Φούρνος Pasteur. Αποστείρωση εργαστηριακών υαλικών. Β. Λεπτομερής τεχνολογία για την παραγωγή βοοειδούς ορού γάλακτος στα σφαγεία της Λυών

Η επίδραση της θερμοκρασίας στους μικροοργανισμούς.

Θερμοκρασία - σημαντικος ΠΑΡΑΓΟΝΤΑΣ, επηρεάζοντας τη ζωή των μικροοργανισμών. Για τους μικροοργανισμούς υπάρχουν ελάχιστες, βέλτιστες και μέγιστες θερμοκρασίες. Αριστος– η θερμοκρασία στην οποία συμβαίνει ο πιο εντατικός πολλαπλασιασμός των μικροβίων. Ελάχιστο– θερμοκρασία κάτω από την οποία οι μικροοργανισμοί δεν παρουσιάζουν ζωτική δραστηριότητα. Ανώτατο όριο– η θερμοκρασία πάνω από την οποία συμβαίνει ο θάνατος των μικροοργανισμών.

Σε σχέση με τη θερμοκρασία, διακρίνονται 3 ομάδες μικροοργανισμών:

2. μεσόφιλοι.βέλτιστη - 30-37°C. Ελάχιστο - 15-20°C.Ανώτατο όριο - 43-45°C.Ζουν σε σώματα θερμόαιμων ζώων. Αυτά περιλαμβάνουν τους περισσότερους παθογόνους και ευκαιριακούς μικροοργανισμούς.

3. Θερμόφιλοι.βέλτιστη - 50-60°C.Ελάχιστο - 45°C.Ανώτατο όριο - 75°С. Ζουν σε θερμές πηγές και συμμετέχουν στις διαδικασίες αυτοθέρμανσης της κοπριάς και των σιτηρών. Δεν είναι σε θέση να αναπαραχθούν στο σώμα των θερμόαιμων ζώων, επομένως δεν έχουν ιατρική σημασία.

Ευνοϊκή δράση βέλτιστη θερμοκρασία χρησιμοποιείται στην ανάπτυξη μικροοργανισμών με σκοπό να εργαστηριακή διάγνωση, παρασκευή εμβολίων και άλλων φαρμάκων.

Δράση πέδησης χαμηλές θερμοκρασίες χρησιμοποιείται για αποθήκευση προϊόντα και καλλιέργειες μικροοργανισμών σε ψυγείο. Η χαμηλή θερμοκρασία σταματά τις διεργασίες σήψης και ζύμωσης. Ο μηχανισμός δράσης των χαμηλών θερμοκρασιών είναι η αναστολή των μεταβολικών διεργασιών στο κύτταρο και η μετάβαση σε μια κατάσταση αναστολής εμψύχωσης.

Επιζήμια επίδραση υψηλή θερμοκρασία(πάνω από το μέγιστο) χρησιμοποιείται για αποστείρωση . Μηχανισμόςδράσεις – μετουσίωση πρωτεΐνης (ένζυμα), βλάβη ριβοσωμάτων, διάρρηξη του οσμωτικού φραγμού. Τα ψυχρόφιλα και τα μεσόφιλα είναι πιο ευαίσθητα στις υψηλές θερμοκρασίες. ειδικός βιωσιμότηταπροβολή διαφωνίεςβακτήρια.

Η επίδραση της ενέργειας ακτινοβολίας και των υπερήχων στους μικροοργανισμούς.

Υπάρχουν μη ιονίζουσες (υπεριώδεις και υπέρυθρες ακτίνες) ηλιακό φως) και ιονίζουσα ακτινοβολία (ακτίνες g και ηλεκτρόνια υψηλής ενέργειας).

Η ιονίζουσα ακτινοβολία έχει ισχυρή διεισδυτική δράση και βλάπτει το κυτταρικό γονιδίωμα. Μηχανισμόςκαταστροφική επίδραση: ιονισμός μακρομόρια, η οποία συνοδεύεται από την ανάπτυξη μεταλλάξεων ή κυτταρικού θανάτου. Επιπλέον, οι θανατηφόρες δόσεις για τους μικροοργανισμούς είναι υψηλότερες από ό,τι για τα ζώα και τα φυτά.

Μηχανισμόςκαταστροφικό αποτέλεσμα ακτίνες UV: σχηματισμός διμερών θυμίνης σε ένα μόριο DNA , που σταματά την κυτταρική διαίρεση και είναι η κύρια αιτία θανάτου τους. Η καταστροφική επίδραση των ακτίνων UV είναι πιο έντονη για τους μικροοργανισμούς παρά για τα ζώα και τα φυτά.

