Φούρνος Pasteur. Η επίδραση των φυσικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς. Μηχανική αποστείρωση με χρήση βακτηριακών φίλτρων

Χρήση φυσικών και χημικών παραγόντων.

Οι παράγοντες φυσικής αποστείρωσης περιλαμβάνουν την υψηλή θερμοκρασία, τις υπεριώδεις ακτίνες, την ιονίζουσα ακτινοβολία και τα βακτηριακά φίλτρα.

Στην εργαστηριακή πρακτική, η αποστείρωση με τη χρήση υψηλής θερμοκρασίας επιτυγχάνεται με πυγμή σε φλόγα, θέρμανση με ξηρή θερμότητα, βρασμό, θεραπεία με ατμό ή ατμό υπό πίεση υπό πίεση.

Ρύζι. 1. Καυστήρας Bunsen. Ρύζι. 2. Καυστήρας Teklu. Ρύζι. 3. Κατανομή θερμοκρασίας στη φλόγα του καυστήρα.

Ρύζι. 4. Ντουλάπι στεγνώματος.

Ρύζι. 5. Λουτρά νερού: 1 - με σταθερή ροή νερού. 2 - κυλινδρικό? 3 - στρογγυλό κάτω μέρος. Ρύζι. 6. Αποστειρωτής με ροή ατμού.

Η αποστείρωση της φλόγας είναι μια απλή και αξιόπιστη μέθοδος για την επεξεργασία διαφόρων αντικειμένων ανθεκτικών στη θερμότητα: βελόνες, βακτηριακούς βρόχους, μικροβιολογικές σπάτουλες, πιπέτες, διαφάνειες και γυαλιά κάλυψης, τσιμπιδάκια κλπ. Για το σκοπό αυτό, καυστήρες αερίου του συστήματος Bunsen (Εικόνα 1) ή Teklu (Εικ. 2). Ο καυστήρας Bunsen είναι εξοπλισμένος με μια κινητή βάση, μετακινώντας την οποία μπορείτε να ρυθμίσετε την πρόσβαση αέρα. Στον καυστήρα Teklu, η ποσότητα του εισερχόμενου αέρα ρυθμίζεται με τη μετακίνηση του δίσκου (Εικόνα 2,1), η ποσότητα αερίου ρυθμίζεται από μια βίδα (Εικόνα 2, 2). Σε περίπτωση απουσίας ή ανεπαρκούς πρόσβασης αέρα, σχηματίζεται μια καπνιστή φλόγα. Η πρόσβαση αέρα στον καυστήρα ρυθμίζεται μέχρι μπλε φλόγα. Μια κατά προσέγγιση κατανομή θερμοκρασίας στη φλόγα του καυστήρα φαίνεται στο Σχ. 3.

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα πραγματοποιείται σε φούρνο ξήρανσης (φούρνος Pasteur). Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση μόνο ξηρών αντικειμένων - εργαστηριακά γυάλινα σκεύη κλπ. Το ντουλάπι ξήρανσης (Εικόνα 4) είναι ένα μικρό ντουλάπι σιδήρου με διπλούς τοίχους, μεταξύ των οποίων εισάγεται ένα υλικό με θέρμανση θερμότητας (αμίαντος, γυάλινο μαλλί). Οι καθαρά πλυμένοι δοκιμαστικοί σωλήνες και οι φιάλες σφραγίζονται με βαμβακερά πώματα. Οι πιπέτες, το βαμβακερό μαλλί, η γάζα είναι τυλιγμένα σε χαρτί και τοποθετούνται στα ράφια του υπουργικού συμβουλίου, έτσι ώστε τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωμένα να μην αγγίζουν τους καυτές τοίχους της συσκευής και τον θερμό αέρα να διεισδύει ελεύθερα μεταξύ τους. Η αποστείρωση σε στεγνωτήριο διαρκεί 45 λεπτά - 1 ώρα στους ° 160-170 ° Σε θερμοκρασίες άνω των 175 °, το χαρτί και το βαμβάκι καίγονται.

Το βράσιμο σε νερό καταστρέφει τις μη σποριακές μορφές μικροβίων σε 1-3 λεπτά. , βελόνες, μαχαίρια, μικρά εργαλεία κ.λπ. μπορούν να βράσουν σε μεταλλικούς αποστειρωτές ακόμα και σε κανονική κατσαρόλα. Προσθήκη μικρής ποσότητας διττανθρακικού νατρίου (όξινο ανθρακικό νάτριο) στο νερό

Η επίδραση της θερμοκρασίας στους μικροοργανισμούς.

Θερμοκρασία - σημαντικος ΠΑΡΑΓΟΝΤΑΣ, επηρεάζοντας τη ζωή των μικροοργανισμών. Για τους μικροοργανισμούς υπάρχουν ελάχιστες, βέλτιστες και μέγιστες θερμοκρασίες. Αριστος– η θερμοκρασία στην οποία συμβαίνει ο πιο εντατικός πολλαπλασιασμός των μικροβίων. Ελάχιστο– θερμοκρασία κάτω από την οποία οι μικροοργανισμοί δεν παρουσιάζουν ζωτική δραστηριότητα. Ανώτατο όριο– η θερμοκρασία πάνω από την οποία συμβαίνει ο θάνατος των μικροοργανισμών.

Σε σχέση με τη θερμοκρασία, διακρίνονται 3 ομάδες μικροοργανισμών:

2. μεσόφιλοι.βέλτιστη - 30-37°C. Ελάχιστο - 15-20°C.Ανώτατο όριο - 43-45°C.Ζουν σε σώματα θερμόαιμων ζώων. Αυτά περιλαμβάνουν τους περισσότερους παθογόνους και ευκαιριακούς μικροοργανισμούς.

3. Θερμόφιλοι.βέλτιστη - 50-60°C.Ελάχιστο - 45°C.Ανώτατο όριο - 75°С. Ζουν σε θερμές πηγές και συμμετέχουν στις διαδικασίες αυτοθέρμανσης της κοπριάς και των σιτηρών. Δεν είναι σε θέση να αναπαραχθούν στο σώμα των θερμόαιμων ζώων, επομένως δεν έχουν ιατρική σημασία.

Ευνοϊκή δράσηβέλτιστη θερμοκρασία χρησιμοποιείται στην ανάπτυξη μικροοργανισμών για σκοπούς εργαστηριακής διάγνωσης, παρασκευής εμβολίων και άλλων φαρμάκων.

Δράση πέδησηςχαμηλές θερμοκρασίες χρησιμοποιείται για αποθήκευση προϊόντα και καλλιέργειες μικροοργανισμών σε ψυγείο. Η χαμηλή θερμοκρασία σταματά τις διεργασίες σήψης και ζύμωσης. Ο μηχανισμός δράσης των χαμηλών θερμοκρασιών είναι η αναστολή των μεταβολικών διεργασιών στο κύτταρο και η μετάβαση σε μια κατάσταση αναστολής εμψύχωσης.

Επιζήμια επίδρασηυψηλή θερμοκρασία (πάνω από τη μέγιστη) χρησιμοποιείται για αποστείρωση . Μηχανισμόςδράσεις – μετουσίωση πρωτεΐνης (ένζυμα), βλάβη ριβοσωμάτων, διάρρηξη του οσμωτικού φραγμού. Τα ψυχρόφιλα και τα μεσόφιλα είναι πιο ευαίσθητα στις υψηλές θερμοκρασίες. ειδικός βιωσιμότηταπροβολή διαφωνίεςβακτήρια.

Η επίδραση της ενέργειας ακτινοβολίας και των υπερήχων στους μικροοργανισμούς.

Υπάρχουν μη ιονίζουσες (υπεριώδεις και υπέρυθρες ακτίνες ηλιακού φωτός) και ιονίζουσα ακτινοβολία (ακτίνες g και ηλεκτρόνια υψηλής ενέργειας).

Η ιονίζουσα ακτινοβολία έχει ισχυρή διεισδυτική δράση και βλάπτει το κυτταρικό γονιδίωμα. Μηχανισμόςκαταστροφική επίδραση: ιονισμός μακρομόρια, η οποία συνοδεύεται από την ανάπτυξη μεταλλάξεων ή κυτταρικού θανάτου. Επιπλέον, οι θανατηφόρες δόσεις για τους μικροοργανισμούς είναι υψηλότερες από ό,τι για τα ζώα και τα φυτά.

Μηχανισμόςκαταστροφικό αποτέλεσμα ακτίνες UV: σχηματισμός διμερών θυμίνης σε ένα μόριο DNA , που σταματά την κυτταρική διαίρεση και είναι η κύρια αιτία θανάτου τους. Η καταστροφική επίδραση των ακτίνων UV είναι πιο έντονη για τους μικροοργανισμούς παρά για τα ζώα και τα φυτά.

Υπέρηχος(ηχητικά κύματα 20 χιλιάδες Hz) έχει βακτηριοκτόνο δράση. Μηχανισμός: εκπαίδευση στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου κοιλότητες σπηλαίωσης , τα οποία είναι γεμάτα με υγρό ατμό και σε αυτά προκύπτει πίεση έως και 10 χιλιάδες atm. Αυτό οδηγεί στο σχηματισμό ριζών υδροξυλίου με υψηλή αντίδραση, καταστροφή κυτταρικών δομών και αποπολυμερισμό οργανιδίων, μετουσίωση μορίων.

Χρησιμοποιούνται ιονίζουσες ακτινοβολίες, υπεριώδεις ακτίνες και υπέρηχοι για αποστείρωση.

Επίδραση της ξήρανσης στους μικροοργανισμούς.

Το νερό είναι απαραίτητο για τη φυσιολογική λειτουργία των μικροοργανισμών. Η μείωση της περιβαλλοντικής υγρασίας οδηγεί στη μετάβαση των κυττάρων σε κατάσταση ηρεμίας και στη συνέχεια σε θάνατο. Μηχανισμόςβλαβερές συνέπειες της ξήρανσης: αφυδάτωση του κυτταροπλάσματος και μετουσίωση πρωτεϊνών.

Οι παθογόνοι μικροοργανισμοί είναι πιο ευαίσθητοι στην ξήρανση: παθογόνα γονόρροια, μηνιγγίτιδα, τυφοειδής πυρετός, δυσεντερία, σύφιλη κ.λπ. Τα βακτηριακά σπόρια, οι κύστεις των πρωτόζωων, τα βακτήρια που προστατεύονται από τη βλέννα των πτυέλων (βάκιλοι της φυματίωσης) είναι πιο ανθεκτικά.

Στην πράξηχρησιμοποιείται ξήρανση για κονσερβοποίηση κρέας, ψάρι, λαχανικά, φρούτα, κατά την προμήθεια φαρμακευτικά βότανα .

Στέγνωμα από παγωμένη κατάσταση υπό κενό – λυοφιλοποίηση ή λυοφιλίωση.Χρησιμοποιείται για τη διατήρηση των καλλιεργειώνμικροοργανισμοί που σε αυτή την κατάσταση για χρόνια (10-20 χρόνια) δεν χάνουν τη βιωσιμότητά τους και δεν αλλάζουν τις ιδιότητές τους. Οι μικροοργανισμοί βρίσκονται σε κατάσταση αναστολής κινούμενης εικόνας. Χρησιμοποιείται λυοφιλοποίηση στην παραγωγή φαρμάκωναπό ζωντανούς μικροοργανισμούς: ευβιοτικά, φάγοι, ζωντανά εμβόλιακατά της φυματίωσης, της πανώλης, της τουλαραιμίας, της βρουκέλλωσης, της γρίπης κ.λπ.

Η επίδραση των χημικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς.

Οι χημικές ουσίες επηρεάζουν τους μικροοργανισμούς με διαφορετικούς τρόπους. Αυτό εξαρτάται από τη φύση, τη συγκέντρωση και τον χρόνο δράσης των χημικών ουσιών. Αυτοί μπορούν διεγείρουν την ανάπτυξη(χρησιμοποιείται ως πηγές ενέργειας), παρέχετε μικροβιοκτόνο, μικροθεραπευτικό, μεταλλαξιογόνο δράσηή μπορεί να είναι αδιάφορο για ζωτικές διαδικασίες

Για παράδειγμα: ένα διάλυμα γλυκόζης 0,5-2% είναι πηγή τροφής για τα μικρόβια και ένα διάλυμα 20-40% έχει ανασταλτική δράση.

Για τους μικροοργανισμούς είναι απαραίτητο Βέλτιστη τιμή pH του περιβάλλοντος. Για τα περισσότερα συμβιόνια και παθογόνα ανθρώπινων ασθενειών - ένα ουδέτερο, ελαφρώς αλκαλικό ή ελαφρώς όξινο περιβάλλον. Καθώς το pH αυξάνεται, συχνά μετατοπίζεται στην όξινη πλευρά και η ανάπτυξη των μικροοργανισμών σταματά. Και μετά έρχεται ο θάνατος. Μηχανισμός:μετουσίωση των ενζύμων με ιόντα υδροξυλίου, διαταραχή του οσμωτικού φραγμού της κυτταρικής μεμβράνης.

Χημικές ουσίες που έχουν αντιμικροβιακή δράση, που χρησιμοποιείται για απολύμανση, αποστείρωση και συντήρηση.

Η επίδραση των βιολογικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς.

Οι βιολογικοί παράγοντες είναι διάφορες μορφές επιρροής των μικροβίων μεταξύ τους, καθώς και η επίδραση ανοσολογικών παραγόντων (λυσοζύμη, αντισώματα, αναστολείς, φαγοκυττάρωση) στους μικροοργανισμούς κατά την παραμονή τους στον μακροοργανισμό. Συνύπαρξη διαφόρων οργανισμών - συμβίωση. Διακρίνονται τα εξής: μορφέςσυμβίωση.

Αμοιβαιότητα- Μια μορφή συγκατοίκησης όπου και οι δύο εταίροι λαμβάνουν αμοιβαία οφέλη (για παράδειγμα, βακτηρίδια οζιδίων και όσπρια).

Ανταγωνισμός- μια μορφή σχέσης όταν ένας οργανισμός προκαλεί βλάβη (ακόμα και θάνατο) σε έναν άλλο οργανισμό με τα μεταβολικά του προϊόντα (οξέα, αντιβιοτικά, βακτηριοσίνες), λόγω της καλύτερης προσαρμοστικότητας στις περιβαλλοντικές συνθήκες, μέσω άμεσης καταστροφής (για παράδειγμα, φυσιολογική εντερική μικροχλωρίδα και παθογόνα εντερικές λοιμώξεις).

Μεταβίωση– μια μορφή συμβίωσης όταν ένας οργανισμός συνεχίζει τη διαδικασία που προκαλεί ο άλλος (χρησιμοποιεί τα απόβλητά του) και απελευθερώνει το περιβάλλον από αυτά τα προϊόντα. Επομένως, δημιουργούνται συνθήκες για περαιτέρω ανάπτυξη (βακτηρίδια νιτροποίησης και αμμωνίας).

Δορυφορισμός– ο ένας από τους συγκατοίκους διεγείρει την ανάπτυξη του άλλου (για παράδειγμα, η μαγιά και η σαρκίνα παράγουν ουσίες που προάγουν την ανάπτυξη άλλων βακτηρίων που απαιτούν περισσότερα θρεπτικά συστατικά).

Κομμενσαλισμός– ένας οργανισμός ζει σε βάρος ενός άλλου (ωφελείται) χωρίς να του προκαλεί βλάβη (για παράδειγμα, το E. coli και το ανθρώπινο σώμα).

Αρπακτικά– ανταγωνιστικές σχέσεις μεταξύ οργανισμών, όταν κάποιος συλλαμβάνει, απορροφά και αφομοιώνει έναν άλλον (για παράδειγμα, η εντερική αμοιβάδα τρέφεται με εντερικά βακτήρια).

Αποστείρωση.

Αποστείρωσηείναι η διαδικασία της πλήρους καταστροφής όλων των βιώσιμων μορφών μικροβίων σε ένα αντικείμενο, συμπεριλαμβανομένων των σπορίων.

Υπάρχουν 3 ομάδες μεθόδων αποστείρωσης: φυσική, χημική και φυσικοχημική.Φυσικές μέθοδοι:αποστείρωση με υψηλή θερμοκρασία, ακτινοβολία UV, ιονίζουσα ακτινοβολία, υπερηχογράφημα, διήθηση μέσω αποστειρωμένων φίλτρων. Χημικές μέθοδοι– χρήση χημικών, καθώς και αποστείρωση αερίου. Φυσικοχημικές μέθοδοι– κοινή χρήση φυσικών και χημικών μεθόδων. Για παράδειγμα, υψηλή θερμοκρασία και αντισηπτικά.

Αποστείρωση υψηλής θερμοκρασίας .

Αυτή η μέθοδος περιλαμβάνει: 1) αποστείρωση με ξηρή θερμότητα; 2) αποστείρωση με ατμό υπό πίεση; 3) ρέοντας αποστείρωση ατμού; 4) εξαγορά και παστερίωση; 5) διαπύρωση; 6) βρασμός.

Αποστείρωση με ξηρή θερμότητα.

Η μέθοδος βασίζεταισχετικά με τη βακτηριοκτόνο δράση του αέρα που θερμαίνεται στους 165-170°C για 45 λεπτά.

