Η επίδραση των φυσικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς. Τρόπος λειτουργίας του φούρνου στεγνώματος Αριθμός ελέγχου...

Στην εργαστηριακή πρακτική, όταν εργάζεστε με μικροοργανισμούς, είναι απαραίτητο να λαμβάνετε συνεχώς μέτρα για να διασφαλίζετε ότι τα πιάτα, τα μέσα καλλιέργειας και τα μεταλλικά εργαλεία που χρησιμοποιούνται κατά την εργασία δεν περιέχουν μικρόβια. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες μέθοδοι αποστείρωσης:

Αποστείρωση υπερθερμασμένος ατμόςυπό πίεση;

Αποστείρωση με ρέοντα ατμό.

Αποστείρωση με ζεστό αέρα;

Απολύμανση.

Η καλύτερη μέθοδος αποστείρωσης είναι η επεξεργασία διαφόρων αντικειμένων με υπέρθερμο ατμό ειδικές συσκευές- αυτόκλειστα.

Αποστείρωση σε αυτόκλειστο και υπέρθερμο ατμό υπό πίεση

Τα αυτόκλειστα είναι μεταλλικοί (χάλυβας, χυτοσίδηρος ή χαλκός) λέβητες με διπλά τοιχώματα και ογκώδες καπάκι που σφραγίζεται ερμητικά με μπουλόνια και ελαστικό παρέμβυσμα. Ανάλογα με το σύστημα θέρμανσης, τα αυτόκλειστα είναι ατμού, ηλεκτρικά και πυρκαγιάς (Εικ. 42). Η παραγωγή ατμού υψηλής πίεσης και υπέρθερμου ατμού σε θερμοκρασία 115-120°C σε αυτόκλειστο σάς επιτρέπει να καταστρέψετε τόσο τα βλαστικά κύτταρα όσο και τα μικροβιακά σπόρια μέσα σε 20-30 λεπτά.

Σε ένα αυτόκλειστο αποστειρώνονται όλα εκείνα τα αντικείμενα που δεν αλλοιώνονται σε υψηλές θερμοκρασίες: διάφορα υγρά (νερό, θρεπτικά μέσα που δεν περιέχουν υδατάνθρακες), γυάλινα σκεύη, μεταλλικά εργαλεία, βαμβάκι, γάζα, χαρτί κ.λπ.

Σε περιπτώσεις όπου ορισμένες ουσίες δεν αντέχουν το κανονικό καθεστώς αποστείρωσης σε αυτόκλειστο (ιδιαίτερα, θρεπτικά μέσα που περιέχουν σάκχαρα), αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο σε θερμοκρασία 112 ° C για 20 λεπτά, καθώς και υπό ηπιότερες συνθήκες.

Στο υψηλές πιέσειςυπερθερμασμένος ατμός στο αυτόκλειστο, η θερμοκρασία θέρμανσης αυξάνεται ανάλογα. Αυτό προκαλεί καραμελοποίηση των σακχάρων που προστίθενται σε ορισμένα μέσα καλλιέργειας, καθιστώντας τα μέσα ακατάλληλα για τον προσδιορισμό των φυσιολογικών ιδιοτήτων των μικροβίων.

Η πίεση μέσα στο αυτόκλειστο μετριέται χρησιμοποιώντας ένα μανόμετρο που είναι τοποθετημένο στο καπάκι ή στο σώμα του αυτόκλειστου. Εάν η πίεση αυξηθεί υπερβολικά, ενεργοποιείται αυτόματα μια βαλβίδα ασφαλείας, η οποία βρίσκεται, ανάλογα με το σχέδιο, είτε στο καπάκι είτε στην πλαϊνή επιφάνεια του τοιχώματος του αυτόκλειστου. Ένας πίδακας ατμού που βγαίνει από τη βαλβίδα ασφαλείας με ένα σφύριγμα προειδοποιεί για την ανάγκη διακοπής της θέρμανσης. Εάν η θέρμανση δεν σταματήσει, το αυτόκλειστο μπορεί να εκραγεί.

Μερικές φορές τοποθετείται ένα θερμόμετρο σε μια ειδική τσέπη στο καπάκι του αυτόκλειστου, με την οποία μετράται η θερμοκρασία αποστείρωσης. Υπάρχει μια βάση μέσα στο αυτόκλειστο, κάτω από την οποία χύνεται νερό μέσω ενός σωλήνα με ένα χωνί που βρίσκεται έξω από το αυτόκλειστο. Επιπλέον, τα αυτόκλειστα είναι εξοπλισμένα με μια βρύση για την απελευθέρωση ατμού και αέρα και μια βρύση για την έκχυση νερού.

Οι κανόνες για το χειρισμό ενός αυτόκλειστου κατά την αποστείρωση είναι οι εξής: η συσκευή γεμίζει με νερό μέσω χοάνης και σωλήνα, το επίπεδο του οποίου πρέπει να είναι κάτω από τη βάση. Τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν τοποθετούνται σε ειδικές μεταλλικές φιάλες και φορτώνονται σε αυτόκλειστο. Το καπάκι του αυτόκλειστου είναι βιδωμένο.

Ανοίγοντας τη βρύση για να διαφύγει ο ατμός και ο αέρας, ξεκινά η θέρμανση. Μόλις το νερό βράσει, ο ατμός που προκύπτει αρχίζει να εκτοπίζει τον αέρα από το αυτόκλειστο. Η βαλβίδα εξαγωγής ατμού διατηρείται ανοιχτή έως ότου ρέει ξηρός ατμός από αυτήν σε συνεχή ροή. Αυτό υποδηλώνει πλήρη απομάκρυνση του αέρα από το αυτόκλειστο. Τότε η βρύση κλείνει. Ο ατμός, που συσσωρεύεται με περαιτέρω θέρμανση σε όλο και μεγαλύτερες ποσότητες, αυξάνει την πίεση στο αυτόκλειστο, και ταυτόχρονα τη θερμοκρασία. Όταν εργάζεστε με αυτόκλειστο, μπορείτε να καθοδηγηθείτε από τον πίνακα των σχέσεων μεταξύ της πίεσης του ατμού και της θερμοκρασίας του (Πίνακας 4).

Αφού φτάσει η βελόνα του μανόμετρου τον απαιτούμενο δείκτηπίεση (η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο θα αντιστοιχεί στην αποδεκτή θερμοκρασία αποστείρωσης), ρυθμίστε τη θέρμανση του αυτόκλειστου έτσι ώστε η πίεση να παραμείνει στο ίδιο επίπεδο για τον απαιτούμενο χρόνο. Στο τέλος της αποστείρωσης, σταματήστε τη θέρμανση. Όταν η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο πέσει και η βελόνα του μανόμετρου πέσει στο μηδέν (η πίεση στο αυτόκλειστο ισούται με την ατμοσφαιρική πίεση), ανοίξτε προσεκτικά τη βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, απελευθερώστε τον ατμό και, ανοίγοντας το καπάκι του αυτόκλειστου, αφαιρέστε το υλικό. Είναι αδύνατο να ανοίξετε πρόωρα τη βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, πριν πέσει η πίεση στο αυτόκλειστο. Μια απότομη μείωση της πίεσης στο θάλαμο του αυτόκλειστου θα προκαλέσει βίαιο βρασμό υγρών που θερμαίνονται σε υψηλότερες θερμοκρασίες από 100 °C, δηλ. πάνω από το σημείο βρασμού στο κανονικό ατμοσφαιρική πίεση. Τα υγρά που βράζουν βίαια θα βρέξουν ή ακόμα και θα σπρώξουν βαμβακερά βύσματα έξω από τα δοχεία - η δουλειά θα γίνει μάταια. Τα θρεπτικά μέσα θα αλλοιωθούν, καθώς η μικροχλωρίδα που προέρχεται από τον αέρα αναπτύσσεται εύκολα σε βρεγμένα βύσματα, διεισδύει στο εσωτερικό και μολύνει τα μέσα. Επιπλέον, το άνοιγμα ενός αυτόκλειστου με αυξημένη πίεση είναι επικίνδυνο για τον εργαζόμενο.