Υπέρηχος(ηχητικά κύματα 20 χιλιάδες Hz) έχει βακτηριοκτόνο δράση. Μηχανισμός: εκπαίδευση στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου κοιλότητες σπηλαίωσης , τα οποία είναι γεμάτα με υγρό ατμό και σε αυτά προκύπτει πίεση έως και 10 χιλιάδες atm. Αυτό οδηγεί στο σχηματισμό ριζών υδροξυλίου με υψηλή αντίδραση, καταστροφή κυτταρικών δομών και αποπολυμερισμό οργανιδίων, μετουσίωση μορίων.

Χρησιμοποιούνται ιονίζουσες ακτινοβολίες, υπεριώδεις ακτίνες και υπέρηχοι για αποστείρωση.

Επίδραση της ξήρανσης στους μικροοργανισμούς.

Το νερό είναι απαραίτητο για τη φυσιολογική λειτουργία των μικροοργανισμών. Η μείωση της περιβαλλοντικής υγρασίας οδηγεί στη μετάβαση των κυττάρων σε κατάσταση ηρεμίας και στη συνέχεια σε θάνατο. Μηχανισμόςβλαβερές συνέπειες της ξήρανσης: αφυδάτωση του κυτταροπλάσματος και μετουσίωση πρωτεϊνών.

Οι παθογόνοι μικροοργανισμοί είναι πιο ευαίσθητοι στην ξήρανση: παθογόνα της γονόρροιας, μηνιγγίτιδα, τυφοειδής πυρετός, δυσεντερία, σύφιλη κ.λπ. Τα βακτηριακά σπόρια, οι κύστεις των πρωτόζωων και τα βακτήρια που προστατεύονται από τη βλέννα των πτυέλων (βάκιλοι της φυματίωσης) είναι πιο ανθεκτικά.

Στην πράξηχρησιμοποιείται ξήρανση για κονσερβοποίηση κρέας, ψάρι, λαχανικά, φρούτα, κατά την παρασκευή φαρμακευτικών βοτάνων.

Στέγνωμα από παγωμένη κατάσταση υπό κενό – λυοφιλοποίηση ή λυοφιλίωση.Χρησιμοποιείται για τη διατήρηση των καλλιεργειώνμικροοργανισμοί που σε αυτή την κατάσταση για χρόνια (10-20 χρόνια) δεν χάνουν τη βιωσιμότητά τους και δεν αλλάζουν τις ιδιότητές τους. Οι μικροοργανισμοί βρίσκονται σε κατάσταση αναστολής κινούμενης εικόνας. Χρησιμοποιείται λυοφιλοποίηση στην παραγωγή φαρμάκωναπό ζωντανούς μικροοργανισμούς: ευβιοτικά, φάγοι, ζωντανά εμβόλιακατά της φυματίωσης, της πανώλης, της τουλαραιμίας, της βρουκέλλωσης, της γρίπης κ.λπ.

Δράση χημικούς παράγοντεςσε μικροοργανισμούς.

Οι χημικές ουσίες επηρεάζουν τους μικροοργανισμούς με διαφορετικούς τρόπους. Αυτό εξαρτάται από τη φύση, τη συγκέντρωση και τον χρόνο δράσης των χημικών ουσιών. Αυτοί μπορούν διεγείρουν την ανάπτυξη(χρησιμοποιείται ως πηγές ενέργειας), παρέχει μικροβιοκτόνο, μικροβοστατικό, μεταλλαξιογόνο δράσηή μπορεί να αδιαφορεί για ζωτικές διαδικασίες

Για παράδειγμα: ένα διάλυμα γλυκόζης 0,5-2% είναι πηγή διατροφής για τα μικρόβια και ένα διάλυμα 20-40% έχει ανασταλτική δράση.

Για τους μικροοργανισμούς είναι απαραίτητο βέλτιστη τιμή pH του περιβάλλοντος. Για τα περισσότερα συμβιωτικά και παθογόνα των ανθρώπινων ασθενειών - ένα ουδέτερο, ελαφρώς αλκαλικό ή ελαφρώς όξινο περιβάλλον. Καθώς το pH αυξάνεται, συχνά μετατοπίζεται στην όξινη πλευρά και η ανάπτυξη των μικροοργανισμών σταματά. Και μετά έρχεται ο θάνατος. Μηχανισμός:μετουσίωση των ενζύμων από ιόντα υδροξυλίου, διάρρηξη του οσμωτικού φραγμού της κυτταρικής μεμβράνης.

Χημικές ουσίες που έχουν αντιμικροβιακή δράση, χρησιμοποιείται για απολύμανση, αποστείρωση και συντήρηση.

Η επίδραση βιολογικών παραγόντων στους μικροοργανισμούς.

Βιολογικοί παράγοντες- Αυτό διάφορα σχήματατην επίδραση των μικροβίων μεταξύ τους, καθώς και την επίδραση των ανοσολογικών παραγόντων (λυσοζύμη, αντισώματα, αναστολείς, φαγοκυττάρωση) στους μικροοργανισμούς κατά τη διάρκεια της παραμονής τους στον μακροοργανισμό. Συνύπαρξη διαφόρων οργανισμών - συμβίωση. Διακρίνονται τα εξής: φόρμεςσυμβίωση.

