Način rada sušare. Metode i metode sterilizacije Sterilizacija ultraljubičastim zračenjem

Život mikroorganizama usko zavisi od uslova okoline. Svi faktori životne sredine koji utiču na mikroorganizme mogu se podeliti u tri grupe: fizičke, hemijske i biološke, čije blagotvorno ili štetno dejstvo zavisi kako od prirode samog faktora tako i od svojstava mikroorganizma.

Fizički faktori

Od fizičkih faktora najveći uticaj Na razvoj mikroorganizama utiču temperatura, sušenje, energija zračenja i ultrazvuk.

Temperatura. Životna aktivnost svakog mikroorganizma ograničena je određenim temperaturnim granicama. Ova temperaturna zavisnost se obično izražava sa tri glavne tačke: minimum - temperatura ispod koje prestaje reprodukcija mikrobnih ćelija; optimalna - najbolja temperatura za rast i razvoj mikroorganizama; maksimum - temperatura iznad koje vitalna aktivnost ćelija slabi ili prestaje. Optimalna temperatura obično odgovara temperaturnim uslovima prirodno okruženje stanište.

Svi mikroorganizmi u odnosu na temperaturu dijele se na psihrofile, mezofile i termofile.

Psihrofili (od grčkog psychros - hladnoća, phileo - ljubav), ili mikroorganizmi koji vole hladnoću, rastu na relativno niskim temperaturama: minimalna temperatura- 0° C, optimalna - 10-20° C, maksimalna - 30° C. U ovu grupu spadaju mikroorganizmi koji žive u sjevernih mora i okeani, tlo, otpadne vode. To također uključuje svjetleće i željezne bakterije, kao i mikrobe koji uzrokuju kvarenje hrane na hladnoći (ispod 0°C).

Mezofili (od grčkog mesos - srednji) su najobimnija grupa, uključujući većinu saprofita i sve patogene mikroorganizme. Optimalna temperatura za njih je 28-37°C, minimalna 10°C, maksimalna 45°C.

Termofili (od grčkog termos - toplota, toplota), ili mikroorganizmi koji vole toplotu, razvijaju se na temperaturama iznad 55°C, minimalna temperatura za njih je 30°C, optimalna je 50-60°C, a maksimalna 70°C. -75°C. Nalaze se u toplim mineralnim izvorima, površinskom sloju tla, samozagrijavajućim supstratima (stajnjak, sijeno, žito), te crijevima ljudi i životinja. Među termofilima postoji mnogo oblika spora.

Visoke i niske temperature imaju različite efekte na mikroorganizme. Neki su osjetljiviji na visoke temperature. Štaviše, što je temperatura viša iznad maksimuma, to brže dolazi do smrti mikrobnih ćelija, što je posledica denaturacije (koagulacije) ćelijskih proteina.

Vegetativni oblici mezofilnih bakterija umiru na temperaturi od 60°C 30-60 minuta, a na 80-100°C - nakon 1-2 minuta. Bakterijske spore su mnogo otpornije na visoke temperature. Na primjer, spore bacila antraksa mogu izdržati ključanje 10-20 minuta, a spore botulizma klostridija - 6 sati.Svi mikroorganizmi, uključujući i spore, umiru na temperaturi od 165-170°C sat vremena (na suhoj vrućini pećnica) ili kada je izložena pari pod pritiskom od 1 atm (u autoklavu) 30 minuta.

Djelovanje visokih temperatura na mikroorganizme je osnova sterilizacije - potpunog oslobađanja raznih predmeta od mikroorganizama i njihovih spora (vidi dolje).

Mnogi mikroorganizmi su izuzetno otporni na niske temperature. Salmonella typhus i Vibrio cholerae dugo preživljavaju u ledu. Neki mikroorganizmi ostaju održivi na temperaturama tekućeg zraka (-190°C), a bakterijske spore mogu izdržati temperature do -250°C.

Samo pojedinačne vrste patogene bakterije su osjetljive na niske temperature (na primjer, Bordetella pertussis i parapertussis, Neisseria meningococcus, itd.). Ova svojstva mikroorganizama su uzeta u obzir u laboratorijska dijagnostika a prilikom transporta ispitivanog materijala dostavlja se u laboratorij zaštićen od hlađenja.

Djelovanje niskih temperatura zaustavlja procese truljenja i fermentacije, što se široko koristi za konzerviranje prehrambenih proizvoda u rashladnim uređajima, podrumima, glečerima. Na temperaturama ispod 0°C, mikrobi padaju u stanje suspendirane animacije - metabolički procesi se usporavaju i reprodukcija prestaje. Međutim, ako postoje odgovarajući temperaturni uslovi i hranljivi medij, vitalne funkcije mikrobnih ćelija se obnavljaju. Ovo svojstvo mikroorganizama koristi se u laboratorijskoj praksi za očuvanje mikrobnih kultura na niskim temperaturama. Brze promjene visokih i niskih temperatura (smrzavanje i odmrzavanje) također štetno djeluju na mikroorganizme - to dovodi do pucanja ćelijskih membrana.

Sušenje. Voda je neophodna za normalno funkcioniranje mikroorganizama. Sušenje dovodi do dehidracije citoplazme, narušavanja integriteta citoplazmatske membrane, zbog čega se narušava ishrana mikrobnih ćelija i dolazi do njihove smrti.

Vrijeme smrti različitih vrsta mikroorganizama pod utjecajem sušenja značajno se razlikuje. Na primjer, patogene Neisseria (meningokoke, gonokoke), Leptospira, Treponema pallidum i druge umiru kada se osuše nakon nekoliko minuta. Vibrio cholerae može izdržati sušenje 2 dana, Salmonella tifusa - 70 dana, a Mycobacterium tuberculosis - 90 dana. Ali osušeni sputum pacijenata sa tuberkulozom, u kojem su patogeni zaštićeni suvim proteinskim omotačem, ostaje zarazan 10 mjeseci.

Spore su posebno otporne na sušenje, kao i na druge uticaje okoline. Spore bacila antraksa zadržavaju sposobnost klijanja 10 godina, a spore plijesni i do 20 godina.

Nepovoljan uticaj sušenja na mikroorganizme odavno se koristi za konzerviranje povrća, voća, mesa, ribe i lekovitog bilja. Istovremeno, našli smo se u uslovima visoka vlažnost, takvi proizvodi brzo propadaju zbog obnove mikrobne aktivnosti.

Metoda sušenja smrzavanjem se široko koristi za čuvanje kultura mikroorganizama, vakcina i drugih bioloških preparata. Suština metode je da se mikroorganizmi ili preparati prvo zamrzavaju, a zatim suše u vakuumskim uslovima. U tom slučaju mikrobne ćelije ulaze u stanje suspendirane animacije i zadržavaju svoja biološka svojstva nekoliko mjeseci ili godina.

Radiant Energy. U prirodi su mikroorganizmi stalno izloženi sunčevo zračenje. Direktna sunčeva svjetlost uzrokuje smrt mnogih mikroorganizama u roku od nekoliko sati, osim fotosintetskih bakterija (zelene i ljubičaste sumporne bakterije). Štetno djelovanje sunčeve svjetlosti uzrokovano je djelovanjem ultraljubičastih zraka (UV zraka). Oni inaktiviraju stanične enzime i oštećuju DNK. Patogene bakterije su osjetljivije na djelovanje UV zraka od saprofita. Stoga je bolje čuvati mikrobne kulture u laboratoriji u mraku. U tom smislu, Buchnerovo iskustvo je demonstrativno.

U Petrijevoj posudi sa tanki sloj agar se proizvodi obilnom inokulacijom bilo koje bakterijske kulture. Slova izrezana iz crnog papira zalijepljena su na vanjsku površinu posude za sjemenje, formirajući, na primjer, riječ "tifus". Šolja, sa dnom okrenutom prema gore, ozračena je ravnom sunčeve zrake 1 sat Potom se papiri skidaju, a čaša se stavlja u termostat na dan na 37°C. Rast bakterija se opaža samo na onim mjestima agara koja su od UV zraka zaštićena lijepljenim slovima. Ostatak agara ostaje providan, odnosno nema rasta mikroorganizama (slika 11).

Značaj sunčeve svetlosti kao prirodnog faktora za poboljšanje zdravlja spoljašnje sredine je veliki. Oslobađa zrak, vodu prirodnih rezervoara i gornje slojeve tla od patogenih bakterija.

Baktericidno (uništavajuće bakterije) dejstvo UV zraka koristi se za sterilizaciju vazduha zatvorene prostorije(operacione sale, svlačionice, boksovi itd.), kao i voda i mlijeko. Izvor ovih zraka su lampe ultraljubičasto zračenje, baktericidne lampe.

Ostale vrste energije zračenja - X-zraci, α-, β-, γ-zraci štetno djeluju na mikroorganizme samo u velikim dozama, reda veličine 440-280 J/kg. Smrt mikroba uzrokovana je uništavanjem nuklearnih struktura i stanične DNK. Niske doze zračenja stimulišu rast mikrobnih ćelija. Mikroorganizmi su mnogo otporniji na radioaktivno zračenje od viših organizama. Poznato je da tionske bakterije žive u nalazištima rude uranijuma. Bakterije su pronađene u vodi nuklearnih reaktora pri koncentraciji jonizujućeg zračenja od 20-30 kJ/kg.

