Φούρνος Pasteur. Μέθοδοι καταστροφής (αποστείρωσης) μικροβίων. Μέθοδος βιολογικής αποστείρωσης

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα πραγματοποιείται σε φούρνους ξηρής θερμότητας(Φούρνος Pasteur). Η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση εργαστηριακών γυαλικών. Τοποθετείται χαλαρά στο φούρνο, ώστε το υλικό να θερμαίνεται ομοιόμορφα. Κλείστε καλά την πόρτα του ντουλαπιού, ενεργοποιήστε την ηλεκτρική συσκευή θέρμανσης και φέρτε τη θερμοκρασία στους 160-165 0 C και αποστειρώστε για 1 ώρα. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε τη θέρμανση, αλλά μην ανοίξετε την πόρτα του ντουλαπιού μέχρι να κρυώσει ο φούρνος (διαφορετικά κρύος αέραςθα προκαλέσει ρωγμές στα πιάτα). Τρόπος αποστείρωσης: 160°C - 60 λεπτά, 180°C - 15 λεπτά, 200°C - 5 λεπτά. Τα υγρά, τα μέσα καλλιέργειας, το καουτσούκ και τα συνθετικά υλικά δεν μπορούν να αποστειρωθούν με ξηρή θερμότητα.

Αποστείρωση με ατμό υπό πίεσηυποβάλλονται επιδέσμους, χειρουργικά κλινοσκεπάσματα, χειρουργικά εργαλεία, μέσα καλλιέργειας, εργαστηριακά γυάλινα σκεύη, μολυσμένο υλικό και ενέσιμα διαλύματα. Το υλικό τοποθετείται σε δοχεία (κουτιά). Τα υφασμάτινα μαξιλάρια τοποθετούνται στο κάτω μέρος του μπιφτέκι για να απορροφούν την υγρασία μετά την αποστείρωση. Η στειρότητα του υλικού διατηρείται για 3 ημέρες. Το μολυσμένο υλικό σε πιάτα και δοκιμαστικούς σωλήνες αποστειρώνεται σε μεταλλικές δεξαμενές με καπάκι.

Η αποστείρωση με ατμό υπό πίεση πραγματοποιείται σε αυτόκλειστο. Με μία μόνο θεραπεία, τόσο οι φυτικές όσο και οι σποριακές μορφές βακτηρίων πεθαίνουν. Ο ατμός υπό πίεση αποστειρώνει τα θρεπτικά μέσα, εκτός από τα μέσα που περιέχουν φυσικές πρωτεΐνες, υγρά και συσκευές με ελαστικά μέρη. Τα απλά μέσα (MPA, MPB) αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120°C (1 atm). Μέσα που περιέχουν φυσικές πρωτεΐνες και υδατάνθρακες δεν μπορούν να αποστειρωθούν σε αυτή τη θερμοκρασία, καθώς πρόκειται για ουσίες που αλλάζουν εύκολα με θέρμανση. Τα μέσα με υδατάνθρακες αποστειρώνονται κλασματικά στους 100 0 C ή σε αυτόκλειστο στους 112 0 C (5 atm.) για 10-15 λεπτά. Διάφορα υγρά, συσκευές με ελαστικούς σωλήνες, βύσματα, βακτηριακά κεριά και φίλτρα αποστειρώνονται στους 120 0 C (1 atm.) για 20 λεπτά.

Το μολυσμένο υλικό (σε δοκιμαστικούς σωλήνες, κύπελλα) τοποθετείται σε ειδικούς μεταλλικούς κάδους ή δεξαμενές με οπές για διείσδυση ατμού και αποστειρώνεται στους 126 0 C (1,5 atm.) για 1 ώρα. Τα εργαλεία αποστειρώνονται επίσης μετά από εργασία με βακτήρια σπορίων.

Υπάρχουν 2 τρόποι αποστείρωσης:

1. Ρέει ατμός σε αυτόκλειστο ή σε συσκευή Koch με το καπάκι ξεβιδωμένο και τη βαλβίδα εξόδου ανοιχτή, όταν η αντιβακτηριδιακή δράση του ατμού εκδηλώνεται κατά των φυτικών μορφών. Έτσι αποστειρώνονται τα μέσα που περιέχουν βιταμίνες και υδατάνθρακες, ουρία, γάλα, πατάτες και ζελατίνη. Για πλήρη αποστείρωση, χρησιμοποιείται κλασματική αποστείρωση (στους 100 0 C) για 20-30 λεπτά για 3 συνεχόμενες ημέρες. Σκοτώνει επίσης τα σπόρια.
2. Η αποστείρωση με ατμό υπό πίεση είναι η μεγαλύτερη αποτελεσματική μέθοδοςστέρηση. Σάλτσα, τα λευκά είδη αποστειρώνονται σε 1 atm. 15-20 λεπτά, μολυσμένο υλικό σε 1,5-2 atm για 20-25 λεπτά.

Χρήση φυσικών και χημικών παραγόντων.

ΠΡΟΣ ΤΗΝ φυσικούς παράγοντεςοι αποστείρωση περιλαμβάνουν υψηλή θερμοκρασία, υπεριώδεις ακτίνες, ιοντίζουσα ακτινοβολίακαι μέσω βακτηριακών φίλτρων.

Στην εργαστηριακή πρακτική, η αποστείρωση με υψηλή θερμοκρασία επιτυγχάνεται με πύρωση σε φλόγα, θέρμανση με ξηρή θερμότητα, βρασμό, επεξεργασία με ρέοντα ατμό ή ατμό υπό πίεση.

