Τρόπος λειτουργίας του φούρνου στεγνώματος. Μέθοδοι και μέθοδοι αποστείρωσης Αποστείρωση με υπεριώδη ακτινοβολία

Η ζωή των μικροοργανισμών εξαρτάται στενά από τις περιβαλλοντικές συνθήκες. Όλοι οι περιβαλλοντικοί παράγοντες που επηρεάζουν τους μικροοργανισμούς μπορούν να χωριστούν σε τρεις ομάδες: φυσικούς, χημικούς και βιολογικούς, η ευεργετική ή επιβλαβής επίδραση των οποίων εξαρτάται τόσο από τη φύση του ίδιου του παράγοντα όσο και από τις ιδιότητες του μικροοργανισμού.

Φυσικοί παράγοντες

Από φυσικούς παράγοντες μεγαλύτερη επιρροήΗ ανάπτυξη των μικροοργανισμών επηρεάζεται από τη θερμοκρασία, την ξήρανση, την ενέργεια ακτινοβολίας και τον υπέρηχο.

Θερμοκρασία. Η ζωτική δραστηριότητα κάθε μικροοργανισμού περιορίζεται από ορισμένα όρια θερμοκρασίας. Αυτή η εξάρτηση από τη θερμοκρασία συνήθως εκφράζεται από τρία κύρια σημεία: ελάχιστη - η θερμοκρασία κάτω από την οποία σταματά η αναπαραγωγή των μικροβιακών κυττάρων. βέλτιστη - η καλύτερη θερμοκρασία για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη μικροοργανισμών. μέγιστη - η θερμοκρασία πάνω από την οποία εξασθενεί ή σταματά η ζωτική δραστηριότητα των κυττάρων. Βέλτιστη θερμοκρασίασυνήθως αντιστοιχεί σε συνθήκες θερμοκρασίας φυσικό περιβάλλονένας βιότοπος.

Όλοι οι μικροοργανισμοί σε σχέση με τη θερμοκρασία χωρίζονται σε ψυχόφιλους, μεσόφιλους και θερμόφιλους.

Τα ψυχρόφιλα (από τα ελληνικά ψυχρός - κρύο, φιλέω - αγάπη), ή μικροοργανισμοί που αγαπούν το κρύο, αναπτύσσονται σε σχετικά χαμηλές θερμοκρασίες: ελάχιστη θερμοκρασία- 0° C, βέλτιστη - 10-20° C, μέγιστη - 30° C. Αυτή η ομάδα περιλαμβάνει μικροοργανισμούς που ζουν σε βόρειες θάλασσεςκαι ωκεανοί, χώμα, λύματα. Αυτό περιλαμβάνει επίσης φωτεινά βακτήρια και βακτήρια σιδήρου, καθώς και μικρόβια που προκαλούν αλλοίωση των τροφίμων στο κρύο (κάτω από 0°C).

Τα μεσόφιλα (από το ελληνικό μέσος - μέση) είναι η πιο εκτεταμένη ομάδα, συμπεριλαμβανομένων των περισσότερων σαπρόφυτων και όλων των παθογόνων μικροοργανισμών. Η βέλτιστη θερμοκρασία για αυτούς είναι 28-37 ° C, η ελάχιστη είναι 10 ° C, η μέγιστη είναι 45 ° C.

Τα θερμόφιλα (από το ελληνικό termos - θερμότητα, θερμότητα) ή μικροοργανισμοί που αγαπούν τη θερμότητα, αναπτύσσονται σε θερμοκρασίες πάνω από 55 ° C, η ελάχιστη θερμοκρασία για αυτούς είναι 30 ° C, η βέλτιστη είναι 50-60 ° C και η μέγιστη είναι 70 -75 ° C. Βρήκαν σε θερμές μεταλλικές πηγές, το επιφανειακό στρώμα του εδάφους, αυτοθερμαινόμενα υποστρώματα (κοπριά, σανός, σιτηρά) και τα έντερα των ανθρώπων και των ζώων. Μεταξύ των θερμόφιλων υπάρχουν πολλές μορφές σπορίων.

Οι υψηλές και οι χαμηλές θερμοκρασίες έχουν διαφορετικές επιπτώσεις στους μικροοργανισμούς. Μερικά είναι πιο ευαίσθητα στις υψηλές θερμοκρασίες. Επιπλέον, όσο υψηλότερη είναι η θερμοκρασία πέρα από τη μέγιστη, τόσο πιο γρήγορος επέρχεται ο θάνατος των μικροβιακών κυττάρων, ο οποίος οφείλεται στη μετουσίωση (πήξη) των πρωτεϊνών των κυττάρων.

Οι φυτικές μορφές μεσόφιλων βακτηρίων πεθαίνουν σε θερμοκρασία 60 ° C για 30-60 λεπτά και στους 80-100 ° C - μετά από 1-2 λεπτά. Τα βακτηριακά σπόρια είναι πολύ πιο ανθεκτικά στις υψηλές θερμοκρασίες. Για παράδειγμα, τα σπόρια των βακίλλων του άνθρακα αντέχουν το βρασμό για 10-20 λεπτά και τα σπόρια της αλλαντίασης του κλωστριδίου - 6 ώρες. Όλοι οι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των σπορίων, πεθαίνουν σε θερμοκρασία 165-170 ° C για μια ώρα (σε ξηρή θερμότητα φούρνο) ή όταν εκτίθεται σε ατμό υπό πίεση 1 atm (σε αυτόκλειστο) για 30 λεπτά.

Η επίδραση των υψηλών θερμοκρασιών στους μικροοργανισμούς είναι η βάση της αποστείρωσης - η πλήρης απελευθέρωση διαφόρων αντικειμένων από τους μικροοργανισμούς και τα σπόρια τους (βλ. παρακάτω).

Πολλοί μικροοργανισμοί είναι εξαιρετικά ανθεκτικοί στις χαμηλές θερμοκρασίες. Ο τύφος Salmonella και το Vibrio cholerae επιβιώνουν για μεγάλο χρονικό διάστημα στον πάγο. Ορισμένοι μικροοργανισμοί παραμένουν βιώσιμοι σε θερμοκρασίες υγρού αέρα (-190°C) και τα βακτηριακά σπόρια μπορούν να αντέξουν σε θερμοκρασίες έως -250°C.

Μόνο μεμονωμένα είδηΤα παθογόνα βακτήρια είναι ευαίσθητα σε χαμηλές θερμοκρασίες (για παράδειγμα, Bordetella pertussis και parapertussis, Neisseria meningococcus κ.λπ.). Αυτές οι ιδιότητες των μικροοργανισμών λαμβάνονται υπόψη στο εργαστηριακή διάγνωσηκαι κατά τη μεταφορά του υπό μελέτη υλικού παραδίδεται στο εργαστήριο προστατευμένο από ψύξη.

Η δράση των χαμηλών θερμοκρασιών σταματά τις διεργασίες σήψης και ζύμωσης, που χρησιμοποιείται ευρέως για τη συντήρηση τρόφιμασε ψυκτικές μονάδες, κελάρια, παγετώνες. Σε θερμοκρασίες κάτω από τους 0°C, τα μικρόβια πέφτουν σε κατάσταση αναστολής εμψύχωσης - οι μεταβολικές διεργασίες επιβραδύνονται και η αναπαραγωγή σταματά. Ωστόσο, εάν υπάρχουν κατάλληλα συνθήκες θερμοκρασίαςκαι θρεπτικό μέσο, αποκαθίστανται οι ζωτικές λειτουργίες των μικροβιακών κυττάρων. Αυτή η ιδιότητα των μικροοργανισμών χρησιμοποιείται στην εργαστηριακή πρακτική για τη διατήρηση μικροβιακών καλλιεργειών σε χαμηλές θερμοκρασίες. Οι γρήγορες αλλαγές σε υψηλές και χαμηλές θερμοκρασίες (πάγωμα και απόψυξη) έχουν επίσης επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς - αυτό οδηγεί σε ρήξη των κυτταρικών μεμβρανών.

Ξήρανση. Το νερό είναι απαραίτητο για τη φυσιολογική λειτουργία των μικροοργανισμών. Η ξήρανση οδηγεί σε αφυδάτωση του κυτταροπλάσματος, διαταραχή της ακεραιότητας της κυτταροπλασματικής μεμβράνης, με αποτέλεσμα να διαταράσσεται η θρέψη των μικροβιακών κυττάρων και να επέρχεται ο θάνατός τους.

Ο χρόνος θανάτου διαφορετικών τύπων μικροοργανισμών υπό την επίδραση της ξήρανσης διαφέρει σημαντικά. Για παράδειγμα, τα παθογόνα Neisseria (μηνιγγιτιδόκοκκοι, γονόκοκκοι), Leptospira, Treponema pallidum και άλλα πεθαίνουν όταν στεγνώσουν μετά από λίγα λεπτά. Το Vibrio cholerae μπορεί να αντέξει το στέγνωμα για 2 ημέρες, η Salmonella typhoid - 70 ημέρες και το Mycobacterium tuberculosis - 90 ημέρες. Όμως τα αποξηραμένα πτύελα των ασθενών με φυματίωση, στα οποία τα παθογόνα προστατεύονται από ένα ξηρό πρωτεϊνικό κάλυμμα, παραμένει μολυσματικό για 10 μήνες.

Τα σπόρια είναι ιδιαίτερα ανθεκτικά στην ξήρανση, καθώς και σε άλλες περιβαλλοντικές επιδράσεις. Τα σπόρια των βακίλλων του άνθρακα διατηρούν την ικανότητα να βλασταίνουν για 10 χρόνια και τα σπόρια μυκήτων μούχλας έως και 20 χρόνια.

Η δυσμενής επίδραση της ξήρανσης στους μικροοργανισμούς έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό για τη συντήρηση λαχανικών, φρούτων, κρέατος, ψαριών και φαρμακευτικά βότανα. Ταυτόχρονα, έχοντας βρεθεί σε συνθήκες υψηλή υγρασία, τέτοια προϊόντα φθείρονται γρήγορα λόγω της αποκατάστασης της μικροβιακής δραστηριότητας.

Η μέθοδος λυοφιλοποίησης χρησιμοποιείται ευρέως για την αποθήκευση καλλιεργειών μικροοργανισμών, εμβολίων και άλλων βιολογικών παρασκευασμάτων. Η ουσία της μεθόδου είναι ότι οι μικροοργανισμοί ή τα παρασκευάσματα πρώτα καταψύχονται και στη συνέχεια ξηραίνονται υπό συνθήκες κενού. Σε αυτή την περίπτωση, τα μικροβιακά κύτταρα εισέρχονται σε μια κατάσταση αναστολής κίνησης και διατηρούν τις βιολογικές τους ιδιότητες για αρκετούς μήνες ή χρόνια.

Ακτινοβόλος ενέργεια. Στη φύση, οι μικροοργανισμοί είναι συνεχώς εκτεθειμένοι ηλιακή ακτινοβολία. Το άμεσο ηλιακό φως προκαλεί το θάνατο πολλών μικροοργανισμών μέσα σε λίγες ώρες, με εξαίρεση τα φωτοσυνθετικά βακτήρια (πράσινα και μωβ βακτήρια θείου). Οι βλαβερές συνέπειες του ηλιακού φωτός προκαλούνται από τη δραστηριότητα των υπεριωδών ακτίνων (ακτίνες UV). Απενεργοποιούν τα ένζυμα των κυττάρων και καταστρέφουν το DNA. Τα παθογόνα βακτήρια είναι πιο ευαίσθητα στη δράση των ακτίνων UV από τα σαπρόφυτα. Επομένως, είναι προτιμότερο να αποθηκεύονται οι μικροβιακές καλλιέργειες στο εργαστήριο στο σκοτάδι. Από αυτή την άποψη, η εμπειρία του Buchner είναι αποδεικτική.

Σε ένα πιάτο Petri με λεπτό στρώμαΤο άγαρ παράγεται με άφθονο εμβολιασμό οποιασδήποτε βακτηριακής καλλιέργειας. Γράμματα κομμένα από μαύρο χαρτί είναι κολλημένα στην εξωτερική επιφάνεια του κυπέλλου με σπόρους, σχηματίζοντας, για παράδειγμα, τη λέξη «τύφος». Το κύπελλο, με το κάτω μέρος του προς τα πάνω, ακτινοβολείται με ίσιο ακτίνες ηλίουγια 1 ώρα Στη συνέχεια αφαιρούνται τα χαρτιά και το κύπελλο τοποθετείται σε θερμοστάτη για μια μέρα στους 37 ° C. Η ανάπτυξη βακτηρίων παρατηρείται μόνο σε εκείνα τα σημεία του άγαρ που προστατεύονταν από τις ακτίνες UV με κολλημένα γράμματα. Το υπόλοιπο άγαρ παραμένει διαφανές, δηλαδή δεν υπάρχει ανάπτυξη μικροοργανισμών (Εικ. 11).

Η σημασία του ηλιακού φωτός ως φυσικού παράγοντα για τη βελτίωση της υγείας του εξωτερικού περιβάλλοντος είναι μεγάλη. Απελευθερώνει τον αέρα, το νερό των φυσικών δεξαμενών και τα ανώτερα στρώματα του εδάφους από παθογόνα βακτήρια.

Η βακτηριοκτόνος (βακτηριοκαταστροφική) επίδραση των ακτίνων UV χρησιμοποιείται για την αποστείρωση του αέρα κλειστούς χώρους(χειρουργεία, καμαρίνια, κουτιά κ.λπ.), καθώς και νερό και γάλα. Η πηγή αυτών των ακτίνων είναι οι λάμπες υπεριωδης ΑΚΤΙΝΟΒΟΛΙΑ, βακτηριοκτόνες λάμπες.

