с равномерным шипящим звуком. Его пропускают в течение 10 мин. В целом вся операция с момента появления пара с воздухом должна занимать не более 15 - 20 мин, иначе в автоклаве останется мало воды и он может испортиться. Чтобы уменьшить расход пара (воды), кран откры­вают не полностью. Степень открывания крана устанавливают на практике при эксплу­атации автоклава. В наиболее совершенных автоклавах воздух из стерилизационной ка­меры удаляют с помощью вакуумного насоса.

Когда воздух вытеснен, закрывают пароотводной кран, и давление пара доводят до показания, соответствующего режиму стерилизации. Режим автоклавирования часто выражают в единицах избыточного давления, указывая при этом длительность его под­держания, например стерилизация при 1 ати в течение 20 мин. На манометре автокла­ва обозначается именно то избыточное давление, которое создается в автоклаве сверх нормального. Нередко режим автоклавирования характеризуется температурой и вре­менем. Как только стрелка манометра дойдет до указателя определенного дополнитель­ного давления и, следовательно, температура пара достигнет соответствующего значе­ния, этот уровень давления пара поддерживают в течение необходимого времени пу­тем ручного или автоматического регулирования подачи пара. В автоматических авто­клавах подачу пара регулируют электроконтактным манометром.

По окончании времени стерилизации выключают нагрев автоклава. Давление в ав­токлаве постепенно падает и сравнивается с атмосферным. Лишь после этого открыва­ют кран, выводящий пар. Преждевременное открывание крана недопустимо, так как перегретые среды при резком снижении давления сразу же бурно закипают, смачива­ют и даже иногда выталкивают ватные пробки, что нарушает стерильность материала. Когда пар выйдет, открывают крышку (дверь) автоклава, соблюдая при этом осто­рожность во избежание ожога паром лица и рук. Удаление пара из стерилизационной камеры автоклавов, оснащенных вакуумным насосом, осуществляют с помощью на­соса. Одновременно происходит подсушивание стерильного материала.

Поскольку автоклав работает при высоких давлениях и температурах, неправильное обращение с ним может быть причиной несчастных случаев. Установка автоклава и работа с ним производятся при точном и строгом выполнении правил, указанных в прилагаемой к автоклаву инструкции. К работе допускаются только подготовленные лица, имеющие специальное разрешение.

При необходимости проконтролировать температуру в автоклаве пользуются раз­ными веществами, плавящимися при определенной температуре. Эти вещества пред­варительно смешивают с нейтральными красителями и помещают в автоклав до нача­ла стерилизации. В качестве индикаторов температуры используют фенантрен (темпе­ратура плавления 98-100°С), бензаурин (115°С), серу (119 °С), бензойную кислоту (121 - 122 °С), мочевину (132°С), глюкозу (146°С), тиомочевину (180°С), аскорбино­вую кислоту (187- 192 °С). На 100 г этих веществ берут 0,01 г красителя (фуксин, метиленовый синий), тщательно смешивают, рассыпают в стеклянные трубочки с одинако­вым диаметром и толщиной стенок, запаивают и в вертикальном положении расклады­вают между стерилизуемым материалом в автоклаве. По достижении в сосуде соответ­ствующей температуры эти вещества расплавляются и окрашиваются в цвет добавлен­ного в них красителя.

Подготовка сред к стерилизации.

При автоклавировании 3 - 5 % жидкости теряется в ре­зультате испарения, поэтому рекомендуется в приготавливаемые среды добавлять сверх объе­ма примерно 5 % дистиллированной воды. Тог­да после стерилизации среда (раствор) будет иметь требуемую концентрацию.

Среды обычно стерилизуют в пробирках, колбах, бутылях. Емкости заполняют средой не более чем на половину их высоты, чтобы пре­дотвратить смачивание пробок. Сосуды со сре­дами закрывают ватными пробками. Они предо­храняют среду от заражения микроорганизма­ми, находящимися в окружающем воздухе.

Пробки должны быть достаточно плотными, чтобы выполнять эту функцию, но с достаточно равномерным распределением волокон ваты, так как через них происходит газообмен культур с окружающей средой. Слишком плотные пробки затрудняют снабжение культур воздухом.

