Dom · električna sigurnost · Pasteur pećnica. Visokotemperaturna sterilizacija. Metoda fizičke sterilizacije

Pasteur pećnica. Visokotemperaturna sterilizacija. Metoda fizičke sterilizacije

Kalcinacija na vatri. Ovo je pouzdana metoda sterilizacije, ali ima ograničenu upotrebu zbog propadanja predmeta. Na ovaj način se steriliziraju bakteriološke petlje.

Suva sterilizacija vrućica. Provodi se u Pasteurovoj peći (tetiva ------

pećnica) na temperaturi od 160-170°C 1 sat. Ova metoda se koristi za sterilizaciju laboratorijskog staklenog posuđa, pipeta umotanih u papir i epruveta zatvorenih pamučnim čepovima. Na temperaturama iznad 170°C počinje ugljenisanje papira, vate i gaze.

Sterilizacija parom pod pritiskom (autoklaviranje). Najuniverzalnija metoda sterilizacije. Izvodi se u autoklavu - vodeno-parnom sterilizatoru. Princip rada autoklava zasniva se na zavisnosti tačke ključanja vode o pritisku.

Autoklav je metalni kotao sa dvostrukim zidovima sa hermetički zatvorenim poklopcem. Na dno autoklava se sipa voda, predmeti koji se sterilišu stavljaju u radnu komoru, a poklopac se zatvara bez prethodnog čvrstog zavrtanja. Uključite vatru i dovedite vodu da proključa. Nastala para istiskuje zrak iz radne komore, koji izlazi kroz otvoreni izlazni ventil. Kada je sav zrak istisnut i iz slavine izlazi kontinuirani mlaz pare, slavina se zatvara i poklopac se zatvara. Para se dovodi do željenog pritiska pod kontrolom manometra. Temperatura pare zavisi od pritiska: pri normalnom atmosferskom pritisku, igla manometra je na 0 atm. - temperatura pare 100°C, na 0,5 atm. - 112°C, na 1 atm. -121°C, na 1,5 atm. - 127°C, na 2 atm. - 134°C. Na kraju sterilizacije isključite autoklav, pričekajte dok tlak ne padne, postupno otpustite paru i otvorite poklopac. Obično pri pritisku od 1 atm. u roku od 20-40 minuta steriliziraju se jednostavni hranljivi mediji i otopine koje ne sadrže proteine ​​i ugljikohidrate, oblačenje, posteljina. Materijali koji se sterilišu moraju biti propusni za paru. Prilikom sterilizacije materijala u velikim količinama ( hirurški materijali) vrijeme se povećava na 2 sata. Pri pritisku od 2 atm. dezinficirati patološki materijal i istrošene mikrobne kulture.

Hranljive podloge koje sadrže šećere ne mogu se sterilisati na 1 atm, jer se karameliziraju, pa se podvrgavaju frakcijskoj sterilizaciji tekućom parom ili autoklaviranju na 0,5 atm.

Za kontrolu režima sterilizacije koriste se biološke i fizičke metode. Biološka metoda se zasniva na činjenici da se istovremeno sa materijalom koji se steriliše stavljaju spore Bacillus stearothermophilus, koje umiru na 121°C za 15 minuta. Nakon sterilizacije, spore ne bi trebale rasti na hranljivom mediju. Fizička metoda se zasniva na upotrebi supstanci koje imaju određenu tačku topljenja, na primer, sumpor (119°C), benzojeva kiselina (120°C). Zapečaćene epruvete koje sadrže supstancu pomešanu sa suvom bojom (fuksinom) stavljaju se u autoklav zajedno sa materijalom koji se steriliše. Ako je temperatura u autoklavu dovoljna, tvar će se otopiti i promijeniti boju boje.

Protočna sterilizacija Para se izvodi u Koch aparatu ili u autoklavu sa odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom. Voda u aparatu se zagreva na 100°C. Nastala para prolazi kroz ugrađeni materijal i sterilizira ga. Jedan tretman na 100°C ne ubija spore. Stoga se koristi metoda frakcijske sterilizacije - 3 dana za redom po 30 minuta, između ostavljanja na dan u sobnoj temperaturi. Zagrijavanjem na 100°C dolazi do termičke aktivacije spora, uslijed čega one klijaju u vegetativne forme do sljedećeg dana i umiru pri drugom i trećem zagrijavanju. Kao rezultat, samo hranljivi mediji mogu se sterilisati tekućom parom, jer Da bi spore klijale neophodno je prisustvo hranljivih materija.

To je metalni cilindar sa dvostrukim stijenkama prekriven s vanjske strane metalnim kućištem. Hermetički je zatvoren masivnim poklopcem pomoću nekoliko vijaka. Opremljen je manometrom sa sigurnosnim ventilom i parnim ventilom.

Prije sterilizacije, destilovana voda se sipa u autoklav kroz lijevak sa staklom za mjerenje vode do linije označene na kućištu. Materijal za sterilizaciju se ubacuje u komoru za sterilizaciju, čvrsto zatvara poklopcem, zašrafljuje i uključuje izvor grijanja. U tom slučaju parni ventil ostaje otvoren. Para nastala tokom ključanja prolazi između zidova autoklava i ulazi u komoru kroz rupe na unutrašnjem zidu. Prilikom zagrijavanja iz autoklava prvo izlazi zrak kroz parni ventil, a zatim para. Oslobađanje kontinuiranog toka suhe pare ukazuje na potpuno istiskivanje zraka iz autoklava: slavina se zatvara i od tog trenutka tlak u autoklavu počinje postupno rasti, igla na mjeraču tlaka se diže. Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada igla merača pritiska dostigne željeni pritisak.

Fig.3

Očitavanje manometra odgovara određene temperature para u autoklavu: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.

Materijal u autoklavu najčešće se steriliše na 0,1 MPa 20-30 minuta. Na kraju sterilizacije isključite izvor grijanja (igla mjerača tlaka postepeno dostiže nulu). Nakon toga otvorite ventil za paru i ispustite preostalu paru. Zatim pažljivo odvrnite poklopac i otvorite ga. Nakon potpunog hlađenja, uklonite sterilizirani materijal.

Autoklav se može koristiti za sterilizaciju posuđa, instrumenata, medija za kulturu (osim želatina i podloga sa ugljikohidratima), zavoja itd. Prilikom rada morate se pridržavati sigurnosnih pravila. Rad imaju lica koja posjeduju uvjerenje o pravu korištenja autoklava. Ispravnost autoklava provjerava inspekcija kotlova.

Koch aparat (slika 4) je metalni cilindar obložen izvana materijalom (linoleum, azbest) koji slabo provodi toplotu. Voda se sipa na dno, a materijal za sterilizaciju se stavlja na vrh postolja. Uređaj je zatvoren konusnim poklopcem koji ima rupice za termometar i izlaz za paru. Na dnu se nalazi slavina za ispuštanje vode. Sterilizacija se vrši tekućom parom na 100 °C u trajanju od 30-60 minuta. U ovom načinu umiru vegetativne ćelije oblika mikroba koji stvaraju spore i koji ne stvaraju spore. Frakciona sterilizacija (tri puta) u trajanju od 30-60 minuta tokom tri dana sa intervalom od 18-20 sati omogućava vam da stvorite uslove za klijanje spora u vegetativne ćelije i da ih se rešite. U vremenskim intervalima između sterilizacije, spore klijaju i umiru tokom naknadnog zagrijavanja. Koch aparat sterilizira one materijale koji ne mogu izdržati temperature iznad 100 °C (želatin, mlijeko, ugljikohidratni mediji itd.).

Proteinski medij i krvni serum koji ne podnose temperaturu od 100 °C steriliziraju se frakciono na 56-58 °C u vodenom kupatilu.