Άλλοι τύποι ενέργειας ακτινοβολίας - οι ακτίνες Χ, οι ακτίνες α-, β-, γ έχουν επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς μόνο σε μεγάλες δόσεις, της τάξης των 440-280 J/kg. Ο θάνατος των μικροβίων προκαλείται από την καταστροφή των πυρηνικών δομών και του κυτταρικού DNA. Χαμηλές δόσεις ακτινοβολίας διεγείρουν την ανάπτυξη μικροβιακών κυττάρων. Οι μικροοργανισμοί είναι πολύ πιο ανθεκτικοί στη ραδιενεργή ακτινοβολία από τους ανώτερους οργανισμούς. Τα θειονικά βακτήρια είναι γνωστό ότι ζουν σε κοιτάσματα μεταλλεύματος ουρανίου. Βακτήρια βρέθηκαν στο νερό πυρηνικούς αντιδραστήρεςσε συγκέντρωση ιοντίζουσας ακτινοβολίας 20-30 kJ/kg.

Η βακτηριοκτόνος δράση της ιονίζουσας ακτινοβολίας χρησιμοποιείται για τη συντήρηση ορισμένων προϊόντων διατροφής, την αποστείρωση βιολογικών παρασκευασμάτων (ορούς, εμβόλια κ.λπ.), ενώ οι ιδιότητες του αποστειρωμένου υλικού δεν αλλάζουν.

Τα τελευταία χρόνια αποστειρώνονται με τη μέθοδο της ακτινοβολίας προϊόντα μιας χρήσης όπως σιφώνια πολυστυρενίου, τρυβλία Petri, φρεάτια ορολογικών αντιδράσεων, σύριγγες, καθώς και υλικό ραμμάτων - catgut κ.λπ.

Υπέρηχοςπροκαλεί σημαντική βλάβη στα μικροβιακά κύτταρα. Υπό την επίδραση του υπερήχου, ενεργοποιούνται αέρια που βρίσκονται στο υγρό περιβάλλον του κυτταροπλάσματος και υψηλή πίεση(έως 10000 atm). Αυτό οδηγεί σε ρήξη της κυτταρικής μεμβράνης και κυτταρικό θάνατο. Ο υπέρηχος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση τροφίμων (γάλα, χυμοί φρούτων), πόσιμο νερό.

Υψηλή πίεση. Τα βακτήρια και ιδιαίτερα τα σπόρια τους είναι ανθεκτικά στη μηχανική πίεση. Στη φύση, βρίσκονται βακτήρια που ζουν σε θάλασσες και ωκεανούς σε βάθος 1000-10000 m υπό πίεση από 100 έως 900 atm. Ορισμένοι τύποι βακτηρίων μπορούν να αντέξουν πιέσεις έως και 3000-5000 atm και τα βακτηριακά σπόρια - ακόμη και 20.000 atm.

Χημικοί παράγοντες

Η επίδραση των χημικών ουσιών στους μικροοργανισμούς ποικίλλει ανάλογα με τη φύση της χημικής ένωσης, τη συγκέντρωσή της και τη διάρκεια της έκθεσης σε μικροβιακά κύτταρα. Ανάλογα με τη συγκέντρωση, μια χημική ουσία μπορεί να είναι πηγή διατροφής ή να έχει ανασταλτική επίδραση στη ζωτική δραστηριότητα των μικροοργανισμών. Για παράδειγμα, ένα διάλυμα γλυκόζης 0,5-2% διεγείρει την ανάπτυξη μικροβίων και διαλύματα γλυκόζης 20-40% αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των μικροβιακών κυττάρων.

Πολλά χημικές ενώσεις, που έχουν επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς, χρησιμοποιούνται στην ιατρική πρακτική ως απολυμαντικά και αντισηπτικά.

Οι χημικές ουσίες που χρησιμοποιούνται για την απολύμανση ονομάζονται απολυμαντικά. Η απολύμανση αναφέρεται σε μέτρα που στοχεύουν στην καταστροφή παθογόνων μικροοργανισμών σε διάφορα περιβαλλοντικά αντικείμενα. Τα απολυμαντικά περιλαμβάνουν ενώσεις αλογονιδίων, φαινόλες και τα παράγωγά τους, άλατα βαρέων μετάλλων, ορισμένα οξέα, αλκάλια, αλκοόλες κ.λπ. Προκαλούν τον θάνατο των μικροβιακών κυττάρων, δρώντας σε βέλτιστες συγκεντρώσεις για ορισμένο χρόνο. Πολλά απολυμαντικά έχουν επιβλαβή επίδραση στους ιστούς του μακροοργανισμού.

Ονομάζονται αντισηπτικά ΧΗΜΙΚΕΣ ΟΥΣΙΕΣ, που μπορεί να προκαλέσει το θάνατο μικροοργανισμών ή να εμποδίσει την ανάπτυξη και την αναπαραγωγή τους. Χρησιμοποιούνται για θεραπευτικούς σκοπούς (χημειοθεραπεία), καθώς και για την απολύμανση τραυμάτων, δέρματος και ανθρώπινων βλεννογόνων. Αντισηπτικές ιδιότητες έχουν υπεροξείδιο του υδρογόνου, διαλύματα αλκοόλης ιωδίου, μπριγιάν πράσινη, διαλύματα υπερμαγγανικού καλίου κλπ. Ορισμένες αντισηπτικές ουσίες (οξικό, θειώδες, βενζοϊκό οξύ κ.λπ.) σε δόσεις που είναι αβλαβείς για τον άνθρωπο χρησιμοποιούνται για τη συντήρηση των τροφίμων.

Σύμφωνα με τον μηχανισμό δράσης, οι χημικές ουσίες με αντιμικροβιακή δράση μπορούν να χωριστούν σε διάφορες ομάδες.

1. Τα επιφανειοδραστικά (λιπαρά οξέα, σαπούνια και άλλα απορρυπαντικά) προκαλούν μείωση της επιφανειακής τάσης, η οποία οδηγεί σε διαταραχή της λειτουργίας του κυτταρικού τοιχώματος και της κυτταροπλασματικής μεμβράνης των μικροοργανισμών.

2. Η φαινόλη, η κρεσόλη και τα παράγωγά τους προκαλούν πήξη των μικροβιακών πρωτεϊνών. Χρησιμοποιούνται για την απολύμανση μολυσματικού υλικού στη μικροβιολογική πρακτική και στα νοσοκομεία μολυσματικών ασθενειών.

3. Οι οξειδωτικοί παράγοντες, που αλληλεπιδρούν με μικροβιακές πρωτεΐνες, διαταράσσουν τη δραστηριότητα των ενζύμων και προκαλούν μετουσίωση της πρωτεΐνης. Ενεργοί οξειδωτικοί παράγοντες είναι το χλώριο και το όζον, που χρησιμοποιούνται για την απολύμανση του πόσιμου νερού. Τα παράγωγα χλωρίου (χλωρίνη, χλωραμίνη) χρησιμοποιούνται ευρέως για σκοπούς απολύμανσης. Το υπεροξείδιο του υδρογόνου, το υπερμαγγανικό κάλιο, το ιώδιο κ.λπ. έχουν οξειδωτικές ιδιότητες.

4. Η φορμαλδεΰδη χρησιμοποιείται σε μορφή διαλύματος 40% (φορμαλίνη) για απολύμανση. Σκοτώνει φυτικές και σποριακές μορφές μικροοργανισμών. Η φορμαλίνη μπλοκάρει τις αμινομάδες των πρωτεϊνών των μικροβιακών κυττάρων και προκαλεί τη μετουσίωση τους.

5. Τα άλατα των βαρέων μετάλλων (υδράργυρος, μόλυβδος, ψευδάργυρος, χρυσός κ.λπ.) πήζουν τις πρωτεΐνες του μικροβιακού κυττάρου, προκαλώντας έτσι τον θάνατό τους. Ένας αριθμός μετάλλων (άργυρος, χρυσός, υδράργυρος κ.λπ.) έχει βακτηριοκτόνο δράση στους μικροοργανισμούς σε αμελητέες συγκεντρώσεις. Αυτή η ιδιότητα ονομάζεται ολιγοδυναμική δράση (από το λατινικό oligos - μικρό, dinamys - δύναμη). Έχει αποδειχτεί ότι το νερό στα ασημένια δοχεία δεν σαπίζει λόγω της βακτηριοκτόνου δράσης των ιόντων αργύρου. Για την πρόληψη της βλενόρροιας * νεογνά για πολύ καιρόχρησιμοποιήθηκε διάλυμα νιτρικού αργύρου 1%. Ως τοπικά αντισηπτικά χρησιμοποιούνται και κολλοειδή διαλύματα οργανικών ενώσεων αργύρου (protargol, collargol).

* (Η Blennorea είναι μια φλεγμονή του επιπεφυκότα του ματιού που προκαλείται από γονόκοκκους.)

Τα παρασκευάσματα υδραργύρου έχουν ισχυρή αντιμικροβιακή δράση. Από την αρχαιότητα, ο διχλωριούχος υδράργυρος ή χλωριούχος υδράργυρος (σε αραίωση 1:1000), έχει χρησιμοποιηθεί για απολύμανση. Ωστόσο, έχει τοξική επίδρασηστον ιστό του μακροοργανισμού και η χρήση του είναι περιορισμένη.

6. Οι βαφές (πράσινο διαμάντι, ριβανόλη κ.λπ.) έχουν την ιδιότητα να αναστέλλουν την ανάπτυξη βακτηρίων. Διαλύματα από έναν αριθμό χρωστικών χρησιμοποιούνται ως αντισηπτικά και προστίθενται επίσης σε ορισμένα θρεπτικά μέσα για την αναστολή της ανάπτυξης της μικροχλωρίδας που τη συνοδεύει.

Η καταστροφική επίδραση ορισμένων φυσικών και χημικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς αποτελεί τη βάση ασηπτικών και αντισηπτικών μεθόδων, που χρησιμοποιούνται ευρέως στην ιατρική και υγειονομική πρακτική.

Η άσηψη είναι ένα σύστημα προληπτικών μέτρων που αποτρέπουν τη μικροβιακή μόλυνση ενός αντικειμένου (τραύματα, χειρουργικό πεδίο, καλλιέργειες μικροοργανισμών κ.λπ.) με βάση φυσικές μεθόδους.

Τα αντισηπτικά είναι ένα σύνολο μέτρων που στοχεύουν στην καταστροφή μικροοργανισμών σε μια πληγή, σε ολόκληρο το σώμα ή σε αντικείμενα του περιβάλλοντος, χρησιμοποιώντας διάφορα απολυμαντικά χημικά.

Βιολογικοί παράγοντες

Στους φυσικούς οικοτόπους, οι μικροοργανισμοί δεν υπάρχουν μεμονωμένα, αλλά βρίσκονται σε πολύπλοκες σχέσεις, οι οποίες καταλήγουν κυρίως σε συμβίωση, μεταβίωση και ανταγωνισμό.

Η συμβίωση είναι η συμβίωση οργανισμών διαφορετικών ειδών, που τους αποφέρει αμοιβαίο όφελος. Ταυτόχρονα, μαζί αναπτύσσονται καλύτερα από το καθένα ξεχωριστά.

Υπάρχουν συμβιωτικές σχέσεις μεταξύ βακτηρίων όζων και ψυχανθών, μεταξύ νηματοειδών μυκήτων και γαλαζοπράσινων φυκών (λειχήνες): Η συμβίωση βακτηρίων γαλακτικού οξέος και αλκοολικής μαγιάς χρησιμοποιείται για την παρασκευή ορισμένων προϊόντων γαλακτικού οξέος (κεφίρ, κούμισ).

Η μεταβίωση είναι ένας τύπος σχέσης στην οποία δημιουργούνται μεταβολικά προϊόντα ενός τύπου μικροοργανισμών τις απαραίτητες προϋποθέσειςγια την ανάπτυξη των άλλων. Για παράδειγμα, οι σήπτοντες μικροοργανισμοί που διασπούν πρωτεϊνικές ουσίες συμβάλλουν στη συσσώρευση ενώσεων αμμωνίου στο περιβάλλον και δημιουργούν ευνοϊκές συνθήκες για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη νιτροποιητικών βακτηρίων. Και η ανάπτυξη αναερόβιων σε καλά αεριζόμενο έδαφος θα ήταν αδύνατη χωρίς αερόβια που απορροφούν ελεύθερο οξυγόνο.

Οι μεταβιοτικές σχέσεις είναι ευρέως διαδεδομένες μεταξύ των μικροοργανισμών του εδάφους και αποτελούν τη βάση του κύκλου των ουσιών στη φύση.

Ο ανταγωνισμός είναι μια μορφή σχέσης κατά την οποία ένας μικροοργανισμός αναστέλλει την ανάπτυξη ενός άλλου ή μπορεί να προκαλέσει τον πλήρη θάνατό του. Ανταγωνιστικές σχέσεις έχουν αναπτυχθεί μεταξύ των μικροοργανισμών στον αγώνα για ύπαρξη. Παντού όπου ζουν, υπάρχει ένας συνεχής αγώνας μεταξύ τους για πηγές τροφής, οξυγόνο αέρα και βιότοπο. Έτσι, η πλειοψηφία των παθογόνων βακτηρίων, έχοντας εισχωρήσει στις εκκρίσεις των ασθενών εξωτερικό περιβάλλον(χώμα, νερό), δεν αντέχουν τον μακροχρόνιο ανταγωνισμό με πολυάριθμα σαπρόφυτα εδώ και πεθαίνουν σχετικά γρήγορα.