Для приготовления пробки плоский кусок ваты, взятый вдоль волокна, скаты­вают валиком. Чтобы придать пробке прочность, ее прокатывают между ладо­нью и чистым стеклом, лежащим на столе. Длина пробки для обычной пробир­ки примерно 4 см. Пробка должна входить в пробирку на 1,5 - 2,0 см (рис. 4.2). Для сохранения формы пробку вынимают из горлышка, слегка вращая. Удобно обернуть пробку чистой марлевой салфеткой.

Перед стерилизацией пробки можно прикрыть бумажными колпачками. Нельзя обертывать пробки сосудов, которые будут стерилизоваться в автокла­ве, целлофаном, фольгой или другими материалами, не пропускающими пар, так как пар должен проникать через пробку в сосуд, иначе среды не нагреются до нужной температуры и не простерилизуются. При использовании стеклян­ных, резиновых, корковых и других пробок их завертывают в двойной слой оберточной бумаги и стерилизуют привязанными к склянке, закрытой ватной пробкой. Пробки в сосуде меняют стерильно около пламени горелки.

Паровой стерилизации подвергаются изделия медицинского назначения, соприкасающиеся с раневой поверхностью, кровью или инъекционными препаратами и отдельные виды изделий, которые в процессе эксплуатации соприкасаются со слизистой оболочкой и могут вызвать ее повреждение. Это изделия из текстиля (хирургическое белье и перевязочный материал), резины (перчатки, трубки, бужи, катетеры и т.п.), металла (хирургический инструментарий) и стекла.

Паровые стерилизаторы различаются по конструкции, размерам, рабочему давлению и другим показателям. Применяемые в медицинских учреждениях паровые стерилизаторы относятся к аппаратам, работающим под избыточным давлением пара до 2-2,5 0,2-0,25 мПа (кгс/см 2 .). Более часто используются круглые и прямоугольные паровые стерилизаторы. В вертикальных аппаратах загрузку и выгрузку стерилизуемых материалов проводят сверху. В горизонтальные стерилизаторы, оборудованные одной дверью, загрузку и выгрузку производят с одной стороны. Эти аппараты называют односторонними, или непроходными. Стерилизаторы с двумя дверями, расположенными одна против другой, называют проходными, или двусторонними. Такие аппараты дают возможность разделить стеной стерилизационное помещение на две половины: подготовительную (грязную) и асептическую (чистую).

Медицинские переносные паровые стерилизаторы выпускаются нескольких типов, различающихся размерами, объемом, а следовательно и производительностью, они состоят из трех вертикально установленных стальных цилиндров, размещенных один в другом. Внутренний цилиндр с нижним выпуклым днищем является стерилизационной камерой, в которую загружаются подлежащие стерилизации предметы. Средний цилиндр называется водопаровой камерой, в которую заливается вода, превращающаяся при нагревании в пар. Водопаровая камера закрывается чугунной крышкой, вращающейся на петлях. Водопаровая и стерилизационная камеры сообщаются между собой через выемки, сделанные в бортах стерилизационной камеры.

Наружный цилиндр - кожух - защищает водопаровую камеру от тепловых потерь. Паровые стерилизаторы снабжаются манометром, предохранительным клапаном. Для заливания воды в водопаровую камеру имеется воронка. Под днищем водопаровой камеры расположен источник нагрева воды. Пар, получающийся в результате кипения воды, поступает в верхнюю часть стерилизационной камеры. Перед началом прогревания краник на отводящей трубе остается открытым, и через трубку выходят воздух и пар. Затем отводящая трубка перекрывается краником, давление повышается и вещи, находящиеся в стерилизаторе, прогреваются паром.

Вертикальные паровые стерилизаторы на электронагреве состоят из стерилизационной камеры, водопаровой камеры и защитного кожуха. Стерилизационная камера сообщается с водопаровой через трубку, на которой имеется запорный вентиль. При помощи этого вентиля стерилизационная камера может быть отключена от водопаровой. В водопаровую камеру вмонтированы электронагреватели. Давление в водопаровой камере поддерживается автоматически. Аппарат имеет водоструйный инжектор, при помощи которого в стерилизаторе создается разрежение, т.е. давление становится меньше атмосферного. Для автоматического поддержания в водопаровой камере давления пара она соединяется с контактным манометром при помощи сифонной трубки с трехходовым краном. На трубке, соединяющей водопаровую камеру со стерилизационной, установлен пружинный предохранительный клапан.

