Режим на работа на сушилнята. Методи за термична стерилизация Метод за механична стерилизация

Животът на микроорганизмите е тясно зависим от условията заобикаляща среда. Всички фактори на околната среда, които влияят на микроорганизмите, могат да бъдат разделени на три групи: физични, химични и биологични, чието благоприятно или вредно въздействие зависи както от природата на самия фактор, така и от свойствата на микроорганизма.

Физически фактори

От физически фактори най-голямо влияниеРазвитието на микроорганизмите се влияе от температура, сушене, лъчиста енергия и ултразвук.

температура. Жизнената активност на всеки микроорганизъм е ограничена от определени температурни граници. Тази температурна зависимост обикновено се изразява с три основни точки: минимум - температурата, под която спира размножаването на микробните клетки; оптимална - най-добрата температура за растеж и развитие на микроорганизми; максимум - температурата, над която жизнената активност на клетките отслабва или спира. Оптимална температураобикновено съответства на температурните условия на естественото местообитание.

Всички микроорганизми по отношение на температурата се делят на психрофилни, мезофилни и термофилни.

Психрофилите (от гръцки psychros - студен, phileo - любов), или студенолюбиви микроорганизми, растат при относително ниски температури: минимална температура- 0° C, оптимална - 10-20° C, максимална - 30° C. Тази група включва микроорганизми, живеещи в северни моретаи океани, почва, Отпадъчни водио Това включва също светещи и железни бактерии, както и микроби, които причиняват разваляне на храната на студ (под 0° C).

Мезофилите (от гръцки mesos - среден) са най-обширната група, включваща повечето сапрофити и всички патогенни микроорганизми. Оптималната температура за тях е 28-37°C, минималната 10°C, максималната 45°C.

Термофилите (от гръцки termos - топлина, топлина), или топлолюбиви микроорганизми, се развиват при температури над 55 ° C, температурният минимум за тях е 30 ° C, оптималната е 50-60 ° C, а максималната е 70 ° C. -75 ° C. Те се срещат в горещо минерални извори, повърхностен слой на почвата, самозагряващи се субстрати (оборски тор, сено, зърно), червата на хора и животни. Сред термофилите има много спорови форми.

Високите и ниските температури имат различен ефект върху микроорганизмите. Някои са по-чувствителни към високи температури. Освен това, колкото по-висока е температурата над максималната, толкова по-бързо настъпва смъртта на микробните клетки, което се дължи на денатурацията (коагулацията) на клетъчните протеини.

Вегетативните форми на мезофилните бактерии загиват при температура 60°С за 30-60 минути, а при 80-100°С - след 1-2 минути. Бактериалните спори са много по-устойчиви на високи температури. Например, спорите на антраксния бацил могат да издържат на кипене в продължение на 10-20 минути, а спорите на клостридиум ботулизъм - 6 часа.Всички микроорганизми, включително спорите, умират при температура 165-170 ° C за един час (при суха топлина фурна) или при излагане на пара под налягане 1 atm (в автоклав) за 30 минути.

Въздействието на високите температури върху микроорганизмите е в основата на стерилизацията - пълното освобождаване на различни предмети от микроорганизми и техните спори (виж по-долу).

Много микроорганизми са изключително устойчиви на ниски температури. Salmonella typhus и Vibrio cholerae оцеляват дълго време в лед. Някои микроорганизми остават жизнеспособни при температури на течния въздух (-190°C), а бактериалните спори могат да издържат на температури до -250°C.

само отделни видовепатогенните бактерии са чувствителни към ниски температури (например Bordetella pertussis и parapertussis, Neisseria meningococcus и др.). Тези свойства на микроорганизмите се вземат предвид в лабораторна диагностикаи при транспортиране на изследвания материал се доставя в лабораторията защитен от охлаждане.

Действието на ниските температури спира гнилостните и ферментационни процеси, което се използва широко за консервиране. хранителни продукти V хладилни агрегати, мазета, ледници. При температури под 0°C микробите изпадат в състояние на спряна анимация - метаболитните процеси се забавят и размножаването спира. Въпреки това, ако има подходящи температурни условияи хранителна среда се възстановяват жизнените функции на микробните клетки. Това свойство на микроорганизмите се използва в лабораторната практика за запазване на микробни култури при ниски температури. Бързата смяна на високи и ниски температури (замръзване и размразяване) също има пагубен ефект върху микроорганизмите - това води до разкъсване на клетъчните мембрани.

Сушене. Водата е необходима за нормалното функциониране на микроорганизмите. Изсушаването води до дехидратация на цитоплазмата, нарушаване на целостта на цитоплазмената мембрана, в резултат на което се нарушава храненето на микробните клетки и настъпва тяхната смърт.

Краен срок за умиране различни видовемикроорганизмите под въздействието на сушене се различават значително. Например, патогенните Neisseria (менингококи, гонококи), Leptospira, Treponema pallidum и други умират при изсушаване след няколко минути. Vibrio cholerae издържа на сушене 2 дни, Salmonella typhoid - 70 дни, а Mycobacterium tuberculosis - 90 дни. Но изсъхналата храчка на пациенти с туберкулоза, в която патогените са защитени от суха протеинова обвивка, остава инфекциозна в продължение на 10 месеца.

Спорите са особено устойчиви на изсушаване, както и на други влияния на околната среда. Спорите на антраксния бацил запазват способността си да покълнат в продължение на 10 години, а спорите на плесенните гъби - до 20 години.

Неблагоприятното въздействие на сушенето върху микроорганизмите отдавна се използва за консервиране на зеленчуци, плодове, месо, риба и лечебни билки. При това, попаднали в условия висока влажност, такива продукти бързо се влошават поради възстановяването на микробната активност.

Методът на сушене чрез замразяване се използва широко за съхранение на култури от микроорганизми, ваксини и други биологични препарати. Същността на метода е, че микроорганизмите или препаратите първо се замразяват и след това се изсушават под вакуум. В този случай микробните клетки влизат в състояние на суспендирана анимация и запазват биологичните си свойства в продължение на няколко месеца или години.

Лъчиста енергия. В природата микроорганизмите са постоянно изложени на слънчева радиация. Пряката слънчева светлина причинява смъртта на много микроорганизми в рамките на няколко часа, с изключение на фотосинтезиращите бактерии (зелени и лилави серни бактерии). Вредното въздействие на слънчевата светлина се причинява от активността на ултравиолетовите лъчи (UV лъчи). Те инактивират клетъчните ензими и увреждат ДНК. Патогенните бактерии са по-чувствителни към действието на UV лъчите от сапрофитите. Поради това е по-добре микробните култури да се съхраняват в лабораторията на тъмно. В това отношение опитът на Бюхнер е показателен.

Обилна култура от бактерии се инокулира в петриево блюдо с тънък слой агар. Букви, изрязани от черна хартия, се залепват върху външната повърхност на чашата със семена, образувайки например думата „тиф“. Чашата с дъното нагоре се облъчва на пряка слънчева светлина за 1 ч. След това хартиите се отстраняват и чашата се поставя за едно денонощие в термостат при 37° С. Бактериален растеж се наблюдава само на тези места на агар, които са защитени от ултравиолетовите лъчи чрез стикери с букви. Останалата част от агара остава прозрачна, т.е. няма растеж на микроорганизми (фиг. 11).

Голямо е значението на слънчевата светлина като естествен фактор за подобряване здравето на външната среда. Освобождава въздуха, водата от естествените резервоари и горните слоеве на почвата от патогенни бактерии.

Бактерицидният (унищожаващ бактериите) ефект на UV лъчите се използва за стерилизиране на въздуха затворени помещения(операционни, съблекални, боксове и др.), както и вода и мляко. Източник на тези лъчи са ултравиолетовите лампи и бактерицидните лампи.

Други видове лъчиста енергия - рентгенови лъчи, α-, β-, γ-лъчи имат вредно въздействие върху микроорганизмите само в големи дози от порядъка на 440-280 J/kg. Смъртта на микробите се причинява от разрушаването на ядрените структури и клетъчната ДНК. Ниските дози радиация стимулират растежа на микробните клетки. Микроорганизмите са много по-устойчиви на радиоактивно лъчение от висшите организми. Известно е, че тионните бактерии живеят в находищата на уранова руда. Във вода от ядрени реактори са открити бактерии при концентрация на йонизиращо лъчение 20-30 kJ/kg.

Бактерицидният ефект на йонизиращото лъчение се използва за консервиране на определени хранителни продукти, стерилизация на биологични препарати (серуми, ваксини и др.), При което свойствата на стерилизирания материал не се променят.

IN последните годиниРадиационният метод се използва за стерилизиране на продукти за еднократна употреба - полистиренови пипети, петриеви панички, ямки за серологични реакции, спринцовки, както и материал за зашиване - кетгут и др.

Ултразвукпричинява значително увреждане на микробните клетки. Под въздействието на ултразвук се активират газове, намиращи се в течната среда на цитоплазмата, и вътре в клетката възниква високо налягане (до 10 000 atm). Това води до разкъсване на клетъчната мембрана и клетъчна смърт. Ултразвукът се използва за стерилизация на хранителни продукти (мляко, плодови сокове) и питейна вода.

Високо налягане. Бактериите и особено техните спори са устойчиви на механичен натиск. В природата се срещат бактерии, които живеят в морета и океани на дълбочина 1000-10000 m под налягане от 100 до 900 atm. Някои видове бактерии издържат на налягане до 3000-5000 atm, а бактериалните спори - дори до 20 000 atm.

Химични фактори

Ефектът на химикалите върху микроорганизмите варира в зависимост от естеството на химичното съединение, неговата концентрация и продължителността на излагане на микробните клетки. В зависимост от концентрацията, химичното вещество може да бъде източник на хранене или да има инхибиторен ефект върху жизнената активност на микроорганизмите. Например, 0,5-2% разтвор на глюкоза стимулира растежа на микробите, а 20-40% разтвори на глюкоза инхибират пролиферацията на микробните клетки.

