Visokotemperaturna sterilizacija. Sterilizacija laboratorijskog staklenog posuđa. Metoda hemijske sterilizacije

Sterilizacija je predstavljena fizičkim, hemijskim, mehaničkim i biološkim metodama i raznim metodama. Izvodljivost upotrebe određene metode sterilizacije i njenih metoda zavisi od karakteristika materijala koji se steriliše, njegovih fizičkih i hemijskih svojstava. Trajanje sterilizacije zavisi od predmeta koji se steriliše, sredstva za sterilizaciju i njegove doze, temperature i vlažnosti okoline.

Metoda fizičke sterilizacije Metode fizičke sterilizacije uključuju sušenje, spaljivanje i kalcinaciju, kuhanje, pasterizaciju i tindizaciju, vrući zrak (suha toplota), ultrazvuk, ultraljubičasto i radioaktivno zračenje, visokofrekventna struja, sunčeva svjetlost. Najčešći način sterilizacije predmeta koji mogu biti izloženi visokim temperaturama je sterilizacija vatrom, vrućim zrakom i zasićenom parom pod pritiskom. Vatra se koristi za spaljivanje zaraženih predmeta koji nemaju nikakvu vrijednost (nepotrebni papiri, stare tapete, krpe, smeće), za dezinfekciju ispljuvka tuberkuloznih bolesnika, leševa ljudi i životinja uginulih od posebno opasnih infekcija, kao i za spaljivati i kalcinirati razne predmete. Spaljivanje i kalcinacija se široko koriste u mikrobiološkoj praksi za dezinfekciju instrumenata, laboratorijskog i farmaceutskog posuđa. Kalcinacija u plamenu plamenika ili flambiranje je metoda sterilizacije u kojoj se predmet potpuno steriliše, jer vegetativne ćelije, ciste i spore mikroorganizama umiru. Obično se omče, lopatice, pipete, stakalca i pokrovni stakalci, mali instrumenti i drugi kontaminirani predmeti steriliziraju kalcinacijom ako se ne mogu prokuhati. Ne preporučuje se sterilizacija makaza i skalpela zagrijavanjem, jer površina rezanja postaje tupa kada je izložena vatri. Jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda fizičke sterilizacije koja se koristi u medicinskoj praksi je sterilizacija toplim zrakom (suha toplina). Sterilizacija suvom toplotom se vrši u sušarama (Pasterove peći). Suvi vrući zrak ima baktericidno, virusicidno, sporicidno djelovanje i koristi se uglavnom za sterilizaciju staklenih proizvoda (laboratorijsko stakleno posuđe - Petrijeve zdjelice, tikvice, pipete, epruvete i sl.), kao i metalnih proizvoda koji se mogu sterilizirati parom. pod pritiskom. Osim toga, suva toplota se koristi za sterilizaciju predmeta od porculana i toplotno otpornih materija (talk, bijela glina), kao i mineralnih i biljnih ulja, masti, vazelina, lanolina i voska. Najefikasniji način za ovu metodu sterilizacije, koji osigurava smrt vegetativnih oblika i spora, je temperatura od 160 - 180 stepeni u trajanju od 15 minuta. Namirnice, izotonične otopine ili predmete od gume i sintetičkih materijala ne možete sterilizirati suhom toplinom, jer tekućine ključaju i izlijevaju se, a guma i sintetički materijali se tope. Sterilizacija zasićenom parom pod pritiskom je najpouzdanija i najčešće korišćena metoda za sterilizaciju zavoja, vode, nekih lekova, podloge za kulturu, meke opreme, instrumenata, kao i za dezinfekciju otpadnih kontaminiranih materijala. U hirurškoj praksi zavoji, hirurški ogrtači i donji veš za operisanog pacijenta dezinfikuju se parom u autoklavu. Sterilizacija parom pod pritiskom vrši se u posebnim uređajima - autoklavima. Autoklaviranje u potpunosti uništava sve mikroorganizme i spore. Metoda sterilizacije pod pritiskom se zasniva na zagrijavanju materijala zasićenom vodenom parom pod pritiskom iznad atmosferskog. Kombinirano djelovanje visoke temperature i pare čini ovu metodu posebno učinkovitom. U tom slučaju umiru i vegetativne stanice i mikrobne spore. Mikrobne spore umiru u roku od 10 minuta pod uticajem zasićene vodene pare, a vegetativni oblici umiru za 1 do 4 minuta. Visoka baktericidna moć zasićene pare posljedica je činjenice da, pod utjecajem vodene pare pod pritiskom, proteini mikrobne stanice bubre i koaguliraju, uslijed čega mikrobne stanice umiru. Baktericidno dejstvo zasićene vodene pare pojačava se prekomernim pritiskom. Sterilizacija u autoklavu se vrši na različite načine. Dakle, jednostavne hranljive podloge (meso - pepton agar i meso - pepton bujon) se sterilišu 20 minuta na 120 stepeni (1 atm.). Ali ovim načinom rada nemoguće je sterilizirati medije koji sadrže proteine, ugljikohidrate i druge tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem. Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu u autoklavu na 0,5 atm. 10 – 15 minuta ili pare sa parom. Visokom temperaturom možete uništiti najupornije oblike patogenih mikroorganizama (uključujući i one koji stvaraju spore) ne samo na površini predmeta koji se dezinficiraju, već iu njihovoj dubini. To je velika prednost visoke temperature kao pouzdanog sredstva za sterilizaciju. Međutim, neki artikli se pod utjecajem visokih temperatura pokvare i u tim slučajevima potrebno je pribjeći drugim metodama i sredstvima dezinfekcije. Potpuna sterilizacija materijala i predmeta koji ne dozvoljavaju upotrebu visokotemperaturne sterilizacije postiže se ponovljenom sterilizacijom vodenom parom u Koch aparatu na temperaturi koja ne prelazi 100 stepeni. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Svodi se na to da preostali neubijeni sporni oblici mikroba, nakon jednog dana u termostatu na 37 stepeni, klijaju u vegetativne ćelije, do čije smrti dolazi prilikom naknadne sterilizacije ovog predmeta tekućom parom. Tretman tečnom parom izvodi se tri puta po 30-40 minuta. Jednokratno zagrijavanje materijala na temperaturi ispod 100 stepeni poznato je kao pasterizacija. Pasterizaciju je predložio Pasteur i namijenjena je uglavnom uništavanju mikroorganizama koji nisu spori. Pasterizacija se vrši na 60 - 70 stepeni 15 do 30 minuta, na 80 stepeni 10 do 15 minuta. U mikrobiološkoj praksi pasterizacija sjemenski materijalčesto se koristi za izolaciju čistih kultura mikroorganizama koji stvaraju spore i za određivanje sposobnosti mikroorganizama da formiraju spore. Za tekućine koje gube okus i druge vrijedne kvalitete kada su izložene visokim temperaturama (mlijeko, bobičasti i voćni sokovi, pivo, hranljive podloge koje sadrže ugljikohidrate ili ureu, itd.), sterilizacija tekućom parom se vrši na 50 - 60 stepeni u trajanju od 15 - 33333330 minuta ili na 70 - 80 stepeni 5 - 10 minuta. U tom slučaju mikrobi prosječne otpornosti umiru, dok se otporniji mikrobi i spore čuvaju. Frakcijska 5-6-struka sterilizacija na 60 stepeni u trajanju od 1 sata naziva se tindalizacija. Mnogi medicinski proizvodi napravljeni od polimernih materijala, ne podnose sterilizaciju parna metoda prema opšteprihvaćenim režimima. Za mnoge proizvode, zbog karakteristika tekućina koje sadrže (konzervansi, lijekovi i drugi proizvodi), nemoguće je sterilizirati općeprihvaćenim metodama i metodama. Za takve proizvode razvijeni su individualni režimi sterilizacije kako bi se osigurala pouzdana sterilizacija predmeta. Dakle, sterilizacija rotora za razdvajanje krvi na frakcije se provodi vodenom parom na temperaturi od 120 stepeni u trajanju od 45 minuta. Sterilnost kontejnera za konzerviranje postiže se na 110 stepeni u trajanju od 60 minuta. Kuhanje je metoda sterilizacije koja se koristi za desterilizaciju špriceva za višekratnu upotrebu, hirurških instrumenata, gumenih cijevi, staklenog i metalnog pribora. Sterilizacija kuhanjem se vrši u sterilizatorima. Forme spora u kipućoj vodi umiru nakon 20 - 30 minuta. Kuhanje od 45 minuta se široko koristi za dezinfekciju izlučevina i drugih infektivnih materijala, posteljine, posuđa, igračaka i predmeta za njegu pacijenata. Topla voda (60 - 100 stepeni) sa deterdžentima se koristi prilikom pranja i čišćenja za mehaničko uklanjanje prljavštine i mikroorganizama. Većina vegetativnih ćelija umire na 70 stepeni nakon 30 minuta. Filtraciona sterilizacija se koristi u slučajevima kada supstrati ne mogu izdržati zagrijavanje, posebno za medije koji sadrže proteine, serume, neke antibiotike, vitamine i isparljive tvari. Ova tehnika se prilično široko koristi za sterilizaciju tečnosti kulture, kada je potrebno osloboditi je od mikrobnih ćelija, ali sačuvati nepromenjene sve metaboličke produkte koje sadrži. Metoda uključuje filtriranje tekućina kroz posebne filtere koji imaju fino porozne pregrade i stoga zadržavaju mikrobne stanice. Dva najčešće korištena tipa filtera su membranski filteri i Seitz filteri. Membranski filteri se pripremaju od kolodijuma, acetata, celuloze i drugih materijala. Seitz filteri su napravljeni od mješavine azbesta i celuloze. Osim toga, za sterilizaciju se koriste filteri od kaolina s dodatkom kvarcnog pijeska, infuzorske zemlje i drugih materijala („svijeće“ Chamberlana, Berkfelda). Membranski i azbestni filteri su dizajnirani za jednokratnu upotrebu. Uz ultraljubičasto zračenje, baktericidni učinak pružaju zraci dužine 200 - 450 nm, čiji su izvor baktericidne lampe. Uz pomoć baktericidnih lampi, vazduh se steriliše ultraljubičastim zracima u medicinskim i preventivnim ustanovama, mikrobiološkim laboratorijskim kutijama i preduzećima. Prehrambena industrija, u kutijama za proizvodnju vakcina i seruma, u operacionim salama, manipulacionim salama, dečijim ustanovama itd. Ultraljubičasti zraci imaju visoku antimikrobnu aktivnost i mogu izazvati odumiranje ne samo vegetativnih ćelija, već i njihovih spora. Sunčeva svjetlost uzrokuje smrt mikroorganizama kao rezultat djelovanja ultraljubičasto zračenje i sušenje. Sušenje na sunčevoj svjetlosti štetno djeluje na mnoge vrste mikroorganizama, ali je njegovo djelovanje površno i stoga sunčeva svjetlost ima pomoćnu ulogu u praksi sterilizacije. U posljednje vrijeme u liječenju rana i opekotina koriste se obloge od sintetičkih i prirodnih polimera u obliku gela. Polimerni antiseptički filmovi se široko koriste za lokalno liječenje rana i opekotina. Sadrže antimikrobne agense širokog spektra kao što su katapol, dioksidin, plavi jod, kao i sorbitol koji sadrži glutaraldehid. Za sterilizaciju ovih filmova koristi se jonizujuće zračenje u dozi od 20,0 kGy. Prilikom industrijske proizvodnje polimernih antiseptičkih filmova i sorbenata njihova sterilnost u ovom režimu sterilizacije je u potpunosti osigurana. Radioaktivno zračenje ubija sve vrste mikroorganizama, kako u vegetativnom, tako iu obliku spora. Široko se koristi za sterilizaciju u preduzećima koja proizvode sterilne proizvode i sterilne medicinske uređaje za jednokratnu upotrebu, za dezinfekciju otpadnih voda i sirovina životinjskog porekla.

Metoda mehaničke sterilizacije Metode mehaničke sterilizacije uklanjaju klice sa površine predmeta. To uključuje pranje, istresanje, metenje, mokro brisanje, provjetravanje, ventilaciju, usisavanje, pranje.