Стерилизационная камера, в которой может быть давление больше или меньше атмосферного, соединена с мановакуумметром, указывающим как давление, так и разрежение в ней. Уровень воды в водопаровой камере определяется при помощи водоуказательной колонки. В верхней части колонки расположена воронка для заполнения водой. Камера имеет отводящую трубку, которая выходит за пределы кожуха. На трубке находится запорный вентиль. Управление электропитанием размещено на отдельном щите.

Горизонтальные паровые стерилизаторы состоят из тех же основных элементов, т.е. из парового котла и стерилизационной части. Существуют шкафные и другие конструкций паровых стерилизаторов различной вместимости. Наряду с простейшими конструкциями в настоящее, время существуют паровые стерилизаторы, представляющие собой сложные автоматические устройства, оснащенные различными приборами и аппаратами, в которых применяют различные системы для удаления воздуха и одновременного прогрева стерилизационной камеры, механизмы для автоматической загрузки и выгрузки стерилизуемых предметов, специальную контрольную и регистрирующую аппаратуру. Полезный объем стерилизаторов составляет 4, 10, 12, 30, 50, 75, 100, 280, 400, 560, 760 дм 3 и более.

В стерилизационную камеру стерилизуемые предметы закладывают в стерилизационных коробках (биксах) или в двойном слое хлопчатобумажной ткани (бязь, полотно и т. п.) или в растительном пергаменте марок А и Б, или в бумаге мешочной непроницаемой и влагопрочной, полиэтиленовой пленке высокой прочности, или в поливинилхлоридном пластикате. Стерилизационные коробки бывают разных размеров и формы (круглой или квадратной) и предназначены не только для стерилизации в них перевязочных материалов, белья и инструментов, но и для последующего хранения простерилизованных изделий. Стерилизационные коробки выпускаются с фильтрами и без фильтров. При применении последних перед укладкой в них стерилизуемых изделий коробку изнутри выстилают одним слоем хлопчатобумажной ткани.

Каждый паровой стерилизатор должен иметь исправный манометр и предохранительный клапан. На шкале манометра должна быть красная черта или взамен ее прикреплена металлическая пластинка, окрашенная в красный цвет, установленная на делении, соответствующем разрешенному рабочему давлению в стерилизаторе.

Эффективность стерилизации зависит от правильного режима работы стерилизатора и плотности укладки. Количество стерилизуемого материала не должно превышать норм, указанных в соответствующих инструктивно-методических указаниях.

Процесс стерилизации паровым методом слагается из ряда этапов. Сначала водопаровую камеру заполняют водой, затем в стерилизационную камеру закладывают вещи, плотно закрывают крышкой, вводят в действие источник нагрева (или готовый пар), удаляют из камеры воздух, чаще всего вытесняя его паром. После этого доводят давление пара до заданного (по инструкции). Этот момент считается началом стерилизационной выдержки (экспозиции). При давлении пара (свыше атмосферного) 0,11 мПа (1,1 кгс/см 2) и температуре 120±2°С выдержка должна быть 45 мин, а при давлении 0,2 мПа (2 кгс/см 2) и температуре 132±2°С - 20 мин. По истечении выдержки стерилизация считается законченной. Давление в аппарате снижают путем выпуска пара. Паровой стерилизатор после окончания цикла стерилизации открывают, стерилизационные коробки вынимают и помещают на стол, покрытый стерильной простыней. Боковые отверстия в коробках после стерилизации немедленно закрывают. Второй простыней закрывают горячие коробки. Запрещается выдавать простерилизованный материал до его полного охлаждения.

Срок хранения простерилизованного материала в стерилизованных коробках с фильтром - 20 сут, без фильтров - до 3 сут. В других видах упаковки (пергамент, бязь) также до 3 сут.

Контроль работы паровых стерилизаторов. Все работающие паровые стерилизаторы должны периодически подвергаться техническому и бактериологическому контролю. При проведении контроля проверяют знание персоналом, работающим на стерилизаторе, его конструкции, правильность записи в журнале работы парового стерилизатора, а также санитарное состояние помещения, где расположен стерилизующий аппарат. Технический контроль осуществляют в соответствии с Правилами по эксплуатации и технике безопасности при работе на автоклавах.