Baktericidno dejstvo jonizujućeg zračenja koristi se za konzerviranje određenih prehrambenih proizvoda, sterilizaciju bioloških preparata (serumi, vakcine i sl.), pri čemu se svojstva sterilizovanog materijala ne menjaju.

Poslednjih godina se metodom zračenja sterilišu proizvodi za jednokratnu upotrebu kao što su polistirenske pipete, Petrijeve zdjelice, bunari za serološke reakcije, špricevi, kao i materijal za šavove - catgut i dr.

Ultrazvuk uzrokuje značajna oštećenja mikrobnih stanica. Pod uticajem ultrazvuka aktiviraju se gasovi koji se nalaze u tečnom okruženju citoplazme, a visokog pritiska(do 10000 atm). To dovodi do pucanja ćelijske membrane i smrti ćelije. Ultrazvuk se koristi za sterilizaciju prehrambenih proizvoda (mlijeko, voćni sokovi), pije vodu.

Visok pritisak. Bakterije, a posebno njihove spore, otporne su na mehanički pritisak. U prirodi se nalaze bakterije koje žive u morima i okeanima na dubini od 1000-10000 m pod pritiskom od 100 do 900 atm. Neke vrste bakterija mogu izdržati pritiske do 3000-5000 atm, a bakterijske spore - čak 20 000 atm.

Hemijski faktori

Efekat hemikalija na mikroorganizme varira u zavisnosti od prirode hemijskog jedinjenja, njegove koncentracije i trajanja izlaganja mikrobnim ćelijama. U zavisnosti od koncentracije, hemijska supstanca može biti izvor ishrane ili imati inhibitorni efekat na vitalnu aktivnost mikroorganizama. Na primjer, 0,5-2% otopina glukoze stimulira rast mikroba, a 20-40% otopina glukoze inhibira proliferaciju mikrobnih stanica.

Mnogi hemijska jedinjenja, koji štetno djeluju na mikroorganizme, koriste se u medicinskoj praksi kao dezinficijensi i antiseptici.

Hemikalije koje se koriste za dezinfekciju nazivaju se dezinficijensima. Dezinfekcija se odnosi na mjere koje imaju za cilj uništavanje patogenih mikroorganizama u različitim objektima okoliša. Dezinficijensi uključuju halogenidne spojeve, fenole i njihove derivate, soli teških metala, neke kiseline, alkalije, alkohole itd. Oni uzrokuju odumiranje mikrobnih stanica, djelujući u optimalnim koncentracijama određeno vrijeme. Mnoga sredstva za dezinfekciju štetno djeluju na tkiva makroorganizma.

Zovu se antiseptici hemijske supstance, što može uzrokovati smrt mikroorganizama ili inhibirati njihov rast i reprodukciju. Koriste se u terapeutske svrhe (kemoterapija), kao i za dezinfekciju rana, kože i sluzokože ljudi. Antiseptička svojstva imaju vodonik peroksid, alkoholni rastvori joda, briljantnog zelenog, rastvori kalijum permanganata i dr. Za konzerviranje hrane koriste se neke antiseptičke supstance (sirćetna, sumporna, benzojeva kiselina itd.) u dozama koje su neškodljive za ljude.

Prema mehanizmu djelovanja, hemijske supstance sa antimikrobnim djelovanjem mogu se podijeliti u nekoliko grupa.

1. Surfaktanti (masne kiseline, sapuni i drugi deterdženti) uzrokuju smanjenje površinske napetosti, što dovodi do narušavanja funkcionisanja ćelijskog zida i citoplazmatske membrane mikroorganizama.

2. Fenol, krezol i njihovi derivati uzrokuju koagulaciju mikrobnih proteina. Koriste se za dezinfekciju infektivnog materijala u mikrobiološkoj praksi i infektivnim bolnicama.

3. Oksidirajući agensi, u interakciji sa mikrobnim proteinima, ometaju aktivnost enzima i uzrokuju denaturaciju proteina. Aktivni oksidanti su hlor i ozon koji se koriste za dezinfekciju vode za piće. Derivati hlora (izbjeljivač, hloramin) se široko koriste u svrhe dezinfekcije. Vodikov peroksid, kalijum permanganat, jod itd. imaju oksidirajuća svojstva.

4. Formaldehid se koristi u obliku 40% rastvora (formalina) za dezinfekciju. Ubija vegetativne i spore forme mikroorganizama. Formalin blokira amino grupe proteina mikrobnih stanica i uzrokuje njihovu denaturaciju.

5. Soli teških metala (živa, olovo, cink, zlato itd.) koaguliraju proteine mikrobne ćelije, uzrokujući tako njihovu smrt. Brojni metali (srebro, zlato, živa, itd.) imaju baktericidni učinak na mikroorganizme u zanemarljivim koncentracijama. Ovo svojstvo se naziva oligodinamičko djelovanje (od latinskog oligos - mali, dinamys - snaga). Dokazano je da voda u srebrnim posudama ne truli zbog baktericidnog dejstva jona srebra. Za prevenciju blenoreje* novorođenčadi dugo vremena korišćen je 1% rastvor srebrnog nitrata. Koloidni rastvori organskih jedinjenja srebra (protargol, kolargol) se takođe koriste kao lokalni antiseptici.

* (Blennorea je upala konjunktive oka uzrokovana gonokokom.)

Preparati žive imaju snažno antimikrobno dejstvo. Od davnina se za dezinfekciju koristi živa biklorid ili živin hlorid (u razrjeđenju 1:1000). Međutim, ona jeste toksični efekat na tkivo makroorganizma i njegova upotreba je ograničena.

6. Boje (dijamant zelena, rivanol, itd.) imaju svojstvo inhibiranja rasta bakterija. Rastvori brojnih boja koriste se kao antiseptici, a dodaju se i nekim hranjivim podlogama kako bi se inhibirao rast prateće mikroflore.

Destruktivno djelovanje niza fizičkih i kemijskih faktora na mikroorganizme čini osnovu aseptičkih i antiseptičkih metoda koje se široko koriste u medicinskoj i sanitarnoj praksi.

Asepsa je sistem preventivnih mjera kojima se sprječava mikrobna kontaminacija predmeta (rana, hirurško polje, kulture mikroorganizama i dr.) na osnovu fizikalnih metoda.

Antiseptici su skup mjera usmjerenih na uništavanje mikroorganizama u rani, cijelom tijelu ili na objektima okoline, korištenjem raznih hemikalija za dezinfekciju.

Biološki faktori

U prirodnim staništima mikroorganizmi ne postoje izolovani, već su u složenim odnosima koji se svode uglavnom na simbiozu, metabiozu i antagonizam.

Simbioza je kohabitacija organizama različitih vrsta, koja im donosi obostranu korist. Istovremeno, zajedno se razvijaju bolje od svakog od njih posebno.

Simbiotski odnosi postoje između bakterija kvržica i mahunarki, između filamentoznih gljiva i modrozelenih algi (lišajeva): simbioza bakterija mliječne kiseline i alkoholnog kvasca koristi se za pripremu nekih proizvoda mliječne kiseline (kefir, kumis).

Metabioza je vrsta odnosa u kojoj nastaju metabolički produkti jedne vrste mikroorganizama neophodne uslove za razvoj drugih. Na primjer, truležni mikroorganizmi koji razgrađuju proteinske tvari doprinose akumulaciji amonijevih spojeva u okolišu i stvaraju povoljne uvjete za rast i razvoj nitrificirajućih bakterija. A razvoj anaeroba u dobro prozračnom tlu bio bi nemoguć bez aerobnih tvari koje apsorbiraju slobodni kisik.

Metabiotički odnosi su široko rasprostranjeni među mikroorganizmima u tlu i leže u osnovi ciklusa supstanci u prirodi.

Antagonizam je oblik odnosa u kojem jedan mikroorganizam inhibira razvoj drugog ili može uzrokovati njegovu potpunu smrt. Razvili su se antagonistički odnosi među mikroorganizmima u borbi za postojanje. Svugdje gdje žive, između njih se vodi stalna borba za izvore hrane, kisik u zraku i stanište. Dakle, većina patogenih bakterija, dospjela u izlučevine pacijenata u spoljašnje okruženje(tlo, voda), ne podnose dugotrajnu konkurenciju sa brojnim saprofitima ovdje i relativno brzo umiru.

Antagonizam može biti uzrokovan direktnim utjecajem mikroorganizama jedni na druge ili djelovanjem njihovih metaboličkih produkata. Na primjer, protozoe proždiru bakterije, a fagi ih liziraju. Crijeva novorođenčadi su kolonizirana bakterijama mliječne kiseline Bifidobacterium bifidum. Oslobađanjem mliječne kiseline potiskuju rast truležnih bakterija i time štite još uvijek krhki organizam od crijevnih smetnji. dojenčadi. Neki mikroorganizmi u procesu života proizvode različite tvari koje štetno djeluju na bakterije i druge mikrobe. Ove supstance uključuju antibiotike (vidi "Antibiotici").