Ρύζι. 1. Καυστήρας Bunsen. Ρύζι. 2. Καυστήρας Teklu. Ρύζι. 3. Κατανομή θερμοκρασίας στη φλόγα του καυστήρα.

Ρύζι. 4. Ντουλάπι στεγνώματος.

Ρύζι. 5. Λουτρά νερού: 1 - με σταθερή ροή νερού. 2 - κυλινδρικό? 3 - στρογγυλό κάτω μέρος. Ρύζι. 6. Αποστειρωτής με ροή ατμού.

Η αποστείρωση με φλόγα είναι μια απλή και αξιόπιστη μέθοδος επεξεργασίας διάφορων αντικειμένων ανθεκτικών στη θερμότητα: βελόνες, βακτηριακές θηλιές, μικροβιολογικές σπάτουλες, πιπέτες, διαφάνειες και γυαλιά κάλυψης, τσιμπιδάκια κ.λπ. Για το σκοπό αυτό, καυστήρες αερίου του συστήματος Bunsen (Εικ. 1) ή Teklu (Εικ. 2). Ο καυστήρας Bunsen είναι εξοπλισμένος με μια κινητή βάση, μετακινώντας την οποία μπορείτε να ρυθμίσετε την πρόσβαση αέρα. Στον καυστήρα Teklu, η ποσότητα του εισερχόμενου αέρα ρυθμίζεται μετακινώντας τον δίσκο (Εικ. 2,1), η ποσότητα του αερίου ρυθμίζεται με μια βίδα (Εικ. 2, 2). Σε περίπτωση απουσίας ή ανεπαρκούς πρόσβασης αέρα, σχηματίζεται μια καπνιστή φλόγα. Η πρόσβαση αέρα στον καυστήρα ρυθμίζεται μέχρι μπλε φλόγα. Μια κατά προσέγγιση κατανομή θερμοκρασίας στη φλόγα του καυστήρα φαίνεται στο Σχ. 3.

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα πραγματοποιείται σε φούρνο ξήρανσης (φούρνος Pasteur). Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση μόνο ξηρών αντικειμένων - εργαστηριακά γυαλικά κ.λπ. Το στεγνωτήριο (Εικ. 4) είναι ένα μικρό σιδερένιο ντουλάπι με διπλά τοιχώματα, μεταξύ του οποίου υπάρχει ένα θερμομονωτικό υλικό(αμίαντος, υαλοβάμβακας). Οι καθαρά πλυμένοι δοκιμαστικοί σωλήνες και οι φιάλες σφραγίζονται με βαμβακερά πώματα. πιπέτες, βαμβάκι, γάζα τυλίγονται σε χαρτί και τοποθετούνται στα ράφια του ντουλαπιού έτσι ώστε τα προς αποστείρωση αντικείμενα να μην αγγίζουν τα καυτά τοιχώματα της συσκευής και ο θερμός αέρας να διεισδύει ελεύθερα ανάμεσά τους. Η αποστείρωση σε στεγνωτήριο διαρκεί 45 λεπτά - 1 ώρα στους ° 160-170 ° Σε θερμοκρασίες άνω των 175 °, το χαρτί και το βαμβάκι καίγονται.

Το βράσιμο σε νερό καταστρέφει τις μη σποριακές μορφές μικροβίων σε 1-3 λεπτά. , βελόνες, μαχαίρια, μικρά εργαλεία κ.λπ. μπορούν να βράσουν σε μεταλλικούς αποστειρωτές ακόμα και σε κανονική κατσαρόλα. Προσθήκη μικρής ποσότητας διττανθρακικού νατρίου (όξινο ανθρακικό νάτριο) στο νερό

Εκτέλεση του σταδίου 1 της βακτηριολογικής μεθόδου για την απομόνωση αεροβίων:

Παρασκευάζουμε σταθερό παρασκεύασμα από το υπό μελέτη υλικό, χρωματίζουμε με τη μέθοδο Gram, μικροσκοπούμε και αναγνωρίζουμε τους μικροοργανισμούς που ανιχνεύονται με μορφοτακτικές ιδιότητες.

Σπέρνουμε το υπό μελέτη υλικό σε μισό πιάτο με πυκνό θρεπτικό υλικό χρησιμοποιώντας τη μέθοδο «stroke with platform» (εφαρμόζουμε το υλικό στην επιφάνεια του πυκνού θρεπτικού μέσου σε ένα τρυβλίο Petri σε περιορισμένη περιοχή και στη συνέχεια το διανέμουμε με σπορά σε συχνές παράλληλες ραβδώσεις)

Ας υπογράψουμε τα κύπελλα, υποδεικνύοντας την ημερομηνία σποράς και τα τοποθετούμε ανάποδα σε θερμοστάτη στους 37° για 18-24 ώρες.

Αποστειρωτής ατμού (αυτόκλειστο) - αποστείρωση με ατμό υπό πίεση.

Η πιο αξιόπιστη και καθολική μέθοδος αποστείρωσης στην ιατρική και μικροβιολογική πρακτική είναι η αποστείρωση με ατμό υπό πίεση. Παράγεται σε αυτόκλειστο, στο οποίο θερμαίνονται τα προς αποστείρωση αντικείμενα κορεσμένο ατμόυπό πίεση πάνω από την ατμοσφαιρική. Υπάρχει η ακόλουθη σχέση μεταξύ των ενδείξεων του μανόμετρου και της θερμοκρασίας κορεσμένου ατμού

Μηδενική πίεσηεξετάστε την κανονική ατμοσφαιρική πίεση (760 mm Hg).