Hemijska metoda sterilizacija Plastika se danas sve više koristi u medicinskoj praksi. Koriste se u stomatologiji, maksilofacijalnoj hirurgiji, traumatologiji, ortopediji i hirurgiji. Većina plastike ne može izdržati metode toplotne sterilizacije parom pod pritiskom i suvom toplotom (suhi zagrijani vazduh). Rastvori alkohola, diocida i ternarni rastvori koji se koriste za sterilizaciju takvih predmeta ne osiguravaju sterilnost proizvoda koji se obrađuju. Stoga se za sterilizaciju plastičnih proizvoda koriste plinske i radijacijske metode, kao i otopine kemikalija. Uvođenje u praksu zdravstvenih ustanova velikog broja proizvoda od termolabilnih materijala doprinosi uvođenju zračenja, gasne metode dezinfekcija i sterilizacija dezinfekcionim rastvorima. Prilikom hemijske sterilizacije koriste se gasovi i agensi iz različitih hemijskih grupa (peroksid, fenolni, halogeni, aldehidi, alkalije i kiseline, tenzidi itd.). Za svakodnevnu upotrebu proizvode se deterdženti, sredstva za čišćenje, izbjeljivanje i drugi preparati koji imaju antimikrobni učinak zbog unošenja raznih kemikalija u njihov sastav. Ovi preparati se koriste za čišćenje i dezinfekciju sanitarne opreme, posuđa, posteljine i dr. Formaldehidna para (parna forma) medicinske ustanove za sterilizaciju metalni proizvodi medicinske svrhe (skalpeli, igle, pincete, sonde, stege, kuke, rezači žice, itd.). Prije sterilizacije s parama formaldehida, proizvodi moraju biti podvrgnuti predsterilizacijskom čišćenju i temeljito osušeni. Kada se sterilizira na bilo koji način hemijski propisi za obradu određenog predmeta zavise od karakteristika predmeta koji se dezinfikuje, otpornosti mikroba i karakteristika svojstava hemijska priprema, temperatura okoline, vlažnost i drugi faktori. Tako se sterilnost metalnih instrumenata postiže nakon pet sati skladištenja u zatvorenoj komori sa parom na temperaturi od najmanje 20 stepeni i relativnoj vlažnosti od 95 - 98%, a na temperaturi od 15 stepeni potpuna sterilnost ovih predmeta. postiže se tek nakon 16 sati. Spocidna aktivnost glutaraldehida zavisi od temperature. Njegovo optimalno djelovanje se javlja na temperaturi od 15 – 25 stepeni. Kako temperatura raste, sporicidna aktivnost ovog lijeka se smanjuje. Hemijska sterilizacija se koristi u donekle ograničenoj mjeri. Najčešće se ova metoda koristi za sprječavanje bakterijske kontaminacije medija kulture i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma). Supstance kao što su hloroform, toluen i eter najčešće se dodaju u hranljive podloge. Ukoliko je potrebno osloboditi medij od ovih konzervansa, zagreva se u vodenom kupatilu na 56 stepeni i konzervansi isparavaju. Za očuvanje vakcina ili seruma koriste se mertiolat, borna kiselina i formalin.

Metoda biološke sterilizacije Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika. Ova metoda se široko koristi u uzgoju virusa.

Sterilizacija

Sterilizacija je sterilizacija, odnosno potpuno oslobađanje objekata životne sredine od mikroorganizama i njihovih spora.

Sterilizacija se provodi na različite načine:

1) fizički (izloženost visokoj temperaturi, UV zracima, upotreba bakterijski filteri);

2) hemijski (upotreba raznih dezinfekcionih sredstava, antiseptika);

3) biološki (upotreba antibiotika).

U laboratorijskoj praksi obično se koriste fizičke metode sterilizacije.

Mogućnost i izvodljivost upotrebe jedne ili druge metode sterilizacije određena je karakteristikama materijala koji se steriliše, njegovim fizičkim i hemijskim svojstvima.

Fizičke metode

Kalcinacija u plamenu plamenika ili flambiranje je metoda sterilizacije u kojoj se predmet potpuno sterilizira, jer umiru i vegetativne stanice i mikrobne spore. Obično se kalciniraju bakteriološke petlje, lopatice, pipete, dijapozitivi i pokrovne čaše, te mali instrumenti. Makaze i skalpele ne treba sterilizirati zagrijavanjem, jer pod utjecajem vatre površina rezanja postaje tupa.

Sterilizacija suvom toplotom

Sterilizacija suhom toplinom ili toplim zrakom se vrši u Pasteur pećnicama (sušenje peći na suvo grijanje). Pasteur pećnica je dvoslojni ormarić od materijala otpornih na toplinu - metala i azbesta. Zagrijte ormar sa plinski gorionici ili električnim grijačima. Električno grijani ormari opremljeni su regulatorima koji osiguravaju potrebna temperatura. Za kontrolu temperature, termometar je umetnut u otvor na gornjem zidu ormarića.

Tečnosti (hranjivi mediji, izotonični rastvor natrijum hlorida itd.), predmeti od gume i sintetičkih materijala ne mogu se sterilisati suvom toplotom, jer tečnosti ključaju i izlivaju se, a guma i sintetički materijali tope.

Sterilizacija ključanjem

Kuhanje je metoda sterilizacije koja garantuje sterilnost pod uslovom da u sterilizovanom materijalu nema spora. Koristi se za obradu špriceva, instrumenata, staklenog i metalnog pribora, gumenih cevi itd. Sterilizacija parom pod pritiskom se vrši u autoklavu. Ova metoda sterilizacije zasniva se na izlaganju materijala koji se steriliše zasićenoj vodenoj pari pod pritiskom iznad atmosferskog. Kao rezultat takve sterilizacije, i vegetativni i sporni oblici mikroorganizama umiru jednim tretmanom. Autoklav (Sl. 12) je masivni kotao, sa vanjske strane prekriven metalnim kućištem, hermetički zatvoren poklopcem, koji je vijcima na šarkama čvrsto pričvršćen na kotao.

Temperatura i trajanje autoklaviranja hranljivih podloga određuju se njihovim sastavom navedenim u receptu za pripremu hranljivog medijuma. Na primjer, jednostavni mediji (meso-pepton agar, mesno-peptonski bujon) steriliziraju se 20 minuta na 120 ° C (1 atm). Međutim, na ovoj temperaturi nemoguće je sterilizirati podloge koje sadrže prirodne proteine, ugljikohidrate i druge tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem. Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu frakciono na 100°C ili u autoklavu na 112°C (0,5 atm) 10-15 minuta. Razne tekućine, uređaji sa gumenim crijevima, čepovi, bakterijske svijeće i filteri steriliziraju se 20 minuta na 120°C (1 atm).

Sterilizacija tekućom parom se vrši u Koch aparatu. Ova metoda se koristi u slučajevima kada se predmet koji se steriliše menja na temperaturi iznad 100°C. Hranljivi mediji koji sadrže ureu, ugljene hidrate, mleko, krompir, želatin itd. sterilišu se tekućom parom.

Koch aparat (bojler) je metalni cilindar obložen izvana (za smanjenje prijenosa topline) filcom ili azbestom. Cilindar je zatvoren konusnim poklopcem sa otvorom za izlazak pare. Unutar cilindra nalazi se postolje do čijeg nivoa se ulijeva voda. Na postolje se postavlja kanta sa rupom u koju se stavlja materijal koji se steriliše. Koch aparat se grije na plin ili struju. Vrijeme sterilizacije računa se od trenutka snažnog ispuštanja pare na rubovima poklopca i od izlaza za paru. Sterilizirajte 30-60 minuta. Na kraju sterilizacije, zagrijavanje se prekida. Izvadite kantu sa materijalom iz aparata i ostavite je na sobnoj temperaturi do sljedećeg dana. Zagrijavanje se vrši 3 dana za redom na temperaturi od 100°C u trajanju od 30-60 minuta. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Prilikom prvog zagrijavanja vegetativni oblici mikroba umiru, dok se sporni oblici čuvaju. U roku od jednog dana, spore uspevaju da proklijaju i pređu u vegetativne forme, koje umiru drugog dana sterilizacije. Pošto je moguće da neke spore nisu imale vremena da proklijaju, materijal se čuva još 24 sata, a zatim se vrši treća sterilizacija. Sterilizacija tekućom parom u Koch aparatu nije potrebna posebna kontrola, budući da je sterilnost pripremljenih hranljivih podloga pokazatelj ispravnog rada uređaja. Također možete sterilizirati tekućom parom u autoklavu sa odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom.

Sterilizacija ultraljubičastim zračenjem

Sterilizacija UV zrakama vrši se pomoću posebnih instalacija - baktericidnih lampi. UV zraci imaju visoko antimikrobno djelovanje i mogu uzrokovati smrt ne samo vegetativnih stanica, već i spora. UV zračenje se koristi za sterilizaciju vazduha u bolnicama, operacionim salama, dečijim ustanovama itd. U mikrobiološkoj laboratoriji kutija se pre rada tretira UV zracima.

Hemijske metode

Ova vrsta sterilizacije se koristi u ograničenoj mjeri, a služi uglavnom za sprječavanje bakterijske kontaminacije podloga za uzgoj i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma).

Supstance kao što su hloroform, toluen i eter najčešće se dodaju u hranljive podloge. Ako je potrebno osloboditi medij od ovih konzervansa, zagrijava se u vodenom kupatilu na 56°C (konzervansi isparavaju).

Za očuvanje vakcina i seruma koristite mertiolat. borna kiselina, formalin itd.

Biološka sterilizacija

Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika. Ova metoda se koristi za uzgoj virusa.

B. Detaljna tehnologija za proizvodnju stočne surutke u klaonicama u Lyonu

Već je uzeta krv od 1.000 životinja, serum je flaširan i besplatno podijeljen za gotovo 20.000 djece.

Tako se pokazuje da industrijska proizvodnja surutka u klaonici uz poštovanje aseptičkih pravila i sanitarnih propisa je moguća.

Preduzeće za seroterapiju ne daje dodatne garancije - nema pravo da izvrši obdukciju životinje donora.

Tehnologija koja se koristi u našoj proizvodnji može izgledati manje stroga sa aseptičke tačke gledišta od klasične metode. Ali ima veliku prednost u brzini, jer se serum u potpunosti proizvodi na dan uzimanja krvi.

Ako su nas trenutne okolnosti navele da serum proizvodimo u klaonici, jasno je da je to privremena mjera, jer se hematogeni i medicinski serumi mogu proizvoditi samo u specijaliziranom institutu.

Odabir životinja. U Lionu, dr. Guier, glavni veterinar klaonice, i dr. Fontenay, veterinarski inspektor, sami biraju donatore između stoke koja je namijenjena da naš grad snabdijeva mesom. Odabrana životinja je označena na desnom ramenu kako bi se olakšala daljnja kontrola.

Nakon klanja, organi životinja se pažljivo provjeravaju. Poznato je da je obdukcija najpouzdanija metoda otkrivanja tuberkuloze.

Naknadne operacije će pokazati da serum oboljele životinje nikada nije konzumiran.

Uzimanje krvi od životinja. U prostoriji za prikupljanje krvi, bik davalac se sigurno drži automatskim jarmom.

Veterinar dezinfikuje kožu jodom na nivou vrata životinje i skalpelom pravi rez u predjelu jugularne vene. Venska punkcija se izvodi trokarom steriliziranim produženim kuhanjem. Kada se pojavi krv, autoklavirano gumeno crijevo se pričvršćuje na troakar kako bi se direktno i aseptično povezalo s defibrinatorom.

Tehnologija defibriniranja i metoda sterilizacije defibrinatora opisani su u nastavku.

Od svake životinje dobije se 8-10 litara krvi, koja se vaga na vagi koja se nalazi ispod aparata.

Metode sterilizacije

Da bi se olakšao rad sanitarne kontrole, svaki defibrinator ima naljepnicu s podacima životinje donora.

Treba napomenuti da se uzimanje uzoraka krvi vrši aseptično zahvaljujući zatvorenom krugu svih komponenti: troakar, gumeno crijevo i defibrinator, koji su prethodno sterilizirani.

Naljepnica s datumom uzimanja krvi prati sakupljenu krv od trenutka punkcije vene do pretvaranja u serum i čuvanja u frižideru.

Defibracija krvi. U većini ustanova za seroterapiju, krv izlivena u staklene posude odvaja serum pod pritiskom opterećenja. U ovim uslovima, krv prvo dobijena od goveda sadrži malo seruma (otprilike 10%).

Stoga koristi seroterapijski centar u Lyonu specijalna tehnologija, dajući 50% surutke, i to u kraćem vremenu.

Dr Merrier je uspeo da razvije ovu metodu delimično nakon nalaza do kojih je došao na Kraljevskom institutu u Roterdamu i na Seroterapeutskom institutu u Milanu.

Kada se krv dobije iz ovih instituta, ona se defibrinira u sterilnim mašinama koje liče na mlaznice.

U roku od 5 minuta krv se sakuplja u posudu zaštićenu od zraka. Potrebno je striktno pridržavati se vremena defibracije: ako je nedovoljno, može doći do koagulacije, a ako je previše može doći do hemolize (zbog rupture crvenih krvnih zrnaca). Potrebno je koristiti laboratorijski sat koji vam omogućava da označite tačno 15 minuta defibrinacije.

Na vrhu sl. 4 vidi se da je broj vađenja krvi dostigao 1000, što je zabilježeno na amblemu Centra.

Centrifugiranje.

Odmah nakon defibracije aparati se prenose u laboratorij, koji se nalazi nekoliko metara od prostorije za vađenje krvi. Sadržaj svakog defibrinatora se posebno obrađuje kako bi se odstranio serum životinje koja se ispostavi da je bolesna.

Krv koja se ne zgrušava nakon defibrinacije prolazi kroz Alfa Laval separator (separator za mlijeko koji smo prilagodili za proizvodnju surutke).

Pod utjecajem centrifugalne sile krv se dijeli na jednake dijelove: crveni dio sadrži crvene kuglice, a prozirni dio čini serum (fibrin ostaje na oštricama defibrinatora).

Od jedne životinje dobije se 8-10 litara krvi ili otprilike 4-5 litara seruma koji se sipa u Pyrex bocu, steriliziranu na 180°C.

Na bočici je pričvršćena etiketa defibrinatora, a pod istim brojem se popunjava kartica kako bi se osigurala sanitarna kontrola.

U serum se dodaje poseban antiseptik, dizajniran tako da je dovoljno aktivan bez narušavanja prozirnosti i okusa seruma. Za 1 litar seruma dodati i 100 ml rastvora koji sadrži 1:1000 formaldehida i 1:5000 siunuksola.