Много химични съединения, които имат вредно въздействие върху микроорганизмите, се използват в медицинската практика като дезинфектанти и антисептици.

Химикалите, използвани за дезинфекция, се наричат ​​дезинфектанти. Дезинфекцията се отнася до мерки, насочени към унищожаване на патогенни микроорганизми в различни обекти на околната среда. Дезинфектантите включват халогенидни съединения, феноли и техните производни, соли на тежки метали, някои киселини, основи, алкохоли и др. Те причиняват смъртта на микробните клетки, действайки в оптимални концентрации за определено време. Много дезинфектанти имат вредно въздействие върху тъканите на макроорганизма.

Антисептиците са химикали, които могат да причинят смъртта на микроорганизми или да потиснат техния растеж и размножаване. Използват се за терапевтични цели (химиотерапия), както и за дезинфекция на рани, кожа и човешки лигавици. Антисептични свойства имат водороден прекис, алкохолни разтвори на йод, брилянтно зелено, разтвори на калиев перманганат и др.. За консервиране на храни се използват някои антисептични вещества (оцетна, сярна, бензоена киселина и др.) В дози, които са безвредни за хората.

Според механизма на действие химичните вещества с антимикробна активност могат да бъдат разделени на няколко групи.

1. Повърхностноактивните вещества (мастни киселини, сапуни и други детергенти) причиняват намаляване на повърхностното напрежение, което води до неизправност клетъчна стенаи цитоплазмената мембрана на микроорганизмите.

2. Фенолът, крезолът и техните производни причиняват коагулация на микробните протеини. Използват се за дезинфекция на инфекциозен материал в микробиологичната практика и инфекциозните болници.

3. Окислителите, взаимодействайки с микробните протеини, нарушават активността на ензимите и причиняват денатурация на протеина. Активни окислители са хлорът и озонът, които се използват за дезинфекция на питейната вода. Хлорните производни (белина, хлорамин) се използват широко за дезинфекционни цели. Водороден прекис, калиев перманганат, йод и др. имат окислителни свойства.

4. Формалдехидът се използва под формата на 40% разтвор (формалин) за дезинфекция. Убива вегетативни и спорови форми на микроорганизми. Формалинът блокира аминогрупите на протеините на микробните клетки и предизвиква тяхната денатурация.

5. Солите на тежките метали (живак, олово, цинк, злато и др.) коагулират протеините на микробната клетка, като по този начин причиняват тяхната смърт. Редица метали (сребро, злато, живак и др.) имат бактерициден ефект върху микроорганизмите в незначителни концентрации. Това свойство се нарича олигодинамично действие (от лат. oligos – малък, dinamys – сила). Доказано е, че водата в сребърните съдове не гние поради бактерицидния ефект на сребърните йони. За предотвратяване на бленорея * при новородени дълго време се използва 1% разтвор на сребърен нитрат. Колоидни разтвори органични съединениясребро (протаргол, коларгол) също се използва под формата на локални антисептици.

* (Бленореята е възпаление на конюнктивата на окото, причинено от гонококи.)

Препаратите с живак имат силно антимикробно действие. От древни времена за дезинфекция се използва живачен бихлорид или живачен хлорид (в разреждане 1:1000). Тя обаче има токсичен ефектвърху тъканта на макроорганизма и използването му е ограничено.

6. Багрилата (диамантено зелено, риванол и др.) имат свойството да потискат растежа на бактериите. Разтвори на редица багрила се използват като антисептици, а също така се добавят към някои хранителни среди за инхибиране на растежа на съпътстващата микрофлора.

Разрушителното действие на редица физични и химични фактори върху микроорганизмите е в основата на асептични и антисептични методи, широко използвани в медицинската и санитарна практика.

Асептиката е система от превантивни мерки, които предотвратяват микробно замърсяване на обект (рана, хирургично поле, култури от микроорганизми и др.), Въз основа на физически методи.

Антисептиците са набор от мерки, насочени към унищожаване на микроорганизми в рана, цялото тяло или върху предмети от околната среда, като се използват различни дезинфекциращи химикали.

Биологични фактори

В естествените местообитания микроорганизмите не съществуват изолирано, а са в сложни взаимоотношения, които се свеждат главно до симбиоза, метабиоза и антагонизъм.

Симбиозата е съжителство на организми от различни видове, което им носи взаимна полза. В същото време заедно те се развиват по-добре от всеки поотделно.

Съществуват симбиотични връзки между нодулни бактерии и бобови растения, между нишковидни гъби и синьо-зелени водорасли (лишеи): Симбиозата на млечнокисели бактерии и алкохолни дрожди се използва за приготвяне на някои млечнокисели продукти (кефир, кумис).

Метабиозата е вид взаимоотношения, при които метаболитните продукти на един вид микроорганизми създават необходимите условия за развитието на други. Например, гнилостните микроорганизми, които разграждат протеиновите вещества, допринасят за натрупването на амониеви съединения в околната среда и създават благоприятни условия за растежа и развитието на нитрифициращи бактерии. А развитието на анаероби в добре аерирана почва би било невъзможно без аероби, които абсорбират свободен кислород.

Метабиотичните взаимоотношения са широко разпространени сред почвените микроорганизми и са в основата на цикъла на веществата в природата.

Антагонизмът е форма на връзка, при която един микроорганизъм потиска развитието на друг или може да причини пълната му смърт. Между микроорганизмите в борбата за съществуване са се развили антагонистични отношения. Навсякъде, където живеят, има постоянна борба между тях за източници на храна, кислород във въздуха и местообитание. По този начин повечето патогенни бактерии, попаднали във външната среда (почва, вода) със секретите на пациентите, не могат да издържат на дългосрочна конкуренция с множество сапрофити и умират сравнително бързо.

Антагонизмът може да бъде причинен от прякото влияние на микроорганизмите един върху друг или от действието на техните метаболитни продукти. Например протозоите поглъщат бактерии, а фагите ги лизират. Червата на новородените са колонизирани от млечнокисели бактерии Bifidobacterium bifidum. Чрез отделянето на млечна киселина те потискат развитието на гнилостните бактерии и по този начин предпазват все още крехкия организъм от чревни разстройства кърмачета. Някои микроорганизми в процеса на живот произвеждат различни вещества, които имат пагубен ефект върху бактериите и други микроби. Тези вещества включват антибиотици (вижте "Антибиотици").

Контролни въпроси

1. Какви физични фактори влияят върху жизнената активност на микроорганизмите?

2. Какви вещества се класифицират като дезинфектанти и как се различават по механизма си на действие върху микроорганизмите?

3. Избройте какви връзки съществуват между микроорганизмите?

Стерилизация

Стерилизацията е стерилизация, т.е. пълно освобождаване на обекти от околната среда от микроорганизми и техните спори.

Стерилизацията се извършва по различни начини:

1) физически (излагане на висока температура, UV лъчи, използване на бактериални филтри);

2) химически (използване на различни дезинфектанти, антисептици);

3) биологични (използване на антибиотици).

В лабораторната практика обикновено се използват физични методи за стерилизация.

Възможността и осъществимостта на използването на един или друг метод на стерилизация се определя от характеристиките на материала, който се стерилизира, неговите физични и химични свойства.

Физически методи

Калцинирането в пламъка на горелка или фламбирането е метод на стерилизация, при който обектът е напълно стерилизиран, тъй като както вегетативните клетки, така и микробните спори умират. Обикновено се калцинират бактериологични бримки, шпатули, пипети, предметни стъкла и покривни стъкла и малки инструменти. Ножиците и скалпелите не трябва да се стерилизират чрез нагряване, тъй като под въздействието на огън режещата повърхност става матова.

Стерилизация със суха топлина

Стерилизация със суха топлина или горещ въздух се извършва в пещи на Пастьор (сушилни). Фурната Pasteur е двустенен шкаф, изработен от топлоустойчиви материали - метал и азбест. Загрейте шкафа с помощта на газови горелки или електрически нагреватели. Шкафовете с електрическо отопление са оборудвани с регулатори за осигуряване на необходимата температура. За контрол на температурата има термометър, поставен в отвора в горната стена на шкафа.

Сухата топлина се използва за стерилизиране на лабораторни стъклени съдове. Съдовете, подготвени за стерилизация, се зареждат свободно във фурната, за да се осигури равномерно и надеждно нагряване на материала, който се стерилизира. Затворете плътно вратата на шкафа, включете нагревателя, доведете температурата до 160-165 ° C и стерилизирайте при тази температура за 1 час.В края на стерилизацията изключете отоплението, но не отваряйте вратата на шкафа, докато не фурната е изстинала; в противен случай студен въздух, влизането в шкафа може да причини пукнатини в горещите съдове за готвене.

Стерилизирането в пещ на Пастьор може да се извърши при различни температури и експозиции (време за стерилизация) (Таблица 1).

Течности (хранителни среди, изотоничен разтвор на натриев хлорид и др.), Предмети от каучук и синтетични материали не могат да бъдат стерилизирани със суха топлина, тъй като течностите кипят и се изливат, а каучукът и синтетичните материали се стопяват.

За да се контролира стерилизацията в пещ на Пастьор, копринените нишки се навлажняват в култура от спорообразуващи бактерии, изсушават се, поставят се в стерилна паничка на Петри и се поставят в пещ на Пастьор. Стерилизацията се извършва при температура 165°С за 1 час (за контрол част от конците се оставят на стайна температура). След това стерилизираните и контролните нишки се поставят върху повърхността на агара в петриево блюдо или се поставят в епруветки с бульон и се инкубират в термостат при 37°С в продължение на 2 дни. При правилна работа на пещта на Пастьор няма да има растеж в епруветки или блюда с хранителни среди, в които са поставени стерилизирани нишки, тъй като бактериалните спори ще умрат, докато бактериалните спори върху нишки, които не са стерилизирани (контрола), ще покълнат върху хранителни вещества медийният растеж ще бъде отбелязан.