Ο ανταγωνισμός μπορεί να προκληθεί από την άμεση επίδραση των μικροοργανισμών μεταξύ τους ή από τη δράση των μεταβολικών προϊόντων τους. Για παράδειγμα, τα πρωτόζωα καταβροχθίζουν τα βακτήρια και οι φάγοι τα λύουν. Τα έντερα των νεογνών αποικίζονται από βακτήρια γαλακτικού οξέος Bifidobacterium bifidum. Απελευθερώνοντας γαλακτικό οξύ, καταστέλλουν την ανάπτυξη σήψης βακτηρίων και έτσι προστατεύουν τον ακόμα εύθραυστο οργανισμό από εντερικές διαταραχές βρέφη. Ορισμένοι μικροοργανισμοί στη διαδικασία της ζωής παράγουν διάφορες ουσίες που έχουν επιζήμια επίδραση στα βακτήρια και άλλα μικρόβια. Αυτές οι ουσίες περιλαμβάνουν αντιβιοτικά (βλ. «Αντιβιοτικά»).

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποιοι φυσικοί παράγοντες επηρεάζουν τη δραστηριότητα της ζωής των μικροοργανισμών;

2. Ποιες ουσίες ταξινομούνται ως απολυμαντικά και σε τι διαφέρουν ως προς τον μηχανισμό δράσης τους στους μικροοργανισμούς;

3. Να αναφέρετε ποιες σχέσεις υπάρχουν μεταξύ των μικροοργανισμών;

Αποστείρωση

Η αποστείρωση είναι η αποστείρωση, δηλαδή η πλήρης απελευθέρωση περιβαλλοντικών αντικειμένων από μικροοργανισμούς και τα σπόρια τους.

Η αποστείρωση πραγματοποιείται με διάφορους τρόπους:

1) φυσική (έκθεση σε υψηλή θερμοκρασία, ακτίνες UV, χρήση βακτηριακά φίλτρα);

2) χημικό (χρήση διαφόρων απολυμαντικών, αντισηπτικών).

3) βιολογική (χρήση αντιβιοτικών).

Στην εργαστηριακή πρακτική, συνήθως χρησιμοποιούνται φυσικές μέθοδοι αποστείρωσης.

Η δυνατότητα και η σκοπιμότητα χρήσης μιας ή άλλης μεθόδου αποστείρωσης καθορίζεται από τα χαρακτηριστικά του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί, τις φυσικές και χημικές του ιδιότητες.

Φυσικές μέθοδοι

Η φρύξη σε φλόγα καυστήρα ή το flambéing είναι μια μέθοδος αποστείρωσης κατά την οποία το αντικείμενο αποστειρώνεται πλήρως, καθώς τόσο τα φυτικά κύτταρα όσο και τα μικροβιακά σπόρια πεθαίνουν. Τυπικά, οι βακτηριολογικοί βρόχοι, οι σπάτουλες, οι πιπέτες, οι διαφάνειες και τα γυαλιά κάλυψης και τα μικρά όργανα φρύνονται. Τα ψαλίδια και τα νυστέρια δεν πρέπει να αποστειρώνονται με θέρμανση, καθώς υπό την επίδραση της φωτιάς η επιφάνεια κοπής γίνεται θαμπή.

Αποστείρωση με ξηρή θερμότητα

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα ή ζεστό αέρα πραγματοποιείται σε φούρνους Pasteur (φούρνοι στεγνώματος). Ο φούρνος Pasteur είναι ένα ντουλάπι με διπλά τοιχώματα κατασκευασμένο από ανθεκτικά στη θερμότητα υλικά - μέταλλο και αμίαντο. Ζεστάνετε το ντουλάπι με καυστήρες αερίουή ηλεκτρικές συσκευές θέρμανσης. Τα ηλεκτρικά θερμαινόμενα ντουλάπια είναι εξοπλισμένα με ρυθμιστές που εξασφαλίζουν απαιτούμενη θερμοκρασία. Για τον έλεγχο της θερμοκρασίας, υπάρχει ένα θερμόμετρο τοποθετημένο στην οπή στο επάνω τοίχωμα του ντουλαπιού.

Η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση εργαστηριακών γυαλικών. Τα πιάτα που προετοιμάζονται για αποστείρωση φορτώνονται χαλαρά στο φούρνο για να διασφαλιστεί η ομοιόμορφη και αξιόπιστη θέρμανση του υλικού που αποστειρώνεται. Κλείστε καλά την πόρτα του ντουλαπιού, ενεργοποιήστε τη συσκευή θέρμανσης, φέρτε τη θερμοκρασία στους 160-165 ° C και αποστειρώστε σε αυτή τη θερμοκρασία για 1 ώρα. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε τη θέρμανση, αλλά μην ανοίξετε την πόρτα του ντουλαπιού μέχρι Ο φούρνος έχει κρυώσει. σε διαφορετική περίπτωση κρύος αέρας, η είσοδος στο ντουλάπι μπορεί να προκαλέσει ρωγμές στα ζεστά μαγειρικά σκεύη.

Η αποστείρωση σε φούρνο Pasteur μπορεί να πραγματοποιηθεί σε διαφορετικές θερμοκρασίες και εκθέσεις (χρόνος αποστείρωσης) (Πίνακας 1).

Τα υγρά (θρεπτικά μέσα, ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου κ.λπ.), τα είδη από καουτσούκ και συνθετικά υλικά δεν μπορούν να αποστειρωθούν με ξηρή θερμότητα, καθώς τα υγρά βράζουν και χύνονται και το καουτσούκ και τα συνθετικά υλικά λιώνουν.

Για τον έλεγχο της αποστείρωσης σε φούρνο Pasteur, τα μεταξωτά νήματα υγραίνονται σε καλλιέργεια βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους, ξηραίνονται, τοποθετούνται σε αποστειρωμένο τρυβλίο Petri και τοποθετούνται σε φούρνο Pasteur. Η αποστείρωση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 165° C για 1 ώρα (για έλεγχο, μερικά από τα νήματα αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου). Στη συνέχεια τα αποστειρωμένα νήματα και τα νήματα ελέγχου τοποθετούνται στην επιφάνεια του άγαρ σε τρυβλίο Petri ή τοποθετούνται σε δοκιμαστικούς σωλήνες με ζωμό και επωάζονται σε θερμοστάτη στους 37°C για 2 ημέρες. Με τη σωστή λειτουργία του φούρνου Pasteur, δεν θα αναπτυχθεί σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή πιάτα με θρεπτικά μέσα στα οποία τοποθετήθηκαν αποστειρωμένα νήματα, καθώς τα βακτηριακά σπόρια θα πεθάνουν, ενώ τα βακτηριακά σπόρια σε κλωστές που δεν ήταν αποστειρωμένα (έλεγχος) θα φυτρώσουν σε θρεπτικό συστατικό θα σημειωθεί ανάπτυξη των μέσων ενημέρωσης.

Για να προσδιορίσετε τη θερμοκρασία στο εσωτερικό του φούρνου Pasteur, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε σακχαρόζη ή κρυσταλλική ζάχαρη, η οποία καραμελώνει σε θερμοκρασία 165-170 ° C.

Προετοιμασία εργαστηριακών υαλικών για αποστείρωση σε φούρνο Pasteur. Εργαστηριακά γυάλινα σκεύη(Τυβλία Petri, διαβαθμισμένες πιπέτες και Παστέρ, φιάλες, φιάλες, δοκιμαστικοί σωλήνες) πριν από την αποστείρωση πρέπει να πλυθούν καλά, να στεγνώσουν και να τυλιχτούν σε χαρτί, διαφορετικά μετά την αποστείρωση μπορεί να μολυνθεί ξανά με βακτήρια αέρα.

Τα πιάτα Petri τυλίγονται σε χαρτί ένα ή περισσότερα κομμάτια κάθε φορά ή τοποθετούνται σε ειδικές μεταλλικές θήκες.

Βαμβακερά μάκτρα εισάγονται στα πάνω άκρα των πιπετών για να αποτραπεί η είσοδος του υλικού δοκιμής στο στόμα. Οι βαθμολογημένες πιπέτες τυλίγονται σε μακριές λωρίδες χαρτιού πλάτους 4-5 εκ. Ο όγκος της τυλιγμένης πιπέτας σημειώνεται στο χαρτί. Στις μολυβοθήκες, οι βαθμονομημένες πιπέτες αποστειρώνονται χωρίς επιπλέον τύλιγμα σε χαρτί.

Σημείωση. Εάν η διαβάθμιση στις πιπέτες είναι ελάχιστα ορατή, αποκαθίσταται πριν από την αποστείρωση. Εφαρμόστε σε μια πιπέτα λαδομπογιάκαι, χωρίς να αφήσετε το χρώμα να στεγνώσει, τρίβεται σε σκόνη θειικού βαρίου με ένα πανί. Μετά από αυτό, αφαιρέστε την περίσσεια χρώματος με ένα πανί, το οποίο παραμένει μόνο στις εγκοπές βαθμολόγησης. Οι πιπέτες που έχουν υποστεί επεξεργασία με αυτόν τον τρόπο πρέπει να ξεπλένονται.

Οι αιχμηρές άκρες των πιπετών Παστέρ σφραγίζονται σε φλόγα καυστήρα και τυλίγονται σε χαρτί, 3-5 τεμάχια τη φορά. Οι πιπέτες Pasteur πρέπει να τυλίγονται προσεκτικά ώστε να μην σπάσουν τα σφραγισμένα άκρα των τριχοειδών αγγείων.

Φιαλίδια, φιάλες, δοκιμαστικοί σωλήνες κλείνονται με πώματα από βαμβακερή γάζα. Ο φελλός πρέπει να μπαίνει στο λαιμό του σκάφους κατά τα 2/3 του μήκους του, όχι πολύ σφιχτό, αλλά ούτε χαλαρό. Ένα χάρτινο πώμα τοποθετείται πάνω από τα πώματα σε κάθε δοχείο (εκτός από τους δοκιμαστικούς σωλήνες). Οι δοκιμαστικοί σωλήνες δένονται μεταξύ τους σε ομάδες των 5-50 και τυλίγονται με χαρτί.

Σημείωση. Στο υψηλές θερμοκρασίεςτο χαρτί στο οποίο είναι τυλιγμένα φλιτζάνια και πιπέτες και το βαμβάκι κιτρινίζει και μπορεί ακόμη και να απανθρακωθεί, έτσι όλοι νέα ποικιλίατο χαρτί που παραλαμβάνεται από το εργαστήριο θα πρέπει να ελέγχεται στις αποδεκτές συνθήκες θερμοκρασίας.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Τι σημαίνει ο όρος στείρωση;

2. Πώς γίνεται η αποστείρωση;

3. Τι αποστειρώνεται με φρύξη στη φωτιά;

4. Περιγράψτε τη δομή και τον τρόπο λειτουργίας του φούρνου Pasteur.

5. Τι αποστειρώνεται σε φούρνο Παστέρ;

6. Πώς προετοιμάζονται τα γυάλινα σκεύη για αποστείρωση;

7. Γιατί δεν μπορούν να αποστειρωθούν θρεπτικά υλικά και αντικείμενα από καουτσούκ σε φούρνο Pasteur;

Ασκηση

Προετοιμάστε τρυβλία Petri, βαθμονομημένες πιπέτες, πιπέτες Παστέρ, δοκιμαστικούς σωλήνες, φιάλες και φιαλίδια για αποστείρωση.

Αποστείρωση με βράσιμο

Το βράσιμο είναι μια μέθοδος αποστείρωσης που εγγυάται τη στειρότητα υπό την προϋπόθεση ότι δεν υπάρχουν σπόρια στο αποστειρωμένο υλικό. Χρησιμοποιείται για την επεξεργασία συρίγγων, οργάνων, γυάλινων και μεταλλικών σκευών, σωλήνων από καουτσούκ κ.λπ.

Η αποστείρωση με βρασμό πραγματοποιείται συνήθως σε αποστειρωτή - μεταλλικό κουτί ορθογώνιο σχήμαμε καπάκι που εφαρμόζει σφιχτά. Το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί τοποθετείται στο πλέγμα που είναι διαθέσιμο στον αποστειρωτή και γεμίζεται με νερό. Για να αυξήσετε το σημείο βρασμού και να εξαλείψετε τη σκληρότητα του νερού, προσθέστε 1-2% διττανθρακικό νάτριο (καλύτερα να χρησιμοποιήσετε απεσταγμένο νερό). Ο αποστειρωτής κλείνεται με καπάκι και θερμαίνεται Αρχή της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή βρασμού του νερού, ο χρόνος βρασμού είναι 15-30 λεπτά. Στο τέλος της αποστείρωσης, το πλέγμα με τα όργανα αφαιρείται από τις πλαϊνές λαβές με ειδικά άγκιστρα και τα εργαλεία σε αυτό λαμβάνονται με αποστειρωμένα τσιμπιδάκια ή λαβίδες, τα οποία βράζονται μαζί με τα υπόλοιπα όργανα.

Η αποστείρωση με ατμό πραγματοποιείται με δύο τρόπους: 1) με ατμό υπό πίεση. 2) ρέοντας ατμός.

Αποστείρωση με ατμό υπό πίεσηπαράγεται σε αυτόκλειστο. Αυτή η μέθοδος αποστείρωσης βασίζεται στην έκθεση των υλικών που αποστειρώνονται σε κορεσμένους υδρατμούς σε πίεση πάνω από την ατμοσφαιρική. Ως αποτέλεσμα μιας τέτοιας αποστείρωσης, τόσο οι βλαστικές όσο και οι σποριακές μορφές μικροοργανισμών πεθαίνουν με μία μόνο επεξεργασία.