Проверку температурного режима проводят путем измерения температуры в стерилизуемом материале в начале или конце стерилизационной выдержки. В первом случае работу прекращают через 7 мин после начала выдержки, во втором - сразу после окончания стерилизации. Для предупреждения дополнительного прогрева материалов, находящихся в нижней части камеры, пар выпускают через трехходовой кран или через предохранительный клапан. Для измерения температуры используют максимальные термометры, которые закладывают в стерилизационные коробки внутри стерилизуемых вещей. В каждую коробку закладывают по 2-3 термометра (в зависимости от ее размера). Коробки с термометрами размещают в различных местах стерилизационной камеры. Отклонения в показаниях термометров допускаются на ±2°С по сравнению с температурой, при которой проводилась стерилизация.

Биотестами для бактериологического контроля стерилизации в паровых стерилизаторах служат пробы почвы - садовой земли, содержащие споры сапрофитов, выдерживающие воздействие пара с температурой 120°С в течение 3-5 мин. Пронумерованные пробы почвы, завернутые в пергаментную или фильтровальную бумагу, закладывают в стерилизационных коробках в стерилизуемый материал вместе с максимальными термометрами. В каждую коробку помещают не менее трех проб, по две пробы закладывают вне коробок в верхней и нижней части стерилизационной камеры. Режим стерилизации при контроле регистрируют в протоколе, где записывают место расположения проб земли, максимальных термометров и их показания, а также результаты бактериологических исследований.

По окончании стерилизации пробы земли в тот же день отправляют в бактериологическую лабораторию. Коробки со стерилизуемым материалом, где находились термометры и пробы земли, подлежат повторной стерилизации. При наличии роста споровой культуры хотя бы в одной пробе бактериологический контроль повторяют. Если и при повторном контроле имеются нестерильные пробы, прекращают использовать данный паровой стерилизатор до установления и устранения причин его некачественной работы.

Контроль работы паровых стерилизаторов в централизованных стерилизационных отделениях проводят не реже двух раз в год; в лечебно-профилактических учреждениях при отсутствии в них стерилизационных отделений, а также в детских учреждениях не реже одного раза в год. Контролируют выборочно 30% общего числа эксплуатируемых стерилизаторов. При наличии в учреждениях одного или двух аппаратов контролю подлежат оба стерилизатора.

Кроме того, силами самого учреждения, где расположены паровые стерилизаторы, ежедневно проводят их проверку, закладывая в стерилизационную коробку химический индикатор - бензойную кислоту, имеющую точку плавления, близкую к температуре пара в стерилизаторе (120-121 °С). Бензойную кислоту с фуксином (краситель) насыпают в количестве 0,3-0,5 г в стеклянные трубочки длиной 30-40 мм, диаметром 4-5 мм, концы которых запаивают или закрывают ватной пробкой. Соотношение компонентов: на 100 г бензойной кислоты - 10 г фуксина.
читайте так-же

Стерилизация сухим жаром

Фламбирование, или прокаливание

Методы стерилизации

Стерилизация , или обеспложивание (от лат. sterilis - бесплодный), - это полное уничтожение клеток микроорганизмов в питательных средах, посуде и пр.

Известно несколько методов стерилизации. Чаще всего применяют стерилизацию нагреванием.

Прокаливать можно непосредственно перед употреблением платиновые петли, иглы, шпатели, мелкие металлические предметы (ножницы, ланцеты, пинцеты), а также стеклянные палочки, предметные, покровные стекла и т. д.

Ее применяют для обработки посуды и сухих материалов, например крахмала, мела. При этом стерилизуемым объект выдерживают при 170 °С в течение 2 ч (считая с того момента, как установлена необходимая температура) в печи Пастера (рис. 8, а) или в электросушильных шкафах. Поднимать температуру выше 170 °С не рекомендуется: ватные пробки и бумага начинают разрушаться (буреют, становятся ломкими).

Перед стерилизацией стеклянную посуду закрывают ватными пробками и обертывают бумагой. Чашки, пробирки, пипетки, вату, марлю заворачивают в бумагу или помещают в особые футляры и пеналы, в которых стерильная посуда может храниться после стерилизации.