Αμοιβαιότητα– μια μορφή συγκατοίκησης όπου και οι δύο σύντροφοι λαμβάνουν αμοιβαία οφέλη (για παράδειγμα, βακτήρια όζων και όσπρια).

Ανταγωνισμός- μια μορφή σχέσης όταν ένας οργανισμός προκαλεί βλάβη (ακόμα και θάνατο) σε έναν άλλο οργανισμό με τα μεταβολικά του προϊόντα (οξέα, αντιβιοτικά, βακτηριοσίνες), λόγω της καλύτερης προσαρμοστικότητας στις περιβαλλοντικές συνθήκες, μέσω άμεσης καταστροφής (για παράδειγμα, φυσιολογική εντερική μικροχλωρίδα και παθογόνα εντερικές λοιμώξεις).

Μεταβίωση– μια μορφή συμβίωσης όταν ένας οργανισμός συνεχίζει τη διαδικασία που προκαλεί ο άλλος (χρησιμοποιεί τα απόβλητά του) και απελευθερώνει το περιβάλλον από αυτά τα προϊόντα. Επομένως, δημιουργούνται συνθήκες για περαιτέρω ανάπτυξη (νιτροποιητικά και αμμωνιοποιητικά βακτήρια).

Δορυφορισμός– ο ένας από τους συγκατοίκους διεγείρει την ανάπτυξη του άλλου (για παράδειγμα, η μαγιά και η σαρκίνα παράγουν ουσίες που προάγουν την ανάπτυξη άλλων βακτηρίων που απαιτούν περισσότερα θρεπτικά συστατικά).

Κομμενσαλισμός– ένας οργανισμός ζει σε βάρος ενός άλλου (ωφελείται) χωρίς να του προκαλεί βλάβη (για παράδειγμα, το E. coli και το ανθρώπινο σώμα).

Αρπακτικά– ανταγωνιστικές σχέσεις μεταξύ οργανισμών, όταν κάποιος συλλαμβάνει, απορροφά και αφομοιώνει έναν άλλον (για παράδειγμα, η εντερική αμοιβάδα τρέφεται με εντερικά βακτήρια).

Αποστείρωση.

Αποστείρωσηείναι η διαδικασία της πλήρους καταστροφής όλων των βιώσιμων μορφών μικροβίων σε ένα αντικείμενο, συμπεριλαμβανομένων των σπορίων.

Υπάρχουν 3 ομάδες μεθόδων αποστείρωσης: φυσική, χημική και φυσικοχημική.Φυσικές μέθοδοι:αποστείρωση με υψηλή θερμοκρασία, ακτινοβολία UV, ιονίζουσα ακτινοβολία, υπερηχογράφημα, διήθηση μέσω αποστειρωμένων φίλτρων. Χημικές μέθοδοι– χρήση χημικών, καθώς και αποστείρωση αερίου. Φυσικοχημικές μέθοδοι – μοιρασιάσωματική και χημικές μεθόδους. Για παράδειγμα, υψηλή θερμοκρασία και αντισηπτικά.

Αποστείρωση υψηλής θερμοκρασίας .

Αυτή η μέθοδος περιλαμβάνει: 1) αποστείρωση με ξηρή θερμότητα; 2) αποστείρωση με ατμό υπό πίεση; 3) αποστείρωση με ρέοντα ατμό; 4) εκχύλιση και παστερίωση; 5) διαπύρωση; 6) βρασμός.

Αποστείρωση με ξηρή θερμότητα.

Η μέθοδος βασίζεταισχετικά με τη βακτηριοκτόνο δράση του αέρα που θερμαίνεται στους 165-170°C για 45 λεπτά.

Εξοπλισμός: ντουλάπι ξηρής θερμότητας (φούρνος Pasteur). Φούρνος Pasteur - μεταλλικό ντουλάπιμε διπλά τοιχώματα, επενδυμένα εξωτερικά με υλικό που δεν μεταφέρει τη θερμότητα (αμίαντο). Ο θερμός αέρας κυκλοφορεί στο χώρο μεταξύ των τοίχων και εξέρχεται από ειδικά ανοίγματα. Κατά την εργασία, είναι απαραίτητο να παρακολουθείτε αυστηρά την απαιτούμενη θερμοκρασία και τον χρόνο αποστείρωσης. Εάν η θερμοκρασία είναι υψηλότερη, τότε θα υπάρξει απανθράκωση των βαμβακερών βυσμάτων και του χαρτιού στο οποίο είναι τυλιγμένα τα πιάτα και σε χαμηλότερη θερμοκρασία απαιτείται μεγαλύτερη αποστείρωση. Μετά την ολοκλήρωση της αποστείρωσης, το ντουλάπι ανοίγει μόνο αφού κρυώσει, διαφορετικά τα γυάλινα σκεύη μπορεί να ραγίσουν λόγω ξαφνικής αλλαγής θερμοκρασίας.