Η αποστείρωση επιτυγχάνεται μόνο όταν το αυτόκλειστο είναι σε πλήρη κατάσταση λειτουργίας και λειτουργεί σωστά από ειδικά εκπαιδευμένο προσωπικό, επομένως απαιτείται συνεχής παρακολούθηση του καθεστώτος αποστείρωσης, η οποία πραγματοποιείται φυσική (μέγιστο θερμόμετρο κ.λπ.), βιολογική (βιοδοκιμή με σπόρια καλλιέργειες δοκιμής μικροοργανισμών) και χημικών (χημικές δοκιμές, δείκτες τύπου IP) τρόπους

Πραγματοποιείται έλεγχος του καθεστώτος αποστείρωσης των αυτόκλειστων χημικάκάθε φορά που φορτώνεται το αυτόκλειστο Χημικός δοκιμαστικός - γυάλινος σωλήνας με χημική ουσία, με ορισμένο σημείο τήξης, αντιπυρίνη, ρεσορκινόλη - 110±2°, βενζοϊκό οξύ - 120±2°, βενζαμίδιο - 126+1°, ουρία, νικοτιναμίδιο, D (+)-μαννόζη - 132+2°. Στις χημικές δοκιμές εισάγεται μια βαφή ανιλίνης (ματζέντα, gentsnan violet κ.λπ.), η οποία χρωματίζει ομοιόμορφα την ουσία όταν λιώνει. Επί του παρόντος, χρησιμοποιούνται συχνότερα δείκτες τύπου IS (Vinar, Ρωσία), οι οποίοι είναι μια λωρίδα χαρτιού με ένα στρώμα μείγματος δείκτη που εφαρμόζεται σε αυτό και προορίζονται για λειτουργική οπτική παρακολούθηση όχι μόνο της θερμοκρασίας, αλλά και του χρόνου αποστείρωσης (IS-120, IS-132) Το καθεστώς αποστείρωσης παρακολουθείται ανά τρίμηνο με τη χρήση βιοτεστ με σπόρια της δοκιμαστικής καλλιέργειας Bacillus stearotermophilus BKM B-718

Φούρνος Pasteur- αποστείρωση με ξηρή θερμότητα.

Προϊόντα από γυαλί, μέταλλο και καουτσούκ με βάση το καουτσούκ σιλικόνης αποστειρώνονται σε φούρνο Pasteur. Λειτουργία αποστείρωσης: 160°C - 150 λεπτά; 180°C - 60 λεπτά Ο έλεγχος του τρόπου αποστείρωσης κατά τη διάρκεια κάθε κύκλου πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας τους δείκτες αποστείρωσης IS-160, IS-180. ανά τρίμηνο - χρησιμοποιώντας βιοδοκιμή με σπόρια της καλλιέργειας δοκιμής Bacillus licheniformis

ΑποστείρωσηΤραπέζι 1.

ΑπολύμανσηΠίνακας 2.

Στην εργαστηριακή πρακτική, όταν εργάζεστε με μικροοργανισμούς, είναι απαραίτητο να λαμβάνετε συνεχώς μέτρα για να διασφαλίζετε ότι τα πιάτα, τα μέσα καλλιέργειας και τα μεταλλικά εργαλεία που χρησιμοποιούνται κατά την εργασία δεν περιέχουν μικρόβια. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες μέθοδοι αποστείρωσης:

Αποστείρωση υπερθερμασμένος ατμόςυπό πίεση;

Αποστείρωση με ρέοντα ατμό.

Αποστείρωση με ζεστό αέρα;

Απολύμανση.

Ο καλύτερος τρόπος αποστείρωσης είναι η επεξεργασία διαφόρων αντικειμένων με υπέρθερμο ατμό σε ειδικές συσκευές - αυτόκλειστα.

Αποστείρωση σε αυτόκλειστο και υπέρθερμο ατμό υπό πίεση

Τα αυτόκλειστα είναι μεταλλικοί (χάλυβας, χυτοσίδηρος ή χαλκός) λέβητες με διπλά τοιχώματα και ογκώδες καπάκι που σφραγίζεται ερμητικά με μπουλόνια και ελαστικό παρέμβυσμα. Ανάλογα με το σύστημα θέρμανσης, τα αυτόκλειστα είναι ατμού, ηλεκτρικά και πυρκαγιάς (Εικ. 42). Η παραγωγή ατμού υψηλής πίεσης και υπέρθερμου ατμού σε θερμοκρασία 115-120°C σε αυτόκλειστο σάς επιτρέπει να καταστρέψετε τόσο τα βλαστικά κύτταρα όσο και τα μικροβιακά σπόρια μέσα σε 20-30 λεπτά.

Σε ένα αυτόκλειστο αποστειρώνονται όλα εκείνα τα αντικείμενα που δεν αλλοιώνονται σε υψηλές θερμοκρασίες: διάφορα υγρά (νερό, θρεπτικά μέσα που δεν περιέχουν υδατάνθρακες), γυάλινα σκεύη, μεταλλικά εργαλεία, βαμβάκι, γάζα, χαρτί κ.λπ.

Σε περιπτώσεις όπου ορισμένες ουσίες δεν αντέχουν το κανονικό καθεστώς αποστείρωσης σε αυτόκλειστο (ιδιαίτερα, θρεπτικά μέσα που περιέχουν σάκχαρα), αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο σε θερμοκρασία 112 ° C για 20 λεπτά, καθώς και υπό ηπιότερες συνθήκες.

Στο υψηλές πιέσειςυπερθερμασμένος ατμός στο αυτόκλειστο, η θερμοκρασία θέρμανσης αυξάνεται ανάλογα. Αυτό προκαλεί καραμελοποίηση των σακχάρων που προστίθενται σε ορισμένα μέσα καλλιέργειας, καθιστώντας τα μέσα ακατάλληλα για τον προσδιορισμό των φυσιολογικών ιδιοτήτων των μικροβίων.