(Između priprema, centrifuga se temeljno dezinfikuje antiseptikom.)

U principu, crvenu frakciju krvi treba vratiti u mesare za proizvodnju krvavica, ali najčešće ostaje neiskorištena, pa se od nje može pripremiti sirup tehnologijom opisanom u nastavku.

Posebni slučajevi pripreme krvnog sirupa. Sirup ima dvije prednosti: omogućava korištenje crvenog dijela krvi koji ostane nakon prijema seruma, a ugodnog je okusa koji se sviđa djeci.

Zbog nedostatka glicerina, teško je pripremiti sirup dugotrajno skladištenje, ali možete napraviti vrlo aktivan proizvod u vodi i dati djeci 2-3 žlice dnevno. Dodajte 20% crvenom dijelu krvi pije vodu i čuvati sirup u glečerima dok se vrši sanitarna kontrola.

Zatim dodajte jednak deo 100% šećerni sirup (šećer se može nabaviti sa kartica grupa kojima je sirup namijenjen).

Ekstrakt limuna ili narandže dodaje se sirupu da neutrališe ukus krvi i sipa se u boce od 250 ml.

Tindalizacija surutke.

Neposredno nakon centrifugiranja, odnosno manje od sat vremena nakon uzimanja krvi, serum se lizira na 56°C jedan sat.

Da biste to učinili, spušta se u vodeno kupatilo sa automatski održavanom temperaturom. Tindalizacija na ovoj temperaturi (na višoj temperaturi sirutka koagulira) neophodna je za delimičnu sterilizaciju surutke, iako je brzina njene pripreme sama po sebi garancija asepse.

Treba napomenuti da svaka boca od pet litara ima originalnu etiketu defibrinatora, tako da numeracija seruma odgovara numeraciji životinja donora.

Kontrolni fajl kartice. Kartica vam omogućava da u svakom trenutku provjerite porijeklo životinje donora, faze pripreme surutke, datum punjenja, kao i distribuciju surutke.

Sanitarna kontrola. Dok se posude čuvaju u rashladnoj komori, veterinarski inspektori se bave sanitarnom kontrolom životinja donora. Nakon njihovog klanja, radi se temeljita obdukcija kako bi se otkrili i najmanji simptomi tuberkuloze.

Ako se otkrije bolest, odgovarajući serum se može lako povući. Poznato je da se krv svake životinje posebno obrađuje, a serum se nalazi u zasebnim, numerisanim bočicama.

Centar za seroterapiju Javni odbor higijena djece u klaonicama u Lyonu

Kontrolni broj…

Goveđa surutka u litrima

Kartica i etiketa

Gornja kartica i etiketa sprečavaju bilo kakvu zabunu.

U Lionu su sanitarne mjere posebno stroge, jer isti veterinari biraju životinje, vade krv i provjeravaju meso.

Sterilizacija opreme. Životinjski serum je odlično mjesto za razmnožavanje mikroba i može se samo djelomično sterilizirati. Na temperaturama iznad 56° koaguliraju i postaju zamućene ako se doda jak antiseptik. Zbog toga je tokom svih operacija proizvodnje seruma potrebna maksimalna sterilnost; oprema mora biti dekontaminirana prije upotrebe.

Individualni defibrinatori se sterilišu na sljedeći način: noć prije uzimanja krvi se pune antiseptičkim rastvorom, a nekoliko sati prije uzimanja krvi isprazne se od antiseptika pomoću slavine koja se nalazi u donjem dijelu uređaja. Centrifuge koje se koriste za proizvodnju seruma također se tretiraju antiseptikom, uključujući između obrade sadržaja svakog defibrinatora.

Svo stakleno posuđe, uključujući i posude od pet litara za skladištenje sirutke, sterilizira se u električnoj pećnici na temperaturi od 180°C.

Bočice od 250 ml za serum se takođe sterilišu na 180°C. Da bi se pojednostavio rad, posuđe se nalazi u kutijama koje se koriste prilikom punjenja i distribucije javnosti.

dostava cvijeća u Voskresensk

Sterilizacija je predstavljena fizičkim, hemijskim, mehaničkim i biološkim metodama i raznim metodama.

Izvodljivost upotrebe određene metode sterilizacije i njenih metoda zavisi od karakteristika materijala koji se steriliše, njegovih fizičkih i hemijskih svojstava.

Trajanje sterilizacije zavisi od predmeta koji se steriliše, sredstva za sterilizaciju i njegove doze, temperature i vlažnosti okoline.

Metoda fizičke sterilizacije

Metode fizičke metode sterilizacije uključuju sušenje, spaljivanje i kalcinaciju, prokuhavanje, pasterizaciju i tindalizaciju, vrući zrak (suha toplina), ultrazvuk, ultraljubičasto i radioaktivno zračenje, struju visoke frekvencije, sunčevu svjetlost.

Najčešći način sterilizacije predmeta koji mogu biti izloženi visokim temperaturama je sterilizacija vatrom, vrućim zrakom i zasićenom parom pod pritiskom.

Vatra se koristi za spaljivanje zaraženih predmeta koji nemaju nikakvu vrijednost (nepotrebni papiri, stare tapete, krpe, smeće), za dezinfekciju ispljuvka tuberkuloznih bolesnika, leševa ljudi i životinja uginulih od posebno opasnih infekcija, kao i za spaljivati i kalcinirati razne predmete.

Spaljivanje i kalcinacija se široko koriste u mikrobiološkoj praksi za dezinfekciju instrumenata, laboratorijskog i farmaceutskog posuđa.

Kalcinacija u plamenu plamenika ili flambiranje je metoda sterilizacije u kojoj se predmet potpuno steriliše, jer vegetativne ćelije, ciste i spore mikroorganizama umiru.

Obično se omče, lopatice, pipete, stakalca i pokrovni stakalci, mali instrumenti i drugi kontaminirani predmeti steriliziraju kalcinacijom ako se ne mogu prokuhati. Ne preporučuje se sterilizacija makaza i skalpela zagrijavanjem, jer površina rezanja postaje tupa kada je izložena vatri.

Jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda fizičke sterilizacije koja se koristi u medicinskoj praksi je sterilizacija toplim zrakom (suha toplina). Sterilizacija suvom toplotom se vrši u sušarama (Pasterove peći). Suvi vrući zrak ima baktericidno, virusicidno, sporicidno djelovanje i koristi se uglavnom za sterilizaciju staklenih proizvoda (laboratorijsko stakleno posuđe - Petrijeve zdjelice, tikvice, pipete, epruvete i sl.), kao i metalnih proizvoda koji se mogu sterilizirati parom. pod pritiskom.

Osim toga, suva toplota se koristi za sterilizaciju predmeta od porculana i toplotno otpornih materija (talk, bijela glina), kao i mineralnih i biljnih ulja, masti, vazelina, lanolina i voska. Najefikasniji način za ovu metodu sterilizacije, koji osigurava smrt vegetativnih oblika i spora, je temperatura od 160 - 180 stepeni u trajanju od 15 minuta.

Namirnice, izotonične otopine ili predmete od gume i sintetičkih materijala ne možete sterilizirati suhom toplinom, jer tekućine ključaju i izlijevaju se, a guma i sintetički materijali se tope.

Sterilizacija zasićenom parom pod pritiskom je najpouzdanija i najčešće korišćena metoda za sterilizaciju zavoja, vode, nekih lekova, podloge za kulturu, meke opreme, instrumenata, kao i za dezinfekciju otpadnih kontaminiranih materijala.

U hirurškoj praksi zavoji, hirurški ogrtači i donji veš za operisanog pacijenta dezinfikuju se parom u autoklavu. Sterilizacija parom pod pritiskom vrši se u posebnim uređajima - autoklavima.

Autoklaviranje u potpunosti uništava sve mikroorganizme i spore. Metoda sterilizacije pod pritiskom se zasniva na zagrijavanju materijala zasićenom vodenom parom pod pritiskom iznad atmosferskog. Kombinirano djelovanje visoke temperature i pare čini ovu metodu posebno učinkovitom. U tom slučaju umiru i vegetativne stanice i mikrobne spore.

Mikrobne spore umiru u roku od 10 minuta pod uticajem zasićene vodene pare, a vegetativni oblici umiru za 1 do 4 minuta.

Visoka baktericidna moć zasićene pare posljedica je činjenice da, pod utjecajem vodene pare pod pritiskom, proteini mikrobne stanice bubre i koaguliraju, uslijed čega mikrobne stanice umiru.

Baktericidno dejstvo zasićene vodene pare pojačava se prekomernim pritiskom.

Sterilizacija u autoklavu se vrši na različite načine.

Dakle, jednostavne hranljive podloge (meso - pepton agar i meso - pepton bujon) se sterilišu 20 minuta na 120 stepeni (1 atm.). Ali ovim načinom rada nemoguće je sterilizirati medije koji sadrže proteine, ugljikohidrate i druge tvari koje se lako mijenjaju zagrijavanjem.

Mediji sa ugljenim hidratima se sterilišu u autoklavu na 0,5 atm. 10 – 15 minuta ili pare sa parom.

Visokom temperaturom možete uništiti najupornije oblike patogenih mikroorganizama (uključujući i one koji stvaraju spore) ne samo na površini predmeta koji se dezinficiraju, već iu njihovoj dubini.

To je velika prednost visoke temperature kao pouzdanog sredstva za sterilizaciju. Međutim, neki artikli se pod utjecajem visokih temperatura pokvare i u tim slučajevima potrebno je pribjeći drugim metodama i sredstvima dezinfekcije.

Potpuna sterilizacija materijala i predmeta koji ne dozvoljavaju upotrebu visokotemperaturne sterilizacije postiže se ponovljenom sterilizacijom vodenom parom u Koch aparatu na temperaturi koja ne prelazi 100 stepeni. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Svodi se na to da preostali neubijeni sporni oblici mikroba, nakon jednog dana u termostatu na 37 stepeni, klijaju u vegetativne ćelije, do čije smrti dolazi prilikom naknadne sterilizacije ovog predmeta tekućom parom.

Tretman tečnom parom izvodi se tri puta po 30-40 minuta. Jednokratno zagrijavanje materijala na temperaturi ispod 100 stepeni poznato je kao pasterizacija. Pasterizaciju je predložio Pasteur i namijenjena je uglavnom uništavanju mikroorganizama koji nisu spori. Pasterizacija se vrši na 60 - 70 stepeni 15 do 30 minuta, na 80 stepeni 10 do 15 minuta.

U mikrobiološkoj praksi, pasterizacija sjemenskog materijala se često koristi za izolaciju čistih kultura mikroorganizama koji stvaraju spore i za identifikaciju sposobnosti mikroorganizama da formiraju spore.

Za tekućine koje gube okus i druge vrijedne kvalitete kada su izložene visokim temperaturama (mlijeko, bobičasti i voćni sokovi, pivo, hranljive podloge koje sadrže ugljikohidrate ili ureu, itd.), sterilizacija tekućom parom se vrši na 50 - 60 stepeni u trajanju od 15 - 33333330 minuta ili na 70 - 80 stepeni 5 - 10 minuta. U tom slučaju mikrobi prosječne otpornosti umiru, dok se otporniji mikrobi i spore čuvaju.

Frakcijska 5-6-struka sterilizacija na 60 stepeni u trajanju od 1 sata naziva se tindalizacija.

Mnogi medicinski proizvodi napravljeni od polimernih materijala ne mogu izdržati parnu sterilizaciju prema općeprihvaćenim režimima. Za mnoge proizvode, zbog karakteristika tekućina koje sadrže (konzervansi, lijekovi i drugi proizvodi), nemoguće je sterilizirati općeprihvaćenim metodama i metodama. Za takve proizvode razvijeni su individualni režimi sterilizacije kako bi se osigurala pouzdana sterilizacija predmeta.

Dakle, sterilizacija rotora za razdvajanje krvi na frakcije se provodi vodenom parom na temperaturi od 120 stepeni u trajanju od 45 minuta.

Sterilnost kontejnera za konzerviranje postiže se na 110 stepeni u trajanju od 60 minuta.

Kuhanje je metoda sterilizacije koja se koristi za desterilizaciju špriceva za višekratnu upotrebu, hirurških instrumenata, gumenih cijevi, staklenog i metalnog pribora.

Sterilizacija kuhanjem se vrši u sterilizatorima. Forme spora u kipućoj vodi umiru nakon 20 - 30 minuta. Kuhanje od 45 minuta se široko koristi za dezinfekciju izlučevina i drugih infektivnih materijala, posteljine, posuđa, igračaka i predmeta za njegu pacijenata.

Topla voda (60 - 100 stepeni) sa deterdžentima se koristi prilikom pranja i čišćenja za mehaničko uklanjanje prljavštine i mikroorganizama.

Većina vegetativnih ćelija umire na 70 stepeni nakon 30 minuta.

Filtraciona sterilizacija se koristi u slučajevima kada supstrati ne mogu izdržati zagrijavanje, posebno za medije koji sadrže proteine, serume, neke antibiotike, vitamine i isparljive tvari. Ova tehnika se prilično široko koristi za sterilizaciju tečnosti kulture, kada je potrebno osloboditi je od mikrobnih ćelija, ali sačuvati nepromenjene sve metaboličke produkte koje sadrži.

Metoda uključuje filtriranje tekućina kroz posebne filtere koji imaju fino porozne pregrade i stoga zadržavaju mikrobne stanice.

Dva najčešće korištena tipa filtera su membranski filteri i Seitz filteri.