α) αντικείμενα από γυαλί, μέταλλο, πορσελάνη, πιάτα, τυλιγμένα σε χαρτί και κλεισμένα με πώματα από βαμβακερή γάζα για διατήρηση της στειρότητας (165-170°C, 45 λεπτά).

β) ανθεκτική στη θερμότητα σκόνη φάρμακα- τάλκης, λευκή άργιλος, οξείδιο ψευδαργύρου (180-200°C, 30-60 λεπτά).

γ) ορυκτό και φυτικά έλαια, λίπη, λανολίνη, βαζελίνη, κερί (180-200°C, 20-40 λεπτά).

Αποστείρωση με ατμό υπό πίεση.

Η πιο αποτελεσματική και ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος στη μικροβιολογική και κλινική πράξη.

Η μέθοδος βασίζεταισχετικά με την υδρολυτική επίδραση του ατμού υπό πίεση στις πρωτεΐνες του μικροβιακού κυττάρου. Η συνδυασμένη δράση υψηλής θερμοκρασίας και ατμού παρέχει υψηλής απόδοσηςαυτή η αποστείρωση, η οποία σκοτώνει τα πιο επίμονα βακτήρια σπορίων.

Εξοπλισμός - αυτόκλειστο.Το αυτόκλειστο αποτελείται από 2 μεταλλικούς κυλίνδρους που εισάγονται ο ένας μέσα στον άλλο με ένα ερμητικά σφραγισμένο καπάκι βιδωμένο με βίδες. Ο εξωτερικός λέβητας είναι ένας θάλαμος νερού-ατμού, ο εσωτερικός λέβητας είναι ένας θάλαμος αποστείρωσης. Υπάρχει μανόμετρο, βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, βαλβίδα ασφαλείας και γυαλί μετρητή νερού. Στην κορυφή του θαλάμου αποστείρωσης υπάρχει μια οπή μέσω της οποίας διέρχεται ατμός από τον θάλαμο νερού-ατμού. Το μανόμετρο χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της πίεσης στο θάλαμο αποστείρωσης. Υπάρχει μια ορισμένη σχέση μεταξύ πίεσης και θερμοκρασίας: 0,5 atm - 112°C, 1-01,1 atm - 119-121°C, 2 atm - 134°C. Βαλβίδα ασφαλείας – για προστασία από υπερβολική πίεση. Όταν η πίεση ανέβει πάνω από την καθορισμένη τιμή, η βαλβίδα ανοίγει και απελευθερώνει περίσσεια ατμού. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ.Το νερό χύνεται στο αυτόκλειστο, η στάθμη του οποίου παρακολουθείται χρησιμοποιώντας ένα γυαλί μετρητή νερού. Το υλικό τοποθετείται στον θάλαμο αποστείρωσης και το καπάκι βιδώνεται σφιχτά. Η βαλβίδα ατμού είναι ανοιχτή. Ανοίξτε τη θέρμανση. Αφού βράσει το νερό, η βρύση κλείνει μόνο όταν έχει εκτοπιστεί όλος ο αέρας (ο ατμός ρέει σε συνεχές ισχυρό ξηρό ρεύμα). Εάν η βρύση κλείσει νωρίτερα, οι ενδείξεις του μανόμετρου δεν θα αντιστοιχούν τη σωστή θερμοκρασία. Μετά το κλείσιμο της βρύσης, η πίεση στο λέβητα αυξάνεται σταδιακά. Η αρχή της αποστείρωσης είναι η στιγμή που η βελόνα του μανόμετρου δείχνει τη ρυθμισμένη πίεση. Μετά τη λήξη της περιόδου αποστείρωσης, σταματήστε τη θέρμανση και ψύξτε το αυτόκλειστο έως ότου η βελόνα του μανόμετρου επιστρέψει στο 0. Εάν απελευθερώσετε ατμό νωρίτερα, το υγρό μπορεί να βράσει λόγω ταχείας αλλαγής της πίεσης και να σπρώξει τα βύσματα (η στειρότητα είναι μειωμένη). Όταν η βελόνα του μανόμετρου επιστρέψει στο 0, ανοίξτε προσεκτικά τη βαλβίδα απελευθέρωσης ατμού, απελευθερώστε τον ατμό και στη συνέχεια αφαιρέστε τα αντικείμενα που πρόκειται να αποστειρωθούν. Εάν ο ατμός δεν απελευθερωθεί αφού η βελόνα επιστρέψει στο 0, το νερό μπορεί να συμπυκνωθεί και να βρέξει τα βύσματα και το υλικό που αποστειρώνεται (θα μειωθεί η στειρότητα).

