Metoda aspiracije mikrobiologije uzorkovanja zraka. Planiranje i kreiranje sigurnih proizvoda. Dijagnoza virusnih infekcija

Mikroorganizmi su sićušna, uglavnom jednoćelijska bića koja su rasprostranjena u prirodi. Nalaze se u svim sredinama (vazduh, tlo, voda), u tijelu ljudi i životinja, te u biljkama.

Kvalitativna raznolikost i broj mikroorganizama zavise prvenstveno od nutritivnih jedinjenja. Međutim, bitni su i vlaga, temperatura, aeracija, izloženost sunčevoj svjetlosti i drugi faktori.

Metode sanitarno-mikrobioloških istraživanja prirodne sredine omogućavaju vam da identifikujete prisustvo patogenih mikroorganizama, odredite njihovu količinu i, u skladu sa dobijenim rezultatima, razvijete mere za uklanjanje ili sprečavanje zarazne bolesti. Osim toga, kvantitativno računovodstvo je neophodno za modeliranje ekosistema i razvoj principa za upravljanje prirodnim procesima. Razmotrimo dalje šta su oni.

Zemlja

Naučnici ga smatraju jednim od mogućih puteva prenošenja zaraznih patologija. Patogeni mikroorganizmi prodiru u tlo s izlučevinama bolesnih ljudi ili životinja. Neki od njih, posebno oni koji nose spore, mogu dugo preživjeti u zemlji (ponekad i nekoliko desetljeća). Patogeni poput ovih ulaze u tlo opasne infekcije, poput tetanusa, antraksa, botulizma itd. Metode sanitarnog i mikrobiološkog ispitivanja tla omogućavaju vam da odredite "mikrobni broj" (broj mikroorganizama u gramu tla), kao i indeks coli (broj E. coli).

Analiza tla: opće informacije

TO metode mikrobiološkog istraživanja tla Prije svega, treba razmotriti direktnu mikroskopiju i sijanje gustih mikroorganizama.Populacije mikroorganizama i njihove grupe koje nastanjuju tlo razlikuju se po taksonomskom položaju i ekološkim funkcijama. U nauci su objedinjeni pod opštim pojmom "biota tla". Tlo je stanište velikog broja mikroorganizama. U gramu zemlje ima od 1 do 10 milijardi njihovih ćelija. U ovom okruženju aktivno se odvija razgradnja organskih tvari uz sudjelovanje različitih saprofitskih mikroorganizama.

Mikroskopska metoda mikrobiološkog istraživanja: etape

Analiza životne sredine počinje uzorkovanjem. Da biste to učinili, koristite nož koji je prethodno očišćen i obrisan alkoholom (možete koristiti lopatu). Nakon toga se priprema uzorak. Sljedeći korak je brojanje ćelija na obojenim razmazima. Pogledajmo svaku fazu posebno.

Uzorkovanje

Prilikom analize obradivog tla, po pravilu se uzimaju uzorci iz dubine cijelog sloja. Prvo se uklanja 2-3 cm vrha tla, jer u njemu može biti prisutna strana mikroflora. Nakon toga se uzimaju monoliti sa proučavanog područja tla. Dužina svakog od njih mora odgovarati debljini sloja iz kojeg se uzima uzorak.

Na placu od 100-200m2. m Uzima se 7-10 uzoraka. Svaka težina je oko 0,5 kg. Uzorci moraju biti dobro promešani u vrećici. Nakon toga se uzima uzorak srednje težine približno 1 kg. Treba ga staviti u pergamentnu (sterilnu) vrećicu, umetnuti torba od tkanine. Uzorak se čuva u frižideru do trenutne analize.

Priprema za studij

Izmiješana zemlja se sipa na suho staklo. Prvo se mora obrisati alkoholom i spaliti na plameniku. Pomoću lopatice tlo se temeljno promiješa i raširi u ravnomjernom sloju. Neophodno je ukloniti korijenje i druge strane elemente. Za to se koriste pinceta. Prije rada, pinceta i lopatica se zagrijavaju na plameniku i hlade.

Male porcije se biraju iz različitih površina zemlje raspoređene po staklu. Vagaju se u porculanskoj šolji na tehničkoj vagi. Obavezna faza mikroskopski mikrobiološka metoda istraživanja je posebna obrada uzoraka. Potrebno je unaprijed pripremiti 2 sterilne tikvice. Njihov kapacitet ne bi trebao biti veći od 250 ml. 100 ml vode iz slavine se sipa u jednu od tikvica. Uzmite 0,4-0,8 ml tečnosti iz njega i navlažite uzorak zemlje do stanja poput paste. Smjesa se mora trljati prstom ili gumenim tučkom 5 minuta.

Koristeći vodu iz prve tikvice, zemljana masa se prenosi u praznu tikvicu. Zatim se ponovo trlja. Nakon toga, masa se prebacuje u tikvicu blizu plamena gorionika. Posuda sa suspenzijom zemlje se trese na stolici za ljuljanje 5 minuta. Nakon toga se ostavi da odstoji oko 30 s. Ovo je neophodno da bi se velike čestice taložile. Nakon pola minute, masa se koristi za pripremu lijeka.

Brojanje ćelija na fiksnim brisevima

Direktno mikroskopsko ispitivanje tla vrši se pomoću mikrobiološka metoda istraživanja, koju je razvio Winogradsky. U određenoj zapremini pripremljene suspenzije izračunava se broj ćelija mikroorganizama. Proučavanje fiksnih razmaza omogućava vam dugotrajno skladištenje preparata i izvođenje proračuna u bilo koje prikladno vrijeme.

Priprema lijeka se provodi na sljedeći način. Određena zapremina suspenzije (obično 0,02-0,05 ml) se nanosi pomoću mikropipete na staklo. Dodaje se kap otopine agar-agara (mješavina polisaharida agaropektina i agaroze ekstrahirane iz smeđih i crvenih algi Crnog mora), brzo se miješa i raspoređuje na površini od 4-6 kvadratnih metara. cm.. Razmaz se suši na vazduhu i fiksira 20-30 minuta. alkohol (96%). Zatim se lijek navlaži destilovanom vodom i stavi u otopinu karboličnog eritrozina na 20-30 minuta.

Nakon bojenja se pere i suši na zraku. Brojanje ćelija se vrši pomoću imerzionog cilja.

Setva na gustu podlogu

Mikroskopski mikrobiološke metode istraživanja omogućavaju identifikaciju velikog broja mikroorganizama. Ali, unatoč sjeme, smatra se najčešćim u praksi. Njegova suština je da se zapremina preparata (zemljišne suspenzije) sije u Petrijevu posudu na čvrstu podlogu.

Ovo mikrobiološka metoda istraživanja omogućava uzimanje u obzir ne samo količine, već i grupe, au nekim slučajevima i sastava vrsta mikroskopske flore. Broj kolonija se obično broji od dna Petrijeve posude u propuštenoj svjetlosti. Tačka se stavlja na izračunato područje markerom ili mastilom.

Analiza vode

Mikroflora vodenog tijela, u pravilu, odražava mikrobni sastav tla oko njega. U tom pogledu metode sanitarno-mikrobioloških istraživanja vode i tla su od posebne praktične važnosti pri proučavanju stanja određenog ekosistema. Slatkovodna tijela obično sadrže koke, štapićaste bakterije.

Anaerobi se nalaze u malim količinama u vodi. U pravilu se razmnožavaju na dnu rezervoara, u mulju, učestvujući u procesima pročišćavanja. Mikrofloru okeana i mora uglavnom predstavljaju bakterije koje vole sol (halofilne).

U vodi arteških bunara praktično nema mikroorganizama. To je zbog sposobnosti filtriranja sloja tla.

Općenito prihvaćeno metode mikrobiološkog istraživanja vode Uzimaju se u obzir određivanje mikrobnog broja i titar kolija ili indeks koli. Prvi indikator karakterizira broj bakterija u 1 ml tekućine. Coli indeks je broj E. coli prisutnih u litri vode, a coli titar je minimalna količina ili maksimalno razrjeđenje tekućine u kojoj se još mogu otkriti.

Određivanje mikrobnog broja

Ova metoda sanitarno-mikrobiološkog ispitivanja vode je sljedeća. U 1 ml vode odredite broj fakultativnih anaerobnih i mezofilnih (intermedijarnih) aeroba sposobnih da rastu na mesnom pepton agaru (glavnom hranljivom mediju) na 37 stepeni. tokom dana formiraju kolonije vidljive pri povećanju od 2-5 r. ili golim okom.