По окончании стерилизации шкаф открывают только после того, как температура снизится до комнатной, иначе стекло может лопнуть.

Текучим паром (100 °С) обрабатывают предметы, портящиеся от сухого жара, и некоторые питательные среды, не выдерживающие более высокой температуры (среды с углеводами, МПЖ, молоко). Проводят стерилизацию в кипятильнике Коха(рис. 8, б) по 30 мин в течение 3 сут ежедневно. Такая стерилизация называется дробной .

Кипятильник Коха - высокий металлический цилиндр с двойным дном, свободно закрывающийся конусообразнойкрышкой с отверстием для термометра. Снаружи цилиндр покрыт асбестом или линолеумом. На дно кипятильника наливают воду, устанавливают подставку с отверстиями дляпрохождения пара, на которую помещают стерилизуемые предметы. Продолжительность стерилизации отсчитывают с моментаинтенсивного выхода пара из-под крышки и повышениятемпературы до 100 °С.

При однократном прогреве при температуре 100°С в течение 30 мин погибают вегетативные клетки, споры же многихмикроорганизмов остаются жизнеспособными. После такого прогрева среду помещают на 24 ч в термостат при 28-30 °С. Споры, сохранившиеся при первом нагревании, успевают за это время прорасти в вегетативные формы, которые погибают при последующем нагревании. Затем эту операцию повторяют еще 2 раза.

Стерилизация текучим паром

Кипячение

Стерилизация влажным жаром

Стерилизация сухим жаром

Стерелизация (определение, способы, контроль качества стерелизации).

Стерилизация - полное освобождение какого-либо предмета от всех видов микроорганизмов, включая бактерии и их споры, грибы,вирионы, а также от прионного белка, находящихся на поверхностях, оборудовании, в пищевых продуктах и лекарствах. Осуществляется термическим, химическим, радиационным, фильтрационным методами.

При использовании этого способа стерилизации стерилизуемый объект нагревают в сушильном шкафу при температуре 180 °С в течение 20-40 мин или при 200 °С в течение 10-20 мин. Сухим жаром стерилизуют стеклянную или фарфоровую посуду, жиры, вазелин, глицерин, термоустойчивые порошки (каолин, тальк, кальция сульфат, цинка окись и т.д.). В сушильных шкафах нельзя стерилизовать водные растворы в стеклянной таре, так как вода при высоких температурах превращается в пар, и стекло может быть повреждено.

При использовании этого способа стерилизации комбинируется воздействие высокой температуры и влажности. Если сухой жар вызывает главным образом пирогенетичесое разрушение микроорганизмов, то влажный жар - коагуляцию белка, требующую участия воды. На практике стерилизация влажным паром проводится при температуре 50-150 °С и осуществляется следующими путями.

Этим способом стерилизуются резиновые предметы, хирургический (неодноразовый) инструментарий, стеклянная посуда. Применять кипячение для стерилизации инъекционных растворов не рекомендуется, так как по эффективности оно значительно уступает стерилизации парам и нередко приводит к снижению терапевтического эффекта от применения лекарственного препарата.

Текучим называется насыщенный водяной пар (без примеси воздуха), имеющий давление 760 мм рт. ст. и температуру 100 °С. Стерилизацию текучим паром осуществляют в паровом стерилизаторе или автоклаве в течение 15-60 мин в зависимости от объема раствора. Это самый распространенный метод стерилизации инъекционных растворов в аптеках.

Осуществляется в различной конструкции автоклавах. Автоклав представляет собой герметично закрывающуюся емкость, состоящую из толстостенной стерилизационной камеры и кожуха. На автоклаве имеется предохранительный клапан, обеспечивающий выход пара при избыточном давлении, и манометр. Каждый автоклав должен иметь инструкцию по эксплуатации и уходу.

Стерилизуемый объект помещают внутрь паровой камеры. Паровую камеру подвергают нагреванию. Вначале автоклав нагревают при открытом кране до тех пор, пока пар не пойдет сильной сплошной струей и не вытеснит находящийся в автоклаве воздух, который значительно снижает теплопроводность водяного пара (при содержании в водяном паре 5 % воздуха она уменьшается на 50 %). Во время нагревания автоклава после закрывания крана необходимо следить за давлением, параллельно с возрастанием которого увеличивается температура пара. Зависимость между температурой и давлением пара выражается следующим образом: 1 атм - 100 °С; 1,5 атм - 112,7 °С; 2 атм - 119,6 °С; 3 атм - 132,9 °С; 5 атм - 151,1 °С.