Υλικό και τρόπος αποστείρωσης:

α) γυαλί, μέταλλο, Κίνα, εσώρουχα, καουτσούκ και φλοιώδη βύσματα, προϊόντα από καουτσούκ, κυτταρίνη, ξύλο, σάλτσα(βαμβάκι, γάζα) (119 - 121°C, 20-40 λεπτά));

β) φυσιολογικό διάλυμα, ενέσιμα διαλύματα, οφθαλμικές σταγόνες, απεσταγμένο νερό, απλά θρεπτικά μέσα - MPB, MPA (119-121°C, 20-40 λεπτά).

γ) ορυκτά και φυτικά έλαια σε ερμητικά σφραγισμένα δοχεία (119-121°C, 120 λεπτά).

Αποστείρωση με ρέοντα ατμό.

Η μέθοδος βασίζεταισχετικά με τη βακτηριοκτόνο δράση του ατμού (100°C) μόνο στα βλαστικά κύτταρα.

Εξοπλισμός– ένα αυτόκλειστο με ξεβιδωμένο καπάκι ή Συσκευή Koch.

Συσκευή Koch -Πρόκειται για έναν μεταλλικό κύλινδρο με διπλό πάτο, ο χώρος στον οποίο είναι γεμάτος κατά τα 2/3 με νερό. Το καπάκι έχει τρύπες για θερμόμετρο και για διαφυγή ατμού. Ο εξωτερικός τοίχος είναι επενδεδυμένος με ένα υλικό που δεν μεταφέρει τη θερμότητα (λινέλαιο, αμίαντος). Η έναρξη της αποστείρωσης είναι ο χρόνος από τον βρασμό του νερού και την είσοδο του ατμού στον θάλαμο αποστείρωσης.

Υλικό και τρόπος αποστείρωσης.Αυτή η μέθοδος αποστειρώνει το υλικό που δεν αντέχει σε θερμοκρασίες πάνω από 100°C: θρεπτικά μέσα με βιταμίνες, υδατάνθρακες (Hiss, Endo, Ploskirev, Levin media), ζελατίνη, γάλα.

Στους 100°C, τα σπόρια δεν πεθαίνουν, επομένως η αποστείρωση πραγματοποιείται πολλές φορές - κλασματική αποστείρωση - 20-30 λεπτά καθημερινά για 3 ημέρες.

Στα μεσοδιαστήματα μεταξύ των αποστείρωσης, το υλικό διατηρείται στο θερμοκρασία δωματίουπροκειμένου τα σπόρια να βλαστήσουν σε βλαστικές μορφές. Θα πεθάνουν κατά την επόμενη θέρμανση στους 100°C.

Τυνδαλοποίηση και παστερίωση.

Tyndalization -μέθοδος κλασματικής αποστείρωσης σε θερμοκρασίες κάτω των 100°C. Χρησιμοποιείται για την αποστείρωση αντικειμένων, που δεν αντέχουν τους 100°C: ορός, ασκιτικό υγρό, βιταμίνες . Η τυνδαλοποίηση πραγματοποιείται σε υδατόλουτρο στους 56°C για 1 ώρα για 5-6 ημέρες.

Παστερίωση - μερικός αποστείρωση (δεν σκοτώνονται τα σπόρια), η οποία πραγματοποιείται σε σχετικά χαμηλή θερμοκρασία μια φορά. Η παστερίωση πραγματοποιείται στους 70-80°C, 5-10 λεπτά ή στους 50-60°C, 15-30 λεπτά. Η παστερίωση χρησιμοποιείται για αντικείμενα που χάνουν την ποιότητά τους σε υψηλές θερμοκρασίες. χρήση Για μερικοί τρόφιμα: γάλα, κρασί, μπύρα . Αυτό δεν βλάπτει την εμπορική τους αξία, αλλά τα σπόρια παραμένουν βιώσιμα, επομένως αυτά τα προϊόντα πρέπει να φυλάσσονται στο ψυγείο.

Ασβεστοποίηση στη φωτιά.Αυτή είναι μια αξιόπιστη μέθοδος αποστείρωσης, αλλά έχει περιορισμένη χρήση λόγω φθοράς των αντικειμένων. Οι βακτηριολογικοί βρόχοι αποστειρώνονται με αυτόν τον τρόπο.

Ξηρά αποστείρωσηπυρετός. Διεξάγεται σε φούρνο Pasteur (τενών ------

φούρνο) σε θερμοκρασία 160-170°C για 1 ώρα. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση εργαστηριακών γυαλικών, πιπέτων τυλιγμένων σε χαρτί και δοκιμαστικών σωλήνων κλειστών με βαμβακερά βύσματα. Σε θερμοκρασίες άνω των 170°C, αρχίζει η απανθράκωση του χαρτιού, του βαμβακιού και της γάζας.