Ormar za sušenje(Pasterova pećnica) (Sl. 5) je metalni ormar sa dvostrukim zidovima prekriven azbestom na vrhu. Gornji zid ima rupe za termometar i ventilaciju. Zagrijani zrak se diže odozdo između zidova i kroz gornji otvor ulazi u ormar, gdje se materijal za sterilizaciju stavlja na police. Sterilizacija se vrši suvom toplotom na 150 °C u trajanju od 2 sata, na 165-170 °C - 45 minuta, na 180 °C - 15 minuta. Stakleno posuđe se steriliše u Pasteur pećnici. Nakon sterilizacije, kabinet se odvaja od izvor grijanja i otvara se tek nakon potpunog hlađenja.

Bakterijski filteri koristi se za sterilizaciju tečnosti bez zagrijavanja. To uključuje Chamberlant, Berkefeld svijeće i Seitz azbestne filtere (ploče).

Filterske svijeće (sl. 6) su šuplji cilindri od fino poroznih tvari: kaolina sa dodatkom kvarcni pijesak(Chamberlant svijeće) i infuzorijalna zemlja (Berkefeld svijeće). Chamberlant svijeće imaju razne veličine pore kroz koje prolaze mikrobi. Svijeće koje propuštaju velike bakterije označene su slovima L9, L1(bis), L3, srednje - L5, L7, one najmanje - L9, L11 , L13 Berkefeld svijeće su označene poroznošću W, N, V(svijeće marke U imaju najveće pore).

Seitz filteri su azbestne ploče različitih veličina. Prilikom montaže uređaja za sterilizaciju, ploča se postavlja na mrežicu između metalni diskovi(sa rupom u sredini), koji su čvrsto pritisnuti vijcima. Montirani filter se ubacuje kroz čep u tikvicu sa bočnim izlazom (Bunsenova boca) i gumenom cevčicom, umotava se u papir i steriliše u autoklavu na 120 °C 20-30 minuta.

Za filtriranje materijala, stvorite vakuum u Bunsenovoj tikvici tako što ćete na nju povezati gumenu cijev s razrijeđenim uljem ručna pumpa Komovsky ili električna vakuum pumpa.

Završetak radova. Mikrobi se uzgajaju u optimalnim temperaturnim uslovima. U tu svrhu laboratorije koriste termostate za zrak ili vodu.

(slika 7) je metalni ormar sa dvostrukim zidovima, između kojih se nalazi sloj vode ili zraka. Vanjski dio termostata je prekriven materijalom koji slabo provodi toplinu (azbest, linoleum).

Rice. 4, 5, 6.

Unutar termostata nalaze se police za postavljanje sjemenskog materijala uzgojenih mikroorganizama. Konstantna temperatura u termostatu se održava pomoću termostata, koji je ugrađen u gornji poklopac termostata. Termostatski uređaj se zasniva na principu linearne ekspanzije tvari. Termoregulatori su legura bilo koja dva metala s različitim koeficijentima toplinske ekspanzije (mjed, cink) ili metalni „jastučić“ napunjen alkoholom, mješavinom alkohola i etra, žive ili drugim tvarima koje mijenjaju svoj volumen na određenoj temperaturi. Kada se termostat zagrije iznad utvrđene norme, metali se šire, kontakti se otvaraju i dalji protok topline se automatski odlaže. Nakon što temperatura padne, uključuje se struja i tok toplote se nastavlja.

U laboratorijskoj praksi, pri radu s mikroorganizmima, potrebno je stalno preduzimati mjere da posuđe, podloge za uzgoj i metalni instrumenti koji se koriste tokom rada ne sadrže mikrobe. U tu svrhu koriste se sljedeće metode sterilizacije:

Sterilizacija pregrijanom parom pod pritiskom;

Sterilizacija tekućom parom;

Sterilizacija vrućim zrakom;

Dezinfekcija.

Najbolja metoda sterilizacije je tretiranje raznih predmeta sa pregrijanom parom specijalnih uređaja- autoklavi.

Sterilizacija autoklavom i pregrijanom parom pod pritiskom

Autoklavi su metalni (čelični, liveni ili bakarni) kotlovi sa duplim zidovima i masivnim poklopcem koji je hermetički zatvoren vijcima i gumenom brtvom. U zavisnosti od sistema grejanja, autoklavi su parni, električni i vatreni (Sl. 42). Proizvodnja visokog pritiska i pregrijane pare na temperaturi od 115-120°C u autoklavu omogućava vam da uništite i vegetativne ćelije i mikrobne spore u roku od 20-30 minuta.

U autoklavu se sterilišu svi oni predmeti koji se ne kvare na visokim temperaturama: razne tečnosti (voda, hranljive podloge koje ne sadrže ugljene hidrate), stakleno posuđe, metalni instrumenti, vata, gaza, papir itd.

U slučajevima kada neke supstance ne izdrže normalan režim sterilizacije u autoklavu (posebno hranljive podloge koje sadrže šećere), sterilišu se u autoklavu na temperaturi od 112°C 20 minuta, kao i u blažim uslovima.

At visoki pritisci pregrijana para u autoklavu, temperatura grijanja se povećava u skladu s tim; To uzrokuje karamelizaciju šećera koji se dodaje u neke podloge za uzgoj, što ih čini neprikladnim za određivanje fizioloških svojstava mikroba.

Pritisak unutar autoklava se mjeri pomoću manometra postavljenog na poklopac ili tijelo autoklava. Ako se pritisak pretjerano poveća, automatski se aktivira sigurnosni ventil, koji se, ovisno o dizajnu, nalazi na poklopcu ili na bočnoj površini stijenke autoklava. Mlaz pare koji izlazi iz sigurnosnog ventila uz zvižduk upozorava na potrebu prestanka grijanja. Ako se grijanje ne zaustavi, autoklav može eksplodirati.

Ponekad se u poseban džep na poklopcu autoklava stavlja termometar kojim se mjeri temperatura sterilizacije. Unutar autoklava se nalazi postolje ispod koje se voda ulijeva kroz cijev sa lijevom koji se nalazi izvan autoklava. Osim toga, autoklavi su opremljeni slavinom za ispuštanje pare i zraka i slavinom za izlijevanje vode.

Pravila za rukovanje autoklavom tokom sterilizacije su sljedeća: uređaj se puni vodom kroz lijevak i cijev čiji nivo treba biti ispod postolja. Predmeti za sterilizaciju stavljaju se u posebne metalne boce i pune u autoklav. Poklopac autoklava je zašrafljen.

Otvaranjem slavine kako bi para i zrak izašli, počinje grijanje. Čim voda proključa, nastala para počinje istiskivati ​​zrak iz autoklava. Izlazni ventil za paru ostaje otvoren sve dok suha para ne iscuri iz njega u neprekidnom toku. Ovo ukazuje na potpuno uklanjanje vazduha iz autoklava. Zatim se slavina zatvori. Para, koja se daljim zagrijavanjem nakuplja u sve većim količinama, povećava pritisak u autoklavu, a istovremeno i temperaturu. Kada radite s autoklavom, možete se voditi tablicom odnosa između tlaka pare i njene temperature (Tablica 4).