Η πίεση μέσα στο αυτόκλειστο μετριέται χρησιμοποιώντας ένα μανόμετρο που είναι τοποθετημένο στο καπάκι ή στο σώμα του αυτόκλειστου. Εάν η πίεση αυξηθεί υπερβολικά, ενεργοποιείται αυτόματα μια βαλβίδα ασφαλείας, η οποία βρίσκεται, ανάλογα με το σχέδιο, είτε στο καπάκι είτε στην πλαϊνή επιφάνεια του τοιχώματος του αυτόκλειστου. Ένας πίδακας ατμού που βγαίνει από τη βαλβίδα ασφαλείας με ένα σφύριγμα προειδοποιεί για την ανάγκη διακοπής της θέρμανσης. Εάν η θέρμανση δεν σταματήσει, το αυτόκλειστο μπορεί να εκραγεί.

Μερικές φορές τοποθετείται ένα θερμόμετρο σε μια ειδική τσέπη στο καπάκι του αυτόκλειστου, με την οποία μετράται η θερμοκρασία αποστείρωσης. Υπάρχει μια βάση μέσα στο αυτόκλειστο, κάτω από την οποία χύνεται νερό μέσω ενός σωλήνα με ένα χωνί που βρίσκεται έξω από το αυτόκλειστο. Επιπλέον, τα αυτόκλειστα είναι εξοπλισμένα με μια βρύση για την απελευθέρωση ατμού και αέρα και μια βρύση για την έκχυση νερού.

Οι κανόνες για το χειρισμό ενός αυτόκλειστου κατά την αποστείρωση είναι οι εξής: η συσκευή γεμίζει με νερό μέσω χοάνης και σωλήνα, το επίπεδο του οποίου πρέπει να είναι κάτω από τη βάση. Τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν τοποθετούνται σε ειδικές μεταλλικές φιάλες και φορτώνονται σε αυτόκλειστο. Το καπάκι του αυτόκλειστου είναι βιδωμένο.

Ανοίγοντας τη βρύση για να διαφύγει ο ατμός και ο αέρας, ξεκινά η θέρμανση. Μόλις το νερό βράσει, ο ατμός που προκύπτει αρχίζει να εκτοπίζει τον αέρα από το αυτόκλειστο. Η βαλβίδα εξόδου ατμού διατηρείται ανοιχτή μέχρι να βγει ξηρός ατμός από αυτήν σε συνεχή ροή. Αυτό υποδηλώνει πλήρη απομάκρυνση του αέρα από το αυτόκλειστο. Τότε η βρύση κλείνει. Ο ατμός, που συσσωρεύεται με περαιτέρω θέρμανση σε όλο και μεγαλύτερες ποσότητες, αυξάνει την πίεση στο αυτόκλειστο, και ταυτόχρονα τη θερμοκρασία. Όταν εργάζεστε με αυτόκλειστο, μπορείτε να καθοδηγηθείτε από τον πίνακα των σχέσεων μεταξύ της πίεσης του ατμού και της θερμοκρασίας του (Πίνακας 4).

Αφού φτάσει η βελόνα του μανόμετρου τον απαιτούμενο δείκτηπίεση (η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο θα αντιστοιχεί στην αποδεκτή θερμοκρασία αποστείρωσης), ρυθμίστε τη θέρμανση του αυτόκλειστου έτσι ώστε η πίεση να παραμείνει στο ίδιο επίπεδο για τον απαιτούμενο χρόνο. Στο τέλος της αποστείρωσης, σταματήστε τη θέρμανση. Όταν η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο πέσει και η βελόνα του μανόμετρου πέσει στο μηδέν (η πίεση στο αυτόκλειστο ισούται με την ατμοσφαιρική πίεση), ανοίξτε προσεκτικά τη βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, απελευθερώστε τον ατμό και, ανοίγοντας το καπάκι του αυτόκλειστου, αφαιρέστε το υλικό. Είναι αδύνατο να ανοίξετε πρόωρα τη βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, πριν πέσει η πίεση στο αυτόκλειστο. Μια απότομη μείωση της πίεσης στο θάλαμο του αυτόκλειστου θα προκαλέσει βίαιο βρασμό υγρών που θερμαίνονται σε υψηλότερες θερμοκρασίες από 100 °C, δηλ. πάνω από το σημείο βρασμού σε κανονική ατμοσφαιρική πίεση. Τα υγρά που βράζουν βίαια θα βρέξουν ή ακόμα και θα σπρώξουν βαμβακερά βύσματα έξω από τα δοχεία - η δουλειά θα γίνει μάταια. Τα θρεπτικά μέσα θα αλλοιωθούν, καθώς η μικροχλωρίδα που προέρχεται από τον αέρα αναπτύσσεται εύκολα σε βρεγμένα βύσματα, διεισδύει στο εσωτερικό και μολύνει τα μέσα. Επιπλέον, το άνοιγμα ενός αυτόκλειστου με αυξημένη πίεση είναι επικίνδυνο για τον εργαζόμενο.

Ωστόσο, μόλις η βελόνα του μανόμετρου σταματήσει στο μηδέν, το αυτόκλειστο πρέπει να ανοίξει αμέσως, διαφορετικά η συμπύκνωση θα αρχίσει να ρέει πάνω στα βύσματα και επίσης θα τα κάνει να βραχούν. Για να αποφύγετε το βρέξιμο των βυσμάτων με νερό συμπύκνωσης, καλύπτονται με χαρτί πριν από την αποστείρωση.