Ključna faza ovoga metoda mikrobiološkog istraživanja vode seje. Iz svakog uzorka se inokuliraju najmanje 2 različite količine. Dodajte 1-0,1 ml čiste tečnosti i 0,01-0,001 ml kontaminirane tečnosti u svaku šolju. Za inokulaciju od 0,1 ml ili manje, tečnost se razblaži destilovanom (sterilnom) vodom. Desetostruka razrjeđenja se pripremaju sukcesivno. Po 1 ml svake od njih se dodaje u dvije Petrijeve zdjelice.

Razblaženja se pune hranjivim agarom. Prvo se mora otopiti i ohladiti na 45 stepeni. Nakon aktivnog miješanja, medij se ostavi da horizontalna površina za otvrdnjavanje. Na 37 stepeni. usevi se uzgajaju tokom celog dana. Razmatrano mikrobiološka metoda ispitivanja vode omogućava vam da uzmete u obzir rezultate na onim pločama gdje je broj kolonija u rasponu od 30 do 300.

Zrak

Smatra se tranzitnim medijumom za mikroorganizme. Main metode mikrobiološkog istraživanja vazduha su sedimentacija (slijeganje) i aspiracija.

Mikroflora vazdušnog okruženja konvencionalno je podeljena na promenljivu i konstantnu. U prvu grupu spadaju kvasac, koke koje stvaraju pigmente, bacili koji nose spore, štapići i drugi mikroorganizmi koji su otporni na sušenje i izlaganje svjetlosti. Predstavnici promjenjive mikroflore, koji prodiru u zrak iz svog uobičajenog staništa, ne zadržavaju dugo svoju održivost.

U vazduhu velikih gradova ima mnogo više mikroorganizama nego u vazdušno okruženje ruralnim područjima. Iznad mora i šuma ima vrlo malo bakterija. Padavine: snijeg i kiša pomažu u pročišćavanju zraka. U zatvorenim prostorima ima mnogo više klica nego u otvorenim prostorima. Njihov broj se povećava zimi u nedostatku redovne ventilacije.

Sedimentacija

Ovo mikrobiološka metoda istraživanja u mikrobiologiji smatra najjednostavnijim. Zasniva se na taloženju kapljica i čestica na površini agara u otvorenoj Petrijevoj posudi pod uticajem gravitacije. Metoda sedimentacije ne određuje precizno broj bakterija u zraku. Činjenica je da je prilično teško uhvatiti male frakcije čestica prašine i bakterijskih kapljica na otvorenoj čaši. Uglavnom se velike čestice zadržavaju na površini.

Ova metoda se ne koristi pri analizi atmosferskog zraka. Ovo okruženje karakterišu velike fluktuacije u brzini kretanja protok vazduha. Sedimentacija se, međutim, može koristiti u nedostatku naprednijih instrumenata ili izvora električne energije.

Broj mikroba se određuje metodom Omelyansky. Prema njemu, za 5 minuta na površini agara od 100 kvadratnih metara. cm broj deponovanih bakterija koji je prisutan u 10 litara vazduha.

Naredba 535 "O objedinjavanju mikrobioloških metoda istraživanja"

Vrijedi reći da je mikrobiološko ispitivanje u ovom slučaju uglavnom praćeno određenim problemima. Nastaju zbog činjenice da u donjim dijelovima reproduktivnog trakta normalno postoji raznolika mikroflora koja se mijenja u različitim dobima. Da bi se povećala efikasnost studije, razvijena su jedinstvena pravila.

Dijagnoza virusnih infekcija

Provodi se metodama identifikacije RNA i DNK patogena. One se zasnivaju prvenstveno na određivanju nukleotidnih sekvenci u patološkom materijalu. Za to se koriste molekularne sonde. To su umjetno dobivene nukleinske kiseline, komplementarne virusnim kiselinama, označene radioaktivnom oznakom ili biotinom.

Posebnost metode je ponovljeno kopiranje specifičnog fragmenta DNK, koji uključuje nekoliko stotina (ili desetina) parova nukleotida. Mehanizam replikacije (kopiranja) je da završetak može započeti samo u određenim blokovima. Za njihovo stvaranje koriste se prajmeri. Oni su sintetizirani oligonukleotidi.

PCR dijagnostika (polimeraza lančana reakcija) je lako implementirati. Ova metoda vam omogućava da brzo dobijete rezultate koristeći malu količinu patološkog materijala. PCR dijagnostikom otkrivaju se akutne, kronične i latentne (skrivene) infekcije.

Za osjetljivost, ova metoda se smatra poželjnijom. Međutim, trenutno testni sistemi nisu dovoljno pouzdani, tako da PCR dijagnostika ne može u potpunosti zamijeniti tradicionalne metode.

Fig.92. Krotovljev uređaj (opći prikaz).
6811‘**8

Fig.91. Dijagram Krotovljevog uređaja, ([-cilindrično tijelo; 2-telo osnova; 3-električni motor; 4-centrifugalni ventilator; 5-osmokraki impeler; 6-disk; 7-opruga; 8-Petrijeva posuda; 9-poklopac uređaja ; 10-on - preklopne brave; 11-pleksiglas diskovi; T2-prorez u obliku klina; 13-spojni prsten; 14-priključak sa dijafragmom; 15-izvodna cijev.
Naprednije su metode instrumentalnog istraživanja mikroflore zraka pomoću Krotov aparata i impaktora (sl. 91, 92, 93). Krotov uređaj je cilindrično tijelo, zatvoreno odozgo s poklopcem koji se može ukloniti, ispod kojeg je Petrijeva posuda s MPA postavljena na rotirajući disk, električni motor je smješten unutar cilindra, koji se okreće brzinom od 4-5 hiljada okretaja u minuti, osigurava usis zraka kroz poklopac od pleksiglasa, koji ima klinasti prorez ili rupe. Kao rezultat turbulentnog strujanja zraka, unutar cilindra se rotira disk s Petrijevom posudom, čime se osigurava ravnomjerna raspodjela mikroflore po cijeloj površini hranljivog medija, a čestice aerosola sve tri faze se aktivno usisavaju. Pomoću rotametra, koji je dizajniran za određivanje količine usisavanog zraka, kroz uređaj se propušta od 50 do 200 litara zraka. Nakon uzorkovanja, čaše se zatvaraju i stavljaju u termostat na 37° na 24 sata, a zatim na 24 sata na sobnu temperaturu. Brojeći broj naraslih kolonija i znajući zapreminu vazduha kroz koji je prošao, lako je izračunati broj mikroba.
Fig.93. Dijagram četverostepenog May Impactora (vidi opis u tekstu).

Impaktori su uređaji opremljeni cijevima sa konusnim mlaznicama - kaskadama kroz koje se usisava zrak. Ispred uskog kraja svake mlaznice postavljene su prijemne ploče, koje su staklena stakla podmazana glicerinom i fiziološkim rastvorom. Da li zrak curi kroz cijevi sa mlaznicama? udari u prijemne ploče, mikroorganizmi se talože na njima. Nakon uzorkovanja zraka, stakalca se uklanjaju iz impaktora, a staloženi mikrobi se pregledavaju ili mikroskopskim putem, ili se staklo ispere fiziološkim rastvorom iz kojeg se mikrobi potom inokuliraju na hranljive podloge.
Metode filtriranja za proučavanje zraka zasnivaju se na filtraciji ili aspiraciji (usisavanju) kroz posebne filtere, tekućine, prahove i sl., koji adsorbiraju mikrofloru.
Filteri koji se koriste za analizu vazduha mogu biti nerastvorljivi - pamuk, papir, membrana, milipore, i rastvorljivi - glicerol-želatina, natrijum alginat, šećer
і
puderi
U Seitz aparat se postavlja filterska ploča od odgovarajućeg materijala i kroz filter se pomoću vakuum pumpe usisava određena količina zraka. Zatim se filter ploča uklanja, uranja u fiziološku otopinu i protresa, mikroorganizmi se desorbiraju u otopinu i iz nje se vrše kvantitativne inokulacije na hranjive podloge. Ako se kao filteri koriste rastvorljivi materijali, onda se nakon usisavanja vazduha otapaju u sterilnoj fiziološkoj otopini.
Zrak se može usisati kroz sterilnu tečnost (voda, fiziološki rastvor, mesni peptonski bujon, itd.) pomoću Djakonovljevog uređaja (Sl. 94)
(G
t
VT
Fig.94. Dyakonov uređaj