Nakon što igla manometra dosegne traženi indikator pritisak (temperatura u autoklavu će odgovarati prihvaćenoj temperaturi sterilizacije), podesite zagrevanje autoklava tako da pritisak ostane na istom nivou tokom potrebnog vremena. Na kraju sterilizacije prestati sa zagrijavanjem. Kada temperatura u autoklavu padne i igla manometra padne na nulu (pritisak u autoklavu jednak je atmosferskom pritisku), pažljivo otvorite ventil za ispuštanje pare, ispustite paru i, otvarajući poklopac autoklava, uklonite materijal. Nemoguće je prerano otvoriti ventil za ispuštanje pare, prije nego što tlak u autoklavu padne. Oštar pad pritiska u komori autoklava će izazvati burno ključanje tečnosti zagrejanih na temperaturu veću od 100 °C, tj. iznad tačke ključanja pri normalnom atmosferskom pritisku. Tečnosti koje jako ključaju će nakvasiti ili čak izgurati pamučne čepove iz posuda - posao će biti obavljen uzalud. Hranljivi mediji će se pogoršati, jer se mikroflora koja dolazi iz zraka lako razvija na vlažnim čepovima, prodire unutra i inficira medij. Osim toga, otvaranje autoklava sa povećanim pritiskom opasno je za radnika.

Međutim, čim se igla manometra zaustavi na nuli, autoklav se mora odmah otvoriti, inače će kondenzacija početi teći na čepove i uzrokovati njihovo vlaženje. Da bi se izbjeglo vlaženje čepova kondenziranom vodom, prije sterilizacije se prekrivaju papirom.

Materijali stavljeni u autoklav će biti pouzdano sterilizirani za 20-30 minuta ako se temperatura održava na 120°C, što odgovara pritisku od 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) ili na manometru 1 atm iznad normalne. Autoklav se također može uspješno koristiti za sterilizaciju medija sa tekućom parom; u ovom slučaju, poklopac autoklava nije pričvršćen.

Koch bojler i protočna parna sterilizacija

Koch kotao je cilindar od pocinkovanog lima ili bakra sa duplim zidovima i konusnim poklopcem u obliku kacige (Sl. 43). Na sredini poklopca je rupa za termometar. Spoljašnja strana Koch kotla je prekrivena slojem toplotnoizolacioni materijal: azbest, linoleum itd.

Unutar kotla je postavljena pregrada (postolje) koja dijeli unutrašnji prostor kotla na dva dijela: gornji i donji. Donji dio je ispunjen vodom čiji se nivo određuje staklom vodomjera: voda ne bi trebala pokrivati ​​gornji dio postolja. Predmeti koji se sterilišu stavljaju se u gornji deo kotla u rešetkaste kante postavljene jedna na drugu. Zatvorivši kotao poklopcem, počinju zagrijavati vodu u njemu. Za početak sterilizacije smatra se trenutak kada termometar pokazuje 98-100°C. U nedostatku termometra, početkom sterilizacije se smatra trenutak kada para počinje snažno da izlazi iz otvora na poklopcu kotla. Tako će predmeti koji se sterilišu uvek biti u mlazu vodene pare dok kotao radi.

Metoda sterilizacije protočnom parom, zbog svoje jednostavnosti i dostupnosti, ima široku primjenu u laboratorijskoj praksi. Protočna para se koristi za sterilizaciju uglavnom hranjivih podloga čija se svojstva mijenjaju pri zagrijavanju iznad 100°C: proteina, ugljikohidrata i želatina. Za ova okruženja najprikladnija je metoda sterilizacije protočnom parom.

Nedostatak metode sterilizacije protočnom parom je njeno trajanje, jer je za potpunu sterilizaciju medijuma potrebno izvršiti ponovljeno zagrijavanje u kotlu određeno vrijeme - od 20 minuta do 1,5 sati (u prosjeku 30-45 minuta) u zavisnosti od zapreminu tečnosti u intervalima od 24 sata Preporučljivo je da se čitav vremenski period između zagrevanja medijuma održava u termostatu na 25-30 °C.

Jedno zagrevanje u Koch kotlu uzrokuje smrt samo vegetativnih mikrobnih ćelija, ali spore mogu preživjeti. Kada se sterilisani hranljivi medij održava u povoljnim uslovima (na sobnoj temperaturi, ili još bolje u termostatu), neke od preostalih spora će proklijati i do sledećeg dana prerasti u vegetativne ćelije. Ponovljeno zagrijavanje će uzrokovati smrt ovih novorazvijenih ćelija. Konačno, treće zagrijavanje nakon jednog dana držanja medija u termostatu osigurat će potpunu sterilnost. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. IN praktičan rad Umjesto sterilizacije tekućom parom u Koch kotlu, uobičajena sterilizacija u autoklavu se često koristi na 112 °C uz protupritisak od 0,5 atm u trajanju od 15-20 minuta.

Ormar za sušenje i sterilizacija toplim vazduhom

U laboratorijskoj praksi za sterilizaciju mikrobiološkog staklenog posuđa potrebno je imati sušionik ili takozvanu Pasteurovu peć. Princip dizajna ormara za sušenje i Pasteurove pećnice je isti. Peći se prave samo pravokutnog oblika, a ormani za sušenje mogu imati ne samo pravougaoni, već i cilindrični oblik (sl. 44 i 45). U ovim uređajima sterilizacija se vrši toplim vazduhom (suva toplota) na temperaturi od 160 °C u trajanju od 1 sata ili na temperaturi od 150 °C u trajanju od 2 sata.

I Pasteurove peći i sušare su šuplji uređaji sa dvostrukim zidovima, sa dvostrukim vratima koja se dobro zatvaraju. Sa vanjske strane su prekriveni slojem azbesta za toplinsku izolaciju. Cirkulira između zidova vrući zrak, čije se grijanje vrši električnim spiralama ili plinskim gorionicima. Unutar ormarića nalazi se nekoliko (obično dvije ili tri) rupe police. Na vrhu ormarića su dva otvora: jedan je za termometar, a drugi za ventilaciju. Električni ormarići za sušenje su najpogodniji.

IN ormari za sušenje Najnoviji dizajn pruža četiri stupnja grijanja, koja se mogu aktivirati posebnim regulatorom postavljenim na bočnoj stijenci ormarića. Željeni stepen zagrevanja postiže se uključivanjem jednog, dva, tri ili sva četiri električne spirale, a redoslijed uključivanja spirala može biti bilo koji.

Osim staklenog posuđa, gazu i vatu možete sterilizirati u sušionicama, ali ih je ipak bolje obraditi u autoklavu, jer na temperaturi od 160 °C požute. Gumeni proizvodi se ne mogu sterilizirati u ormaru za sušenje, jer ne mogu izdržati visoke temperature - postaju lomljivi i propadaju. Tečnosti ključaju na 150-160 °C i menjaju svoj hemijski sastav.

Kako bi se izbjegla naknadna kontaminacija steriliziranih predmeta mikrobima iz zraka, oni se prije sterilizacije umotaju u papir. Petrijeve zdjelice se umotaju u papir, po 2 komada, tako da nema praznina u omotu. Staklene epruvete i pipete se takođe umotaju u papir, prvo svaka posebno, a zatim u pakovanja od 10-20 komada. Omotavanje epruveta i pipeta mora biti izuzetno pažljivo kako bi se u potpunosti zaštitile vanjska površina od komunikacije sa vazduhom. Prije sterilizacije vrućim zrakom, tikvice, epruvete, boce se zatvaraju pamučnim čepovima i papirnim čepovima.

Nemojte dozvoliti da temperatura u sušioniku poraste iznad 170 °C, jer na toj temperaturi pamučni čepovi postaju smeđi, a papirni omoti postaju lomljivi i čak ugljenisani. Za početak sterilizacije smatra se trenutak kada termometar pokaže 150-160 °C. Nakon što prođe potrebno vrijeme za sterilizaciju, zagrijavanje se prekida. Da biste zaštitili posuđe od pucanja, potrebno je samo sterilizirati suho posuđe i otvoriti ormar nakon sterilizacije tek kada temperatura u njemu padne na 50-70 ° C. Mali laboratorijski predmeti, kao što su platinaste petlje, igle, pincete, makaze, itd., mogu se sterilizirati jednostavnim kalciniranjem na plamenu plinskog plamenika (ili alkoholne lampe).