Τα υλικά που τοποθετούνται σε αυτόκλειστο θα αποστειρωθούν αξιόπιστα σε 20-30 λεπτά εάν η θερμοκρασία διατηρείται στους 120°C, που αντιστοιχεί σε πίεση 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) ή σε μανόμετρο 1 atm πάνω από το κανονικό. Ένα αυτόκλειστο μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί με επιτυχία για την αποστείρωση μέσων με ρέοντα ατμό. Σε αυτή την περίπτωση, το καπάκι του αυτόκλειστου δεν βιδώνεται.

Λέβητας Koch και αποστείρωση με ρέοντα ατμό

Ο λέβητας Koch είναι ένας κύλινδρος από γαλβανισμένο φύλλο ή χαλκό με διπλά τοιχώματα και κωνικό καπάκι σε σχήμα κράνους (Εικ. 43). Υπάρχει μια τρύπα στη μέση του καπακιού για ένα θερμόμετρο. Το εξωτερικό του λέβητα Koch καλύπτεται με ένα στρώμα θερμομονωτικό υλικό: αμίαντος, λινέλαιο κ.λπ.

Στο εσωτερικό του λέβητα τοποθετείται ένα χώρισμα (stand), χωρίζοντας τον εσωτερικό χώρο του λέβητα σε δύο τμήματα: πάνω και κάτω. Το κάτω τμήμα είναι γεμάτο με νερό, το επίπεδο του οποίου καθορίζεται από το ποτήρι του μετρητή νερού: το νερό δεν πρέπει να καλύπτει το πάνω μέρος της βάσης. Τα προς αποστείρωση αντικείμενα τοποθετούνται στο επάνω τμήμα του λέβητα σε δικτυωτούς κάδους τοποθετημένους ο ένας πάνω στον άλλο. Έχοντας κλείσει το λέβητα με ένα καπάκι, αρχίζουν να θερμαίνουν το νερό σε αυτό. Αρχή αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που το θερμόμετρο δείχνει 98-100°C. Ελλείψει θερμομέτρου, ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που ο ατμός αρχίζει να διαφεύγει έντονα από την τρύπα στο καπάκι του λέβητα. Έτσι, τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν θα βρίσκονται πάντα σε ένα ρεύμα ρέοντος ατμού ενώ ο λέβητας λειτουργεί.

Η μέθοδος αποστείρωσης με ρέοντα ατμό, λόγω της απλότητας και της διαθεσιμότητάς της, χρησιμοποιείται ευρέως στην εργαστηριακή πρακτική. Ο ρέοντας ατμός χρησιμοποιείται για την αποστείρωση κυρίως θρεπτικών μέσων των οποίων οι ιδιότητες αλλάζουν όταν θερμαίνονται πάνω από 100°C: πρωτεΐνη, υδατάνθρακες και ζελατίνη. Για αυτά τα περιβάλλοντα, η μέθοδος αποστείρωσης με ρέοντα ατμό είναι η πλέον κατάλληλη.

Το μειονέκτημα της μεθόδου αποστείρωσης με ρέοντα ατμό είναι η διάρκειά της, καθώς για την πλήρη αποστείρωση του μέσου είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθεί επαναλαμβανόμενη θέρμανση σε λέβητα για ορισμένο χρόνο - από 20 λεπτά έως 1,5 ώρα (κατά μέσο όρο 30-45 λεπτά) ανάλογα με ο όγκος του υγρού σε διαστήματα 24 ωρών Συνιστάται να διατηρείται ολόκληρο το χρονικό διάστημα μεταξύ της θέρμανσης του μέσου σε θερμοστάτη στους 25-30 °C.

Μια μόνο θέρμανση σε λέβητα Koch προκαλεί το θάνατο μόνο φυτικών μικροβιακών κυττάρων, αλλά τα σπόρια μπορούν να επιβιώσουν. Όταν διατηρείτε το αποστειρωμένο θρεπτικό μέσο μέσα ευνοϊκές συνθήκες(στο θερμοκρασία δωματίου, ή ακόμα καλύτερα σε θερμοστάτη), μερικά από τα υπόλοιπα σπόρια θα βλαστήσουν και θα μετατραπούν σε βλαστικά κύτταρα μέχρι την επόμενη μέρα. Η επαναλαμβανόμενη θέρμανση θα προκαλέσει τον θάνατο αυτών των νεοαναπτυγμένων κυττάρων. Τέλος, μια τρίτη θέρμανση μετά από μια ημέρα διατήρησης του μέσου σε θερμοστάτη θα εξασφαλίσει πλήρη στειρότητα. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται κλασματική αποστείρωση. ΣΕ πρακτική δουλειάΑντί για αποστείρωση με ρέοντα ατμό σε λέβητα Koch, η συμβατική αποστείρωση σε αυτόκλειστα χρησιμοποιείται συχνά στους 112 °C με αντίθλιψη 0,5 atm για 15-20 λεπτά.

Ντουλάπι στεγνώματος και αποστείρωση με ζεστό αέρα

Στην εργαστηριακή πρακτική, για την αποστείρωση μικροβιολογικών γυάλινων σκευών, είναι απαραίτητο να υπάρχει στεγνωτήριο ή ο λεγόμενος φούρνος Pasteur. Αρχή συσκευής ντουλάπι στεγνώματοςκαι ο φούρνος Παστέρ είναι το ίδιο. Οι σόμπες κατασκευάζονται μόνο ορθογώνιο σχήμα, και τα ντουλάπια στεγνώματος μπορούν να έχουν όχι μόνο ορθογώνιο, αλλά και κυλινδρικό σχήμα (Εικ. 44 και 45). Σε αυτές τις συσκευές, η αποστείρωση πραγματοποιείται με ζεστό αέρα (ξηρή θερμότητα) σε θερμοκρασία 160 °C για 1 ώρα ή σε θερμοκρασία 150 °C για 2 ώρες.