Membranski filteri se pripremaju od kolodijuma, acetata, celuloze i drugih materijala.

Seitz filteri su napravljeni od mješavine azbesta i celuloze.

Osim toga, za sterilizaciju se koriste filteri od kaolina s dodatkom kvarcnog pijeska, infuzorske zemlje i drugih materijala („svijeće“ Chamberlana, Berkfelda).

Membranski i azbestni filteri su dizajnirani za jednokratnu upotrebu.

Uz ultraljubičasto zračenje, baktericidni učinak pružaju zraci dužine 200 - 450 nm, čiji su izvor baktericidne lampe.

Uz pomoć baktericidnih lampi, zrak se steriliše ultraljubičastim zracima u medicinskim i preventivnim ustanovama, kutijama u mikrobiološkim laboratorijama, u preduzećima prehrambene industrije, u kutijama za proizvodnju vakcina i seruma, u operacionim salama, manipulacionim salama, dečijim ustanovama itd. .

Ultraljubičaste zrake imaju visoku antimikrobnu aktivnost i mogu uzrokovati smrt ne samo vegetativnih stanica, već i njihovih spora.

Sunčeva svjetlost uzrokuje smrt mikroorganizama kao rezultat ultraljubičastog zračenja i sušenja.

Sušenje na sunčevoj svjetlosti štetno djeluje na mnoge vrste mikroorganizama, ali je njegovo djelovanje površno i stoga sunčeva svjetlost ima pomoćnu ulogu u praksi sterilizacije.

U posljednje vrijeme u liječenju rana i opekotina koriste se obloge od sintetičkih i prirodnih polimera u obliku gela.

Polimerni antiseptički filmovi se široko koriste za lokalno liječenje rana i opekotina. Sadrže antimikrobne agense širokog spektra kao što su katapol, dioksidin, plavi jod, kao i sorbitol koji sadrži glutaraldehid. Za sterilizaciju ovih filmova koristi se jonizujuće zračenje u dozi od 20,0 kGy. Prilikom industrijske proizvodnje polimernih antiseptičkih filmova i sorbenata njihova sterilnost u ovom režimu sterilizacije je u potpunosti osigurana.

Radioaktivno zračenje ubija sve vrste mikroorganizama, kako u vegetativnom, tako iu obliku spora. Široko se koristi za sterilizaciju u preduzećima koja proizvode sterilne proizvode i sterilne medicinske uređaje za jednokratnu upotrebu, za dezinfekciju otpadnih voda i sirovina životinjskog porekla.

Metoda mehaničke sterilizacije

Metode mehaničke sterilizacije uklanjaju klice sa površine predmeta. To uključuje pranje, istresanje, metenje, mokro brisanje, provjetravanje, ventilaciju, usisavanje, pranje.

Metoda hemijske sterilizacije

Plastika se danas sve više koristi u medicinskoj praksi.

Koriste se u stomatologiji, maksilofacijalnoj hirurgiji, traumatologiji, ortopediji i hirurgiji. Većina plastike ne može izdržati metode toplotne sterilizacije parom pod pritiskom i suvom toplotom (suhi zagrijani vazduh). Rastvori alkohola, diocida i ternarni rastvori koji se koriste za sterilizaciju takvih predmeta ne osiguravaju sterilnost proizvoda koji se obrađuju.

Stoga se za sterilizaciju plastičnih proizvoda koriste plinske i radijacijske metode, kao i otopine kemikalija.

Uvođenje velikog broja proizvoda od termolabilnih materijala u praksu zdravstvenih ustanova doprinosi uvođenju radijacionih i gasnih metoda dezinfekcije i sterilizacije dezinfekcionim rastvorima.

Prilikom hemijske sterilizacije koriste se gasovi i agensi iz različitih hemijskih grupa (peroksid, fenolni, halogeni, aldehidi, alkalije i kiseline, tenzidi itd.). Za svakodnevnu upotrebu proizvode se deterdženti, sredstva za čišćenje, izbjeljivanje i drugi preparati koji imaju antimikrobni učinak zbog unošenja raznih kemikalija u njihov sastav.

Ovi preparati se koriste za čišćenje i dezinfekciju sanitarne opreme, posuđa, posteljine itd.

Formaldehidna para (steamform) se može koristiti u medicinskim ustanovama za sterilizaciju metalnih medicinskih proizvoda (skalpeli, igle, pincete, sonde, stege, kuke, rezači žice, itd.).

Prije sterilizacije s parama formaldehida, proizvodi moraju biti podvrgnuti predsterilizacijskom čišćenju i temeljito osušeni.

Kod sterilizacije bilo kojom hemijskom metodom, postupak obrade određenog predmeta zavisi od karakteristika predmeta koji se dezinfikuje, otpornosti mikroba, karakteristika svojstva hemikalije, temperature okoline, vlažnosti i drugih faktora.

Tako se sterilnost metalnih instrumenata postiže nakon pet sati skladištenja u zatvorenoj komori sa parom na temperaturi od najmanje 20 stepeni i relativnoj vlažnosti od 95 - 98%, a na temperaturi od 15 stepeni potpuna sterilnost ovih predmeta. postiže se tek nakon 16 sati.

Spocidna aktivnost glutaraldehida zavisi od temperature. Njegovo optimalno djelovanje se javlja na temperaturi od 15 – 25 stepeni. Kako temperatura raste, sporicidna aktivnost ovog lijeka se smanjuje.

Hemijska sterilizacija se koristi u donekle ograničenoj mjeri. Najčešće se ova metoda koristi za sprječavanje bakterijske kontaminacije medija kulture i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma). Supstance kao što su hloroform, toluen i eter najčešće se dodaju u hranljive podloge. Ukoliko je potrebno osloboditi medij od ovih konzervansa, zagreva se u vodenom kupatilu na 56 stepeni i konzervansi isparavaju.

Za očuvanje vakcina ili seruma koriste se mertiolat, borna kiselina i formalin.

Metoda biološke sterilizacije

Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika.

Ova metoda se široko koristi u uzgoju virusa.

Sterilizacija (od latinskog sterilis - sterilan) podrazumijeva potpunu inaktivaciju mikroba na predmetima koji se obrađuju.

Pasteur pećnica - sterilizacija suvom toplotom.

Postoje tri glavne metode sterilizacije: toplotna, radijaciona i hemijska.

Jod.

Toplotna sterilizacija zasniva se na osjetljivosti mikroba na visoku temperaturu.

Na 60 °C i prisutnosti vode dolazi do denaturacije proteina, uključujući enzime, uslijed čega vegetativni oblici mikroba umiru. Spore koje sadrže vrlo malu količinu vezane vode i imaju gustu školjku inaktiviraju se na 160-170 °C. Za termičku sterilizaciju uglavnom se koriste suha toplota i para pod pritiskom.
Sterilizacija suvom toplotom se vrši u pećima sa suvom toplotom, odnosno Pasteur pećnicama. Pasteur pećnica je čvrsto zatvoren metalni ormarić, grijan na struju i opremljen termometrom.

Dezinfekcija materijala u njemu se odvija na 160-170 °C u trajanju od 60-120 minuta. Nedostatak ove metode je što samo neki predmeti koji se mogu sterilizirati, kao što je laboratorijsko staklo, mogu izdržati tako visoke temperature.
Najuniverzalnija metoda sterilizacije je obrada parom pod pritiskom u autoklavima, u kojima se sterilišu zavoji, posteljina, mnogi instrumenti, podloge za kulturu, rastvori, infektivni materijal itd.

Autoklav je metalni cilindar čvrstih zidova, hermetički zatvoren, koji se sastoji od vodeno-parne i komore za sterilizaciju. Uređaj je opremljen manometrom, termometrom i drugim uređajima za praćenje. U autoklavu se stvara povećani pritisak, što dovodi do povećanja tačke ključanja vode. Dakle, na 0,5 atm tačka ključanja je 80 °C, na 1 atm - 100 °C, na 2 atm - 121 °C i na 3 atm - 136 °C.

Zbog činjenice da, osim visoke temperature, para djeluje na mikroorganizme, spore umiru već na 120 ° C. Najčešći režim rada autoklava je 2 atm, 121 °C, 15-20 minuta. Vrijeme sterilizacije se smanjuje sa povećanjem atmosferski pritisak, a samim tim i tačka ključanja. Mikroorganizmi umiru za nekoliko sekundi, ali se materijal obrađuje duže vrijeme, jer, prvo, unutar materijala koji se sterilizira mora biti visoka temperatura, a drugo postoji takozvano sigurnosno polje, predviđeno za moguće odstupanje od navedene parametre prilikom rada u autoklavu.

Oznake: tijelo, rast, sterilizacija, enzim

Život mikroorganizama usko zavisi od uslova okoline. Svi faktori životne sredine koji utiču na mikroorganizme mogu se podeliti u tri grupe: fizičke, hemijske i biološke, čije blagotvorno ili štetno dejstvo zavisi kako od prirode samog faktora tako i od svojstava mikroorganizma.

Fizički faktori

Od fizičkih faktora najveći uticaj na razvoj mikroorganizama imaju temperatura, sušenje, energija zračenja i ultrazvuk.

Temperatura. Životna aktivnost svakog mikroorganizma ograničena je određenim temperaturnim granicama. Ova temperaturna zavisnost se obično izražava sa tri glavne tačke: minimum - temperatura ispod koje prestaje reprodukcija mikrobnih ćelija; optimalno - najbolja temperatura za rast i razvoj mikroorganizama; maksimum - temperatura iznad koje vitalna aktivnost ćelija slabi ili prestaje. Optimalna temperatura obično odgovara temperaturnim uslovima prirodnog staništa.

Svi mikroorganizmi u odnosu na temperaturu dijele se na psihrofile, mezofile i termofile.

Psihrofili (od grčkog psychros - hladnoća, phileo - ljubav), ili mikroorganizmi koji vole hladnoću, rastu relativno niske temperature: minimalna temperatura - 0° C, optimalna - 10-20° C, maksimalna - 30° C. Ova grupa uključuje mikroorganizme koji žive u sjevernih mora i okeani, tlo, otpadne vode. To također uključuje svjetleće i željezne bakterije, kao i mikrobe koji uzrokuju kvarenje hrane na hladnoći (ispod 0°C).

Mezofili (od grčkog mesos - srednji) su najobimnija grupa, uključujući većinu saprofita i sve patogene mikroorganizme. Optimalna temperatura za njih je 28-37°C, minimalna 10°C, maksimalna 45°C.

Termofili (od grčkog termos - toplota, toplota), ili mikroorganizmi koji vole toplotu, razvijaju se na temperaturama iznad 55°C, minimalna temperatura za njih je 30°C, optimalna je 50-60°C, a maksimalna 70°C. -75°C. Nalaze se u toplim mineralnim izvorima, površinskom sloju tla, samozagrijavajućim supstratima (stajnjak, sijeno, žito), te crijevima ljudi i životinja. Među termofilima postoji mnogo oblika spora.

Visoke i niske temperature imaju različite efekte na mikroorganizme. Neki su osjetljiviji na visoke temperature. Štaviše, što je temperatura viša iznad maksimuma, to brže dolazi do smrti mikrobnih ćelija, što je posledica denaturacije (koagulacije) ćelijskih proteina.

Vegetativni oblici mezofilnih bakterija umiru na temperaturi od 60°C 30-60 minuta, a na 80-100°C - nakon 1-2 minuta. Bakterijske spore su mnogo otpornije na visoke temperature. Na primjer, spore bacila antraksa mogu izdržati ključanje 10-20 minuta, a spore botulizma klostridija - 6 sati.Svi mikroorganizmi, uključujući i spore, umiru na temperaturi od 165-170°C sat vremena (na suhoj vrućini pećnica) ili kada je izložena pari pod pritiskom od 1 atm (u autoklavu) 30 minuta.

Djelovanje visokih temperatura na mikroorganizme je osnova sterilizacije - potpunog oslobađanja raznih predmeta od mikroorganizama i njihovih spora (vidi dolje).

Mnogi mikroorganizmi su izuzetno otporni na niske temperature. Salmonella typhus i Vibrio cholerae dugo preživljavaju u ledu. Neki mikroorganizmi ostaju održivi na temperaturama tekućeg zraka (-190°C), a bakterijske spore mogu izdržati temperature do -250°C.

Samo pojedinačne vrste patogene bakterije su osjetljive na niske temperature (na primjer, Bordetella pertussis i parapertussis, Neisseria meningococcus, itd.). Ova svojstva mikroorganizama uzimaju se u obzir u laboratorijskoj dijagnostici i prilikom transporta ispitivanog materijala - dostavlja se u laboratorij zaštićen od hlađenja.

Djelovanje niskih temperatura zaustavlja procese truljenja i fermentacije, što se široko koristi za čuvanje hrane u rashladnim uređajima, podrumima i glečerima. Na temperaturama ispod 0°C, mikrobi padaju u stanje suspendirane animacije - metabolički procesi se usporavaju i reprodukcija prestaje. Međutim, ako postoje odgovarajući temperaturni uslovi i hranljivi medij, vitalne funkcije mikrobnih ćelija se obnavljaju. Ovo svojstvo mikroorganizama koristi se u laboratorijskoj praksi za očuvanje mikrobnih kultura na niskim temperaturama. Brze promjene visokih i niskih temperatura (smrzavanje i odmrzavanje) također štetno djeluju na mikroorganizme - to dovodi do pucanja ćelijskih membrana.