Dezinfekcija

Dezinfekcija u mikrobiološkoj laboratoriji mora se pribjegavati vrlo često. Najčešće korišćena sredstva za dezinfekciju su: 3-5% rastvor karbonske kiseline i rastvori drugih viših fenola, 50-70% rastvor etil alkohol, ista koncentracija butil alkohola, 4% rastvor formaldehida, 1-2% rastvori hloroforma i toluena, 0,5% rastvor hloramina itd.

U mikrobiološkim laboratorijama tvornica konzervi dezinfikuju se površine stolova, posuđe, podovi i zidovi prostorija. Za dezinfekciju površina stolova možete koristiti ne samo otopine etilnog alkohola, već i otopine karbonske kiseline.

Dezinfekcija kanalizacionih uređaja u fabrikama konzervi i dr prehrambena preduzeća proizveden od 5-10% rastvora izbeljivača. Za dezinfekciju cirkulacije staklene posude koristi se u fabrikama konzervi hlorne vode, koji sadrži najmanje 100 mg aktivnog hlora po litri. Za pripremu takvog rastvora uzmite izbjeljivač i pomiješajte ga s malom količinom vode dok se ne dobije gusta masa. mlečno. Ova smjesa se doda u vodu, dobro promiješa i ostavi jedan dan. Prašak za izbjeljivanje reaguje da formira kalcijum oksid hidrat - Ca(OH)2 - i aktivni hlor. Ca(OH)2 se taloži na dno, otopina iznad sedimenta nakon bistrenja postaje prozirna i zelenkaste boje. Natapanje posude u ovom rastvoru traje 10 minuta. Nakon hlorisanja, kontejner se mora dobro oprati u tekućoj vodi.


Sterilizacija suvom toplotom se vrši u peći na suvo grijanje(Pasterova pećnica). Suva toplota steriliše laboratorijsko stakleno posuđe. Labavo se stavlja u rernu tako da se materijal ravnomerno zagreva. Čvrsto zatvorite vrata ormarića, uključite električni uređaj za grijanje i zagrijte temperaturu na 160-165 0 C i sterilizirajte 1 sat. Na kraju sterilizacije isključite grijanje, ali ne otvarajte vrata ormarića dok se pećnica ne ohladi (u suprotnom hladan vazduhće uzrokovati pukotine na posuđu). Način sterilizacije: 160°C - 60 min, 180°C - 15 min, 200°C - 5 min. Tečnosti, podloge za kulturu, guma i sintetički materijali ne mogu se sterilisati suvom toplotom.

Sterilizacija parom pod pritiskom podvrgnuti su zavoji, hirurška posteljina, hirurški instrumenti, podloge za kulturu, laboratorijsko stakleno posuđe, inficirani materijal i rastvori za injekcije. Materijal se stavlja u kontejnere (kutije). Jastučići od tkanine se postavljaju na dno biksa kako bi apsorbirali vlagu nakon sterilizacije. Sterilnost materijala se održava 3 dana. Zaraženi materijal u posudama i epruvetama steriliše se u metalnim rezervoarima sa poklopcem.

Sterilizacija parom pod pritiskom se vrši u autoklavu. Sa jednim tretmanom, i vegetativni i sporni oblici bakterija umiru. Para pod pritiskom steriliše hranljive podloge, osim medija koji sadrže prirodne proteine, tečnosti i uređaje sa gumenim delovima. Jednostavni mediji (MPA, MPB) se sterilišu 20 minuta na 120°C (1 atm). Mediji koji sadrže prirodne proteine ​​i ugljikohidrate ne mogu se sterilizirati na ovoj temperaturi, jer su to tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem. Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu frakciono na 100 0 C ili u autoklavu na 112 0 C (5 atm.) 10-15 minuta. Razne tečnosti, uređaji sa gumenim crevima, utikači, bakterijske sveće i filteri se sterilišu na 120 0 C (1 atm.) 20 minuta.

Inficirani materijal (u epruvetama, čašama) stavlja se u posebne metalne kante ili rezervoare sa otvorima za prodor pare i steriliše na 126 0 C (1,5 atm.) 1 sat. Instrumenti se takođe sterilišu nakon rada sa spornim bakterijama.

Postoje 2 načina sterilizacije:

  1. Protočna para u autoklavu ili u Koch aparatu sa odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom, kada se antibakterijski efekat pare manifestuje na vegetativne oblike. Tako se sterilišu podloge koje sadrže vitamine i ugljene hidrate, ureu, mleko, krompir i želatin. Za potpunu desterilizaciju koristi se frakciona sterilizacija (na 100 0 C) u trajanju od 20-30 minuta 3 dana za redom. Takođe ubija spore.
  2. Najviše je sterilizacija parom pod pritiskom efikasan metod deprivacija. Zavoji i posteljina se sterilišu na 1 atm. 15-20 minuta, inficirani materijal na 1,5-2 atm 20-25 minuta.

Sterilizacija

Sterilizacija je sterilizacija, odnosno potpuno oslobađanje predmeta okruženje od mikroorganizama i njihovih spora.

Sterilizacija se provodi na različite načine:

1) fizičke (izlaganje visokoj temperaturi, UV zracima, upotreba bakterijskih filtera);

2) hemijski (upotreba raznih dezinfekcionih sredstava, antiseptika);

3) biološki (upotreba antibiotika).

U laboratorijskoj praksi obično se koriste fizičke metode sterilizacije.

Mogućnost i izvodljivost upotrebe jedne ili druge metode sterilizacije određena je karakteristikama materijala koji se steriliše, njegovim fizičkim i hemijskim svojstvima.

Fizičke metode

Kalcinacija u plamenu plamenika ili flambiranje je metoda sterilizacije u kojoj se predmet potpuno sterilizira, jer umiru i vegetativne stanice i mikrobne spore. Obično se kalciniraju bakteriološke petlje, lopatice, pipete, dijapozitivi i pokrovne čaše, te mali instrumenti. Makaze i skalpele ne treba sterilizirati zagrijavanjem, jer pod utjecajem vatre površina rezanja postaje tupa.

Sterilizacija suvom toplotom

Sterilizacija suvom toplotom ili vrelim vazduhom vrši se u Pasteur pećnicama (sušare). Pasteur pećnica je dvoslojni ormarić od materijala otpornih na toplinu - metala i azbesta. Zagrijte ormar pomoću plinskih gorionika ili električnih uređaja za grijanje. Električno grijani ormari opremljeni su regulatorima koji osiguravaju potrebnu temperaturu. Za kontrolu temperature, termometar je umetnut u otvor na gornjem zidu ormarića.

Tečnosti (hranjivi mediji, izotonični rastvor natrijum hlorida itd.), predmeti od gume i sintetičkih materijala ne mogu se sterilisati suvom toplotom, jer tečnosti ključaju i izlivaju se, a guma i sintetički materijali tope.

Sterilizacija ključanjem

Kuhanje je metoda sterilizacije koja garantuje sterilnost pod uslovom da u sterilizovanom materijalu nema spora. Koristi se za obradu špriceva, instrumenata, staklenog i metalnog pribora, gumenih cevi itd. Sterilizacija parom pod pritiskom se vrši u autoklavu. Ova metoda sterilizacije zasniva se na izlaganju materijala koji se steriliše zasićenoj vodenoj pari pod pritiskom iznad atmosferskog. Kao rezultat takve sterilizacije, i vegetativni i sporni oblici mikroorganizama umiru jednim tretmanom. Autoklav (Sl. 12) je masivni kotao, sa vanjske strane prekriven metalnim kućištem, hermetički zatvoren poklopcem, koji je vijcima na šarkama čvrsto pričvršćen na kotao.