Ovaj uređaj se sastoji od staklenog cilindra zapremine 100-200 ml, u hermetički zatvoren čep se ubacuju dvije staklene cijevi, duga ulazna cijev završava na samom dnu, a izlazna (kratka) cijev završava direktno ispod čepa. Prilikom proučavanja zraka u uređaj se ulije 10-20 ml vode, stavljaju se staklene perle i steriliziraju. Nakon sterilizacije, izlazna cijev se spaja na vakuum pumpu, na koju je pričvršćen reometar za mjerenje volumena zraka koji prolazi kroz uređaj, a zrak se usisava u količini od 100-200 litara. Nakon isključivanja uređaja, uzmite 1 ml vode kroz koju je filtriran zrak, dodajte u praznu sterilnu Petrijevu posudu i ulijte 15 ml otopljenog MPA (+ 45°). Inokulirane posude se inkubiraju u termostatu na 37° 1-2 dana, a zatim se izbroji broj izraslih kolonija i, znajući zapreminu filtriranog zraka, izračuna se mikrobni broj.
Utvrđuje se prisustvo sanitarno-indikativnih mikroorganizama u zraku zatvorenih prostora, kao iu vodi i zemljištu.
Prepoznati su kao Streptococcus viridans (viridans streptococcus) (tip L.), Str.haemolyticus (hemolitički streptococcus Staphylococcus aureus, koji ima hemolitička svojstva. Prisustvo ovih mikroba u vazduhu ukazuje na kontaminaciju njegove gornje mikroflore respiratornog trakta osoba. Broj sanitarnih indikativnih mikroorganizama koji sadrže
O
sadržan u I m (1000 litara) zraka naziva se streptokokni indeks.
Za identifikaciju sanitarno-indikativnih mikroba zraka koriste se sve gore opisane metode, ali se inokulacija provodi na selektivnim i diferencijalno dijagnostičkim medijima, koji omogućavaju brzo otkrivanje ovih bakterija i njihovo odvajanje od drugih predstavnika zračne mikroflore. Takve podloge uključuju krvni agar, na kojem hemolitički stafilokoki i streptokoki daju zonu hemolize (uništavanje crvenih krvnih stanica), žuti slani agar itd.
Rezultati procjene zraka u stambenim prostorijama zimi i ljeti prikazani su u tabeli 10.
Tabela 10
Kriterijumi za sanitarnu ocjenu zraka u stambenim prostorijama
O
(broj mikroorganizama u prvom m vazduha) Procena vazduha Letnji period Zimski period totalno ozelenjavanje i mikrohemolitički organi-streptokoki ukupno
mikro-
org
viridans i hemolitički streptokoki Čisti 1500 16 4500 36 Kontaminirani.... 2500 36 7000 124 Svrha rada: Određivanje mikrobnog broja u vazduhu i sadržaja sanitarnih indikativnih mikroorganizama.
Materijali: Petrijeve posude sa MPA, agar sladovine i krvni agar, Krotov aparat.
Napredak. I. Odredite broj mikroba pomoću Kochove metode: ostavite Petrijeve zdjelice s MPA, krvnim agarom i agarom sladovine otvorene u različitim dijelovima laboratorije 5 minuta. Zatvorite čaše i stavite ih u termostat na 37°C na 48 sati. Izbrojite broj uzgojenih kolonija, odredite mikrobni broj zraka (vidi gore).
Odrediti mikrobni broj i broj sanitarno-indikativnih mikroorganizama pomoću Krotov aparata. Koristite ploče sa MPA, krvnim agarom i agarom od sladovine. Za svaki
čaše, propuštaju 200 litara vazduha brzinom od 20-30 l/min. Nakon uzimanja uzoraka, zatvorite čaše i stavite u termostat na 37° na 48 sati. Prebrojite narasle kolonije, mikroskopirajte ih, pripremite razmazove i obojite ih Gramom. Obratite pažnju na prisustvo zona hemolize na krvnom agaru.
Uporedite rezultate dobijene pomoću ove dve metode. Procijenite čistoću zraka. Rezultate predstaviti u obliku tabele.
Procjena zdravlja zraka
Srednji Broj kolonija na ploči kada je određen
Kochova metoda u aparatu Krotov
IPA
krvni agar wort agar
Mikrobni broj
Broj zelenih i
hemolitički
streptokoke
Književnost
Labinskaya A.S. Mikrobiologija sa tehnologijom mikrobiološka istraživanja. M., 1972.
Pereti L.G. Važnost normalne mikroflore za ljudski organizam. Medgiz., 1955.
P i t k i n K.D., Krivoshein V.S. Mikrobiologija.M. ,1980. Sanitarna mikrobiologija. Ed. G.P. Kalina i G.K.Chistovich. M., 1969.
Tep V.I. Sanitarna mikrobiologija. 1958.
T i m a k o v V.D. Mikrobiologija. M., 1973. .

Sedimentacija- većina stara metoda, široko se koristi zbog svoje jednostavnosti i dostupnosti, ali je neprecizan. Metodu je predložio R. Koch i sastoji se u sposobnosti mikroorganizama da se pod uticajem gravitacije i pod uticajem kretanja vazduha (zajedno sa česticama prašine i kapljicama aerosola) talože na površini hranljive podloge u otvorenim Petrijevim posudama. Čaše se postavljaju na mjestima uzorkovanja na horizontalnoj površini. Prilikom određivanja ukupne mikrobne kontaminacije, ploče sa mesnim pepton agarom ostavljaju se otvorene 5-10 minuta ili duže, ovisno o stupnju sumnje na bakterijsku kontaminaciju. Za identifikaciju sanitarno-indikativnih mikroba koristite podlogu Garro ili Turzhetsky (za otkrivanje streptokoka), agar od mlijeka i soli ili žumanca (za otkrivanje stafilokoka), agar od sladovine ili medij Sabouraud (za otkrivanje kvasaca i gljivica). Prilikom određivanja sanitarnih indikativnih mikroorganizama, čaše se ostavljaju otvorene 40-60 minuta.

Na kraju ekspozicije, sve posude se zatvaraju, stavljaju u termostat na jedan dan za uzgoj na temperaturi optimalnoj za razvoj izolovanog mikroorganizma, a zatim (ako istraživanja zahtijevaju) ostavljaju 48 sati na sobnoj temperaturi za stvaranje pigmenta mikroorganizmima koji stvaraju pigment.

Metoda sedimentacije ima brojne nedostatke: samo grube frakcije aerosola se talože na površini medija; kolonije se često ne formiraju iz jedne ćelije, već iz klastera mikroba; Samo dio mikroflore zraka raste na korištenim hranjivim podlogama. Osim toga, ova metoda je potpuno neprikladna za proučavanje bakterijskog zagađenja atmosferskog zraka.

Naprednije metode su aspiracija, zasnovan na prisilnom taloženju mikroorganizama iz zraka na površinu gustog hranjivog medija ili u tečnost za hvatanje (mesno-peptonski bujon, puferski rastvor, izotonični rastvor natrijum hlorida itd.). U praksi sanitarna služba Prilikom uzimanja aspiracijskih uzoraka koristi se aparat Krotov, klopka za bakterije Rechmensky, uređaj za uzorkovanje zraka (POV-1), aerosolni bakteriološki uzorkivač (PAB-1), bakterijsko-virusni elektroprecipitator (BVEP-1), uređaj Kiktenko, Andersen Koriste se uređaji , Dyakonov, MB itd. Za proučavanje atmosfere mogu se koristiti i membranski filteri br. 4, kroz koje se vazduh usisava pomoću Seitz aparata. Širok izbor instrumenata ukazuje na nepostojanje univerzalnog aparata i veći ili manji stepen njihove nesavršenosti.

Krotovljev uređaj. Trenutno se ovaj uređaj široko koristi u proučavanju zraka u zatvorenom prostoru i dostupan je u laboratorijima

Princip rada aparata Krotov (Sl. 22) zasniva se na činjenici da vazduh, usisan kroz klinasti prorez na poklopcu aparata, udara o površinu hranljivog medijuma, dok se čestice prašine i aerosola lepe. u medijum, a sa njima i mikroorganizmi u vazduhu. Petrijeva posuda sa tanki sloj Medij je fiksiran na rotirajućem stolu aparata, što osigurava ravnomjernu distribuciju bakterija na njegovoj površini. Uređaj radi iz električne mreže. Nakon uzimanja uzorka sa određenom ekspozicijom, čaša se uklanja, pokriva poklopcem i stavlja u termostat na 48 sati. Obično se uzorkovanje vrši brzinom od 20-25 l/min u trajanju od 5 minuta. Tako se utvrđuje flora u 100-125 litara vazduha. Ako se otkriju sanitarno-indikativni mikroorganizmi, volumen zraka koji se ispituje povećava se na 250 litara.