За да определите температурата във фурната на Пастьор, можете да използвате захароза или гранулирана захар, която се карамелизира при температура 165-170 ° C.

Подготовка на лабораторна стъклария за стерилизация в пещ на Пастьор. Преди стерилизация лабораторните съдове от стъкло (Петриеви панички, градуирани и пастьорови пипети, флакони, колби, епруветки) трябва да бъдат добре измити, подсушени и опаковани в хартия, в противен случай след стерилизация те могат отново да се заразят с въздушни бактерии.

Петриевите блюда се опаковат в хартия едно или повече парчета наведнъж или се поставят в специални метални кутии.

В горните краища на пипетите се поставят памучни тампони, за да се предотврати навлизането на тестовия материал в устата. Градуираните пипети се увиват в дълги ивици хартия с ширина 4-5 см. Обемът на увитата пипета се отбелязва върху хартията. В моливниците градуираните пипети се стерилизират без допълнително опаковане в хартия.

Забележка. Ако градуирането на пипетите е слабо видимо, то се възстановява преди стерилизация. Маслената боя се нанася върху пипетата и, без да се оставя боята да изсъхне, в нея се втрива прах от бариев сулфат с помощта на кърпа. След това отстранете с парцал излишната боя, която остава само в прорезите. Обработените по този начин пипети трябва да се изплакнат.

Острите краища на пастьоровите пипети се затварят в пламъка на горелка и се увиват в хартия, по 3-5 парчета наведнъж. Пипетите на Пастьор трябва да се опаковат внимателно, за да не се счупят запечатаните краища на капилярите.

Флакони, колби, епруветки се затварят с памучно-марлени запушалки. Корковата тапа трябва да влиза в гърлото на съда на 2/3 от дължината му, не много стегнато, но и не хлабаво. Върху запушалките на всеки съд (с изключение на епруветките) се поставя хартиена капачка. Епруветките се завързват една в друга в групи от 5-50 и се увиват с хартия.

Забележка. При високи температури хартията, в която са опаковани чаши и пипети, и памучната вата пожълтяват и дори могат да се овъглят, така че всеки нов вид хартия, получен в лабораторията, трябва да бъде тестван при приетите температурни условия.

Контролни въпроси

1. Какво се разбира под термина стерилизация?

2. Как се извършва стерилизацията?

3. Какво се стерилизира чрез калциниране на огън?

4. Опишете устройството и режима на работа на пещта на Пастьор.

5. Какво се стерилизира във фурната на Пастьор?

6. Как се подготвят стъклените съдове за стерилизация?

7. Защо хранителните среди и гумените предмети не могат да бъдат стерилизирани в пещ на Пастьор?

Упражнение

Подгответе петриеви панички, градуирани пипети, пастьорови пипети, епруветки, колби и флакони за стерилизация.

Стерилизация чрез варене

Варенето е метод на стерилизация, който гарантира стерилност, при условие че няма спори в стерилизирания материал. Използва се за обработка на инструментални спринцовки, стъкло и метални приборигумени тръби и др.

Стерилизирането чрез кипене обикновено се извършва в стерилизатор - метална кутияс правоъгълна форма с плътно затварящ се капак. Материалът за стерилизация се поставя върху наличната мрежа в стерилизатора и се пълни с вода. За да увеличите точката на кипене и да премахнете твърдостта на водата, добавете 1-2% натриев бикарбонат (по-добре е да използвате дестилирана вода). Стерилизаторът се затваря с капак и се нагрява.За начало на стерилизацията се счита моментът на завиране на водата, времето за кипене е 15-30 минути. В края на стерилизацията мрежата с инструменти се отстранява чрез страничните дръжки със специални кукички, а инструментите в нея се вземат със стерилни пинсети или щипки, които се изваряват заедно с останалите инструменти.

Парната стерилизация се извършва по два начина: 1) пара под налягане; 2) течаща пара.

Парна стерилизация под наляганепроизведени в автоклав. Този метод на стерилизация се основава на излагане на стерилизираните материали на наситена водна пара при налягане над атмосферното. В резултат на такава стерилизация, както вегетативните, така и споровите форми на микроорганизмите умират с едно третиране.

Автоклавът (фиг. 12) представлява масивен котел, покрит отвън с метален корпус, херметически затворен с капак, който е здраво завинтен към котела с шарнирни болтове. Друг, по-малък диаметър, който се нарича стерилизационна камера, се вкарва във външния котел. Предметите за стерилизация се поставят в тази камера. Между двата котела има свободно пространство, наречено водно-парна камера. Водата се налива в тази камера през фуния, фиксирана отвън, до определено ниво, отбелязано на специална водомерна тръба. Когато водата се вари във водно-парна камера, се получава пара. Стерилизационната камера е снабдена с изпускателен кран с предпазен клапан, който позволява на парата да излиза, когато налягането се повиши над необходимото ниво. За определяне на налягането, създадено в стерилизационната камера, се използва манометър.

Ориз. 12. Схема на автоклав. M - манометър; PC - предпазен клапан; B - фуния за вода; K 2 - кран за изпускане на вода; K 3 - клапан за изпускане на пара

Нормалното атмосферно налягане (760 mm Hg) се приема за нула. Съществува определена връзка между показанията на манометъра и температурата (Таблица 2).

В момента има автоклави с автоматичен контрол на режима на работа. В допълнение към обикновения манометър, те са оборудвани с електрически контактен манометър, който предотвратява повишаването на налягането над предварително определена стойност и по този начин осигурява постоянството на желаната температура в автоклава.

Пара под налягане стерилизира различни хранителни среди (с изключение на тези, съдържащи естествени протеини), течности (изотоничен разтвор на натриев хлорид, вода и др.); устройства, особено тези с гумени части.

Температурата и продължителността на автоклавиране на хранителните среди се определят от техния състав, посочен в рецептата за приготвяне на хранителната среда. Например, прости среди (месен пептонен агар, месен пептонен бульон) се стерилизират за 20 минути при 120 ° C (1 atm). При тази температура обаче е невъзможно да се стерилизират среди, съдържащи естествени протеини, въглехидрати и други вещества, които лесно се променят чрез нагряване. Средите с въглехидрати се стерилизират фракционно при 100°С или в автоклав при 112°С (0,5 atm) за 10-15 минути. Различни течности, устройства с гумени маркучи, тапи, бактериални свещи и филтри се стерилизират за 20 минути при 120 ° C (1 atm).

внимание! Заразеният материал също се неутрализира в автоклави. Чаши и епруветки, съдържащи култури от микроорганизми, се поставят в специални метални кофи или резервоари с отвори в капака за проникване на пара и се стерилизират в автоклав при 126 ° C (1,5 atm) в продължение на 1 час. Инструментите се стерилизират по същия начин след работа с бактерии , образувайки спорове.

До работа с автоклава се допускат само специално обучени лица, които трябва стриктно и точно да спазват правилата, посочени в приложената към уреда инструкция.

Техника на автоклавиране. 1. Преди работа проверете изправността на всички части и шлайфането на крановете.

2. Вода (дестилирана или преварена, за да не се образува котлен камък) се налива през фуния, монтирана извън бойлера до горната маркировка на стъклото на водомера. Кранът под фунията е затворен.

3. Материалът за стерилизация се поставя в стерилизационната камера върху специална мрежа. Артикулите не трябва да се зареждат прекалено плътно, тъй като парата трябва да преминава свободно между тях, в противен случай те няма да се нагреят до необходимата температура и могат да останат нестерилни.

4. Гуменото уплътнение на капака се натрива с тебешир за по-добро уплътнение.

5. Капакът се затваря и се завинтва към корпуса на автоклава, като болтовете се завинтват по двойки на кръст.

6. Отворете докрай изпускателния вентил, свързващ стерилизационната камера с външния въздух, и започнете да загрявате автоклава. Автоклавът обикновено се нагрява с газ или електричество.

При нагряване на автоклава водата завира, получената пара се издига между стените на котлите и през специални отвори в стената на вътрешния бойлер (виж фиг. 12), навлиза в стерилизационната камера и излиза през отворения изходен клапан. Първо, парата излиза заедно с въздуха в автоклава. Необходимо е целият въздух да бъде изтласкан от автоклава, в противен случай показанията на манометъра няма да съответстват на температурата в автоклава.

Появата на непрекъснат силен поток от пара показва пълно отстраняване на въздуха от автоклава; След това изходният клапан се затваря и налягането вътре в автоклава започва постепенно да се увеличава.

7. За начало на стерилизация се счита моментът, в който показанията на манометъра достигнат определената стойност. Нагряването се регулира така, че налягането в автоклава да не се променя за определен период от време.

8. След изтичане на времето за стерилизация, нагряването на автоклава се спира, а парата се изпуска през изпускателния клапан. Когато стрелката на манометъра падне до нула, отворете капака. За да избегнете изгаряния от пара, останала в автоклава, капакът трябва да се отваря към вас.

Може да се провери нивото на температурата в автоклава, т.е. коректността на показанията на манометъра. За да направите това, използвайте различни вещества, които имат определена точка на топене: антипирин (113 ° C), резорцинол и сяра (119 ° C), бензоена киселина (120 ° C). Едно от тези вещества се смесва с незначително количество багрило (муксин или метиленово синьо) и се излива в стъклена тръба, която се затваря и поставя в вертикално положениемежду материала, който се стерилизира. Ако температурата е достатъчна, веществото ще се стопи и ще оцвети цвета на съответното багрило.

За да се провери ефективността на стерилизацията, в автоклава се поставя епруветка с известна култура от спори. След автоклавиране епруветката се прехвърля в термостат за 24-48 часа, като се отбелязва липсата или наличието на растеж. Липсата на растеж показва правилна работа на устройството.