Temperatura i trajanje autoklaviranja hranljivih podloga određuju se njihovim sastavom navedenim u receptu za pripremu hranljivog medijuma. Na primjer, jednostavni mediji (meso-pepton agar, mesno-peptonski bujon) steriliziraju se 20 minuta na 120 ° C (1 atm). Međutim, na ovoj temperaturi nemoguće je sterilizirati podloge koje sadrže prirodne proteine, ugljikohidrate i druge tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem. Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu frakciono na 100°C ili u autoklavu na 112°C (0,5 atm) 10-15 minuta. Razne tekućine, uređaji sa gumenim crijevima, čepovi, bakterijske svijeće i filteri steriliziraju se 20 minuta na 120°C (1 atm).

Sterilizacija tekućom parom se vrši u Koch aparatu. Ova metoda se koristi u slučajevima kada se predmet koji se steriliše menja na temperaturi iznad 100°C. Hranljivi mediji koji sadrže ureu, ugljene hidrate, mleko, krompir, želatin itd. sterilišu se tekućom parom.

Koch aparat (bojler) je metalni cilindar obložen izvana (za smanjenje prijenosa topline) filcom ili azbestom. Cilindar je zatvoren konusnim poklopcem sa otvorom za izlazak pare. Unutar cilindra nalazi se postolje do čijeg nivoa se ulijeva voda. Na postolje se postavlja kanta sa rupom u koju se stavlja materijal koji se steriliše. Koch aparat se grije na plin ili struju. Vrijeme sterilizacije računa se od trenutka snažnog ispuštanja pare na rubovima poklopca i od izlaza za paru. Sterilizirajte 30-60 minuta. Na kraju sterilizacije, zagrijavanje se prekida. Izvadite kantu sa materijalom iz aparata i ostavite je na sobnoj temperaturi do sljedećeg dana. Zagrijavanje se vrši 3 dana za redom na temperaturi od 100°C u trajanju od 30-60 minuta. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Prilikom prvog zagrijavanja vegetativni oblici mikroba umiru, dok se sporni oblici čuvaju. U roku od jednog dana, spore uspevaju da proklijaju i pređu u vegetativne forme, koje umiru drugog dana sterilizacije. Pošto je moguće da neke spore nisu imale vremena da proklijaju, materijal se čuva još 24 sata, a zatim se vrši treća sterilizacija. Sterilizacija tekućom parom u Koch aparatu nije potrebna posebna kontrola, budući da indikator pravilan rad Uređaj osigurava sterilnost pripremljene podloge za kulturu. Također možete sterilizirati tekućom parom u autoklavu sa odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom.

Sterilizacija ultraljubičastim zračenjem

Sterilizacija UV zracima se vrši korišćenjem specijalne instalacije- baktericidne lampe. UV zraci imaju visoko antimikrobno djelovanje i mogu uzrokovati smrt ne samo vegetativnih stanica, već i spora. UV zračenje se koristi za sterilizaciju vazduha u bolnicama, operacionim salama, dečijim ustanovama itd. U mikrobiološkoj laboratoriji kutija se pre rada tretira UV zracima.

Hemijske metode

Ova vrsta sterilizacije se koristi u ograničenoj mjeri, a služi uglavnom za sprječavanje bakterijske kontaminacije podloga za uzgoj i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma).

Supstance kao što su hloroform, toluen i eter najčešće se dodaju u hranljive podloge. Ako je potrebno osloboditi medij od ovih konzervansa, zagrijava se u vodenom kupatilu na 56°C (konzervansi isparavaju).

Za očuvanje vakcina i seruma koriste se mertiolat, borna kiselina, formaldehid itd.

Biološka sterilizacija

Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika. Ova metoda se koristi za uzgoj virusa.

B. Detaljna tehnologija za proizvodnju stočne surutke u klaonicama u Lyonu

Već je uzeta krv od 1.000 životinja, serum je flaširan i besplatno podijeljen za gotovo 20.000 djece.

Tako se pokazuje da industrijska proizvodnja surutka u klaonici uz poštovanje aseptičkih pravila i sanitarnih propisa je moguća.

Preduzeće za seroterapiju ne daje dodatne garancije - nema pravo da izvrši obdukciju životinje donora.

Tehnologija koja se koristi u našoj proizvodnji može izgledati manje aseptično nego klasična metoda. Ali ima veliku prednost u brzini, jer se serum u potpunosti proizvodi na dan uzimanja krvi.

Ako su nas trenutne okolnosti navele da serum proizvodimo u klaonici, jasno je da je to privremena mjera, jer se hematogeni i medicinski serumi mogu proizvoditi samo u specijaliziranom institutu.

Odabir životinja. U Lionu, dr. Guier, glavni veterinar klaonice, i dr. Fontenay, veterinarski inspektor, sami biraju donatore između stoke koja je namijenjena da naš grad snabdijeva mesom. Odabrana životinja je označena na desnom ramenu kako bi se olakšala daljnja kontrola.

Nakon klanja, organi životinja se pažljivo provjeravaju. Poznato je da je obdukcija najpouzdanija metoda otkrivanja tuberkuloze.

Naknadne operacije će pokazati da serum oboljele životinje nikada nije konzumiran.

Uzimanje krvi od životinja. U prostoriji za prikupljanje krvi, bik davalac se sigurno drži automatskim jarmom.

Veterinar dezinfikuje kožu jodom na nivou vrata životinje i skalpelom pravi rez u predjelu jugularne vene. Venska punkcija se izvodi trokarom steriliziranim produženim kuhanjem. Kada se pojavi krv, autoklavirano gumeno crijevo se pričvršćuje na troakar kako bi se direktno i aseptično povezalo s defibrinatorom.

Tehnologija defibriniranja i metoda sterilizacije defibrinatora opisani su u nastavku.

Od svake životinje dobije se 8-10 litara krvi, koja se vaga na vagi koja se nalazi ispod aparata.

Metode sterilizacije

Da bi se olakšao rad sanitarne kontrole, svaki defibrinator ima naljepnicu s podacima životinje donora.

Treba napomenuti da se uzimanje uzoraka krvi vrši aseptično zahvaljujući zatvorenom krugu svih komponenti: troakar, gumeno crijevo i defibrinator, koji su prethodno sterilizirani.

Naljepnica s datumom uzimanja krvi prati sakupljenu krv od trenutka punkcije vene do pretvaranja u serum i čuvanja u frižideru.

Defibracija krvi. U većini ustanova za seroterapiju, krv izlivena u staklene posude odvaja serum pod pritiskom opterećenja. U ovim uslovima, krv prvo dobijena od goveda sadrži malo seruma (otprilike 10%).

Stoga koristi seroterapijski centar u Lyonu specijalna tehnologija, dajući 50% surutke, i to u kraćem vremenu.

Dr Merrier je uspeo da razvije ovu metodu delimično nakon nalaza do kojih je došao na Kraljevskom institutu u Roterdamu i na Seroterapeutskom institutu u Milanu.

Kada se krv dobije iz ovih instituta, ona se defibrinira u sterilnim mašinama koje liče na mlaznice.

U roku od 5 minuta krv se sakuplja u posudu zaštićenu od zraka. Potrebno je striktno pridržavati se vremena defibracije: ako je nedovoljno, može doći do koagulacije, a ako je previše može doći do hemolize (zbog rupture crvenih krvnih zrnaca). Potrebno je koristiti laboratorijski sat koji vam omogućava da označite tačno 15 minuta defibrinacije.

Na vrhu sl. 4 vidi se da je broj vađenja krvi dostigao 1000, što je zabilježeno na amblemu Centra.

Centrifugiranje.

Odmah nakon defibracije aparati se prenose u laboratorij, koji se nalazi nekoliko metara od prostorije za vađenje krvi. Sadržaj svakog defibrinatora se posebno obrađuje kako bi se odstranio serum životinje koja se ispostavi da je bolesna.