Εξοπλισμός: φούρνος ξηρής θερμότητας (φούρνος Pasteur). Ο φούρνος Pasteur είναι ένα μεταλλικό ντουλάπι με διπλά τοιχώματα, επενδυμένο εξωτερικά με ένα υλικό που δεν μεταφέρει τη θερμότητα (αμίαντο). Ο θερμός αέρας κυκλοφορεί στο χώρο μεταξύ των τοίχων και εξέρχεται από ειδικά ανοίγματα. Κατά την εργασία, είναι απαραίτητο να παρακολουθείτε αυστηρά την απαιτούμενη θερμοκρασία και τον χρόνο αποστείρωσης. Εάν η θερμοκρασία είναι υψηλότερη, τότε θα υπάρξει απανθράκωση των βαμβακερών βυσμάτων και του χαρτιού στο οποίο είναι τυλιγμένα τα πιάτα και σε χαμηλότερη θερμοκρασία απαιτείται μεγαλύτερη αποστείρωση. Μετά την ολοκλήρωση της αποστείρωσης, το ντουλάπι ανοίγει μόνο αφού κρυώσει, διαφορετικά τα γυάλινα σκεύη μπορεί να ραγίσουν λόγω ξαφνικής αλλαγής θερμοκρασίας.

α) αντικείμενα από γυαλί, μέταλλο, πορσελάνη, πιάτα, τυλιγμένα σε χαρτί και κλεισμένα με πώματα από βαμβακερή γάζα για διατήρηση της στειρότητας (165-170°C, 45 λεπτά).

β) ανθεκτικά στη θερμότητα φάρμακα σε σκόνη - τάλκης, λευκή άργιλος, οξείδιο ψευδαργύρου (180-200°C, 30-60 λεπτά).

γ) ορυκτά και φυτικά έλαια, λίπη, λανολίνη, βαζελίνη, κερί (180-200°C, 20-40 λεπτά).

Αποστείρωση ατμού υπό πίεση.

Η πιο αποτελεσματική και ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος στη μικροβιολογική και κλινική πράξη.

Η μέθοδος βασίζεταισχετικά με την υδρολυτική επίδραση του ατμού υπό πίεση στις πρωτεΐνες του μικροβιακού κυττάρου. Η συνδυασμένη δράση υψηλής θερμοκρασίας και ατμού εξασφαλίζει την υψηλή απόδοση αυτής της αποστείρωσης, η οποία σκοτώνει τα πιο επίμονα βακτήρια σπορίων.

Εξοπλισμός - Autoclave.Το αυτόκλειστο αποτελείται από 2 μεταλλικούς κυλίνδρους που εισάγονται ο ένας μέσα στον άλλο με ένα ερμητικά σφραγισμένο καπάκι βιδωμένο με βίδες. Ο εξωτερικός λέβητας είναι ένας θάλαμος νερού-ατμού, ο εσωτερικός λέβητας είναι ένας θάλαμος αποστείρωσης. Υπάρχει μανόμετρο, βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, βαλβίδα ασφαλείας και γυαλί μετρητή νερού. Στην κορυφή του θαλάμου αποστείρωσης υπάρχει μια οπή μέσω της οποίας διέρχεται ατμός από τον θάλαμο νερού-ατμού. Το μανόμετρο χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της πίεσης στο θάλαμο αποστείρωσης. Υπάρχει μια ορισμένη σχέση μεταξύ πίεσης και θερμοκρασίας: 0,5 atm - 112°C, 1-01,1 atm - 119-121°C, 2 atm - 134°C. Βαλβίδα ασφαλείας – για προστασία από υπερβολική πίεση. Όταν η πίεση ανέβει πάνω από την καθορισμένη τιμή, η βαλβίδα ανοίγει και απελευθερώνει περίσσεια ατμού. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ.Το νερό χύνεται στο αυτόκλειστο, η στάθμη του οποίου παρακολουθείται χρησιμοποιώντας ένα γυαλί μετρητή νερού. Το υλικό τοποθετείται στον θάλαμο αποστείρωσης και το καπάκι βιδώνεται σφιχτά. Η βαλβίδα ατμού είναι ανοιχτή. Ανοίξτε τη θέρμανση. Αφού βράσει το νερό, η βρύση κλείνει μόνο όταν έχει εκτοπιστεί όλος ο αέρας (ο ατμός ρέει σε συνεχές ισχυρό ξηρό ρεύμα). Εάν η βρύση είναι κλειστή νωρίτερα, οι μετρήσεις μετρητή πίεσης δεν θα αντιστοιχούν στην επιθυμητή θερμοκρασία. Μετά το κλείσιμο της βρύσης, η πίεση στον λέβητα αυξάνεται σταδιακά. Η έναρξη της αποστείρωσης είναι η στιγμή που η βελόνα του μετρητή πίεσης δείχνει την οριακή πίεση. Μετά τη λήξη της περιόδου αποστείρωσης, σταματήστε τη θέρμανση και ψύξτε το αυτόκλειστο έως ότου η βελόνα του μανόμετρου επιστρέψει στο 0. Εάν απελευθερώσετε ατμό νωρίτερα, το υγρό μπορεί να βράσει λόγω ταχείας αλλαγής της πίεσης και να σπρώξει τα βύσματα (η στειρότητα είναι μειωμένη). Όταν η βελόνα του μανόμετρου επιστρέψει στο 0, ανοίξτε προσεκτικά τη βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, απελευθερώστε τον ατμό και στη συνέχεια αφαιρέστε τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν. Εάν ο ατμός δεν απελευθερωθεί αφού η βελόνα επιστρέψει στο 0, το νερό μπορεί να συμπυκνωθεί και να βρέξει τα βύσματα και το υλικό που αποστειρώνεται (θα μειωθεί η στειρότητα).

Λειτουργία υλικού και αποστείρωσης:

α) γυαλί, μέταλλο, Κίνα, λινά, καουτσούκ και φελλό, προϊόντα από καουτσούκ, κυτταρίνη, ξύλο, σάλτσα(βαμβακερό μαλλί, γάζα) (119 - 121 ° C, 20-40 λεπτά)).

β) φυσιολογική λύση, διαλύματα για ενέσεις, οφθαλμικές σταγόνες, απεσταγμένο νερό, απλά θρεπτικά μέσα-MPB, MPA (119-121 ° C, 20-40 λεπτά).

γ) ορυκτά και φυτικά έλαια σε ερμητικά σφραγισμένα αγγεία (119-121 ° C, 120 λεπτά).

Αποστείρωση με ροή ατμού.

Η μέθοδος βασίζεταιστο βακτηριοκτόνο αποτέλεσμα του ατμού (100 ° C) έναντι μόνο των βλαστικών κυττάρων.

Εξοπλισμός- ένα αυτόκλειστο με ένα ξεβιδωμένο καπάκι ή Συσκευή Koch.

Συσκευή Koch -Αυτός είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος με διπλό πυθμένα, ο χώρος στον οποίο είναι 2/3 γεμάτο με νερό. Το καπάκι έχει τρύπες για ένα θερμόμετρο και για ατμό να δραπετεύσει. Το εξωτερικό τοίχωμα είναι επενδεδυμένο με ένα υλικό που διεξάγει θερμότητα άσχημα (λινέλαιο, αμίαντος). Η έναρξη της αποστείρωσης είναι ο χρόνος από τη βρασμό του νερού και την είσοδο του ατμού στον θάλαμο αποστείρωσης.

Υλικό και τρόπος αποστείρωσης.Αυτή η μέθοδος αποστειρώνει το υλικό που δεν αντέχει σε θερμοκρασίες πάνω από 100°C: Τα θρεπτικά μέσα με βιταμίνες, υδατάνθρακες (Hiss, Endo, Ploskirev, Levin Media), ζελατίνη, γάλα.

Στους 100 ° C, τα σπόρια δεν πεθαίνουν, έτσι η αποστείρωση πραγματοποιείται αρκετές φορές - κλασματική αποστείρωση - 20-30 λεπτά καθημερινά για 3 ημέρες.

Στα διαστήματα μεταξύ των αποστειρώσεων, το υλικό διατηρείται θερμοκρασία δωματίουπροκειμένου τα σπόρια να βλαστήσουν σε βλαστικές μορφές. Θα πεθάνουν κατά την επόμενη θέρμανση στους 100°C.

Τυνδαλοποίηση και παστερίωση.

Tyndalization -μέθοδος κλασματικής αποστείρωσης σε θερμοκρασίες κάτω των 100°C. Χρησιμοποιείται για την αποστείρωση αντικειμένων, που δεν αντέχουν τους 100°C: ορός, ασκιτικό υγρό, βιταμίνες . Η τυνδαλοποίηση πραγματοποιείται σε υδατόλουτρο στους 56°C για 1 ώρα για 5-6 ημέρες.

Παστερίωση - μερικός αποστείρωση (δεν σκοτώνονται τα σπόρια), η οποία πραγματοποιείται σε σχετικά χαμηλή θερμοκρασία μια φορά. Η παστερίωση πραγματοποιείται στους 70-80°C, 5-10 λεπτά ή στους 50-60°C, 15-30 λεπτά. Η παστερίωση χρησιμοποιείται για αντικείμενα που χάνουν την ποιότητά τους σε υψηλές θερμοκρασίες. χρήση Για μερικοί τρόφιμα: γάλα, κρασί, μπύρα . Αυτό δεν βλάπτει την εμπορική τους αξία, αλλά τα σπόρια παραμένουν βιώσιμα, επομένως αυτά τα προϊόντα πρέπει να φυλάσσονται στο ψυγείο.

Είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος διπλού τοιχώματος που καλύπτεται εξωτερικά με μεταλλικό περίβλημα. Είναι ερμητικά σφραγισμένο με ένα ογκώδες καπάκι χρησιμοποιώντας πολλές βίδες. Είναι εξοπλισμένο με μανόμετρο με βαλβίδα ασφαλείας και βαλβίδα ατμού.

Πριν από την αποστείρωση, το αποσταγμένο νερό χύνεται στο αυτόκλειστο μέσω χοάνης με γυαλί μέτρησης νερού μέχρι τη γραμμή που υποδεικνύεται στο περίβλημα. Το υλικό για αποστείρωση φορτώνεται στον θάλαμο αποστείρωσης, κλειστό σφιχτά με ένα καπάκι, βιδωμένο και η πηγή θέρμανσης είναι ενεργοποιημένη. Σε αυτή την περίπτωση, η βαλβίδα ατμού παραμένει ανοιχτή. Ο ατμός που παράγεται κατά το βρασμό περνά ανάμεσα στα τοιχώματα του αυτόκλειστου και εισέρχεται στον θάλαμο μέσω των οπών στο εσωτερικό τοίχωμα. Κατά τη θέρμανση, ο αέρας εξέρχεται πρώτα από το αυτόκλειστο μέσω της βαλβίδας ατμού και μετά ο ατμός. Η απελευθέρωση ενός συνεχούς ρεύματος ξηρού ατμού υποδεικνύει πλήρη μετατόπιση του αέρα από το αυτόκλειστο: η βρύση είναι κλειστή και από εκείνη τη στιγμή η πίεση στο αυτόκλειστο αρχίζει να αυξάνεται σταδιακά, η βελόνα στο μετρητή πίεσης αυξάνεται. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που η βελόνα του μανόμετρου φτάνει στην επιθυμητή πίεση.

Εικ.3

Η ένδειξη του μανόμετρου αντιστοιχεί σε μια συγκεκριμένη θερμοκρασία ατμού στο αυτόκλειστο: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.

Το υλικό σε αυτόκλειστο αποστειρώνεται συχνότερα στα 0,1 MPa για 20-30 λεπτά. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε την πηγή θέρμανσης (η βελόνα του μανόμετρου φτάνει σταδιακά στο μηδέν). Μετά από αυτό, ανοίξτε τη βαλβίδα ατμού και απελευθερώστε τον υπόλοιπο ατμό. Στη συνέχεια, ξεβιδώστε προσεκτικά το καπάκι και ανοίξτε το. Μετά την πλήρη ψύξη, αφαιρέστε το αποστειρωμένο υλικό.

Ένα αυτόκλειστο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αποστείρωση πιάτων, οργάνων, μέσων καλλιέργειας (εκτός από ζελατίνη και υλικά με υδατάνθρακες), επιδέσμων κ.λπ. Όταν εργάζεστε, πρέπει να ακολουθείτε τους κανόνες ασφαλείας. Τα άτομα που διαθέτουν πιστοποιητικό για το δικαίωμα χρήσης αυτόκλειστου επιτρέπεται να εργάζονται. Η δυνατότητα συντήρησης του αυτόκλειστου ελέγχεται από την επιθεώρηση του λέβητα.

Η συσκευή Koch (Εικ. 4) είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος επενδεδυμένος εξωτερικά με υλικό (λινέλαιο, αμίαντος) που δεν μεταφέρει καλά τη θερμότητα. Το νερό χύνεται στον πάτο και το αποστειρωτικό υλικό τοποθετείται στην κορυφή της βάσης. Η συσκευή κλείνει με ένα κωνικό καπάκι, το οποίο έχει οπές για θερμόμετρο και έξοδο ατμού. Στο κάτω μέρος υπάρχει βρύση για την αποστράγγιση του νερού. Η αποστείρωση πραγματοποιείται με ρέοντα ατμό στους 100 °C για 30-60 λεπτά. Σε αυτόν τον τρόπο, τα φυτικά κύτταρα των μορφών μικροβίων που σχηματίζουν σπόρους και που δεν σχηματίζουν σπόρια πεθαίνουν. Η κλασματική αποστείρωση (τρεις φορές) για 30-60 λεπτά σε τρεις ημέρες με μεσοδιάστημα 18-20 ωρών σάς επιτρέπει να δημιουργήσετε συνθήκες για τη βλάστηση των σπορίων σε βλαστικά κύτταρα και να απαλλαγείτε από αυτά. Στα χρονικά διαστήματα μεταξύ της αποστείρωσης, τα σπόρια βλασταίνουν και πεθαίνουν κατά τη διάρκεια της επακόλουθης θέρμανσης. Η συσκευή Koch αποστειρώνει εκείνα τα υλικά που δεν αντέχουν σε θερμοκρασίες πάνω από 100 °C (ζελατίνη, γάλα, υδατάνθρακες κ.λπ.).

Τα πρωτεϊνικά μέσα και ο ορός αίματος που δεν μπορούν να ανεχθούν θερμοκρασίες 100 °C αποστειρώνονται κλασματικά στους 56-58 °C σε λουτρό νερού.

Ντουλάπι στεγνώματος(Φούρνος Pasteur) (Εικ. 5) είναι ένα μεταλλικό ντουλάπι διπλού τοιχώματος καλυμμένο με αμίαντο από πάνω. Ο επάνω τοίχος έχει τρύπες για θερμόμετρο και αερισμό. Ο θερμαινόμενος αέρας ανεβαίνει από κάτω μεταξύ των τοίχων και μέσω του άνω ανοίγματος εισέρχεται στο ντουλάπι, όπου το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί τοποθετείται στα ράφια. Η αποστείρωση πραγματοποιείται με ξηρή θερμότητα στους 150 °C για 2 ώρες, στους 165-170 °C - 45 λεπτά, στους 180 °C - 15 λεπτά. Τα γυάλινα σκεύη αποστειρώνονται σε φούρνο Pasteur. Μετά την αποστείρωση, το ντουλάπι αποσυνδέεται από το πηγή θέρμανσης και ανοίγει μόνο μετά από πλήρη ψύξη.

Βακτηριακά φίλτραχρησιμοποιείται για την αποστείρωση υγρών χωρίς θέρμανση. Αυτά περιλαμβάνουν τα κεριά Chamberlant, Berkefeld και τα φίλτρα αμιάντου Seitz (πλάκες).

Τα κεριά φίλτρου (Εικ. 6) είναι κοίλοι κύλινδροι κατασκευασμένοι από λεπτά πορώδεις ουσίες: καολίνη με πρόσμικτο χαλαζιακή άμμος(Chamberlant candles) και infusorial earth (κεριά Berkefeld). Chamberlant κεριά έχουν διάφορα μεγέθηπόρους από τους οποίους περνούν τα μικρόβια. Τα κεριά που επιτρέπουν τη διέλευση μεγάλων βακτηρίων χαρακτηρίζονται με τα γράμματα L9, L1(bis), L3, τα μεσαία - L5, L7, τα μικρότερα - L9, μεγάλο11 , μεγάλο13 Τα κεριά Berkefeld χαρακτηρίζονται από πορώδες W, Ν, V(τα κεριά με μάρκα U έχουν τους μεγαλύτερους πόρους).

Τα φίλτρα Seitz είναι πλάκες αμιάντου διαφόρων μεγεθών. Κατά την τοποθέτηση της συσκευής για αποστείρωση, η πλάκα τοποθετείται σε ένα πλέγμα μεταξύ μεταλλικών δίσκων (με μια οπή στη μέση), τα οποία πιέζονται σφιχτά μαζί με βίδες. Το τοποθετημένο φίλτρο εισάγεται μέσα από ένα πώμα σε μια φιάλη με πλαϊνή έξοδο (φιάλη Bunsen) και ένα σωλήνα από καουτσούκ, τυλιγμένο σε χαρτί και αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο στους 120 ° C για 20-30 λεπτά.

Για να φιλτράρετε το υλικό, δημιουργήστε ένα κενό σε μια φιάλη Bunsen συνδέοντας σε αυτήν έναν ελαστικό σωλήνα με ένα σπάνιο λάδι αντλία χειρός Komovsky ή ηλεκτρική αντλία κενού.

Ολοκλήρωση της εργασίας. Τα μικρόβια καλλιεργούνται σε βέλτιστες συνθήκες θερμοκρασίας. Για το σκοπό αυτό, τα εργαστήρια χρησιμοποιούν θερμοστάτες αέρα ή νερού.