Kontrolna pitanja

1. Koji fizički faktori utiču na životnu aktivnost mikroorganizama?

2. Koje supstance se klasifikuju kao dezinfekciona sredstva i po čemu se razlikuju po mehanizmu delovanja na mikroorganizme?

3. Navedite kakve veze postoje između mikroorganizama?

Sterilizacija

Sterilizacija je sterilizacija, odnosno potpuno oslobađanje objekata životne sredine od mikroorganizama i njihovih spora.

Sterilizacija se provodi na različite načine:

1) fizički (izloženost visokoj temperaturi, UV zracima, upotreba bakterijski filteri);

2) hemijski (upotreba raznih dezinfekcionih sredstava, antiseptika);

3) biološki (upotreba antibiotika).

U laboratorijskoj praksi obično se koriste fizičke metode sterilizacije.

Mogućnost i izvodljivost upotrebe jedne ili druge metode sterilizacije određena je karakteristikama materijala koji se steriliše, njegovim fizičkim i hemijskim svojstvima.

Fizičke metode

Kalcinacija u plamenu plamenika ili flambiranje je metoda sterilizacije u kojoj se predmet potpuno sterilizira, jer umiru i vegetativne stanice i mikrobne spore. Obično se kalciniraju bakteriološke petlje, lopatice, pipete, dijapozitivi i pokrovne čaše, te mali instrumenti. Makaze i skalpele ne treba sterilizirati zagrijavanjem, jer pod utjecajem vatre površina rezanja postaje tupa.

Sterilizacija suvom toplotom

Sterilizacija suvom toplotom ili vrelim vazduhom vrši se u Pasteur pećnicama (sušare). Pasteur pećnica je dvoslojni ormarić od materijala otpornih na toplinu - metala i azbesta. Zagrijte ormar sa plinski gorionici ili električnim grijačima. Električno grijani ormari opremljeni su regulatorima koji osiguravaju potrebna temperatura. Za kontrolu temperature, termometar je umetnut u otvor na gornjem zidu ormarića.

Suva toplota se koristi za sterilizaciju laboratorijskog staklenog posuđa. Posuđe pripremljeno za sterilizaciju se lagano stavlja u pećnicu kako bi se osiguralo jednolično i pouzdano zagrijavanje materijala koji se sterilizira. Čvrsto zatvorite vrata ormarića, uključite uređaj za grijanje, zagrijte temperaturu na 160-165 °C i sterilizirajte na ovoj temperaturi 1 sat. Na kraju sterilizacije isključite grijanje, ali ne otvarajte vrata ormarića do pećnica se ohladila; inače hladan vazduh, ulazak u ormarić može uzrokovati pukotine na vrućem posuđu.

Sterilizacija u Pasteur pećnici može se vršiti na različitim temperaturama i izloženostima (vrijeme sterilizacije) (tabela 1).

Tečnosti (hranjivi mediji, izotonični rastvor natrijum hlorida itd.), predmeti od gume i sintetičkih materijala ne mogu se sterilisati suvom toplotom, jer tečnosti ključaju i izlivaju se, a guma i sintetički materijali tope.

Za kontrolu sterilizacije u Pasteur pećnici, svilene niti se navlaže u kulturi bakterija koje stvaraju spore, osuše se, stave u sterilnu Petrijevu posudu i stave u Pasteurovu peć. Sterilizacija se vrši na temperaturi od 165°C u trajanju od 1 sata (za kontrolu, dio niti se ostavi na sobnoj temperaturi). Zatim se sterilizirane i kontrolne niti stavljaju na površinu agara u Petrijevoj posudi ili stavljaju u epruvete sa bujonom i inkubiraju u termostatu na 37°C 2 dana. Pravilnim radom Pasteurove peći neće doći do rasta u epruvetama ili posudama sa hranljivim podlogama u koje su stavljene sterilisane niti, jer će spore bakterija umrijeti, dok će spore bakterija na nitima koje nisu sterilizirane (kontrola) proklijati na nutrijentima. bit će zabilježen medijski rast.

Da biste odredili temperaturu unutar Pasteurove pećnice, možete koristiti saharozu ili granulirani šećer, koji se karamelizira na temperaturi od 165-170 ° C.

Priprema laboratorijskog staklenog posuđa za sterilizaciju u Pasteur pećnici. Laboratorijsko stakleno posuđe(Petrijeve zdjelice, graduirane i Pasteurove pipete, boce, tikvice, epruvete) prije sterilizacije moraju se dobro oprati, osušiti i umotati u papir, inače nakon sterilizacije može ponovo doći do kontaminacije vazdušnim bakterijama.

Petrijeve zdjelice se umotaju u papir jedan ili više komada odjednom ili se stavljaju u posebne metalne kutije.

Pamučni štapići se ubacuju u gornje krajeve pipete kako bi se spriječilo da ispitni materijal uđe u usta. Graduirane pipete se umotaju u dugačke trake papira širine 4-5 cm.Zapremina umotane pipete je označena na papiru. U kutijama za olovke, graduirane pipete se sterilišu bez dodatnog umotavanja u papir.

Bilješka. Ako je gradacija na pipetama slabo vidljiva, ona se vraća prije sterilizacije. Nanesite na pipetu uljane boje i, ne dopuštajući da se boja osuši, u nju se krpom utrlja prah barijum sulfata. Nakon toga krpom uklonite višak boje, koja ostaje samo u zarezima za diplomiranje. Ovako tretirane pipete treba isprati.

Oštri krajevi Pasteurovih pipeta zapečaćeni su u plamenu plamenika i umotani u papir, po 3-5 komada. Pasteurove pipete moraju se pažljivo umotati kako se ne bi odlomili zapečaćeni krajevi kapilara.

Bočice, tikvice, epruvete se zatvaraju čepovima od pamučne gaze. Pluto treba da stane u grlo posude 2/3 dužine, ne previše čvrsto, ali ni labavo. Preko čepova svake posude (osim epruveta) stavlja se papirna kapica. Epruvete su povezane u grupe od 5-50 i omotane papirom.

Bilješka. At visoke temperature papir u koji su umotane čaše i pipete, i vata požute i mogu se čak i ugljenisati, tako da svi nova sorta papir primljen u laboratoriju treba testirati na prihvaćenim temperaturnim uslovima.

Kontrolna pitanja

1. Šta se podrazumijeva pod pojmom sterilizacija?

2. Kako se vrši sterilizacija?

3. Šta se steriliše kalcinacijom na vatri?

4. Opišite strukturu i način rada Pasteurove peći.

5. Šta se steriliše u Pasteur pećnici?

6. Kako se stakleno posuđe priprema za sterilizaciju?

7. Zašto se hranljivi mediji i gumeni predmeti ne mogu sterilisati u Pasteur pećnici?

Vježbajte

Pripremite Petrijeve zdjelice, graduirane pipete, Pasteurove pipete, epruvete, tikvice i bočice za sterilizaciju.

Sterilizacija ključanjem

Kuhanje je metoda sterilizacije koja garantuje sterilnost pod uslovom da u sterilizovanom materijalu nema spora. Koristi se za obradu špriceva, instrumenata, staklenog i metalnog pribora, gumenih cijevi itd.

Sterilizacija kuhanjem se obično vrši u sterilizatoru - metalna kutija pravokutnog oblika sa čvrstim poklopcem. Materijal koji se steriliše stavlja se na mrežicu koja se nalazi u sterilizatoru i puni se vodom. Da biste povećali tačku ključanja i eliminisali tvrdoću vode, dodajte 1-2% natrijum bikarbonata (bolje je koristiti destilovanu vodu). Sterilizator se zatvara poklopcem i zagreva.Početkom sterilizacije se smatra trenutak ključanja vode, vreme ključanja je 15-30 minuta. Na kraju sterilizacije, bočnim drškama se posebnim kukama uklanja mrežica sa instrumentima, a instrumenti u njoj se uzimaju sterilnom pincetom ili pincetom, koje se zajedno sa ostatkom instrumenata prokuvaju.

Sterilizacija parom se vrši na dva načina: 1) parom pod pritiskom; 2) tekuća para.

Sterilizacija parom pod pritiskom proizvedeno u autoklavu. Ova metoda sterilizacije zasniva se na izlaganju materijala koji se steriliše zasićenoj vodenoj pari pod pritiskom iznad atmosferskog. Kao rezultat takve sterilizacije, i vegetativni i sporni oblici mikroorganizama umiru jednim tretmanom.