Автоклавирование является наиболее надежным способом стерилизации. Обычно стерилизация в автоклаве производится при 120 °С в течение 5-30 мин в зависимости от объема раствора. Этим гарантируется достаточно полная стерилизация независимо от вида микроорганизма. Таким способом стерилизуют посуду, фильтры, инструменты, водные растворы устойчивых к воздействию высокой температуры лекарственных веществ, перевязочный материал.

Общие правила. Стерилизацию паром (влажным жаром) проводят в автоклаве насыщенным паром под давлением обычно в течение 15-20 мин при температуре 121 °С. Когда давление пара повышается, возрастает его температура (табл. 6).

Таблица 6

Температура насыщенного пара при разных давлениях

* В настоящее время давление принято выражать в паскалях, 1 атм (физическая атмосфера) = 1,01325 10 5 Па - 10 2 кПа.

Контролировать температурный режим в автоклаве можно с помощью веществ, имеющих определенную точку плавления. Их помещают в автоклав в пробирках с добавлением краски (бензонафтол, температура плавления (t^) 110 °С, бензойная кислота, / пл 120 °С).

Особое внимание следует обратить на стерилизацию питательных сред. Режим автоклавирования, которое в данном случае является наиболее распространенным и эффективным методом, не должен изменять свойства среды (табл. 7).

Таблица 7

Режим стерилизации различных сред автоклавированием

Как правило, принято считать, что при давлении, атм; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 достигается определенная температура, °С; 115, 120, 127, 133 соответственно. До 2 атм давление повышают при сильном засорении материала устойчивыми к температуре формами микроорганизмов. Продолжительность стерилизации зависит от состава стерилизуемого объекта и степени его бактериального загрязнения и колеблется от 30 мин до 1 - 1,5 ч.

Эффективность стерилизации проверяют высевом на питательные среды материала, заведомо зараженного спорами. Материал выдерживают в автоклаве вместе со стерилизуемыми объектами.

Большинство автоклавов относится к гравитационным: пар движется в них сверху вниз под действием разности плотностей воздуха и пара. Весьма важны правильное приготовление стерилизуемых образцов и соответствующая загрузка автоклава.

Наиболее удобны автоматические автоклавы, оснащенные датчиками времени и автоматическими регуляторами температуры. Лабораторные автоклавы должны иметь датчики режима работы на шкалах термометра. Упаковки образцов должны располагаться свободно по отношению друг к другу, чтобы не препятствовать проникновению пара.

В зависимости от объема жидкости и числа емкостей в загрузке меняется продолжительность стерилизации (табл. 8). Она меньше для малых объемов. Таким образом, можно подобрать продолжительность циклов стерилизации по размерам и числу емкостей.

Таблица 8

Влияние объема жидкости и числа емкостей на время, необходимое для достижения температуры 121 °С в автоклаве

По окончании цикла стерилизации необходимо медленно понижать давление, строго соблюдая продолжительность охлаждения стерилизуемой питательной среды. Перед тем как открыть автоклав, необходимо убедиться, что в нем установилось давление окружающей среды, показываемое на манометре. Если открыть крышку автоклава преждевременно (раньше, чем упадет давление), могут произойти заброс воздуха внутрь, загрязнение раствора, закипание жидкости в сосудах или колбах и выталкивание из них пробок. При стерилизации колб и бутылей нужно неплотно закрывать пробки, чтобы обеспечить вентиляцию и предотвратить разбивание стекла.

Питательные среды, содержащие углеводы, стерилизуют в автоклаве при пониженном давлении (0,5 атм) и температуре 110-112 °С в течение 10-15 - 20 мин, отсчитывая время с момента достижения нужного давления.

Среды наливают не выше половины высоты сосуда (табл. 9), пробки из ваты должны быть достаточно плотными, обернутые марлей, но не целлофаном. Поверх пробки горлышко колбы накрывают газетой или пергаментом и фиксируют нитками.

Таблица 9

Уровень наполненности различных типов колб жидкостями