Ωστόσο, μόλις η βελόνα του μανόμετρου σταματήσει στο μηδέν, το αυτόκλειστο πρέπει να ανοίξει αμέσως, διαφορετικά η συμπύκνωση θα αρχίσει να ρέει πάνω στα βύσματα και επίσης θα τα κάνει να βραχούν. Για να αποφύγετε το βρέξιμο των βυσμάτων με νερό συμπύκνωσης, καλύπτονται με χαρτί πριν από την αποστείρωση.

Τα υλικά που τοποθετούνται σε αυτόκλειστο θα αποστειρωθούν αξιόπιστα σε 20-30 λεπτά εάν η θερμοκρασία διατηρείται στους 120°C, που αντιστοιχεί σε πίεση 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) ή σε μανόμετρο 1 atm πάνω από το κανονικό. Ένα αυτόκλειστο μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί με επιτυχία για την αποστείρωση μέσων με ρέοντα ατμό. Σε αυτή την περίπτωση, το καπάκι του αυτόκλειστου δεν βιδώνεται.

Λέβητας Koch και αποστείρωση με ρέοντα ατμό

Ο λέβητας Koch είναι ένας κύλινδρος από γαλβανισμένο φύλλο ή χαλκό με διπλά τοιχώματα και κωνικό καπάκι σε σχήμα κράνους (Εικ. 43). Υπάρχει μια τρύπα στη μέση του καπακιού για ένα θερμόμετρο. Το εξωτερικό του λέβητα Koch καλύπτεται με ένα στρώμα θερμομονωτικό υλικό: αμίαντος, λινέλαιο κ.λπ.

Στο εσωτερικό του λέβητα τοποθετείται ένα χώρισμα (stand), χωρίζοντας τον εσωτερικό χώρο του λέβητα σε δύο τμήματα: πάνω και κάτω. Το κάτω τμήμα είναι γεμάτο με νερό, το επίπεδο του οποίου καθορίζεται από το ποτήρι του μετρητή νερού: το νερό δεν πρέπει να καλύπτει το πάνω μέρος της βάσης. Τα προς αποστείρωση αντικείμενα τοποθετούνται στο επάνω τμήμα του λέβητα σε δικτυωτούς κάδους τοποθετημένους ο ένας πάνω στον άλλο. Έχοντας κλείσει το λέβητα με ένα καπάκι, αρχίζουν να θερμαίνουν το νερό σε αυτό. Αρχή αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που το θερμόμετρο δείχνει 98-100°C. Ελλείψει θερμομέτρου, ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που ο ατμός αρχίζει να διαφεύγει έντονα από την τρύπα στο καπάκι του λέβητα. Έτσι, τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν θα βρίσκονται πάντα σε ένα ρεύμα ρέοντος ατμού ενώ ο λέβητας λειτουργεί.

Η μέθοδος αποστείρωσης με ρέοντα ατμό, λόγω της απλότητας και της διαθεσιμότητάς της, χρησιμοποιείται ευρέως στην εργαστηριακή πρακτική. Ο ρέοντας ατμός χρησιμοποιείται για την αποστείρωση κυρίως θρεπτικών μέσων των οποίων οι ιδιότητες αλλάζουν όταν θερμαίνονται πάνω από 100°C: πρωτεΐνη, υδατάνθρακες και ζελατίνη. Για αυτά τα περιβάλλοντα, η μέθοδος αποστείρωσης με ρέοντα ατμό είναι η πλέον κατάλληλη.

Το μειονέκτημα της μεθόδου αποστείρωσης με ρέοντα ατμό είναι η διάρκειά της, καθώς για την πλήρη αποστείρωση του μέσου είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθεί επαναλαμβανόμενη θέρμανση σε λέβητα για ορισμένο χρόνο - από 20 λεπτά έως 1,5 ώρα (κατά μέσο όρο 30-45 λεπτά) ανάλογα με ο όγκος του υγρού σε διαστήματα 24 ωρών Συνιστάται να διατηρείται ολόκληρο το χρονικό διάστημα μεταξύ της θέρμανσης του μέσου σε θερμοστάτη στους 25-30 °C.

Μια μόνο θέρμανση σε λέβητα Koch προκαλεί το θάνατο μόνο φυτικών μικροβιακών κυττάρων, αλλά τα σπόρια μπορούν να επιβιώσουν. Όταν διατηρείτε το αποστειρωμένο θρεπτικό μέσο μέσα ευνοϊκές συνθήκες(στο θερμοκρασία δωματίου, ή ακόμα καλύτερα σε θερμοστάτη), μερικά από τα υπόλοιπα σπόρια θα βλαστήσουν και θα μετατραπούν σε βλαστικά κύτταρα μέχρι την επόμενη μέρα. Η επαναλαμβανόμενη θέρμανση θα προκαλέσει τον θάνατο αυτών των νεοαναπτυγμένων κυττάρων. Τέλος, μια τρίτη θέρμανση μετά από μια ημέρα διατήρησης του μέσου σε θερμοστάτη θα εξασφαλίσει πλήρη στειρότητα. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται κλασματική αποστείρωση. ΣΕ πρακτική δουλειάΑντί για αποστείρωση με ρέοντα ατμό σε λέβητα Koch, η συμβατική αποστείρωση σε αυτόκλειστα χρησιμοποιείται συχνά στους 112 °C με αντίθλιψη 0,5 atm για 15-20 λεπτά.

Ντουλάπι στεγνώματος και αποστείρωση με ζεστό αέρα

Στην εργαστηριακή πρακτική, για την αποστείρωση μικροβιολογικών γυάλινων σκευών, είναι απαραίτητο να υπάρχει στεγνωτήριο ή ο λεγόμενος φούρνος Pasteur. Η αρχή σχεδιασμού του θαλάμου στεγνώματος και του φούρνου Pasteur είναι η ίδια. Οι σόμπες κατασκευάζονται μόνο ορθογώνιο σχήμα, και τα ντουλάπια στεγνώματος μπορούν να έχουν όχι μόνο ορθογώνιο, αλλά και κυλινδρικό σχήμα (Εικ. 44 και 45). Σε αυτές τις συσκευές, η αποστείρωση πραγματοποιείται με ζεστό αέρα (ξηρή θερμότητα) σε θερμοκρασία 160 °C για 1 ώρα ή σε θερμοκρασία 150 °C για 2 ώρες.

Τόσο οι φούρνοι Pasteur όσο και οι φούρνοι στεγνώματος είναι κοίλες εσωτερικές συσκευές με διπλά τοιχώματα, με διπλές πόρτες που κλείνουν ερμητικά. Εξωτερικά καλύπτονται με στρώμα αμιάντου για θερμομόνωση. Κυκλοφορεί μεταξύ των τοίχων ζεστός αέρας, η θέρμανση των οποίων πραγματοποιείται είτε με ηλεκτρικές σπείρες είτε με καυστήρες αερίου. Μέσα στο ντουλάπι υπάρχουν πολλά (συνήθως δύο ή τρία) ράφια με τρύπες. Υπάρχουν δύο ανοίγματα στο πάνω μέρος του ντουλαπιού: το ένα είναι για το θερμόμετρο και το άλλο για αερισμό. Τα ηλεκτρικά ντουλάπια στεγνώματος είναι τα πιο βολικά.

Τα ντουλάπια στεγνώματος τελευταίας σχεδίασης διαθέτουν τέσσερα στάδια θέρμανσης, τα οποία μπορούν να ενεργοποιηθούν από έναν ειδικό ρυθμιστή που τοποθετείται στο πλευρικό τοίχωμα του ντουλαπιού. Ο επιθυμητός βαθμός θέρμανσης επιτυγχάνεται με την ενεργοποίηση ενός, δύο, τριών ή και των τεσσάρων ηλεκτρικές σπείρες, και η σειρά ενεργοποίησης των σπειρών μπορεί να είναι οποιαδήποτε.

Εκτός από τα γυάλινα σκεύη, μπορείτε να αποστειρώσετε γάζα και βαμβάκι σε ντουλάπια στεγνώματος, αν και είναι ακόμα καλύτερο να τα επεξεργαστείτε σε αυτόκλειστο, καθώς κιτρινίζουν σε θερμοκρασία 160 °C. Δεν μπορεί να αποστειρωθεί σε ντουλάπι στεγνώματοςΤα προϊόντα από καουτσούκ, καθώς δεν αντέχουν τις υψηλές θερμοκρασίες, γίνονται εύθραυστα και αλλοιώνονται. Τα υγρά βράζουν στους 150-160 °C και αλλάζουν τη χημική τους σύσταση.