Autoklav (Sl. 12) je masivni kotao, sa vanjske strane prekriven metalnim kućištem, hermetički zatvoren poklopcem, koji je vijcima na šarkama čvrsto pričvršćen na kotao. Drugi, manji prečnik, koji se zove sterilizaciona komora, ubacuje se u spoljašnji kotao. U ovu komoru se stavljaju predmeti koji se sterilišu. Između oba kotla postoji slobodan prostor koji se zove vodeno-parna komora. Voda se u ovu komoru ulijeva kroz lijevak pričvršćen sa vanjske strane do određenog nivoa označenog na posebnoj cijevi za mjerenje vode. Kada se voda prokuva u vodeno-parnoj komori, nastaje para. Komora za sterilizaciju je opremljena ispusnom slavinom sa sigurnosnim ventilom koji omogućava izlaz pare kada se pritisak poveća iznad potrebnog nivoa. Manometar se koristi za određivanje pritiska stvorenog u komori za sterilizaciju.

Rice. 12. Dijagram autoklava. M - manometar; PC - sigurnosni ventil; B - lijevak za vodu; K 2 - slavina za ispuštanje vode; K 3 - ventil za ispuštanje pare

Normalni atmosferski pritisak (760 mm Hg) uzima se kao nula. Postoji određena veza između očitavanja manometra i temperature (tabela 2).

Trenutno postoje autoklavi sa automatskom kontrolom načina rada. Pored uobičajenog manometra, opremljeni su i električnim kontaktnim manometrom, koji sprečava porast pritiska iznad unapred određene vrednosti i na taj način obezbeđuje konstantan željenu temperaturu u autoklavu.

Para pod pritiskom steriliše različite hranljive podloge (osim onih koje sadrže prirodne proteine), tečnosti (izotonični rastvor natrijum hlorida, voda, itd.); uređaja, posebno onih sa gumenim dijelovima.

Temperatura i trajanje autoklaviranja hranljivih podloga određuju se njihovim sastavom navedenim u receptu za pripremu hranljivog medijuma. Na primjer, jednostavni mediji (meso-pepton agar, mesno-peptonski bujon) steriliziraju se 20 minuta na 120 ° C (1 atm). Međutim, na ovoj temperaturi nemoguće je sterilizirati podloge koje sadrže prirodne proteine, ugljikohidrate i druge tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem. Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu frakciono na 100°C ili u autoklavu na 112°C (0,5 atm) 10-15 minuta. Razne tekućine, uređaji sa gumenim crijevima, čepovi, bakterijske svijeće i filteri steriliziraju se 20 minuta na 120°C (1 atm).

Pažnja! Inficirani materijal se također neutralizira u autoklavu. Čaše i epruvete sa kulturama mikroorganizama stavljaju se u specijalne metalne kante ili rezervoare sa otvorima na poklopcu za prodiranje pare i sterilišu u autoklavu na 126°C (1,5 atm) 1 sat. Na isti način instrumenti se sterilišu nakon rada. sa bakterijama, stvarajući sporove.

Samo posebno obučene osobe smiju raditi s autoklavom, koje moraju striktno i točno slijediti pravila navedena u uputama isporučenim uz uređaj.

Tehnika autoklaviranja. 1. Prije rada provjerite ispravnost svih dijelova i brušenost slavina.

2. Voda (destilirana ili prokuvana da se spriječi stvaranje kamenca) se ulijeva kroz lijevak postavljen izvan kotla do gornje oznake na staklu vodomjera. Slavina ispod lijevka je zatvorena.

3. Materijal koji se steriliše stavlja se u komoru za sterilizaciju na posebnu mrežicu. Predmete ne treba puniti previše čvrsto, jer para mora slobodno prolaziti između njih, inače se neće zagrijati na potrebnu temperaturu i mogu ostati nesterilni.

4. Gumena brtva na poklopcu se istrlja kredom radi boljeg zaptivanja.

5. Poklopac je zatvoren i pričvršćen vijcima na tijelo autoklava, a vijci su ukršteni u paru.

6. Otvorite izlazni ventil koji povezuje komoru za sterilizaciju sa vanjskim zrakom do kraja i počnite zagrijavati autoklav. Autoklav se obično zagrijava na plin ili struju.

Kada se autoklav zagreje, voda proključa, nastala para se diže između zidova bojlera i kroz posebne rupe na zidu unutrašnjeg kotla (vidi sliku 12), ulazi u komoru za sterilizaciju i izlazi kroz otvoreni izlazni ventil. Prvo, para izlazi zajedno sa vazduhom u autoklavu. Neophodno je da sav vazduh bude istisnut iz autoklava, inače očitavanje manometra neće odgovarati temperaturi u autoklavu.

Pojava kontinuiranog jakog toka pare ukazuje na potpuno uklanjanje zraka iz autoklava; Nakon toga, izlazni ventil se zatvara i tlak unutar autoklava počinje postupno rasti.

7. Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada očitanja merača pritiska dostignu zadatu vrednost. Zagrijavanje je podešeno tako da se tlak u autoklavu ne mijenja u određenom vremenskom periodu.

8. Nakon isteka vremena sterilizacije, zagrijavanje autoklava se zaustavlja, a para se ispušta kroz izlazni ventil. Kada igla merača pritiska padne na nulu, otvorite poklopac. Da biste izbjegli opekotine od pare koja ostaje u autoklavu, poklopac treba otvoriti prema vama.

Nivo temperature u autoklavu, odnosno ispravnost očitavanja manometra, može se provjeriti. Da biste to učinili, koristite različite supstance koje imaju određenu tačku topljenja: antipirin (113°C), resorcinol i sumpor (119°C), benzojeva kiselina (120°C). Jedna od ovih supstanci se pomeša sa zanemarljivom količinom boje (muchsin ili metilen plavo) i izlije u staklenu epruvetu, koja se zatvori i postavi u vertikalni položaj između materijala koji se steriliše. Ako je temperatura dovoljna, tvar će se otopiti i promijeniti boju odgovarajuće boje.

Da bi se proverila efikasnost sterilizacije, epruveta sa poznatom kulturom spora stavlja se u autoklav. Nakon autoklaviranja, epruveta se prenosi u termostat na 24-48 sati, primjećuje se odsutnost ili prisustvo rasta. Nedostatak rasta ukazuje na pravilan rad uređaja.

Sterilizacija tekućom parom proizveden u Koch aparatu. Ova metoda se koristi u slučajevima kada se predmet koji se steriliše menja na temperaturi iznad 100°C. Hranljivi mediji koji sadrže ureu, ugljene hidrate, mleko, krompir, želatin itd. sterilišu se tekućom parom.

Koch aparat (bojler) je metalni cilindar obložen izvana (za smanjenje prijenosa topline) filcom ili azbestom. Cilindar je zatvoren konusnim poklopcem sa otvorom za izlazak pare. Unutar cilindra nalazi se postolje do čijeg nivoa se ulijeva voda. Na postolje se postavlja kanta sa rupom u koju se stavlja materijal koji se steriliše. Koch aparat se grije na plin ili struju. Vrijeme sterilizacije računa se od trenutka snažnog ispuštanja pare na rubovima poklopca i od izlaza za paru. Sterilizirajte 30-60 minuta. Na kraju sterilizacije, zagrijavanje se prekida. Izvadite kantu sa materijalom iz aparata i ostavite je na sobnoj temperaturi do sljedećeg dana. Zagrijavanje se vrši 3 dana za redom na temperaturi od 100°C u trajanju od 30-60 minuta. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Prilikom prvog zagrijavanja vegetativni oblici mikroba umiru, dok se sporni oblici čuvaju. U roku od jednog dana, spore uspevaju da proklijaju i pređu u vegetativne forme, koje umiru drugog dana sterilizacije. Pošto je moguće da neke spore nisu imale vremena da proklijaju, materijal se čuva još 24 sata, a zatim se vrši treća sterilizacija. Sterilizacija tekućom parom u Koch aparatu nije potrebna posebna kontrola, budući da je sterilnost pripremljenih hranljivih podloga pokazatelj ispravnog rada uređaja. Također možete sterilizirati tekućom parom u autoklavu sa odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom.

Kontrolna pitanja

1. Koje hranljive podloge se sterilišu parom?

2. Šta je sterilizator i kako radi?

3. Zašto treba koristiti destilovanu vodu pri sterilizaciji prokuvavanjem?

4. Opišite strukturu i način rada autoklava.

5. Šta se steriliše u autoklavu?

6. Šta služi kao kontrola za pravilnu sterilizaciju tokom autoklaviranja?

7. Šta je sterilizacija protočnom parom?

8. Opišite strukturu Kochovog aparata.

9. Koja je svrha frakcione sterilizacije?

Vježbajte

Popunite formular.

Frakciona sterilizacija se takođe može izvesti u Koch koagulansu.

Kochov koagulant se koristi za koagulaciju sirutke i podloge za uzgoj jaja, a istovremeno sa zbijanjem podloge vrši se i sterilizacija.

Kochov koagulant je ravna metalna kutija sa dvostrukim zidovima prekrivena spolja termoizolacioni materijal. Voda se ulijeva u prostor između zidova kroz poseban otvor koji se nalazi u gornjem dijelu vanjskog zida. Rupa se zatvara čepom u koji je umetnut termometar. Uređaj je zatvoren sa dva poklopca: staklenim i metalnim. Kroz stakleni poklopac možete pratiti proces koagulacije. Epruvete sa podlogom postavljene su na dno koagulatora u nagnutom položaju.