Стерилизация с течаща парапроизведени в апарата на Кох. Този метод се използва в случаите, когато обектът, който се стерилизира, се променя при температура над 100° C. С течаща пара се стерилизират хранителни среди, съдържащи урея, въглехидрати, мляко, картофи, желатин и др.

Апаратът на Кох (бойлер) е метален цилиндър, облицован отвън (за намаляване на топлообмена) с филц или азбест. Цилиндърът е затворен с коничен капак с отвор за излизане на парата. Вътре в цилиндъра има стойка, до нивото на която се налива вода. На стойката се поставя кофа с отвор, в която се поставя материалът за стерилизация. Апаратът на Кох се нагрява с газ или електричество. Времето за стерилизация се отчита от момента на енергично изпускане на пара по краищата на капака и от изхода на парата. Стерилизирайте 30-60 минути. В края на стерилизацията нагряването се спира. Извадете кофата с материала от апарата и я оставете на стайна температура до следващия ден. Затоплянето се извършва 3 дни подред при температура 100°С за 30-60 минути. Този метод се нарича фракционна стерилизация. При първото нагряване вегетативните форми на микробите умират, докато споровите се запазват. В рамките на един ден спорите успяват да покълнат и да се превърнат във вегетативни форми, които загиват на втория ден от стерилизацията. Тъй като е възможно някои от спорите да не са имали време да покълнат, материалът се съхранява още 24 часа и след това се извършва трета стерилизация. Не се изисква стерилизация с течаща пара в апарат на Кох специален контрол, тъй като индикаторът правилна работаУстройството гарантира стерилността на подготвените хранителни среди. Можете също така да стерилизирате с течаща пара в автоклав с отвинтен капак и отворен изходен клапан.

Контролни въпроси

1. Какви хранителни среди се стерилизират на пара?

2. Какво е стерилизатор и как работи?

3. Защо трябва да се използва дестилирана вода при стерилизация чрез кипене?

4. Опишете устройството и режима на работа на автоклава.

5. Какво се стерилизира в автоклав?

6. Какво служи като контрол за правилна стерилизация по време на автоклавиране?

7. Какво представлява стерилизацията с течаща пара?

8. Опишете структурата на апарата на Кох.

9. Каква е целта на фракционната стерилизация?

Упражнение

Попълнете формата.

Фракционната стерилизация може да се извърши и в коагулант на Кох.

Коагулантът на Кох се използва за коагулиране на суроватъчна и яйчна хранителна среда и едновременно с уплътняването на средата се стерилизира.

Коагулант на Кохпредставлява плоска метална кутия с двойни стени, покрита отвън топлоизолационен материал. Водата се излива в пространството между стените през специален отвор, разположен в горната част на външната стена. Отворът се затваря със запушалка, в която се поставя термометър. Устройството се затваря с два капака: стъклен и метален. През стъкления капак можете да наблюдавате процеса на коагулация. Епруветките със среда се поставят на дъното на коагулатора в наклонено положение.

Коагулаторът се нагрява с газ или електричество. Средите се стерилизират еднократно при температура 90°С за 1 час или частично - 3 дни подред при 80°С за 1 час.

Тиндализация* - фракционна стерилизация при ниски температури - използва се за вещества, които лесно се разрушават и денатурират при температура от 60 ° C (например протеинови течности). Материалът за стерилизация се загрява на водна баня или в специални устройствас термостати при температура 56-58° С за един час в продължение на 5 поредни дни.

* (Методът на стерилизация е кръстен на Тиндал, който го предлага.)

Пастьоризация- стерилизация при 65-70 ° C за 1 час, предложена от Пастьор за унищожаване на неспорови форми на микроби. Пастьоризират се мляко, вино, бира, плодови сокове и други продукти. Млякото се пастьоризира за отстраняване на млечнокиселите и патогенните бактерии (бруцела, микобактериум туберкулоза, шигела, салмонела, стафилококи и др.). При пастьоризиране на бира, плодови сокове и вино умират микроорганизми, които причиняват различни видове ферментация. Пастьоризираните храни се съхраняват най-добре в хладилник.

Контролни въпроси

1. Каква е целта и структурата на коагулатора на Кох?

2. Какви са методите за стерилизация в машина за съсирване?

3. Какво е тиндализация?

4. Какво е пастьоризация?

Стерилизация чрез ултравиолетово облъчване

Стерилизацията с UV лъчи се извършва с помощта на специални инсталации- бактерицидни лампи. UV лъчите имат висока антимикробна активност и могат да причинят смъртта не само на вегетативни клетки, но и на спори. UV лъчението се използва за стерилизиране на въздуха в болници, операционни зали, детски заведения и др. В микробиологична лаборатория кутията се обработва с UV лъчи преди работа.

Контролни въпроси

1. Какви свойства притежават ултравиолетовите лъчи?

2. В какви случаи се използва стерилизация с ултравиолетово лъчение?

Механична стерилизация с бактериални филтри

Филтрационната стерилизация се използва в случаите, когато стерилизираните обекти се променят при нагряване. Филтрацията се извършва с помощта на бактериални филтри, изработени от различни фино порести материали. Порите на филтрите трябва да са достатъчно малки (до 1 микрон), за да осигурят механично задържане на бактерии, поради което някои автори наричат ​​филтрацията т.н. механични методистерилизация.

Методът на филтриране се използва за стерилизиране на хранителни среди, съдържащи протеин, серум и някои антибиотици, както и за отделяне на бактерии от вируси, фаги и екзотоксини.

В микробиологичната практика се използват азбестови филтри Seitz, мембранни филтри и филтри Chamberlant и Berkefeld (свещи).

Филтрите Seitz са дискове, направени от смес от азбест и целулоза. Дебелината им е 3-5 мм, диаметър 35-140 мм. Домашната промишленост произвежда филтри от две марки: "F" (филтриране) - задържане на суспендирани частици, но позволяващо преминаване на бактерии; "SF" (стерилизиращ) - с по-малки пори, задържащи бактерии, но пропускащи вируси. Намачканите азбестови плочи, както и плочите със счупвания и пукнатини са неподходящи за работа.

Мембранните филтри са изработени от нитроцелулоза. Те са дискове бялоДебелина 0,1 мм и диаметър 35 мм. В зависимост от размера на порите те се обозначават с номера 1, 2, 3, 4 и 5 (табл. 3).

Най-подходящ за стерилизация е филтър No 1. Освен изброените произвеждат и така наречения предфилтър, предназначен да освободи филтрираната течност от съдържащите се в нея големи частици.

Филтрите Chamberlant и Berkefeld (свещи) са кухи цилиндри, затворени от единия край. Свещите Chamberlant са направени от каолин, смесен с пясък и кварц. Те са стандартизирани по размер на порите и обозначени с L 1, L 2, L 3 ... L 13. Филтрите (свещи) Berkefeld се приготвят от инфузионна почва, според размера на порите им се обозначават V, N, W, което съответства на диаметър на порите 3-4, 4-7, 8-12 микрона.

Работата с бактериални филтри се извършва по следния начин. Филтърът трябва да бъде закрепен в специален държач, който се поставя във филтърния приемник. Приемникът обикновено е Бунзенова колба. Държачите, в повечето случаи изработени от неръждаема стомана, се състоят от две части: горната, оформена като цилиндър без дъно, и долната, носеща част, завършваща с тръба. Поставят се Seitz филтри с грапавата повърхност нагоре метална мрежаи здраво захванат с винтове между горната част и отдолудържач. Монтираният филтър е закрепен в гумена запушалка, поставена в гърлото на Бунзенова колба. В изходната тръба на колбата, която е свързана към вакуумната помпа, се поставя памучен тампон. Приготвената инсталация се увива в хартия и се стерилизира в автоклав под налягане 1 atm за 20-30 минути. Цялото сглобено устройство се нарича още филтър на Seitz (фиг. 13).

Непосредствено преди филтрирането изходният край на Бунзенова колба се свързва чрез гумена тръба към маслена или водоструйна помпа. Съединенията на различните части са запълнени с парафин, за да се създаде плътно уплътнение. Филтрираната течност се излива в цилиндъра на апарата и помпата се включва, създавайки вакуум в приемника. В резултат на получената разлика в налягането филтрираната течност преминава през порите на филтъра в приемника, а микробите остават на повърхността на филтъра.

Преди употреба мембранните филтри се стерилизират чрез кипене в дестилирана вода. За да се предотврати навиването на филтрите, те първо се поставят в дестилирана вода, загрята до температура 50-60 ° C и се вари на слаб огън в продължение на 30 минути, като водата се сменя 2-3 пъти. Държачът на филтъра и приемникът се стерилизират предварително и устройството се монтира при асептични условия. За да избегнете разкъсване на мембранния филтър върху металната мрежа, поставете чаши от стерилна филтърна хартия под него. След това, като използвате стерилни пинсети с гладки върхове, вземете мембранния филтър от стерилизатора и го поставете върху поддържащата решетка с лъскавата повърхност надолу.

Свещите (Chamberlant), стерилизирани в автоклав, се свързват през гумена тръба към приемник и се спускат в съд (обикновено цилиндър) с филтрирана течност. Филтрирането се извършва с помощта на вакуумна помпа. Стерилен филтрат влиза в приемника, а бактериите се задържат от порите на свещта.

Мембранните и азбестовите филтри са предназначени за еднократна употреба. След употреба свещите се изваряват вода от чешмата, след което се калцинира в муфелна пещ.

Преди последваща употреба свещите се проверяват за цялост. Свещта се спуска в съд с вода и се пропуска въздух. Ако на повърхността на свещта се появят въздушни мехурчета, това означава, че в свещта са се образували пукнатини и тя е неизползваема.

Контролни въпроси

1. Какъв е методът за стерилизация на филтъра? Какво се стерилизира по този метод?