Ένα αυτόκλειστο (Εικ. 12) είναι ένας τεράστιος λέβητας, καλυμμένος εξωτερικά με μεταλλικό περίβλημα, ερμητικά σφραγισμένο με ένα καπάκι, το οποίο βιδώνεται σφιχτά στον λέβητα με αρθρωτούς κοχλίες. Μια άλλη, μικρότερης διαμέτρου, που ονομάζεται θάλαμος αποστείρωσης, εισάγεται στον εξωτερικό λέβητα. Τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν τοποθετούνται σε αυτόν τον θάλαμο. Μεταξύ των δύο λεβήτων υπάρχει ένας ελεύθερος χώρος που ονομάζεται θάλαμος νερού-ατμού. Το νερό χύνεται σε αυτόν τον θάλαμο μέσω μιας χοάνης στερεωμένης στο εξωτερικό σε ένα ορισμένο επίπεδο που σημειώνεται σε έναν ειδικό σωλήνα μέτρησης νερού. Όταν το νερό βράζεται σε θάλαμο νερού-ατμού, παράγεται ατμός. Ο θάλαμος αποστείρωσης είναι εξοπλισμένος με μια στρόφιγγα εξόδου με μια βαλβίδα ασφαλείας για να επιτρέπει στον ατμό να διαφεύγει όταν η πίεση αυξάνεται πάνω από το απαιτούμενο επίπεδο. Ένα μανόμετρο χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της πίεσης που δημιουργείται στο θάλαμο αποστείρωσης.

Ρύζι. 12. Διάγραμμα αυτόκλειστου. M - μανόμετρο; PC - βαλβίδα ασφαλείας. Β - χοάνη για νερό. K 2 - βρύση για απελευθέρωση νερού. K 3 - βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού

Η κανονική ατμοσφαιρική πίεση (760 mm Hg) λαμβάνεται ως μηδέν. Υπάρχει μια ορισμένη σχέση μεταξύ των ενδείξεων του μανόμετρου και της θερμοκρασίας (Πίνακας 2).

Επί του παρόντος, υπάρχουν αυτόκλειστα με αυτόματο έλεγχο του τρόπου λειτουργίας. Εκτός από το συνηθισμένο μανόμετρο, είναι εξοπλισμένα με ένα μανόμετρο ηλεκτρικής επαφής, το οποίο εμποδίζει την αύξηση της πίεσης πάνω από μια προκαθορισμένη τιμή και έτσι εξασφαλίζει σταθερή επιθυμητή θερμοκρασίασε αυτόκλειστο.

Ο ατμός υπό πίεση αποστειρώνει διάφορα θρεπτικά μέσα (εκτός από αυτά που περιέχουν φυσικές πρωτεΐνες), υγρά (ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, νερό κ.λπ.). συσκευές, ειδικά αυτές με ελαστικά μέρη.

Η θερμοκρασία και η διάρκεια του αποστείρωσης σε αυτόκαυστο των θρεπτικών μέσων καθορίζονται από τη σύνθεσή τους που καθορίζεται στη συνταγή για την παρασκευή του θρεπτικού μέσου. Για παράδειγμα, απλά μέσα (άγαρ κρέατος-πεπτόνης, ζωμός κρέατος-πεπτόνης) αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120 ° C (1 atm). Ωστόσο, σε αυτή τη θερμοκρασία είναι αδύνατο να αποστειρωθούν μέσα που περιέχουν φυσικές πρωτεΐνες, υδατάνθρακες και άλλες ουσίες που αλλάζουν εύκολα με θέρμανση. Τα μέσα με υδατάνθρακες αποστειρώνονται κλασματικά στους 100°C ή σε αυτόκλειστο στους 112°C (0,5 atm) για 10-15 λεπτά. Διάφορα υγρά, συσκευές με ελαστικούς σωλήνες, βύσματα, βακτηριακά κεριά και φίλτρα αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120 ° C (1 atm).

Προσοχή! Το μολυσμένο υλικό εξουδετερώνεται επίσης σε αυτόκλειστα. Φλιτζάνια και δοκιμαστικοί σωλήνες που περιέχουν καλλιέργειες μικροοργανισμών τοποθετούνται σε ειδικούς μεταλλικούς κάδους ή δεξαμενές με τρύπες στο καπάκι για διείσδυση ατμού και αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο στους 126 ° C (1,5 atm) για 1 ώρα. Τα όργανα αποστειρώνονται με τον ίδιο τρόπο μετά την εργασία με βακτήρια, σχηματίζοντας διαφωνίες.

Μόνο ειδικά εκπαιδευμένα άτομα επιτρέπεται να εργάζονται με το αυτόκλειστο, τα οποία πρέπει να ακολουθούν αυστηρά και με ακρίβεια τους κανόνες που καθορίζονται στις οδηγίες που παρέχονται με τη συσκευή.

Τεχνική αυτόκλειστου. 1. Πριν από την εργασία, ελέγξτε τη δυνατότητα συντήρησης όλων των εξαρτημάτων και τη λείανση των κρουνών.

2. Το νερό (απεσταγμένο ή βρασμένο για να αποφευχθεί ο σχηματισμός αλάτων) χύνεται μέσω μιας χοάνης τοποθετημένης έξω από το λέβητα μέχρι το επάνω σημάδι του ποτηριού του μετρητή νερού. Η βρύση κάτω από τη χοάνη είναι κλειστή.

3. Το προς αποστείρωση υλικό τοποθετείται στο θάλαμο αποστείρωσης πάνω σε ειδικό πλέγμα. Τα αντικείμενα δεν πρέπει να φορτώνονται πολύ σφιχτά, καθώς ο ατμός πρέπει να περνά ελεύθερα ανάμεσά τους, διαφορετικά δεν θα ζεσταθούν στην απαιτούμενη θερμοκρασία και μπορεί να παραμείνουν αποστειρωμένα.

4. Η ελαστική φλάντζα στο καπάκι τρίβεται με κιμωλία για καλύτερη στεγανοποίηση.

5. Το καπάκι είναι κλειστό και βιδωμένο στο σώμα του αυτόκλειστου και τα μπουλόνια βιδώνονται σε ζευγάρια σταυρωτά.

6. Ανοίξτε τη βαλβίδα εξόδου που συνδέει το θάλαμο αποστείρωσης με τον εξωτερικό αέρα μέχρι τέρμα και αρχίστε να θερμαίνετε το αυτόκλειστο. Το αυτόκλειστο συνήθως θερμαίνεται με αέριο ή ηλεκτρική ενέργεια.

Όταν το αυτόκλειστο θερμαίνεται, το νερό βράζει, ο ατμός που προκύπτει ανεβαίνει ανάμεσα στα τοιχώματα των λεβήτων και μέσω ειδικών οπών στο τοίχωμα του εσωτερικού λέβητα (βλ. Εικ. 12), εισέρχεται στον θάλαμο αποστείρωσης και εξέρχεται από την ανοιχτή βαλβίδα εξόδου. Πρώτον, ο ατμός διαφεύγει μαζί με τον αέρα στο αυτόκλειστο. Είναι απαραίτητο όλος ο αέρας να βγαίνει έξω από το αυτόκλειστο, διαφορετικά η ένδειξη του μανόμετρου δεν θα αντιστοιχεί στη θερμοκρασία στο αυτόκλειστο.

Η εμφάνιση ενός συνεχούς ισχυρού ρεύματος ατμού υποδηλώνει πλήρη απομάκρυνση του αέρα από το αυτόκλειστο. Μετά από αυτό, η βαλβίδα εξόδου κλείνει και η πίεση μέσα στο αυτόκλειστο αρχίζει σταδιακά να αυξάνεται.

7. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που οι ενδείξεις του μανόμετρου φτάνουν την καθορισμένη τιμή. Η θέρμανση ρυθμίζεται έτσι ώστε η πίεση στο αυτόκλειστο να μην αλλάζει σε μια συγκεκριμένη χρονική περίοδο.

8. Μετά τη λήξη του χρόνου αποστείρωσης, η θέρμανση του αυτόκλειστου διακόπτεται και ο ατμός απελευθερώνεται μέσω της βαλβίδας εξόδου. Όταν η βελόνα του μανόμετρου πέσει στο μηδέν, ανοίξτε το καπάκι. Για να αποφύγετε εγκαύματα από τον ατμό που παραμένει στο αυτόκλειστο, το καπάκι θα πρέπει να ανοίξει προς το μέρος σας.

Το επίπεδο θερμοκρασίας στο αυτόκλειστο, δηλαδή η ορθότητα των ενδείξεων του μανόμετρου, μπορεί να ελεγχθεί. Για να το κάνετε αυτό, χρησιμοποιήστε διάφορες ουσίες που έχουν ορισμένο σημείο τήξης: αντιπυρίνη (113 ° C), ρεσορκινόλη και θείο (119 ° C), βενζοϊκό οξύ (120 ° C). Μία από αυτές τις ουσίες αναμιγνύεται με αμελητέα ποσότητα χρωστικής ουσίας (muchsin ή μπλε του μεθυλενίου) και χύνεται σε ένα γυάλινο σωλήνα, ο οποίος σφραγίζεται και τοποθετείται σε κάθετη θέση μεταξύ του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί. Εάν η θερμοκρασία είναι επαρκής, η ουσία θα λιώσει και θα πάρει το χρώμα της αντίστοιχης βαφής.

Για να ελεγχθεί η αποτελεσματικότητα της αποστείρωσης, ένας δοκιμαστικός σωλήνας με γνωστή καλλιέργεια σπορίων τοποθετείται στο αυτόκλειστο. Μετά την αποστείρωση σε αυτόκλειστο, ο σωλήνας μεταφέρεται σε θερμοστάτη για 24-48 ώρες, σημειώνεται η απουσία ή η παρουσία ανάπτυξης. Η έλλειψη ανάπτυξης υποδηλώνει σωστή λειτουργία της συσκευής.

Αποστείρωση με ρέοντα ατμόπου παράγεται στη συσκευή Koch. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου το αντικείμενο που αποστειρώνεται αλλάζει σε θερμοκρασία πάνω από 100° C. Τα θρεπτικά υλικά που περιέχουν ουρία, υδατάνθρακες, γάλα, πατάτες, ζελατίνη κ.λπ. αποστειρώνονται με ρέον ατμό.

Η συσκευή Koch (λέβητας) είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος επενδυμένος εξωτερικά (για μείωση της μεταφοράς θερμότητας) με τσόχα ή αμίαντο. Ο κύλινδρος είναι κλειστός με κωνικό καπάκι με οπή για τη διαφυγή του ατμού. Μέσα στον κύλινδρο υπάρχει μια βάση, στο επίπεδο της οποίας χύνεται νερό. Ένας κουβάς με τρύπα τοποθετείται στη βάση στην οποία τοποθετείται το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί. Η συσκευή Koch θερμαίνεται με φυσικό αέριο ή ηλεκτρική ενέργεια. Ο χρόνος αποστείρωσης υπολογίζεται από τη στιγμή της έντονης απελευθέρωσης ατμού στα άκρα του καπακιού και από την έξοδο ατμού. Αποστειρώστε για 30-60 λεπτά. Στο τέλος της αποστείρωσης, η θέρμανση διακόπτεται. Αφαιρέστε τον κάδο με το υλικό από τη συσκευή και αφήστε το σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την επόμενη μέρα. Η θέρμανση πραγματοποιείται για 3 συνεχόμενες ημέρες σε θερμοκρασία 100°C για 30-60 λεπτά. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται κλασματική αποστείρωση. Κατά την πρώτη θέρμανση πεθαίνουν οι φυτικές μορφές μικροβίων, ενώ οι μορφές των σπορίων διατηρούνται. Μέσα σε μια μέρα, τα σπόρια καταφέρνουν να βλαστήσουν και να μετατραπούν σε φυτικές μορφές, οι οποίες πεθαίνουν τη δεύτερη μέρα της στείρωσης. Δεδομένου ότι είναι πιθανό ορισμένα από τα σπόρια να μην είχαν χρόνο να βλαστήσουν, το υλικό διατηρείται για άλλες 24 ώρες και στη συνέχεια πραγματοποιείται μια τρίτη αποστείρωση. Δεν απαιτείται αποστείρωση με ρέοντα ατμό σε συσκευή Koch ειδικό έλεγχο, αφού η στειρότητα του παρασκευασμένου θρεπτικού μέσου αποτελεί ένδειξη της σωστής λειτουργίας της συσκευής. Μπορείτε επίσης να αποστειρώσετε με ρέοντα ατμό σε αυτόκλειστο με το καπάκι ξεβιδωμένο και τη βαλβίδα εξόδου ανοιχτή.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποια θρεπτικά μέσα αποστειρώνονται με ατμό;

2. Τι είναι ο αποστειρωτής και πώς λειτουργεί;

3. Γιατί πρέπει να χρησιμοποιείται απεσταγμένο νερό κατά την αποστείρωση με βρασμό;

4. Περιγράψτε τη δομή και τον τρόπο λειτουργίας του αυτόκλειστου.

5. Τι αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο;

6. Τι χρησιμεύει ως έλεγχος για τη σωστή αποστείρωση κατά το αυτόκαυστο;

7. Τι είναι η αποστείρωση με ρέοντα ατμό;

8. Περιγράψτε τη δομή της συσκευής Koch.

9. Ποιος είναι ο σκοπός της κλασματικής αποστείρωσης;

Ασκηση

Συμπληρώστε τη φόρμα.

Η κλασματική αποστείρωση μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί σε πηκτικό Koch.