(Εικ. 7) είναι ένα μεταλλικό ντουλάπι με διπλά τοιχώματα, μεταξύ των οποίων υπάρχει ένα στρώμα νερού ή αέρα. Το εξωτερικό μέρος του θερμοστάτη καλύπτεται με ένα υλικό που δεν μεταφέρει τη θερμότητα καλά (αμίαντος, λινέλαιο).

Ρύζι. 4, 5, 6.

Στο εσωτερικό του θερμοστάτη υπάρχουν ράφια για την τοποθέτηση υλικού σπόρου καλλιεργημένων μικροοργανισμών. Μια σταθερή θερμοκρασία στον θερμοστάτη διατηρείται χρησιμοποιώντας έναν θερμοστάτη, ο οποίος είναι ενσωματωμένος στο επάνω κάλυμμα του θερμοστάτη. Η συσκευή θερμοστάτη βασίζεται στην αρχή της γραμμικής διαστολής των ουσιών. Οι θερμοργαραγωγοί είναι ένα κράμα οποιουδήποτε δύο μετάλλων με διαφορετικούς συντελεστές θερμικής διαστολής (ορείχαλκος, ψευδάργυρος) ή μεταλλικό "μαξιλάρι" γεμάτο με αλκοόλ, μείγμα αλκοόλ και αιθέρα, υδράργυρο ή άλλες ουσίες που αλλάζουν τον όγκο τους σε μια ορισμένη θερμοκρασία. Όταν ο θερμοστάτης θερμαίνεται πάνω από τον καθορισμένο κανόνα, τα μέταλλα διαστέλλονται, οι επαφές ανοίγουν και η περαιτέρω ροή θερμότητας καθυστερεί αυτόματα. Αφού πέσει η θερμοκρασία, το ηλεκτρικό ρεύμα ενεργοποιείται και η ροή της θερμότητας συνεχίζεται.

Η αποστείρωση αντιπροσωπεύεται από φυσικές, χημικές, μηχανικές και βιολογικές μεθόδους και διάφορες μεθόδους. Η σκοπιμότητα χρήσης μιας συγκεκριμένης μεθόδου αποστείρωσης και των μεθόδων της εξαρτάται από τα χαρακτηριστικά του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί, τις φυσικές και χημικές του ιδιότητες. Η διάρκεια της αποστείρωσης εξαρτάται από το αντικείμενο που αποστειρώνεται, τον παράγοντα αποστείρωσης και τη δόση, τη θερμοκρασία και την υγρασία του περιβάλλον.

Μέθοδος φυσικής αποστείρωσης Στους τρόπους φυσική μέθοδοςΗ αποστείρωση περιλαμβάνει ξήρανση, καύση και πύρωση, βρασμό, παστερίωση και αφυδάτωση, ζεστός αέρας(ξηρή θερμότητα), υπέρηχος, υπεριώδης και ραδιενεργός ακτινοβολία, ρεύμα υψηλής συχνότητας, ηλιακό φως. Η πιο κοινή μέθοδος αποστείρωσης αντικειμένων που μπορούν να εκτεθούν σε υψηλές θερμοκρασίες είναι η αποστείρωση με φωτιά, ζεστό αέρα και κορεσμένο ατμό υπό πίεση. Η φωτιά χρησιμοποιείται για την καύση μολυσμένων αντικειμένων που δεν αντιπροσωπεύουν καμία αξία (περιττά χαρτιά, παλιές ταπετσαρίες, κουρέλια, σκουπίδια), για την απολύμανση των πτυέλων ασθενών με φυματίωση, των πτωμάτων ανθρώπων και ζώων που πέθαναν από ιδιαίτερα επικίνδυνες λοιμώξεις, καθώς και για κάψτε και φρύξτε διάφορα αντικείμενα. Η καύση και η πύρωση χρησιμοποιούνται ευρέως στη μικροβιολογική πρακτική για την απολύμανση εργαλείων, εργαστηριακών και φαρμακευτικών υαλικών. Η φρύξη σε φλόγα καυστήρα ή το flambéing είναι μια μέθοδος αποστείρωσης κατά την οποία το αντικείμενο αποστειρώνεται πλήρως, καθώς τα φυτικά κύτταρα, οι κύστεις και τα σπόρια μικροοργανισμών πεθαίνουν. Συνήθως, οι θηλιές, οι σπάτουλες, οι πιπέτες, οι τσουλήθρες και οι καλυπτρίδες, τα μικρά εργαλεία και άλλα μολυσμένα αντικείμενα αποστειρώνονται με φρύξη εάν δεν μπορούν να βράσουν. Δεν συνιστάται η αποστείρωση ψαλιδιών και νυστέρι με θέρμανση, καθώς η επιφάνεια κοπής γίνεται θαμπή όταν εκτίθεται στη φωτιά. Μία από τις απλούστερες και πιο κοινές μεθόδους φυσικής αποστείρωσης που χρησιμοποιούνται στην ιατρική πρακτική είναι η αποστείρωση με θερμό αέρα (ξηρή θερμότητα). Αποστείρωση με ξηρή θερμότηταπραγματοποιείται σε φούρνους ξήρανσης (φούρνοι Pasteur). Ο ξηρός ζεστός αέρας έχει βακτηριοκτόνο, ιοκτόνο, σποριοκτόνο δράση και χρησιμοποιείται κυρίως για την αποστείρωση γυάλινων προϊόντων (εργαστηριακά γυάλινα σκεύη - πιάτα Petri, φιάλες, πιπέτες, δοκιμαστικοί σωλήνες κ.λπ.), καθώς και μεταλλικά προϊόντα που μπορούν να αποστειρωθούν με ατμό υπό πίεση. Επιπλέον, η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση αντικειμένων από πορσελάνη και ανθεκτικές στη θερμότητα ουσίες (ταλκ, λευκή άργιλος), καθώς και ορυκτά και φυτικά έλαια, λίπη, βαζελίνη, λανολίνη και κερί. Ο πιο αποτελεσματικός τρόπος για αυτή τη μέθοδο αποστείρωσης, που εξασφαλίζει τον θάνατο των φυτικών μορφών και των σπορίων, είναι η θερμοκρασία 160 - 180 βαθμών για 15 λεπτά. Δεν μπορείτε να αποστειρώσετε τρόφιμα, ισοτονικά διαλύματα ή είδη από καουτσούκ και συνθετικά υλικά με ξηρή θερμότητα, καθώς τα υγρά βράζουν και χύνονται και το καουτσούκ και τα συνθετικά υλικά λιώνουν. Αποστείρωση κορεσμένο ατμόυπό πίεση είναι η πιο αξιόπιστη και πιο συχνά δοκιμασμένη μέθοδος για την αποστείρωση επιδέσμων, νερού, ορισμένων φαρμάκων, μέσων καλλιέργειας, μαλακού εξοπλισμού, οργάνων, καθώς και για την απολύμανση μολυσμένου υλικού από απόβλητα. Στη χειρουργική πρακτική, οι επίδεσμοι, οι ρόμπες των χειρουργών και τα εσώρουχα για τον χειρουργημένο ασθενή απολυμαίνονται με χρήση ατμού σε αυτόκλειστα. Η αποστείρωση με ατμό υπό πίεση πραγματοποιείται σε ειδικές συσκευές– αυτόκλειστα. Το αυτόκαυστο καταστρέφει πλήρως όλους τους μικροοργανισμούς και τα σπόρια. Η μέθοδος αποστείρωσης με πίεση ατμού βασίζεται στη θέρμανση του υλικού με κορεσμένους υδρατμούς υπό πίεση πάνω από την ατμοσφαιρική πίεση. Η συνδυασμένη δράση υψηλής θερμοκρασίας και ατμού καθιστά αυτή τη μέθοδο ιδιαίτερα αποτελεσματική. Σε αυτή την περίπτωση, τόσο τα φυτικά κύτταρα όσο και τα μικροβιακά σπόρια πεθαίνουν. Τα μικροβιακά σπόρια πεθαίνουν μέσα σε 10 λεπτά υπό την επίδραση κορεσμένου υδρατμού και οι φυτικές μορφές πεθαίνουν μέσα σε 1 έως 4 λεπτά. Η υψηλή βακτηριοκτόνος δύναμη του κορεσμένου ατμού οφείλεται στο γεγονός ότι, υπό την επίδραση υδρατμών υπό πίεση, οι πρωτεΐνες του μικροβιακού κυττάρου διογκώνονται και πήζουν, με αποτέλεσμα τα μικροβιακά κύτταρα να πεθαίνουν. Η βακτηριοκτόνος δράση των κορεσμένων υδρατμών ενισχύεται από την υπερβολική πίεση. Η αποστείρωση σε αυτόκλειστο πραγματοποιείται με διαφορετικούς τρόπους. Έτσι, απλά θρεπτικά μέσα (άγαρ κρέας - πεπτόνη και ζωμός κρέατος - πεπτόνης) αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120 βαθμούς (1 atm.). Αλλά με αυτόν τον τρόπο λειτουργίας είναι αδύνατο να αποστειρωθούν μέσα που περιέχουν πρωτεΐνες, υδατάνθρακες και άλλες ουσίες που αλλάζουν εύκολα με θέρμανση. Τα μέσα με υδατάνθρακες αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο σε 0,5 atm. 10 – 15 λεπτά ή κλασματική ροή ατμού. Χρησιμοποιώντας υψηλή θερμοκρασία, μπορείτε να καταστρέψετε τις πιο επίμονες μορφές παθογόνων μικροοργανισμών (συμπεριλαμβανομένων εκείνων που σχηματίζουν σπόρους) όχι μόνο στην επιφάνεια των αντικειμένων που απολυμαίνονται, αλλά και στο βάθος τους. Αυτό είναι το μεγάλο πλεονέκτημα της υψηλής θερμοκρασίας ως αξιόπιστου μέσου αποστείρωσης. Ωστόσο, ορισμένα είδη αλλοιώνονται υπό την επίδραση υψηλών θερμοκρασιών και σε αυτές τις περιπτώσεις είναι απαραίτητο να καταφύγουμε σε άλλες μεθόδους και μέσα απολύμανσης. Η πλήρης αποστείρωση υλικών και αντικειμένων που δεν επιτρέπουν τη χρήση αποστείρωσης σε υψηλή θερμοκρασία επιτυγχάνεται με επαναλαμβανόμενη αποστείρωση με υδρατμούς σε συσκευή Koch σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 100 βαθμούς. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται κλασματική αποστείρωση. Συνοψίζεται στο γεγονός ότι οι υπόλοιπες μη σκοτωμένες μορφές σπορίων μικροβίων, μετά από μια μέρα σε θερμοστάτη στους 37 βαθμούς, βλασταίνουν σε φυτικά κύτταρα, ο θάνατος των οποίων συμβαίνει κατά τη διάρκεια της επακόλουθης αποστείρωσης αυτού του αντικειμένουρέοντας ατμός. Η επεξεργασία με υγρό ατμό πραγματοποιείται τρεις φορές για 30-40 λεπτά. Η θέρμανση του υλικού μία φορά σε θερμοκρασία κάτω των 100 βαθμών είναι γνωστή ως παστερίωση. Η παστερίωση προτάθηκε από τον Παστέρ και προορίζεται κυρίως για την καταστροφή μικροοργανισμών κυρίως μη σπορίων. Η παστερίωση πραγματοποιείται στους 60 - 70 βαθμούς για 15 έως 30 λεπτά, στους 80 βαθμούς για 10 έως 15 λεπτά. Στη μικροβιολογική πρακτική, η παστερίωση του υλικού σπόρων χρησιμοποιείται συχνά για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών μικροοργανισμών που σχηματίζουν σπόρους και για τον εντοπισμό της ικανότητας των μικροοργανισμών να σχηματίζουν σπόρια. Για υγρά που χάνουν τη γεύση και άλλες πολύτιμες ιδιότητες όταν εκτίθενται σε υψηλές θερμοκρασίες (γάλα, μούρα και χυμοί φρούτων, μπύρα, θρεπτικά υλικά που περιέχουν υδατάνθρακες ή ουρία κ.λπ.), η αποστείρωση με ρέον ατμό πραγματοποιείται στους 50 - 60 βαθμούς για 15 - 33333330 λεπτά ή στους 70 - 80 βαθμούς για 5 - 10 λεπτά. Σε αυτή την περίπτωση, μικρόβια μέσης αντοχής πεθαίνουν, ενώ διατηρούνται πιο ανθεκτικά μικρόβια και σπόρια. Η κλασματική 5-6-πλάσια αποστείρωση στους 60 βαθμούς για 1 ώρα ονομάζεται τυνδαλοποίηση. Πολλά ιατρικά προϊόντα που κατασκευάζονται από πολυμερή υλικά δεν αντέχουν την αποστείρωση μέθοδος ατμούσύμφωνα με γενικά αποδεκτούς τρόπους. Για πολλά προϊόντα, λόγω των χαρακτηριστικών των υγρών που περιέχουν (συντηρητικά, φάρμακα και άλλα προϊόντα), είναι αδύνατο να αποστειρωθούν χρησιμοποιώντας γενικά αποδεκτές μεθόδους και μεθόδους. Για τέτοια προϊόντα, αναπτύσσονται ατομικά καθεστώτα αποστείρωσης για να διασφαλιστεί η αξιόπιστη αποστείρωση των αντικειμένων. Έτσι, η αποστείρωση του ρότορα για διαχωρισμό του αίματος σε κλάσματα πραγματοποιείται με υδρατμούς σε θερμοκρασία 120 βαθμών για 45 λεπτά. Η στειρότητα των δοχείων συντηρητικού επιτυγχάνεται στους 110 βαθμούς για 60 λεπτά. Το βρασμό είναι μια μέθοδος αποστείρωσης που χρησιμοποιείται για την αποστείρωση επαναχρησιμοποιήσιμων συρίγγων, χειρουργικών εργαλείων, σωλήνων από καουτσούκ, γυαλιού και μεταλλικά σκεύη. Η αποστείρωση με βρασμό πραγματοποιείται σε αποστειρωτές. Οι μορφές σπορίων σε βραστό νερό πεθαίνουν μετά από 20 - 30 λεπτά. Το βράσιμο για 45 λεπτά χρησιμοποιείται ευρέως για την απολύμανση εκκρίσεων και άλλων μολυσματικών υλικών, λευκών ειδών, πιάτων, παιχνιδιών και ειδών φροντίδας ασθενών. Για πλύσιμο και καθαρισμό χρησιμοποιείται ζεστό νερό (60 - 100 μοίρες) με απορρυπαντικά μηχανική αφαίρεσηρύπους και μικροοργανισμούς. Τα περισσότερα βλαστικά κύτταρα πεθαίνουν στους 70 βαθμούς μετά από 30 λεπτά. Η αποστείρωση με διήθηση χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου τα υποστρώματα δεν αντέχουν τη θέρμανση, ιδιαίτερα για μέσα που περιέχουν πρωτεΐνες, ορούς, ορισμένα αντιβιοτικά, βιταμίνες και πτητικές ουσίες. Αυτή η τεχνική χρησιμοποιείται αρκετά ευρέως για την αποστείρωση ενός υγρού καλλιέργειας, όταν είναι απαραίτητο να απελευθερωθεί από τα μικροβιακά κύτταρα, αλλά να διατηρηθούν αμετάβλητα όλα τα μεταβολικά προϊόντα που περιέχει. Η μέθοδος περιλαμβάνει το φιλτράρισμα υγρών μέσω ειδικών φίλτρων που έχουν λεπτά πορώδη χωρίσματα και επομένως διατηρούν τα μικροβιακά κύτταρα. Οι δύο πιο ευρέως χρησιμοποιούμενοι τύποι φίλτρων είναι τα φίλτρα μεμβράνης και τα φίλτρα Seitz. Τα φίλτρα μεμβράνης παρασκευάζονται από κολλίδιο, οξικό, κυτταρίνη και άλλα υλικά. Τα φίλτρα Seitz κατασκευάζονται από μείγμα αμιάντου και κυτταρίνης. Επιπλέον, για την αποστείρωση χρησιμοποιούνται φίλτρα από καολίνη με ανάμειξη χαλαζιακής άμμου, χώματος έγχυσης και άλλων υλικών («κεριά» των Chamberlan, Berkfeld). Τα φίλτρα μεμβράνης και αμιάντου είναι σχεδιασμένα για μία χρήση. Με την υπεριώδη ακτινοβολία, το βακτηριοκτόνο αποτέλεσμα παρέχεται από ακτίνες μήκους 200 - 450 nm, η πηγή των οποίων είναι βακτηριοκτόνοι λαμπτήρες. Χρησιμοποιώντας βακτηριοκτόνες λάμπες, ο αέρας αποστειρώνεται με υπεριώδεις ακτίνες για θεραπευτικούς σκοπούς. προληπτικά ιδρύματα, κουτιά μικροβιολογικών εργαστηρίων, σε επιχειρήσεις Βιομηχανία τροφίμων, σε κουτιά για την παραγωγή εμβολίων και ορών, σε χειρουργεία, αίθουσες χειρισμών, παιδικά ιδρύματα κ.λπ. Οι υπεριώδεις ακτίνες έχουν υψηλή αντιμικροβιακή δράση και μπορούν να προκαλέσουν θάνατο όχι μόνο των βλαστικών κυττάρων, αλλά και των σπορίων τους. Το ηλιακό φως προκαλεί το θάνατο μικροοργανισμών ως αποτέλεσμα της δράσης υπεριώδη ακτινοβολίακαι ξήρανση. Η ξήρανση με ηλιακή ακτινοβολία έχει επιζήμια επίδραση σε πολλούς τύπους μικροοργανισμών, αλλά η επίδρασή της είναι επιφανειακή και επομένως το φως του ήλιου παίζει υποστηρικτικό ρόλο στην πρακτική αποστείρωσης. Πρόσφατα, στη θεραπεία τραυμάτων και εγκαυμάτων, έχουν χρησιμοποιηθεί επικαλύψεις από συνθετικά και φυσικά πολυμερή σε μορφή τζελ. Τα πολυμερή αντισηπτικά φιλμ χρησιμοποιούνται ευρέως για τοπική θεραπεία τραυμάτων και εγκαυμάτων. Περιέχουν αντιμικροβιακούς παράγοντες ευρέος φάσματος όπως καταπόλη, διοξειδίνη, μπλε ιώδιο, καθώς και γλουταραλδεΰδη που περιέχει σορβιτόλη. Για την αποστείρωση αυτών των μεμβρανών, χρησιμοποιείται ιονίζουσα ακτινοβολία σε δόση 20,0 kGy. Κατά τη βιομηχανική παραγωγή πολυμερών αντισηπτικών μεμβρανών και ροφητών, η στειρότητά τους σε αυτό το καθεστώς αποστείρωσης διασφαλίζεται πλήρως. Η ραδιενεργή ακτινοβολία σκοτώνει όλους τους τύπους μικροοργανισμών, τόσο σε βλαστική όσο και σε μορφή σπορίων. Χρησιμοποιείται ευρέως για αποστείρωση σε επιχειρήσεις παραγωγής αποστειρωμένων προϊόντων και αποστειρωμένων ιατρικών συσκευών μιας χρήσης, για την απολύμανση λυμάτων και πρώτων υλών ζωικής προέλευσης.