Για να αποφευχθεί η επακόλουθη μόλυνση των αποστειρωμένων αντικειμένων από μικρόβια του αέρα, τυλίγονται σε χαρτί πριν από την αποστείρωση. Τα πιάτα Petri τυλίγονται σε χαρτί, 2 τεμάχια το καθένα, για να μην υπάρχουν κενά στο τύλιγμα. Οι γυάλινοι σωλήνες και οι πιπέτες τυλίγονται επίσης σε χαρτί, πρώτα το καθένα ξεχωριστά, και στη συνέχεια σε συσκευασίες των 10-20 τεμαχίων. Το τύλιγμα των σωλήνων και των πιπέτων πρέπει να είναι εξαιρετικά προσεκτικό για την πλήρη προστασία τους εξωτερική επιφάνειααπό την επικοινωνία με τον αέρα. Πριν από την αποστείρωση με ζεστό αέρα, οι φιάλες, οι δοκιμαστικοί σωλήνες, οι φιάλες κλείνονται με βαμβακερά πώματα και χάρτινα πώματα.

Μην αφήνετε τη θερμοκρασία στο στεγνωτήριο να ανέβει πάνω από 170 °C, καθώς σε αυτή τη θερμοκρασία τα βαμβακερά βύσματα γίνονται καφέ και τα χάρτινα περιτυλίγματα γίνονται εύθραυστα και ακόμη και απανθρακωμένα. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που το θερμόμετρο δείχνει 150-160 °C. Αφού περάσει ο απαιτούμενος χρόνος για την αποστείρωση, η θέρμανση διακόπτεται. Για να προστατεύσετε τα πιάτα από το ράγισμα, χρειάζεται μόνο να αποστειρώσετε τα στεγνά πιάτα και να ανοίξετε το ντουλάπι μετά την αποστείρωση μόνο όταν η θερμοκρασία σε αυτό πέσει στους 50-70 ° C. Μικρά εργαστηριακά αντικείμενα, όπως θηλιές πλατίνας, βελόνες, τσιμπιδάκια, ψαλίδια κ.λπ., μπορούν να αποστειρωθούν απλά θερμαίνοντάς τα σε φλόγα καυστήρας αερίου(ή λάμπες αλκοόλης).

Απολύμανση

Η απολύμανση σε μικροβιολογικό εργαστήριο πρέπει να γίνεται πολύ συχνά. Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα απολυμαντικά είναι τα ακόλουθα: Διάλυμα 3-5% καρβολικού οξέος και διαλύματα άλλων ανώτερων φαινολών, διάλυμα 50-70%. εθυλική αλκοόλη, ίδια συγκέντρωση βουτυλικής αλκοόλης, διάλυμα φορμαλδεΰδης 4%, διαλύματα χλωροφορμίου και τολουολίου 1-2%, διάλυμα χλωραμίνης 0,5% κ.λπ.

Σε μικροβιολογικά εργαστήρια κονσερβοποιιών, οι επιφάνειες τραπεζιών, τα πιάτα, τα δάπεδα και οι τοίχοι των χώρων απολυμαίνονται. Για την απολύμανση των επιφανειών του τραπεζιού, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε όχι μόνο διαλύματα αιθυλικής αλκοόλης, αλλά και διαλύματα καρβολικού οξέος.

Απολύμανση συσκευές αποχέτευσηςσε κονσερβοποιία και άλλα επιχειρήσεις τροφίμωνπαράγεται από διάλυμα χλωρίνης 5-10%. Για την απολύμανση του κυκλοφορούντος γυάλινα δοχείαχρησιμοποιείται σε εργοστάσια κονσερβοποιίας νερό χλωρίου, που περιέχει τουλάχιστον 100 mg ενεργού χλωρίου ανά λίτρο. Για να προετοιμάσετε ένα τέτοιο διάλυμα, πάρτε χλωρίνη και ανακατέψτε το με μια μικρή ποσότητα νερού μέχρι να ληφθεί μια παχιά μάζα. γαλακτώδης. Αυτό το μείγμα προστίθεται σε νερό, ανακατεύεται καλά και αφήνεται για μια μέρα. Λευκαντική σκόνηαντιδρά σχηματίζοντας ένυδρο οξείδιο του ασβεστίου - Ca(OH)2 - και ενεργό χλώριο. Το Ca(OH)2 κατακάθεται στον πυθμένα, το διάλυμα πάνω από το ίζημα μετά τη διαύγαση αποδεικνύεται διαφανές και πρασινωπό χρώμα. Το μούλιασμα του δοχείου σε αυτό το διάλυμα διαρκεί 10 λεπτά. Μετά τη χλωρίωση, το δοχείο πρέπει να πλυθεί καλά με τρεχούμενο νερό.

Θερμοστάτης– συσκευή για τη διατήρηση σταθερής θερμοκρασίας – που χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια μικροοργανισμών. Είναι ένα ντουλάπι (Εικόνα 1) στο οποίο διατηρείται για μεγάλο χρονικό διάστημα ορισμένη θερμοκρασία. Βέλτιστη θερμοκρασίαγια την αναπαραγωγή πολλών μικροοργανισμών 37 ºС. Οι θερμοστάτες διατίθενται σε τύπους ξηρού αέρα και νερού.

Ντουλάπι στεγνώματος (φούρνος Pasteur)χρησιμοποιείται για ξηρή θερμική αποστείρωση πιάτων, εξοπλισμού και ξηρών υλικών, όπως άμυλο, κιμωλία (Εικόνα 2). Το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί είναι προτυλιγμένο σε χαρτί και τοποθετείται σε ντουλάπι για να μην ακουμπάει τους τοίχους. Η αποστείρωση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 160 ºС για δύο ώρες. Δεν συνιστάται η αύξηση της θερμοκρασίας πάνω από 180 ºС: τα βαμβακερά βύσματα και το χαρτί αρχίζουν να φθείρονται (μαυρίζουν καφέ, γίνονται εύθραυστα). Το αποστειρωμένο υλικό αφαιρείται αφού το ντουλάπι απενεργοποιηθεί και κρυώσει, κατά προτίμηση όταν η θερμοκρασία στο ντουλάπι είναι ίση με τη θερμοκρασία δωματίου.

Συσκευή μέτρησης αποικιών(Εικόνα 3) - ένας ημιαυτόματος μετρητής εξοπλισμένος με ηλεκτρικό στυλό με συσκευή ελατηρίου, σχεδιασμένο για την καταμέτρηση βακτηριακών αποικιών σε πιάτα Petri. Φλιτζάνι
Ένα Petri με βακτηριακές αποικίες τοποθετείται ανάποδα σε ένα γυαλί σάρωσης. Η ελαφριά πίεση του ηλεκτρικού στυλό στην περιοχή του πυθμένα του πιάτου Petri που αντιστοιχεί στη θέση της αποικίας αφήνει ένα σημάδι στο ποτήρι. Σε αυτή την περίπτωση, η θήκη ανεβαίνει, το κύκλωμα κλείνει και οι ενδείξεις του μετρητή αυξάνονται κατά μία. Ο αριθμός των βακτηριακών αποικιών μετράται με τον υπολογισμό της διαφοράς στις μετρήσεις του μετρητή παλμών πριν από την έναρξη της μέτρησης και μετά το τέλος της.

Αεροστεγής λέβης βρασμού(Εικόνα 4) είναι μια συσκευή με παχύ τοίχωμα σχεδιασμένη για την αποστείρωση πιάτων και μέσων καλλιέργειας με ατμό υπό πίεση. Πρόκειται για ένα σφραγισμένο καζάνι με διπλά μεταλλικά τοιχώματα και καπάκι. Ο χώρος μεταξύ των τοίχων (θάλαμος υδρατμών) είναι γεμάτος με νερό. Εσωτερικό(θάλαμος αποστείρωσης) είναι εξοπλισμένος με μανόμετρο, βαλβίδες ασφαλείας και βρύση για την αποστράγγιση νερού και ατμού. Για να δημιουργήσετε μια σφιχτή σφράγιση, το αυτόκλειστο κλείνει καλά με ένα καπάκι με ελαστικό παρέμβυσμα. Χρησιμοποιείται για την αποστείρωση των μέσων καλλιέργειας υπό πίεση από 0,5 έως 1,0 MPa για 20...30 λεπτά.