Krv koja se ne zgrušava nakon defibrinacije prolazi kroz Alfa Laval separator (separator za mlijeko koji smo prilagodili za proizvodnju surutke).

Pod utjecajem centrifugalne sile krv se dijeli na jednake dijelove: crveni dio sadrži crvene kuglice, a prozirni dio čini serum (fibrin ostaje na oštricama defibrinatora).

Od jedne životinje dobije se 8-10 litara krvi ili otprilike 4-5 litara seruma koji se sipa u Pyrex bocu, steriliziranu na 180°C.

Na bočici je pričvršćena etiketa defibrinatora, a pod istim brojem se popunjava kartica kako bi se osigurala sanitarna kontrola.

U serum se dodaje poseban antiseptik, dizajniran tako da je dovoljno aktivan bez narušavanja prozirnosti i okusa seruma. Za 1 litar seruma dodati i 100 ml rastvora koji sadrži 1:1000 formaldehida i 1:5000 siunuksola.

(Između priprema, centrifuga se temeljno dezinfikuje antiseptikom.)

U principu, crvenu frakciju krvi treba vratiti u mesare za proizvodnju krvavica, ali najčešće ostaje neiskorištena, pa se od nje može pripremiti sirup tehnologijom opisanom u nastavku.

Posebni slučajevi pripreme krvnog sirupa. Sirup ima dvije prednosti: omogućava korištenje crvenog dijela krvi koji ostane nakon prijema seruma, a ugodnog je okusa koji se sviđa djeci.

Zbog nedostatka glicerina, teško je pripremiti sirup dugotrajno skladištenje, ali možete napraviti vrlo aktivan proizvod u vodi i dati djeci 2-3 žlice dnevno. Dodajte 20% crvenom dijelu krvi pije vodu i čuvati sirup u glečerima dok se vrši sanitarna kontrola.

Zatim dodajte jednak deo 100% šećerni sirup (šećer se može nabaviti sa kartica grupa kojima je sirup namijenjen).

Ekstrakt limuna ili narandže dodaje se sirupu da neutrališe ukus krvi i sipa se u boce od 250 ml.

Tindalizacija surutke.

Neposredno nakon centrifugiranja, odnosno manje od sat vremena nakon uzimanja krvi, serum se lizira na 56°C jedan sat.

Da biste to učinili, spušta se u vodeno kupatilo sa automatski održavanom temperaturom. Tindalizacija na ovoj temperaturi (na višoj temperaturi sirutka koagulira) neophodna je za delimičnu sterilizaciju surutke, iako je brzina njene pripreme sama po sebi garancija asepse.

Treba napomenuti da svaka boca od pet litara ima originalnu etiketu defibrinatora, tako da numeracija seruma odgovara numeraciji životinja donora.

Kontrolni fajl kartice. Kartica vam omogućava da u svakom trenutku provjerite porijeklo životinje donora, faze pripreme surutke, datum punjenja, kao i distribuciju surutke.

Sanitarna kontrola. Dok se posude čuvaju u rashladnoj komori, veterinarski inspektori se bave sanitarnom kontrolom životinja donora. Nakon njihovog klanja, radi se temeljita obdukcija kako bi se otkrili i najmanji simptomi tuberkuloze.

Ako se otkrije bolest, odgovarajući serum se može lako povući. Poznato je da se krv svake životinje posebno obrađuje, a serum se nalazi u zasebnim, numerisanim bočicama.

Centar za seroterapiju Javni odbor higijena djece u klaonicama u Lyonu

Kontrolni broj…

Goveđa surutka u litrima


Kartica i etiketa

Gornja kartica i etiketa sprečavaju bilo kakvu zabunu.

U Lionu su sanitarne mjere posebno stroge, jer isti veterinari biraju životinje, vade krv i provjeravaju meso.

Sterilizacija opreme. Životinjski serum je odlično mjesto za razmnožavanje mikroba i može se samo djelomično sterilizirati. Na temperaturama iznad 56° koaguliraju i postaju zamućene ako se doda jak antiseptik. Zbog toga je tokom svih operacija proizvodnje seruma potrebna maksimalna sterilnost; oprema mora biti dekontaminirana prije upotrebe.

Individualni defibrinatori se sterilišu na sljedeći način: noć prije uzimanja krvi se pune antiseptičkim rastvorom, a nekoliko sati prije uzimanja krvi isprazne se od antiseptika pomoću slavine koja se nalazi u donjem dijelu uređaja. Centrifuge koje se koriste za proizvodnju seruma također se tretiraju antiseptikom, uključujući između obrade sadržaja svakog defibrinatora.

Svo stakleno posuđe, uključujući i posude od pet litara za skladištenje sirutke, sterilizira se u električnoj pećnici na temperaturi od 180°C.

Bočice od 250 ml za serum se takođe sterilišu na 180°C. Da bi se pojednostavio rad, posuđe se nalazi u kutijama koje se koriste prilikom punjenja i distribucije javnosti.

dostava cvijeća u Voskresensk

Sterilizacija je predstavljena fizičkim, hemijskim, mehaničkim i biološkim metodama i raznim metodama.

Izvodljivost upotrebe određene metode sterilizacije i njenih metoda zavisi od karakteristika materijala koji se steriliše, njegovih fizičkih i hemijskih svojstava.

Trajanje sterilizacije zavisi od predmeta koji se steriliše, sredstva za sterilizaciju i njegove doze, temperature i vlažnosti okoline.

Metoda fizičke sterilizacije

Metode fizičke metode sterilizacije uključuju sušenje, spaljivanje i kalcinaciju, prokuhavanje, pasterizaciju i tindalizaciju, vrući zrak (suha toplina), ultrazvuk, ultraljubičasto i radioaktivno zračenje, struju visoke frekvencije, sunčevu svjetlost.

Najčešći način sterilizacije predmeta koji mogu biti izloženi visokim temperaturama je sterilizacija vatrom, vrućim zrakom i zasićenom parom pod pritiskom.

Vatra se koristi za spaljivanje zaraženih predmeta koji ne predstavljaju nikakvu vrijednost (nepotrebni papiri, stare tapete, krpe, smeće), za dezinfekciju ispljuvka bolesnika sa tuberkulozom, leševa ljudi i životinja koje su uginule od posebno opasne infekcije, kao i za spaljivanje i kalciniranje raznih predmeta.

Spaljivanje i kalcinacija se široko koriste u mikrobiološkoj praksi za dezinfekciju instrumenata, laboratorijskog i farmaceutskog staklenog posuđa.

Kalcinacija u plamenu plamenika ili flambiranje je metoda sterilizacije u kojoj se predmet potpuno steriliše, jer vegetativne ćelije, ciste i spore mikroorganizama umiru.

Obično se petlje, lopatice, pipete, stakalca i pokrovni stakalci, mali instrumenti i drugi kontaminirani predmeti steriliziraju kalcinacijom ako se ne mogu prokuhati. Ne preporučuje se sterilizacija makaza i skalpela zagrijavanjem, jer površina rezanja postaje tupa kada je izložena vatri.

Jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda fizičke sterilizacije koja se koristi u medicinskoj praksi je sterilizacija toplim zrakom (suha toplina). Sterilizacija suvom toplotom se vrši u sušarama (Pasterove peći). Suvi topli zrak ima baktericidno, viruscidno, sporicidno djelovanje i koristi se uglavnom za sterilizaciju staklenih proizvoda (laboratorijski posuđe - šolje Petrijeve tikvice, pipete, epruvete itd.), kao i metalni proizvodi koji se mogu sterilizirati parom pod pritiskom.