Αποστείρωση με ατμό υπό πίεση (αυτόκαυστο).Η πιο καθολική μέθοδος αποστείρωσης. Πραγματοποιείται σε αυτόκλειστο - αποστειρωτή νερού-ατμού. Η αρχή λειτουργίας του αυτόκλειστου βασίζεται στην εξάρτηση του σημείου βρασμού του νερού από την πίεση.

Το αυτόκλειστο είναι ένα μεταλλικό καζάνι διπλού τοιχώματος με ερμητικά κλειστό καπάκι. Χύνεται νερό στον πυθμένα του αυτόκλειστου, τα προς αποστείρωση αντικείμενα τοποθετούνται στον θάλαμο εργασίας και το καπάκι κλείνει χωρίς προηγουμένως να το βιδώσετε καλά. Ανάβουμε τη φωτιά και αφήνουμε το νερό να βράσει. Ο προκύπτων ατμός εκτοπίζει τον αέρα από τον θάλαμο εργασίας, ο οποίος εξέρχεται μέσω της ανοιχτής βαλβίδας εξόδου. Όταν όλος ο αέρας έχει μετατοπιστεί και ένα συνεχές ρεύμα ατμού βγαίνει από τη βρύση, η βρύση κλείνει και το καπάκι σφραγίζεται. Ο ατμός φέρεται στην επιθυμητή πίεση υπό τον έλεγχο ενός μετρητή πίεσης. Η θερμοκρασία του ατμού εξαρτάται από την πίεση: σε κανονική ατμοσφαιρική πίεση, η βελόνα του μανόμετρου είναι στο 0 atm. - θερμοκρασία ατμού 100°C, σε 0,5 atm. - 112°C, σε 1 atm. -121°C, σε 1,5 atm. - 127°C, στις 2 atm. - 134°C. Στο τέλος της αποστείρωσης, απενεργοποιήστε το αυτόκλειστο, περιμένετε μέχρι να πέσει η πίεση, απελευθερώστε σταδιακά τον ατμό και ανοίξτε το καπάκι. Συνήθως σε πίεση 1 atm. Μέσα σε 20-40 λεπτά, αποστειρώνονται απλά θρεπτικά μέσα και διαλύματα που δεν περιέχουν πρωτεΐνες και υδατάνθρακες, σάλτσες και λινά. Τα υλικά που πρόκειται να αποστειρωθούν πρέπει να είναι διαπερατά στον ατμό. Όταν αποστειρώνετε υλικά σε μεγάλους όγκους ( χειρουργικά υλικά) ο χρόνος αυξάνεται σε 2 ώρες. Σε πίεση 2 atm. απολυμάνετε παθολογικό υλικό και χρησιμοποιημένες μικροβιακές καλλιέργειες.

Τα θρεπτικά υλικά που περιέχουν σάκχαρα δεν μπορούν να αποστειρωθούν σε 1 atm, καθώς καραμελώνονται, επομένως υποβάλλονται σε κλασματική αποστείρωση με ρέοντα ατμό ή σε αυτόκαυστο στις 0,5 atm.

Για τον έλεγχο του καθεστώτος αποστείρωσης, χρησιμοποιούνται βιολογικές και φυσικές μέθοδοι. Η βιολογική μέθοδος βασίζεται στο γεγονός ότι τα σπόρια Bacillus stearothermophilus τοποθετούνται ταυτόχρονα με το προς αποστείρωση υλικό, τα οποία πεθαίνουν στους 121°C σε 15 λεπτά. Μετά την αποστείρωση, τα σπόρια δεν πρέπει να αναπτύσσονται στο θρεπτικό μέσο. Φυσική μέθοδοςβασίζεται στη χρήση ουσιών που έχουν ορισμένο σημείο τήξης, για παράδειγμα, θείο (119°C), βενζοϊκό οξύ (120°C). Σφραγισμένοι σωλήνες που περιέχουν την ουσία αναμεμειγμένη με ξηρή βαφή (φουξίνη) τοποθετούνται σε αυτόκλειστο μαζί με το υλικό που πρόκειται να αποστειρωθεί. Εάν η θερμοκρασία στο αυτόκλειστο είναι επαρκής, η ουσία θα λιώσει και θα αλλάξει το χρώμα της βαφής.

Ρευστή αποστείρωσηΟ ατμός πραγματοποιείται σε συσκευή Koch ή σε αυτόκλειστο με το καπάκι ξεβιδωμένο και τη βαλβίδα εξόδου ανοιχτή. Το νερό στη συσκευή θερμαίνεται στους 100°C. Ο ατμός που προκύπτει περνά μέσα από το ενσωματωμένο υλικό και το αποστειρώνει. Μία μόνο επεξεργασία στους 100°C δεν σκοτώνει τα σπόρια. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται μια μέθοδος κλασματικής αποστείρωσης - 3 ημέρες στη σειρά για 30 λεπτά, ενδιάμεσα αφήνοντας για μια μέρα σε θερμοκρασία δωματίου. Η θέρμανση στους 100°C προκαλεί θερμική ενεργοποίηση των σπορίων, με αποτέλεσμα να βλαστήσουν σε βλαστικές μορφές μέχρι την επόμενη μέρα και να πεθάνουν κατά τη δεύτερη και τρίτη θέρμανση. Ως αποτέλεσμα, μόνο τα θρεπτικά μέσα μπορούν να αποστειρωθούν με ρέοντα ατμό, επειδή Για να βλαστήσουν τα σπόρια, είναι απαραίτητη η παρουσία θρεπτικών συστατικών.