Prije uzimanja uzorka zraka, prijemnik se napuni sa 3-5 ml tečnosti za prikupljanje (voda, mesno-peptonski bujon, izotonični rastvor natrijum hlorida).

Rechmenskyjev uređaj Radi na principu spreja: kada zrak prolazi kroz uski otvor lijevka, tekućina iz prijemnika kroz kapilaru u obliku kapljica se diže u cilindar. Kapljice tečnosti se dalje drobe, udarajući u staklenu lopaticu i zidove posude, stvarajući oblak malih kapljica na kojima se adsorbuju mikroorganizmi iz vazduha. Kapljice tekućine zasićene bakterijama teku u prijemnik i zatim se ponovo raspršuju, što osigurava maksimalno hvatanje bakterija iz zraka. U toku rada uređaj se postavlja pod uglom od 15-25°, čime se obezbeđuje da tečnost za prikupljanje teče u prijemnik. Brzina uzorkovanja zraka kroz aparat Rechmensky je 10-20 l/min. Na kraju rada, tečnost se uzima iz prijemnika sterilnom pipetom i inokuliše (po 0,2 ml) na površinu čvrstih hranljivih podloga. Prednost zamke bakterija Rechmensky je visoka efikasnost hvatanje bakterijskih aerosola. Nedostaci uređaja su teškoća njegove proizvodnje, nestandardna priroda rezultirajućih uređaja, njihova velika krhkost i relativno niska produktivnost.

Velike prednosti su serijska proizvodnja ovog uređaja (što je omogućilo opremanje laboratorija njime), njegova prenosivost i veća produktivnost (20-25 l/min). Boca uređaja u koju se stavlja sabirna tečnost je od pleksiglasa otpornog na toplotu, kapilara je od nerđajućeg čelika. Boca sa raspršivačem je ugrađena u tikvicu, što uzrokuje disperziju tečnosti za hvatanje kada se usisava vazduh. Takav uređaj omogućava jednostavno čišćenje i sterilizaciju tikvice pomoću uređaja za raspršivanje jednostavnim kuhanjem 30 minuta (autoklaviranje je neprihvatljivo, jer uzrokuje deformaciju cilindra).

Prije uzimanja uzoraka zraka, u tikvicu dodati 5-10 ml tečnosti za sakupljanje (najčešće čorbe od mesnog ekstrakta) i postaviti je pod uglom od 10°, čime se obezbeđuje prirodna drenaža tečnosti nakon disperzije. Prolazak zraka kroz bocu i bocu s raspršivačem uzrokuje stvaranje malih kapljica tečnosti za hvatanje na kojoj se talože mikroorganizmi. Uređaj POV-1 koristi se za proučavanje unutrašnjeg zraka na opću mikrobnu kontaminaciju, za otkrivanje patogenih bakterija (npr. Mycobacterium tuberculosis) i respiratornih virusa u zraku bolničkih odjela.

Bakteriološki uzorkivač Typhoon P-40 (M) dizajniran je za određivanje opće bakterijske kontaminacije zraka uz naknadnu izolaciju različitih patogenih i sanitarno-indikativnih mikroorganizama.

Inokulacija mikroorganizama iz okolnog zraka se vrši kroz kalibriranu rupu u odjeljku za gledanje na Petrijevu posudu s hranljivim podlogom postavljenom na rotirajući sto uređaja. Pumpanje zraka vrši se bakteriološkom rotacionom pneumatskom pumpom ugrađenom u uzorkivač Typhoon R-40 (M), montaža na rotirajući sto je univerzalna, što omogućava korištenje Petrijevih zdjelica različitih modifikacija.

U bakteriološkom uzorkivaču "Typhoon" R- 40 (M) osigurava nepropusnost unutrašnje komore i lak pristup ispitnom mediju.

Brzina rotacije čaše se glatko podešava pomoću regulatora brzine koji se nalazi na prednjoj ploči uzorkivača (Sl. 23) “Typhoon” R-40 (M).

Aerosolni bakteriološki uzorkivač (PAB-1). Mehanizam djelovanja PAB-1 zasniva se na principu elektrostatičkog taloženja čestica aerosola (i, posljedično, mikroorganizama) iz zraka pri prolasku kroz uređaj u kojem te čestice primaju električni naboj i talože se na elektrode sa suprotan znak. Elektrode za sakupljanje aerosola postavljene su u horizontalnom položaju metalne palete sa čvrstim podlogama u Petrijevim posudama ili tečnom hranljivom podlogom (15-20 ml). Uređaj je prenosiv sa visokom produktivnošću od 150-250 l/min, tj. za 1 sat možete uzeti 5-6 m3 vazduha. Preporučuje se da se koristi za proučavanje velikih količina vazduha pri otkrivanju oportunističkih i patogenih mikroorganizama, na primer, prilikom identifikacije uzročnika bolničkih infekcija (Pseudomonas aeruginosa. Staph, aureus i dr.) u vazduhu bolničkih soba, određivanje salmonele i ešerihije. u atmosferskom zraku u područjima prskalica pri navodnjavanju poljoprivrednih površina otpadnim vodama.

Bakterijsko-virusni elektroprecipitator (BVEP-1). Uređaj je baziran na principu rada aspiracijsko-jonizacijskim. BVEP-1 se sastoji od precipitacijske komore u koju su montirane elektrode: negativna u obliku vodeće cijevi kroz koju ulazi zrak (i ​​čestice aerosola se shodno tome negativno nabijaju) i pozitivna na kojoj se naseljavaju bakterije.

MB uređaj. Ovaj uređaj služi ne samo za određivanje opće mikrobne kontaminacije, već i za uzimanje uzoraka zraka s česticama aerosola različitih veličina. MB uređaj je izgrađen na principu “sito” i predstavlja cilindar podijeljen na 6 horizontalnih traka, na svaku od kojih su postavljene Petrijeve zdjelice sa MPA. Vazduh se usisava počevši od gornjeg stepena, u čijoj su ploči rupe najveće, a što je stepen niži, to su rupe manje (kroz potonje prolaze samo sitne frakcije vazdušnog aerosola). Uređaj je dizajniran da uhvati čestice aerosola veće od 1 mikrona pri brzini uzorkovanja zraka od 30 l/min. Smanjenje broja rupa osigurava ravnomjerniju distribuciju aerosola iz zraka kroz hranjivi medij. Da biste uhvatili još manje čestice aerosola, možete dodati dodatni filter od AFA materijala za filter.

Kada se koristi bilo koji od navedenih uređaja, dobijeni rezultati su približni, ali daju tačniju procjenu kontaminacije zraka u odnosu na metodu sedimentacije. Budući da GOST ne regulira ni uzorkovanje ni sanitarno-mikrobiološke studije zraka, za procjenu bakterijskog zagađenja zraka može se koristiti bilo koji uređaj. U mnogim slučajevima, uzorkovanje se kombinuje sa fazom inokulacije.

Za smanjenje broja mikroorganizama u vazduhu zatvorenih prostora koriste se sledeća sredstva: a) hemijska - tretman ozonom, azot-dioksidom, prskanje mlečne kiseline, b) mehanička - propuštanje vazduha kroz posebne filtere, c) fizička - ultraljubičasta zračenje.