Koagulator se zagrijava plinom ili električnom energijom. Podloge se sterilišu jednom na temperaturi od 90°C u trajanju od 1 sata ili frakciono - 3 dana za redom na 80°C u trajanju od 1 sata.

Tindalizacija* - frakcijska sterilizacija na niskim temperaturama - koristi se za tvari koje se lako uništavaju i denaturiraju na temperaturi od 60 ° C (na primjer, proteinske tekućine). Materijal koji se sterilizira zagrijava se u vodenoj kupelji ili u posebnim uređajima s termostatima na temperaturi od 56-58 ° C sat vremena 5 dana za redom.

* (Metoda sterilizacije je nazvana po Tyndallu, koji ju je predložio.)

Pasterizacija- sterilizacija na 65-70°C u trajanju od 1 sata, koju je predložio Pasteur za uništavanje oblika mikroba bez spora. Pasteriziraju se mlijeko, vino, pivo, voćni sokovi i drugi proizvodi. Mlijeko se pasterizira radi uklanjanja mliječne kiseline i patogenih bakterija (brucela, mikobakterija tuberkuloze, šigela, salmonela, stafilokok itd.). Prilikom pasterizacije piva, voćnih sokova i vina umiru mikroorganizmi koji izazivaju različite vrste fermentacije. Pasterizovanu hranu najbolje je čuvati u frižideru.

Kontrolna pitanja

1. Koja je svrha i struktura Koch koagulatora?

2. Koje su metode sterilizacije u mašini za zgrušavanje?

3. Šta je tindalizacija?

4. Šta je pasterizacija?

Sterilizacija ultraljubičasto zračenje

Sterilizacija UV zracima se vrši korišćenjem specijalne instalacije- baktericidne lampe. UV zraci imaju visoko antimikrobno djelovanje i mogu uzrokovati smrt ne samo vegetativnih stanica, već i spora. UV zračenje se koristi za sterilizaciju vazduha u bolnicama, operacionim salama, dečijim ustanovama itd. U mikrobiološkoj laboratoriji kutija se pre rada tretira UV zracima.

Kontrolna pitanja

1. Koja svojstva imaju ultraljubičaste zrake?

2. U kojim slučajevima se koristi sterilizacija ultraljubičastim zračenjem?

Mehanička sterilizacija pomoću bakterijskih filtera

Filtraciona sterilizacija se koristi u slučajevima kada se predmeti koji se sterilišu menjaju zagrevanjem. Filtracija se vrši pomoću bakterijskih filtera izrađenih od različitih finoporoznih materijala. Pore filtera moraju biti dovoljno male (do 1 mikron) da osiguraju mehaničko zadržavanje bakterija, pa neki autori filtraciju nazivaju mehaničke metode sterilizacija.

Metoda filtracije se koristi za sterilizaciju hranjivih podloga koje sadrže proteine, serum i neke antibiotike, kao i za odvajanje bakterija od virusa, faga i egzotoksina.

U mikrobiološkoj praksi koriste se Seitz azbestni filteri, membranski filteri i Chamberlant i Berkefeld filteri (svijeće).

Seitz filteri su diskovi napravljeni od mješavine azbesta i celuloze. Njihova debljina je 3-5 mm, prečnik 35-140 mm. Domaća industrija proizvodi filtere dvije marke: “F” (filtriranje) - zadržava suspendirane čestice, ali propušta bakterije; "SF" (sterilizacija) - sa manjim porama, zadržava bakterije, ali propušta viruse. Zgužvane azbestne ploče, kao i ploče sa lomovima i pukotinama, neprikladne su za rad.

Membranski filteri su napravljeni od nitroceluloze. Oni su diskovi bijela Debljine 0,1 mm i prečnika 35 mm. Ovisno o veličini pora, označeni su brojevima 1, 2, 3, 4 i 5 (Tablica 3).

Za sterilizaciju je najpogodniji filter broj 1. Osim navedenih, oni proizvode i tzv. predfilter, dizajniran da oslobodi filtriranu tečnost od krupnih čestica koje se nalaze u njoj.

Chamberlant i Berkefeld filteri (svijeće) su šuplji cilindri, zatvoreni na jednom kraju. Chamberlant svijeće su napravljene od kaolina pomiješanog s pijeskom i kvarcom. Standardizovani su po veličini pora i označeni kao L 1, L 2, L 3 ... L 13. Berkefeld filteri (svijeće) pripremaju se od tla infuzora, prema veličini njihovih pora označeni su V, N, W, što odgovara promjeru pora od 3-4, 4-7, 8-12 mikrona.

Rad s bakterijskim filterima izvodi se na sljedeći način. Filter mora biti pričvršćen u posebnom držaču, koji se ubacuje u prijemnik filtera. Prijemnik je obično Bunsenova boca. Držači, najčešće od nerđajućeg čelika, sastoje se iz dva dela: gornjeg, u obliku cilindra bez dna, i donjeg, nosećeg dela koji se završava cevi. Seitz filteri sa grubom površinom prema gore postavljeni su na metalnu mrežicu i čvrsto stegnuti vijcima između gornjeg i dnu držač. Montirani filter je pričvršćen gumenim čepom umetnutim u grlo Bunsenove tikvice. Pamučni štapić se ubacuje u izlaznu cijev tikvice, koja je povezana sa vakuum pumpom. Pripremljena instalacija se umotava u papir i steriliše u autoklavu pod pritiskom od 1 atm 20-30 minuta. Cijeli sklopljeni uređaj naziva se i Seitz filter (slika 13).

Neposredno prije filtracije, izlazni kraj Bunsenove tikvice spojen je gumenom cijevi na pumpu za ulje ili vodu. Spojevi različitih dijelova ispunjeni su parafinom kako bi se stvorilo čvrsto zaptivanje. Filtrirana tečnost se sipa u cilindar aparata i pumpa se uključuje, stvarajući vakuum u prijemniku. Kao rezultat nastale razlike tlaka, filtrirana tekućina prolazi kroz pore filtera u prijemnik, a mikrobi ostaju na površini filtera.

Prije upotrebe, membranski filteri se steriliziraju kuhanjem u destilovanoj vodi. Da se filteri ne bi savijali, prvo se stavljaju u destilovanu vodu, zagrijavaju na temperaturu od 50-60 °C i kuhaju na laganoj vatri 30 minuta, mijenjajući vodu 2-3 puta. Držač filtera i prijemnik se unapred sterilišu, a uređaj se montira u aseptičnim uslovima. Da biste izbjegli kidanje membranskog filtera na metalnoj mreži, ispod njega stavite šalice sterilnog filter papira. Zatim, sterilnom pincetom sa glatkim vrhovima, izvadite membranski filter iz sterilizatora i stavite ga na potpornu rešetku sa sjajnom površinom nadole.

Sveće (Chamberlant) sterilisane u autoklavu povezuju se preko gumene cevi sa prijemnikom i spuštaju u posudu (obično cilindar) sa filtriranom tečnošću. Filtracija se vrši pomoću vakuum pumpe. Sterilni filtrat ulazi u prijemnik, a bakterije se zadržavaju u porama svijeće.

Membranski i azbestni filteri su dizajnirani za jednokratnu upotrebu. Nakon upotrebe, svijeće se kuhaju u vodi iz slavine, a zatim kalciniraju u muflnoj peći.

Prije sljedeće upotrebe svijeće se provjeravaju na integritet. Svijeća se spušta u posudu s vodom i kroz nju se propušta zrak. Ako se na površini svijeće pojave mjehurići zraka, to znači da su na svijeći nastale pukotine i da je neupotrebljiva.

Kontrolna pitanja

1. Koja je metoda sterilizacije filtera? Šta se steriliše ovom metodom?

2. Koje bakterijske filtere poznajete? Kako je instaliran uređaj za filtriranje, koji uslovi se moraju poštovati?

Hemijske metode

Ova vrsta sterilizacije se koristi u ograničenoj mjeri, a služi uglavnom za sprječavanje bakterijske kontaminacije podloga za uzgoj i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma).

Supstance kao što su hloroform, toluen i eter najčešće se dodaju u hranljive podloge. Ako je potrebno osloboditi medij od ovih konzervansa, zagrijava se u vodenom kupatilu na 56°C (konzervansi isparavaju).

Za očuvanje vakcina i seruma koriste se mertiolat, borna kiselina, formaldehid itd.

Biološka sterilizacija

Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika. Ova metoda se koristi za uzgoj virusa.

Kontrolna pitanja

1. Šta je hemijska sterilizacija i kada se koristi?

2. Šta je biološka sterilizacija?

Glavne metode sterilizacije prikazane su u tabeli. 4.

1 (Sterilizacija je nepotpuna: spore ostaju u steriliziranom materijalu.)

2 (Sterilizacija je nepotpuna: virusi ostaju u steriliziranom materijalu.)

Dezinfekcija

U mikrobiološkoj praksi koriste se različita dezinfekciona sredstva: 3-5% rastvori fenola, 5-10% rastvori lizola, 1-5% rastvori hloramina, 3-6% rastvori vodonik peroksida, 1-5% rastvori formaldehida, rastvori živinog hlorida u razblaženju 1: 1000 (0,1%), 70° alkohol, itd.