Χρήση φυσικών και χημικών παραγόντων.

ΠΡΟΣ ΤΗΝ φυσικούς παράγοντεςΟι μέθοδοι αποστείρωσης περιλαμβάνουν υψηλή θερμοκρασία, υπεριώδεις ακτίνες, ιοντίζουσα ακτινοβολίακαι μέσω βακτηριακών φίλτρων.

Στην εργαστηριακή πρακτική, η αποστείρωση με υψηλή θερμοκρασία επιτυγχάνεται με πύρωση σε φλόγα, θέρμανση με ξηρή θερμότητα, βρασμό, επεξεργασία με ρέοντα ατμό ή ατμό υπό πίεση.

Ρύζι. 1. Καυστήρας Bunsen. Ρύζι. 2. Καυστήρας Teklu. Ρύζι. 3. Κατανομή θερμοκρασίας στη φλόγα του καυστήρα.

Ρύζι. 4. Ντουλάπι στεγνώματος.

Ρύζι. 5. Λουτρά νερού: 1 - με σταθερή ροή νερού. 2 - κυλινδρικό? 3 - στρογγυλό κάτω μέρος. Ρύζι. 6. Αποστειρωτής με ροή ατμού.

Η αποστείρωση με φλόγα είναι μια απλή και αξιόπιστη μέθοδος για την επεξεργασία διαφόρων αντικειμένων ανθεκτικών στη θερμότητα: βελόνες, βακτηριακές θηλιές, μικροβιολογικές σπάτουλες, πιπέτες, διαφάνειες και γυαλιά κάλυψης, τσιμπιδάκια κ.λπ. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται ευρέως καυστήρες αερίου Bunsen (Εικ. 1) ή συστήματα Teklu (Εικ. 2). Ο καυστήρας Bunsen είναι εξοπλισμένος με μια κινητή βάση, μετακινώντας την οποία μπορείτε να ρυθμίσετε την πρόσβαση αέρα. Στον καυστήρα Teklu, η ποσότητα του εισερχόμενου αέρα ρυθμίζεται μετακινώντας τον δίσκο (Εικ. 2,1), η ποσότητα του αερίου ρυθμίζεται με μια βίδα (Εικ. 2, 2). Σε περίπτωση απουσίας ή ανεπαρκούς πρόσβασης αέρα, σχηματίζεται μια καπνιστή φλόγα. Η πρόσβαση αέρα στον καυστήρα ρυθμίζεται μέχρι μπλε φλόγα. Μια κατά προσέγγιση κατανομή θερμοκρασίας στη φλόγα του καυστήρα φαίνεται στο Σχ. 3.

Η αποστείρωση με ξηρή θερμότητα πραγματοποιείται σε ντουλάπι στεγνώματος(Φούρνος Pasteur). Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται για την αποστείρωση μόνο ξηρών αντικειμένων - εργαστηριακά γυαλικά κ.λπ. Το στεγνωτήριο (Εικ. 4) είναι ένα μικρό σιδερένιο ντουλάπι με διπλά τοιχώματα, μεταξύ του οποίου υπάρχει ένα θερμομονωτικό υλικό(αμίαντος, υαλοβάμβακας). Οι καθαρά πλυμένοι δοκιμαστικοί σωλήνες και οι φιάλες σφραγίζονται με βαμβακερά πώματα. πιπέτες, βαμβάκι, γάζα τυλίγονται σε χαρτί και τοποθετούνται στα ράφια του ντουλαπιού έτσι ώστε τα προς αποστείρωση αντικείμενα να μην αγγίζουν τα καυτά τοιχώματα της συσκευής και ο θερμός αέρας να διεισδύει ελεύθερα ανάμεσά τους. Η αποστείρωση σε στεγνωτήριο διαρκεί 45 λεπτά - 1 ώρα στους ° 160-170 ° Σε θερμοκρασίες άνω των 175 °, το χαρτί και το βαμβάκι καίγονται.