1.1 Opšte odredbe.
Organizacija mora planirati i razviti procese potrebne za stvaranje sigurnih proizvoda.
Organizacija je dužna da implementira, implementira i osigura efektivnost planiranih aktivnosti i svih promjena u njima. Ovo uključuje plan upravljanja sigurnošću, kao i operativni plan upravljanja sigurnošću i/ili HACCP plan.
1.2Osnovni programi (BPR).
1.2.1 Organizacija mora uspostaviti, implementirati i održavati osnovne programe (BP) za upravljanje:
a) mogućnost unošenja faktora koji izazivaju opasnost po prehrambeni proizvod u proizvod kroz radnu okolinu,
b) biološka, ​​hemijska i fizička kontaminacija proizvoda, uključujući unakrsnu kontaminaciju između proizvoda, i
c) nivoe opasnosti u proizvodu i okolini za njegovu obradu.
1.2.2 BDP mora:
a) zadovoljiti potrebe organizacije u vezi sa sigurnošću hrane,
b) odgovaraju obimu i vrsti proizvodnje i prirodi proizvedenih i/ili obrađenih proizvoda,
c) biti ugrađen u mrežu interni sistem proizvodnju, kao programe koji se univerzalno primjenjuju, ili kao programi koji se primjenjuju na određeni proizvod ili proizvodnu liniju, i
d) biti odobren od strane grupe za sigurnost hrane.
Organizacija će identificirati zakonske i zakonske zahtjeve relevantne za gore navedeno.
1.2.3 Prilikom odabira i/ili uspostavljanja PBP-a, organizacija će uzeti u obzir i koristiti relevantne informacije [npr. statutarni i statutarni zahtjevi, zahtjevi kupaca, priznate smjernice, principi Codex Alimentarius Komisije (Kodeks), kodeksi prakse, nacionalni, međunarodni ili industrijski standardi ].
BILJEŠKA. Dodatak C daje listu relevantnih publikacija Codexa.
Prilikom uspostavljanja ovih programa, organizacija treba uzeti u obzir sljedeće:
a) dizajn i raspored zgrada i povezanih usluga;
d) raspored prostorija, uključujući radna mjesta i pomoćne prostore za radnike;
c) snabdevanje vazduhom, vodom, strujom i drugim komunalnim uslugama;
d) usluge podrške, uključujući upravljanje otpadom i otpadnim vodama;
f) prikladnost opreme i njena dostupnost za čišćenje, održavanje i preventivno održavanje;
f) upravljanje kupljenim materijalom (na primjer: sirovine, sastojci, kemikalije i ambalaža), opskrba (na primjer: voda, zrak, para i led), odlaganje (na primjer: otpad i otpadne vode) i rukovanje proizvodom (npr. : skladištenje i transport);
g) mjere za sprečavanje unakrsne kontaminacije;
h) čišćenje i sanitacija;
i) kontrola štetočina;
j) higijena osoblja;
k) druge relevantne aspekte.
Treba planirati verifikaciju FDP-a (vidjeti 1.8), a FBP treba modificirati ako je potrebno (vidi 1.1). Moraju se čuvati evidencije verifikacija i modifikacija.
Dokumenti treba da opisuju kako se upravlja aktivnostima uključenim u finansijski izvještaj.
1.3 Preliminarni koraci za analizu opasnosti.
1.3.1 Opšte odredbe.
Sve informacije potrebne za provođenje analize opasnosti moraju se prikupiti, održavati, ažurirati i dokumentirati. Evidencija se mora čuvati.
1.3.2 Grupa za sigurnost hrane.
Mora se imenovati tim za sigurnost hrane.
Tim za sigurnost hrane mora imati multidisciplinarno znanje i iskustvo u razvoju i implementaciji sistema sigurnosti hrane. Ovo uključuje, ali nije ograničeno na, poznavanje proizvoda organizacije, procesa, opreme i opasnosti od hrane u okviru sistema bezbednosti hrane.
Mora se voditi evidencija kako bi se pokazalo da grupa ima potrebno znanje i iskustvo (vidjeti 6.2.2).
1.3.3 Karakteristike proizvoda.
1.3.3.1 Sirovine, sastojci i materijali u kontaktu sa proizvodima.
Sve sirovine, sastojci i materijali koji su u kontaktu s proizvodima moraju biti dokumentirani u mjeri potrebnoj za provođenje analize opasnosti (vidi 1.4), uključujući sljedeće, ako je primjenjivo:
a) biološke, hemijske i fizičke karakteristike,
b) sastav sastojaka recepture, uključujući aditive i tehnološka pomagala,
c) porijeklo,
d) način proizvodnje,
f) načini pakovanja i isporuke,
f) uslove skladištenja i rok trajanja,
g) priprema i/ili rukovanje prije upotrebe ili obrade,
h) kriterije prihvatljivosti koji se odnose na sigurnost hrane ili specifikacije kupljenih materijala i sastojaka prema njihovoj namjeni.
Organizacija će identificirati zakonske i zakonske zahtjeve za sigurnost hrane relevantne za gore navedeno.