2. Какви бактериални филтри познавате? Как се монтира филтърното устройство, какви условия трябва да се спазват?

Химични методи

Този вид стерилизация се използва ограничено и служи главно за предотвратяване на бактериално замърсяване на хранителна среда и имунобиологични препарати (ваксини и серуми).

Най-често към хранителните среди се добавят вещества като хлороформ, толуен и етер. Ако е необходимо средата да се освободи от тези консерванти, тя се нагрява на водна баня при 56 ° C (консервантите се изпаряват).

За консервиране на ваксини и серуми се използват мертиолат, борна киселина, формалдехид и др.

Биологична стерилизация

Биологичната стерилизация се основава на използването на антибиотици. Този метод се използва за култивиране на вируси.

Контролни въпроси

1. Какво е химическа стерилизация и кога се използва?

2. Какво е биологична стерилизация?

Основните методи за стерилизация са представени в табл. 4.

1 (Стерилизацията е непълна: спорите остават в стерилизирания материал.)

2 (Стерилизацията е непълна: вирусите остават в стерилизирания материал.)

Дезинфекция

В микробиологичната практика се използват различни дезинфектанти: 3-5% разтвори на фенол, 5-10% разтвори на лизол, 1-5% разтвори на хлорамин, 3-6% разтвори на водороден прекис, 1-5% разтвори на формалдехид, разтвори на живачен хлорид в разреждане 1: 1000 (0,1%), 70° алкохол и др.

Отработеният патологичен материал (гной, изпражнения, урина, храчка, кръв, цереброспинална течност) се дезинфекцира преди източването му в канализацията. Дезинфекцията се извършва със суха белина или 3-5% разтвор на хлорамин.

Пипети (градуирани и Пастьор), стъклени шпатули, предметни стъкла и покривни стъкла, замърсени с патологичен материал или култури от микроорганизми, се потапят във вода за 24 часа. стъклени бурканис 3% разтвор на фенол или водороден прекис.

След приключване на работа със заразен материал, лаборантът трябва да го третира с дезинфекционен разтвор. работно мястои ръцете. Повърхността на работната маса се избърсва с памучна вата, навлажнена с 3% разтвор на фенол. Ръцете се дезинфекцират с 1% разтвор на хлорамин. За да направите това, използвайте памучна топка или тампон от марлянавлажнете с дезинфекционен разтвор и избършете лявата ръка, след това дясната и след това измийте ръцете си с топла вода и сапун.

Изборът на дезинфектант, неговата концентрация и продължителността на експозиция (експозиция) зависят от биологични свойствамикроби и средата, в която дезинфектантът ще влезе в контакт с патогенни микроорганизми. Например живачният хлорид, фенолът и алкохолите са неподходящи за дезинфекция на протеинови субстрати (гной, кръв, храчки), тъй като под тяхно влияние настъпва коагулация на протеини, а коагулираният протеин предпазва микроорганизмите от ефектите на дезинфектанти.

При дезинфекция на материал, заразен със спорови форми на микроорганизми, се използват 5% разтвор на хлорамин, 1-2,5% разтвори на активиран хлорамин, 5-10% разтвори на формалин и други вещества.

Дезинфекцията, която се извършва през целия ден по време на работа, се нарича текуща, а в края на работа - окончателна.

Дезинфектанти и инструкции за приготвяне на работни разтвори от тях. Избелващ прах- бял прах на бучки с остра миризма на хлор, не се разтваря напълно във вода. Бактерицидният ефект зависи от съдържанието на активен хлор, чието количество варира от 28 до 36%. Хлор, съдържащ по-малко от 25% активен хлор, не е подходящ за дезинфекция.

Ако се съхранява неправилно, белината се разлага и губи част от активния си хлор. Разлагането се подпомага от топлина, влага и слънчева светлина, така че белината трябва да се съхранява на сухо и тъмно място в плътно затворен съд.

Сухата белина се използва за дезинфекция на човешки и животински секрети (в размер на 200 g на 1 литър изпражнения и 10 g на 1 литър урина).

Приготвяне на оригиналния 10% избистрен разтвор на белина. Вземете 1 кг суха белина, поставете я в емайлирана кофа и я смилайте. След това изсипете студена водадо обем от 10 литра, разбъркайте добре, затворете с капак и оставете за един ден на хладно място. След това полученият 10% избистрен разтвор внимателно се отцежда и филтрира през няколко слоя марля или се филтрира през плътна кърпа. Съхранява се в бутилки от тъмно стъкло, затворени с дървена тапа, на хладно място за не повече от 10 дни. Работните разтвори с необходимата концентрация се приготвят от изходния разтвор непосредствено преди употреба. Количеството основен разтвор, необходимо за приготвяне на 0,2-10% избистрени разтвори на белина, е дадено в табл. 5.

Концентрацията на избистрените разтвори на белина от 0,2 до 10% се избира в зависимост от естеството на обекта, който се дезинфекцира, и устойчивостта на патогена.

хлорамин - кристално веществобял или жълтеникав на цвят, съдържа 24-28% активен хлор. Разтваря се добре във вода при стайна температура, така че разтворите се приготвят непосредствено преди дезинфекция. Използвайте 0,2-10% разтвори на хлорамин. Връзката между процентната концентрация на разтвора и количеството хлорамин в грамове на 1 и 10 литра е дадена в табл. 6.

Разтворете хлорамин в стъклен или емайлиран съд. При съхранение на разтвори на хлорамин в тъмни стъклени съдове с шлифована запушалка тяхната активност се запазва до 15 дни.

Активиран хлорамин. Дезинфекциращите свойства на хлорамина се засилват чрез добавяне на активатор към него в съотношение 1:1 или 1:2. Като активатор се използват амониеви съединения - амониев хлорид, сулфат, амониев нитрат. Активираният хлорамин се използва в концентрации от 0,5, 1 и 2,5%. Приготвят се непосредствено преди употреба. Хлораминът и амониевата сол се претеглят отделно. Първо, хлораминът се разтваря във вода и след това се добавя активатор.

Предимството на разтворите с активиран хлорамин пред конвенционалните е, че добавянето на активатор ускорява отделянето на активен хлор. Поради това лекарството има пагубен ефект не само върху вегетативните форми на микроорганизмите, но и върху техните спори. Активираният хлорамин се използва в по-ниски концентрации и с по-малко излагане.

Фенолът (карболовата киселина) е безцветен, игловиден кристал с остра, характерна миризма. При излагане на светлина, въздух и влага кристалите придобиват пурпурночервен цвят. Съхранявайте в затворени банкиот тъмно стъкло и на защитено от светлина място.

Фенолът е разтворим във вода, алкохол, етер и мастни масла. Притежавайки голяма хигроскопичност, той абсорбира влагата от околната среда и става течен. Течната карболова киселина съдържа 90% кристален фенол и 10% вода.

Използвайте 3-5% водни разтвори на карболова киселина, приготвени от кристален фенол и течна карболова киселина съгласно схемата, дадена в табл. 7. Активността на фенола се увеличава, когато се разтвори в топла вода(40-50°C).

внимание! Кристалният фенол или течната карболова киселина, ако попаднат върху кожата, могат да причинят дразнене, а във високи концентрации - тежки изгаряния. Ето защо с карболовата киселина трябва да се работи много внимателно. Когато правите разтвори, трябва да носите гумени ръкавици или в краен случай да смажете ръцете си с вазелин.

Ако карболовата киселина попадне върху кожата ви, незабавно я измийте с топла вода и сапун или 40° етилов алкохол.

Забележка. За приготвяне на дезинфекционни разтвори на фенол е по-удобно и по-безопасно да се използва течна карболова киселина.

Контролни въпроси

1. Какви дезинфектанти се използват в микробиологичната практика?

2. Опишете външен види основните свойства на белина, хлорамин, фенол.

3. Какви разтвори на дезинфектанти се използват за дезинфекция на материал, заразен със спорови форми на микроорганизми?

Упражнение

Пригответе 2 литра 5% работен разтвор на избистрена белина; 500 ml 3% разтвор на хлорамин, 300 ml 1% активиран разтвор на хлорамин.

внимание! Преди да започнете да подготвяте решения, направете изчисления.

Провеждане на етап 1 от бактериологичния метод за изолиране на аероби:

Подготвяме фиксиран препарат от изследвания материал, оцветяваме по метода на Грам, микроскопираме и идентифицираме откритите микроорганизми чрез морфотинкториални свойства.

Засяваме изследвания материал върху половин чиния с плътна хранителна среда, като използваме метода „удар с платформа“ (нанасяме материала върху повърхността на плътната хранителна среда в петриево блюдо в ограничена област и след това го разпределяме по сеитба на чести успоредни ивици)

Нека подпишем чашите, като посочим датата на сеитба, и ги поставим с главата надолу в термостат при температура 37 ° за 18-24 часа.

Парен стерилизатор (автоклав) - парна стерилизация под налягане.

Най-надеждният и универсален метод за стерилизация в медицинската и микробиологичната практика е парната стерилизация под налягане. Произвежда се в автоклав, в който се нагряват обектите за стерилизация наситена парапод налягане над атмосферното. Съществува следната връзка между показанията на манометъра и температурата на наситената пара

Нулевото налягане се счита за нормално атмосферно налягане (760 mm Hg).