1 – σώμα; 2 – θερμόμετρο; 1 – κάλυμμα; 2 – σώμα;

3 – πόρτα; 4 – ποτενσιόμετρο; 3 – κιβώτιο ταχυτήτων. 4 – μονάδα ελέγχου.

5 – διακόπτης εναλλαγής. 6 – λαμπτήρας; 5 – σήμανση. 6 – θερμόμετρο

7 – οπές εξαερισμού

Εικόνα 1 - Θερμοστάτης Εικόνα 2 - Ντουλάπι στεγνώματος

1 – τραπέζι για ένα πιάτο Petri. 2 – στυλό με συσκευή ελατηρίου.

3 – δείκτης μετρητή. 4 – εναλλαγή διακόπτη για να ενεργοποιήσετε τον μετρητή παλμών. 5 – Ενεργοποιήστε τον διακόπτη για να ανάψετε τη λυχνία φωτισμού του μετρητή

Εικόνα 3 - Συσκευή μέτρησης αποικιών μικροοργανισμών

Η αποστείρωση αντιπροσωπεύεται από φυσικές, χημικές, μηχανικές και βιολογικές μεθόδους και διάφορες μεθόδους. Η σκοπιμότητα χρήσης μιας συγκεκριμένης μεθόδου αποστείρωσης και των μεθόδων της εξαρτάται από τα χαρακτηριστικά του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί, τη φυσική του και Χημικές ιδιότητες. Η διάρκεια της αποστείρωσης εξαρτάται από το αντικείμενο που αποστειρώνεται, τον παράγοντα αποστείρωσης και τη δόση, τη θερμοκρασία και την υγρασία του περιβάλλον.