1.3.3.2 Karakteristike finalnog proizvoda.
Karakteristike konačnih proizvoda moraju biti dokumentirane u mjeri potrebnoj da se podrži analiza opasnosti (vidi 1.4), uključujući sljedeće informacije, ako je primjenjivo:
a) naziv proizvoda ili druga identifikacija,
b) sastav,
c) biološke, hemijske i fizičke karakteristike relevantne za sigurnost hrane,
d) utvrđeni rok trajanja i uslovi skladištenja,
e) pakovanje,
f) označavanje sigurnosti hrane, i/ili uputstva za rukovanje, pripremu i upotrebu,
g) metod(e) distribucije.
Organizacija će identificirati zakonske i zakonske zahtjeve za sigurnost hrane relevantne za gore navedeno.
Opisi se moraju ažurirati, uključujući, ako je potrebno, odredbe stava 1.1.
1.3.4 Namjena.
Namenska upotreba, razumno očekivano rukovanje krajnjim proizvodom, i svako nenamerno, ali razumno predvidljivo pogrešno rukovanje i zloupotreba krajnjeg proizvoda moraju se pregledati i dokumentovati u meri u kojoj se može sprovesti analiza opasnosti (videti 1.4.).
Grupe korisnika, a gdje je to prikladno, grupe potrošača treba identificirati za svaki proizvod, a posebno ranjive grupe potrošača na određene opasnosti treba uzeti u obzir.
Opisi se moraju ažurirati, uključujući, ako je potrebno, odredbe stava 1.1.
1.3.5 Dijagrami sekvenci, koraci procesa i kontrole.
1.3.5.1 Dijagrami sekvenci.
Dijagrame toka treba pripremiti za kategorije proizvoda ili procesa obuhvaćene sistemom upravljanja sigurnošću hrane. Dijagrami toka trebaju činiti osnovu za procjenu potencijalne pojave, povećanja ili uvođenja opasnosti od hrane.
Dijagrami toka moraju biti jasni, precizni i dovoljno detaljni.
Dijagrami sekvenci trebaju uključivati ​​sljedeće, ako je primjenjivo:
a) slijed i interakcija svih faza u proizvodnji,
b) sve procese koje izvode treće strane i podugovorene radove,
c) gdje se proizvode sirovine, sastojci i poluproizvodi,
d) tamo gdje dolazi do prerade i ponovne upotrebe,
f) kada se konačni ili međuproizvodi, kao i nusproizvodi i otpad puštaju ili odlažu,
U skladu sa stavom 1.8, tim za sigurnost hrane mora provjeriti tačnost trenutnog dijagrama na licu mjesta. Validirani dijagrami sekvence treba da se čuvaju kao zapisi.
1.3.5.2 Opis koraka procesa i kontrola.
Postojeće kontrole, parametri procesa i/ili preciznost s kojom se izvode, ili postupci koji utiču na sigurnost hrane treba opisati u mjeri potrebnoj za analizu opasnosti (vidjeti 1.4).
Eksterni zahtjevi (npr. zakonodavci ili kupci) koji mogu uticati na odabir i tačnost kontrolnih mjera također treba opisati.
Opisi se moraju ažurirati, uključujući, ako je potrebno, odredbe stava 1.1.
1.4 Analiza opasnosti.
1.4.1 Opšte odredbe.
Tim za sigurnost hrane mora provesti analizu opasnosti kako bi utvrdio koje opasnosti treba kontrolisati, obim kontrole kako bi se osigurala sigurnost hrane i koji je skup kontrola potreban.
1.4.2 Identifikacija opasnosti i uspostavljanje prihvatljivih nivoa.
1.4.2.1 Sve opasnosti za koje postoji razumna vjerovatnoća da će nastati ovisno o vrsti proizvoda, vrsti procesa i stvarnim proizvodnih prostorija, moraju biti identifikovani i registrovani. Identifikacija se mora zasnivati ​​na:
a) preliminarne informacije i podatke prikupljene u skladu sa tačkom 1.3.,
b) iskustvo,
c) eksterne informacije, uključujući što je moguće više epidemioloških i drugih istorijskih podataka, i
d) informacije o sigurnosti hrane dobivene kroz lanac proizvodnje hrane, koje mogu biti relevantne za sigurnost konačnih ili međuproizvoda i hrane kada se konzumiraju.
Svaka faza (od sirovina, proizvodnje do distribucije) u kojoj se može uvesti bilo koji od faktora koji izazivaju opasnost od hrane mora biti specificirana.
1.4.2.2 Prilikom utvrđivanja opasnosti, mora se uzeti u obzir sljedeće:
a) faze koje prethode i nakon dotične operacije,
b) tehnološku opremu, usluge i životnu sredinu, i
c) uzvodne i nizvodne karike u lancu proizvodnje hrane.
1.4.2.3 Za svaku identificiranu opasnost od hrane, potrebno je utvrditi prihvatljiv nivo opasnosti u konačnom proizvodu, kad god je to moguće.
Pri uspostavljanju ovog nivoa treba uzeti u obzir zakonske i zakonske zahtjeve, zahtjeve za sigurnost hrane kupaca, namjeravanu upotrebu potrošača i druge relevantne podatke.
Valjanost i rezultati određivanja moraju se zabilježiti.
1.4.3 Procjena opasnosti.
Procjena opasnosti se mora provesti kako bi se utvrdilo, za svaku opasnost od hrane (vidi 1.4.2), da li je njeno eliminiranje ili smanjenje na prihvatljive nivoe bitno za proizvodnju sigurne hrane i, ako se kontrolira, neophodno da se osigura da su identificirani prihvatljivi nivoi postignuto.
Svaka opasnost od hrane mora se procijeniti prema njenoj mogućoj ozbiljnosti. štetnih efekata na zdravlje i vjerovatnoću njegovog nastanka.
Treba opisati korištenu metodologiju i zabilježiti rezultate procjene opasnosti.
1.4.4 Izbor i evaluacija kontrolnih mjera.
Na osnovu procene opasnosti prema tački 1.4.3, mora se odabrati odgovarajući skup kontrolnih mera koje će moći da spreče, eliminišu ili smanje faktore koji izazivaju opasnost po prehrambene proizvode na određene prihvatljive nivoe.
Sa ovim izborom, svaka kontrolna mjera iz stava 1.3.5.2 mora biti analizirana uzimajući u obzir njenu efikasnost u odnosu na identificirane opasnosti.
Odabrane kontrolne mjere moraju se rangirati (procijeniti) s obzirom na potrebu njihove kontrole korištenjem operativnog plana upravljanja ili HACCP plana.
Odabir i rangiranje mjera treba izvršiti logičkim pristupom, uključujući procjenu uzimajući u obzir sljedeće:
a) njegov uticaj na identifikovane opasnosti u odnosu na utvrđenu tačnost,
b) izvodljivost njegovog praćenja (npr. mogućnost redovnog praćenja kako bi se osigurala trenutna korekcija);
c) njegovo mjesto u sistemu u odnosu na druge kontrole;
d) vjerovatnoća neuspjeha kontrole ili značajne varijabilnosti procesa;
f) težinu posljedica u slučaju nefunkcionisanja;
f) da li je kontrolna mjera uspostavljena i primijenjena posebno za uklanjanje ili značajno smanjenje nivoa opasnosti;
g) sinergijski efekti (tj. interakcija koja se javlja između dvije ili više kontrolnih mjera, zbog čega konačni rezultat premašuje zbir njihovih pojedinačnih rezultata).
Kontrolne mjere koje su rangirane kao relevantne za HACCP plan moraju se implementirati u skladu sa tačkom 1.6. Ostale mjere upravljanja moraju se implementirati kao operativni BDP u skladu sa tačkom 1.5.
Metodologija i parametri korišćeni za ovo rangiranje moraju biti dokumentovani, a rezultati procene moraju biti zabeleženi.
1.5 Ugradnja operacionih sala osnovne programe(BPR).
Operativni BPR moraju biti dokumentirani i moraju uključivati ​​sljedeće informacije za svaki program:
a) faktor(i) koji izazivaju opasnosti od hrane koje kontroliše program (vidi tačku 1.4.4.),
b) kontrolne mjere (vidi stav 1.4.4.),
c) procedure praćenja koje pokazuju implementaciju operativnog plana upravljanja;
d) ispravke i korektivne radnje preduzete u slučaju otkrivanja gubitka kontrole tokom praćenja operativnog BDP-a (videti tačku 1.10.1 i tačku 1.10.2.),
f) odgovornosti i ovlaštenja,
f) evidenciju praćenja.
1.6 Uspostavljanje HACCP plana.
1.6.1 HACCP plan.
HACCP plan mora biti dokumentiran i mora uključivati ​​sljedeće informacije za svaku kritičnu kontrolnu tačku (CCP):
a) faktori koji uzrokuju opasnost za prehrambene proizvode moraju se upravljati u CTU-u (vidi tačku 1.4.4.),
b) kontrolne mjere (vidi stav 1.4.4.),
c) kritične granice (vidi tačku 1.6.3.)
d) postupak(e) praćenja (vidjeti 1.6.4),
f) ispravke i korektivne radnje koje treba preduzeti ako su kritične granice prekoračene (vidjeti 1.6.5);
f) odgovornosti i ovlaštenja;
g) evidenciju praćenja.
1.6.2 Identifikacija kritičnih kontrolnih tačaka (CCP).
Za svaku opasnost koja se kontroliše u skladu sa HACCP planom, moraju se identifikovati KTU-ovi za identifikovane kontrolne mere (videti paragraf 1.4.4.).
1.6.3 Određivanje kritičnih granica za kritične kontrolne tačke.
Moraju se odrediti kritične granice za praćenje uspostavljeno za svaki CTU.
Moraju se uspostaviti kritične granice kako bi se osiguralo da utvrđeni prihvatljivi nivo opasnosti u konačnom proizvodu (vidi 1.4.2.) nije prekoračen.
Kritične granice moraju biti mjerljive.
Obrazloženje za odabrane kritične granice treba dokumentirati.
Kritične granice zasnovane na subjektivnim podacima (kao što su vizuelni pregled proizvoda, procesa, tretmana, itd.) moraju biti podržane uputstvima ili specifikacijama i/ili edukacijom i obukom.
1.6.4 Sistem nadzora kritičnih kontrolnih tačaka.
Za svaki CTU treba instalirati sistem za nadzor kako bi se pokazalo da je CTU pod kontrolom. Ovaj sistem uključuje sva planirana mjerenja ili zapažanja u vezi sa kritičnim granicama.
Sistem praćenja treba da se sastoji od odgovarajućih procedura, uputstava i zapisa koji pokrivaju sljedeće:
a) mjerenja ili zapažanja koja daju rezultate u odgovarajućem vremenskom okviru,
b) uređaji za praćenje koji se koriste,
c) korišćene metode kalibracije (videti 8.3);
d) učestalost praćenja;
f) odgovornosti i ovlašćenja u vezi sa praćenjem i evaluacijom rezultata praćenja;
f) zahtjevi za evidencijom i metode vođenja evidencije