Стерилизацията се постига само когато автоклавът е в пълна изправност и се експлоатира правилно от специално обучен персонал.Затова е необходим постоянен контрол на режима на стерилизация, който се извършва физически (максимален термометър и др.), биологичен (биотест със спори на тестови култури от микроорганизми) и химични (химични тестове, типови индикатори IP) начини

Извършва се контрол на режима на стерилизация на автоклавите химическипри всяко зареждане на автоклава Химически тест - стъклена тръба с химическо вещество с определена точка на топене, антипирин, резорцин - 110±2°, бензоена киселина - 120±2°, бензамид - 126+1°, урея, никотинамид, D (+)-маноза - 132+2°. В химическите тестове се въвежда анилиново багрило (фуксин, генцнан виолет и др.), Което равномерно оцветява веществото, когато се стопи. Понастоящем по-често се използват индикатори от типа IS (Винар, Русия), които представляват лента от хартия със слой от индикаторна смес, нанесен върху нея и са предназначени за оперативно визуално наблюдение не само на температурата, но и на времето на стерилизация (IS-120, IS-132) Режимът на стерилизация се контролира тримесечно чрез биотест със спори на тест културата Bacillus stearotermophilus BKM B-718

Пещ на Пастьор- стерилизация със суха топлина.

Стъклени, метални и гумени изделия на основата на силиконов каучук се стерилизират в пещ на Пастьор. Режим на стерилизация: 160°C - 150 мин.; 180°C - 60 мин. Контролът на режима на стерилизация по време на всеки цикъл се извършва чрез стерилизационни индикатори IS-160, IS-180; тримесечно - чрез биотест със спори на тестовата култура на Bacillus licheniformis

СтерилизацияМаса 1.

ДезинфекцияТаблица 2.

Стерилизацията със суха топлина се извършва в пещи със суха топлина (пещ на Пастьор). Сухата топлина се използва за стерилизиране на лабораторни стъклени съдове. Зарежда се рехаво във фурната, за да се загрее равномерно материала. Затворете плътно вратата на шкафа, включете електрическия нагревател и доведете температурата до 160-165 0 С и стерилизирайте 1 час. В края на стерилизацията изключете отоплението, но не отваряйте вратата на шкафа, докато фурната не се охлади (в противен случай студеният въздух ще причини пукнатини в съдовете). Режим на стерилизация: 160°C - 60 мин., 180°C - 15 мин., 200°C - 5 мин. Течности, хранителна среда, каучук и синтетични материали не могат да се стерилизират със суха топлина.

Парна стерилизация под наляганеподложени дресинг, хирургическо бельо, хирургически инструменти, хранителна среда, лабораторна стъклария, заразен материал, инжекционни разтвори. Материалът се поставя в контейнери (кутии). На дъното на бикса се поставят платнени подложки, за да абсорбират влагата след стерилизация. Стерилността на материала се поддържа в продължение на 3 дни. Заразеният материал в съдове и епруветки се стерилизира в метални резервоари с капак.

Парна стерилизация под налягане се извършва в автоклав. При едно третиране както вегетативните, така и споровите форми на бактериите умират. Пара под налягане стерилизира хранителни среди, с изключение на среди, съдържащи естествени протеини, течности и устройства с гумени части. Обикновените среди (MPA, MPB) се стерилизират за 20 минути при 120°C (1 atm). Среди, съдържащи естествени протеини и въглехидрати, не могат да бъдат стерилизирани при тази температура, тъй като това са вещества, които лесно се променят чрез нагряване. Средите с въглехидрати се стерилизират фракционно при 100 0 С или в автоклав при 112 0 С (5 атм.) за 10-15 минути. Различни течности, устройства с гумени маркучи, тапи, бактериални свещи и филтри се стерилизират при 120 0 С (1 атм.) за 20 минути.

Заразеният материал (в епруветки, чаши) се поставя в специални метални кофи или резервоари с отвори за проникване на пара и се стерилизира при 126 0 С (1,5 атм.) за 1 час. Инструментите също се стерилизират след работа със спорови бактерии.

Има 2 режима на стерилизация:

1. Течаща пара в автоклав или в апарат на Кох с отвинтен капак и отворен изходен клапан, когато антибактериалният ефект на парата се проявява срещу вегетативни форми. Така се стерилизират среди, съдържащи витамини и въглехидрати, урея, мляко, картофи и желатин. За пълна дестерилизация се използва фракционна стерилизация (при 100 0 С) за 20-30 минути в продължение на 3 дни подред. Освен това убива спорите.
2. Парната стерилизация под налягане е най-много ефективен методлишения. Превързочният материал и бельото се стерилизират при 1 атм. 15-20 минути, заразен материал при 1,5-2 atm за 20-25 минути.

В лабораторната практика при работа с микроорганизми е необходимо постоянно да се вземат мерки, за да се гарантира, че съдовете, хранителната среда и металните инструменти, използвани по време на работа, не съдържат микроби. За тази цел се използват следните методи за стерилизация:

Стерилизация с прегрята пара под налягане;

Стерилизация с течаща пара;

Стерилизация с горещ въздух;

Дезинфекция.

Най-добрият метод за стерилизация е обработката на различни предмети с прегрята пара специални устройства- автоклави.

Автоклав и стерилизация с прегрята пара под налягане

Автоклавите са метални (стоманени, чугунени или медни) котли с двойни стени и масивен капак, който е херметически затворен с болтове и гумено уплътнение. В зависимост от отоплителната система автоклавите биват парни, електрически и огневи (фиг. 42). Произвеждането на високо налягане и прегрята пара при температура 115-120°C в автоклав ви позволява да унищожите както вегетативните клетки, така и микробните спори в рамките на 20-30 минути.

В автоклав се стерилизират всички предмети, които не се развалят при високи температури: различни течности (вода, хранителни среди, които не съдържат въглехидратни компоненти), стъклария, метални инструменти, памучна вата, марля, хартия и др.

В случаите, когато някои вещества не издържат на нормалния режим на стерилизация в автоклав (по-специално хранителни среди, съдържащи захари), те се стерилизират в автоклав при температура 112 ° C за 20 минути, както и при по-меки условия.

При високи наляганияпрегрята пара в автоклава, температурата на нагряване се повишава съответно; Това причинява карамелизиране на захарите, добавени към някои хранителни среди, което прави средата неподходяща за определяне на физиологичните свойства на микробите.

Налягането вътре в автоклава се измерва с помощта на манометър, монтиран в капака или тялото на автоклава. Ако налягането се повиши прекомерно, автоматично се активира предпазен клапан, разположен, в зависимост от конструкцията, на капака или на страничната повърхност на стената на автоклава. Струя пара, излизаща от предпазния клапан със свирене, предупреждава за необходимостта от спиране на отоплението. Ако нагряването не бъде спряно, автоклавът може да експлодира.

Понякога в специален джоб на капака на автоклава се поставя термометър, с който се измерва температурата на стерилизация. Вътре в автоклава има стойка, под която се налива вода през тръба с фуния, разположена извън автоклава. Освен това автоклавите са оборудвани с кран за изпускане на пара и въздух и кран за изливане на вода.

Правилата за работа с автоклав по време на стерилизация са следните: устройството се пълни с вода през фуния и тръба, чието ниво трябва да е под стойката. Предметите за стерилизация се поставят в специални метални бутилки и се зареждат в автоклав. Капакът на автоклава се завинтва.

При отваряне на крана, за да излязат парата и въздухът, започва нагряването. Веднага след като водата заври, получената пара започва да измества въздуха от автоклава. Изпускателният вентил за пара се държи отворен, докато сухата пара изтече от него в непрекъснат поток. Това означава пълно отстраняване на въздуха от автоклава. След това кранът се затваря. Парата, която се натрупва при по-нататъшно нагряване във все по-големи количества, повишава налягането в автоклава и в същото време температурата. Когато работите с автоклав, можете да се ръководите от таблицата на връзките между налягането на парата и нейната температура (Таблица 4).

След като стрелката на манометъра достигне желаното отчитане на налягането (температурата в автоклава ще съответства на приетата температура на стерилизация), регулирайте нагряването на автоклава така, че налягането да остане на същото ниво за необходимото време. В края на стерилизацията спрете нагряването. Когато температурата в автоклава спадне и стрелката на манометъра падне до нула (налягането в автоклава е равно на атмосферното налягане), внимателно отворете вентила за изпускане на пара, изпуснете парата и, отваряйки капака на автоклава, отстранете материала. Невъзможно е вентилът за освобождаване на пара да се отвори преждевременно, преди налягането в автоклава да падне. Рязкото понижаване на налягането в камерата на автоклава ще предизвика бурно кипене на течности, загряти до по-високи температури от 100 °C, т.е. над точката на кипене при нормално атмосферно налягане. Силно кипящите течности ще намокрят или дори ще изтласкат памучните тапи от съдовете - работата ще бъде напразна. Хранителната среда ще се влоши, тъй като микрофлората, идваща от въздуха, лесно се развива върху мокри тапи, прониква вътре и заразява средата. Освен това отварянето на автоклав с повишено налягане е опасно за работника.

Въпреки това, веднага щом стрелката на манометъра спре на нула, автоклавът трябва да се отвори незабавно, в противен случай ще започне да тече конденз върху щепселите и ще ги намокри. За да се избегне намокряне на тапите с кондензирана вода, те се покриват с хартия преди стерилизация.

Материалите, поставени в автоклав, ще бъдат надеждно стерилизирани за 20-30 минути, ако температурата се поддържа на 120°C, което съответства на налягане от 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) или на манометър с 1 atm над нормалното. Автоклав също може успешно да се използва за стерилизиране на среда с течаща пара; в този случай капакът на автоклава не се завинтва.

Котел Кох и течаща парна стерилизация

Котелът на Кох е цилиндър от поцинкована ламарина или мед с двойни стени и коничен капак с форма на шлем (фиг. 43). В средата на капака има отвор за термометър. Външната страна на котела Koch е покрита със слой топлоизолационен материал: азбест, линолеум и др.

Вътре в котела е поставена преграда (стойка), която разделя вътрешното пространство на котела на две части: горна и долна. Долната част се напълва с вода, чието ниво се определя от стъклото на водомера: водата не трябва да покрива горната част на стойката. Предметите за стерилизация се поставят в горната част на котела в решетъчни кофи, поставени една върху друга. След като затвориха котела с капак, те започват да загряват водата в него. За начало на стерилизация се счита моментът, когато термометърът покаже 98-100°C. При липса на термометър за начало на стерилизацията се счита моментът, в който парата започне енергично да излиза от отвора в капака на котела. По този начин обектите за стерилизация винаги ще бъдат в поток от течаща пара, докато котелът работи.