Τόσο οι φούρνοι Pasteur όσο και οι φούρνοι στεγνώματος είναι κοίλες εσωτερικές συσκευές με διπλά τοιχώματα, με διπλές πόρτες που κλείνουν ερμητικά. Εξωτερικά καλύπτονται με στρώμα αμιάντου για θερμομόνωση. Κυκλοφορεί μεταξύ των τοίχων ζεστός αέρας, η θέρμανση των οποίων πραγματοποιείται είτε με ηλεκτρικές σπείρες είτε με καυστήρες αερίου. Μέσα στο ντουλάπι υπάρχουν πολλά (συνήθως δύο ή τρία) ράφια με τρύπες. Υπάρχουν δύο ανοίγματα στο πάνω μέρος του ντουλαπιού: το ένα είναι για το θερμόμετρο και το άλλο για αερισμό. Τα ηλεκτρικά ντουλάπια στεγνώματος είναι τα πιο βολικά.

Τα ντουλάπια στεγνώματος τελευταίας σχεδίασης διαθέτουν τέσσερα στάδια θέρμανσης, τα οποία μπορούν να ενεργοποιηθούν από έναν ειδικό ρυθμιστή που τοποθετείται στο πλευρικό τοίχωμα του ντουλαπιού. Ο επιθυμητός βαθμός θέρμανσης επιτυγχάνεται με την ενεργοποίηση ενός, δύο, τριών ή και των τεσσάρων ηλεκτρικές σπείρες, και η σειρά ενεργοποίησης των σπειρών μπορεί να είναι οποιαδήποτε.

Εκτός από τα γυάλινα σκεύη, μπορείτε να αποστειρώσετε γάζα και βαμβάκι σε ντουλάπια στεγνώματος, αν και είναι ακόμα καλύτερο να τα επεξεργαστείτε σε αυτόκλειστο, καθώς κιτρινίζουν σε θερμοκρασία 160 °C. Τα προϊόντα από καουτσούκ δεν μπορούν να αποστειρωθούν σε ντουλάπι στεγνώματος, καθώς δεν μπορούν να αντέξουν τις υψηλές θερμοκρασίες - γίνονται εύθραυστα και αλλοιώνονται. Τα υγρά βράζουν στους 150-160 °C και αλλάζουν τη χημική τους σύσταση.

Για να αποφευχθεί η επακόλουθη μόλυνση των αποστειρωμένων αντικειμένων από μικρόβια του αέρα, τυλίγονται σε χαρτί πριν από την αποστείρωση. Τα πιάτα Petri τυλίγονται σε χαρτί, 2 τεμάχια το καθένα, για να μην υπάρχουν κενά στο τύλιγμα. Οι γυάλινοι σωλήνες και οι πιπέτες τυλίγονται επίσης σε χαρτί, πρώτα το καθένα ξεχωριστά, και στη συνέχεια σε συσκευασίες των 10-20 τεμαχίων. Το τύλιγμα των σωλήνων και των πιπέτων πρέπει να είναι εξαιρετικά προσεκτικό για την πλήρη προστασία τους εξωτερική επιφάνειααπό την επικοινωνία με τον αέρα. Πριν από την αποστείρωση με ζεστό αέρα, οι φιάλες, οι δοκιμαστικοί σωλήνες, οι φιάλες κλείνονται με βαμβακερά πώματα και χάρτινα πώματα.

Μην αφήνετε τη θερμοκρασία στο στεγνωτήριο να ανέβει πάνω από 170 °C, καθώς σε αυτή τη θερμοκρασία τα βαμβακερά βύσματα γίνονται καφέ και τα χάρτινα περιτυλίγματα γίνονται εύθραυστα και ακόμη και απανθρακωμένα. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που το θερμόμετρο δείχνει 150-160 °C. Αφού περάσει ο απαιτούμενος χρόνος για την αποστείρωση, η θέρμανση διακόπτεται. Για να προστατεύσετε τα πιάτα από το ράγισμα, χρειάζεται μόνο να αποστειρώσετε τα στεγνά πιάτα και να ανοίξετε το ντουλάπι μετά την αποστείρωση μόνο όταν η θερμοκρασία σε αυτό πέσει στους 50-70 ° C. Μικρά εργαστηριακά αντικείμενα, όπως θηλιές πλατίνας, βελόνες, τσιμπιδάκια, ψαλίδι κ.λπ., μπορούν να αποστειρωθούν απλά αναφλέγοντάς τα στη φλόγα καυστήρας αερίου(ή λάμπες αλκοόλης).

Απολύμανση

Η απολύμανση σε μικροβιολογικό εργαστήριο πρέπει να γίνεται πολύ συχνά. Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα απολυμαντικά είναι τα ακόλουθα: Διάλυμα 3-5% καρβολικού οξέος και διαλύματα άλλων ανώτερων φαινολών, διάλυμα 50-70%. εθυλική αλκοόλη, ίδια συγκέντρωση βουτυλικής αλκοόλης, διάλυμα φορμαλδεΰδης 4%, διαλύματα χλωροφορμίου και τολουολίου 1-2%, διάλυμα χλωραμίνης 0,5% κ.λπ.

Σε μικροβιολογικά εργαστήρια κονσερβοποιιών, οι επιφάνειες τραπεζιών, τα πιάτα, τα δάπεδα και οι τοίχοι των χώρων απολυμαίνονται. Για την απολύμανση των επιφανειών του τραπεζιού, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε όχι μόνο διαλύματα αιθυλικής αλκοόλης, αλλά και διαλύματα καρβολικού οξέος.