Osim toga, suva toplota se koristi za sterilizaciju predmeta od porculana i materija otpornih na toplotu (talk, bijela glina), kao i mineralnih i biljna ulja, masti, vazelin, lanolin, vosak. Najefikasniji način za ovu metodu sterilizacije, koji osigurava smrt vegetativnih oblika i spora, je temperatura od 160 - 180 stepeni u trajanju od 15 minuta.

Namirnice, izotonične otopine ili predmete od gume i sintetičkih materijala ne možete sterilizirati suhom toplinom, jer tekućine ključaju i izlijevaju se, a guma i sintetički materijali se tope.

Sterilizacija zasićena para pod pritiskom - ovo je najpouzdanija i najčešće isprobana metoda sterilizacije zavoja, vode, nekih lijekovi, hranljive podloge, mekanu opremu, alate, kao i za dezinfekciju otpadom kontaminiranog materijala.

U hirurškoj praksi zavoji, hirurški ogrtači i donji veš za operisanog pacijenta dezinfikuju se parom u autoklavu. Sterilizacija parom pod pritiskom vrši se u posebnim uređajima - autoklavima.

Autoklaviranje u potpunosti uništava sve mikroorganizme i spore. Metoda sterilizacije pod pritiskom se zasniva na zagrijavanju materijala zasićenom vodenom parom pod pritiskom iznad atmosferskog. Kombinirano djelovanje visoke temperature i pare čini ovu metodu posebno učinkovitom. U tom slučaju umiru i vegetativne stanice i mikrobne spore.

Mikrobne spore umiru u roku od 10 minuta pod uticajem zasićene vodene pare, a vegetativni oblici umiru za 1 do 4 minuta.

Visoka baktericidna moć zasićene pare posljedica je činjenice da, pod utjecajem vodene pare pod pritiskom, proteini mikrobne stanice bubre i koaguliraju, uslijed čega mikrobne stanice umiru.

Baktericidno dejstvo zasićene vodene pare pojačava se prekomernim pritiskom.

Sterilizacija u autoklavu se vrši na različite načine.

Dakle, jednostavne hranljive podloge (meso - pepton agar i meso - pepton bujon) se sterilišu 20 minuta na 120 stepeni (1 atm.). Ali ovim načinom rada nemoguće je sterilizirati medije koji sadrže proteine, ugljikohidrate i druge tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem.

Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu u autoklavu na 0,5 atm. 10 – 15 minuta ili pare sa parom.

Visokom temperaturom možete uništiti najupornije oblike patogenih mikroorganizama (uključujući i one koji stvaraju spore) ne samo na površini predmeta koji se dezinficiraju, već iu njihovoj dubini.

To je velika prednost visoke temperature kao pouzdanog sredstva za sterilizaciju. Međutim, neki artikli se pod utjecajem visokih temperatura pokvare i u tim slučajevima potrebno je pribjeći drugim metodama i sredstvima dezinfekcije.

Potpuna sterilizacija materijala i predmeta koji se ne mogu sterilisati visoke temperature, postiže se ponovnom sterilizacijom vodenom parom u Koch aparatu na temperaturi koja ne prelazi 100 stepeni. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Svodi se na to da preostali neubijeni sporni oblici mikroba, nakon jednog dana u termostatu na 37 stepeni, klijaju u vegetativne ćelije, do čije smrti dolazi prilikom naknadne sterilizacije ovog predmeta tekućom parom.

Tretman tečnom parom izvodi se tri puta po 30-40 minuta. Jednokratno zagrijavanje materijala na temperaturi ispod 100 stepeni poznato je kao pasterizacija. Pasterizaciju je predložio Pasteur i namijenjena je uglavnom uništavanju mikroorganizama koji nisu spori. Pasterizacija se vrši na 60 - 70 stepeni 15 do 30 minuta, na 80 stepeni 10 do 15 minuta.

U mikrobiološkoj praksi pasterizacija sjemenski materijalčesto se koristi za izolaciju čistih kultura mikroorganizama koji stvaraju spore i za određivanje sposobnosti mikroorganizama da formiraju spore.

Za tekućine koje gube okus i druge vrijedne kvalitete kada su izložene visokim temperaturama (mlijeko, bobičasti i voćni sokovi, pivo, hranljive podloge koje sadrže ugljikohidrate ili ureu, itd.), sterilizacija tekućom parom se vrši na 50 - 60 stepeni u trajanju od 15 - 33333330 minuta ili na 70 - 80 stepeni 5 - 10 minuta. U tom slučaju mikrobi prosječne otpornosti umiru, dok se otporniji mikrobi i spore čuvaju.

Frakcijska 5-6-struka sterilizacija na 60 stepeni u trajanju od 1 sata naziva se tindalizacija.

Mnogi medicinski proizvodi napravljeni od polimernih materijala, ne podnose sterilizaciju parna metoda prema opšteprihvaćenim režimima. Za mnoge proizvode, zbog karakteristika tekućina koje sadrže (konzervansi, lijekovi i drugi proizvodi), nemoguće je sterilizirati općeprihvaćenim metodama i metodama. Za takve proizvode razvijeni su individualni režimi sterilizacije kako bi se osigurala pouzdana sterilizacija predmeta.

Dakle, sterilizacija rotora za razdvajanje krvi na frakcije se provodi vodenom parom na temperaturi od 120 stepeni u trajanju od 45 minuta.

Sterilnost kontejnera za konzerviranje postiže se na 110 stepeni u trajanju od 60 minuta.

Kuhanje je metoda sterilizacije koja se koristi za desterilizaciju špriceva za višekratnu upotrebu, hirurških instrumenata, gumenih cijevi, staklenog i metalnog pribora.

Sterilizacija kuhanjem se vrši u sterilizatorima. Forme spora u kipućoj vodi umiru nakon 20 - 30 minuta. Kuhanje od 45 minuta se široko koristi za dezinfekciju izlučevina i drugih infektivnih materijala, posteljine, posuđa, igračaka i predmeta za njegu pacijenata.

Topla voda (60 - 100 stepeni) so deterdženti koristi se za pranje i čišćenje mehaničko uklanjanje kontaminanti i mikroorganizmi.

Većina vegetativnih ćelija umire na 70 stepeni nakon 30 minuta.

Filtraciona sterilizacija se koristi u slučajevima kada supstrati ne mogu izdržati zagrijavanje, posebno za medije koji sadrže proteine, serume, neke antibiotike, vitamine i isparljive tvari. Ova tehnika se prilično široko koristi za sterilizaciju tečnosti kulture, kada je potrebno osloboditi je od mikrobnih ćelija, ali sačuvati nepromenjene sve metaboličke produkte koje sadrži.

Metoda uključuje filtriranje tekućina kroz posebne filtere koji imaju fino porozne pregrade i stoga zadržavaju mikrobne stanice.

Dva najčešće korištena tipa filtera su membranski filteri i Seitz filteri.

Membranski filteri se pripremaju od kolodijuma, acetata, celuloze i drugih materijala.

Seitz filteri su napravljeni od mješavine azbesta i celuloze.

Osim toga, za sterilizaciju se koriste filteri od kaolina s dodatkom kvarcnog pijeska, infuzorske zemlje i drugih materijala („svijeće“ Chamberlana, Berkfelda).

Membranski i azbestni filteri su dizajnirani za jednokratnu upotrebu.

Uz ultraljubičasto zračenje, baktericidni učinak pružaju zraci dužine 200 - 450 nm, čiji su izvor baktericidne lampe.

Sterilizacija se provodi baktericidnim lampama ultraljubičastih zraka vazduh u lekoviti preventivne ustanove, kutije mikrobioloških laboratorija, u preduzećima Prehrambena industrija, u kutijama za proizvodnju vakcina i seruma, u operacionim salama, manipulacionim salama, dečijim ustanovama itd.