Μέθοδος μηχανικής αποστείρωσης Οι μέθοδοι μηχανικής αποστείρωσης απομακρύνουν τα μικρόβια από την επιφάνεια των αντικειμένων. Αυτά περιλαμβάνουν το πλύσιμο, το τίναγμα, το σκούπισμα, το υγρό σκούπισμα, τον αερισμό, τον εξαερισμό, το σκούπισμα με ηλεκτρική σκούπα, το πλύσιμο.

Μέθοδος χημικής αποστείρωσης Τα πλαστικά χρησιμοποιούνται πλέον όλο και περισσότερο στην ιατρική πρακτική. Χρησιμοποιούνται στην οδοντιατρική, τη γναθοπροσωπική χειρουργική, την τραυματολογία, την ορθοπεδική και τη χειρουργική. Τα περισσότερα πλαστικά δεν μπορούν να αντέξουν τις μεθόδους θερμικής αποστείρωσης του ατμού υπό πίεση και ξηρής θερμότητας (ξηρός θερμαινόμενος αέρας). Τα διαλύματα αλκοόλης, διοκτόνου και τριμερούς διαλύματος που χρησιμοποιούνται για την αποστείρωση τέτοιων αντικειμένων δεν διασφαλίζουν τη στειρότητα των προϊόντων που υποβάλλονται σε επεξεργασία. Επομένως, μέθοδοι αερίου και ακτινοβολίας, καθώς και διαλύματα χημικών ουσιών, χρησιμοποιούνται για την αποστείρωση πλαστικών προϊόντων. Η εισαγωγή μεγάλου αριθμού προϊόντων από θερμοευαίσθητα υλικά στην πρακτική των ιατρικών ιδρυμάτων συμβάλλει στην εισαγωγή μεθόδων απολύμανσης και αποστείρωσης με ακτινοβολία και αέρια με απολυμαντικά διαλύματα. Κατά τη χημική αποστείρωση χρησιμοποιούνται αέρια και παράγοντες από διάφορες χημικές ομάδες (υπεροξείδια, φαινολικά, αλογόνου, αλδεΰδες, αλκάλια και οξέα, επιφανειοδραστικά κ.λπ.). Για καθημερινή χρήση παράγονται απορρυπαντικά, καθαριστικά, λεύκανση και άλλα σκευάσματα που έχουν αντιμικροβιακή δράση λόγω της εισαγωγής διάφορων χημικών ουσιών στη σύνθεσή τους. Αυτά τα παρασκευάσματα χρησιμοποιούνται για τον καθαρισμό και την απολύμανση εξοπλισμού υγιεινής, πιάτων, λευκών ειδών κ.λπ. Ο ατμός φορμαλδεΰδης (ατμομορφή) μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ιατρικά ιδρύματαγια αποστείρωση μεταλλικά προϊόνταιατρικούς σκοπούς (νυστέρια, βελόνες, τσιμπιδάκια, καθετήρες, σφιγκτήρες, γάντζοι, κόφτες σύρματος κ.λπ.). Πριν από την αποστείρωση με ατμό φορμαλδεΰδης, τα προϊόντα πρέπει να υποβληθούν σε καθαρισμό πριν από την αποστείρωση και να στεγνώσουν καλά. Όταν αποστειρώνεται με οποιονδήποτε τρόπο χημικάοι κανονισμοί για την επεξεργασία ενός συγκεκριμένου αντικειμένου εξαρτώνται από τα χαρακτηριστικά του αντικειμένου που απολυμαίνεται, την αντοχή των μικροβίων και τα χαρακτηριστικά των ιδιοτήτων χημική προετοιμασία, θερμοκρασία περιβάλλοντος, υγρασία και άλλοι παράγοντες. Έτσι, η στειρότητα των μεταλλικών οργάνων επιτυγχάνεται μετά από πέντε ώρες αποθήκευσης σε σφραγισμένο θάλαμο με ατμό σε θερμοκρασία τουλάχιστον 20 βαθμών και σχετική υγρασία 95 - 98%, σε θερμοκρασία 15 βαθμών, πλήρης αποστείρωση αυτών των αντικειμένων επιτυγχάνεται μόνο μετά από 16 ώρες. Η σποριοκτόνος δράση της γλουταραλδεΰδης εξαρτάται από τη θερμοκρασία. Η βέλτιστη δράση του εμφανίζεται σε θερμοκρασία 15 – 25 βαθμών. Καθώς αυξάνεται η θερμοκρασία, η σποριτική δραστηριότητα αυτού του φαρμάκου μειώνεται. Η χημική αποστείρωση χρησιμοποιείται σε κάπως περιορισμένο βαθμό. Τις περισσότερες φορές, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την πρόληψη της βακτηριακής μόλυνσης των μέσων καλλιέργειας και των ανοσοβιολογικών παρασκευασμάτων (εμβόλια και ορούς). Οι ουσίες όπως το χλωροφόρμιο, το τολουόλιο και ο αιθέρα προστίθενται συχνότερα στα θρεπτικά μέσα. Εάν είναι απαραίτητο να απελευθερωθείτε το μέσο από αυτά τα συντηρητικά, θερμαίνεται σε υδατόλουτρο στους 56 μοίρες και τα συντηρητικά εξατμίζονται. Για τη διατήρηση των εμβολίων ή των ορών, χρησιμοποιούνται τα merthiolate, το βορικό οξύ και η φορμαλίνη.

Μέθοδος βιολογικής αποστείρωσης Η βιολογική αποστείρωση βασίζεται στη χρήση αντιβιοτικών. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται ευρέως στην καλλιέργεια των ιών.

Η ζωή των μικροοργανισμών εξαρτάται στενά από τις περιβαλλοντικές συνθήκες. Όλοι οι περιβαλλοντικοί παράγοντες που επηρεάζουν τους μικροοργανισμούς μπορούν να χωριστούν σε τρεις ομάδες: φυσικούς, χημικούς και βιολογικούς, η ευεργετική ή επιβλαβής επίδραση των οποίων εξαρτάται τόσο από τη φύση του ίδιου του παράγοντα όσο και από τις ιδιότητες του μικροοργανισμού.

Φυσικοί παράγοντες

Από τους φυσικούς παράγοντες, τη θερμοκρασία, την ξήρανση, την ακτινοβολία ενέργειας και τον υπερηχογράφημα έχουν τη μεγαλύτερη επίδραση στην ανάπτυξη μικροοργανισμών.

Θερμοκρασία. Η δραστηριότητα ζωής κάθε μικροοργανισμού περιορίζεται από ορισμένα όρια θερμοκρασίας. Αυτή η εξάρτηση από τη θερμοκρασία συνήθως εκφράζεται από τρία κύρια σημεία: ελάχιστη - η θερμοκρασία κάτω από την οποία σταματά η αναπαραγωγή των μικροβιακών κυττάρων. Βέλτιστη - η καλύτερη θερμοκρασία για την ανάπτυξη και ανάπτυξη μικροοργανισμών. Μέγιστη - η θερμοκρασία πάνω από την οποία η ζωτική δραστικότητα των κυττάρων αποδυναμώνει ή σταματά. Βέλτιστη θερμοκρασίασυνήθως αντιστοιχεί σε συνθήκες θερμοκρασίας φυσικό περιβάλλονένας βιότοπος.

Όλοι οι μικροοργανισμοί σε σχέση με τη θερμοκρασία χωρίζονται σε ψυχοφίλους, μεσοφίλους και θερμοφιλικά.

Τα ψυχρόφιλα (από τα ελληνικά ψυχρός - κρύο, φιλέω - αγάπη), ή μικροοργανισμοί που αγαπούν το κρύο, αναπτύσσονται σε σχετικά χαμηλές θερμοκρασίες: ελάχιστη θερμοκρασία - 0 ° C, βέλτιστη - 10-20 ° C, μέγιστη - 30 ° C. Αυτή η ομάδα περιλαμβάνει μικροοργανισμοί που ζουν στις βόρειες θάλασσες και τους ωκεανούς, το έδαφος, λύματα. Αυτό περιλαμβάνει επίσης φωτεινά βακτήρια και βακτήρια σιδήρου, καθώς και μικρόβια που προκαλούν αλλοίωση των τροφίμων στο κρύο (κάτω από 0°C).

Τα μεσόφιλα (από το ελληνικό μέσος - μέση) είναι η πιο εκτεταμένη ομάδα, συμπεριλαμβανομένων των περισσότερων σαπρόφυτων και όλων των παθογόνων μικροοργανισμών. Η βέλτιστη θερμοκρασία για αυτούς είναι 28-37 ° C, η ελάχιστη είναι 10 ° C, η μέγιστη είναι 45 ° C.

Τα θερμόφιλα (από το ελληνικό termos - θερμότητα, θερμότητα) ή μικροοργανισμοί που αγαπούν τη θερμότητα, αναπτύσσονται σε θερμοκρασίες πάνω από 55 ° C, η ελάχιστη θερμοκρασία για αυτούς είναι 30 ° C, η βέλτιστη είναι 50-60 ° C και η μέγιστη είναι 70 -75 ° C. Βρήκαν σε θερμές μεταλλικές πηγές, το επιφανειακό στρώμα του εδάφους, αυτοθερμαινόμενα υποστρώματα (κοπριά, σανός, σιτηρά) και τα έντερα των ανθρώπων και των ζώων. Μεταξύ των θερμόφιλων υπάρχουν πολλές μορφές σπορίων.

Οι υψηλές και οι χαμηλές θερμοκρασίες έχουν διαφορετικές επιπτώσεις στους μικροοργανισμούς. Μερικά είναι πιο ευαίσθητα στις υψηλές θερμοκρασίες. Επιπλέον, όσο υψηλότερη είναι η θερμοκρασία πέρα ​​από τη μέγιστη, τόσο πιο γρήγορος επέρχεται ο θάνατος των μικροβιακών κυττάρων, ο οποίος οφείλεται στη μετουσίωση (πήξη) των πρωτεϊνών των κυττάρων.

Οι φυτικές μορφές μεσόφιλων βακτηρίων πεθαίνουν σε θερμοκρασία 60 ° C για 30-60 λεπτά και στους 80-100 ° C - μετά από 1-2 λεπτά. Τα βακτηριακά σπόρια είναι πολύ πιο ανθεκτικά στις υψηλές θερμοκρασίες. Για παράδειγμα, τα σπόρια των βακίλλων του άνθρακα αντέχουν το βρασμό για 10-20 λεπτά και τα σπόρια της αλλαντίασης του κλωστριδίου - 6 ώρες. Όλοι οι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των σπορίων, πεθαίνουν σε θερμοκρασία 165-170 ° C για μια ώρα (σε ξηρή θερμότητα φούρνο) ή όταν εκτίθεται σε ατμό υπό πίεση 1 atm (σε αυτόκλειστο) για 30 λεπτά.

Η επίδραση των υψηλών θερμοκρασιών στους μικροοργανισμούς είναι η βάση της αποστείρωσης - η πλήρης απελευθέρωση διαφόρων αντικειμένων από τους μικροοργανισμούς και τα σπόρια τους (βλ. παρακάτω).

Πολλοί μικροοργανισμοί είναι εξαιρετικά ανθεκτικοί στις χαμηλές θερμοκρασίες. Ο τύφος Salmonella και το Vibrio cholerae επιβιώνουν για μεγάλο χρονικό διάστημα στον πάγο. Ορισμένοι μικροοργανισμοί παραμένουν βιώσιμοι σε θερμοκρασίες υγρού αέρα (-190°C) και τα βακτηριακά σπόρια μπορούν να αντέξουν σε θερμοκρασίες έως -250°C.

Μόνο ορισμένοι τύποι παθογόνων βακτηρίων είναι ευαίσθητοι σε χαμηλές θερμοκρασίες (για παράδειγμα, Bordetella pertussis και parapertussis, Neisseria meningococcus κ.λπ.). Αυτές οι ιδιότητες των μικροοργανισμών λαμβάνονται υπόψη στο εργαστηριακή διάγνωσηκαι κατά τη μεταφορά του υπό μελέτη υλικού, παραδίδεται στο εργαστήριο που προστατεύεται από την ψύξη.

Η δράση των χαμηλών θερμοκρασιών σταματάει τις διαδικασίες Putrefactive και Bermentation, οι οποίες χρησιμοποιούνται ευρέως για τη διατήρηση των τροφίμων στο ψυκτικές μονάδες, κελάρια, παγετώνες. Σε θερμοκρασίες κάτω από 0 ° C, τα μικρόβια εμπίπτουν σε κατάσταση αναστολής κινούμενων σχεδίων - οι μεταβολικές διεργασίες επιβραδύνουν και σταματάει η αναπαραγωγή. Ωστόσο, εάν υπάρχουν κατάλληλα συνθήκες θερμοκρασίαςκαι θρεπτικό μέσο ζωτικές λειτουργίεςτα μικροβιακά κύτταρα αποκαθίστανται. Αυτή η ιδιότητα των μικροοργανισμών χρησιμοποιείται στην εργαστηριακή πρακτική για τη διατήρηση των μικροβιακών καλλιεργειών σε χαμηλές θερμοκρασίες. Οι γρήγορες αλλαγές σε υψηλές και χαμηλές θερμοκρασίες (πάγωμα και απόψυξη) έχουν επίσης επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς - αυτό οδηγεί σε ρήξη των κυτταρικών μεμβρανών.

Ξήρανση. Το νερό είναι απαραίτητο για τη φυσιολογική λειτουργία των μικροοργανισμών. Η ξήρανση οδηγεί σε αφυδάτωση του κυτταροπλάσματος, διαταραχή της ακεραιότητας της κυτταροπλασματικής μεμβράνης, με αποτέλεσμα να διαταράσσεται η θρέψη των μικροβιακών κυττάρων και να επέρχεται ο θάνατός τους.

Ο χρόνος του θανάτου διαφορετικών τύπων μικροοργανισμών υπό την επίδραση της ξήρανσης διαφέρει σημαντικά. Για παράδειγμα, η παθογόνα Neisseria (Meningococci, Gonococci), η Leptospira, η Treponema Pallidum και άλλοι πεθαίνουν όταν στεγνώνουν μετά από λίγα λεπτά. Το Vibrio cholerae μπορεί να αντέξει την ξήρανση για 2 ημέρες, τον τυφοειδή Salmonella - 70 ημέρες και το Mycobacterium tuberculosis - 90 ημέρες. Ωστόσο, τα αποξηραμένα πτύελα ασθενών με φυματίωση, στα οποία τα παθογόνα προστατεύονται από ένα ξηρό κάλυμμα πρωτεΐνης, παραμένει μολυσματικό για 10 μήνες.

Τα σπόρια είναι ιδιαίτερα ανθεκτικά στην ξήρανση, καθώς και σε άλλες περιβαλλοντικές επιρροές. Τα σπόρια των βακίλων άνθρακα διατηρούν την ικανότητα να βλαστήσουν για 10 χρόνια και σπόρια μούχλα μούχλα για έως και 20 χρόνια.

Η δυσμενή επίδραση της ξήρανσης σε μικροοργανισμούς έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό για τη διατήρηση των λαχανικών, των φρούτων, του κρέατος, των ψαριών και των φαρμακευτικών βοτάνων. Ταυτόχρονα, έχοντας βρεθεί σε συνθήκες υψηλή υγρασία, τέτοια προϊόντα επιδεινώνεται γρήγορα λόγω της αποκατάστασης της μικροβιακής δραστηριότητας.