Potrošeni patološki materijal (gnoj, izmet, urin, sputum, krv, likvor) se dezinfikuje prije odvodnjavanja u kanalizaciju. Dezinfekcija se vrši suhim izbjeljivačem ili 3-5% otopinom kloramina.

Pipete (gradirane i Pasteur), staklene lopatice, stakalca i pokrovna stakla kontaminirana patološkim materijalom ili kulturama mikroorganizama potapaju se u staklene posude s 3% otopinom fenola ili vodikovog peroksida na jedan dan.

Nakon završetka rada sa infektivnim materijalom, laboratorijski tehničar mora ga tretirati dezinfekcijskim rastvorom. radno mjesto i ruke. Površina radnog stola se obriše komadom vate navlaženom 3% otopinom fenola. Ruke se dezinfikuju 1% rastvorom hloramina. Da biste to učinili, koristite vatu ili jastučić od gaze navlažite dezinfekcijskim rastvorom i obrišite lijevu ruku, zatim desnu, a zatim operite ruke toplom vodom i sapunom.

Izbor dezinficijensa, njegova koncentracija i trajanje ekspozicije (izlaganja) zavise od bioloških svojstava mikroba i od sredine u kojoj će dezinficijens doći u kontakt sa patogenim mikroorganizmima. Na primjer, živin klorid, fenol i alkoholi nisu pogodni za dezinfekciju proteinskih supstrata (gnoj, krv, sputum), jer pod njihovim utjecajem dolazi do koagulacije proteina, a koagulirani protein štiti mikroorganizme od djelovanja dezinficijensa.

Prilikom dezinfekcije materijala zaraženog spornim oblicima mikroorganizama koristi se 5% otopina kloramina, 1-2,5% otopine aktiviranog kloramina, 5-10% otopine formalina i druge tvari.

Dezinfekcija, koja se provodi tokom dana tokom rada, naziva se tekućom, a na kraju rada - završnom.

Sredstva za dezinfekciju i uputstva za pripremu radnih rastvora od njih. Klorid vapna je bijeli, grudasti prah sa oštrim mirisom hlora; ne rastvara se u potpunosti u vodi. Baktericidno dejstvo zavisi od sadržaja aktivnog hlora, čija se količina kreće od 28 do 36%. Klor koji sadrži manje od 25% aktivnog hlora nije pogodan za dezinfekciju.

Ako se nepravilno skladišti, izbjeljivač se raspada i gubi dio svog aktivnog hlora. Razgradnju podstiču toplota, vlaga i sunčeva svetlost, pa izbeljivač treba čuvati na suvom, tamnom mestu, u dobro zatvorenoj posudi.

Suhi izbjeljivač se koristi za dezinfekciju ljudskih i životinjskih izlučevina (u količini od 200 g na 1 litru izmeta i 10 g na 1 litru urina).

Priprema originalnog 10% bistrenog rastvora izbeljivača. Uzmite 1 kg suhog izbjeljivača, stavite ga u emajliranu kantu i sameljite. Zatim sipajte hladnom vodom do zapremine od 10 litara, dobro promešati, zatvoriti poklopcem i ostaviti jedan dan na hladnom mestu. Nakon toga, dobivena 10% pročišćena otopina pažljivo se ocijedi i filtrira kroz nekoliko slojeva gaze ili filtrira kroz gustu krpu. Čuvati u tamnim staklenim bocama, zatvorenim drvenim čepom, na hladnom mestu ne duže od 10 dana. Radni rastvori potrebne koncentracije pripremaju se iz osnovnog rastvora neposredno pre upotrebe. Količina baznog rastvora potrebna za pripremu 0,2-10% bistrenih rastvora izbeljivača data je u tabeli. 5.

Koncentracija pročišćenih otopina izbjeljivača od 0,2 do 10% odabire se ovisno o prirodi predmeta koji se dezinficira i otpornosti patogena.

Kloramin je kristalna supstanca bijele ili žućkaste boje, koja sadrži 24-28% aktivnog hlora. Dobro se otapa u vodi sobne temperature, tako da se rastvori pripremaju neposredno pre dezinfekcije. Koristite 0,2-10% rastvore hloramina. Odnos između procentualne koncentracije otopine i količine kloramina u gramima na 1 i 10 litara dat je u tabeli. 6.

Otopiti hloramin u staklu ili emajlirano posuđe. Prilikom skladištenja otopina kloramina u posudama od tamnog stakla sa brušenim čepom, njihova aktivnost traje do 15 dana.

Aktivirani hloramin. Dezinfekciona svojstva hloramina se poboljšavaju dodavanjem aktivatora u omjeru 1:1 ili 1:2. Kao aktivator koriste se amonijum jedinjenja - amonijum hlorid, sulfat, amonijum nitrat. Aktivirani hloramin se koristi u koncentracijama od 0,5, 1 i 2,5%. Pripremaju se neposredno prije upotrebe. Hloramin i amonijum so se mere odvojeno. Prvo se hloramin otopi u vodi, a zatim se dodaje aktivator.

Prednost aktiviranih otopina kloramina u odnosu na konvencionalne je u tome što dodavanje aktivatora ubrzava oslobađanje aktivnog klora. Stoga lijek ima štetan učinak ne samo na vegetativne oblike mikroorganizama, već i na njihove spore. Aktivirani hloramin se koristi u nižim koncentracijama i uz manju izloženost.

Fenol (karbolna kiselina) je bezbojni kristal u obliku igle sa oštrim, karakterističnim mirisom. Kada su izloženi svjetlosti, zraku i vlazi, kristali poprimaju grimizno-crvenu boju. Čuvajte u zatvorene banke od tamnog stakla i na mestu zaštićenom od svetlosti.

Fenol je rastvorljiv u vodi, alkoholu, etru i masnim uljima. Posjeduje veliku higroskopnost, upija vlagu iz okoline i postaje tečna. Tečna karbonska kiselina sadrži 90% kristalnog fenola i 10% vode.

Koristite 3-5% vodene otopine karbonske kiseline pripremljene od kristalnog fenola i tekuće karbonske kiseline prema shemi datoj u tabeli. 7. Aktivnost fenola se povećava kada je otopljen u njemu vruća voda(40-50°C).

Pažnja! Kristalni fenol ili tečna karbonska kiselina, ako dospije na kožu, može izazvati iritaciju, au visokim koncentracijama - teške opekotine. Stoga se sa karbonskom kiselinom mora postupati s velikom pažnjom. Prilikom pripreme rastvora treba nositi gumene rukavice ili kao poslednje sredstvo Podmažite ruke vazelinom.

Ako vam karbolna kiselina dospije na kožu, odmah je isperite toplom vodom i sapunom ili 40° etil alkoholom.

Bilješka. Za pripremu dezinfekcijskih otopina fenola pogodnije je i sigurnije koristiti tečnu karbonsku kiselinu.

Kontrolna pitanja

1. Koja dezinfekciona sredstva se koriste u mikrobiološkoj praksi?

2. Opišite izgled i osnovna svojstva izbjeljivača, kloramina, fenola.

3. Koje otopine dezinficijensa se koriste za dezinfekciju materijala zaraženog spornim oblicima mikroorganizama?

Vježbajte

Pripremite 2 litre 5% radne otopine bistrenog izbjeljivača; 500 ml 3% rastvora hloramina, 300 ml 1% rastvora aktiviranog hloramina.

Pažnja! Prije nego počnete pripremati rješenja, napravite proračune.

Termostat– uređaj za održavanje stalne temperature – koristi se za uzgoj kultura mikroorganizama. To je ormar (slika 1) u kojem se dugo održava određena temperatura. Optimalna temperatura za razmnožavanje mnogih mikroorganizama je 37 ºS. Termostati su dostupni u tipovima suvog zraka i vode.

Ormar za sušenje (Pasterova pećnica) koristi se za sterilizaciju suvom toplotom posuđa, opreme i suvih materijala, kao što su skrob, kreda (slika 2). Materijal koji se steriliše prethodno se umota u papir i stavi u ormarić tako da ne dodiruje zidove. Sterilizacija se vrši na temperaturi od 160 ºS dva sata. Ne preporučuje se podizanje temperature iznad 180 ºS: pamučni čepovi i papir počinju da se kvare (posmeđaju, postaju lomljivi). Sterilizovani materijal se uklanja nakon što se kabinet isključi i ohladi, po mogućnosti kada je temperatura u kabinetu jednaka sobnoj temperaturi.

Aparat za brojanje kolonija(Slika 3) - poluautomatski brojač opremljen električnom olovkom sa opružni uređaj, dizajniran za brojanje kolonija bakterija u Petrijevim zdjelicama. Kup
Petri sa kolonijama bakterija stavlja se naopako na staklo za skeniranje. Lagani pritisak električne olovke na područje dna Petrijeve posude koji odgovara položaju kolonije ostavlja trag na staklu. U tom slučaju, držač se podiže, krug se zatvara, a očitanja brojila se povećavaju za jedan. Broj kolonija bakterija se računa izračunavanjem razlike u očitanjima brojača impulsa prije početka brojanja i nakon njegovog završetka.