Το πηκτικό του Koch χρησιμοποιείται για την πήξη του ορού γάλακτος και των μέσων καλλιέργειας αυγών και ταυτόχρονα με τη συμπίεση του μέσου, αποστειρώνεται.

Το πηκτικό του Κοχείναι ένα επίπεδο μεταλλικό κουτί με διπλά τοιχώματα καλυμμένο εξωτερικά θερμομονωτικό υλικό. Το νερό χύνεται στο χώρο μεταξύ των τοίχων μέσω μιας ειδικής οπής που βρίσκεται στο πάνω μέρος του εξωτερικού τοίχου. Η τρύπα κλείνει με ένα πώμα στο οποίο εισάγεται ένα θερμόμετρο. Η συσκευή κλείνει με δύο καπάκια: γυαλί και μέταλλο. Μέσα από το γυάλινο καπάκι μπορείτε να παρατηρήσετε τη διαδικασία πήξης. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες με μέσα τοποθετούνται στο κάτω μέρος του πηκτικού σε κεκλιμένη θέση.

Ο θρομβωτής θερμαίνεται με αέριο ή ηλεκτρική ενέργεια. Τα μέσα αποστειρώνονται μία φορά σε θερμοκρασία 90°C για 1 ώρα ή κλασματικά - 3 ημέρες στη σειρά στους 80°C για 1 ώρα.

Τυνδαλοποίηση* - κλασματική αποστείρωση σε χαμηλές θερμοκρασίες - χρησιμοποιείται για ουσίες που καταστρέφονται και μετουσιώνονται εύκολα σε θερμοκρασία 60 ° C (για παράδειγμα, πρωτεϊνικά υγρά). Το προς αποστείρωση υλικό θερμαίνεται σε λουτρό νερού ή σε ειδικές συσκευές με θερμοστάτες σε θερμοκρασία 56-58 ° C για μία ώρα για 5 συνεχόμενες ημέρες.

* (Η μέθοδος αποστείρωσης πήρε το όνομά της από τον Tyndall, ο οποίος την πρότεινε.)

Παστερίωση- αποστείρωση στους 65-70 ° C για 1 ώρα, που προτείνεται από τον Παστέρ για την καταστροφή μη σποριακών μορφών μικροβίων. Το γάλα, το κρασί, η μπύρα, οι χυμοί φρούτων και άλλα προϊόντα παστεριώνονται. Το γάλα παστεριώνεται για την απομάκρυνση του γαλακτικού οξέος και των παθογόνων βακτηρίων (βρουκέλλα, μυκοβακτηρίδιο της φυματίωσης, σιγκέλα, σαλμονέλα, σταφυλόκοκκος κ.λπ.). Κατά την παστερίωση της μπύρας, των χυμών φρούτων και του κρασιού, οι μικροοργανισμοί που προκαλούν διάφορα είδη ζύμωσης πεθαίνουν. Τα παστεριωμένα τρόφιμα διατηρούνται καλύτερα στο ψυγείο.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποιος είναι ο σκοπός και η δομή του πηκτικού Koch;

2. Ποιες είναι οι μέθοδοι αποστείρωσης σε μηχανή πήξης;

3. Τι είναι η τυνδαλοποίηση;

4. Τι είναι η παστερίωση;

Αποστείρωση υπεριώδη ακτινοβολία

Η αποστείρωση με ακτίνες UV πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας ειδικές εγκαταστάσεις- βακτηριοκτόνοι λαμπτήρες. Οι ακτίνες UV έχουν υψηλή αντιμικροβιακή δράση και μπορούν να προκαλέσουν θάνατο όχι μόνο βλαστικών κυττάρων, αλλά και σπορίων. Η ακτινοβολία UV χρησιμοποιείται για την αποστείρωση του αέρα σε νοσοκομεία, χειρουργεία, παιδικά ιδρύματα κ.λπ. Σε ένα μικροβιολογικό εργαστήριο, ένα κουτί υποβάλλεται σε επεξεργασία με ακτίνες UV πριν από την εργασία.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Τι ιδιότητες έχουν οι υπεριώδεις ακτίνες;

2. Σε ποιες περιπτώσεις χρησιμοποιείται αποστείρωση με υπεριώδη ακτινοβολία;

Μηχανική αποστείρωση με χρήση βακτηριακών φίλτρων

Η αποστείρωση με διήθηση χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου τα αντικείμενα που αποστειρώνονται αλλάζουν όταν θερμαίνονται. Η διήθηση πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας βακτηριακά φίλτρα κατασκευασμένα από διάφορα λεπτά πορώδη υλικά. Οι πόροι των φίλτρων πρέπει να είναι αρκετά μικροί (μέχρι 1 micron) ώστε να διασφαλίζεται η μηχανική κατακράτηση βακτηρίων, επομένως ορισμένοι συγγραφείς αναφέρονται στη διήθηση ως μηχανικές μεθόδουςαποστείρωση.

Η μέθοδος διήθησης χρησιμοποιείται για την αποστείρωση θρεπτικών μέσων που περιέχουν πρωτεΐνη, ορό και ορισμένα αντιβιοτικά, καθώς και για τον διαχωρισμό των βακτηρίων από τους ιούς, τους φάγους και τις εξωτοξίνες.

Στη μικροβιολογική πρακτική χρησιμοποιούνται φίλτρα αμιάντου Seitz, φίλτρα μεμβράνης και φίλτρα Chamberlant και Berkefeld (κεριά).

Τα φίλτρα Seitz είναι δίσκοι κατασκευασμένοι από μείγμα αμιάντου και κυτταρίνης. Το πάχος τους είναι 3-5 mm, διάμετρος 35-140 mm. Η εγχώρια βιομηχανία παράγει φίλτρα δύο εμπορικών σημάτων: "F" (φιλτράρισμα) - συγκρατούν αιωρούμενα σωματίδια αλλά επιτρέπουν στα βακτήρια να περάσουν. "SF" (αποστείρωση) - με μικρότερους πόρους, που συγκρατούν τα βακτήρια, αλλά επιτρέπουν στους ιούς να περάσουν. Οι τσαλακωμένες πλάκες αμιάντου, καθώς και οι πλάκες με σπασίματα και ρωγμές, είναι ακατάλληλες για εργασία.

Τα φίλτρα μεμβράνης κατασκευάζονται από νιτροκυτταρίνη. Είναι δίσκοι άσπροΠάχος 0,1 mm και διάμετρος 35 mm. Ανάλογα με το μέγεθος των πόρων, χαρακτηρίζονται Νο. 1, 2, 3, 4 και 5 (Πίνακας 3).

Το φίλτρο Νο. 1 είναι το πλέον κατάλληλο για αποστείρωση. Εκτός από αυτά που αναφέρονται, παράγουν επίσης ένα λεγόμενο προ-φίλτρο, σχεδιασμένο να απελευθερώνει το φιλτραρισμένο υγρό από μεγάλα σωματίδια που περιέχονται σε αυτό.

Τα φίλτρα Chamberlant και Berkefeld (κεριά) είναι κοίλοι κύλινδροι, κλειστοί στο ένα άκρο. Τα κεριά Chamberlant κατασκευάζονται από καολίνη αναμεμειγμένο με άμμο και χαλαζία. Είναι τυποποιημένα με βάση το μέγεθος των πόρων και ονομάζονται L 1, L 2, L 3 ... L 13. Τα φίλτρα Berkefeld (κεριά) παρασκευάζονται από χώμα έγχυσης· ανάλογα με το μέγεθος των πόρων τους χαρακτηρίζονται V, N, W, που αντιστοιχεί σε διάμετρο πόρων 3-4, 4-7, 8-12 microns.

Η εργασία με βακτηριακά φίλτρα πραγματοποιείται ως εξής. Το φίλτρο πρέπει να στερεωθεί σε ειδική θήκη, η οποία εισάγεται στον δέκτη φίλτρου. Ο δέκτης είναι συνήθως μια φιάλη Bunsen. Οι βάσεις, στις περισσότερες περιπτώσεις από ανοξείδωτο χάλυβα, αποτελούνται από δύο μέρη: το επάνω, σε σχήμα κυλίνδρου χωρίς πάτο, και το κάτω, ένα τμήμα στήριξης που καταλήγει σε σωλήνα. Τα φίλτρα Seitz με την τραχιά επιφάνεια προς τα πάνω τοποθετούνται σε μεταλλικό πλέγμα και σφίγγονται σφιχτά με βίδες μεταξύ της κορυφής και κάτω μέροςκάτοχος. Το τοποθετημένο φίλτρο στερεώνεται σε ένα ελαστικό πώμα που εισάγεται στο λαιμό μιας φιάλης Bunsen. Μια μπατονέτα εισάγεται στον σωλήνα εξόδου της φιάλης, η οποία συνδέεται με την αντλία κενού. Η προετοιμασμένη εγκατάσταση τυλίγεται σε χαρτί και αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο υπό πίεση 1 atm για 20-30 λεπτά. Ολόκληρη η συναρμολογημένη συσκευή ονομάζεται επίσης φίλτρο Seitz (Εικ. 13).

Αμέσως πριν από τη διήθηση, το άκρο εξόδου της φιάλης Bunsen συνδέεται με έναν ελαστικό σωλήνα σε μια αντλία λαδιού ή εκτόξευσης νερού. Οι ενώσεις των διαφόρων τμημάτων γεμίζονται με παραφίνη για να δημιουργηθεί μια σφιχτή σφράγιση. Το φιλτραρισμένο υγρό χύνεται στον κύλινδρο της συσκευής και η αντλία ενεργοποιείται, δημιουργώντας ένα κενό στον δέκτη. Ως αποτέλεσμα της διαφοράς πίεσης που προκύπτει, το φιλτραρισμένο υγρό περνά μέσα από τους πόρους του φίλτρου στον δέκτη και τα μικρόβια παραμένουν στην επιφάνεια του φίλτρου.

Πριν από τη χρήση, τα φίλτρα μεμβράνης αποστειρώνονται με βρασμό σε απεσταγμένο νερό. Για να αποφευχθεί η κατσαροποίηση των φίλτρων, τοποθετούνται πρώτα σε απεσταγμένο νερό, θερμαίνονται σε θερμοκρασία 50-60 ° C και βράζονται σε χαμηλή φωτιά για 30 λεπτά, αλλάζοντας το νερό 2-3 φορές. Η βάση και ο δέκτης του φίλτρου αποστειρώνονται εκ των προτέρων και η συσκευή τοποθετείται υπό άσηπτες συνθήκες. Για να αποφύγετε το σκίσιμο του φίλτρου μεμβράνης στο μεταλλικό πλέγμα, τοποθετήστε κούπες με αποστειρωμένο διηθητικό χαρτί κάτω από αυτό. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας αποστειρωμένα τσιμπιδάκια με λείες άκρες, αφαιρέστε το φίλτρο μεμβράνης από τον αποστειρωτή και τοποθετήστε το στο πλέγμα στήριξης με τη γυαλιστερή επιφάνεια προς τα κάτω.

Κεριά (Chamberlant) που αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο συνδέονται μέσω ενός ελαστικού σωλήνα σε έναν δέκτη και κατεβαίνουν σε ένα δοχείο (συνήθως κύλινδρο) με ένα φιλτραρισμένο υγρό. Το φιλτράρισμα πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας αντλία κενού. Ένα αποστειρωμένο διήθημα εισέρχεται στον δέκτη και τα βακτήρια συγκρατούνται από τους πόρους του κεριού.

Τα φίλτρα μεμβράνης και αμιάντου είναι σχεδιασμένα για μία χρήση. Μετά τη χρήση, τα κεριά βράζονται σε νερό βρύσης και στη συνέχεια φρύνονται σε φούρνο σιγαστήρα.

Πριν από την επόμενη χρήση, τα κεριά ελέγχονται για ακεραιότητα. Το κερί κατεβαίνει σε ένα δοχείο με νερό και περνάει αέρας. Εάν εμφανιστούν φυσαλίδες αέρα στην επιφάνεια του κεριού, σημαίνει ότι έχουν δημιουργηθεί ρωγμές στο κερί και δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποια είναι η μέθοδος αποστείρωσης φίλτρου; Τι αποστειρώνεται με αυτή τη μέθοδο;

2. Ποια βακτηριακά φίλτρα γνωρίζετε; Πώς τοποθετείται η συσκευή φιλτραρίσματος, ποιες προϋποθέσεις πρέπει να τηρούνται;

Χημικές μέθοδοι

Αυτός ο τύπος αποστείρωσης χρησιμοποιείται σε περιορισμένο βαθμό και χρησιμεύει κυρίως για την πρόληψη της βακτηριακής μόλυνσης των μέσων καλλιέργειας και των ανοσοβιολογικών παρασκευασμάτων (εμβόλια και οροί).

Ουσίες όπως το χλωροφόρμιο, το τολουόλιο και ο αιθέρας προστίθενται συχνότερα στα θρεπτικά μέσα. Εάν είναι απαραίτητο να ελευθερωθεί το μέσο από αυτά τα συντηρητικά, θερμαίνεται σε λουτρό νερού στους 56 ° C (τα συντηρητικά εξατμίζονται).

Για τη διατήρηση των εμβολίων και των ορών χρησιμοποιούνται μερθειολικό οξύ, βορικό οξύ, φορμαλδεΰδη κ.λπ.

Βιολογική αποστείρωση

Η βιολογική στείρωση βασίζεται στη χρήση αντιβιοτικών. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια ιών.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Τι είναι χημική αποστείρωσηκαι πότε χρησιμοποιείται;

2. Τι είναι η βιολογική στείρωση;

Οι κύριες μέθοδοι αποστείρωσης παρουσιάζονται στον πίνακα. 4.