Φυσική μέθοδοςαποστείρωση Οι μέθοδοι της φυσικής μεθόδου αποστείρωσης περιλαμβάνουν ξήρανση, καύση και πύρωση, βρασμό, παστερίωση και εκπυρήνωση, θερμό αέρα (ξηρή θερμότητα), υπερήχους, υπεριώδη και ραδιενεργή ακτινοβολία, ρεύμα υψηλής συχνότητας, ηλιακό φως. Η πιο κοινή μέθοδος αποστείρωσης αντικειμένων που μπορούν να εκτεθούν σε υψηλές θερμοκρασίες είναι η αποστείρωση με φωτιά, ζεστό αέρα και κορεσμένο ατμό υπό πίεση. Η φωτιά χρησιμοποιείται για την καύση μολυσμένων αντικειμένων που δεν αντιπροσωπεύουν καμία αξία (περιττά χαρτιά, παλιές ταπετσαρίες, κουρέλια, σκουπίδια), για την απολύμανση των πτυέλων φυματιοπαθών, πτωμάτων ανθρώπων και ζώων που πέθαναν από ειδικά επικίνδυνες λοιμώξεις, καθώς και για καύση και φρύξη διαφόρων αντικειμένων. Η καύση και η πύρωση χρησιμοποιούνται ευρέως στη μικροβιολογική πρακτική για την απολύμανση εργαλείων, εργαστηριακών και φαρμακευτικών υαλικών. Η φρύξη σε φλόγα καυστήρα ή το flambéing είναι μια μέθοδος αποστείρωσης κατά την οποία το αντικείμενο αποστειρώνεται πλήρως, καθώς τα φυτικά κύτταρα, οι κύστεις και τα σπόρια μικροοργανισμών πεθαίνουν. Συνήθως, οι θηλιές, οι σπάτουλες, οι πιπέτες, οι τσουλήθρες και οι καλυπτρίδες, τα μικρά εργαλεία και άλλα μολυσμένα αντικείμενα αποστειρώνονται με φρύξη εάν δεν μπορούν να βράσουν. Δεν συνιστάται η αποστείρωση ψαλιδιών και νυστέρι με θέρμανση, καθώς η επιφάνεια κοπής γίνεται θαμπή όταν εκτίθεται στη φωτιά. Μία από τις απλούστερες και πιο κοινές μεθόδους φυσικής αποστείρωσης που χρησιμοποιούνται στην ιατρική πρακτική είναι η αποστείρωση με θερμό αέρα (ξηρή θερμότητα). Αποστείρωση με ξηρή θερμότηταπραγματοποιείται σε φούρνους ξήρανσης (φούρνοι Pasteur). Ο ξηρός ζεστός αέρας έχει βακτηριοκτόνο, ιοκτόνο, σποριοκτόνο δράση και χρησιμοποιείται κυρίως για την αποστείρωση γυάλινων προϊόντων (εργαστήριο πιάτα - φλιτζάνιαΦιάλες Petri, σιφώνια, δοκιμαστικοί σωλήνες κ.λπ.), καθώς και μεταλλικά προϊόντα που μπορούν να αποστειρωθούν με ατμό υπό πίεση. Επιπλέον, η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση αντικειμένων από πορσελάνη και ανθεκτικών στη θερμότητα ουσιών (ταλκ, λευκή άργιλος), καθώς και ορυκτών και φυτικά έλαια, λίπη, βαζελίνη, λανολίνη, κερί. Ο πιο αποτελεσματικός τρόπος για αυτή τη μέθοδο αποστείρωσης, που εξασφαλίζει τον θάνατο των φυτικών μορφών και των σπορίων, είναι η θερμοκρασία 160 - 180 βαθμών για 15 λεπτά. Δεν μπορείτε να αποστειρώσετε τρόφιμα, ισοτονικά διαλύματα ή είδη από καουτσούκ και συνθετικά υλικά με ξηρή θερμότητα, καθώς τα υγρά βράζουν και χύνονται και το καουτσούκ και τα συνθετικά υλικά λιώνουν. Αποστείρωση κορεσμένο ατμόυπό πίεση - αυτή είναι η πιο αξιόπιστη και πιο συχνά δοκιμασμένη μέθοδος αποστείρωσης επιδέσμων, νερού, ορισμένων φάρμακα, θρεπτικά μέσα, μαλακός εξοπλισμός, εργαλεία, καθώς και για την απολύμανση μολυσμένου υλικού από απόβλητα. Στη χειρουργική πρακτική σάλτσα, οι ρόμπες των χειρουργών και τα εσώρουχα για το άτομο που χειρουργείται απολυμαίνονται με χρήση ατμού σε αυτόκλειστα. Η αποστείρωση με ατμό υπό πίεση πραγματοποιείται σε ειδικές συσκευές - αυτόκλειστα. Το αυτόκαυστο καταστρέφει πλήρως όλους τους μικροοργανισμούς και τα σπόρια. Η μέθοδος αποστείρωσης με πίεση ατμού βασίζεται στη θέρμανση του υλικού με κορεσμένους υδρατμούς υπό πίεση πάνω από την ατμοσφαιρική πίεση. Η συνδυασμένη δράση υψηλής θερμοκρασίας και ατμού καθιστά αυτή τη μέθοδο ιδιαίτερα αποτελεσματική. Σε αυτή την περίπτωση, τόσο τα φυτικά κύτταρα όσο και τα μικροβιακά σπόρια πεθαίνουν. Τα μικροβιακά σπόρια πεθαίνουν μέσα σε 10 λεπτά υπό την επίδραση κορεσμένου υδρατμού και οι φυτικές μορφές πεθαίνουν μέσα σε 1 έως 4 λεπτά. Η υψηλή βακτηριοκτόνος δύναμη του κορεσμένου ατμού οφείλεται στο γεγονός ότι, υπό την επίδραση υδρατμών υπό πίεση, οι πρωτεΐνες του μικροβιακού κυττάρου διογκώνονται και πήζουν, με αποτέλεσμα τα μικροβιακά κύτταρα να πεθαίνουν. Η βακτηριοκτόνος δράση των κορεσμένων υδρατμών ενισχύεται από την υπερβολική πίεση. Η αποστείρωση σε αυτόκλειστο πραγματοποιείται με διαφορετικούς τρόπους. Έτσι, απλά θρεπτικά μέσα (άγαρ κρέας - πεπτόνη και ζωμός κρέατος - πεπτόνης) αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120 βαθμούς (1 atm.). Αλλά με αυτόν τον τρόπο λειτουργίας είναι αδύνατο να αποστειρωθούν μέσα που περιέχουν πρωτεΐνες, υδατάνθρακες και άλλες ουσίες που αλλάζουν εύκολα με θέρμανση. Τα μέσα με υδατάνθρακες αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο σε 0,5 atm. 10 – 15 λεπτά ή κλασματική ροή ατμού. Χρησιμοποιώντας υψηλή θερμοκρασία, μπορείτε να καταστρέψετε τις πιο επίμονες μορφές παθογόνων μικροοργανισμών (συμπεριλαμβανομένων εκείνων που σχηματίζουν σπόρους) όχι μόνο στην επιφάνεια των αντικειμένων που απολυμαίνονται, αλλά και στο βάθος τους. Αυτό είναι το μεγάλο πλεονέκτημα της υψηλής θερμοκρασίας ως αξιόπιστου μέσου αποστείρωσης. Ωστόσο, ορισμένα είδη αλλοιώνονται υπό την επίδραση υψηλών θερμοκρασιών και σε αυτές τις περιπτώσεις είναι απαραίτητο να καταφύγουμε σε άλλες μεθόδους και μέσα απολύμανσης. Η πλήρης αποστείρωση υλικών και αντικειμένων που δεν επιτρέπουν τη χρήση αποστείρωσης σε υψηλή θερμοκρασία επιτυγχάνεται με επαναλαμβανόμενη αποστείρωση με υδρατμούς σε συσκευή Koch σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 100 βαθμούς. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται κλασματική αποστείρωση. Συνοψίζεται στο γεγονός ότι οι υπόλοιπες μη σκοτωμένες μορφές σπορίων μικροβίων, μετά από μια μέρα σε θερμοστάτη στους 37 βαθμούς, βλασταίνουν σε φυτικά κύτταρα, ο θάνατος των οποίων συμβαίνει κατά τη διάρκεια της επακόλουθης αποστείρωσης αυτού του αντικειμένουρέοντας ατμός. Η επεξεργασία με υγρό ατμό πραγματοποιείται τρεις φορές για 30-40 λεπτά. Η θέρμανση του υλικού μία φορά σε θερμοκρασία κάτω των 100 βαθμών είναι γνωστή ως παστερίωση. Η παστερίωση προτάθηκε από τον Παστέρ και προορίζεται κυρίως για την καταστροφή μικροοργανισμών κυρίως μη σπορίων. Η παστερίωση πραγματοποιείται στους 60 - 70 βαθμούς για 15 έως 30 λεπτά, στους 80 βαθμούς για 10 έως 15 λεπτά. Στη μικροβιολογική πρακτική η παστερίωση υλικό σπόρουΣυχνά χρησιμοποιείται για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών μικροοργανισμών που σχηματίζουν σπόρους και για τον προσδιορισμό της ικανότητας των μικροοργανισμών να σχηματίζουν σπόρια. Για υγρά που χάνουν τη γεύση και άλλες πολύτιμες ιδιότητες όταν εκτίθενται σε υψηλές θερμοκρασίες (γάλα, μούρα και χυμοί φρούτων, μπύρα, θρεπτικά υλικά που περιέχουν υδατάνθρακες ή ουρία κ.λπ.), η αποστείρωση με ρέον ατμό πραγματοποιείται στους 50 - 60 βαθμούς για 15 - 33333330 λεπτά ή στους 70 - 80 βαθμούς για 5 - 10 λεπτά. Σε αυτή την περίπτωση, μικρόβια μέσης αντοχής πεθαίνουν, ενώ διατηρούνται πιο ανθεκτικά μικρόβια και σπόρια. Η κλασματική αποστείρωση 5 - 6 φορές στους 60 βαθμούς για 1 ώρα ονομάζεται τυνδαλοποίηση. Πολλά ιατρικά προϊόντα που παρασκευάζονται από πολυμερή υλικά, δεν αντέχουν την αποστείρωση μέθοδος ατμούσύμφωνα με γενικά αποδεκτούς τρόπους. Για πολλά προϊόντα, λόγω των χαρακτηριστικών των υγρών που περιέχουν (συντηρητικά, φάρμακα και άλλα προϊόντα), είναι αδύνατο να αποστειρωθούν χρησιμοποιώντας γενικά αποδεκτές μεθόδους και μεθόδους. Για τέτοια προϊόντα, αναπτύσσονται ατομικά καθεστώτα αποστείρωσης για να διασφαλιστεί η αξιόπιστη αποστείρωση των αντικειμένων. Έτσι, η αποστείρωση του ρότορα για διαχωρισμό του αίματος σε κλάσματα πραγματοποιείται με υδρατμούς σε θερμοκρασία 120 βαθμών για 45 λεπτά. Η στειρότητα των δοχείων συντηρητικού επιτυγχάνεται στους 110 βαθμούς για 60 λεπτά. Το βράσιμο είναι μια μέθοδος αποστείρωσης που χρησιμοποιείται για την αποστείρωση επαναχρησιμοποιήσιμων συρίγγων, χειρουργικών εργαλείων, ελαστικών σωλήνων, γυάλινων και μεταλλικών σκευών. Η αποστείρωση με βρασμό πραγματοποιείται σε αποστειρωτές. Οι μορφές σπορίων σε βραστό νερό πεθαίνουν μετά από 20 - 30 λεπτά. Το βράσιμο για 45 λεπτά χρησιμοποιείται ευρέως για την απολύμανση εκκρίσεων και άλλων μολυσματικών υλικών, λευκών ειδών, πιάτων, παιχνιδιών και ειδών φροντίδας ασθενών. Ζεστό νερό (60 - 100 βαθμούς) με απορρυπαντικάχρησιμοποιείται για πλύσιμο και καθαρισμό μηχανική αφαίρεσηρύπους και μικροοργανισμούς. Τα περισσότερα βλαστικά κύτταρα πεθαίνουν στους 70 βαθμούς μετά από 30 λεπτά. Η αποστείρωση με διήθηση χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου τα υποστρώματα δεν αντέχουν τη θέρμανση, ιδιαίτερα για μέσα που περιέχουν πρωτεΐνες, ορούς, ορισμένα αντιβιοτικά, βιταμίνες και πτητικές ουσίες. Αυτή η τεχνική χρησιμοποιείται αρκετά ευρέως για την αποστείρωση ενός υγρού καλλιέργειας, όταν είναι απαραίτητο να απελευθερωθεί από τα μικροβιακά κύτταρα, αλλά να διατηρηθούν αμετάβλητα όλα τα μεταβολικά προϊόντα που περιέχει. Η μέθοδος περιλαμβάνει το φιλτράρισμα υγρών μέσω ειδικών φίλτρων που έχουν λεπτά πορώδη χωρίσματα και επομένως διατηρούν τα μικροβιακά κύτταρα. Οι δύο πιο ευρέως χρησιμοποιούμενοι τύποι φίλτρων είναι τα φίλτρα μεμβράνης και τα φίλτρα Seitz. Τα φίλτρα μεμβράνης παρασκευάζονται από κολλίδιο, οξικό, κυτταρίνη και άλλα υλικά. Τα φίλτρα Seitz κατασκευάζονται από μείγμα αμιάντου και κυτταρίνης. Επιπλέον, για την αποστείρωση χρησιμοποιούνται φίλτρα από καολίνη με πρόσμικτο. χαλαζιακή άμμος, από χώμα έγχυσης και από άλλα υλικά («κεριά» των Chamberlan, Berkfeld). Τα φίλτρα μεμβράνης και αμιάντου είναι σχεδιασμένα για μία χρήση. Με την υπεριώδη ακτινοβολία, το βακτηριοκτόνο αποτέλεσμα παρέχεται από ακτίνες μήκους 200 - 450 nm, η πηγή των οποίων είναι βακτηριοκτόνοι λαμπτήρες. Χρησιμοποιώντας βακτηριοκτόνες λάμπες, ο αέρας αποστειρώνεται με υπεριώδεις ακτίνες για θεραπευτικούς σκοπούς. προληπτικά ιδρύματα, κουτιά μικροβιολογικών εργαστηρίων, σε επιχειρήσεις Βιομηχανία τροφίμων, σε κουτιά για την παραγωγή εμβολίων και ορών, σε χειρουργεία, αίθουσες χειρισμών, παιδικά ιδρύματα κ.λπ. Οι υπεριώδεις ακτίνες έχουν υψηλή αντιμικροβιακή δράση και μπορούν να προκαλέσουν θάνατο όχι μόνο των βλαστικών κυττάρων, αλλά και των σπορίων τους. Το ηλιακό φως προκαλεί το θάνατο μικροοργανισμών ως αποτέλεσμα της δράσης υπεριώδη ακτινοβολίακαι ξήρανση. Η ξήρανση με ηλιακή ακτινοβολία έχει επιζήμια επίδραση σε πολλούς τύπους μικροοργανισμών, αλλά η επίδρασή της είναι επιφανειακή και επομένως το φως του ήλιου παίζει υποστηρικτικό ρόλο στην πρακτική αποστείρωσης. ΣΕ Πρόσφαταστη θεραπεία τραυμάτων και εγκαυμάτων, χρησιμοποιούνται επιστρώσεις από συνθετικά και φυσικά πολυμερή με τη μορφή πηκτωμάτων. Τα πολυμερή αντισηπτικά φιλμ χρησιμοποιούνται ευρέως για τοπική θεραπεία τραυμάτων και εγκαυμάτων. Περιέχουν αντιμικροβιακούς παράγοντες ευρέος φάσματος όπως καταπόλη, διοξιδίνη, μπλε ιώδιο, καθώς και γλουταραλδεΰδη που περιέχει σορβιτόλη. Για την αποστείρωση αυτών των μεμβρανών χρησιμοποιείται ιοντίζουσα ακτινοβολίασε δόση 20,0 kGy. Κατά τη βιομηχανική παραγωγή πολυμερών αντισηπτικών μεμβρανών και ροφητών, η στειρότητά τους σε αυτό το καθεστώς αποστείρωσης διασφαλίζεται πλήρως. Η ραδιενεργή ακτινοβολία σκοτώνει όλους τους τύπους μικροοργανισμών, τόσο σε βλαστική όσο και σε μορφή σπορίων. Χρησιμοποιείται ευρέως για αποστείρωση σε επιχειρήσεις που παράγουν αποστειρωμένα προϊόντα και αποστειρωμένες ιατρικές συσκευές μιας χρήσης, για απολύμανση Λυμάτωνκαι πρώτες ύλες ζωικής προέλευσης.