Απολύμανση συσκευές αποχέτευσηςσε κονσερβοποιία και άλλα επιχειρήσεις τροφίμωνπαράγεται από διάλυμα χλωρίνης 5-10%. Για την απολύμανση του κυκλοφορούντος γυάλινα δοχείαχρησιμοποιείται σε εργοστάσια κονσερβοποιίας νερό χλωρίου, που περιέχει τουλάχιστον 100 mg ενεργού χλωρίου ανά λίτρο. Για να προετοιμάσετε ένα τέτοιο διάλυμα, πάρτε χλωρίνη και ανακατέψτε το με μια μικρή ποσότητα νερού μέχρι να ληφθεί μια παχιά μάζα. γαλακτώδης. Αυτό το μείγμα προστίθεται σε νερό, ανακατεύεται καλά και αφήνεται για μια μέρα. Λευκαντική σκόνηαντιδρά σχηματίζοντας ένυδρο οξείδιο του ασβεστίου - Ca(OH)2 - και ενεργό χλώριο. Το Ca(OH)2 κατακάθεται στον πυθμένα, το διάλυμα πάνω από το ίζημα μετά τη διαύγαση αποδεικνύεται διαφανές και πρασινωπό χρώμα. Το μούλιασμα του δοχείου σε αυτό το διάλυμα διαρκεί 10 λεπτά. Μετά τη χλωρίωση, το δοχείο πρέπει να πλυθεί καλά με τρεχούμενο νερό.

Αποστείρωση- στειρότητα καταστροφή παθογόνων και μη παθογόνων μικροοργανισμών σε φυτικές και σποριακές μορφές σε οποιοδήποτε υλικό.

Προετοιμασία πιάτων για αποστείρωση. Γυαλικάπρέπει να πλένονται καθαρά και να αποστειρώνονται. Για πλύσιμο, χρησιμοποιήστε σαπούνι ή χημικά διαλύματα απορρυπαντικά. Τα νέα πιάτα προβράζονται σε διάλυμα 1-2%. του υδροχλωρικού οξέος, για να αποφευχθεί η επακόλουθη έκπλυση του γυαλιού. Τα πιάτα που πλένονται σε τρεχούμενο νερό ξεπλένονται με απεσταγμένο νερό και στεγνώνουν.

Βακτηριολογικοί σωλήνες. Οι κωνικές, ματ φιάλες κλείνονται με πώματα από βαμβακερή γάζα, που αποτελούνται από σφιχτά στριμμένα ρολά από βαμβάκι, καλυμμένα με ένα στρώμα γάζας. Μεταλλικά πώματα με τη μορφή εξωτερικών πωμάτων έχουν επίσης αναπτυχθεί για βακτηριολογικούς δοκιμαστικούς σωλήνες. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η αποστείρωση βαμβακερών βυσμάτων σε υψηλές θερμοκρασίες οδηγεί στην απελευθέρωση ουσιών από το βαμβάκι που αναστέλλουν την ανάπτυξη ορισμένων ευαίσθητων βακτηρίων, όπως η βρουκέλλα.

Όταν τοποθετείτε πιπέτες, τοποθετήστε μια μπατονέτα στο επάνω άκρο. Οι πιπέτες Παστέρ πρέπει να έχουν σφραγισμένο τριχοειδές. Κάθε πιπέτα μέτρησης τυλίγεται σε μια μακριά λωρίδα χαρτιού πλάτους 4-5 cm, ξεκινώντας από το στόμιο, ελικοειδώς σε όλο το μήκος της. Οι πιπέτες Παστέρ τυλίγονται σε χαρτί, 10-20 τεμάχια το καθένα, δοκιμαστικοί σωλήνες - 15-20 τεμάχια το καθένα. Είναι προτιμότερο να αποθηκεύετε όλα τα είδη πιπέτων πριν και μετά την αποστείρωση σε ειδικές μεταλλικές θήκες. Τα πώματα στις φιάλες καλύπτονται επιπλέον με χάρτινα πώματα.

Πριν από την αποστείρωση, τα καθαρά, συναρμολογημένα πιάτα Petri τυλίγονται σε χαρτί, 3 έως 4 τεμάχια το καθένα. Μετά την αποστείρωση, το χαρτί προστατεύει τα αποστειρωμένα γυάλινα σκεύη από μόλυνση από μικροχλωρίδα.

Πριν από την αποστείρωση, τα πιάτα τοποθετούνται στο στεγνωτήριο όχι πολύ σφιχτά για να διασφαλιστεί η κυκλοφορία του αέρα και προσέχουμε η θερμοκρασία να μην ξεπερνά τους 180°C, αφού σε υψηλότερη θερμοκρασία το χαρτί και το βαμβάκι θα απανθρακωθούν. Μετά την ολοκλήρωση της αποστείρωσης, το ντουλάπι στεγνώματος δεν ανοίγει μέχρι τότε. Μέχρι να πέσει η θερμοκρασία σε αυτό στους 70-80?C, γιατί απότομη πτώσηοι θερμοκρασίες μπορεί να προκαλέσουν σπάσιμο του γυαλιού.

Εάν τα πιάτα προορίζονται για αποστείρωση θρεπτικών μέσων σε αυτά με αποστείρωση σε αυτόκλειστο υπό πίεση τουλάχιστον 1 atm, τότε δεν είναι προ-αποστειρωμένα. Κατά την αποστείρωση μέσων με ρέοντα ατμό ή σε αυτόκλειστο υπό πίεση όχι μεγαλύτερη από 0,5 atm. Πρέπει να χρησιμοποιούνται αποστειρωμένα δοχεία.