1 (Η αποστείρωση είναι ατελής: τα σπόρια παραμένουν στο αποστειρωμένο υλικό.)

2 (Η αποστείρωση είναι ατελής: οι ιοί παραμένουν στο αποστειρωμένο υλικό.)

Απολύμανση

Στη μικροβιολογική πρακτική χρησιμοποιούνται διάφορα απολυμαντικά: διαλύματα φαινόλης 3-5%, διαλύματα Lysol 5-10%, διαλύματα χλωραμίνης 1-5%, διαλύματα υπεροξειδίου του υδρογόνου 3-6%, διαλύματα φορμαλδεΰδης 1-5%, διαλύματα χλωριούχου υδραργύρου σε αραίωση 1: 1000 (0,1%), 70° αλκοόλ κ.λπ.

Το χρησιμοποιημένο παθολογικό υλικό (πύον, κόπρανα, ούρα, πτύελα, αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό) απολυμαίνεται πριν αποστραγγιστεί στην αποχέτευση. Η απολύμανση πραγματοποιείται με ξηρή χλωρίνη ή διάλυμα χλωραμίνης 3-5%.

Πιπέτες (βαθμονομημένη και Παστέρ), γυάλινες σπάτουλες, διαφάνειες και καλυπτρίδες μολυσμένες με παθολογικό υλικό ή καλλιέργειες μικροοργανισμών βυθίζονται σε γυάλινα βάζα με διάλυμα φαινόλης ή υπεροξειδίου του υδρογόνου 3% για μια ημέρα.

Αφού τελειώσει η εργασία με μολυσματικό υλικό, ο τεχνικός εργαστηρίου πρέπει να το επεξεργαστεί με απολυμαντικό διάλυμα. ΧΩΡΟΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣκαι τα χέρια. Η επιφάνεια του τραπεζιού εργασίας σκουπίζεται με ένα κομμάτι βαμβάκι βρεγμένο με διάλυμα φαινόλης 3%. Τα χέρια απολυμαίνονται με διάλυμα χλωραμίνης 1%. Για να το κάνετε αυτό, χρησιμοποιήστε ένα βαμβάκι ή επίθεμα γάζαςβρέξτε με απολυμαντικό διάλυμα και σκουπίστε το αριστερό χέρι, μετά το δεξί και μετά πλύνετε τα χέρια σας με ζεστό νερό και σαπούνι.

Η επιλογή ενός απολυμαντικού, η συγκέντρωσή του και η διάρκεια της έκθεσης (έκθεση) εξαρτώνται από τις βιολογικές ιδιότητες του μικροβίου και από το περιβάλλον στο οποίο το απολυμαντικό θα έρθει σε επαφή με παθογόνους μικροοργανισμούς. Για παράδειγμα, το χλωριούχο υδράργυρο, η φαινόλη και οι αλκοόλες είναι ακατάλληλα για την απολύμανση πρωτεϊνικών υποστρωμάτων (πύον, αίμα, πτύελα), καθώς υπό την επήρεια τους λαμβάνει χώρα πήξη πρωτεϊνών και η πηγμένη πρωτεΐνη προστατεύει τους μικροοργανισμούς από τις επιδράσεις των απολυμαντικών.

Κατά την απολύμανση υλικού μολυσμένου με μορφές σπορίων μικροοργανισμών, χρησιμοποιείται διάλυμα χλωραμίνης 5%, διαλύματα ενεργοποιημένης χλωραμίνης 1-2,5%, διαλύματα φορμαλίνης 5-10% και άλλες ουσίες.

Η απολύμανση, η οποία πραγματοποιείται όλη την ημέρα κατά τη διάρκεια της εργασίας, ονομάζεται τρέχουσα και στο τέλος της εργασίας - τελική.

Απολυμαντικά και οδηγίες για την παρασκευή διαλυμάτων εργασίας από αυτά. Το χλωρίδιο του ασβέστη είναι μια λευκή, σβώλους σκόνη με μια έντονη οσμή χλωρίου, δεν διαλύεται πλήρως στο νερό. Η βακτηριοκτόνος δράση εξαρτάται από την περιεκτικότητα σε ενεργό χλώριο, η ποσότητα του οποίου κυμαίνεται από 28 έως 36%. Χλώριο που περιέχει λιγότερο από 25% ενεργό χλώριο είναι ακατάλληλο για απολύμανση.

Εάν αποθηκευτεί ακατάλληλα, η χλωρίνη αποσυντίθεται και χάνει μέρος του ενεργού χλωρίου της. Η αποσύνθεση προωθείται από τη θερμότητα, την υγρασία και το ηλιακό φως, επομένως η χλωρίνη πρέπει να φυλάσσεται σε ξηρό, σκοτεινό μέρος, σε ερμητικά κλεισμένο δοχείο.

Η ξηρή χλωρίνη χρησιμοποιείται για την απολύμανση των εκκρίσεων ανθρώπων και ζώων (με αναλογία 200 g ανά 1 λίτρο περιττωμάτων και 10 g ανά 1 λίτρο ούρων).

Παρασκευή του αρχικού 10% διαυγασμένου διαλύματος λευκαντικού. Πάρτε 1 κιλό ξηρή χλωρίνη, τοποθετήστε το σε έναν εμαγιέ κουβά και τρίψτε το. Στη συνέχεια ρίξτε κρύο νερόσε όγκο 10 λίτρων, ανακατεύουμε καλά, κλείνουμε με καπάκι και αφήνουμε για μια μέρα σε δροσερό μέρος. Μετά από αυτό, το προκύπτον διαυγασμένο διάλυμα 10% στραγγίζεται προσεκτικά και φιλτράρεται μέσω πολλών στρωμάτων γάζας ή φιλτράρεται μέσω ενός χοντρού υφάσματος. Φυλάσσετε σε σκούρα γυάλινα μπουκάλια, κλεισμένα με ξύλινο πώμα, σε δροσερό μέρος για όχι περισσότερο από 10 ημέρες. Τα διαλύματα εργασίας της απαιτούμενης συγκέντρωσης παρασκευάζονται από το αρχικό διάλυμα αμέσως πριν από τη χρήση. Η ποσότητα του βασικού διαλύματος που απαιτείται για την παρασκευή 0,2-10% διαυγασμένων διαλυμάτων λευκαντικού δίνεται στον πίνακα. 5.

Η συγκέντρωση των διαυγασμένων διαλυμάτων λευκαντικού από 0,2 έως 10% επιλέγεται ανάλογα με τη φύση του αντικειμένου που απολυμαίνεται και την αντίσταση του παθογόνου.

Η χλωραμίνη είναι μια κρυσταλλική ουσία λευκού ή κιτρινωπού χρώματος, που περιέχει 24-28% ενεργό χλώριο. Διαλύεται καλά σε νερό σε θερμοκρασία δωματίου, επομένως τα διαλύματα παρασκευάζονται αμέσως πριν την απολύμανση. Χρησιμοποιήστε διαλύματα χλωραμίνης 0,2-10%. Η σχέση μεταξύ της εκατοστιαίας συγκέντρωσης του διαλύματος και της ποσότητας χλωραμίνης σε γραμμάρια ανά 1 και 10 λίτρα δίνεται στον πίνακα. 6.

Διαλύστε τη χλωραμίνη σε γυαλί ή εμαγιέ πιάτα. Κατά την αποθήκευση διαλυμάτων χλωραμίνης σε σκούρα γυάλινα δοχεία με αλεσμένο πώμα, η δράση τους παραμένει έως και 15 ημέρες.

Ενεργοποιημένη χλωραμίνη. Οι απολυμαντικές ιδιότητες της χλωραμίνης ενισχύονται με την προσθήκη ενός ενεργοποιητή σε αυτήν σε αναλογία 1:1 ή 1:2. Οι ενώσεις αμμωνίου χρησιμοποιούνται ως ενεργοποιητής - χλωριούχο αμμώνιο, θειικό, νιτρικό αμμώνιο. Η ενεργοποιημένη χλωραμίνη χρησιμοποιείται σε συγκεντρώσεις 0,5, 1 και 2,5%. Παρασκευάζονται αμέσως πριν τη χρήση. Η χλωραμίνη και το άλας αμμωνίου ζυγίζονται χωριστά. Αρχικά, η χλωραμίνη διαλύεται σε νερό και στη συνέχεια προστίθεται ένας ενεργοποιητής.

Το πλεονέκτημα των διαλυμάτων ενεργοποιημένης χλωραμίνης έναντι των συμβατικών είναι ότι η προσθήκη ενός ενεργοποιητή επιταχύνει την απελευθέρωση ενεργού χλωρίου. Ως εκ τούτου, το φάρμακο έχει επιζήμια επίδραση όχι μόνο στις φυτικές μορφές μικροοργανισμών, αλλά και στα σπόρια τους. Η ενεργοποιημένη χλωραμίνη χρησιμοποιείται σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις και με λιγότερη έκθεση.

Η φαινόλη (καρβολικό οξύ) είναι ένας άχρωμος κρύσταλλος σε σχήμα βελόνας με έντονη, χαρακτηριστική οσμή. Όταν εκτίθενται στο φως, τον αέρα και την υγρασία, οι κρύσταλλοι αποκτούν ένα κατακόκκινο χρώμα. Αποθηκεύω στο κλειστές τράπεζεςκατασκευασμένο από σκούρο γυαλί και σε μέρος προστατευμένο από το φως.

Η φαινόλη είναι διαλυτή στο νερό, την αλκοόλη, τον αιθέρα και τα λιπαρά έλαια. Διαθέτοντας μεγάλη υγροσκοπικότητα, απορροφά την υγρασία από το περιβάλλον και γίνεται υγρό. Το υγρό καρβολικό οξύ περιέχει 90% κρυσταλλική φαινόλη και 10% νερό.

Χρησιμοποιήστε 3-5% υδατικά διαλύματα καρβολικού οξέος που παρασκευάζονται από κρυσταλλική φαινόλη και υγρό καρβολικό οξύ σύμφωνα με το σχήμα που δίνεται στον πίνακα. 7. Η δραστηριότητα της φαινόλης αυξάνεται όταν διαλυθεί μέσα ζεστό νερό(40-50°C).

Προσοχή! Η κρυσταλλική φαινόλη ή το υγρό καρβολικό οξύ, εάν εισέλθει στο δέρμα, μπορεί να προκαλέσει ερεθισμό και σε υψηλές συγκεντρώσεις - σοβαρά εγκαύματα. Επομένως, ο χειρισμός του καρβολικού οξέος πρέπει να γίνεται με μεγάλη προσοχή. Κατά την προετοιμασία των διαλυμάτων, θα πρέπει να φοράτε λαστιχένια γάντια ή ως έσχατη λύσηΛιπάνετε τα χέρια σας με βαζελίνη.

Εάν το καρβολικό οξύ πέσει στο δέρμα σας, ξεπλύνετε το αμέσως με ζεστό νερό και σαπούνι ή αιθυλική αλκοόλη 40°.

Σημείωση. Για την παρασκευή απολυμαντικών διαλυμάτων φαινόλης, είναι πιο βολικό και ασφαλέστερο να χρησιμοποιείτε υγρό καρβολικό οξύ.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποια απολυμαντικά χρησιμοποιούνται στη μικροβιολογική πρακτική;

2. Περιγράψτε εμφάνισηκαι τις βασικές ιδιότητες της χλωρίνης, της χλωραμίνης, της φαινόλης.

3. Ποια διαλύματα απολυμαντικών χρησιμοποιούνται για την απολύμανση υλικού μολυσμένου με μορφές σπορίων μικροοργανισμών;

Ασκηση

Προετοιμάστε 2 λίτρα διαλύματος εργασίας 5% διαυγασμένης χλωρίνης. 500 ml διαλύματος χλωραμίνης 3%, 300 ml διαλύματος ενεργοποιημένης χλωραμίνης 1%.

Προσοχή! Πριν ξεκινήσετε την προετοιμασία λύσεων, κάντε υπολογισμούς.

Θερμοστάτης– συσκευή για τη διατήρηση σταθερής θερμοκρασίας – που χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια μικροοργανισμών. Είναι ένα ντουλάπι (Εικόνα 1) στο οποίο διατηρείται μια συγκεκριμένη θερμοκρασία για μεγάλο χρονικό διάστημα. Η βέλτιστη θερμοκρασία για την αναπαραγωγή πολλών μικροοργανισμών είναι 37 ºС. Οι θερμοστάτες διατίθενται σε τύπους ξηρού αέρα και νερού.

Ντουλάπι στεγνώματος (φούρνος Pasteur)χρησιμοποιείται για ξηρή θερμική αποστείρωση πιάτων, εξοπλισμού και ξηρών υλικών, όπως άμυλο, κιμωλία (Εικόνα 2). Το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί είναι προτυλιγμένο σε χαρτί και τοποθετείται σε ντουλάπι για να μην ακουμπάει τους τοίχους. Η αποστείρωση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 160 ºС για δύο ώρες. Δεν συνιστάται η αύξηση της θερμοκρασίας πάνω από 180 ºС: τα βαμβακερά βύσματα και το χαρτί αρχίζουν να φθείρονται (μαυρίζουν καφέ, γίνονται εύθραυστα). Το αποστειρωμένο υλικό αφαιρείται αφού το ντουλάπι απενεργοποιηθεί και κρυώσει, κατά προτίμηση όταν η θερμοκρασία στο ντουλάπι είναι ίση με τη θερμοκρασία δωματίου.