Autoklav(Slika 4) je aparat sa debelim zidovima dizajniran za sterilizaciju posuđa i medija za uzgoj parom pod pritiskom. Ovo je zatvoreni kotao sa dvostrukim metalnim stijenkama i poklopcem. Prostor između zidova (komora vodene pare) je ispunjen vodom. Enterijer(komora za sterilizaciju) opremljena je manometrom, sigurnosnim ventilima i slavinom za odvod vode i pare. Da bi se stvorilo čvrsto zaptivanje, autoklav je čvrsto zatvoren poklopcem s gumenom brtvom. Koristi se za sterilizaciju medija za kulturu pod pritiskom od 0,5 do 1,0 MPa u trajanju od 20...30 minuta.

1 – tijelo; 2 – termometar; 1 – poklopac; 2 – tijelo;

3 – vrata; 4 – potenciometar; 3 – menjač; 4 – upravljačka jedinica;

5 – prekidač; 6 – lampa; 5 – oznaka; 6 – termometar

7 – otvori za ventilaciju

Slika 1 – Termostat Slika 2 – Ormar za sušenje

1 – sto za Petrijevu posudu; 2 – olovka sa opružnim uređajem;

3 – pokazivač brojača; 4 – prekidač za uključivanje brojača impulsa; 5 – prekidač za uključivanje lampe za osvetljenje merača

Slika 3 - Uređaj za brojanje kolonija mikroorganizama

Sterilizacija- neplodnost; uništavanje patogenih i nepatogenih mikroorganizama u vegetativnim i spornim oblicima u bilo kojem materijalu.

Priprema posuđa za sterilizaciju. Laboratorijsko stakleno posuđe mora biti čisto oprano i sterilizirano. Za pranje koristite sapun ili hemijske rastvore deterdženti. Nova jela se prethodno kuvaju u 1-2% rastvoru hlorovodonične kiseline kako bi se izbeglo naknadno ispiranje stakla. Posuđe oprano u tekućoj vodi ispire se destilovanom vodom i suši.

Bakteriološke epruvete. Konične, mat tikvice zatvorene su čepovima od pamučne gaze, koji se sastoje od čvrsto uvijenih smotana vate, prekrivenih slojem gaze. Metalni čepovi u obliku vanjskih čepova također su razvijeni za bakteriološke epruvete. Treba uzeti u obzir da sterilizacija pamučnih čepova na visokim temperaturama dovodi do oslobađanja tvari iz vate koje inhibiraju rast nekih osjetljivih bakterija, kao što je Brucella.

Kada postavljate pipete, umetnite pamučni štapić u gornji kraj. Pasteurove pipete moraju imati zatvorenu kapilaru. Svaka mjerna pipeta je umotana u dugačku traku papira širine 4-5 cm, počevši od izljeva, spiralno cijelom dužinom. Pasterove pipete su umotane u papir, po 10-20 komada, epruvete - po 15-20 komada. Sve vrste pipeta prije i poslije sterilizacije bolje je čuvati u posebnim metalnim kutijama. Čepovi na tikvicama su dodatno prekriveni papirnim poklopcima.

Prije sterilizacije, čiste, sastavljene Petrijeve zdjelice se umotaju u papir, po 3 do 4 komada. Nakon sterilizacije, papir štiti sterilno stakleno posuđe od kontaminacije mikroflorom.

Pre sterilizacije posuđe se stavlja u sušač ne previše čvrsto kako bi se obezbedila cirkulacija vazduha, a vodi se računa da temperatura ne pređe 180°C, jer će se na višoj temperaturi papir i vata ugljenisati. Nakon što je sterilizacija završena, kabinet za sušenje se ne otvara do tada. Sve dok temperatura u njemu ne padne na 70-80°C, jer oštar pad temperature mogu uzrokovati lomljenje stakla.

Ako su posude namijenjene za sterilizaciju hranjivih podloga u njima autoklaviranjem pod pritiskom od najmanje 1 atm, tada nisu prethodno sterilizirane. Prilikom sterilizacije medija tekućom parom ili u autoklavu pod pritiskom ne većim od 0,5 atm. Moraju se koristiti sterilne posude.

Sterilizacija suvim zagrejanim vazduhom. Metoda se koristi za sterilizaciju čistog staklenog posuđa. U tu svrhu koristi se Pasteur pećnica - poseban ormar za sušenje s dvostrukim zidovima. Vanjska strana je obložena materijalom otpornim na toplinu. Na vrhu se nalazi termometar. Između obloge otporne na toplinu i unutrašnjeg dijela metalno telo Na dnu je postavljen automatski električni grijač. Kada je ormarić za sušenje uključen, zrak u njemu se zagrijava. Kada se postigne podešena temperatura, bilježi se vrijeme početka sterilizacije. Režim sterilizacije: na temperaturi od 155-160°C - ekspozicija 2 sata, na 165-170°C - 1-1,5 sati, na 180°C - 1 sat.Po isteku vremena sterilizacije zagrevanje se prekida.

Autoklaviranje. Ovo je parna sterilizacija pod pritiskom u kombinaciji sa visokom temperaturom specijalni aparati- autoklav. Kada zasićena para naiđe na hladniji predmet, para se kondenzuje u vodu, oslobađajući veliku količinu toplote. Osim toga, smanjuje se volumen pare, što olakšava njeno prodiranje u unutrašnje dijelove materijala koji se sterilizira. Preduvjet je dotok istinski zasićene pare, tako da njen kontakt sa hladnim predmetom dovodi do trenutne kondenzacije i zagrijavanja. Industrija proizvodi vertikalne i horizontalne autoklave.

Vertikalni autoklav je cilindrični metalni kotao sa dvostrukim stijenkama, zatvoren poklopcem. Voda se ulijeva između zidova kroz posebnu slavinu s lijevkom do određenog nivoa. Unutrašnja stijenka kotla je opremljena rupama u gornjem dijelu i slavinom u donjem dijelu kroz koju, kada se voda zagrije, para istiskuje zrak iz kotla. Na autoklav se postavlja metalni zaštitni okvir, a između njega i samog autoklava mora biti slobodan prostor. Autoklav se zagrijava spajanjem na električnu mrežu.

Autoklav se puni materijalom koji se steriliše, zatvaraju se poklopac i slavina kroz koju se točila voda, a donja slavina se privremeno ostavlja otvorena. Zagrijana voda između zidova autoklava ključa, nastala para se diže prema gore i prolazi kroz gornje rupe unutrašnjeg zida u kotao, istiskujući zrak kroz donju otvorenu slavinu. Kada se sav zrak istisne i para počne izlaziti ravnomjerno, donji ventil se zatvara. Kao rezultat, povećava se pritisak pare unutar autoklava. Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada pritisak dostigne zadatu vrijednost (prema mjeraču pritiska). Toplina se podešava tokom sterilizacije, održavajući pritisak pare na istom nivou. Ako se pritisak unutar autoklava pretjerano poveća, postoji sigurnosni ventil kroz koji višak para automatski izlazi.

Kako pritisak pare raste, temperatura u autoklavu se povećava u skladu s tim.

Manometar pokazuje pritisak pare bez uzimanja u obzir okoline atmosferski pritisak(760 mmHg). Nakon isteka vremena sterilizacije, autoklav se isključuje. Nakon hlađenja, kada je očitavanje manometra nula, otvorite ventil da ispustite paru.

Horizontalni autoklav se razlikuje od vertikalnog autoklava po dizajnu, ali njegov princip rada je isti.

virusološka sterilizacija patološke životinje

Uzorci obrazaca koji se popunjavaju prilikom slanja patološkog materijala u laboratoriju

Sterilizacija suvom toplotom ili vrelim vazduhom vrši se u Pasteur pećnicama (sušare). Pasteur pećnica je dvoslojni ormarić od materijala otpornih na toplinu - metala i azbesta. Zagrijte ormar pomoću plinskih gorionika ili električnih uređaja za grijanje. Električno grijani ormari opremljeni su regulatorima koji osiguravaju potrebnu temperaturu. Za kontrolu temperature, termometar je umetnut u otvor na gornjem zidu ormarića.

Suva toplota se koristi za sterilizaciju laboratorijskog staklenog posuđa. Posuđe pripremljeno za sterilizaciju se lagano stavlja u pećnicu kako bi se osiguralo jednolično i pouzdano zagrijavanje materijala koji se sterilizira. Čvrsto zatvorite vrata ormarića, uključite uređaj za grijanje, zagrijte temperaturu na 160-165 °C i sterilizirajte na ovoj temperaturi 1 sat. Na kraju sterilizacije isključite grijanje, ali ne otvarajte vrata ormarića do pećnica se ohladila; U suprotnom, hladni zrak koji ulazi u ormar može uzrokovati pukotine na vrućem posuđu.

Sterilizacija u Pasteur pećnici može se vršiti na različitim temperaturama i izloženostima (vrijeme sterilizacije) (tabela 1).