Методът на стерилизация с течаща пара, поради своята простота и достъпност, се използва широко в лабораторната практика. Течаща пара се използва за стерилизиране главно на хранителни среди, чиито свойства се променят при нагряване над 100°C: протеини, въглехидрати и желатин. За тези среди най-подходящ е методът за стерилизация с течаща пара.

Недостатъкът на метода за стерилизация с течаща пара е неговата продължителност, тъй като за пълната стерилизация на средата е необходимо многократно нагряване в котел за определено време - от 20 минути до 1,5 часа (средно 30-45 минути) в зависимост от обема на течността на интервали от 24 ч. Препоръчва се целият период от време между нагряването на средата да се поддържа в термостат при 25-30 °C.

Еднократно нагряване в котел на Кох причинява смъртта само на вегетативни микробни клетки, но спорите могат да оцелеят. При съхраняване на стерилизираната хранителна среда в благоприятни условия(при стайна температура или дори по-добре в термостат), някои от останалите спори ще покълнат и ще се превърнат във вегетативни клетки до следващия ден. Повтарящото се нагряване ще причини смъртта на тези новоразвити клетки. И накрая, трето нагряване след един ден на съхранение на средата в термостат ще осигури пълна стерилност. Този метод се нарича фракционна стерилизация. В практическата работа, вместо стерилизация с течаща пара в котел на Кох, често се използва конвенционална стерилизация в автоклави при 112 °C с обратно налягане от 0,5 atm за 15-20 минути.

Сушилен шкаф и стерилизация с горещ въздух

В лабораторната практика за стерилизиране на микробиологична стъклария е необходимо наличието на сушилен шкаф или така наречената пещ на Пастьор. Принципът на проектиране на сушилния шкаф и пещта на Пастьор са еднакви. Пещите се изработват само в правоъгълна форма, а сушилните шкафове могат да имат не само правоъгълна, но и цилиндрична форма (фиг. 44 и 45). В тези устройства стерилизацията се извършва с горещ въздух (суха топлина) при температура 160 °C за 1 час или при температура 150 °C за 2 часа.

Както фурните на Пастьор, така и сушилните са кухи отвътре устройства с двойни стени, с двойни врати, които се затварят плътно. Отвън те са покрити със слой азбест за топлоизолация. Между стените циркулира горещ въздух, който се нагрява или от електрически спирали, или от газови горелки. Вътре в шкафа има няколко (обикновено два или три) рафта с дупки. В горната част на шкафа има два отвора: единият е за термометъра, а другият е за вентилация. Най-удобни са електрическите сушилни шкафове.

Сушилните шкафове с последен дизайн имат четири степени на нагряване, които се активират от специален регулатор, поставен на страничната стена на шкафа. Необходимата степен на нагряване се постига чрез завъртане на една, две, три или четирите електрически спирали, като последователността на завъртане на спиралите може да бъде произволна.

В допълнение към стъклените съдове можете да стерилизирате марля и памучна вата в сушилни шкафове, но все още е по-добре да ги обработвате в автоклав, тъй като те пожълтяват при температура от 160 ° C. Каучуковите продукти не могат да бъдат стерилизирани в сушилен шкаф, тъй като не издържат на високи температури - стават крехки и се развалят. Течностите кипят при 150-160 °C и променят химичния си състав.

За да се избегне последващо замърсяване на стерилизираните предмети от микроби от въздуха, те се опаковат в хартия преди стерилизация. Петриевите панички се опаковат в хартия по 2 бр., за да няма пропуски в опаковката. Стъклените тръби и пипети също се опаковат в хартия, първо всяка отделно, а след това в опаковки от 10-20 броя. Опаковането на тръбите и пипетите трябва да бъде изключително внимателно, като напълно предпазва външната им повърхност от комуникация с въздуха. Преди стерилизация с горещ въздух колбите, епруветките, бутилките се затварят с памучни тапи и хартиени капачки.

Не позволявайте температурата в сушилнята да се повишава над 170 °C, тъй като при тази температура памучните тампони покафеняват, а хартиените опаковки стават крехки и дори овъглени. За начало на стерилизация се счита моментът, когато термометърът покаже 150-160 °C. След като изтече необходимото време за стерилизация, нагряването се спира. За да предпазите съдовете от напукване, трябва само да стерилизирате сухи съдове и да отворите шкафа след стерилизация само когато температурата в него падне до 50-70 ° C. Малки лабораторни предмети, като платинени примки, игли, пинсети, ножици и др., могат да бъдат стерилизирани чрез просто запалване в пламък газов котлон(или алкохолни лампи).

Дезинфекция

Много често се налага да се прибягва до дезинфекция в микробиологична лаборатория. Най-често използваните дезинфектанти са следните: 3-5% разтвор на карболова киселина и разтвори на други висши феноли, 50-70% разтвор етилов алкохол, същата концентрация на бутилов алкохол, 4% разтвор на формалдехид, 1-2% разтвори на хлороформ и толуен, 0,5% разтвор на хлорамин и др.

В микробиологичните лаборатории на консервните фабрики се дезинфекцират повърхности на маси, съдове, подове и стени на помещения. За дезинфекция на повърхностите на масите можете да използвате не само разтвори на етилов алкохол, но и разтвори на карболова киселина.

Дезинфекция канализационни устройствав консервни заводи и др хранителни предприятияпроизведени от 5-10% разтвор на белина. За дезинфекция на циркул стъклени съдовеКонсервните предприятия използват хлорирана вода, съдържаща най-малко 100 mg активен хлор на литър. За да приготвите такъв разтвор, вземете белина и я смесете с малко количество вода, докато се получи гъста млечна маса. Тази смес се добавя към вода, разбърква се добре и се оставя за един ден. Избелената вар реагира, за да образува калциев оксид хидрат - Ca(OH)2 - и активен хлор. Ca (OH) 2 се утаява на дъното, разтворът над утайката след избистряне се оказва прозрачен и зеленикав на цвят. Накисването на съда в този разтвор продължава 10 минути. След хлориране контейнерът трябва да се измие обилно в течаща вода.

Стерилизацията е представена от физични, химични, механични и биологични методи и различни методи. Възможността за използване на определен метод на стерилизация и неговите методи зависи от характеристиките на материала, който ще се стерилизира, неговите физични и химични свойства. Продължителността на стерилизацията зависи от обекта, който се стерилизира, стерилизиращия агент и неговата доза, температурата и влажността на околната среда.