Μηχανική μέθοδοςαποστείρωση Οι μέθοδοι μηχανικής αποστείρωσης απομακρύνουν τα μικρόβια από την επιφάνεια των αντικειμένων. Αυτά περιλαμβάνουν το πλύσιμο, το τίναγμα, το σκούπισμα, το υγρό σκούπισμα, τον αερισμό, τον εξαερισμό, το σκούπισμα με ηλεκτρική σκούπα, το πλύσιμο.

Μέθοδος χημικής αποστείρωσης Τα πλαστικά χρησιμοποιούνται πλέον όλο και περισσότερο στην ιατρική πρακτική. Χρησιμοποιούνται στην οδοντιατρική, τη γναθοπροσωπική χειρουργική, την τραυματολογία, την ορθοπεδική και τη χειρουργική. Τα περισσότερα πλαστικά δεν μπορούν να αντέξουν τις μεθόδους θερμικής αποστείρωσης του ατμού υπό πίεση και ξηρής θερμότητας (ξηρός θερμαινόμενος αέρας). Τα διαλύματα αλκοόλης, διοκτόνου και τριμερούς διαλύματος που χρησιμοποιούνται για την αποστείρωση τέτοιων αντικειμένων δεν διασφαλίζουν τη στειρότητα των προϊόντων που υποβάλλονται σε επεξεργασία. Επομένως, μέθοδοι αερίου και ακτινοβολίας, καθώς και διαλύματα χημικών ουσιών, χρησιμοποιούνται για την αποστείρωση πλαστικών προϊόντων. Εισαγωγή στην πράξη των ιατρικών ιδρυμάτων μεγάλος αριθμόςπροϊόντα που κατασκευάζονται από θερμοευαίσθητα υλικά συμβάλλει στην εισαγωγή ακτινοβολίας, μεθόδους αερίουαπολύμανση και αποστείρωση με απολυμαντικά διαλύματα. Στο χημική αποστείρωσηχρησιμοποιήστε αέρια και παράγοντες από διάφορες χημικές ομάδες (υπεροξείδια, φαινολικά, που περιέχουν αλογόνο, αλδεΰδες, αλκάλια και οξέα, επιφανειοδραστικές ουσίες κ.λπ.). Για καθημερινή χρήση παράγονται απορρυπαντικά, καθαριστικά, λεύκανση και άλλα σκευάσματα που έχουν αντιμικροβιακή δράση λόγω της εισαγωγής διαφόρων ΧΗΜΙΚΕΣ ΟΥΣΙΕΣ. Αυτά τα παρασκευάσματα χρησιμοποιούνται για τον καθαρισμό και την απολύμανση των ειδών υγιεινής τεχνικός εξοπλισμός, πιάτα, λευκά είδη κ.λπ. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί ατμός φορμαλδεΰδης (μορφή ατμού). ιατρικά ιδρύματαγια αποστείρωση μεταλλικά προϊόνταιατρικούς σκοπούς (νυστέρια, βελόνες, τσιμπιδάκια, καθετήρες, σφιγκτήρες, γάντζοι, κόφτες σύρματος κ.λπ.). Πριν από την αποστείρωση με ατμό φορμαλδεΰδης, τα προϊόντα πρέπει να υποβληθούν σε καθαρισμό πριν από την αποστείρωση και να στεγνώσουν καλά. Όταν αποστειρώνεται με οποιονδήποτε τρόπο χημικάοι κανονισμοί για την επεξεργασία ενός συγκεκριμένου αντικειμένου εξαρτώνται από τα χαρακτηριστικά του αντικειμένου που απολυμαίνεται, την αντοχή των μικροβίων και τα χαρακτηριστικά των ιδιοτήτων χημική προετοιμασία, θερμοκρασία περιβάλλοντος, υγρασία και άλλοι παράγοντες. Έτσι, η στειρότητα των μεταλλικών οργάνων επιτυγχάνεται διατηρώντας τα σε σφραγισμένο θάλαμο με ατμό για πέντε ώρες σε θερμοκρασία τουλάχιστον 20 βαθμών και σχετική υγρασία 95 - 98%, σε θερμοκρασία 15 βαθμών, η πλήρης στειρότητα αυτών των αντικειμένων επιτυγχάνεται μόνο μετά από 16 ώρες. Η σποριοκτόνος δράση της γλουταραλδεΰδης εξαρτάται από τη θερμοκρασία. Η βέλτιστη δράση του εμφανίζεται σε θερμοκρασία 15 – 25 βαθμών. Καθώς η θερμοκρασία αυξάνεται, η σποριοκτόνος δράση αυτού του φαρμάκου μειώνεται. Αποστείρωση χημική μέθοδοςΗ χρήση είναι κάπως περιορισμένη. Τις περισσότερες φορές, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την πρόληψη της βακτηριακής μόλυνσης των μέσων καλλιέργειας και των ανοσοβιολογικών παρασκευασμάτων (εμβόλια και οροί). Ουσίες όπως το χλωροφόρμιο, το τολουόλιο και ο αιθέρας προστίθενται συχνότερα στα θρεπτικά μέσα. Εάν είναι απαραίτητο να ελευθερωθεί το μέσο από αυτά τα συντηρητικά, θερμαίνεται σε υδατόλουτρο στους 56 βαθμούς και τα συντηρητικά εξατμίζονται. Για τη συντήρηση εμβολίων ή ορών χρησιμοποιείται μερθειολικό, βορικό οξύ, φορμαλίνη.

Βιολογική μέθοδοςαποστείρωση Η βιολογική στείρωση βασίζεται στη χρήση αντιβιοτικών. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται ευρέως στην καλλιέργεια ιών.

Ασβεστοποίηση στη φωτιά.Αυτή είναι μια αξιόπιστη μέθοδος αποστείρωσης, αλλά έχει περιορισμένη χρήση λόγω φθοράς των αντικειμένων. Οι βακτηριολογικοί βρόχοι αποστειρώνονται με αυτόν τον τρόπο.