Η μέθοδος λυοφιλοποίησης χρησιμοποιείται ευρέως για την αποθήκευση καλλιεργειών μικροοργανισμών, εμβολίων και άλλων βιολογικών παρασκευασμάτων. Η ουσία της μεθόδου είναι ότι οι μικροοργανισμοί ή τα παρασκευάσματα πρώτα καταψύχονται και στη συνέχεια ξηραίνονται υπό συνθήκες κενού. Σε αυτή την περίπτωση, τα μικροβιακά κύτταρα εισέρχονται σε μια κατάσταση αναστολής κίνησης και διατηρούν τις βιολογικές τους ιδιότητες για αρκετούς μήνες ή χρόνια.

Ακτινοβόλος ενέργεια. Στη φύση, οι μικροοργανισμοί εκτίθενται συνεχώς σε ηλιακή ακτινοβολία. Το άμεσο ηλιακό φως προκαλεί το θάνατο πολλών μικροοργανισμών μέσα σε λίγες ώρες, με εξαίρεση τα φωτοσυνθετικά βακτήρια (πράσινα και μωβ βακτήρια θείου). Οι βλαβερές επιδράσεις του ηλιακού φωτός προκαλούνται από τη δραστηριότητα των υπεριώδους ακτίνων (ακτίνες UV). Απενεργοποιούν τα κυτταρικά ένζυμα και βλάπτουν το DNA. Τα παθογόνα βακτήρια είναι πιο ευαίσθητα στη δράση των ακτίνων υπεριώδους ακτίνων από τα σαπροφύλη. Ως εκ τούτου, είναι καλύτερο να αποθηκεύσετε μικροβιακές καλλιέργειες στο εργαστήριο στο σκοτάδι. Από αυτή την άποψη, η εμπειρία του Buchner είναι επίδειξη.

Μια άφθονη κουλτούρα βακτηρίων ενοφθαλμίζεται σε ένα πιάτο Petri με ένα λεπτό στρώμα άγαρ. Τα γράμματα που κόβονται από το μαύρο χαρτί είναι κολλημένα στην εξωτερική επιφάνεια του σπόρου κυπέλλου, σχηματίζοντας, για παράδειγμα, τη λέξη "τυφλός". Το κύπελλο, με το κάτω μέρος του στραμμένο προς τα πάνω, ακτινοβολείται από το άμεσο ηλιακό φως για 1 ώρα. Στη συνέχεια αφαιρούνται τα χαρτιά και το κύπελλο τοποθετείται σε θερμοστάτη στους 37° C για μια ημέρα. Η ανάπτυξη βακτηρίων παρατηρείται μόνο σε εκείνα τα σημεία του Άγαρ που προστατεύονταν από ακτίνες υπεριώδους ακτίνες με ετικέτες. Το υπόλοιπο άγαρ παραμένει διαφανές, δηλαδή δεν υπάρχει ανάπτυξη μικροοργανισμών (Εικόνα 11).

Η σημασία του ηλιακού φωτός ως φυσικού παράγοντα για τη βελτίωση της υγείας του εξωτερικού περιβάλλοντος είναι μεγάλη. Ελευθερώνει τον αέρα, το νερό των φυσικών δεξαμενών και τα ανώτερα στρώματα του εδάφους από τα παθογόνα βακτήρια.

Η επίδραση των βακτηριοκτόνων (βακτηρίδια) των ακτίνων UV χρησιμοποιείται για την αποστείρωση του αέρα κλειστούς χώρους(Λειτουργικά δωμάτια, αίθουσες σάλτσας, κιβώτια κ.λπ.), καθώς και νερό και γάλα. Η πηγή αυτών των ακτίνων είναι λαμπτήρες υπεριωδης ΑΚΤΙΝΟΒΟΛΙΑ, βακτηριοκτόνες λάμπες.

Άλλοι τύποι ενέργειας ακτινοβολίας - οι ακτίνες Χ, οι ακτίνες α-, β-, γ έχουν επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς μόνο σε μεγάλες δόσεις, της τάξης των 440-280 J/kg. Ο θάνατος των μικροβίων προκαλείται από την καταστροφή των πυρηνικών δομών και του κυτταρικού DNA. Οι χαμηλές δόσεις ακτινοβολίας διεγείρουν την ανάπτυξη των μικροβιακών κυττάρων. Οι μικροοργανισμοί είναι πολύ πιο ανθεκτικοί στη ραδιενεργή ακτινοβολία από τους ανώτερους οργανισμούς. Τα θειονικά βακτήρια είναι γνωστό ότι ζουν σε κοιτάσματα μεταλλεύματος ουρανίου. Βακτήρια βρέθηκαν στο νερό από πυρηνικούς αντιδραστήρες σε συγκέντρωση ιοντίζουσας ακτινοβολίας 20-30 kJ/kg.

Η βακτηριοκτόνος δράση της ιονίζουσας ακτινοβολίας χρησιμοποιείται για τη συντήρηση ορισμένων προϊόντων διατροφής, την αποστείρωση βιολογικών παρασκευασμάτων (ορούς, εμβόλια κ.λπ.), ενώ οι ιδιότητες του αποστειρωμένου υλικού δεν αλλάζουν.

Τα τελευταία χρόνια, προϊόντα μιας χρήσης αποστειρώνονται με τη μέθοδο της ακτινοβολίας - σιφώνια πολυστυρενίου, τρυβλία Petri, φρεάτια για ορολογικές αντιδράσεις, σύριγγες, καθώς και υλικό ράμματος- catgut, κ.λπ.

Υπέρηχοςπροκαλεί σημαντική βλάβη στα μικροβιακά κύτταρα. Υπό την επίδραση του υπερήχου, τα αέρια που βρίσκονται στο υγρό περιβάλλον του κυτταροπλάσματος ενεργοποιούνται και δημιουργείται υψηλή πίεση μέσα στο κύτταρο (έως 10.000 atm). Αυτό οδηγεί σε ρήξη της κυτταρικής μεμβράνης και κυτταρικό θάνατο. Ο υπέρηχος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση τροφίμων (γάλα, χυμοί φρούτων) και πόσιμο νερό.

Υψηλή πίεση. Τα βακτήρια και ιδιαίτερα τα σπόρια τους είναι ανθεκτικά στη μηχανική πίεση. Στη φύση, βρίσκονται βακτήρια που ζουν σε θάλασσες και ωκεανούς σε βάθος 1000-10000 m υπό πίεση από 100 έως 900 atm. Ορισμένοι τύποι βακτηρίων μπορούν να αντέξουν πιέσεις έως και 3000-5000 atm και τα βακτηριακά σπόρια - ακόμη και 20.000 atm.

Χημικοί παράγοντες

Η επίδραση των χημικών ουσιών στους μικροοργανισμούς ποικίλλει ανάλογα με τη φύση της χημικής ένωσης, τη συγκέντρωσή της και τη διάρκεια της έκθεσης σε μικροβιακά κύτταρα. Ανάλογα με τη συγκέντρωση, μια χημική ουσία μπορεί να είναι πηγή διατροφής ή να έχει ανασταλτική επίδραση στη ζωτική δραστηριότητα των μικροοργανισμών. Για παράδειγμα, ένα διάλυμα γλυκόζης 0,5-2% διεγείρει την ανάπτυξη μικροβίων και διαλύματα γλυκόζης 20-40% αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των μικροβιακών κυττάρων.

Πολλές χημικές ενώσεις που έχουν επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς χρησιμοποιούνται στην ιατρική πρακτική ως απολυμαντικά και αντισηπτικά.

Οι χημικές ουσίες που χρησιμοποιούνται για την απολύμανση ονομάζονται απολυμαντικά. Η απολύμανση αναφέρεται σε μέτρα που στοχεύουν στην καταστροφή παθογόνων μικροοργανισμών σε διάφορα περιβαλλοντικά αντικείμενα. Τα απολυμαντικά περιλαμβάνουν ενώσεις αλογονιδίων, φαινόλες και τα παράγωγά τους, άλατα βαρέων μετάλλων, ορισμένα οξέα, αλκάλια, αλκοόλες κ.λπ. Προκαλούν τον θάνατο των μικροβιακών κυττάρων, δρώντας σε βέλτιστες συγκεντρώσεις για ορισμένο χρόνο. Πολλά απολυμαντικά έχουν επιβλαβή επίδραση στους ιστούς του μακροοργανισμού.

Τα αντισηπτικά είναι χημικές ουσίες που μπορούν να προκαλέσουν το θάνατο μικροοργανισμών ή να εμποδίσουν την ανάπτυξη και την αναπαραγωγή τους. Χρησιμοποιούνται για θεραπευτικούς σκοπούς (χημειοθεραπεία), καθώς και για την απολύμανση τραυμάτων, δέρματος και ανθρώπινων βλεννογόνων. Αντισηπτικές ιδιότητες έχουν υπεροξείδιο του υδρογόνου, διαλύματα αλκοόλης ιωδίου, μπριγιάν πράσινη, διαλύματα υπερμαγγανικού καλίου κλπ. Ορισμένες αντισηπτικές ουσίες (οξικό, θειώδες, βενζοϊκό οξύ κ.λπ.) σε δόσεις που είναι αβλαβείς για τον άνθρωπο χρησιμοποιούνται για τη συντήρηση των τροφίμων.

Σύμφωνα με τον μηχανισμό δράσης, οι χημικές ουσίες με αντιμικροβιακή δράση μπορούν να χωριστούν σε διάφορες ομάδες.

1. Τα επιφανειοδραστικά (λιπαρά οξέα, σαπούνια και άλλα απορρυπαντικά) προκαλούν μείωση της επιφανειακής τάσης, η οποία οδηγεί σε διαταραχή της λειτουργίας του κυτταρικού τοιχώματος και της κυτταροπλασματικής μεμβράνης των μικροοργανισμών.

2. Η φαινόλη, η κρεσόλη και τα παράγωγά τους προκαλούν πήξη των μικροβιακών πρωτεϊνών. Χρησιμοποιούνται για την απολύμανση μολυσματικού υλικού στη μικροβιολογική πρακτική και στα νοσοκομεία μολυσματικών ασθενειών.

3. Οι οξειδωτικοί παράγοντες, που αλληλεπιδρούν με μικροβιακές πρωτεΐνες, διαταράσσουν τη δραστηριότητα των ενζύμων και προκαλούν μετουσίωση της πρωτεΐνης. Ενεργοί οξειδωτικοί παράγοντες είναι το χλώριο και το όζον, που χρησιμοποιούνται για την απολύμανση του πόσιμου νερού. Τα παράγωγα χλωρίου (χλωρίνη, χλωραμίνη) χρησιμοποιούνται ευρέως για σκοπούς απολύμανσης. Το υπεροξείδιο του υδρογόνου, το υπερμαγγανικό κάλιο, το ιώδιο κ.λπ. έχουν οξειδωτικές ιδιότητες.

4. Η φορμαλδεΰδη χρησιμοποιείται σε μορφή διαλύματος 40% (φορμαλίνη) για απολύμανση. Σκοτώνει φυτικές και σποριακές μορφές μικροοργανισμών. Η φορμαλίνη μπλοκάρει τις αμινομάδες των πρωτεϊνών των μικροβιακών κυττάρων και προκαλεί τη μετουσίωση τους.

5. Τα άλατα των βαρέων μετάλλων (υδράργυρος, μόλυβδος, ψευδάργυρος, χρυσός κ.λπ.) πήζουν τις πρωτεΐνες του μικροβιακού κυττάρου, προκαλώντας έτσι τον θάνατό τους. Ένας αριθμός μετάλλων (άργυρος, χρυσός, υδράργυρος κ.λπ.) έχει βακτηριοκτόνο δράση στους μικροοργανισμούς σε αμελητέες συγκεντρώσεις. Αυτή η ιδιότητα ονομάζεται ολιγοδυναμική δράση (από το λατινικό oligos - μικρό, dinamys - δύναμη). Έχει αποδειχτεί ότι το νερό στα ασημένια δοχεία δεν σαπίζει λόγω της βακτηριοκτόνου δράσης των ιόντων αργύρου. Για την πρόληψη της βλενόρροιας * νεογνά για πολύ καιρόΧρησιμοποιήθηκε 1% διάλυμα νιτρικού αργύρου. Τα κολλοειδή διαλύματα οργανικών ενώσεων αργύρου (Protargol, Collargol) χρησιμοποιούνται επίσης ως τοπικά αντισηπτικά.

* (Το Blennorea είναι μια φλεγμονή του επιπεφυκότα του ματιού που προκαλείται από τους γονοκοκκούς.)

Τα παρασκευάσματα υδραργύρου έχουν ισχυρή αντιμικροβιακή δράση. Από την αρχαιότητα, το δακλωρίδιο του υδραργύρου ή το χλωριούχο υδραργύρου (σε αραίωση 1: 1000), έχει χρησιμοποιηθεί για απολύμανση. Ωστόσο, έχει τοξική επίδραση στους ιστούς του μακροοργανισμού και η χρήση του είναι περιορισμένη.

6. Οι βαφές (Diamond Green, Rivanol κ.λπ.) έχουν την ιδιότητα της αναστολής της ανάπτυξης των βακτηρίων. Διαλύματα από έναν αριθμό χρωστικών χρησιμοποιούνται ως αντισηπτικά και προστίθενται επίσης σε ορισμένα θρεπτικά μέσα για την αναστολή της ανάπτυξης της μικροχλωρίδας που τη συνοδεύει.

Η καταστροφική επίδραση ορισμένων φυσικών και χημικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς αποτελεί τη βάση ασηπτικών και αντισηπτικών μεθόδων, που χρησιμοποιούνται ευρέως στην ιατρική και υγειονομική πρακτική.

Η άσηψη είναι ένα σύστημα προληπτικών μέτρων που αποτρέπουν τη μικροβιακή μόλυνση ενός αντικειμένου (τραύμα, χειρουργικό πεδίο, καλλιέργειες μικροοργανισμών κ.λπ.), με βάση φυσικές μεθόδους.

Τα αντισηπτικά είναι ένα σύνολο μέτρων που στοχεύουν στην καταστροφή μικροοργανισμών σε μια πληγή, σε ολόκληρο το σώμα ή σε αντικείμενα του περιβάλλοντος, χρησιμοποιώντας διάφορα απολυμαντικά χημικά.

Βιολογικοί παράγοντες

Στους φυσικούς οικοτόπους, οι μικροοργανισμοί δεν υπάρχουν μεμονωμένα, αλλά βρίσκονται σε πολύπλοκες σχέσεις, οι οποίες καταλήγουν κυρίως σε συμβίωση, μεταβίωση και ανταγωνισμό.

Η συμβίωση είναι η συγκατοίκηση των οργανισμών διαφορετικών ειδών, φέρνοντας τους αμοιβαίο όφελος. Ταυτόχρονα, μαζί αναπτύσσονται καλύτερα από κάθε ένα από αυτά ξεχωριστά.

Υπάρχουν συμβιωτικές σχέσεις μεταξύ βακτηρίων όζων και ψυχανθών, μεταξύ νηματοειδών μυκήτων και γαλαζοπράσινων φυκών (λειχήνες): Η συμβίωση βακτηρίων γαλακτικού οξέος και αλκοολικής μαγιάς χρησιμοποιείται για την παρασκευή ορισμένων προϊόντων γαλακτικού οξέος (κεφίρ, κούμισ).

Η μεταβίωση είναι ένας τύπος σχέσης κατά την οποία τα μεταβολικά προϊόντα ενός τύπου μικροοργανισμού δημιουργούν τις απαραίτητες συνθήκες για την ανάπτυξη άλλων. Για παράδειγμα, σήψης μικροοργανισμοί που διασπούν πρωτεϊνικές ουσίες συμβάλλουν στη συσσώρευση ενώσεων αμμωνίου στο περιβάλλον και δημιουργούν ευνοϊκές συνθήκεςγια την ανάπτυξη και την ανάπτυξη βακτηρίων νιτροποίησης. Και η ανάπτυξη των αναερόβων σε καλά φωτοβολταϊκά εδάφη θα ήταν αδύνατη χωρίς αερόβια που απορροφούν ελεύθερο οξυγόνο.

Οι μεταβολικές σχέσεις είναι ευρέως διαδεδομένες μεταξύ των μικροοργανισμών του εδάφους και υπογραμμίζουν τον κύκλο των ουσιών στη φύση.

Ο ανταγωνισμός είναι μια μορφή σχέσης κατά την οποία ένας μικροοργανισμός αναστέλλει την ανάπτυξη ενός άλλου ή μπορεί να προκαλέσει τον πλήρη θάνατό του. Ανταγωνιστικές σχέσεις έχουν αναπτυχθεί μεταξύ των μικροοργανισμών στον αγώνα για ύπαρξη. Παντού όπου ζουν, υπάρχει ένας συνεχής αγώνας μεταξύ τους για πηγές τροφής, οξυγόνο αέρα και βιότοπο. Έτσι, τα περισσότερα παθογόνα βακτήρια, έχοντας εισχωρήσει στο εξωτερικό περιβάλλον (έδαφος, νερό) με τις εκκρίσεις των ασθενών, δεν μπορούν να αντέξουν τον μακροχρόνιο ανταγωνισμό με πολυάριθμα σαπρόφυτα και πεθαίνουν σχετικά γρήγορα.