Метод на физическа стерилизация Методите на физическия метод на стерилизация включват сушене, изгаряне и калциниране, кипене, пастьоризация и тиндализация, горещ въздух (суха топлина), ултразвук, ултравиолетово и радиоактивно лъчение, високочестотен ток, слънчева светлина. Най-разпространеният метод за стерилизиране на предмети, които могат да бъдат изложени на високи температури, е стерилизация с огън, горещ въздух и наситена пара под налягане. Огънят се използва за изгаряне на заразени предмети, които не представляват никаква стойност (ненужни хартии, стари тапети, парцали, боклук), за дезинфекция на храчки на болни от туберкулоза, трупове на хора и животни, умрели от особено опасни инфекции, както и за изгаряне и калциниране на различни предмети. Изгарянето и калцинирането се използват широко в микробиологичната практика за дезинфекция на инструменти, лабораторна и фармацевтична стъклария. Калцинирането в пламъка на горелка или фламбирането е метод на стерилизация, при който обектът се стерилизира напълно, тъй като загиват вегетативни клетки, цисти и спори на микроорганизми. Обикновено примки, шпатули, пипети, предметни стъкла и покривни стъкла, малки инструменти и други замърсени предмети се стерилизират чрез калциниране, ако не могат да се варят. Не се препоръчва да стерилизирате ножици и скалпели чрез нагряване, тъй като режещата повърхност става матова при излагане на огън. Един от най-простите и най-често срещаните методи за физическа стерилизация, използвани в медицинската практика, е стерилизацията с горещ въздух (суха топлина). Стерилизацията със суха топлина се извършва в сушилни (пещи на Пастьор). Сухият горещ въздух има бактерицидно, вирусоцидно, спороцидно действие и се използва предимно за стерилизация на стъклени изделия (лабораторна стъклария – петриеви панички, колби, пипети, епруветки и др.), както и на метални изделия, които могат да се стерилизират с пара. под напрежение. Освен това сухата топлина се използва за стерилизиране на предмети от порцелан и топлоустойчиви вещества (талк, бяла глина), както и минерални и растителни масла , мазнини, вазелин, ланолин, восък. Най-ефективният режим за този метод на стерилизация, който осигурява смъртта на вегетативните форми и спорите, е температура 160 - 180 градуса за 15 минути. Не можете да стерилизирате хранителни продукти, изотоничен разтвор или предмети от каучук и синтетични материали със суха топлина, тъй като течностите кипят и се изливат, а каучукът и синтетичните материали се топят. Стерилизацията с наситена пара под налягане е най-надеждният и най-често използван метод за стерилизиране на превързочни материали, вода, някои лекарства, хранителни среди, меко оборудване, инструменти, както и за дезинфекция на замърсен отпадъчен материал. В хирургическата практика превръзките, хирургическите халати и бельото на оперирания пациент се дезинфекцират с помощта на пара в автоклави. Парна стерилизация под налягане се извършва в специални устройства - автоклави. Автоклавирането унищожава напълно всички микроорганизми и спори. Методът за стерилизация под налягане с пара се основава на нагряване на материала с наситена водна пара под налягане над атмосферното. Комбинираното действие на висока температура и пара прави този метод особено ефективен. В този случай както вегетативните клетки, така и микробните спори умират. Спорите на микробите умират в рамките на 10 минути под въздействието на наситени водни пари, а вегетативните форми умират в рамките на 1 до 4 минути. Високата бактерицидна сила на наситената пара се дължи на факта, че под въздействието на водни пари под налягане протеините на микробната клетка набъбват и коагулират, в резултат на което микробните клетки умират. Бактерицидният ефект на наситените водни пари се засилва от свръхналягане. Стерилизацията в автоклав се извършва при различни режими. Така прости хранителни среди (месен пептонен агар и месен пептонен бульон) се стерилизират за 20 минути при 120 градуса (1 atm.). Но с този режим е невъзможно да се стерилизират среди, съдържащи протеини, въглехидрати и други вещества, които лесно се променят чрез нагряване. Средата с въглехидрати се стерилизира в автоклав при 0,5 atm. 10 – 15 минути или частично течаща пара. С помощта на висока температура можете да унищожите най-устойчивите форми на патогенни микроорганизми (включително спорообразуващи) не само на повърхността на обектите, които се дезинфекцират, но и в тяхната дълбочина. Това е голямото предимство на високата температура като надеждно средство за стерилизация. Някои предмети обаче се развалят под въздействието на високи температури и в тези случаи е необходимо да се прибегне до други методи и средства за дезинфекция. Пълна стерилизация на материали и предмети, които не позволяват използването на високотемпературна стерилизация, се постига чрез многократна стерилизация с водна пара в апарат на Кох при температура не по-висока от 100 градуса. Този метод се нарича фракционна стерилизация. Свежда се до факта, че останалите неубити спорови форми на микроби, след един ден в термостат при 37 градуса, покълват във вегетативни клетки, чиято смърт настъпва при последваща стерилизация на този обекттечаща пара. Третирането с течна пара се извършва три пъти в продължение на 30-40 минути. Загряването на материала еднократно при температура под 100 градуса е известно като пастьоризация. Пастьоризацията е предложена от Пастьор и е предназначена главно за унищожаване на предимно неспорови микроорганизми. Пастьоризацията се извършва при 60 - 70 градуса за 15 до 30 минути, при 80 градуса за 10 до 15 минути. В микробиологичната практика пастьоризацията на посевен материал често се използва за изолиране на чисти култури от спорообразуващи микроорганизми и за идентифициране на способността на микроорганизмите да образуват спори. За течности, които губят вкус и други ценни качества при излагане на високи температури (мляко, горски плодове и плодови сокове, бира, хранителни среди, съдържащи въглехидрати или урея и др.), Стерилизацията с течаща пара се извършва при 50 - 60 градуса за 15 - 33333330 минути или при 70 - 80 градуса за 5 - 10 минути. В този случай микробите със средна устойчивост умират, докато по-устойчивите микроби и спори се запазват. Фракционната 5-6-кратна стерилизация при 60 градуса за 1 час се нарича тиндализация. Много медицински продукти, направени от полимерни материали, не издържат на парна стерилизация по общоприетите режими. За много продукти, поради характеристиките на течностите, които съдържат (консерванти, лекарства и други продукти), е невъзможно да се стерилизират по общоприети методи и методи. За такива продукти се разработват индивидуални режими на стерилизация, за да се осигури надеждна стерилизация на обектите. По този начин стерилизацията на ротора за разделяне на кръвта на фракции се извършва с водна пара при температура 120 градуса за 45 минути. Стерилността на контейнерите с консерванти се постига при 110 градуса за 60 минути. Кипенето е метод на стерилизация, използван за дестерилизиране на спринцовки за многократна употреба, хирургически инструменти, гумени тръби, стъклени и метални съдове. Стерилизация чрез кипене се извършва в стерилизатори. Споровите форми във вряща вода умират след 20 - 30 минути. Кипенето в продължение на 45 минути се използва широко за дезинфекция на секрети и други инфекциозни материали, бельо, съдове, играчки и предмети за грижа за пациентите. За пране и почистване се използва топла вода (60 - 100 градуса) с препарати механично отстраняванезамърсители и микроорганизми. Повечето вегетативни клетки умират при 70 градуса след 30 минути. Филтруващата стерилизация се използва в случаите, когато субстратите не могат да издържат на нагряване, по-специално за среди, съдържащи протеини, серуми, някои антибиотици, витамини и летливи вещества. Тази техника се използва доста широко за стерилизиране на културална течност, когато е необходимо тя да се освободи от микробни клетки, но да се запазят непроменени всички метаболитни продукти, които съдържа. Методът включва филтриране на течности през специални филтри, които имат фино порести прегради и следователно задържат микробните клетки. Двата най-широко използвани типа филтри са мембранните филтри и филтрите на Seitz. Мембранните филтри се изготвят от колодий, ацетат, целулоза и други материали. Филтрите Seitz са направени от смес от азбест и целулоза. Освен това за стерилизация се използват филтри от каолин с добавка. кварцов пясък, от почва за инфузор и от други материали („свещи” на Chamberlan, Berkfeld). Мембранните и азбестовите филтри са предназначени за еднократна употреба. При ултравиолетово облъчване бактерицидният ефект се осигурява от лъчи с дължина 200 - 450 nm, чийто източник са бактерицидни лампи. Стерилизацията се извършва с помощта на бактерицидни лампи ултравиолетови лъчивъздух в лечебни и профилактични заведения, кутии на микробиологични лаборатории, в предприятия на хранително-вкусовата промишленост, в кутии за производство на ваксини и серуми, в операционни, манипулационни, детски заведения и др. Ултравиолетовите лъчи имат висока антимикробна активност и могат да причинят смърт не само на вегетативните клетки, но и на техния спор. Слънчевата светлина причинява смъртта на микроорганизмите в резултат на действието ултравиолетово облъчванеи сушене. Сушенето със слънчева светлина има вредно въздействие върху много видове микроорганизми, но ефектът му е повърхностен и следователно слънчевата светлина играе спомагателна роля в практиката на стерилизация. IN напоследъкпри лечение на рани и изгаряния се използват покрития от синтетични и естествени полимери под формата на гелове. Полимерните антисептични филми се използват широко за локално лечение на рани и изгаряния. Те съдържат такива широкоспектърни антимикробни агенти като катапол, диоксидин, син йод, както и сорбитол, съдържащ глутаралдехид. За стерилизиране на тези филми се използва йонизиращо лъчение в доза от 20,0 kGy. По време на промишленото производство на полимерни антисептични филми и сорбенти, тяхната стерилност при този режим на стерилизация е напълно осигурена. Радиоактивното лъчение убива всички видове микроорганизми, както във вегетативна, така и в спорова форма. Използва се широко за стерилизация в предприятия, произвеждащи стерилни продукти и стерилни медицински изделия за еднократна употреба, за дезинфекция на отпадни води и суровини от животински произход.

Механичен методстерилизация Методите за механична стерилизация премахват микробите от повърхността на предметите. Те включват измиване, изтърсване, метене, мокро избърсване, проветряване, проветряване, прахосмукачка, миене.

Метод на химическа стерилизация Сега пластмасите се използват все повече в медицинската практика. Използват се в стоматологията, лицево-челюстната хирургия, травматологията, ортопедията и хирургията. Повечето пластмаси не могат да издържат на методите за топлинна стерилизация на пара под налягане и суха топлина (сух нагрят въздух). Разтворите на алкохол, диоксид и троен разтвор, използвани за стерилизиране на такива предмети, не гарантират стерилността на обработваните продукти. Ето защо за стерилизиране на пластмасови продукти се използват газови и радиационни методи, както и разтвори на химикали. Въвеждането на голям брой продукти, изработени от термолабилни материали в практиката на лечебните заведения, допринася за въвеждането на радиационни и газови методи за дезинфекция и стерилизация с дезинфекционни разтвори. По време на химическата стерилизация се използват газове и агенти от различни химични групи (пероксидни, фенолни, халогеносъдържащи, алдехиди, основи и киселини, повърхностно активни вещества и др.). За ежедневна употреба се произвеждат перилни, почистващи, избелващи и други препарати, които имат антимикробен ефект поради въвеждането на различни химикали в състава им. Тези препарати се използват за почистване и дезинфекция на санитарни помещения техническо оборудване, съдове, бельо и др. Формалдехидна пара (парна форма) може да се използва в лечебни заведенияза стерилизация метални изделияза медицински цели (скалпели, игли, пинсети, сонди, скоби, куки, резачки за тел и др.). Преди стерилизация с формалдехидни пари, продуктите трябва да бъдат подложени на предварително стерилизационно почистване и старателно изсушени. При стерилизация по който и да е химичен метод процедурата за обработка на конкретен обект зависи от характеристиките на обекта, който се дезинфекцира, устойчивостта на микробите, характеристиките на свойствата на химикала, температурата на околната среда, влажността и други фактори. По този начин стерилността на металните инструменти се постига, като се държат в запечатана камера с пара в продължение на пет часа при температура най-малко 20 градуса и относителна влажност 95 - 98%, при температура 15 градуса, пълна стерилност на тези предмети се постига едва след 16 часа. Спороцидната активност на глутаралдехида зависи от температурата. Оптималното му действие се проявява при температура 15 – 25 градуса. С повишаване на температурата спороцидната активност на това лекарство намалява. Химическата стерилизация се използва в известна ограничена степен. Най-често този метод се използва за предотвратяване на бактериално замърсяване на хранителна среда и имунобиологични препарати (ваксини и серуми). Най-често към хранителните среди се добавят вещества като хлороформ, толуен и етер. Ако е необходимо средата да се освободи от тези консерванти, тя се загрява на водна баня при 56 градуса и консервантите се изпаряват. За запазване на ваксини или серуми се използват мертиолат, борна киселина и формалин.

Биологичен методстерилизация Биологичната стерилизация се основава на използването на антибиотици. Този метод се използва широко при култивирането на вируси.