Ξηρά αποστείρωσηπυρετός. Διεξάγεται σε φούρνο Pasteur (τενών ------

φούρνο) σε θερμοκρασία 160-170°C για 1 ώρα. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση εργαστηριακών γυαλικών, πιπέτων τυλιγμένων σε χαρτί και δοκιμαστικών σωλήνων κλειστών με βαμβακερά βύσματα. Σε θερμοκρασίες άνω των 170°C, αρχίζει η απανθράκωση του χαρτιού, του βαμβακιού και της γάζας.

Αποστείρωση με ατμό υπό πίεση (αυτόκαυστο).Η πιο καθολική μέθοδος αποστείρωσης. Πραγματοποιείται σε αυτόκλειστο - αποστειρωτή νερού-ατμού. Η αρχή λειτουργίας του αυτόκλειστου βασίζεται στην εξάρτηση του σημείου βρασμού του νερού από την πίεση.

Το αυτόκλειστο είναι ένα μεταλλικό καζάνι διπλού τοιχώματος με ερμητικά κλειστό καπάκι. Χύνεται νερό στον πυθμένα του αυτόκλειστου, τα προς αποστείρωση αντικείμενα τοποθετούνται στον θάλαμο εργασίας και το καπάκι κλείνει χωρίς προηγουμένως να το βιδώσετε καλά. Ανάβουμε τη φωτιά και αφήνουμε το νερό να βράσει. Ο προκύπτων ατμός εκτοπίζει τον αέρα από τον θάλαμο εργασίας, ο οποίος εξέρχεται μέσω της ανοιχτής βαλβίδας εξόδου. Όταν όλος ο αέρας έχει μετατοπιστεί και ένα συνεχές ρεύμα ατμού βγαίνει από τη βρύση, η βρύση κλείνει και το καπάκι σφραγίζεται. Ο ατμός φέρεται στην επιθυμητή πίεση υπό τον έλεγχο ενός μετρητή πίεσης. Η θερμοκρασία του ατμού εξαρτάται από την πίεση: σε κανονική ατμοσφαιρική πίεση, η βελόνα του μανόμετρου είναι στο 0 atm. - θερμοκρασία ατμού 100°C, σε 0,5 atm. - 112°C, σε 1 atm. -121°C, σε 1,5 atm. - 127°C, στις 2 atm. - 134°C. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε το αυτόκλειστο, περιμένετε μέχρι να πέσει η πίεση, απελευθερώστε σταδιακά τον ατμό και ανοίξτε το καπάκι. Συνήθως σε πίεση 1 atm. Μέσα σε 20-40 λεπτά, αποστειρώνονται απλά θρεπτικά μέσα και διαλύματα που δεν περιέχουν πρωτεΐνες και υδατάνθρακες, σάλτσες και λινά. Τα υλικά που πρόκειται να αποστειρωθούν πρέπει να είναι διαπερατά στον ατμό. Όταν αποστειρώνετε υλικά σε μεγάλους όγκους ( χειρουργικά υλικά) ο χρόνος αυξάνεται σε 2 ώρες. Σε πίεση 2 atm. απολυμάνετε παθολογικό υλικό και χρησιμοποιημένες μικροβιακές καλλιέργειες.

Τα θρεπτικά υλικά που περιέχουν σάκχαρα δεν μπορούν να αποστειρωθούν σε 1 atm, καθώς καραμελώνονται, επομένως υποβάλλονται σε κλασματική αποστείρωση με ρέοντα ατμό ή σε αυτόκαυστο στις 0,5 atm.

Για τον έλεγχο του καθεστώτος αποστείρωσης, χρησιμοποιούνται βιολογικές και φυσικές μέθοδοι. Η βιολογική μέθοδος βασίζεται στο γεγονός ότι τα σπόρια Bacillus stearothermophilus τοποθετούνται ταυτόχρονα με το προς αποστείρωση υλικό, τα οποία πεθαίνουν στους 121°C σε 15 λεπτά. Μετά την αποστείρωση, τα σπόρια δεν πρέπει να αναπτύσσονται στο θρεπτικό μέσο. Η φυσική μέθοδος βασίζεται στη χρήση ουσιών που έχουν ορισμένο σημείο τήξης, για παράδειγμα, θείο (119°C), βενζοϊκό οξύ (120°C). Σφραγισμένοι σωλήνες που περιέχουν την ουσία αναμεμειγμένη με ξηρή βαφή (φουξίνη) τοποθετούνται σε αυτόκλειστο μαζί με το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί. Εάν η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο είναι επαρκής, η ουσία θα λιώσει και θα αλλάξει το χρώμα της βαφής.

Ρευστή αποστείρωσηΟ ατμός πραγματοποιείται σε συσκευή Koch ή σε αυτόκλειστο με το καπάκι ξεβιδωμένο και τη βαλβίδα εξόδου ανοιχτή. Το νερό στη συσκευή θερμαίνεται στους 100°C. Ο ατμός που προκύπτει περνά μέσα από το ενσωματωμένο υλικό και το αποστειρώνει. Μία μόνο επεξεργασία στους 100°C δεν σκοτώνει τα σπόρια. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται μια μέθοδος κλασματικής αποστείρωσης - 3 ημέρες στη σειρά για 30 λεπτά, ενδιάμεσα αφήνοντας για μια μέρα σε θερμοκρασία δωματίου. Η θέρμανση στους 100°C προκαλεί θερμική ενεργοποίηση των σπορίων, με αποτέλεσμα να βλαστήσουν σε βλαστικές μορφές μέχρι την επόμενη μέρα και να πεθάνουν κατά τη δεύτερη και τρίτη θέρμανση. Ως αποτέλεσμα, μόνο τα θρεπτικά μέσα μπορούν να αποστειρωθούν με ρέοντα ατμό, επειδή Για να βλαστήσουν τα σπόρια, είναι απαραίτητη η παρουσία θρεπτικών συστατικών.

1. Φλεγόμενος(από το λατ. flamma - φλόγα και φρ. flamb é - έγκαυμα) - αποστείρωση με φρύξη μικρών μεταλλικών ή γυάλινων αντικειμένων σε φλόγα. Με αυτόν τον τρόπο αποστειρώνονται βακτηριολογικοί βρόχοι, μεταλλικά τσιμπιδάκια, γυάλινες σπάτουλες και σωλήνες, γυάλινες πλάκες κ.λπ.. Η θερμοκρασία της φλόγας είναι περίπου 1000ºC. Όταν πυρώνονται, όλοι οι μικροοργανισμοί (βλαστικές μορφές και μορφές σπορίων) καίγονται. Αυτή είναι μια γρήγορη και αξιόπιστη μέθοδος αποστείρωσης.

2. Βρασμός. Είναι ένα από τα πιο απλούς τρόπουςαποστείρωση. Πραγματοποιείται σε αποστειρωτή - μεταλλικό ορθογώνιο κουτίμε καπάκι και πλέγμα στο κάτω μέρος για την τοποθέτηση αποστειρωμένων αντικειμένων. Ρίχνουμε νερό σε αυτό και το ζεσταίνουμε μέχρι να βράσει (ηλεκτρική θέρμανση ή σε φωτιά). Ο βρασμός μπορεί να διαρκέσει από 15-30 λεπτά έως 2 ώρες σε θερμοκρασία περίπου 100 ºС. Αποστειρώστε μικρά μεταλλικά ή γυάλινα αντικείμενα - σύριγγες, βελόνες, γυάλινους σωλήνες κ.λπ. Σε αυτή την περίπτωση, οι φυτικές μορφές μικροοργανισμών και ορισμένα σπόρια πεθαίνουν. Εφαρμόζεται επίσης το ζεμάτισμα του υλικού που αποστειρώνεται με βραστό νερό.