Sušenje. Voda je neophodna za normalno funkcioniranje mikroorganizama. Sušenje dovodi do dehidracije citoplazme, narušavanja integriteta citoplazmatske membrane, zbog čega se narušava ishrana mikrobnih ćelija i dolazi do njihove smrti.

Vrijeme smrti različitih vrsta mikroorganizama pod utjecajem sušenja značajno se razlikuje. Na primjer, patogene Neisseria (meningokoke, gonokoke), Leptospira, Treponema pallidum i druge umiru kada se osuše nakon nekoliko minuta. Vibrio cholerae može izdržati sušenje 2 dana, Salmonella tifusa - 70 dana, a Mycobacterium tuberculosis - 90 dana. Ali osušeni sputum pacijenata sa tuberkulozom, u kojem su patogeni zaštićeni suvim proteinskim omotačem, ostaje zarazan 10 mjeseci.

Spore su posebno otporne na sušenje, kao i na druge uticaje okoline. Spore bacila antraksa zadržavaju sposobnost klijanja 10 godina, a spore plijesni i do 20 godina.

Nepovoljan uticaj sušenja na mikroorganizme odavno se koristi za konzerviranje povrća, voća, mesa, ribe i lekovitog bilja. U isto vrijeme, kada su izloženi uvjetima visoke vlažnosti, takvi proizvodi brzo propadaju zbog obnavljanja mikrobne aktivnosti.

Metoda sušenja smrzavanjem se široko koristi za čuvanje kultura mikroorganizama, vakcina i drugih bioloških preparata. Suština metode je da se mikroorganizmi ili preparati prvo zamrzavaju, a zatim suše u vakuumskim uslovima. U tom slučaju mikrobne ćelije ulaze u stanje suspendirane animacije i zadržavaju svoja biološka svojstva nekoliko mjeseci ili godina.

Radiant Energy. U prirodi su mikroorganizmi stalno izloženi sunčevom zračenju. Direktna sunčeva svjetlost uzrokuje smrt mnogih mikroorganizama u roku od nekoliko sati, osim fotosintetskih bakterija (zelene i ljubičaste sumporne bakterije). Štetni efekti sunčeve svjetlosti su posljedica aktivnosti ultraljubičastih zraka(UV zraci). Oni inaktiviraju stanične enzime i oštećuju DNK. Patogene bakterije su osjetljivije na djelovanje UV zraka od saprofita. Stoga je bolje čuvati mikrobne kulture u laboratoriji u mraku. U tom smislu, Buchnerovo iskustvo je demonstrativno.

U Petrijevoj posudi sa tanki sloj agar se proizvodi obilnom inokulacijom bilo koje bakterijske kulture. Slova izrezana iz crnog papira zalijepljena su na vanjsku površinu posude za sjemenje, formirajući, na primjer, riječ "tifus". Čašu sa dnom okrenutim nagore 1 sat zrače direktnim sunčevim zracima.Potom se papiri skidaju, a šolja se stavlja u termostat na 37°C na jedan dan.Razrast bakterija se primećuje samo na tim mestima agar koji su od UV zraka bili zaštićeni naljepnicama slovima. Ostatak agara ostaje providan, odnosno nema rasta mikroorganizama (slika 11).

Značaj sunčeve svetlosti kao prirodnog faktora za poboljšanje zdravlja spoljašnje sredine je veliki. Oslobađa zrak, vodu prirodnih rezervoara i gornje slojeve tla od patogenih bakterija.

Baktericidno (bakterijsko uništavajuće) dejstvo UV zraka koristi se za sterilizaciju vazduha u zatvorenim prostorima (operacionim salama, svlačionicama, boksovima i sl.), kao i vode i mleka. Izvor ovih zraka su lampe ultraljubičastog zračenja i baktericidne lampe.

Druge vrste energije zračenja - X-zraci, α-, β-, γ-zraci štetno djeluju na mikroorganizme samo u velikim dozama, reda veličine 440-280 J/kg. Smrt mikroba uzrokovana je uništavanjem nuklearnih struktura i stanične DNK. Niske doze zračenja stimulišu rast mikrobnih ćelija. Mikroorganizmi su mnogo otporniji na radioaktivno zračenje od viših organizama. Poznato je da tionske bakterije žive u naslagama rude uranijuma. Bakterije su pronađene u vodi iz nuklearnih reaktora u koncentraciji jonizujućeg zračenja od 20-30 kJ/kg.

Baktericidno dejstvo jonizujućeg zračenja koristi se za konzerviranje određenih prehrambenih proizvoda, sterilizaciju bioloških preparata (serumi, vakcine i sl.), pri čemu se svojstva sterilizovanog materijala ne menjaju.

Posljednjih godina se metodom zračenja steriliziraju proizvodi za jednokratnu upotrebu kao što su polistirenske pipete, Petrijeve zdjelice, bunari za serološke reakcije, špricevi, kao i materijal za šavove - catgut i dr.

Ultrazvuk uzrokuje značajna oštećenja mikrobnih stanica. Pod uticajem ultrazvuka aktiviraju se gasovi koji se nalaze u tečnom okruženju citoplazme, a unutar ćelije nastaje visoki pritisak (do 10.000 atm). To dovodi do pucanja ćelijske membrane i smrti ćelije. Ultrazvuk se koristi za sterilizaciju prehrambenih proizvoda (mlijeko, voćni sokovi) i vode za piće.

Visok pritisak. Bakterije, a posebno njihove spore, otporne su na mehanički pritisak. U prirodi se nalaze bakterije koje žive u morima i okeanima na dubini od 1000-10000 m pod pritiskom od 100 do 900 atm. Neke vrste bakterija mogu izdržati pritiske do 3000-5000 atm, a bakterijske spore - čak 20 000 atm.

Hemijski faktori

Efekat hemikalija na mikroorganizme varira u zavisnosti od prirode hemijskog jedinjenja, njegove koncentracije i trajanja izlaganja mikrobnim ćelijama. U zavisnosti od koncentracije, hemijska supstanca može biti izvor ishrane ili imati inhibitorni efekat na vitalnu aktivnost mikroorganizama. Na primjer, 0,5-2% otopina glukoze stimulira rast mikroba, a 20-40% otopina glukoze inhibira proliferaciju mikrobnih stanica.

Mnogi hemijski spojevi koji štetno djeluju na mikroorganizme koriste se u medicinskoj praksi kao dezinficijensi i antiseptici.

Hemikalije koje se koriste za dezinfekciju nazivaju se dezinficijensima. Dezinfekcija se odnosi na mjere koje imaju za cilj uništavanje patogenih mikroorganizama u različitim objektima okoliša. Dezinficijensi uključuju halogenidne spojeve, fenole i njihove derivate, soli teških metala, neke kiseline, alkalije, alkohole itd. Oni uzrokuju odumiranje mikrobnih stanica, djelujući u optimalnim koncentracijama određeno vrijeme. Mnoga sredstva za dezinfekciju štetno djeluju na tkiva makroorganizma.

Zovu se antiseptici hemijske supstance, što može uzrokovati smrt mikroorganizama ili inhibirati njihov rast i reprodukciju. Koriste se u terapeutske svrhe (kemoterapija), kao i za dezinfekciju rana, kože i sluzokože ljudi. Antiseptička svojstva imaju vodonik peroksid, alkoholni rastvori joda, briljantnog zelenog, rastvori kalijum permanganata i dr. Za konzerviranje hrane koriste se neke antiseptičke supstance (sirćetna, sumporna, benzojeva kiselina itd.) u dozama koje su neškodljive za ljude.

Prema mehanizmu djelovanja, hemijske supstance sa antimikrobnim djelovanjem mogu se podijeliti u nekoliko grupa.

1. Surfaktanti (masne kiseline, sapuni i drugi deterdženti) uzrokuju smanjenje površinske napetosti, što dovodi do narušavanja funkcionisanja ćelijskog zida i citoplazmatske membrane mikroorganizama.

2. Fenol, krezol i njihovi derivati uzrokuju koagulaciju mikrobnih proteina. Koriste se za dezinfekciju infektivnog materijala u mikrobiološkoj praksi i infektivnim bolnicama.

3. Oksidirajući agensi, u interakciji sa mikrobnim proteinima, ometaju aktivnost enzima i uzrokuju denaturaciju proteina. Aktivni oksidanti su hlor i ozon koji se koriste za dezinfekciju vode za piće. Derivati hlora (izbjeljivač, hloramin) se široko koriste u svrhe dezinfekcije. Vodikov peroksid, kalijum permanganat, jod itd. imaju oksidirajuća svojstva.

4. Formaldehid se koristi u obliku 40% rastvora (formalina) za dezinfekciju. Ubija vegetativne i spore forme mikroorganizama. Formalin blokira amino grupe proteina mikrobnih stanica i uzrokuje njihovu denaturaciju.

5. Soli teških metala (živa, olovo, cink, zlato itd.) koaguliraju proteine mikrobne ćelije, uzrokujući tako njihovu smrt. Brojni metali (srebro, zlato, živa, itd.) imaju baktericidni učinak na mikroorganizme u zanemarljivim koncentracijama. Ovo svojstvo se naziva oligodinamičko djelovanje (od latinskog oligos - mali, dinamys - snaga). Dokazano je da voda u srebrnim posudama ne truli zbog baktericidnog dejstva jona srebra. Za prevenciju blenoreje* novorođenčadi dugo vremena korišćen je 1% rastvor srebrnog nitrata. Koloidne otopine organska jedinjenja srebro (protargol, collargol) se također koristi u obliku lokalnih antiseptika.

* (Blennorea je upala konjunktive oka uzrokovana gonokokom.)

Preparati žive imaju snažno antimikrobno dejstvo. Od davnina se za dezinfekciju koristi živa biklorid ili živin hlorid (u razrjeđenju 1:1000). Međutim, ona jeste toksični efekat na tkivo makroorganizma i njegova upotreba je ograničena.

6. Boje (dijamant zelena, rivanol, itd.) imaju svojstvo inhibiranja rasta bakterija. Rastvori brojnih boja koriste se kao antiseptici, a dodaju se i nekim hranjivim podlogama kako bi se inhibirao rast prateće mikroflore.

Destruktivno djelovanje niza fizičkih i kemijskih faktora na mikroorganizme čini osnovu aseptičkih i antiseptičkih metoda koje se široko koriste u medicinskoj i sanitarnoj praksi.

Asepsa je sistem preventivnih mjera kojima se sprječava mikrobna kontaminacija predmeta (rana, hirurško polje, kulture mikroorganizama i dr.) na osnovu fizikalnih metoda.

Antiseptici su skup mjera usmjerenih na uništavanje mikroorganizama u rani, cijelom tijelu ili na objektima okoline, korištenjem raznih hemikalija za dezinfekciju.

Biološki faktori

U prirodnim staništima mikroorganizmi ne postoje izolovani, već su u složenim odnosima koji se svode uglavnom na simbiozu, metabiozu i antagonizam.

Simbioza je kohabitacija organizama različitih vrsta, koja im donosi obostranu korist. Istovremeno, zajedno se razvijaju bolje od svakog od njih posebno.

Simbiotski odnosi postoje između bakterija kvržica i mahunarki, između filamentoznih gljiva i modrozelenih algi (lišajeva): simbioza bakterija mliječne kiseline i alkoholnog kvasca koristi se za pripremu nekih proizvoda mliječne kiseline (kefir, kumis).

Metabioza je vrsta odnosa u kojoj metabolički produkti jedne vrste mikroorganizama stvaraju potrebne uvjete za razvoj drugih. Na primjer, truležni mikroorganizmi koji razgrađuju proteinske tvari doprinose akumulaciji amonijevih spojeva u okolišu i stvaraju povoljne uvjete za rast i razvoj nitrificirajućih bakterija. A razvoj anaeroba u dobro prozračnom tlu bio bi nemoguć bez aerobnih tvari koje apsorbiraju slobodni kisik.

Metabiotički odnosi su široko rasprostranjeni među mikroorganizmima u tlu i leže u osnovi ciklusa supstanci u prirodi.

Antagonizam je oblik odnosa u kojem jedan mikroorganizam inhibira razvoj drugog ili može uzrokovati njegovu potpunu smrt. Razvili su se antagonistički odnosi među mikroorganizmima u borbi za postojanje. Svugdje gdje žive, između njih se vodi stalna borba za izvore hrane, kisik u zraku i stanište. Dakle, većina patogenih bakterija, ušavši u vanjsku sredinu (tlo, vodu) sa izlučevinama bolesnika, ne može izdržati dugotrajnu konkurenciju s brojnim saprofitima i relativno brzo umire.

Antagonizam može biti uzrokovan direktnim utjecajem mikroorganizama jedni na druge ili djelovanjem njihovih metaboličkih produkata. Na primjer, protozoe proždiru bakterije, a fagi ih liziraju. Crijeva novorođenčadi su kolonizirana bakterijama mliječne kiseline Bifidobacterium bifidum. Oslobađanjem mliječne kiseline suzbijaju rast truležnih bakterija i na taj način štite još uvijek krhki organizam dojenčadi od crijevnih smetnji. Neki mikroorganizmi u procesu života proizvode različite tvari koje štetno djeluju na bakterije i druge mikrobe. Ove supstance uključuju antibiotike (vidi "Antibiotici").

Kontrolna pitanja

1. Šta fizički faktori utiču na životnu aktivnost mikroorganizama?