Ο ανταγωνισμός μπορεί να προκληθεί από την άμεση επίδραση των μικροοργανισμών μεταξύ τους ή από τη δράση των μεταβολικών προϊόντων τους. Για παράδειγμα, τα πρωτόζωα καταβροχθίζουν τα βακτήρια και οι φάγοι τα λύουν. Τα έντερα των νεογνών αποικίζονται από βακτήρια γαλακτικού οξέος Bifidobacterium bifidum. Απελευθερώνοντας γαλακτικό οξύ, καταστέλλουν την ανάπτυξη σήψης βακτηρίων και έτσι προστατεύουν τον ακόμα εύθραυστο οργανισμό από εντερικές διαταραχές βρέφη. Ορισμένοι μικροοργανισμοί στη διαδικασία της ζωής παράγουν διάφορες ουσίες που έχουν επιζήμια επίδραση στα βακτήρια και άλλα μικρόβια. Αυτές οι ουσίες περιλαμβάνουν αντιβιοτικά (βλ. «Αντιβιοτικά»).

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποιοι φυσικοί παράγοντες επηρεάζουν τη δραστηριότητα της ζωής των μικροοργανισμών;

2. Ποιες ουσίες ταξινομούνται ως απολυμαντικά και σε τι διαφέρουν ως προς τον μηχανισμό δράσης τους στους μικροοργανισμούς;

3. Να αναφέρετε ποιες σχέσεις υπάρχουν μεταξύ των μικροοργανισμών;

Αποστείρωση

Η αποστείρωση είναι η αποστείρωση, δηλαδή η πλήρης απελευθέρωση περιβαλλοντικών αντικειμένων από μικροοργανισμούς και τα σπόρια τους.

Η αποστείρωση πραγματοποιείται με διάφορους τρόπους:

1) φυσική (έκθεση σε υψηλή θερμοκρασία, ακτίνες UV, χρήση βακτηριακά φίλτρα);

2) χημικό (χρήση διαφόρων απολυμαντικών, αντισηπτικών).

3) Βιολογική (χρήση αντιβιοτικών).

Στην εργαστηριακή πρακτική, συνήθως χρησιμοποιούνται φυσικές μέθοδοι αποστείρωσης.

Η δυνατότητα και η σκοπιμότητα χρήσης μιας ή άλλης μεθόδου αποστείρωσης καθορίζεται από τα χαρακτηριστικά του υλικού που πρόκειται να αποστειρωθεί, τις φυσικές και χημικές του ιδιότητες.

Φυσικές μέθοδοι

Η φρύξη σε φλόγα καυστήρα ή το flambéing είναι μια μέθοδος αποστείρωσης κατά την οποία το αντικείμενο αποστειρώνεται πλήρως, καθώς τόσο τα φυτικά κύτταρα όσο και τα μικροβιακά σπόρια πεθαίνουν. Τυπικά, οι βακτηριολογικοί βρόχοι, οι σπάτουλες, οι πιπέτες, οι διαφάνειες και τα γυαλιά κάλυψης και τα μικρά όργανα φρύνονται. Τα ψαλίδια και τα νυστέρια δεν πρέπει να αποστειρώνονται με θέρμανση, καθώς υπό την επίδραση της φωτιάς η επιφάνεια κοπής γίνεται θαμπή.

Αποστείρωση με ξηρή θερμότητα

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα ή ζεστό αέρα πραγματοποιείται σε φούρνους Pasteur (ξήρανση φούρνους ξηρής θερμότητας). Ο φούρνος Pasteur είναι ένα ντουλάπι με διπλά τοιχώματα κατασκευασμένο από ανθεκτικά στη θερμότητα υλικά - μέταλλο και αμίαντο. Θερμάνετε το ντουλάπι χρησιμοποιώντας καυστήρες αερίου ή ηλεκτρικές συσκευές θέρμανσης. Τα ηλεκτρικά θερμαινόμενα ντουλάπια είναι εξοπλισμένα με ρυθμιστές για την εξασφάλιση της απαιτούμενης θερμοκρασίας. Για τον έλεγχο της θερμοκρασίας, υπάρχει ένα θερμόμετρο τοποθετημένο στην οπή στο επάνω τοίχωμα του ντουλαπιού.

Η ξηρή θερμότητα χρησιμοποιείται για την αποστείρωση εργαστηριακών γυαλικών. Τα πιάτα που προετοιμάζονται για αποστείρωση φορτώνονται χαλαρά στο φούρνο για να διασφαλιστεί η ομοιόμορφη και αξιόπιστη θέρμανση του υλικού που αποστειρώνεται. Κλείστε καλά την πόρτα του ντουλαπιού, ενεργοποιήστε τη συσκευή θέρμανσης, φέρτε τη θερμοκρασία στους 160-165 ° C και αποστειρώστε σε αυτή τη θερμοκρασία για 1 ώρα. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε τη θέρμανση, αλλά μην ανοίξετε την πόρτα του ντουλαπιού μέχρι Ο φούρνος έχει κρυώσει. σε διαφορετική περίπτωση κρύος αέρας, η είσοδος στο ντουλάπι μπορεί να προκαλέσει ρωγμές στα ζεστά μαγειρικά σκεύη.

Η αποστείρωση σε φούρνο Pasteur μπορεί να πραγματοποιηθεί σε διαφορετικά σημεία συνθήκες θερμοκρασίαςκαι έκθεση (χρόνος αποστείρωσης) (Πίνακας 1).

Τα υγρά (θρεπτικά μέσα, ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου κ.λπ.), τα είδη από καουτσούκ και συνθετικά υλικά δεν μπορούν να αποστειρωθούν με ξηρή θερμότητα, καθώς τα υγρά βράζουν και χύνονται και το καουτσούκ και τα συνθετικά υλικά λιώνουν.

Για τον έλεγχο της αποστείρωσης σε φούρνο Pasteur, τα μεταξωτά νήματα υγραίνονται σε καλλιέργεια βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους, ξηραίνονται, τοποθετούνται σε αποστειρωμένο τρυβλίο Petri και τοποθετούνται σε φούρνο Pasteur. Η αποστείρωση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 165° C για 1 ώρα (για έλεγχο, μερικά από τα νήματα αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου). Στη συνέχεια τα αποστειρωμένα νήματα και τα νήματα ελέγχου τοποθετούνται στην επιφάνεια του άγαρ σε τρυβλίο Petri ή τοποθετούνται σε δοκιμαστικούς σωλήνες με ζωμό και επωάζονται σε θερμοστάτη στους 37°C για 2 ημέρες. Με τη σωστή λειτουργία του φούρνου Pasteur, δεν θα αναπτυχθεί σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή πιάτα με θρεπτικά μέσα στα οποία τοποθετήθηκαν αποστειρωμένα νήματα, καθώς τα βακτηριακά σπόρια θα πεθάνουν, ενώ τα βακτηριακά σπόρια σε κλωστές που δεν ήταν αποστειρωμένα (έλεγχος) θα φυτρώσουν σε θρεπτικό συστατικό Η ανάπτυξη των μέσων ενημέρωσης θα σημειωθεί.

Για να προσδιορίσετε τη θερμοκρασία στο εσωτερικό του φούρνου Pasteur, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε σακχαρόζη ή κρυσταλλική ζάχαρη, η οποία καραμελώνει σε θερμοκρασία 165-170 ° C.

Προετοιμασία εργαστηριακών υαλικών για αποστείρωση σε φούρνο Pasteur. Πριν από την αποστείρωση, τα εργαστηριακά γυάλινα σκεύη (τρυβλία Petri, διαβαθμισμένες πιπέτες και Παστέρ, φιαλίδια, φιάλες, δοκιμαστικοί σωλήνες) πρέπει να πλυθούν καλά, να στεγνώσουν και να τυλιχτούν σε χαρτί, διαφορετικά μετά την αποστείρωση μπορεί να μολυνθούν ξανά με βακτήρια αέρα.

Τα πιάτα Petri τυλίγονται σε χαρτί ένα ή περισσότερα κομμάτια κάθε φορά ή τοποθετούνται σε ειδικές μεταλλικές θήκες.

Βαμβακερά μάκτρα εισάγονται στα πάνω άκρα των πιπετών για να αποτραπεί η είσοδος του υλικού δοκιμής στο στόμα. Οι βαθμολογημένες πιπέτες τυλίγονται σε μακριές λωρίδες χαρτιού πλάτους 4-5 εκ. Ο όγκος της τυλιγμένης πιπέτας σημειώνεται στο χαρτί. Στις μολυβοθήκες, οι βαθμονομημένες πιπέτες αποστειρώνονται χωρίς επιπλέον τύλιγμα σε χαρτί.

Σημείωση. Εάν η διαβάθμιση στις πιπέτες είναι ελάχιστα ορατή, αποκαθίσταται πριν από την αποστείρωση. Εφαρμόστε σε μια πιπέτα λαδομπογιάκαι, χωρίς να αφήσετε το χρώμα να στεγνώσει, τρίβεται σε σκόνη θειικού βαρίου με ένα πανί. Μετά από αυτό, αφαιρέστε την περίσσεια χρώματος με ένα πανί, το οποίο παραμένει μόνο στις εγκοπές βαθμολόγησης. Οι πιπέτες που αντιμετωπίζονται με αυτόν τον τρόπο θα πρέπει να ξεπλυθούν.

Οι αιχμηρές άκρες των πιπετών Παστέρ σφραγίζονται σε φλόγα καυστήρα και τυλίγονται σε χαρτί, 3-5 τεμάχια τη φορά. Οι πιπέτες Pasteur πρέπει να τυλίγονται προσεκτικά ώστε να μην σπάσουν τα σφραγισμένα άκρα των τριχοειδών αγγείων.

Φιαλίδια, φιάλες, δοκιμαστικοί σωλήνες κλείνονται με πώματα από βαμβακερή γάζα. Ο φελλός πρέπει να μπαίνει στο λαιμό του σκάφους κατά τα 2/3 του μήκους του, όχι πολύ σφιχτό, αλλά ούτε χαλαρό. Ένα χάρτινο πώμα τοποθετείται πάνω από τα πώματα σε κάθε δοχείο (εκτός από τους δοκιμαστικούς σωλήνες). Οι δοκιμαστικοί σωλήνες δένονται μεταξύ τους σε ομάδες των 5-50 και τυλίγονται με χαρτί.

Σημείωση. Στο υψηλές θερμοκρασίεςτο χαρτί στο οποίο είναι τυλιγμένα φλιτζάνια και πιπέτες και το βαμβάκι κιτρινίζει και μπορεί ακόμη και να απανθρακωθεί, έτσι όλοι νέα ποικιλίατο χαρτί που παραλαμβάνεται από το εργαστήριο θα πρέπει να ελέγχεται στις αποδεκτές συνθήκες θερμοκρασίας.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Τι σημαίνει ο όρος στείρωση;

2. Πώς γίνεται η αποστείρωση;

3. Τι αποστειρώνεται με φρύξη στη φωτιά;

4. Περιγράψτε τη δομή και τον τρόπο λειτουργίας του φούρνου Pasteur.

5. Τι αποστειρώνεται σε φούρνο Παστέρ;

6. Πώς προετοιμάζονται τα γυάλινα σκεύη για αποστείρωση;

7. Γιατί δεν μπορούν να αποστειρωθούν θρεπτικά υλικά και αντικείμενα από καουτσούκ σε φούρνο Pasteur;

Ασκηση

Προετοιμάστε τρυβλία Petri, βαθμονομημένες πιπέτες, πιπέτες Παστέρ, δοκιμαστικούς σωλήνες, φιάλες και φιαλίδια για αποστείρωση.

Αποστείρωση με βράσιμο

Το βράσιμο είναι μια μέθοδος αποστείρωσης που εγγυάται τη στειρότητα υπό την προϋπόθεση ότι δεν υπάρχουν σπόρια στο αποστειρωμένο υλικό. Χρησιμοποιείται για την επεξεργασία συρίγγων, οργάνων, γυάλινων και μεταλλικών σκευών, σωλήνων από καουτσούκ κ.λπ.

Η αποστείρωση με βρασμό πραγματοποιείται συνήθως σε αποστειρωτή - μεταλλικό κουτί ορθογώνιο σχήμαμε καπάκι που εφαρμόζει σφιχτά. Το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί τοποθετείται στο πλέγμα που είναι διαθέσιμο στον αποστειρωτή και γεμίζεται με νερό. Για να αυξήσετε το σημείο βρασμού και να εξαλείψετε τη σκληρότητα του νερού, προσθέστε 1-2% διττανθρακικό νάτριο (καλύτερα να χρησιμοποιήσετε απεσταγμένο νερό). Ο αποστειρωτής κλείνεται με καπάκι και θερμαίνεται Αρχή της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή βρασμού του νερού, ο χρόνος βρασμού είναι 15-30 λεπτά. Στο τέλος της αποστείρωσης, το πλέγμα με τα όργανα αφαιρείται από τις πλαϊνές λαβές με ειδικά άγκιστρα και τα εργαλεία σε αυτό λαμβάνονται με αποστειρωμένα τσιμπιδάκια ή λαβίδες, τα οποία βράζονται μαζί με τα υπόλοιπα όργανα.

Η αποστείρωση με ατμό πραγματοποιείται με δύο τρόπους: 1) με ατμό υπό πίεση. 2) ρέον ατμός.

Αποστείρωση με ατμό υπό πίεσηπαράγεται σε αυτόκλειστο. Αυτή η μέθοδος αποστείρωσης βασίζεται στην έκθεση των υλικών που αποστειρώνονται σε κορεσμένους υδρατμούς σε πίεση πάνω από την ατμοσφαιρική. Ως αποτέλεσμα μιας τέτοιας αποστείρωσης, τόσο οι φυτικές όσο και οι σποριακές μορφές μικροοργανισμών πεθαίνουν με μία μόνο επεξεργασία.

Ένα αυτόκλειστο (Εικ. 12) είναι ένας τεράστιος λέβητας, καλυμμένος εξωτερικά με μεταλλικό περίβλημα, ερμητικά σφραγισμένο με ένα καπάκι, το οποίο βιδώνεται σφιχτά στον λέβητα με αρθρωτούς κοχλίες. Μια άλλη, μικρότερης διαμέτρου, που ονομάζεται θάλαμος αποστείρωσης, εισάγεται στον εξωτερικό λέβητα. Τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν τοποθετούνται σε αυτόν τον θάλαμο. Ανάμεσα στους δύο λέβητες υπάρχει ελεύθερος χώρος, που ονομάζεται θάλαμος υδρατμών. Το νερό χύνεται σε αυτόν τον θάλαμο μέσω μιας χοάνης στερεωμένης στο εξωτερικό σε ένα ορισμένο επίπεδο που σημειώνεται σε έναν ειδικό σωλήνα μέτρησης νερού. Όταν το νερό βράζεται σε θάλαμο νερού-ατμού, παράγεται ατμός. Ο θάλαμος αποστείρωσης είναι εξοπλισμένος με μια στρόφιγγα εξόδου με μια βαλβίδα ασφαλείας για να επιτρέπει στον ατμό να διαφεύγει όταν η πίεση αυξάνεται πάνω από το απαιτούμενο επίπεδο. Ένα μανόμετρο χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της πίεσης που δημιουργείται στο θάλαμο αποστείρωσης.

Ρύζι. 12. Διάγραμμα αυτόκλειστου. M - μανόμετρο; PC - βαλβίδα ασφαλείας. Β - χοάνη για νερό. K 2 - βρύση για απελευθέρωση νερού. K 3 - βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού

Κανονικός Ατμοσφαιρική πίεση(760 mmHg) λαμβάνεται ως μηδέν. Υπάρχει μια ορισμένη σχέση μεταξύ των ενδείξεων του μανόμετρου και της θερμοκρασίας (Πίνακας 2).

Επί του παρόντος, υπάρχουν αυτόκλειστα με αυτόματο έλεγχο του τρόπου λειτουργίας. Εκτός από το συνηθισμένο μανόμετρο, είναι εξοπλισμένα ηλεκτρικό μανόμετρο επαφής, που εμποδίζει την αύξηση της πίεσης πάνω από μια προκαθορισμένη τιμή και έτσι εξασφαλίζει τη σταθερότητα της επιθυμητής θερμοκρασίας στο αυτόκλειστο.

Ο ατμός υπό πίεση αποστειρώνει διάφορα θρεπτικά μέσα (εκτός από αυτά που περιέχουν φυσικές πρωτεΐνες), υγρά (ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, νερό κ.λπ.). συσκευές, ειδικά αυτές με ελαστικά μέρη.

Η θερμοκρασία και η διάρκεια του αποστείρωσης σε αυτόκαυστο των θρεπτικών μέσων καθορίζονται από τη σύνθεσή τους που καθορίζεται στη συνταγή για την παρασκευή του θρεπτικού μέσου. Για παράδειγμα, απλά μέσα (άγαρ κρέατος-πεπτόνης, ζωμός κρέατος-πεπτόνης) αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120 ° C (1 atm). Ωστόσο, σε αυτή τη θερμοκρασία είναι αδύνατο να αποστειρωθούν μέσα που περιέχουν φυσικές πρωτεΐνες, υδατάνθρακες και άλλες ουσίες που αλλάζουν εύκολα με θέρμανση. Τα μέσα με υδατάνθρακες αποστειρώνονται κλασματικά στους 100°C ή σε αυτόκλειστο στους 112°C (0,5 atm) για 10-15 λεπτά. Διάφορα υγρά, συσκευές με ελαστικούς σωλήνες, βύσματα, βακτηριακά κεριά και φίλτρα αποστειρώνονται για 20 λεπτά στους 120 ° C (1 atm).

Προσοχή! Το μολυσμένο υλικό εξουδετερώνεται επίσης σε αυτόκλειστα. Φλιτζάνια και δοκιμαστικοί σωλήνες που περιέχουν καλλιέργειες μικροοργανισμών τοποθετούνται σε ειδικούς μεταλλικούς κάδους ή δεξαμενές με τρύπες στο καπάκι για διείσδυση ατμού και αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο στους 126 ° C (1,5 atm) για 1 ώρα. Τα όργανα αποστειρώνονται με τον ίδιο τρόπο μετά την εργασία με βακτήρια, σχηματίζοντας διαφωνίες.