Συσκευή μέτρησης αποικιών(Εικόνα 3) - ένας ημιαυτόματος μετρητής εξοπλισμένος με ηλεκτρικό στυλό με συσκευή ελατηρίου, σχεδιασμένο για την καταμέτρηση βακτηριακών αποικιών σε πιάτα Petri. Φλιτζάνι
Ένα Petri με βακτηριακές αποικίες τοποθετείται ανάποδα σε ένα γυαλί σάρωσης. Η ελαφριά πίεση του ηλεκτρικού στυλό στην περιοχή του πυθμένα του πιάτου Petri που αντιστοιχεί στη θέση της αποικίας αφήνει ένα σημάδι στο ποτήρι. Σε αυτή την περίπτωση, η θήκη ανεβαίνει, το κύκλωμα κλείνει και οι ενδείξεις του μετρητή αυξάνονται κατά μία. Ο αριθμός των βακτηριακών αποικιών μετράται με τον υπολογισμό της διαφοράς στις μετρήσεις του μετρητή παλμών πριν από την έναρξη της μέτρησης και μετά το τέλος της.

Αεροστεγής λέβης βρασμού(Εικόνα 4) είναι μια συσκευή με παχύ τοίχωμα σχεδιασμένη για την αποστείρωση πιάτων και μέσων καλλιέργειας με ατμό υπό πίεση. Πρόκειται για ένα σφραγισμένο καζάνι με διπλά μεταλλικά τοιχώματα και καπάκι. Ο χώρος μεταξύ των τοίχων (θάλαμος υδρατμών) είναι γεμάτος με νερό. Εσωτερικό(θάλαμος αποστείρωσης) είναι εξοπλισμένος με μανόμετρο, βαλβίδες ασφαλείας και βρύση για την αποστράγγιση νερού και ατμού. Για να δημιουργήσετε μια σφιχτή σφράγιση, το αυτόκλειστο κλείνει καλά με ένα καπάκι με ελαστικό παρέμβυσμα. Χρησιμοποιείται για την αποστείρωση των μέσων καλλιέργειας υπό πίεση από 0,5 έως 1,0 MPa για 20...30 λεπτά.

1 – σώμα; 2 – θερμόμετρο; 1 – κάλυμμα; 2 – σώμα;

3 – πόρτα; 4 – ποτενσιόμετρο; 3 – κιβώτιο ταχυτήτων. 4 – μονάδα ελέγχου.

5 – διακόπτης εναλλαγής. 6 – λαμπτήρας; 5 – σήμανση. 6 – θερμόμετρο

7 – οπές εξαερισμού

Εικόνα 1 - Θερμοστάτης Εικόνα 2 - Ντουλάπι στεγνώματος

1 – τραπέζι για ένα πιάτο Petri. 2 – στυλό με συσκευή ελατηρίου.

3 – δείκτης μετρητή. 4 – εναλλαγή διακόπτη για να ενεργοποιήσετε τον μετρητή παλμών. 5 – Ενεργοποιήστε τον διακόπτη για να ανάψετε τη λυχνία φωτισμού του μετρητή

Εικόνα 3 - Συσκευή μέτρησης αποικιών μικροοργανισμών

Αποστείρωση- στειρότητα καταστροφή παθογόνων και μη παθογόνων μικροοργανισμών σε φυτικές και σποριακές μορφές σε οποιοδήποτε υλικό.

Προετοιμασία πιάτων για αποστείρωση. Τα εργαστηριακά γυάλινα σκεύη πρέπει να πλένονται καθαρά και να αποστειρώνονται. Για πλύσιμο, χρησιμοποιήστε σαπούνι ή χημικά διαλύματα απορρυπαντικά. Τα νέα πιάτα προβράζονται σε διάλυμα υδροχλωρικού οξέος 1-2% για να αποφευχθεί η επακόλουθη έκπλυση του ποτηριού. Τα πιάτα που πλένονται σε τρεχούμενο νερό ξεπλένονται με απεσταγμένο νερό και στεγνώνουν.

Βακτηριολογικοί σωλήνες. Οι κωνικές, ματ φιάλες κλείνονται με πώματα από βαμβακερή γάζα, που αποτελούνται από σφιχτά στριμμένα ρολά από βαμβάκι, καλυμμένα με ένα στρώμα γάζας. Μεταλλικά πώματα με τη μορφή εξωτερικών πωμάτων έχουν επίσης αναπτυχθεί για βακτηριολογικούς δοκιμαστικούς σωλήνες. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η αποστείρωση βαμβακερών βυσμάτων σε υψηλές θερμοκρασίες οδηγεί στην απελευθέρωση ουσιών από το βαμβάκι που αναστέλλουν την ανάπτυξη ορισμένων ευαίσθητων βακτηρίων, όπως η βρουκέλλα.

Όταν τοποθετείτε πιπέτες, τοποθετήστε μια μπατονέτα στο επάνω άκρο. Οι πιπέτες Παστέρ πρέπει να έχουν σφραγισμένο τριχοειδές. Κάθε πιπέτα μέτρησης τυλίγεται σε μια μακριά λωρίδα χαρτιού πλάτους 4-5 cm, ξεκινώντας από το στόμιο, ελικοειδώς σε όλο το μήκος της. Οι πιπέτες Παστέρ τυλίγονται σε χαρτί, 10-20 τεμάχια το καθένα, δοκιμαστικοί σωλήνες - 15-20 τεμάχια το καθένα. Είναι προτιμότερο να αποθηκεύετε όλα τα είδη πιπέτων πριν και μετά την αποστείρωση σε ειδικές μεταλλικές θήκες. Τα πώματα στις φιάλες καλύπτονται επιπλέον με χάρτινα πώματα.

Πριν από την αποστείρωση, τα καθαρά, συναρμολογημένα πιάτα Petri τυλίγονται σε χαρτί, 3 έως 4 τεμάχια το καθένα. Μετά την αποστείρωση, το χαρτί προστατεύει τα αποστειρωμένα γυάλινα σκεύη από μόλυνση από μικροχλωρίδα.

Πριν από την αποστείρωση, τα πιάτα τοποθετούνται στο στεγνωτήριο όχι πολύ σφιχτά για να διασφαλιστεί η κυκλοφορία του αέρα και προσέχουμε η θερμοκρασία να μην ξεπερνά τους 180°C, αφού σε υψηλότερη θερμοκρασία το χαρτί και το βαμβάκι θα απανθρακωθούν. Μετά την ολοκλήρωση της αποστείρωσης, το ντουλάπι στεγνώματος δεν ανοίγει μέχρι τότε. Μέχρι να πέσει η θερμοκρασία σε αυτό στους 70-80?C, γιατί απότομη πτώσηοι θερμοκρασίες μπορεί να προκαλέσουν σπάσιμο του γυαλιού.

Εάν τα πιάτα προορίζονται για αποστείρωση θρεπτικών μέσων σε αυτά με αποστείρωση σε αυτόκλειστο υπό πίεση τουλάχιστον 1 atm, τότε δεν είναι προ-αποστειρωμένα. Κατά την αποστείρωση μέσων με ρέοντα ατμό ή σε αυτόκλειστο υπό πίεση όχι μεγαλύτερη από 0,5 atm. Πρέπει να χρησιμοποιούνται αποστειρωμένα δοχεία.

Αποστείρωση με ξηρό θερμαινόμενο αέρα. Η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση καθαρών γυάλινων σκευών. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιείται ένας φούρνος Pasteur - ένα ειδικό ντουλάπι στεγνώματος με διπλά τοιχώματα. Εξωτερικά είναι επενδεδυμένο με ανθεκτικό στη θερμότητα υλικό. Στην κορυφή υπάρχει ένα θερμόμετρο. Μεταξύ της θερμομονωτικής επένδυσης και της εσωτερικής μεταλλικό σώμαΣτο κάτω μέρος τοποθετείται αυτόματη ηλεκτρική αντίσταση. Όταν το ντουλάπι στεγνώματος είναι ενεργοποιημένο, ο αέρας στο εσωτερικό του θερμαίνεται. Μόλις επιτευχθεί η καθορισμένη θερμοκρασία, σημειώνεται ο χρόνος έναρξης της αποστείρωσης. Λειτουργία αποστείρωσης: σε θερμοκρασία 155-160° C - έκθεση για 2 ώρες, στους 165-170° C - 1-1,5 ώρες, στους 180° C - 1 ώρα Μετά το χρόνο αποστείρωσης, η θέρμανση διακόπτεται.

Αυτόκαυστο. Πρόκειται για αποστείρωση με ατμό υπό πίεση σε συνδυασμό με υψηλή θερμοκρασία ειδική συσκευή- αυτόκλειστο. Όταν ο κορεσμένος ατμός συναντά ένα πιο ψυχρό αντικείμενο, ο ατμός συμπυκνώνεται σε νερό, απελευθερώνοντας μεγάλη ποσότητα θερμότητας. Επιπλέον, μειώνεται ο όγκος του ατμού, γεγονός που διευκολύνει τη διείσδυσή του στα εσωτερικά μέρη του υλικού που αποστειρώνεται. Απαραίτητη προϋπόθεση είναι η παροχή πραγματικά κορεσμένου ατμού, ώστε η επαφή του με κρύο αντικείμενο να οδηγεί σε άμεση συμπύκνωση και θέρμανση. Η βιομηχανία παράγει αυτόκλειστα κάθετα και οριζόντια.

Ένα κατακόρυφο αυτόκλειστο είναι ένα κυλινδρικό μεταλλικό καζάνι με διπλά τοιχώματα, σφραγισμένο με καπάκι. Το νερό χύνεται μεταξύ των τοίχων μέσω ειδικής βρύσης με χοάνη σε ένα ορισμένο επίπεδο. Το εσωτερικό τοίχωμα του λέβητα είναι εξοπλισμένο με οπές στο επάνω μέρος και μια βρύση στο κάτω μέρος, μέσω των οποίων, όταν θερμαίνεται το νερό, ο ατμός εκτοπίζει τον αέρα από το λέβητα. Ένα μεταλλικό προστατευτικό πλαίσιο τοποθετείται στην κορυφή του αυτόκλειστου και πρέπει να υπάρχει ελεύθερος χώρος μεταξύ αυτού και του ίδιου του αυτόκλειστου. Το αυτόκλειστο θερμαίνεται με σύνδεση στο ηλεκτρικό δίκτυο.

Το αυτόκλειστο φορτώνεται με το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί, το καπάκι και η βρύση μέσω της οποίας χύθηκε νερό κλείνουν και η κάτω βρύση αφήνεται προσωρινά ανοιχτή. Το θερμαινόμενο νερό μεταξύ των τοιχωμάτων του αυτόκλειστου βράζει, ο ατμός που προκύπτει ανεβαίνει και περνά μέσα από τις επάνω οπές του εσωτερικού τοιχώματος στον λέβητα, σπρώχνοντας τον αέρα μέσω της κάτω ανοιχτής βρύσης. Όταν όλος ο αέρας μετατοπιστεί και ο ατμός αρχίσει να βγαίνει σε ομοιόμορφο ρεύμα, η κάτω βαλβίδα είναι κλειστή. Ως αποτέλεσμα, η πίεση ατμού μέσα στο αυτόκλειστο αυξάνεται. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που η πίεση φτάνει σε μια δεδομένη τιμή (σύμφωνα με το μανόμετρο). Η θερμότητα ρυθμίζεται καθ' όλη τη διάρκεια της αποστείρωσης, διατηρώντας την πίεση του ατμού στο ίδιο επίπεδο. Εάν η πίεση στο εσωτερικό του αυτόκλειστου αυξηθεί υπερβολικά, υπάρχει μια βαλβίδα ασφαλείας μέσω της οποίας διαφεύγει αυτόματα ο περίσσιος ατμός.

Καθώς η πίεση του ατμού αυξάνεται, η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο αυξάνεται ανάλογα.

Το μανόμετρο δείχνει την πίεση του ατμού χωρίς να λαμβάνει υπόψη το περιβάλλον ατμοσφαιρική πίεση(760 mmHg). Μετά τη λήξη του χρόνου αποστείρωσης, το αυτόκλειστο απενεργοποιείται. Μετά την ψύξη, όταν η ένδειξη του μανόμετρου είναι μηδέν, ανοίξτε τη βαλβίδα για να απελευθερώσετε ατμό.

Ένα οριζόντιο αυτόκλειστο διαφέρει από ένα κάθετο αυτόκλειστο στο σχεδιασμό, αλλά η αρχή λειτουργίας του είναι η ίδια.

ιολογική στείρωση παθολογικό ζώο

Δείγματα εντύπων που πρέπει να συμπληρώνονται κατά την αποστολή παθολογικού υλικού στο εργαστήριο

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα ή ζεστό αέρα πραγματοποιείται σε φούρνους Pasteur (φούρνοι στεγνώματος). Ο φούρνος Pasteur είναι ένα ντουλάπι με διπλά τοιχώματα κατασκευασμένο από ανθεκτικά στη θερμότητα υλικά - μέταλλο και αμίαντο. Θερμάνετε το ντουλάπι χρησιμοποιώντας καυστήρες αερίου ή ηλεκτρικές συσκευές θέρμανσης. Τα ηλεκτρικά θερμαινόμενα ντουλάπια είναι εξοπλισμένα με ρυθμιστές για την εξασφάλιση της απαιτούμενης θερμοκρασίας. Για τον έλεγχο της θερμοκρασίας, υπάρχει ένα θερμόμετρο τοποθετημένο στην οπή στο επάνω τοίχωμα του ντουλαπιού.