2. Koje supstance se klasifikuju kao dezinfekciona sredstva i po čemu se razlikuju po mehanizmu delovanja na mikroorganizme?

3. Navedite kakve veze postoje između mikroorganizama?

Sterilizacija

Sterilizacija je sterilizacija, odnosno potpuno oslobađanje objekata životne sredine od mikroorganizama i njihovih spora.

Sterilizacija se provodi na različite načine:

1) fizičke (izlaganje visokoj temperaturi, UV zracima, upotreba bakterijskih filtera);

2) hemijski (upotreba raznih dezinfekcionih sredstava, antiseptika);

3) biološki (upotreba antibiotika).

U laboratorijskoj praksi obično se koriste fizičke metode sterilizacije.

Mogućnost i izvodljivost upotrebe jedne ili druge metode sterilizacije određena je karakteristikama materijala koji se steriliše, njegovim fizičkim i hemijskim svojstvima.

Fizičke metode

Sterilizacija suvom toplotom

Sterilizacija suvom toplotom ili vrelim vazduhom vrši se u Pasteur pećnicama (sušare). Pasteur pećnica je dvoslojni ormarić od materijala otpornih na toplinu - metala i azbesta. Zagrijte ormar pomoću plinskih gorionika ili električnih uređaja za grijanje. Električno grijani ormari opremljeni su regulatorima koji osiguravaju potrebnu temperaturu. Za kontrolu temperature, termometar je umetnut u otvor na gornjem zidu ormarića.

Suva toplota se koristi za sterilizaciju laboratorijskog staklenog posuđa. Posuđe pripremljeno za sterilizaciju se lagano stavlja u pećnicu kako bi se osiguralo jednolično i pouzdano zagrijavanje materijala koji se sterilizira. Čvrsto zatvorite vrata ormarića, uključite uređaj za grijanje, zagrijte temperaturu na 160-165 °C i sterilizirajte na ovoj temperaturi 1 sat. Na kraju sterilizacije isključite grijanje, ali ne otvarajte vrata ormarića sve dok pećnica se ohladila; inače hladan vazduh, ulazak u ormarić može uzrokovati pukotine na vrućem posuđu.

Sterilizacija u Pasteur pećnici može se vršiti na različite načine temperaturni uslovi i izlaganje (vreme sterilizacije) (tabela 1).

Za kontrolu sterilizacije u Pasteur pećnici, svilene niti se navlaže u kulturi bakterija koje stvaraju spore, osuše se, stave u sterilnu Petrijevu posudu i stave u Pasteurovu peć. Sterilizacija se vrši na temperaturi od 165°C u trajanju od 1 sata (za kontrolu, dio niti se ostavi na sobnoj temperaturi). Zatim se sterilizirane i kontrolne niti stavljaju na površinu agara u Petrijevoj posudi ili stavljaju u epruvete sa bujonom i inkubiraju u termostatu na 37°C 2 dana. Pravilnim radom Pasteurove peći neće doći do rasta u epruvetama ili posudama sa hranljivim podlogama u koje su stavljene sterilisane niti, jer će spore bakterija umrijeti, dok će spore bakterija na nitima koje nisu sterilizirane (kontrola) proklijati na nutrijentima. bit će zabilježen medijski rast.

Da biste odredili temperaturu unutar Pasteurove pećnice, možete koristiti saharozu ili granulirani šećer, koji se karamelizira na temperaturi od 165-170 ° C.

Priprema laboratorijskog staklenog posuđa za sterilizaciju u Pasteur pećnici. Prije sterilizacije, laboratorijsko stakleno posuđe (Petrijeve zdjelice, graduirane i Pasteurove pipete, bočice, tikvice, epruvete) mora se dobro oprati, osušiti i umotati u papir, jer se u suprotnom nakon sterilizacije može ponovo kontaminirati zračnim bakterijama.

Petrijeve zdjelice se umotaju u papir jedan ili više komada odjednom ili se stavljaju u posebne metalne kutije.

Pamučni štapići se ubacuju u gornje krajeve pipete kako bi se spriječilo da ispitni materijal uđe u usta. Graduirane pipete se umotaju u dugačke trake papira širine 4-5 cm.Zapremina umotane pipete je označena na papiru. U kutijama za olovke, graduirane pipete se sterilišu bez dodatnog umotavanja u papir.

Bilješka. Ako je gradacija na pipetama slabo vidljiva, ona se vraća prije sterilizacije. Uljana boja se nanosi na pipetu i, ne dopuštajući da se boja osuši, u nju se krpom utrlja prah barij sulfata. Nakon toga krpom uklonite višak boje, koja ostaje samo u zarezima za diplomiranje. Ovako tretirane pipete treba isprati.

Oštri krajevi Pasteurovih pipeta zapečaćeni su u plamenu plamenika i umotani u papir, po 3-5 komada. Pasteurove pipete moraju se pažljivo umotati kako se ne bi odlomili zapečaćeni krajevi kapilara.

Bočice, tikvice, epruvete se zatvaraju čepovima od pamučne gaze. Pluto treba da stane u grlo posude 2/3 dužine, ne previše čvrsto, ali ni labavo. Preko čepova svake posude (osim epruveta) stavlja se papirna kapica. Epruvete su povezane u grupe od 5-50 i omotane papirom.

Bilješka. Na visokim temperaturama papir u koji su umotane čaše i pipete i vata požute i mogu čak i da se ugljene, tako da svaki nova sorta papir primljen u laboratoriju treba testirati na prihvaćenim temperaturnim uslovima.

Kontrolna pitanja

1. Šta se podrazumijeva pod pojmom sterilizacija?

2. Kako se vrši sterilizacija?

3. Šta se steriliše kalcinacijom na vatri?

4. Opišite strukturu i način rada Pasteurove peći.

5. Šta se steriliše u Pasteur pećnici?

6. Kako se stakleno posuđe priprema za sterilizaciju?

7. Zašto se hranljivi mediji i gumeni predmeti ne mogu sterilisati u Pasteur pećnici?

Vježbajte

Pripremite Petrijeve zdjelice, graduirane pipete, Pasteurove pipete, epruvete, tikvice i bočice za sterilizaciju.

Sterilizacija ključanjem

Sterilizacija kuhanjem se obično vrši u sterilizatoru - metalnoj kutiji pravougaonog oblika sa čvrstim poklopcem. Materijal koji se steriliše stavlja se na mrežicu koja se nalazi u sterilizatoru i puni se vodom. Da biste povećali tačku ključanja i eliminisali tvrdoću vode, dodajte 1-2% natrijum bikarbonata (bolje je koristiti destilovanu vodu). Sterilizator se zatvara poklopcem i zagreva.Početkom sterilizacije se smatra trenutak ključanja vode, vreme ključanja je 15-30 minuta. Na kraju sterilizacije, bočnim drškama se posebnim kukama uklanja mrežica sa instrumentima, a instrumenti u njoj se uzimaju sterilnom pincetom ili pincetom, koje se zajedno sa ostatkom instrumenata prokuvaju.

Sterilizacija parom se vrši na dva načina: 1) parom pod pritiskom; 2) tekuća para.

Sterilizacija parom pod pritiskom proizvedeno u autoklavu. Ova metoda sterilizacije zasniva se na izlaganju materijala koji se steriliše zasićenoj vodenoj pari pod pritiskom iznad atmosferskog. Kao rezultat takve sterilizacije, i vegetativni i sporni oblici mikroorganizama umiru jednim tretmanom.

Autoklav (Sl. 12) je masivni kotao, sa vanjske strane prekriven metalnim kućištem, hermetički zatvoren poklopcem, koji je vijcima na šarkama čvrsto pričvršćen na kotao. Drugi, manji prečnik, koji se zove sterilizaciona komora, ubacuje se u spoljašnji kotao. U ovu komoru se stavljaju predmeti koji se sterilišu. Između oba kotla se nalazi slobodan prostor, nazvana komora za vodenu paru. Voda se u ovu komoru ulijeva kroz lijevak pričvršćen sa vanjske strane do određenog nivoa označenog na posebnoj cijevi za mjerenje vode. Kada se voda prokuva u vodeno-parnoj komori, nastaje para. Komora za sterilizaciju je opremljena ispusnom slavinom sa sigurnosnim ventilom koji omogućava izlaz pare kada se pritisak poveća iznad potrebnog nivoa. Manometar se koristi za određivanje pritiska stvorenog u komori za sterilizaciju.

Rice. 12. Dijagram autoklava. M - manometar; PC - sigurnosni ventil; B - lijevak za vodu; K 2 - slavina za ispuštanje vode; K 3 - ventil za ispuštanje pare

Normalni atmosferski pritisak (760 mm Hg) uzima se kao nula. Postoji određena veza između očitavanja manometra i temperature (tabela 2).

Trenutno postoje autoklavi sa automatskom kontrolom načina rada. Pored uobičajenog manometra, opremljeni su električni kontaktni manometar, koji sprečava povećanje pritiska iznad zadate vrednosti i na taj način obezbeđuje konstantan željenu temperaturu u autoklavu.

Para pod pritiskom steriliše različite hranljive podloge (osim onih koje sadrže prirodne proteine), tečnosti (izotonični rastvor natrijum hlorida, voda, itd.); uređaja, posebno onih sa gumenim dijelovima.

Pažnja! Inficirani materijal se također neutralizira u autoklavu. Čaše i epruvete sa kulturama mikroorganizama stavljaju se u specijalne metalne kante ili rezervoare sa otvorima na poklopcu za prodiranje pare i sterilišu u autoklavu na 126°C (1,5 atm) 1 sat. Na isti način instrumenti se sterilišu nakon rada. sa bakterijama, stvarajući sporove.

Samo posebno obučene osobe smiju raditi s autoklavom, koje moraju striktno i točno slijediti pravila navedena u uputama isporučenim uz uređaj.

Tehnika autoklaviranja. 1. Prije rada provjerite ispravnost svih dijelova i brušenost slavina.

2. Voda (destilirana ili prokuvana da se spriječi stvaranje kamenca) se ulijeva kroz lijevak postavljen izvan kotla do gornje oznake na staklu vodomjera. Slavina ispod lijevka je zatvorena.

3. Materijal koji se steriliše stavlja se u komoru za sterilizaciju na posebnu mrežicu. Predmete ne treba puniti previše čvrsto, jer para mora slobodno prolaziti između njih, inače se neće zagrijati na potrebnu temperaturu i mogu ostati nesterilni.

4. Gumena brtva na poklopcu se istrlja kredom radi boljeg zaptivanja.

5. Poklopac je zatvoren i pričvršćen vijcima na tijelo autoklava, a vijci su ukršteni u paru.

6. Otvorite izlazni ventil koji povezuje komoru za sterilizaciju sa vanjskim zrakom do kraja i počnite zagrijavati autoklav. Autoklav se obično zagrijava na plin ili struju.

Kada se autoklav zagreje, voda proključa, nastala para se diže između zidova bojlera i kroz posebne rupe na zidu unutrašnjeg kotla (vidi sliku 12), ulazi u komoru za sterilizaciju i izlazi kroz otvoreni izlazni ventil. Prvo, para izlazi zajedno sa vazduhom u autoklavu. Neophodno je da sav vazduh bude istisnut iz autoklava, inače očitavanje manometra neće odgovarati temperaturi u autoklavu.

Pojava kontinuiranog jakog toka pare ukazuje na potpuno uklanjanje zraka iz autoklava; Nakon toga, izlazni ventil se zatvara i tlak unutar autoklava počinje postupno rasti.

7. Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada očitanja merača pritiska dostignu zadatu vrednost. Zagrijavanje je podešeno tako da se tlak u autoklavu ne mijenja u određenom vremenskom periodu.

8. Nakon isteka vremena sterilizacije, zagrijavanje autoklava se zaustavlja, a para se ispušta kroz izlazni ventil. Kada igla merača pritiska padne na nulu, otvorite poklopac. Da biste izbjegli opekotine od pare koja ostaje u autoklavu, poklopac treba otvoriti prema vama.

Nivo temperature u autoklavu, odnosno ispravnost očitavanja manometra, može se provjeriti. Da biste to učinili, koristite različite supstance koje imaju određenu tačku topljenja: antipirin (113°C), resorcinol i sumpor (119°C), benzojeva kiselina (120°C). Jedna od ovih supstanci se pomeša sa zanemarljivom količinom boje (muchsin ili metilen plavo) i izlije u staklenu epruvetu, koja se zatvori i postavi u vertikalni položaj između materijala koji se steriliše. Ako je temperatura dovoljna, tvar će se otopiti i promijeniti boju odgovarajuće boje.

Da bi se proverila efikasnost sterilizacije, epruveta sa poznatom kulturom spora stavlja se u autoklav. Nakon autoklaviranja, epruveta se prenosi u termostat na 24-48 sati, primjećuje se odsutnost ili prisustvo rasta. Nedostatak rasta ukazuje na pravilan rad uređaja.

Sterilizacija tekućom parom proizveden u Koch aparatu. Ova metoda se koristi u slučajevima kada se predmet koji se steriliše menja na temperaturi iznad 100°C. Hranljivi mediji koji sadrže ureu, ugljene hidrate, mleko, krompir, želatin itd. sterilišu se tekućom parom.