Tabela 1. Režim sterilizacije

Da biste odredili temperaturu unutar Pasteurove pećnice, možete koristiti saharozu ili granulirani šećer, koji se karamelizira na temperaturi od 165-170 ° C.

Priprema laboratorijskog staklenog posuđa za sterilizaciju u Pasteur pećnici. Prije sterilizacije, laboratorijsko stakleno posuđe (Petrijeve zdjelice, graduirane i Pasteurove pipete, bočice, tikvice, epruvete) mora se dobro oprati, osušiti i umotati u papir, jer se u suprotnom nakon sterilizacije može ponovo kontaminirati zračnim bakterijama.

Petrijeve zdjelice se umotaju u papir jedan ili više komada odjednom ili se stavljaju u posebne metalne kutije.

Bilješka. Ako je gradacija na pipetama slabo vidljiva, ona se vraća prije sterilizacije. Uljana boja se nanosi na pipetu i, ne dopuštajući da se boja osuši, u nju se krpom utrlja prah barij sulfata. Nakon toga krpom uklonite višak boje, koja ostaje samo u zarezima za diplomiranje. Ovako tretirane pipete treba isprati.

Bilješka. Na visokim temperaturama papir u koji su umotane čašice i pipete i vata požute, pa čak mogu i da se ugljene, pa svaki novi tip papira koji dobije u laboratoriju treba ispitati na prihvaćenim temperaturnim uslovima.

Kontrolna pitanja

1. Šta se podrazumijeva pod pojmom sterilizacija?

2. Kako se vrši sterilizacija?

3. Šta se steriliše kalcinacijom na vatri?

4. Opišite strukturu i način rada Pasteurove peći.

5. Šta se steriliše u Pasteur pećnici?

6. Kako se stakleno posuđe priprema za sterilizaciju?

7. Zašto se hranljivi mediji i gumeni predmeti ne mogu sterilisati u Pasteur pećnici?

Vježbajte

Pripremite Petrijeve zdjelice, graduirane pipete, Pasteurove pipete, epruvete, tikvice i bočice za sterilizaciju.

1. Flambing(od lat. flamma - plamen i fr. flamb é - burn) - sterilizacija kalcinacijom malih metalnih ili staklenih predmeta u plamenu. Na ovaj način se sterilišu bakteriološke petlje, metalne pincete, staklene lopatice i epruvete, staklene pločice itd. Temperatura plamena je oko 1000ºC. Kada se kalciniraju, svi mikroorganizmi (vegetativni i sporni oblici) sagorevaju. Ovo je brza i pouzdana metoda sterilizacije.

2. Kipuće. To je jedna od najjednostavnijih metoda sterilizacije. Izvodi se u sterilizatoru - metalnoj pravougaonoj kutiji sa poklopcem i mrežicom na dnu za stavljanje sterilisanih predmeta. U to ulijte vodu i zagrijte do ključanja (na struju ili na vatri). Kuvanje može trajati od 15-30 minuta do 2 sata na temperaturi od oko 100 ºS. Sterilizirajte male metalne ili staklene predmete - špriceve, igle, staklene cijevi itd. U tom slučaju umiru vegetativni oblici mikroorganizama i neke spore. Takođe se praktikuje da se materijal koji se steriliše opeče kipućom vodom.

3. Sterilizacija suvom toplotom. Proizvedeno toplim zrakom u Pasteur pećnici ili pećnici. Pasteur pećnica je dvoslojni ormarić sa vanjske strane obložen azbestom radi toplinske izolacije. Unutar ormarića postoje metalne police sa rupama na koje se stavlja materijal koji se steriliše. Električno grijanje. Sterilizacija se vrši na temperaturi od 160-180 ºS u trajanju od 1-2 sata od postizanja ovih temperatura (kontrolisano termometrom). Suva toplota se koristi za sterilizaciju uglavnom staklenog posuđa - Petrijevih zdjela, pipeta, lopatica (umotanih u papir), kao i epruveta i tikvica. Ova tehnika je pouzdana - nesporni i sporni oblici mikroorganizama umiru. Umotan u papir i steriliziran, materijal se može čuvati.

4. Sterilizacija protočnom parom. Provedeno vruće vlažan vazduh u Koch aparatu. Koch aparat (bojler) je metalni cilindar, koji može biti na nogama i obložen linoleumom. U aparat se ulije toliko vode da ne dođe do ivice na koju se postavlja metalni krug sa rupama i na njega se stavlja materijal koji se steriliše. Aparat je dobro zatvoren konusnim poklopcem sa rupom u sredini za izlazak pare i zagreva se na vatri. Kada voda proključa, vrela vodena para temperature oko 100 ºS će u jakom mlazu „strujati“ iz otvora na poklopcu. Od ovog trenutka se bilježi vrijeme početka sterilizacije. Sterilizacija protočnom parom traje od 45 minuta do 1,5 sat, u zavisnosti od količine materijala koji se steriliše. Sterilizirajte hranljive podloge koje se ne mogu zagrijati iznad 100 ºS, na primjer, MPG (na temperaturama iznad 100 ºS ukapljuje se i ne očvršćava). Ova metoda sterilizacije nije sasvim pouzdana - samo vegetativni oblici mikroorganizama potpuno umiru, ali se spore čuvaju. Da bi se postigla potpuna sterilizacija medija u Koch aparatu, koristi se frakciona sterilizacija.

5. Sterilizacija parom pod pritiskom (autoklaviranje). Izvodi se sa zasićenom vodenom parom u autoklavu. Autoklav dolazi u različitim dizajnima. Vertikalni autoklav je masivni kotao sa dvostrukim zidovima, sa vanjske strane okružen metalnim kućištem, sa teškim poklopcem na šarkama koji je čvrsto pričvršćen za kotao. Na dnu kotla nalazi se lijevak i slavina kroz koju se voda ulijeva u slobodni prostor između unutrašnjeg kotla i kućišta. Materijal koji se steriliše stavlja se na dno kotla, poklopac se čvrsto zašrafi i uključuje električno grijanje. Kada voda proključa, para prolazi u unutrašnji kotao. Pritisak u autoklavu raste, a istovremeno raste i temperatura. Kada manometar pokaže da je pritisak u kotlu dostigao zadatu vrednost, označite vreme početka sterilizacije. Pritisak se održava na određenom nivou pomoću sigurnosnog ventila.

Obično se u laboratorijskoj praksi sterilizacija pod pritiskom izvodi na 1,5-2 atm i temperaturi od oko 115-120 ºS za

20-30 min. Nakon isteka vremena sterilizacije, zagrijavanje se zaustavlja, ventil za paru se otvara i para se ispušta. Hranljivi mediji MPB, MPA, stakleno posuđe sa vodom sterilišu se parom pod pritiskom. oblačenje, hirurški instrumenti itd. Autoklaviranje je brza i pouzdana metoda sterilizacije, koja ubija sve oblike mikroorganizama, čak i najotpornije spore.

6. Pasterizacija. Ova metoda parcijalne sterilizacije nazvana je po francuskom naučniku L. Pasteuru koji ju je predložio. Metoda je da se tečnost koja se sipa u sterilnu posudu zagreva u vodenom kupatilu na temperaturi od 60-90 ºS za

10-30 min. Pogodno za tečne medije koji mijenjaju svoje fizičko-hemijske karakteristike na visokim temperaturama. Pasterizuju mlijeko, vrhnje, vino, pivo, sokove itd. Pri tome se čuvaju vitamini i ukus proizvoda. Pasterizirani proizvodi ne mogu se čuvati duže vrijeme, jer ovom metodom sterilizacije umiru samo vegetativni oblici mikroorganizama, dok spore ostaju. U laboratorijskoj praksi ova metoda se uglavnom koristi za odvajanje vrsta koje stvaraju spore od onih koje ne stvaraju spore.

7. Frakciona sterilizacija. Zasniva se na obradi materijala koji se steriliše u nekoliko faza. Frakcijski može biti kuhanje ili sterilizacija tekućom parom u Koch aparatu. Obično se sterilizacija provodi 3 dana, 30 minuta dnevno, na jedan od navedenih metoda, a u pauzama se medij ostavlja na sobnoj temperaturi. To se radi kako bi se izazvalo rast spora u vegetativne oblike i njihovo uništavanje tokom naknadnih tretmana, što povećava pouzdanost ovih tehnika.

8. Tindalizacija. Ovo je vrsta frakcione sterilizacije (frakciona pasterizacija). Tehnika je dobila ime po engleskom naučniku D. Tyndallu koji ju je predložio. Izvodi se u vodenom kupatilu na temperaturi od 56-58 ºS u trajanju od 1 sata, ponavlja se 5-7 puta nakon 24 sata.U intervalima između zagrijavanja materijal se drži na sobnoj temperaturi. Tindalizacija se vrši na hranljivim podlogama siromašnim mikroorganizmima, a sadrže i supstance koje se lako uništavaju i denaturiraju na temperaturama iznad 60 ºC (proteini, vitamini). To su krvni serum, jaja, itd. Kao rezultat tindalizacije postiže se potpuno uništenje mikroorganizama.