Η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση εργαστηριακών γυαλικών. Τα πιάτα που προετοιμάζονται για αποστείρωση φορτώνονται χαλαρά στο φούρνο για να διασφαλιστεί η ομοιόμορφη και αξιόπιστη θέρμανση του υλικού που αποστειρώνεται. Κλείστε καλά την πόρτα του ντουλαπιού, ενεργοποιήστε τη συσκευή θέρμανσης, φέρτε τη θερμοκρασία στους 160-165 ° C και αποστειρώστε σε αυτή τη θερμοκρασία για 1 ώρα. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε τη θέρμανση, αλλά μην ανοίξετε την πόρτα του ντουλαπιού μέχρι Ο φούρνος έχει κρυώσει. Διαφορετικά, ο κρύος αέρας που εισέρχεται στο ντουλάπι μπορεί να προκαλέσει ρωγμές στα ζεστά μαγειρικά σκεύη.

Πίνακας 1. Λειτουργία αποστείρωσης

Προετοιμασία εργαστηριακών υαλικών για αποστείρωση σε φούρνο Pasteur. Πριν από την αποστείρωση, τα εργαστηριακά γυάλινα σκεύη (τρυβλία Petri, διαβαθμισμένες πιπέτες και Παστέρ, φιαλίδια, φιάλες, δοκιμαστικοί σωλήνες) πρέπει να πλυθούν καλά, να στεγνώσουν και να τυλιχτούν σε χαρτί, διαφορετικά μετά την αποστείρωση μπορεί να μολυνθούν ξανά με βακτήρια αέρα.

Σημείωση. Εάν η διαβάθμιση στις πιπέτες είναι ελάχιστα ορατή, αποκαθίσταται πριν από την αποστείρωση. Εφαρμόζεται λαδομπογιά στην πιπέτα και, χωρίς να αφήνεται το χρώμα να στεγνώσει, τρίβεται σε αυτό σκόνη θειικού βαρίου χρησιμοποιώντας ένα πανί. Μετά από αυτό, αφαιρέστε την περίσσεια χρώματος με ένα πανί, το οποίο παραμένει μόνο στις εγκοπές βαθμολόγησης. Οι πιπέτες που έχουν υποστεί επεξεργασία με αυτόν τον τρόπο πρέπει να ξεπλένονται.

Σημείωση. Σε υψηλές θερμοκρασίες, το χαρτί στο οποίο είναι τυλιγμένα τα κύπελλα και οι πιπέτες και το βαμβάκι κιτρινίζουν και μπορεί ακόμη και να απανθρακωθούν, επομένως κάθε νέος τύπος χαρτιού που λαμβάνεται από το εργαστήριο θα πρέπει να ελέγχεται στις αποδεκτές συνθήκες θερμοκρασίας.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Τι σημαίνει ο όρος στείρωση;

2. Πώς γίνεται η αποστείρωση;

3. Τι αποστειρώνεται με φρύξη στη φωτιά;

4. Περιγράψτε τη δομή και τον τρόπο λειτουργίας του φούρνου Pasteur.

5. Τι αποστειρώνεται σε φούρνο Παστέρ;

6. Πώς προετοιμάζονται τα γυάλινα σκεύη για αποστείρωση;

7. Γιατί δεν μπορούν να αποστειρωθούν θρεπτικά υλικά και αντικείμενα από καουτσούκ σε φούρνο Pasteur;

Ασκηση

1. Φλεγόμενος(από το λατ. flamma - φλόγα και φρ. flamb é - έγκαυμα) - αποστείρωση με φρύξη μικρών μεταλλικών ή γυάλινων αντικειμένων σε φλόγα. Με αυτόν τον τρόπο αποστειρώνονται βακτηριολογικοί βρόχοι, μεταλλικά τσιμπιδάκια, γυάλινες σπάτουλες και σωλήνες, γυάλινες πλάκες κ.λπ.. Η θερμοκρασία της φλόγας είναι περίπου 1000ºC. Όταν πυρώνονται, όλοι οι μικροοργανισμοί (βλαστικές μορφές και μορφές σπορίων) καίγονται. Αυτή είναι μια γρήγορη και αξιόπιστη μέθοδος αποστείρωσης.

2. Βρασμός. Είναι μια από τις απλούστερες μεθόδους αποστείρωσης. Πραγματοποιείται σε αποστειρωτή - μεταλλικό ορθογώνιο κουτί με καπάκι και πλέγμα στο κάτω μέρος για τοποθέτηση αποστειρωμένων αντικειμένων. Ρίχνουμε νερό σε αυτό και το ζεσταίνουμε μέχρι να βράσει (ηλεκτρική θέρμανση ή σε φωτιά). Ο βρασμός μπορεί να διαρκέσει από 15-30 λεπτά έως 2 ώρες σε θερμοκρασία περίπου 100 ºС. Αποστειρώστε μικρά μεταλλικά ή γυάλινα αντικείμενα - σύριγγες, βελόνες, γυάλινους σωλήνες κ.λπ. Σε αυτή την περίπτωση, οι φυτικές μορφές μικροοργανισμών και ορισμένα σπόρια πεθαίνουν. Εφαρμόζεται επίσης το ζεμάτισμα του υλικού που αποστειρώνεται με βραστό νερό.

3. Αποστείρωση με ξηρή θερμότητα.Παράγεται με ζεστό αέρα σε φούρνο ή φούρνο Pasteur. Ο φούρνος Pasteur είναι ένα ντουλάπι με διπλά τοιχώματα επενδεδυμένο με αμίαντο εξωτερικά για θερμομόνωση. Μέσα στο ντουλάπι υπάρχουν μεταλλικά ράφιαμε τρύπες στις οποίες τοποθετείται το προς αποστείρωση υλικό. Ηλεκτρική θέρμανση. Η αποστείρωση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 160-180 ºС για 1-2 ώρες από τη στιγμή που επιτυγχάνονται αυτές οι θερμοκρασίες (ελέγχεται από ένα θερμόμετρο). Η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση κυρίως γυάλινων σκευών - πιάτων Petri, πιπέττες, σπάτουλες (τυλιγμένες σε χαρτί), καθώς και δοκιμαστικούς σωλήνες και φιάλες. Αυτή η τεχνική είναι αξιόπιστη - οι μη σποριακές και σποριακές μορφές μικροοργανισμών πεθαίνουν. Τυλιγμένο σε χαρτί και αποστειρωμένο, το υλικό μπορεί να αποθηκευτεί.

4. Αποστείρωση ρέοντος ατμού. Διεξήχθη εν θερμώ υγρός αέραςστη συσκευή Koch. Η συσκευή Koch (λέβητας) είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος, ο οποίος μπορεί να είναι στα πόδια και να καλύπτεται με λινέλαιο. Στη συσκευή χύνεται τόσο πολύ νερό ώστε να μην φτάσει στην προεξοχή, πάνω στην οποία τοποθετείται ένας μεταλλικός κύκλος με τρύπες και από πάνω τοποθετείται το προς αποστείρωση υλικό. Η συσκευή είναι ερμητικά κλεισμένη με ένα κωνικό καπάκι με μια τρύπα στη μέση για τη διαφυγή του ατμού και θερμαίνεται σε φωτιά. Όταν το νερό βράσει, ζεστοί υδρατμοί με θερμοκρασία περίπου 100 ºС θα «ρέουν» σε ένα ισχυρό ρεύμα από την τρύπα στο καπάκι. Από αυτή τη στιγμή σημειώνεται ο χρόνος έναρξης της στείρωσης. Η αποστείρωση με ρέοντα ατμό διαρκεί από 45 λεπτά έως 1,5 ώρα, ανάλογα με τον όγκο του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί. Αποστειρώστε τα θρεπτικά μέσα που δεν μπορούν να θερμανθούν πάνω από 100 ºС, για παράδειγμα, MPG (σε θερμοκρασίες πάνω από 100 ºС υγροποιείται και δεν στερεοποιείται). Αυτή η μέθοδος αποστείρωσης δεν είναι απολύτως αξιόπιστη - μόνο οι φυτικές μορφές μικροοργανισμών σκοτώνονται εντελώς, αλλά τα σπόρια διατηρούνται. Για να επιτευχθεί πλήρης αποστείρωση των μέσων στη συσκευή Koch, χρησιμοποιείται κλασματική αποστείρωση.

5. Αποστείρωση με ατμό υπό πίεση (αυτόκαυστο).Πραγματοποιείται με κορεσμένο υδρατμό σε αυτόκλειστο. Το αυτόκλειστο διατίθεται σε διάφορα σχέδια. Το κάθετο αυτόκλειστο είναι ένας τεράστιος λέβητας διπλού τοιχώματος, που περιβάλλεται εξωτερικά από ένα μεταλλικό περίβλημα, με ένα βαρύ αρθρωτό καπάκι που είναι σφιχτά βιδωμένο στον λέβητα. Στο κάτω μέρος του λέβητα υπάρχει μια χοάνη και μια βρύση μέσω της οποίας χύνεται νερό στον ελεύθερο χώρο μεταξύ του εσωτερικού λέβητα και του περιβλήματος. Το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί τοποθετείται στο κάτω μέρος του λέβητα, το καπάκι βιδώνεται σφιχτά και η ηλεκτρική θέρμανση είναι ενεργοποιημένη. Όταν το νερό βράζει, ο ατμός περνά στον εσωτερικό λέβητα. Η πίεση στο αυτόκλειστο αυξάνεται και ταυτόχρονα αυξάνεται η θερμοκρασία. Όταν το μανόμετρο δείχνει ότι η πίεση στο λέβητα έχει φτάσει την καθορισμένη τιμή, σημειώστε την ώρα έναρξης της αποστείρωσης. Η πίεση διατηρείται σε ένα ορισμένο επίπεδο χρησιμοποιώντας μια βαλβίδα ασφαλείας.

Συνήθως στην εργαστηριακή πρακτική, η αποστείρωση υπό πίεση πραγματοποιείται σε 1,5-2 atm και θερμοκρασία περίπου 115-120 ºС για

20-30 λεπτά. Μετά τη λήξη του χρόνου αποστείρωσης, η θέρμανση διακόπτεται, η βαλβίδα ατμού ανοίγει και ο ατμός απελευθερώνεται. Τα θρεπτικά μέσα MPB, MPA, γυάλινα σκεύη με νερό αποστειρώνονται με ατμό υπό πίεση. σάλτσα, χειρουργικά εργαλεία κ.λπ. Το αυτόκλειστο είναι μια γρήγορη και αξιόπιστη μέθοδος αποστείρωσης, η οποία σκοτώνει όλες τις μορφές μικροοργανισμών, ακόμη και τα πιο ανθεκτικά σπόρια.

6. Παστερίωση.Αυτή η μέθοδος μερικής αποστείρωσης πήρε το όνομά της από τον Γάλλο επιστήμονα L. Pasteur που την πρότεινε. Η μέθοδος είναι ότι το υγρό που χύνεται σε ένα αποστειρωμένο δοχείο θερμαίνεται σε λουτρό νερού σε θερμοκρασία 60-90 ºС για

10-30 λεπτά. Κατάλληλο για υγρά μέσα που αλλάζουν φυσικοχημικά χαρακτηριστικάσε υψηλές θερμοκρασίες. Παστεριώνουν γάλα, κρέμα γάλακτος, κρασί, μπύρα, χυμούς κλπ. Παράλληλα διατηρούνται οι βιταμίνες και η γεύση των προϊόντων. Τα παστεριωμένα προϊόντα δεν μπορούν να αποθηκευτούν για μεγάλα χρονικά διαστήματα, αφού με αυτή τη μέθοδο αποστείρωσης πεθαίνουν μόνο φυτικές μορφές μικροοργανισμών, ενώ παραμένουν τα σπόρια. Στην εργαστηριακή πρακτική, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται κυρίως για τον διαχωρισμό ειδών που σχηματίζουν σπόρους από αυτά που δεν σχηματίζουν σπόρους.

7. Κλασματική αποστείρωση. Βασίζεται στην επεξεργασία του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί σε διάφορα στάδια. Το κλασματικό μπορεί να είναι βρασμός ή αποστείρωση με ρέοντα ατμό σε μια συσκευή Koch. Τυπικά, η αποστείρωση πραγματοποιείται για 3 ημέρες, 30 λεπτά καθημερινά, χρησιμοποιώντας μία από τις υποδεικνυόμενες μεθόδους και κατά τη διάρκεια των διαλειμμάτων το μέσο αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτό γίνεται για να προκληθεί η ανάπτυξη των σπορίων σε φυτικές μορφές και η καταστροφή τους κατά τις επόμενες επεξεργασίες, γεγονός που αυξάνει την αξιοπιστία αυτών των τεχνικών.

8. Τυνδαλισμός.Πρόκειται για ένα είδος κλασματικής αποστείρωσης (κλασματική παστερίωση). Η τεχνική πήρε το όνομά της από τον Άγγλο επιστήμονα D. Tyndall που την πρότεινε. Πραγματοποιείται σε υδατόλουτρο σε θερμοκρασία 56-58 ºС για 1 ώρα, επαναλαμβάνεται 5-7 φορές μετά από 24 ώρες. Στα μεσοδιαστήματα μεταξύ της θέρμανσης, το υλικό διατηρείται σε θερμοκρασία δωματίου. Η τυνδαλοποίηση πραγματοποιείται σε θρεπτικά μέσα που είναι φτωχά σε μικροοργανισμούς και περιέχουν επίσης ουσίες που καταστρέφονται και μετουσιώνονται εύκολα σε θερμοκρασίες άνω των 60 ºC (πρωτεΐνες, βιταμίνες). Πρόκειται για ορό αίματος, αυγά κλπ. Ως αποτέλεσμα της τυνδαλοποίησης επιτυγχάνεται η πλήρης καταστροφή των μικροοργανισμών.