Koch aparat (bojler) je metalni cilindar obložen izvana (za smanjenje prijenosa topline) filcom ili azbestom. Cilindar je zatvoren konusnim poklopcem sa otvorom za izlazak pare. Unutar cilindra nalazi se postolje do čijeg nivoa se ulijeva voda. Na postolje se postavlja kanta sa rupom u koju se stavlja materijal koji se steriliše. Koch aparat se grije na plin ili struju. Vrijeme sterilizacije računa se od trenutka snažnog ispuštanja pare na rubovima poklopca i od izlaza za paru. Sterilizirajte 30-60 minuta. Na kraju sterilizacije, zagrijavanje se prekida. Izvadite kantu sa materijalom iz aparata i ostavite je na sobnoj temperaturi do sljedećeg dana. Zagrijavanje se vrši 3 dana za redom na temperaturi od 100°C u trajanju od 30-60 minuta. Ova metoda se zove frakciona sterilizacija. Prilikom prvog zagrijavanja vegetativni oblici mikroba umiru, dok se sporni oblici čuvaju. U roku od jednog dana, spore uspevaju da proklijaju i pređu u vegetativne forme, koje umiru drugog dana sterilizacije. Pošto je moguće da neke spore nisu imale vremena da proklijaju, materijal se čuva još 24 sata, a zatim se vrši treća sterilizacija. Sterilizacija tekućom parom u Koch aparatu ne zahtijeva posebnu kontrolu, jer je sterilnost pripremljene podloge za kulturu pokazatelj ispravnog rada uređaja. Također možete sterilizirati tekućom parom u autoklavu sa odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom.

Kontrolna pitanja

1. Koje hranljive podloge se sterilišu parom?

2. Šta je sterilizator i kako radi?

3. Zašto treba koristiti destilovanu vodu pri sterilizaciji prokuvavanjem?

4. Opišite strukturu i način rada autoklava.

5. Šta se steriliše u autoklavu?

6. Šta služi kao kontrola za pravilnu sterilizaciju tokom autoklaviranja?

7. Šta je sterilizacija protočnom parom?

8. Opišite strukturu Kochovog aparata.

9. Koja je svrha frakcione sterilizacije?

Vježbajte

Popunite formular.

Frakciona sterilizacija se takođe može izvesti u Koch koagulansu.

Kochov koagulant se koristi za koagulaciju sirutke i podloge za uzgoj jaja, a istovremeno sa zbijanjem podloge vrši se i sterilizacija.

Kochov koagulant je ravna metalna kutija sa duplim zidovima, spolja obložena termoizolacionim materijalom. Voda se ulijeva u prostor između zidova kroz poseban otvor koji se nalazi u gornjem dijelu vanjskog zida. Rupa se zatvara čepom u koji je umetnut termometar. Uređaj je zatvoren sa dva poklopca: staklenim i metalnim. Kroz stakleni poklopac možete pratiti proces koagulacije. Epruvete sa podlogom postavljene su na dno koagulatora u nagnutom položaju.

Koagulator se zagrijava plinom ili električnom energijom. Podloge se sterilišu jednom na temperaturi od 90°C u trajanju od 1 sata ili frakciono - 3 dana za redom na 80°C u trajanju od 1 sata.

Tindalizacija* - frakcijska sterilizacija na niskim temperaturama - koristi se za tvari koje se lako uništavaju i denaturiraju na temperaturi od 60 ° C (na primjer, proteinske tekućine). Materijal koji se steriliše zagrijava se u vodenom kupatilu ili u specijalnih uređaja sa termostatima na temperaturi od 56-58°C sat vremena 5 dana za redom.

* (Metoda sterilizacije je nazvana po Tyndallu, koji ju je predložio.)

Pasterizacija- sterilizacija na 65-70°C u trajanju od 1 sata, koju je predložio Pasteur za uništavanje oblika mikroba bez spora. Pasteriziraju se mlijeko, vino, pivo, voćni sokovi i drugi proizvodi. Mlijeko se pasterizira radi uklanjanja mliječne kiseline i patogenih bakterija (brucela, mikobakterija tuberkuloze, šigela, salmonela, stafilokok itd.). Prilikom pasterizacije piva, voćnih sokova i vina, mikroorganizmi koji uzrokuju različite vrste fermentacija. Pasterizovanu hranu najbolje je čuvati u frižideru.

Kontrolna pitanja

1. Koja je svrha i struktura Koch koagulatora?

2. Koje su metode sterilizacije u mašini za zgrušavanje?

3. Šta je tindalizacija?

4. Šta je pasterizacija?

Sterilizacija ultraljubičastim zračenjem

Kontrolna pitanja

1. Koja svojstva imaju ultraljubičaste zrake?

2. U kojim slučajevima se koristi sterilizacija ultraljubičastim zračenjem?

Mehanička sterilizacija pomoću bakterijskih filtera

Filtraciona sterilizacija se koristi u slučajevima kada se predmeti koji se sterilišu menjaju zagrevanjem. Filtracija se vrši pomoću bakterijskih filtera izrađenih od različitih finoporoznih materijala. Pore filtera moraju biti dovoljno male (do 1 mikron) da osiguraju mehaničko zadržavanje bakterija, pa neki autori filtraciju nazivaju mehaničke metode sterilizacija.

Metoda filtracije se koristi za sterilizaciju hranjivih podloga koje sadrže proteine, serum i neke antibiotike, kao i za odvajanje bakterija od virusa, faga i egzotoksina.

U mikrobiološkoj praksi koriste se Seitz azbestni filteri, membranski filteri i Chamberlant i Berkefeld filteri (svijeće).

Seitz filteri su diskovi napravljeni od mješavine azbesta i celuloze. Njihova debljina je 3-5 mm, prečnik 35-140 mm. Domaća industrija proizvodi filtere dvije marke: “F” (filtriranje) - zadržava suspendirane čestice, ali propušta bakterije; "SF" (sterilizacija) - sa manjim porama, zadržava bakterije, ali propušta viruse. Zgužvane azbestne ploče, kao i ploče sa lomovima i pukotinama, neprikladne su za rad.

Membranski filteri su napravljeni od nitroceluloze. Oni su diskovi bijela Debljine 0,1 mm i prečnika 35 mm. Ovisno o veličini pora, označeni su brojevima 1, 2, 3, 4 i 5 (Tablica 3).

Za sterilizaciju je najpogodniji filter broj 1. Osim navedenih, oni proizvode i tzv. predfilter, dizajniran da oslobodi filtriranu tečnost od krupnih čestica koje se nalaze u njoj.

Chamberlant i Berkefeld filteri (svijeće) su šuplji cilindri, zatvoreni na jednom kraju. Chamberlant svijeće su napravljene od kaolina pomiješanog s pijeskom i kvarcom. Standardizovani su po veličini pora i označeni kao L 1, L 2, L 3 ... L 13. Berkefeld filteri (svijeće) pripremaju se od tla infuzora, prema veličini njihovih pora označeni su V, N, W, što odgovara promjeru pora od 3-4, 4-7, 8-12 mikrona.

Rad s bakterijskim filterima izvodi se na sljedeći način. Filter mora biti pričvršćen u posebnom držaču, koji se ubacuje u prijemnik filtera. Prijemnik je obično Bunsenova boca. Držači, najčešće od nerđajućeg čelika, sastoje se iz dva dela: gornjeg, u obliku cilindra bez dna, i donjeg, nosećeg dela koji se završava cevi. Postavljaju se Seitz filteri sa grubom površinom okrenutom prema gore metalna mreža i sigurno stegnuti vijcima između gornjeg i donjeg dijela držača. Montirani filter je pričvršćen gumenim čepom umetnutim u grlo Bunsenove tikvice. Pamučni štapić se ubacuje u izlaznu cijev tikvice, koja je povezana sa vakuum pumpom. Pripremljena instalacija se umotava u papir i steriliše u autoklavu pod pritiskom od 1 atm 20-30 minuta. Cijeli sklopljeni uređaj naziva se i Seitz filter (slika 13).

Neposredno prije filtracije, izlazni kraj Bunsenove tikvice spojen je gumenom cijevi na pumpu za ulje ili vodu. Spojevi različitih dijelova ispunjeni su parafinom kako bi se stvorilo čvrsto zaptivanje. Filtrirana tečnost se sipa u cilindar aparata i pumpa se uključuje, stvarajući vakuum u prijemniku. Kao rezultat nastale razlike tlaka, filtrirana tekućina prolazi kroz pore filtera u prijemnik, a mikrobi ostaju na površini filtera.

Prije upotrebe, membranski filteri se steriliziraju kuhanjem u destilovanoj vodi. Da se filteri ne bi savijali, prvo se stavljaju u destilovanu vodu, zagrijavaju na temperaturu od 50-60 °C i kuhaju na laganoj vatri 30 minuta, mijenjajući vodu 2-3 puta. Držač filtera i prijemnik se unapred sterilišu, a uređaj se montira u aseptičnim uslovima. Da biste izbjegli kidanje membranskog filtera na metalnoj mreži, ispod njega stavite šalice sterilnog filter papira. Zatim, sterilnom pincetom sa glatkim vrhovima, izvadite membranski filter iz sterilizatora i stavite ga na potpornu rešetku sa sjajnom površinom nadole.

Sveće (Chamberlant) sterilisane u autoklavu povezuju se preko gumene cevi sa prijemnikom i spuštaju u posudu (obično cilindar) sa filtriranom tečnošću. Filtracija se vrši pomoću vakuum pumpe. Sterilni filtrat ulazi u prijemnik, a bakterije se zadržavaju u porama svijeće.

Membranski i azbestni filteri su dizajnirani za jednokratnu upotrebu. Nakon upotrebe, svijeće se ukuvaju voda iz česme, zatim kalcinirano u muflnoj peći.

Prije sljedeće upotrebe svijeće se provjeravaju na integritet. Svijeća se spušta u posudu s vodom i kroz nju se propušta zrak. Ako se na površini svijeće pojave mjehurići zraka, to znači da su na svijeći nastale pukotine i da je neupotrebljiva.

Kontrolna pitanja

1. Koja je metoda sterilizacije filtera? Šta se steriliše ovom metodom?

2. Koje bakterijske filtere poznajete? Kako je instaliran uređaj za filtriranje, koji uslovi se moraju poštovati?

Hemijske metode

Ova vrsta sterilizacije se koristi u ograničenoj mjeri, a služi uglavnom za sprječavanje bakterijske kontaminacije podloga za uzgoj i imunobioloških preparata (cjepiva i seruma).

Za očuvanje vakcina i seruma koriste se mertiolat, borna kiselina, formaldehid itd.

Biološka sterilizacija

Biološka sterilizacija se zasniva na upotrebi antibiotika. Ova metoda se koristi za uzgoj virusa.

Kontrolna pitanja

1. Šta je hemijska sterilizacija i kada se koristi?

2. Šta je biološka sterilizacija?

Glavne metode sterilizacije prikazane su u tabeli. 4.

1 (Sterilizacija je nepotpuna: spore ostaju u steriliziranom materijalu.)

2 (Sterilizacija je nepotpuna: virusi ostaju u steriliziranom materijalu.)

Dezinfekcija

U mikrobiološkoj praksi koriste se različita dezinfekciona sredstva: 3-5% rastvori fenola, 5-10% rastvori lizola, 1-5% rastvori hloramina, 3-6% rastvori vodonik peroksida, 1-5% rastvori formaldehida, rastvori živinog hlorida u razblaženju 1: 1000 (0,1%), 70° alkohol, itd.

Potrošeni patološki materijal (gnoj, izmet, urin, sputum, krv, likvor) se dezinfikuje prije odvodnjavanja u kanalizaciju. Dezinfekcija se vrši suhim izbjeljivačem ili 3-5% otopinom kloramina.

Pipete (gradirane i Pasteur), staklene lopatice, stakalca i pokrovna stakla kontaminirana patološkim materijalom ili kulturama mikroorganizama potapaju se u staklene posude s 3% otopinom fenola ili vodikovog peroksida na jedan dan.

Nakon završetka rada sa infektivnim materijalom, laboratorijski tehničar mora ga tretirati dezinfekcijskim rastvorom. radno mjesto i ruke. Površina radnog stola se obriše komadom vate navlaženom 3% otopinom fenola. Ruke se dezinfikuju 1% rastvorom hloramina. Da biste to učinili, navlažite vatu ili gazu otopinom za dezinfekciju i obrišite lijevu ruku, zatim desnu, a zatim operite ruke toplom vodom i sapunom.

Izbor dezinficijensa, njegova koncentracija i trajanje ekspozicije (izlaganja) zavise od bioloških svojstava mikroba i od sredine u kojoj će dezinficijens doći u kontakt sa patogenim mikroorganizmima. Na primjer, živin klorid, fenol i alkoholi nisu pogodni za dezinfekciju proteinskih supstrata (gnoj, krv, sputum), jer pod njihovim utjecajem dolazi do koagulacije proteina, a koagulirani protein štiti mikroorganizme od djelovanja dezinficijensa.

Prilikom dezinfekcije materijala zaraženog spornim oblicima mikroorganizama koristi se 5% otopina kloramina, 1-2,5% otopine aktiviranog kloramina, 5-10% otopine formalina i druge tvari.

Dezinfekcija, koja se provodi tokom dana tokom rada, naziva se tekućom, a na kraju rada - završnom.

Sredstva za dezinfekciju i uputstva za pripremu radnih rastvora od njih. Klorid vapna je bijeli, grudasti prah sa oštrim mirisom hlora; ne rastvara se u potpunosti u vodi. Baktericidno dejstvo zavisi od sadržaja aktivnog hlora, čija se količina kreće od 28 do 36%. Klor koji sadrži manje od 25% aktivnog hlora nije pogodan za dezinfekciju.