Αποστείρωση με ξηρό θερμαινόμενο αέρα. Η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση καθαρών γυάλινων σκευών. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιείται ένας φούρνος Pasteur - ένα ειδικό ντουλάπι στεγνώματος με διπλά τοιχώματα. Εξωτερικά είναι επενδεδυμένο με ανθεκτικό στη θερμότητα υλικό. Στην κορυφή υπάρχει ένα θερμόμετρο. Μεταξύ της θερμομονωτικής επένδυσης και της εσωτερικής μεταλλικό σώμαΣτο κάτω μέρος τοποθετείται αυτόματη ηλεκτρική αντίσταση. Όταν το ντουλάπι στεγνώματος είναι ενεργοποιημένο, ο αέρας στο εσωτερικό του θερμαίνεται. Μόλις επιτευχθεί η καθορισμένη θερμοκρασία, σημειώνεται ο χρόνος έναρξης της αποστείρωσης. Λειτουργία αποστείρωσης: σε θερμοκρασία 155-160° C - έκθεση για 2 ώρες, στους 165-170° C - 1-1,5 ώρες, στους 180° C - 1 ώρα Μετά το χρόνο αποστείρωσης, η θέρμανση διακόπτεται.

Αυτόκαυστο. Πρόκειται για αποστείρωση με πίεση ατμού σε συνδυασμό με υψηλή θερμοκρασία V ειδική συσκευή- αυτόκλειστο. Όταν ο κορεσμένος ατμός συναντά ένα πιο ψυχρό αντικείμενο, ο ατμός συμπυκνώνεται σε νερό, με αποτέλεσμα την απελευθέρωση ένας μεγάλος αριθμός απόθερμότητα. Επιπλέον, μειώνεται ο όγκος του ατμού, γεγονός που διευκολύνει τη διείσδυσή του στα εσωτερικά μέρη του υλικού που αποστειρώνεται. Απαραίτητη προϋπόθεση είναι η παροχή πραγματικά κορεσμένου ατμού, ώστε η επαφή του με κρύο αντικείμενο να οδηγεί σε άμεση συμπύκνωση και θέρμανση. Η βιομηχανία παράγει αυτόκλειστα κάθετα και οριζόντια.

Ένα κατακόρυφο αυτόκλειστο είναι ένα κυλινδρικό μεταλλικό καζάνι με διπλά τοιχώματα, σφραγισμένο με καπάκι. Το νερό χύνεται μεταξύ των τοίχων μέσω ειδικής βρύσης με χοάνη σε ένα ορισμένο επίπεδο. Το εσωτερικό τοίχωμα του λέβητα είναι εξοπλισμένο με οπές στο επάνω μέρος και μια βρύση στο κάτω μέρος, μέσω των οποίων, όταν θερμαίνεται το νερό, ο ατμός εκτοπίζει τον αέρα από το λέβητα. Ένα μεταλλικό προστατευτικό πλαίσιο τοποθετείται στην κορυφή του αυτόκλειστου και μεταξύ αυτού και του ίδιου του αυτόκλειστου θα πρέπει να υπάρχει ελεύθερος χώρος. Το αυτόκλειστο θερμαίνεται με σύνδεση στο ηλεκτρικό δίκτυο.

Το αυτόκλειστο φορτώνεται με το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί, το καπάκι και η βρύση μέσω της οποίας χύθηκε νερό κλείνουν και η κάτω βρύση αφήνεται προσωρινά ανοιχτή. Το θερμαινόμενο νερό μεταξύ των τοιχωμάτων του αυτόκλειστου βράζει, ο ατμός που προκύπτει ανεβαίνει και περνά μέσα από τις επάνω οπές του εσωτερικού τοιχώματος στον λέβητα, σπρώχνοντας τον αέρα μέσω της κάτω ανοιχτής βρύσης. Όταν όλος ο αέρας μετατοπιστεί και ο ατμός αρχίσει να βγαίνει σε ομοιόμορφο ρεύμα, η κάτω βαλβίδα είναι κλειστή. Ως αποτέλεσμα, η πίεση ατμού μέσα στο αυτόκλειστο αυξάνεται. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που η πίεση φτάνει σε μια δεδομένη τιμή (σύμφωνα με το μανόμετρο). Η θερμότητα ρυθμίζεται καθ' όλη τη διάρκεια της αποστείρωσης, διατηρώντας την πίεση του ατμού στο ίδιο επίπεδο. Εάν η πίεση στο εσωτερικό του αυτόκλειστου αυξηθεί υπερβολικά, υπάρχει μια βαλβίδα ασφαλείας μέσω της οποίας διαφεύγει αυτόματα ο υπερβολικός ατμός.

Καθώς η πίεση του ατμού αυξάνεται, η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο αυξάνεται ανάλογα.

Το μανόμετρο δείχνει την πίεση του ατμού χωρίς να λαμβάνει υπόψη το περιβάλλον ατμοσφαιρική πίεση(760 mmHg). Μετά τη λήξη του χρόνου αποστείρωσης, το αυτόκλειστο απενεργοποιείται. Μετά την ψύξη, όταν η ένδειξη του μανόμετρου είναι μηδέν, ανοίξτε τη βαλβίδα για να απελευθερώσετε ατμό.

Ένα οριζόντιο αυτόκλειστο διαφέρει από ένα κάθετο αυτόκλειστο στο σχεδιασμό, αλλά η αρχή λειτουργίας του είναι η ίδια.

ιολογική στείρωση παθολογικό ζώο

Δείγματα εντύπων που πρέπει να συμπληρώνονται κατά την αποστολή παθολογικού υλικού στο εργαστήριο