3. Αποστείρωση με ξηρή θερμότητα.Παράγεται με ζεστό αέρα σε φούρνο ή φούρνο Pasteur. Ο φούρνος Pasteur είναι ένα ντουλάπι με διπλά τοιχώματα επενδεδυμένο με αμίαντο εξωτερικά για θερμομόνωση. Μέσα στο ντουλάπι υπάρχουν μεταλλικά ράφιαμε τρύπες στις οποίες τοποθετείται το προς αποστείρωση υλικό. Ηλεκτρική θέρμανση. Η αποστείρωση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 160-180 ºС για 1-2 ώρες από τη στιγμή που επιτυγχάνονται αυτές οι θερμοκρασίες (ελέγχεται από ένα θερμόμετρο). Η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση κυρίως γυάλινων σκευών - πιάτων Petri, πιπέττες, σπάτουλες (τυλιγμένες σε χαρτί), καθώς και δοκιμαστικούς σωλήνες και φιάλες. Αυτή η τεχνική είναι αξιόπιστη - οι μη σποριακές και σποριακές μορφές μικροοργανισμών πεθαίνουν. Τυλιγμένο σε χαρτί και αποστειρωμένο, το υλικό μπορεί να αποθηκευτεί.

4. Αποστείρωση ρέοντος ατμού. Διεξήχθη εν θερμώ υγρός αέραςστη συσκευή Koch. Η συσκευή Koch (λέβητας) είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος, ο οποίος μπορεί να είναι στα πόδια και να καλύπτεται με λινέλαιο. Στη συσκευή χύνεται τόσο πολύ νερό ώστε να μην φτάσει στην προεξοχή, πάνω στην οποία τοποθετείται ένας μεταλλικός κύκλος με τρύπες και από πάνω τοποθετείται το προς αποστείρωση υλικό. Η συσκευή είναι ερμητικά κλεισμένη με ένα κωνικό καπάκι με μια τρύπα στη μέση για τη διαφυγή του ατμού και θερμαίνεται σε φωτιά. Όταν το νερό βράσει, ζεστοί υδρατμοί με θερμοκρασία περίπου 100 ºС θα «ρέουν» σε ένα ισχυρό ρεύμα από την τρύπα στο καπάκι. Από αυτή τη στιγμή σημειώνεται ο χρόνος έναρξης της στείρωσης. Η αποστείρωση με ρέοντα ατμό διαρκεί από 45 λεπτά έως 1,5 ώρα, ανάλογα με τον όγκο του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί. Αποστειρώστε τα θρεπτικά μέσα που δεν μπορούν να θερμανθούν πάνω από 100 ºС, για παράδειγμα, MPG (σε θερμοκρασίες πάνω από 100 ºС υγροποιείται και δεν στερεοποιείται). Αυτή η μέθοδος αποστείρωσης δεν είναι απολύτως αξιόπιστη - μόνο οι φυτικές μορφές μικροοργανισμών σκοτώνονται εντελώς, αλλά τα σπόρια διατηρούνται. Για να επιτευχθεί πλήρης αποστείρωση των μέσων στη συσκευή Koch, χρησιμοποιείται κλασματική αποστείρωση.

5. Αποστείρωση με ατμό υπό πίεση (αυτόκαυστο).Πραγματοποιείται με κορεσμένο υδρατμό σε αυτόκλειστο. Υπάρχουν αυτόκλειστο διαφορετικά σχέδια. Το κάθετο αυτόκλειστο είναι ένας τεράστιος λέβητας διπλού τοιχώματος, που περιβάλλεται εξωτερικά από ένα μεταλλικό περίβλημα, με ένα βαρύ αρθρωτό καπάκι που είναι σφιχτά βιδωμένο στον λέβητα. Στο κάτω μέρος του λέβητα υπάρχει μια χοάνη και μια βρύση μέσα από την οποία χύνεται νερό ελεύθερος χώροςμεταξύ του εσωτερικού λέβητα και του περιβλήματος. Το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί τοποθετείται στο κάτω μέρος του λέβητα, το καπάκι βιδώνεται σφιχτά και η ηλεκτρική θέρμανση είναι ενεργοποιημένη. Όταν το νερό βράζει, ο ατμός περνά στον εσωτερικό λέβητα. Η πίεση στο αυτόκλειστο αυξάνεται και ταυτόχρονα αυξάνεται η θερμοκρασία. Όταν το μανόμετρο δείχνει ότι η πίεση στο λέβητα έχει φτάσει την καθορισμένη τιμή, σημειώστε την ώρα έναρξης της αποστείρωσης. Η πίεση διατηρείται σε ένα ορισμένο επίπεδο χρησιμοποιώντας μια βαλβίδα ασφαλείας.

Συνήθως στην εργαστηριακή πρακτική, η αποστείρωση υπό πίεση πραγματοποιείται σε 1,5-2 atm και θερμοκρασία περίπου 115-120 ºС για

20-30 λεπτά. Μετά τη λήξη του χρόνου αποστείρωσης, η θέρμανση διακόπτεται, η βαλβίδα ατμού ανοίγει και ο ατμός απελευθερώνεται. Αποστειρώστε με ατμό υπό πίεση θρεπτικά μέσα MPB, MPA, γυάλινα σκεύη με νερό, υλικό επίδεσμου, χειρουργικά εργαλείακ.λπ. Το αυτόκλειστο είναι μια γρήγορη και αξιόπιστη μέθοδος αποστείρωσης, η οποία σκοτώνει όλες τις μορφές μικροοργανισμών, ακόμη και τα πιο ανθεκτικά σπόρια.

6. Παστερίωση.Αυτή η μέθοδος μερικής αποστείρωσης πήρε το όνομά της από τον Γάλλο επιστήμονα L. Pasteur που την πρότεινε. Η μέθοδος είναι ότι το υγρό που χύνεται σε ένα αποστειρωμένο δοχείο θερμαίνεται σε λουτρό νερού σε θερμοκρασία 60-90 ºС για

10-30 λεπτά. Κατάλληλο για υγρά μέσα που αλλάζουν φυσικοχημικά χαρακτηριστικάστο υψηλές θερμοκρασίες. Παστεριώνονται γάλα, κρέμα γάλακτος, κρασί, μπύρα, χυμοί κ.λπ.. Παράλληλα, οι βιταμίνες και γευστικές ιδιότητεςπροϊόντα. Παστεριωμένα προϊόντα μακροχρόνια αποθήκευσηδεν υπόκεινται σε, καθώς με αυτήν τη μέθοδο αποστείρωσης πεθαίνουν μόνο φυτικές μορφές μικροοργανισμών και παραμένουν σπόρια. Στην εργαστηριακή πρακτική, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται κυρίως για τον διαχωρισμό ειδών που σχηματίζουν σπόρους από αυτά που δεν σχηματίζουν σπόρους.

7. Κλασματική αποστείρωση. Βασίζεται στην επεξεργασία του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί σε διάφορα στάδια. Το κλασματικό μπορεί να είναι βρασμός ή αποστείρωση με ρέοντα ατμό σε μια συσκευή Koch. Τυπικά, η αποστείρωση πραγματοποιείται για 3 ημέρες, 30 λεπτά καθημερινά, χρησιμοποιώντας μία από τις υποδεικνυόμενες μεθόδους και κατά τη διάρκεια των διαλειμμάτων το μέσο αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτό γίνεται για να προκληθεί η ανάπτυξη των σπορίων σε φυτικές μορφές και η καταστροφή τους κατά τις επόμενες επεξεργασίες, γεγονός που αυξάνει την αξιοπιστία αυτών των τεχνικών.

8. Τυνδαλισμός.Πρόκειται για ένα είδος κλασματικής αποστείρωσης (κλασματική παστερίωση). Η τεχνική πήρε το όνομά της από τον Άγγλο επιστήμονα D. Tyndall που την πρότεινε. Πραγματοποιείται σε λουτρό νερού σε θερμοκρασία 56-58 ºС για 1 ώρα, επαναλαμβάνεται 5-7 φορές μετά από 24 ώρες. Στα μεσοδιαστήματα μεταξύ της θέρμανσης, το υλικό διατηρείται σε θερμοκρασία δωματίου. Η τυνδαλοποίηση πραγματοποιείται σε θρεπτικά μέσα που είναι φτωχά σε μικροοργανισμούς και περιέχουν επίσης ουσίες που καταστρέφονται και μετουσιώνονται εύκολα σε θερμοκρασίες άνω των 60 ºC (πρωτεΐνες, βιταμίνες). Πρόκειται για ορό αίματος, αυγά κλπ. Ως αποτέλεσμα της τυνδαλοποίησης επιτυγχάνεται η πλήρης καταστροφή των μικροοργανισμών.