Ako se nepravilno skladišti, izbjeljivač se raspada i gubi dio svog aktivnog hlora. Razgradnju pospješuju toplina, vlaga, sunčeva svjetlost, pa čuvajte izbjeljivač treba čuvati na suvom, tamnom mestu, u dobro zatvorenoj posudi.

Suhi izbjeljivač se koristi za dezinfekciju ljudskih i životinjskih izlučevina (u količini od 200 g na 1 litru izmeta i 10 g na 1 litru urina).

Priprema originalnog 10% bistrenog rastvora izbeljivača. Uzmite 1 kg suhog izbjeljivača, stavite ga u emajliranu kantu i sameljite. Zatim prelijte hladnom vodom do zapremine od 10 litara, dobro promešajte, pokrijte poklopcem i ostavite jedan dan na hladnom mestu. Nakon toga, dobivena 10% pročišćena otopina pažljivo se ocijedi i filtrira kroz nekoliko slojeva gaze ili filtrira kroz gustu krpu. Čuvati u tamnim staklenim bocama, zatvorenim drvenim čepom, na hladnom mestu ne duže od 10 dana. Radni rastvori potrebne koncentracije pripremaju se iz osnovnog rastvora neposredno pre upotrebe. Količina baznog rastvora potrebna za pripremu 0,2-10% bistrenih rastvora izbeljivača data je u tabeli. 5.

Koncentracija pročišćenih otopina izbjeljivača od 0,2 do 10% odabire se ovisno o prirodi predmeta koji se dezinficira i otpornosti patogena.

Kloramin je kristalna supstanca bijele ili žućkaste boje, koja sadrži 24-28% aktivnog hlora. Dobro se otapa u vodi sobne temperature, tako da se rastvori pripremaju neposredno pre dezinfekcije. Koristite 0,2-10% rastvore hloramina. Odnos između procentualne koncentracije otopine i količine kloramina u gramima na 1 i 10 litara dat je u tabeli. 6.

Otopiti hloramin u staklu ili emajlirano posuđe. Prilikom skladištenja otopina kloramina u posudama od tamnog stakla sa brušenim čepom, njihova aktivnost traje do 15 dana.

Aktivirani hloramin. Dezinfekciona svojstva hloramina se poboljšavaju dodavanjem aktivatora u omjeru 1:1 ili 1:2. Kao aktivator koriste se amonijum jedinjenja - amonijum hlorid, sulfat, amonijum nitrat. Aktivirani hloramin se koristi u koncentracijama od 0,5, 1 i 2,5%. Pripremaju se neposredno prije upotrebe. Hloramin i amonijum so se mere odvojeno. Prvo se hloramin otopi u vodi, a zatim se dodaje aktivator.

Prednost aktiviranih otopina kloramina u odnosu na konvencionalne je u tome što dodavanje aktivatora ubrzava oslobađanje aktivnog klora. Stoga lijek ima štetan učinak ne samo na vegetativne oblike mikroorganizama, već i na njihove spore. Aktivirani hloramin se koristi u nižim koncentracijama i uz manju izloženost.

Fenol (karbolna kiselina) je bezbojni kristal u obliku igle sa oštrim, karakterističnim mirisom. Kada su izloženi svjetlosti, zraku i vlazi, kristali poprimaju grimizno-crvenu boju. Čuvajte u zatvorene banke od tamnog stakla i na mestu zaštićenom od svetlosti.

Fenol je rastvorljiv u vodi, alkoholu, etru i masnim uljima. Posjeduje veliku higroskopnost, upija vlagu iz okoline i postaje tečna. Tečna karbonska kiselina sadrži 90% kristalnog fenola i 10% vode.

Koristite 3-5% vodene otopine karbonske kiseline pripremljene od kristalnog fenola i tekuće karbonske kiseline prema shemi datoj u tabeli. 7. Aktivnost fenola se povećava kada se rastvori u vrućoj vodi (40-50°C).

Pažnja! Kristalni fenol ili tečna karbonska kiselina, ako dospije na kožu, može izazvati iritaciju, au visokim koncentracijama - teške opekotine. Stoga se sa karbonskom kiselinom mora postupati s velikom pažnjom. Prilikom pripreme rastvora treba nositi gumene rukavice ili kao poslednje sredstvo Podmažite ruke vazelinom.

Ako vam karbolna kiselina dospije na kožu, odmah je isperite toplom vodom i sapunom ili 40° etil alkoholom.

Bilješka. Za pripremu dezinfekcijskih otopina fenola pogodnije je i sigurnije koristiti tečnu karbonsku kiselinu.

Kontrolna pitanja

1. Koja dezinfekciona sredstva se koriste u mikrobiološkoj praksi?

2. Opišite izgled i osnovna svojstva izbjeljivača, kloramina, fenola.

3. Koje otopine dezinficijensa se koriste za dezinfekciju materijala zaraženog spornim oblicima mikroorganizama?

Vježbajte

Pripremite 2 litre 5% radne otopine bistrenog izbjeljivača; 500 ml 3% rastvora hloramina, 300 ml 1% rastvora aktiviranog hloramina.

Pažnja! Prije nego počnete pripremati rješenja, napravite proračune.

Sterilizacija- neplodnost; uništavanje patogenih i nepatogenih mikroorganizama u vegetativnim i spornim oblicima u bilo kojem materijalu.

Priprema posuđa za sterilizaciju. Laboratorijsko stakleno posuđe mora biti čisto oprano i sterilizirano. Za pranje koristite sapun ili hemijske rastvore deterdženti. Nova jela se prethodno kuvaju u 1-2% rastvoru hlorovodonične kiseline kako bi se izbeglo naknadno ispiranje stakla. Posuđe oprano u tekućoj vodi ispire se destilovanom vodom i suši.

Bakteriološke epruvete. Konične, mat tikvice zatvorene su čepovima od pamučne gaze, koji se sastoje od čvrsto uvijenih smotana vate, prekrivenih slojem gaze. Metalni čepovi u obliku vanjskih čepova također su razvijeni za bakteriološke epruvete. Treba uzeti u obzir da sterilizacija pamučnih čepova na visokim temperaturama dovodi do oslobađanja tvari iz vate koje inhibiraju rast nekih osjetljivih bakterija, kao što je Brucella.

Kada postavljate pipete, umetnite pamučni štapić u gornji kraj. Pasteurove pipete moraju imati zatvorenu kapilaru. Svaka mjerna pipeta je umotana u dugačku traku papira širine 4-5 cm, počevši od izljeva, spiralno cijelom dužinom. Pasterove pipete su umotane u papir, po 10-20 komada, epruvete - po 15-20 komada. Sve vrste pipeta prije i poslije sterilizacije bolje je čuvati u posebnim metalnim kutijama. Čepovi na tikvicama su dodatno prekriveni papirnim poklopcima.

Prije sterilizacije, čiste, sastavljene Petrijeve zdjelice se umotaju u papir, po 3 do 4 komada. Nakon sterilizacije, papir štiti sterilno stakleno posuđe od kontaminacije mikroflorom.

Pre sterilizacije posuđe se stavlja u sušač ne previše čvrsto kako bi se obezbedila cirkulacija vazduha, a vodi se računa da temperatura ne pređe 180°C, jer će se na višoj temperaturi papir i vata ugljenisati. Nakon što je sterilizacija završena, kabinet za sušenje se ne otvara do tada. Sve dok temperatura u njemu ne padne na 70-80°C, jer oštar pad temperature mogu uzrokovati lomljenje stakla.

Ako su posude namijenjene za sterilizaciju hranjivih podloga u njima autoklaviranjem pod pritiskom od najmanje 1 atm, tada nisu prethodno sterilizirane. Prilikom sterilizacije medija tekućom parom ili u autoklavu pod pritiskom ne većim od 0,5 atm. Moraju se koristiti sterilne posude.

Sterilizacija suvim zagrejanim vazduhom. Metoda se koristi za sterilizaciju čistog staklenog posuđa. U tu svrhu koristi se Pasteur pećnica - poseban ormar za sušenje s dvostrukim zidovima. Vanjska strana je obložena materijalom otpornim na toplinu. Na vrhu se nalazi termometar. Automatski električni grijač postavljen je između kućišta otpornog na toplinu i unutrašnjeg metalnog kućišta na dnu. Kada je ormarić za sušenje uključen, zrak u njemu se zagrijava. Kada se postigne podešena temperatura, bilježi se vrijeme početka sterilizacije. Režim sterilizacije: na temperaturi od 155-160°C - ekspozicija 2 sata, na 165-170°C - 1-1,5 sati, na 180°C - 1 sat.Po isteku vremena sterilizacije zagrevanje se prekida.

Autoklaviranje. Ovo je parna sterilizacija pod pritiskom u kombinaciji sa visokom temperaturom specijalni aparati- autoklav. Kada zasićena para naiđe na hladniji predmet, para se kondenzuje u vodu, oslobađajući veliku količinu toplote. Osim toga, smanjuje se volumen pare, što olakšava njeno prodiranje u unutrašnje dijelove materijala koji se sterilizira. Preduvjet je dotok istinski zasićene pare, tako da njen kontakt sa hladnim predmetom dovodi do trenutne kondenzacije i zagrijavanja. Industrija proizvodi vertikalne i horizontalne autoklave.

Vertikalni autoklav je cilindrični metalni kotao sa dvostrukim stijenkama, zatvoren poklopcem. Voda se ulijeva između zidova kroz posebnu slavinu s lijevkom do određenog nivoa. Unutrašnja stijenka kotla je opremljena rupama u gornjem dijelu i slavinom u donjem dijelu kroz koju, kada se voda zagrije, para istiskuje zrak iz kotla. Na autoklav se postavlja metalni zaštitni okvir, a između njega i samog autoklava mora biti slobodan prostor. Autoklav se zagrijava spajanjem na električnu mrežu.

Autoklav se puni materijalom koji se steriliše, zatvaraju se poklopac i slavina kroz koju se točila voda, a donja slavina se privremeno ostavlja otvorena. Zagrijana voda između zidova autoklava ključa, nastala para se diže prema gore i prolazi kroz gornje rupe unutrašnjeg zida u kotao, istiskujući zrak kroz donju otvorenu slavinu. Kada se sav zrak istisne i para počne izlaziti ravnomjerno, donji ventil se zatvara. Kao rezultat, povećava se pritisak pare unutar autoklava. Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada pritisak dostigne zadatu vrijednost (prema mjeraču pritiska). Toplina se podešava tokom sterilizacije, održavajući pritisak pare na istom nivou. Ako se pritisak unutar autoklava pretjerano poveća, postoji sigurnosni ventil kroz koji višak para automatski izlazi.

Kako pritisak pare raste, temperatura u autoklavu se povećava u skladu s tim.

Manometar pokazuje pritisak pare bez uzimanja u obzir atmosferskog pritiska okoline (760 mm Hg). Nakon isteka vremena sterilizacije, autoklav se isključuje. Nakon hlađenja, kada je očitavanje manometra nula, otvorite ventil da ispustite paru.

Horizontalni autoklav se razlikuje od vertikalnog autoklava po dizajnu, ali njegov princip rada je isti.

virusološka sterilizacija patološke životinje

Uzorci obrazaca koji se popunjavaju prilikom slanja patološkog materijala u laboratoriju

Suva toplota se koristi za sterilizaciju laboratorijskog staklenog posuđa. Posuđe pripremljeno za sterilizaciju se lagano stavlja u pećnicu kako bi se osiguralo jednolično i pouzdano zagrijavanje materijala koji se sterilizira. Čvrsto zatvorite vrata ormarića, uključite uređaj za grijanje, zagrijte temperaturu na 160-165 °C i sterilizirajte na ovoj temperaturi 1 sat. Na kraju sterilizacije isključite grijanje, ali ne otvarajte vrata ormarića sve dok pećnica se ohladila; U suprotnom, hladni zrak koji ulazi u ormar može uzrokovati pukotine na vrućem posuđu.

Sterilizacija u Pasteur pećnici može se vršiti na različitim temperaturama i izloženostima (vrijeme sterilizacije) (tabela 1).

Tabela 1. Režim sterilizacije

Da biste odredili temperaturu unutar Pasteurove pećnice, možete koristiti saharozu ili granulirani šećer, koji se karamelizira na temperaturi od 165-170 ° C.

Petrijeve zdjelice se umotaju u papir jedan ili više komada odjednom ili se stavljaju u posebne metalne kutije.

Bilješka. Na visokim temperaturama papir u koji su umotane čašice i pipete i vata požute, pa čak mogu i da se ugljene, pa svaki novi tip papira koji dobije u laboratoriju treba ispitati na prihvaćenim temperaturnim uslovima.

Kontrolna pitanja

1. Šta se podrazumijeva pod pojmom sterilizacija?

2. Kako se vrši sterilizacija?

3. Šta se steriliše kalcinacijom na vatri?

4. Opišite strukturu i način rada Pasteurove peći.

5. Šta se steriliše u Pasteur pećnici?

6. Kako se stakleno posuđe priprema za sterilizaciju?

7. Zašto se hranljivi mediji i gumeni predmeti ne mogu sterilisati u Pasteur pećnici?

Vježbajte

Pripremite Petrijeve zdjelice, graduirane pipete, Pasteurove pipete, epruvete, tikvice i bočice za sterilizaciju.