Το βράσιμο σε νερό καταστρέφει τις μη σποριακές μορφές μικροβίων σε 1-3 λεπτά. , βελόνες, μαχαίρια, μικρά εργαλεία κ.λπ. μπορούν να βράσουν σε μεταλλικούς αποστειρωτές ακόμα και σε κανονική κατσαρόλα. Προσθήκη μικρής ποσότητας διττανθρακικού νατρίου (όξινο ανθρακικό νάτριο) στο νερό

Εκτέλεση του σταδίου 1 της βακτηριολογικής μεθόδου για την απομόνωση αεροβίων:

Παρασκευάζουμε σταθερό παρασκεύασμα από το υπό μελέτη υλικό, χρωματίζουμε με τη μέθοδο Gram, μικροσκοπούμε και αναγνωρίζουμε τους μικροοργανισμούς που ανιχνεύονται με μορφοτακτικές ιδιότητες.

Σπέρνουμε το υπό μελέτη υλικό σε μισό πιάτο με πυκνό θρεπτικό υλικό χρησιμοποιώντας τη μέθοδο «stroke with platform» (εφαρμόζουμε το υλικό στην επιφάνεια του πυκνού θρεπτικού μέσου σε ένα τρυβλίο Petri σε περιορισμένη περιοχή και στη συνέχεια το διανέμουμε με σπορά σε συχνές παράλληλες ραβδώσεις)

Ας υπογράψουμε τα κύπελλα, υποδεικνύοντας την ημερομηνία σποράς και τα τοποθετούμε ανάποδα σε θερμοστάτη στους 37° για 18-24 ώρες.

Αποστειρωτής ατμού (αυτόκλειστο) - αποστείρωση με ατμό υπό πίεση.

Η πιο αξιόπιστη και καθολική μέθοδος αποστείρωσης στην ιατρική και μικροβιολογική πρακτική είναι η αποστείρωση με ατμό υπό πίεση. Παράγεται σε αυτόκλειστο, στο οποίο θερμαίνονται τα προς αποστείρωση αντικείμενα κορεσμένο ατμόυπό πίεση πάνω από την ατμοσφαιρική. Υπάρχει η ακόλουθη σχέση μεταξύ των ενδείξεων του μανόμετρου και της θερμοκρασίας κορεσμένου ατμού

Μηδενική πίεσηεξετάστε την κανονική ατμοσφαιρική πίεση (760 mm Hg).

Η αποστείρωση επιτυγχάνεται μόνο όταν το αυτόκλειστο είναι σε πλήρη κατάσταση λειτουργίας και λειτουργεί σωστά από ειδικά εκπαιδευμένο προσωπικό, επομένως απαιτείται συνεχής παρακολούθηση του καθεστώτος αποστείρωσης, η οποία πραγματοποιείται φυσική (μέγιστο θερμόμετρο κ.λπ.), βιολογική (βιοδοκιμή με σπόρια καλλιέργειες δοκιμής μικροοργανισμών) και χημικών (χημικές δοκιμές, δείκτες τύπου IP) τρόπους

Πραγματοποιείται έλεγχος του καθεστώτος αποστείρωσης των αυτόκλειστων χημικάκάθε φορά που φορτώνεται το αυτόκλειστο Χημικός δοκιμαστικός - γυάλινος σωλήνας με χημική ουσία, με ορισμένο σημείο τήξης, αντιπυρίνη, ρεσορκινόλη - 110±2°, βενζοϊκό οξύ - 120±2°, βενζαμίδιο - 126+1°, ουρία, νικοτιναμίδιο, D (+)-μαννόζη - 132+2°. Στις χημικές δοκιμές εισάγεται μια βαφή ανιλίνης (φουξίνη, gentsnan violet κ.λπ.), η οποία χρωματίζει ομοιόμορφα την ουσία όταν λιώνει. Επί του παρόντος, χρησιμοποιούνται συχνότερα δείκτες τύπου IS (Vinar, Ρωσία), οι οποίοι είναι μια λωρίδα χαρτιού με ένα στρώμα μείγματος δείκτη που εφαρμόζεται σε αυτό και προορίζονται για λειτουργική οπτική παρακολούθηση όχι μόνο της θερμοκρασίας, αλλά και του χρόνου αποστείρωσης (IS-120, IS-132) Το καθεστώς αποστείρωσης παρακολουθείται ανά τρίμηνο με τη χρήση βιοτεστ με σπόρια της δοκιμαστικής καλλιέργειας Bacillus stearotermophilus BKM B-718

Φούρνος Pasteur- αποστείρωση με ξηρή θερμότητα.

Προϊόντα από γυαλί, μέταλλο και καουτσούκ με βάση το καουτσούκ σιλικόνης αποστειρώνονται σε φούρνο Pasteur. Λειτουργία αποστείρωσης: 160°C - 150 λεπτά; 180°C - 60 λεπτά Ο έλεγχος του τρόπου αποστείρωσης κατά τη διάρκεια κάθε κύκλου πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας τους δείκτες αποστείρωσης IS-160, IS-180. ανά τρίμηνο - χρησιμοποιώντας βιοδοκιμή με σπόρια της καλλιέργειας δοκιμής Bacillus licheniformis

ΑποστείρωσηΤραπέζι 1.

ΑπολύμανσηΠίνακας 2.