Ultraljubičaste zrake imaju visoku antimikrobnu aktivnost i mogu uzrokovati smrt ne samo vegetativnih stanica, već i njihovih spora.

Sunčeva svjetlost uzrokuje smrt mikroorganizama kao rezultat djelovanja ultraljubičasto zračenje i sušenje.

Sušenje na sunčevoj svjetlosti štetno djeluje na mnoge vrste mikroorganizama, ali je njegovo djelovanje površno i stoga sunčeva svjetlost ima pomoćnu ulogu u praksi sterilizacije.

IN U poslednje vreme u liječenju rana i opekotina koriste se premazi od sintetičkih i prirodnih polimera u obliku gelova.

Polimerni antiseptički filmovi se široko koriste za lokalno liječenje rana i opekotina. Sadrže antimikrobne agense širokog spektra kao što su katapol, dioksidin, plavi jod, kao i sorbitol koji sadrži glutaraldehid. Za sterilizaciju ovih filmova koristi se jonizujuće zračenje u dozi od 20,0 kGy. Prilikom industrijske proizvodnje polimernih antiseptičkih filmova i sorbenata njihova sterilnost u ovom režimu sterilizacije je u potpunosti osigurana.

Radioaktivno zračenje ubija sve vrste mikroorganizama, kako u vegetativnom, tako iu obliku spora. Široko se koristi za sterilizaciju u preduzećima koja proizvode sterilne proizvode i sterilne medicinske uređaje za jednokratnu upotrebu, za dezinfekciju Otpadne vode i sirovine životinjskog porijekla.

Metoda mehaničke sterilizacije

Metode mehaničke sterilizacije uklanjaju klice sa površine predmeta. To uključuje pranje, istresanje, metenje, mokro brisanje, provjetravanje, ventilaciju, usisavanje, pranje.

Metoda hemijske sterilizacije

Plastika se danas sve više koristi u medicinskoj praksi.

Koriste se u stomatologiji, maksilofacijalnoj hirurgiji, traumatologiji, ortopediji i hirurgiji. Većina plastike ne može izdržati metode toplotne sterilizacije parom pod pritiskom i suvom toplotom (suhi zagrijani vazduh). Rastvori alkohola, diocida i ternarni rastvori koji se koriste za sterilizaciju takvih predmeta ne osiguravaju sterilnost proizvoda koji se obrađuju.

Stoga se za sterilizaciju plastičnih proizvoda koriste plinske i radijacijske metode, kao i otopine kemikalija.

Uvođenje u praksu zdravstvenih ustanova velikog broja proizvoda od termolabilnih materijala doprinosi uvođenju zračenja, gasne metode dezinfekcija i sterilizacija dezinfekcionim rastvorima.

At hemijska sterilizacija koristiti plinove i agense iz različitih kemijskih grupa (peroksid, fenol, halogen koji sadrži, aldehide, alkalije i kiseline, tenzide, itd.). Za svakodnevnu upotrebu proizvode se deterdženti, sredstva za čišćenje, izbjeljivanje i drugi preparati koji imaju antimikrobni učinak zbog unošenja raznih kemikalija u njihov sastav.

Ovi preparati se koriste za čišćenje i dezinfekciju sanitarnih čvorova tehnička oprema, posuđe, posteljina itd.

Formaldehidna para (vaporform) se može koristiti u medicinske ustanove za sterilizaciju metalni proizvodi medicinske svrhe (skalpeli, igle, pincete, sonde, stege, kuke, rezači žice, itd.).

Prije sterilizacije s parama formaldehida, proizvodi moraju biti podvrgnuti predsterilizacijskom čišćenju i temeljito osušeni.

Kada se sterilizira na bilo koji način hemijski propisi za obradu određenog predmeta zavise od karakteristika predmeta koji se dezinfikuje, otpornosti mikroba i karakteristika svojstava hemijska priprema, temperatura okoline, vlažnost i drugi faktori.

Tako se sterilnost metalnih instrumenata postiže nakon pet sati skladištenja u zatvorenoj komori sa parom na temperaturi od najmanje 20 stepeni i relativnoj vlažnosti od 95 - 98%, a na temperaturi od 15 stepeni potpuna sterilnost ovih predmeta. postiže se tek nakon 16 sati.

Spocidna aktivnost glutaraldehida zavisi od temperature. Njegovo optimalno djelovanje se javlja na temperaturi od 15 – 25 stepeni. Kako temperatura raste, sporicidna aktivnost ovog lijeka se smanjuje.

Sterilizacija hemijska metoda Upotreba je donekle ograničena. Najčešće se ova metoda koristi za sprječavanje bakterijske kontaminacije medija kulture i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma). Supstance kao što su hloroform, toluen i eter najčešće se dodaju u hranljive podloge. Ukoliko je potrebno osloboditi medij od ovih konzervansa, zagreva se u vodenom kupatilu na 56 stepeni i konzervansi isparavaju.

Za čuvanje vakcina ili seruma koristi se mertiolat, borna kiselina, formalin.

Metoda biološke sterilizacije

Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika.

Ova metoda se široko koristi u uzgoju virusa.

Sterilizacija (od latinskog sterilis - sterilan) podrazumijeva potpunu inaktivaciju mikroba na predmetima koji se obrađuju.

Pasteur pećnica - sterilizacija suvom toplotom.

Postoje tri glavne metode sterilizacije: toplotna, radijaciona i hemijska.

Jod.

Toplotna sterilizacija zasniva se na osjetljivosti mikroba na visoku temperaturu.

Na 60 °C i prisutnosti vode dolazi do denaturacije proteina, uključujući enzime, uslijed čega vegetativni oblici mikroba umiru. Spore koje sadrže vrlo malu količinu vezane vode i imaju gustu školjku inaktiviraju se na 160-170 °C. Za termičku sterilizaciju uglavnom se koriste suha toplota i para pod pritiskom.
Sterilizacija suvom toplotom se vrši u pećima sa suvom toplotom, odnosno Pasteur pećnicama. Pasteur pećnica je čvrsto zatvoren metalni ormarić, grijan na struju i opremljen termometrom.

Dezinfekcija materijala u njemu se odvija na 160-170 °C u trajanju od 60-120 minuta. Nedostatak ove metode je što samo neki predmeti koji se mogu sterilizirati, kao što je laboratorijsko staklo, mogu izdržati tako visoke temperature.
Najuniverzalnija metoda sterilizacije je obrada parom pod pritiskom u autoklavima, u kojima se sterilišu zavoji, posteljina, mnogi instrumenti, podloge za kulturu, rastvori, infektivni materijal itd.

Autoklav je metalni cilindar čvrstih zidova, hermetički zatvoren, koji se sastoji od vodeno-parne i komore za sterilizaciju. Uređaj je opremljen manometrom, termometrom i drugim uređajima za praćenje. U autoklavu se stvara povećani pritisak, što dovodi do povećanja tačke ključanja vode. Dakle, na 0,5 atm tačka ključanja je 80 °C, na 1 atm - 100 °C, na 2 atm - 121 °C i na 3 atm - 136 °C.

Zbog činjenice da, osim visoke temperature, para djeluje na mikroorganizme, spore umiru već na 120 ° C. Najčešći režim rada autoklava je 2 atm, 121 °C, 15-20 minuta. Vrijeme sterilizacije se smanjuje s povećanjem atmosferski pritisak, a samim tim i tačka ključanja. Mikroorganizmi umiru za nekoliko sekundi, ali se materijal obrađuje duže vrijeme, jer, prvo, unutar materijala koji se sterilizira mora biti visoka temperatura, a drugo postoji takozvano sigurnosno polje, predviđeno za moguće odstupanje od navedene parametre prilikom rada u autoklavu.

Oznake: tijelo, rast, sterilizacija, enzim