Μόνο ειδικά εκπαιδευμένα άτομα επιτρέπεται να εργάζονται με το αυτόκλειστο, τα οποία πρέπει να ακολουθούν αυστηρά και με ακρίβεια τους κανόνες που καθορίζονται στις οδηγίες που παρέχονται με τη συσκευή.

Τεχνική αυτόκλειστου. 1. Πριν από την εργασία, ελέγξτε τη δυνατότητα συντήρησης όλων των εξαρτημάτων και τη λείανση των κρουνών.

2. Το νερό (απεσταγμένο ή βρασμένο για να αποφευχθεί ο σχηματισμός αλάτων) χύνεται μέσω μιας χοάνης τοποθετημένης έξω από το λέβητα μέχρι το επάνω σημάδι του ποτηριού του μετρητή νερού. Η βρύση κάτω από τη χοάνη είναι κλειστή.

3. Το προς αποστείρωση υλικό τοποθετείται στο θάλαμο αποστείρωσης πάνω σε ειδικό πλέγμα. Τα αντικείμενα δεν πρέπει να φορτώνονται πολύ σφιχτά, καθώς ο ατμός πρέπει να περνά ελεύθερα ανάμεσά τους, διαφορετικά δεν θα ζεσταθούν στην απαιτούμενη θερμοκρασία και μπορεί να παραμείνουν αποστειρωμένα.

4. Η ελαστική φλάντζα στο καπάκι τρίβεται με κιμωλία για καλύτερη στεγανοποίηση.

5. Το καπάκι είναι κλειστό και βιδωμένο στο σώμα του αυτόκλειστου και τα μπουλόνια βιδώνονται σε ζευγάρια σταυρωτά.

6. Ανοίξτε τη βαλβίδα εξόδου που συνδέει το θάλαμο αποστείρωσης με τον εξωτερικό αέρα μέχρι τέρμα και αρχίστε να θερμαίνετε το αυτόκλειστο. Το αυτόκλειστο συνήθως θερμαίνεται με αέριο ή ηλεκτρική ενέργεια.

Όταν το αυτόκλειστο θερμαίνεται, το νερό βράζει, ο ατμός που προκύπτει ανεβαίνει ανάμεσα στα τοιχώματα των λεβήτων και μέσω ειδικών οπών στο τοίχωμα του εσωτερικού λέβητα (βλ. Εικ. 12), εισέρχεται στον θάλαμο αποστείρωσης και εξέρχεται από την ανοιχτή βαλβίδα εξόδου. Πρώτον, ο ατμός διαφεύγει μαζί με τον αέρα στο αυτόκλειστο. Είναι απαραίτητο όλος ο αέρας να βγαίνει έξω από το αυτόκλειστο, διαφορετικά η ένδειξη του μανόμετρου δεν θα αντιστοιχεί στη θερμοκρασία στο αυτόκλειστο.

Η εμφάνιση ενός συνεχούς ισχυρού ρεύματος ατμού υποδηλώνει πλήρη απομάκρυνση του αέρα από το αυτόκλειστο. Μετά από αυτό, η βαλβίδα εξόδου κλείνει και η πίεση μέσα στο αυτόκλειστο αρχίζει σταδιακά να αυξάνεται.

7. Ως έναρξη της αποστείρωσης θεωρείται η στιγμή που οι ενδείξεις του μανόμετρου φτάνουν την καθορισμένη τιμή. Η θέρμανση ρυθμίζεται έτσι ώστε η πίεση στο αυτόκλειστο να μην αλλάζει σε μια συγκεκριμένη χρονική περίοδο.

8. Μετά τη λήξη του χρόνου αποστείρωσης, η θέρμανση του αυτόκλειστου διακόπτεται και ο ατμός απελευθερώνεται μέσω της βαλβίδας εξόδου. Όταν η βελόνα του μανόμετρου πέσει στο μηδέν, ανοίξτε το καπάκι. Για να αποφύγετε εγκαύματα από τον ατμό που παραμένει στο αυτόκλειστο, το καπάκι θα πρέπει να ανοίξει προς το μέρος σας.

Το επίπεδο θερμοκρασίας στο αυτόκλειστο, δηλαδή η ορθότητα των ενδείξεων του μανόμετρου, μπορεί να ελεγχθεί. Για να το κάνετε αυτό, χρησιμοποιήστε διάφορες ουσίες που έχουν ορισμένο σημείο τήξης: αντιπυρίνη (113 ° C), ρεσορκινόλη και θείο (119 ° C), βενζοϊκό οξύ (120 ° C). Μία από αυτές τις ουσίες αναμειγνύεται με αμελητέα ποσότητα χρωστικής ουσίας (μουχσίνη ή μπλε του μεθυλενίου) και χύνεται σε ένα γυάλινο σωλήνα, ο οποίος σφραγίζεται και τοποθετείται σε κατακόρυφη θέσηΜεταξύ του υλικού που αποστειρώνεται. Εάν η θερμοκρασία είναι επαρκής, η ουσία θα λιώσει και θα πάρει το χρώμα της αντίστοιχης βαφής.

Για να ελεγχθεί η αποτελεσματικότητα της αποστείρωσης, ένας δοκιμαστικός σωλήνας με γνωστή καλλιέργεια σπορίων τοποθετείται στο αυτόκλειστο. Μετά την αποστείρωση σε αυτόκλειστο, ο σωλήνας μεταφέρεται σε θερμοστάτη για 24-48 ώρες, σημειώνεται η απουσία ή η παρουσία ανάπτυξης. Η έλλειψη ανάπτυξης υποδηλώνει σωστή λειτουργία της συσκευής.

Αποστείρωση με ρέον ατμόπαράγεται στη συσκευή Koch. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου το αντικείμενο που αποστειρώνεται αλλάζει σε θερμοκρασία πάνω από 100° C. Τα θρεπτικά υλικά που περιέχουν ουρία, υδατάνθρακες, γάλα, πατάτες, ζελατίνη κ.λπ. αποστειρώνονται με ρέον ατμό.

Η συσκευή Koch (λέβητας) είναι ένας μεταλλικός κύλινδρος επενδυμένος εξωτερικά (για μείωση της μεταφοράς θερμότητας) με τσόχα ή αμίαντο. Ο κύλινδρος είναι κλειστός με κωνικό καπάκι με οπή για τη διαφυγή του ατμού. Μέσα στον κύλινδρο υπάρχει μια βάση, στο επίπεδο της οποίας χύνεται νερό. Ένας κουβάς με τρύπα τοποθετείται στη βάση στην οποία τοποθετείται το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί. Η συσκευή Koch θερμαίνεται με φυσικό αέριο ή ηλεκτρική ενέργεια. Ο χρόνος αποστείρωσης υπολογίζεται από τη στιγμή της έντονης απελευθέρωσης ατμού στα άκρα του καπακιού και από την έξοδο ατμού. Αποστειρώστε για 30-60 λεπτά. Στο τέλος της αποστείρωσης, η θέρμανση σταματά. Αφαιρέστε τον κάδο με το υλικό από τη συσκευή και αφήστε το σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την επόμενη μέρα. Η θέρμανση πραγματοποιείται για 3 συνεχόμενες ημέρες σε θερμοκρασία 100°C για 30-60 λεπτά. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται κλασματική αποστείρωση. Κατά την πρώτη θέρμανση πεθαίνουν οι φυτικές μορφές μικροβίων, ενώ οι μορφές των σπορίων διατηρούνται. Μέσα σε μια μέρα, τα σπόρια καταφέρνουν να βλαστήσουν και να μετατραπούν σε φυτικές μορφές, οι οποίες πεθαίνουν τη δεύτερη μέρα της στείρωσης. Δεδομένου ότι είναι πιθανό ορισμένα από τα σπόρια να μην είχαν χρόνο να βλαστήσουν, το υλικό διατηρείται για άλλες 24 ώρες και στη συνέχεια πραγματοποιείται μια τρίτη αποστείρωση. Δεν απαιτείται αποστείρωση με ρέοντα ατμό σε συσκευή Koch ειδικό έλεγχο, αφού η στειρότητα του παρασκευασμένου θρεπτικού μέσου αποτελεί ένδειξη της σωστής λειτουργίας της συσκευής. Μπορείτε επίσης να αποστειρώσετε με ρέοντα ατμό σε αυτόκλειστο με το καπάκι ξεβιδωμένο και τη βαλβίδα εξόδου ανοιχτή.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποια θρεπτικά μέσα ενημέρωσης αποστειρώνονται;

2. Τι είναι ένας αποστειρωτής και πώς λειτουργεί;

3. Γιατί πρέπει να χρησιμοποιείται απεσταγμένο νερό κατά την αποστείρωση με βρασμό;

4. Περιγράψτε τη δομή και τον τρόπο λειτουργίας του αυτόκλειστου.

5. Τι αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο;

6. Τι χρησιμεύει ως έλεγχος για τη σωστή αποστείρωση κατά το αυτόκαυστο;

7. Τι ρέει η αποστείρωση ατμού;

8. Περιγράψτε τη δομή της συσκευής Koch.

9. Ποιος είναι ο σκοπός της κλασματικής αποστείρωσης;

Ασκηση

Συμπληρώστε τη φόρμα.

Η κλασματική αποστείρωση μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί σε πηκτικό Koch.

Το πηκτικό του Koch χρησιμοποιείται για την πήξη του ορού γάλακτος και των μέσων καλλιέργειας αυγών και ταυτόχρονα με τη συμπίεση του μέσου, αποστειρώνεται.

Το πηκτικό του Κοχείναι ένα επίπεδο μεταλλικό κουτί με διπλά τοιχώματα καλυμμένο εξωτερικά θερμομονωτικό υλικό. Το νερό χύνεται στο χώρο μεταξύ των τοίχων μέσω μιας ειδικής οπής που βρίσκεται στο πάνω μέρος του εξωτερικού τοίχου. Η τρύπα κλείνει με ένα πώμα στο οποίο εισάγεται ένα θερμόμετρο. Η συσκευή κλείνει με δύο καπάκια: γυαλί και μέταλλο. Μέσα από το γυάλινο καπάκι μπορείτε να παρατηρήσετε τη διαδικασία πήξης. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες με μέσα τοποθετούνται στο κάτω μέρος του πηκτικού σε κεκλιμένη θέση.

Ο θρομβωτής θερμαίνεται με αέριο ή ηλεκτρική ενέργεια. Τα μέσα αποστειρώνονται μία φορά σε θερμοκρασία 90°C για 1 ώρα ή κλασματικά - 3 ημέρες στη σειρά στους 80°C για 1 ώρα.

Τυνδαλοποίηση* - κλασματική αποστείρωση σε χαμηλές θερμοκρασίες - χρησιμοποιείται για ουσίες που καταστρέφονται και μετουσιώνονται εύκολα σε θερμοκρασία 60 ° C (για παράδειγμα, πρωτεϊνικά υγρά). Το προς αποστείρωση υλικό θερμαίνεται σε λουτρό νερού ή σε ειδικές συσκευές με θερμοστάτες σε θερμοκρασία 56-58 ° C για μία ώρα για 5 συνεχόμενες ημέρες.

* (Η μέθοδος αποστείρωσης πήρε το όνομά της από τον Tyndall, ο οποίος την πρότεινε.)

Παστερίωση- αποστείρωση στους 65-70 ° C για 1 ώρα, που προτείνεται από τον Παστέρ για την καταστροφή μη σποριακών μορφών μικροβίων. Το γάλα, το κρασί, η μπύρα, οι χυμοί φρούτων και άλλα προϊόντα παστεριώνονται. Το γάλα παστεριώνεται για την απομάκρυνση του γαλακτικού οξέος και των παθογόνων βακτηρίων (βρουκέλλα, μυκοβακτηρίδιο της φυματίωσης, σιγκέλα, σαλμονέλα, σταφυλόκοκκος κ.λπ.). Κατά την παστερίωση της μπύρας, των χυμών φρούτων και του κρασιού, μικροοργανισμοί που προκαλούν διαφορετικά είδηζύμωση. Τα παστεριωμένα τρόφιμα διατηρούνται καλύτερα σε ψυγείο.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποιος είναι ο σκοπός και η δομή του πηκτικού Koch;

2. Ποιες είναι οι μέθοδοι αποστείρωσης σε μηχανή πήξης;

3. Τι είναι η Tyndalization;

4. Τι είναι η παστερίωση;

Αποστείρωση με υπεριώδη ακτινοβολία

Η αποστείρωση με ακτίνες UV πραγματοποιείται με τη χρήση ειδικών εγκαταστάσεων - βακτηριοκτόνων λαμπτήρων. Οι ακτίνες UV έχουν υψηλή αντιμικροβιακή δράση και μπορούν να προκαλέσουν θάνατο όχι μόνο βλαστικών κυττάρων, αλλά και σπορίων. Η ακτινοβολία UV χρησιμοποιείται για την αποστείρωση του αέρα σε νοσοκομεία, χειρουργεία, παιδικά ιδρύματα κ.λπ. Σε ένα μικροβιολογικό εργαστήριο, ένα κουτί υποβάλλεται σε επεξεργασία με ακτίνες UV πριν από την εργασία.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποιες ιδιότητες έχουν οι υπεριώδεις ακτίνες;

2. Σε ποιες περιπτώσεις χρησιμοποιείται αποστείρωση με υπεριώδη ακτινοβολία;

Μηχανική αποστείρωση με χρήση βακτηριακών φίλτρων

Η αποστείρωση με διήθηση χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου τα αντικείμενα που αποστειρώνονται αλλάζουν όταν θερμαίνονται. Η διήθηση πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας βακτηριακά φίλτρα κατασκευασμένα από διάφορα λεπτά πορώδη υλικά. Οι πόροι των φίλτρων πρέπει να είναι αρκετά μικροί (μέχρι 1 micron) ώστε να διασφαλίζεται η μηχανική κατακράτηση βακτηρίων, επομένως ορισμένοι συγγραφείς αναφέρονται στη διήθηση ως μηχανικές μεθόδουςαποστείρωση.

Η μέθοδος διήθησης χρησιμοποιείται για την αποστείρωση θρεπτικών μέσων που περιέχουν πρωτεΐνη, ορό και ορισμένα αντιβιοτικά, καθώς και για τον διαχωρισμό των βακτηρίων από τους ιούς, τους φάγους και τις εξωτοξίνες.

Στη μικροβιολογική πρακτική χρησιμοποιούνται φίλτρα αμιάντου Seitz, φίλτρα μεμβράνης και φίλτρα Chamberlant και Berkefeld (κεριά).

Τα φίλτρα Seitz είναι δίσκοι κατασκευασμένοι από μείγμα αμιάντου και κυτταρίνης. Το πάχος τους είναι 3-5 mm, διάμετρος 35-140 mm. Η εγχώρια βιομηχανία παράγει φίλτρα δύο εμπορικών σημάτων: "F" (φιλτράρισμα) - συγκρατούν αιωρούμενα σωματίδια αλλά επιτρέπουν στα βακτήρια να περάσουν. "SF" (αποστείρωση) - με μικρότερους πόρους, που συγκρατούν τα βακτήρια, αλλά επιτρέπουν στους ιούς να περάσουν. Οι τσαλακωμένες πλάκες αμιάντου, καθώς και οι πλάκες με σπασίματα και ρωγμές, είναι ακατάλληλες για εργασία.

Τα φίλτρα μεμβράνης κατασκευάζονται από νιτροκυτταρίνη. Είναι δίσκοι άσπροΠάχος 0,1 mm και διάμετρος 35 mm. Ανάλογα με το μέγεθος των πόρων, χαρακτηρίζονται Νο. 1, 2, 3, 4 και 5 (Πίνακας 3).

Το φίλτρο Νο. 1 είναι το πλέον κατάλληλο για αποστείρωση. Εκτός από αυτά που αναφέρονται, παράγουν επίσης ένα λεγόμενο προ-φίλτρο, σχεδιασμένο να απελευθερώνει το φιλτραρισμένο υγρό από μεγάλα σωματίδια που περιέχονται σε αυτό.

Τα φίλτρα Chamberlant και Berkefeld (κεριά) είναι κοίλοι κύλινδροι, κλειστοί στο ένα άκρο. Τα κεριά Chamberlant κατασκευάζονται από καολίνη αναμεμειγμένο με άμμο και χαλαζία. Είναι τυποποιημένα με βάση το μέγεθος των πόρων και ονομάζονται L 1, L 2, L 3 ... L 13. Τα φίλτρα Berkefeld (κεριά) παρασκευάζονται από χώμα έγχυσης· ανάλογα με το μέγεθος των πόρων τους χαρακτηρίζονται V, N, W, που αντιστοιχεί σε διάμετρο πόρων 3-4, 4-7, 8-12 microns.