Metode i učestalost praćenja moraju biti u stanju da otkriju kada su kritični nivoi prekoračeni na vrijeme, kako bi se proizvod izolirao prije nego što se koristi ili konzumira.
1.6.5 Radnje koje se preduzimaju kada su kritične granice prekoračene na osnovu rezultata praćenja.
Planirane korekcije i korektivne radnje koje se poduzimaju kada su kritične granice prekoračene moraju biti opisane u HACCP planu. Ove radnje treba da obezbede da se identifikuje uzrok neusaglašenosti, da se parametri kontrolisani u kontrolnoj jedinici vrate pod kontrolu i da se spreči ponavljanje neusaglašenosti (videti tačku 1.10.2).
Moraju se uspostaviti i slijediti dokumentirane procedure kako bi se osiguralo da se potencijalno opasnim proizvodima rukuje na odgovarajući način i da se osigura da se oni ne ispuštaju bez prethodne procjene (vidjeti 1.10.3).
1.7 Ažuriranje preliminarnih informacija i dokumenata koji opisuju plan upravljanja sigurnošću i HACCP plan.
Nakon odobrenja operativnog plana upravljanja sigurnošću (vidi tačku 1.5) i/ili HACCP plana (vidjeti klauzulu 1.6), organizacija će ažurirati sljedeće informacije, ako je potrebno:
a) karakteristike proizvoda (videti tačku 1.3.3);
b) namjeravanu upotrebu (vidjeti tačku 1.3.4);
c) dijagrame sekvence (vidjeti 1.5.5.1);
d) korake procesa (vidjeti 1.3.5.2);
f) kontrolne mjere (vidjeti tačku 1.3.5.2).
Ako je potrebno, moraju se izvršiti izmjene u HACCP planu (vidjeti tačku 1.6.1), kao iu postupcima i uputstvima koja opisuju sigurnosne mjere (vidjeti tačku 1.2).
1.8 Planiranje verifikacije.
Prilikom planiranja verifikacije moraju se odrediti ciljevi, metode, učestalost i odgovornosti za provođenje verifikacije. Aktivnosti verifikacije trebaju potvrditi da:
a) BDP se sprovode (vidi tačku 1.2),
b) ulazni podaci za analizu opasnosti (vidi tačku 1.3) se kontinuirano ažuriraju,
c) planovi upravljanja bezbednošću rada (videti tačku 1.5) i elementi u okviru HACCP plana (videti tačku 1.6.1) su implementirani i delotvorni,
d) nivoi opasnosti su unutar prihvatljivih nivoa (vidjeti 1.4.2), i
f) druge procedure koje zahtijeva organizacija su implementirane i djelotvorne.
Rezultat ovog planiranja mora biti u formi koja je adekvatna metodama funkcionisanja organizacije.
Rezultati verifikacije moraju se zabilježiti i prijaviti timu za sigurnost hrane.
Rezultati verifikacije moraju biti dostavljeni kako bi se podržala analiza rezultata aktivnosti verifikacije (vidi tačku 8.4.3).
Ako se sistem verifikacije zasniva na ispitivanju uzoraka finalnog proizvoda, i ako takvo ispitivanje uzoraka otkrije neusaglašenost sa prihvatljivim nivoom opasnosti (vidi 1.4.2), relevantne serije proizvoda moraju se tretirati kao potencijalno opasne u skladu sa 1.10.3.
1.9Sistem sljedivosti.
Organizacija će uspostaviti i održavati sistem sljedivosti koji osigurava identifikaciju serija proizvoda u odnosu na partije sirovina, evidenciju proizvodnje i snabdijevanja.
Sistem sljedivosti mora biti u stanju da identifikuje ulazni materijal od direktnog dobavljača i početni put distribucije konačnog proizvoda.
Zapisi o sljedivosti moraju se održavati u određenom periodu kako bi se procijenio sistem kako bi se osiguralo rukovanje potencijalno opasnim proizvodima iu slučaju povlačenja proizvoda. Evidencija treba da se vodi u skladu sa zakonskim, zakonskim i zahtjevima kupaca i može se, na primjer, zasnivati ​​na identifikaciji serije konačnog proizvoda.
1.10 Upravljanje neusklađenošću.
1.10.1 Ispravke.
Organizacija će osigurati da, u slučaju prekoračenja kritične granice za CTU (vidjeti 1.6.5) ili gubitka kontrole nad operativnim BDP-ima, proizvodi na koje se to odnosi budu identifikovani i kontrolirani, uzimajući u obzir njihovu upotrebu i oslobađanje.
Mora se uspostaviti i slijediti dokumentirana procedura. Trebalo bi definirati:
a) identifikaciju i procjenu krajnjih proizvoda na koje utiče kako bi se odredilo njihovo odgovarajuće rukovanje (vidjeti 1.10.3), i
b) analiza izvršenih ispravki.
Proizvodi proizvedeni u uslovima u kojima su kritični nivoi prekoračeni su potencijalno opasni i sa njima se mora rukovati u skladu sa tačkom 1.10.3. Proizvodi proizvedeni u suprotnosti sa propisima o sigurnosti u radu moraju se procijeniti u pogledu uzroka neusklađenosti i njihovih posljedica po sigurnost hrane i, gdje je prikladno, s njima se postupa u skladu sa 1.10.3. Procjena se mora zabilježiti.
Sve ispravke moraju biti odobrene odgovorna osoba(od strane osoba) i treba ih evidentirati zajedno sa informacijama o prirodi neusaglašenosti, njihovim uzrocima i posljedicama, uključujući informacije potrebne za potrebe sljedivosti u vezi sa neusaglašenim partijama.
1.10.2 Korektivne radnje.
Podaci dobijeni kao rezultat praćenja operativnih BDP-a i CTU-a moraju biti procijenjeni od strane imenovane osobe(e) sa dovoljno znanja (vidjeti tačku 6.2) i ovlaštenja (vidi tačku 5.4) za pokretanje korektivnih mjera.
Korektivne radnje moraju se preduzeti kada su kritične granice prekoračene (videti tačku 1.6.5) ili kada postoji nedostatak usklađenosti sa operativnim BPR.
Organizacija će uspostaviti i implementirati dokumentirane procedure koje specificiraju odgovarajuće radnje za identifikaciju i ispravljanje uzroka otkrivenih neusklađenosti, sprječavanje njihovog ponavljanja i vraćanje procesa ili sistema pod kontrolu nakon što se otkrije neusklađenost.
Ove radnje uključuju:
a) analiza neusaglašenosti (uključujući pritužbe kupaca);
b) analiza trendova u rezultatima praćenja koji mogu ukazivati ​​na razvoj ka gubitku kontrole;
c) utvrđivanje uzroka neusklađenosti,
d) procjenu radnji neophodnih za sprečavanje ponavljanja neusaglašenosti;
f) identifikaciju i sprovođenje potrebnih radnji;
f) evidentiranje rezultata preduzetih korektivnih radnji, i
g) analizu korektivnih radnji koje su preduzete da bi se potvrdila njihova efikasnost.
Korektivne radnje moraju biti zabilježene.
1.10.3 Rukovanje potencijalno opasnim proizvodima.
1.10.3.1 Opće odredbe.
Organizacija će postupati s neusklađenim proizvodima poduzimanjem mjera za sprječavanje ulaska neusklađenih proizvoda u lanac proizvodnje hrane sve dok ne bude sigurna da:
a) opasnosti od hrane su smanjene na identifikovane prihvatljive nivoe,
b) dotične opasnosti od hrane će se smanjiti na identifikovane prihvatljive nivoe (vidjeti 1.4.2) prije ulaska u lanac proizvodnje hrane, ili
c) proizvodi su u skladu sa prihvatljivim nivoom opasnosti za hranu koja se razmatra, uprkos neusklađenosti.
Sve serije proizvoda na koje utiče neusaglašena situacija ostaće pod kontrolom organizacije dok se ne procene.
Ako se utvrdi da su proizvodi koji su izgubili kontrolu organizacije opasni, organizacija mora obavijestiti odgovarajuće zainteresirane strane i pokrenuti povlačenje (vidjeti 1.10.4).
BILJEŠKA. Izraz "zapljena" uključuje opoziv hrane.
Kontrolne mjere i odgovarajući odgovori i ovlaštenja za rukovanje potencijalno opasnim proizvodima moraju biti dokumentirani.
1.10.3.2 Evaluacija za puštanje proizvoda.
Svaka serija proizvoda zahvaćena neusklađenošću bit će puštena kao sigurna samo kada je ispunjen jedan od sljedećih uvjeta:
a) dokazi osim sistema praćenja pokazuju da su mjere kontrole bile efikasne,
b) potvrđeno je da kombinovani ishod kontrolnih mera za proizvod ispunjava predviđeni kriterijum (tj. identifikovani prihvatljivi nivoi u skladu sa 1.4.2);
c) rezultati ispitivanja uzorka, analize i/ili druge aktivnosti verifikacije pokazuju da serija proizvoda na koje se odnosi neusaglašenost ispunjava identifikovane prihvatljive nivoe opasnosti o kojima je reč.
1.10.3.3 Rukovanje neusaglašenim proizvodima.
Ako serija proizvoda nije prihvatljiva za puštanje u promet, tada se na njoj mora izvršiti jedna od sljedećih radnji:
a) ponovnu obradu ili dalju obradu, unutar ili izvan organizacije, koja eliminiše ili smanjuje opasnost na prihvatljiv nivo;
b) uništavanje i/ili odlaganje kao otpad.
1.10.4 Povlačenje.
Da bi se osiguralo i olakšalo potpuno i pravovremeno uklanjanje partija finalnih proizvoda koje su identificirane kao opasne:
a) više rukovodstvo mora odrediti osoblje koje ima ovlaštenje da pokrene povlačenje i dodijeli odgovorno osoblje da izvrši povlačenje, i
b) organizacija će uspostaviti i implementirati dokumentiranu proceduru za:
1) obavještenja relevantnim zainteresiranim stranama (na primjer: zakonodavnim i regulatornim tijelima, kupcima i/ili potrošačima),
2) rukovanje oduzetim proizvodima, kao i opasnim pošiljkama proizvoda koji se još nalaze u skladištu, i
3) utvrđivanje redosleda neophodnih radnji.
Uklanjanje proizvoda mora biti osigurano ili nadzirano sve dok se ne unište, upotrijebe u svrhu koja nije njihova izvorna svrha, dok se ne utvrdi da su bezbedni za svoju prvobitnu svrhu (ili na neki drugi način) ili se obrađuju na način koji osigurava da su sigurni.
Informaciju o uzroku, obimu i efektu povlačenja treba zabilježiti i prijaviti višem rukovodstvu kao input za pregled menadžmenta (vidjeti 5.8.2).
Organizacija će provjeriti i evidentirati djelotvornost programa povlačenja korištenjem odgovarajućih metoda (npr. simulirano povlačenje ili stvarno povlačenje).