Η εργασία με βακτηριακά φίλτρα πραγματοποιείται ως εξής. Το φίλτρο πρέπει να στερεωθεί σε ειδική θήκη, η οποία εισάγεται στον δέκτη φίλτρου. Ο δέκτης είναι συνήθως μια φιάλη Bunsen. Οι βάσεις, στις περισσότερες περιπτώσεις από ανοξείδωτο χάλυβα, αποτελούνται από δύο μέρη: το επάνω, σε σχήμα κυλίνδρου χωρίς πάτο, και το κάτω, ένα τμήμα στήριξης που καταλήγει σε σωλήνα. Τα φίλτρα Seitz με την τραχιά επιφάνεια προς τα πάνω τοποθετούνται σε μεταλλικό πλέγμα και σφίγγονται σφιχτά με βίδες μεταξύ της κορυφής και κάτω μέροςκάτοχος. Το τοποθετημένο φίλτρο στερεώνεται σε ένα ελαστικό πώμα που εισάγεται στο λαιμό μιας φιάλης Bunsen. Μια μπατονέτα εισάγεται στον σωλήνα εξόδου της φιάλης, η οποία συνδέεται με την αντλία κενού. Η προετοιμασμένη εγκατάσταση τυλίγεται σε χαρτί και αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο υπό πίεση 1 atm για 20-30 λεπτά. Ολόκληρη η συναρμολογημένη συσκευή ονομάζεται επίσης φίλτρο Seitz (Εικ. 13).

Αμέσως πριν από τη διήθηση, το άκρο εξόδου της φιάλης Bunsen συνδέεται με έναν ελαστικό σωλήνα σε μια αντλία λαδιού ή εκτόξευσης νερού. Οι ενώσεις των διαφόρων τμημάτων γεμίζονται με παραφίνη για να δημιουργηθεί μια σφιχτή σφράγιση. Το φιλτραρισμένο υγρό χύνεται στον κύλινδρο της συσκευής και η αντλία ενεργοποιείται, δημιουργώντας ένα κενό στον δέκτη. Ως αποτέλεσμα της διαφοράς πίεσης που προκύπτει, το φιλτραρισμένο υγρό περνά μέσα από τους πόρους του φίλτρου στον δέκτη και τα μικρόβια παραμένουν στην επιφάνεια του φίλτρου.

Πριν από τη χρήση, τα φίλτρα μεμβράνης αποστειρώνονται με βρασμό σε απεσταγμένο νερό. Για να αποφευχθεί η κατσαροποίηση των φίλτρων, τοποθετούνται πρώτα σε απεσταγμένο νερό, θερμαίνονται σε θερμοκρασία 50-60 ° C και βράζονται σε χαμηλή φωτιά για 30 λεπτά, αλλάζοντας το νερό 2-3 φορές. Η βάση και ο δέκτης του φίλτρου αποστειρώνονται εκ των προτέρων και η συσκευή τοποθετείται υπό άσηπτες συνθήκες. Για να αποφύγετε το σκίσιμο του φίλτρου μεμβράνης στο μεταλλικό πλέγμα, τοποθετήστε κούπες με αποστειρωμένο διηθητικό χαρτί κάτω από αυτό. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας αποστειρωμένα τσιμπιδάκια με λείες άκρες, αφαιρέστε το φίλτρο μεμβράνης από τον αποστειρωτή και τοποθετήστε το στο πλέγμα στήριξης με τη γυαλιστερή επιφάνεια προς τα κάτω.

Κεριά (Chamberlant) που αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο συνδέονται μέσω ενός ελαστικού σωλήνα σε έναν δέκτη και κατεβαίνουν σε ένα δοχείο (συνήθως κύλινδρο) με ένα φιλτραρισμένο υγρό. Το φιλτράρισμα πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας αντλία κενού. Ένα αποστειρωμένο διήθημα εισέρχεται στον δέκτη και τα βακτήρια συγκρατούνται από τους πόρους του κεριού.

Τα φίλτρα μεμβράνης και αμιάντου είναι σχεδιασμένα για μία χρήση. Μετά τη χρήση, τα κεριά βράζονται σε νερό βρύσης και στη συνέχεια φρύνονται σε φούρνο σιγαστήρα.

Πριν από την επόμενη χρήση, τα κεριά ελέγχονται για ακεραιότητα. Το κερί κατεβαίνει σε ένα δοχείο με νερό και περνάει αέρας. Εάν εμφανιστούν φυσαλίδες αέρα στην επιφάνεια του κεριού, σημαίνει ότι έχουν δημιουργηθεί ρωγμές στο κερί και δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποια είναι η μέθοδος αποστείρωσης φίλτρου; Τι αποστειρώνεται με αυτή τη μέθοδο;

2. Ποια βακτηριακά φίλτρα γνωρίζετε; Πώς τοποθετείται η συσκευή φιλτραρίσματος, ποιες προϋποθέσεις πρέπει να τηρούνται;

Χημικές μέθοδοι

Αυτός ο τύπος αποστείρωσης χρησιμοποιείται σε περιορισμένο βαθμό και χρησιμεύει κυρίως για την πρόληψη της βακτηριακής μόλυνσης των μέσων καλλιέργειας και των ανοσοβιολογικών παρασκευασμάτων (εμβόλια και οροί).

Ουσίες όπως το χλωροφόρμιο, το τολουόλιο και ο αιθέρας προστίθενται συχνότερα στα θρεπτικά μέσα. Εάν είναι απαραίτητο να ελευθερωθεί το μέσο από αυτά τα συντηρητικά, θερμαίνεται σε λουτρό νερού στους 56 ° C (τα συντηρητικά εξατμίζονται).

Για να διατηρήσετε τα εμβόλια και τους ορούς, χρησιμοποιήστε merthiolate. βορικό οξύ, φορμαλίνη κ.λπ.

Βιολογική αποστείρωση

Η βιολογική στείρωση βασίζεται στη χρήση αντιβιοτικών. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια ιών.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Τι είναι χημική αποστείρωσηκαι πότε χρησιμοποιείται;

2. Τι είναι η βιολογική αποστείρωση;

Οι κύριες μέθοδοι αποστείρωσης παρουσιάζονται στον πίνακα. 4.

1 (Η αποστείρωση είναι ατελής: τα σπόρια παραμένουν στο αποστειρωμένο υλικό.)

2 (Η αποστείρωση είναι ατελής: οι ιοί παραμένουν στο αποστειρωμένο υλικό.)

Απολύμανση

Στη μικροβιολογική πρακτική χρησιμοποιούνται διάφορα απολυμαντικά: διαλύματα φαινόλης 3-5%, διαλύματα Lysol 5-10%, διαλύματα χλωραμίνης 1-5%, διαλύματα υπεροξειδίου του υδρογόνου 3-6%, διαλύματα φορμαλδεΰδης 1-5%, διαλύματα χλωριούχου υδραργύρου σε αραίωση 1: 1000 (0,1%), 70 ° αλκοόλ, κλπ.

Το χρησιμοποιημένο παθολογικό υλικό (πύον, κόπρανα, ούρα, πτύελα, αίμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό) απολυμαίνεται πριν αποστραγγιστεί στην αποχέτευση. Η απολύμανση πραγματοποιείται με ξηρή χλωρίνη ή διάλυμα χλωραμίνης 3-5%.

Πιπέτες (βαθμονομημένη και Παστέρ), γυάλινες σπάτουλες, διαφάνειες και καλυπτρίδες μολυσμένες με παθολογικό υλικό ή καλλιέργειες μικροοργανισμών βυθίζονται σε γυάλινα βάζα με διάλυμα φαινόλης ή υπεροξειδίου του υδρογόνου 3% για μια ημέρα.

Αφού τελειώσει η εργασία με μολυσματικό υλικό, ο τεχνικός εργαστηρίου πρέπει να το επεξεργαστεί με απολυμαντικό διάλυμα. ΧΩΡΟΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣκαι τα χέρια. Η επιφάνεια του τραπεζιού εργασίας σκουπίζεται με ένα κομμάτι βαμβάκι βρεγμένο με διάλυμα φαινόλης 3%. Τα χέρια απολυμαίνονται με διάλυμα χλωραμίνης 1%. Για να το κάνετε αυτό, βρέξτε ένα βαμβάκι ή μια γάζα με ένα απολυμαντικό διάλυμα και σκουπίστε το αριστερό χέρι, μετά το δεξί και στη συνέχεια πλύνετε τα χέρια σας με ζεστό νερό και σαπούνι.

Η επιλογή του απολυμαντικού, η συγκέντρωσή του και η διάρκεια έκθεσης (έκθεση) εξαρτώνται από βιολογικές ιδιότητεςμικρόβιο και το περιβάλλον στο οποίο το απολυμαντικό θα έρθει σε επαφή με παθογόνους μικροοργανισμούς. Για παράδειγμα, το χλωριούχο υδράργυρο, η φαινόλη και οι αλκοόλες είναι ακατάλληλα για την απολύμανση πρωτεϊνικών υποστρωμάτων (πύον, αίμα, πτύελα), καθώς υπό την επήρεια τους λαμβάνει χώρα πήξη πρωτεϊνών και η πηγμένη πρωτεΐνη προστατεύει τους μικροοργανισμούς από τις επιδράσεις των απολυμαντικών.

Κατά την απολύμανση υλικού μολυσμένου με μορφές σπορίων μικροοργανισμών, χρησιμοποιείται διάλυμα χλωραμίνης 5%, διαλύματα ενεργοποιημένης χλωραμίνης 1-2,5%, διαλύματα φορμαλίνης 5-10% και άλλες ουσίες.

Η απολύμανση, η οποία πραγματοποιείται όλη την ημέρα κατά τη διάρκεια της εργασίας, ονομάζεται τρέχουσα και στο τέλος της εργασίας - τελική.

Απολυμαντικά και οδηγίες για την παρασκευή διαλυμάτων εργασίας από αυτά. Το χλωρίδιο του ασβέστη είναι μια λευκή, σβώλους σκόνη με μια έντονη οσμή χλωρίου, δεν διαλύεται πλήρως στο νερό. Η βακτηριοκτόνος δράση εξαρτάται από την περιεκτικότητα σε ενεργό χλώριο, η ποσότητα του οποίου κυμαίνεται από 28 έως 36%. Χλώριο που περιέχει λιγότερο από 25% ενεργό χλώριο είναι ακατάλληλο για απολύμανση.

Εάν αποθηκευτεί ακατάλληλα, η χλωρίνη αποσυντίθεται και χάνει μέρος του ενεργού χλωρίου της. Η αποσύνθεση ευνοείται από τη θερμότητα, την υγρασία, το ηλιακό φως, γι' αυτό αποθηκεύστε λευκαντικόπρέπει να φυλάσσεται σε ξηρό, σκοτεινό μέρος, σε καλά κλεισμένο δοχείο.

Η ξηρή χλωρίνη χρησιμοποιείται για την απολύμανση των εκκρίσεων ανθρώπων και ζώων (με αναλογία 200 g ανά 1 λίτρο περιττωμάτων και 10 g ανά 1 λίτρο ούρων).

Παρασκευή του αρχικού 10% διαυγασμένου διαλύματος λευκαντικού. Πάρτε 1 κιλό ξηρή χλωρίνη, τοποθετήστε το σε έναν εμαγιέ κουβά και τρίψτε το. Στη συνέχεια ρίξτε κρύο νερόσε όγκο 10 λίτρων, ανακατεύουμε καλά, κλείνουμε με καπάκι και αφήνουμε για μια μέρα σε δροσερό μέρος. Μετά από αυτό, το προκύπτον διαυγές διάλυμα 10% στραγγίζεται προσεκτικά και φιλτράρεται μέσω πολλών στρωμάτων γάζας ή φιλτράρεται μέσω ενός χοντρού υφάσματος. Φυλάσσετε σε σκούρα γυάλινα μπουκάλια, κλεισμένα με ξύλινο πώμα, σε δροσερό μέρος για όχι περισσότερο από 10 ημέρες. Τα διαλύματα εργασίας της απαιτούμενης συγκέντρωσης παρασκευάζονται από το αρχικό διάλυμα αμέσως πριν από τη χρήση. Η ποσότητα του βασικού διαλύματος που απαιτείται για την παρασκευή 0,2-10% διαυγασμένων διαλυμάτων λευκαντικού δίνεται στον πίνακα. 5.

Η συγκέντρωση των διαυγασμένων διαλυμάτων λευκαντικού από 0,2 έως 10% επιλέγεται ανάλογα με τη φύση του αντικειμένου που απολυμαίνεται και την αντίσταση του παθογόνου.

Χλωραμίνη - κρυσταλλική ουσίαλευκό ή κιτρινωπό χρώμα, περιέχει 24-28% ενεργό χλώριο. Διαλύεται καλά σε νερό σε θερμοκρασία δωματίου, επομένως τα διαλύματα παρασκευάζονται αμέσως πριν την απολύμανση. Χρησιμοποιήστε διαλύματα χλωραμίνης 0,2-10%. Η σχέση μεταξύ της εκατοστιαίας συγκέντρωσης του διαλύματος και της ποσότητας χλωραμίνης σε γραμμάρια ανά 1 και 10 λίτρα δίνεται στον πίνακα. 6.

Διαλύστε τη χλωραμίνη σε ένα γυάλινο ή σμάλτο δοχείο. Κατά την αποθήκευση διαλυμάτων χλωραμίνης σε σκούρα γυάλινα δοχεία με αλεσμένο πώμα, η δράση τους παραμένει έως και 15 ημέρες.

Ενεργοποιημένη χλωραμίνη. Οι απολυμαντικές ιδιότητες της χλωραμίνης ενισχύονται με την προσθήκη ενός ενεργοποιητή σε αυτήν σε αναλογία 1:1 ή 1:2. Οι ενώσεις αμμωνίου χρησιμοποιούνται ως ενεργοποιητής - χλωριούχο αμμώνιο, θειικό, νιτρικό αμμώνιο. Η ενεργοποιημένη χλωραμίνη χρησιμοποιείται σε συγκεντρώσεις 0,5, 1 και 2,5%. Είναι προετοιμασμένοι αμέσως πριν από τη χρήση. Η χλωραμίνη και το άλας αμμωνίου ζυγίζονται χωριστά. Αρχικά, η χλωραμίνη διαλύεται σε νερό και στη συνέχεια προστίθεται ένας ενεργοποιητής.

Το πλεονέκτημα των διαλυμάτων ενεργοποιημένης χλωραμίνης έναντι των συμβατικών είναι ότι η προσθήκη ενός ενεργοποιητή επιταχύνει την απελευθέρωση ενεργού χλωρίου. Ως εκ τούτου, το φάρμακο έχει επιζήμια επίδραση όχι μόνο στις φυτικές μορφές μικροοργανισμών, αλλά και στα σπόρια τους. Η ενεργοποιημένη χλωραμίνη χρησιμοποιείται σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις και με λιγότερη έκθεση.

Η φαινόλη (καρβολικό οξύ) είναι ένας άχρωμος κρύσταλλος σε σχήμα βελόνας με έντονη, χαρακτηριστική οσμή. Όταν εκτίθενται στο φως, τον αέρα και την υγρασία, οι κρύσταλλοι αποκτούν ένα κατακόκκινο χρώμα. Φυλάσσετε σε κλειστά σκούρα γυάλινα βάζα και σε μέρος προστατευμένο από το φως.

Η φαινόλη είναι διαλυτή στο νερό, την αλκοόλη, τον αιθέρα και τα λιπαρά έλαια. Διαθέτοντας μεγάλη υγροσκοπικότητα, απορροφά την υγρασία από το περιβάλλον και γίνεται υγρό. Το υγρό καρβολικό οξύ περιέχει 90% κρυσταλλική φαινόλη και 10% νερό.

Χρησιμοποιήστε 3-5% υδατικά διαλύματα καρβολικού οξέος που παρασκευάζονται από κρυσταλλική φαινόλη και υγρό καρβολικό οξύ σύμφωνα με το σχήμα που δίνεται στον πίνακα. 7. Η δράση της φαινόλης αυξάνεται όταν διαλυθεί σε ζεστό νερό (40-50° C).

Προσοχή! Η κρυσταλλική φαινόλη ή το υγρό καρβολικό οξύ, εάν εισέλθει στο δέρμα, μπορεί να προκαλέσει ερεθισμό και σε υψηλές συγκεντρώσεις - σοβαρά εγκαύματα. Επομένως, ο χειρισμός του καρβολικού οξέος πρέπει να γίνεται με μεγάλη προσοχή. Όταν φτιάχνετε λύσεις, θα πρέπει να φοράτε λαστιχένια γάντια ή, σε ακραίες περιπτώσεις, να λιπάνετε τα χέρια σας με βαζελίνη.

Εάν το καρβολικό οξύ πέσει στο δέρμα σας, ξεπλύνετε το αμέσως με ζεστό νερό και σαπούνι ή αιθυλική αλκοόλη 40°.

Σημείωση. Για την παρασκευή απολυμαντικών διαλυμάτων φαινόλης, είναι πιο βολικό και ασφαλέστερο να χρησιμοποιείτε υγρό καρβολικό οξύ.

Ερωτήσεις ελέγχου

1. Ποια απολυμαντικά χρησιμοποιούνται στη μικροβιολογική πρακτική;

2. Περιγράψτε εμφάνισηκαι τις βασικές ιδιότητες της χλωρίνης, της χλωραμίνης, της φαινόλης.

3. Ποια διαλύματα απολυμαντικών χρησιμοποιούνται για την απολύμανση υλικού μολυσμένου με μορφές σπορίων μικροοργανισμών;

Ασκηση

Προετοιμάστε 2 λίτρα διαλύματος εργασίας 5% διαυγασμένης χλωρίνης. 500 ml διαλύματος χλωραμίνης 3%, 300 ml διαλύματος ενεργοποιημένης χλωραμίνης 1%.

Προσοχή! Πριν ξεκινήσετε την προετοιμασία λύσεων, κάντε υπολογισμούς.