Prilikom uzimanja uzorka zraka radi utvrđivanja nivoa mikrobne kontaminacije potrebno je pridržavati se sljedećih obaveznih uslova: uzorak zraka se uzima najkasnije 30 minuta nakon čišćenja prostorije, dok prozori i vrata moraju biti zatvoreni, visina uzorka mora odgovarati visini radnog stola. Kontrola se mora vršiti u sterilnoj tehničkoj odeći od tkanine koja ne ostavlja dlačice i rukavicama.

Prije unošenja uređaja u "čistu" prostoriju, potrebno ga je obrisati krpom koja ne ostavlja dlačice sa tretiranim rubovima, navlaženom 76% etil alkoholom. Prijenos uređaja u proizvodne prostorije klase 1 i 2 i, po mogućnosti, klase 3 čistoće treba izvršiti kroz zračnu komoru za materijale. Kontrolu čistoće zraka treba provoditi najmanje 2 puta sedmično prije i tokom proizvodni proces na preporučenim tačkama.

Određivanje mikrobnog zagađenja vazduha u zatvorenom prostoru metodom sedimentacija sastoji se od taloženja (taloženja) mikroflore (koja se nalazi u vazduhu), pod uticajem gravitacije, na površinu hranljivog medija.

Ova metoda se koristi za približnu procjenu mikrobne kontaminacije zraka u industrijskim prostorijama, uglavnom u prostorijama sa povećanim zagađenjem zraka i u slučajevima kada je istraživanje nemoguće. metoda aspiracije(kada se koristi u proizvodnji zapaljivih ili eksplozivnih materija).

U industrijskim prostorijama kontrola sadržaja mikroorganizama provodi se uglavnom u onim radnim prostorima u kojima se nalaze najvjerovatniji izvori mikrobne kontaminacije zraka (mjesta s velikim brojem osoblja, povećan rizik od stvaranja prašine, itd.), kao i u prostorima gdje su tvari, pomoćne tvari i gotov proizvod u direktnom kontaktu sa okolinom.

Setva se vrši na otvorene Petrijeve posude sa mesno-peptonskim agarom (za određivanje broja bakterija) i odvojeno sa Sabouraud agarom (za određivanje broja gljivica). Šolje se postavljaju na više mjesta u prostorijama: na dugim i uskim - na 4 tačke horizontalno na udaljenosti ne većoj od 5 m jedna od druge; u prostorijama do 15 m2 - u dvije suprotne točke prostorije; više od 100 m2 - u svakoj od 4 suprotne tačke iu centru prostorije. Nakon 10 minuta izlaganja u otvorenom stanju, čaše se zatvaraju i stavljaju u termostat.

Inokulacije na mesno-peptonskom agaru inkubiraju se na temperaturi od 32,5 ± 2,5 ° C, na Sabouraud agaru - na 22,5 ± 2,5 ° C tokom 5 dana.

Računovodstvo rezultata istraživanja. Da bi se odredio ukupan broj bakterija (gljivica) u 1 m3 vazduha, broj uzgojenih kolonija na posudi se pomnoži sa jednim od faktora prikazanih u tabeli „Proračun broja mikroorganizama u 1 m3 vazduha na 10 min. izloženosti”:

Na primjer: 50 kolonija bakterija izraslo je na čaši prečnika 10 cm. U 1 m3 vazduha ukupan broj bakterija je 50 x 60 = 3000.

Međutim, ova metoda ne daje potpunu sliku kvantitativnog sadržaja mikroorganizama. To je zbog činjenice da naseljavanje mikroorganizama ovisi o brzini kretanja zraka, koja se može razlikovati na različitim mjestima u prostoriji. Osim toga, primjenom ove metode, sitne frakcije bakterijskog aerosola se slabo hvataju, a pri sjetvi jedne čestice aerosola koja sadrži nekoliko održivih mikroorganizama izraste samo jedna kolonija, što smanjuje ukupno mikrobno zagađenje zraka.

Stoga je metoda sedimentacije približna u procjeni stvarnog stepena mikrobne kontaminacije zraka u zatvorenom prostoru. Međutim, može poslužiti za određivanje mikrobne kontaminacije zraka tokom vremena i za procjenu efikasnosti tekućih protivepidemijskih mjera.

Određivanje mikrobnog zagađenja vazduha metoda aspiracije provodi se uz pomoć uzorkovača inercijalnog tipa - udarca ili uređaja za bakteriološku analizu zraka (Krotovljev prorezni aparat, otuda i drugi naziv metode: prorezna metoda za hvatanje bakterija). Rad uređaja zasniva se na principu udaranja mlaza zraka na površinu hranljive podloge koja se stavlja u Petrijevu posudu.

Kada se koristi Krotov aparat, zrak se usisava kroz klinasti prorez koji se nalazi radijalno iznad Petrijeve posude pomoću centrifugalnog ventilatora. Disk na koji je pričvršćena Petrijeva posuda rotira se brzinom od 1 obrtaja u sekundi, zbog čega se inokulacija mikroorganizama odvija ravnomjerno po cijeloj površini hranjivog medija.

Lokacija i broj tačaka za uzorkovanje zraka određuju se ovisno o veličini prostorije (vidi metodu sedimentacije).

Petrijeva posuda sa hranljivim medijumom stavlja se na disk uređaja, a poklopac se pažljivo zatvara pomoću stezaljki postavljenih na njeno telo. Uređaj se uključuje u struju, a brzina zraka se podešava pomoću reometra - 25 ili 40 l/min. U prosjeku se uzorak zraka uzima 5 minuta pri brzini od 40 l/min.

Nakon uzimanja uzorka zraka (sa svake određene točke u dvije paralelne Petrijeve posude sa MPA i Sabouraudovim medijumom), posude se zatvaraju poklopcima i stavljaju u termostat. Hranljivi mediji, temperaturni uslovi i vreme inkubacije useva su isti kao kod proučavanja vazduha metodom sedimentacije (vidi gore).

Obračun rezultata. Obračun se vrši prema formuli:

X = a x 1000 / b, gdje je X broj mikroorganizama u 1 m3 zraka; a je broj kolonija koje su izrasle na Petrijevoj zdjelici nakon perioda inkubacije; c je zapremina ispitivanog uzorka vazduha, smanjena na normalnim uslovima(pogledajte formulu za dovođenje zapremine vazduha u normalne uslove za metodu aspiracije).

Druga metoda izračuna: izbrojite broj kolonija gljivica i bakterija koje su rasle na paralelnim posudama, odredite aritmetičku sredinu i pomnožite je sa 5.

Dobijeni rezultati se upoređuju sa dozvoljenim granicama mikrobne kontaminacije vazduha date prostorije prema odgovarajućim tabelama: „klasifikacija proizvodnih prostorija prema dozvoljenom sadržaju mikroorganizama i mehaničkih čestica u vazduhu za proizvodnju sterilnih proizvoda“ i „klasifikacija prostorija za proizvodnju nesterilnih lijekovi prema dozvoljenom broju čestica i mikroorganizama u zraku.”

Proračun minimalne ukupne zapremine uzorka vazduha na svakoj kontrolnoj tački se vrši u skladu sa metodološkim preporukama za praćenje sadržaja mikroorganizama i čestica u vazduhu industrijskih prostorija (Naredba Ministarstva zdravlja Ukrajine od 14. decembra 2001. br. 502).