बंध्याकरण और अन्य सूक्ष्मजीवविज्ञानी उद्देश्य। शुष्क ताप स्टरलाइज़ेशन, सुखाने वाला ओवन और गर्म हवा स्टरलाइज़ेशन

आग पर कैल्सीनेशन.यह नसबंदी का एक विश्वसनीय तरीका है, लेकिन वस्तुओं के खराब होने के कारण इसका उपयोग सीमित है। बैक्टीरियोलॉजिकल लूप्स को इस तरह से स्टरलाइज़ किया जाता है।

सूखी नसबंदीबुखार। एक पाश्चर ओवन में आयोजित (कण्डरा ------

ओवन) 1 घंटे के लिए 160-170 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर। इस विधि का उपयोग प्रयोगशाला के कांच के बर्तनों, कागज में लिपटे पिपेट और कपास प्लग से बंद परीक्षण ट्यूबों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। 170 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर, कागज, रूई और धुंध का जलना शुरू हो जाता है।

दबाव में भाप नसबंदी (आटोक्लेविंग)।सबसे सार्वभौमिक नसबंदी विधि। यह एक आटोक्लेव में किया जाता है - एक जल-भाप स्टरलाइज़र। आटोक्लेव के संचालन का सिद्धांत दबाव पर पानी के क्वथनांक की निर्भरता पर आधारित है।

आटोक्लेव एक दोहरी दीवार वाली धातु की कड़ाही है जिसमें भली भांति बंद करके सील किया गया ढक्कन होता है। आटोक्लेव के तल में पानी डाला जाता है, निष्फल की जाने वाली वस्तुओं को कार्य कक्ष में रखा जाता है, और ढक्कन को पहले कसकर पेंच किए बिना बंद कर दिया जाता है। आंच चालू करें और पानी को उबाल लें। परिणामी भाप कार्य कक्ष से हवा को विस्थापित करती है, जो खुले आउटलेट वाल्व के माध्यम से बाहर आती है। जब सारी हवा विस्थापित हो जाती है और भाप की एक सतत धारा नल से निकलती है, तो नल बंद कर दिया जाता है और ढक्कन सील कर दिया जाता है। दबाव नापने का यंत्र के नियंत्रण में भाप को वांछित दबाव में लाया जाता है। भाप का तापमान दबाव पर निर्भर करता है: सामान्य वायुमंडलीय दबाव पर, दबाव नापने का यंत्र सुई 0 एटीएम पर होती है। - भाप का तापमान 100°C, 0.5 एटीएम पर। - 112°C, 1 बजे। -121°C, 1.5 बजे। - 127°सेल्सियस, 2 बजे। - 134°C. नसबंदी के अंत में, आटोक्लेव को बंद कर दें, दबाव कम होने तक प्रतीक्षा करें, धीरे-धीरे भाप छोड़ें और ढक्कन खोलें। आमतौर पर 1 एटीएम के दबाव पर। 20-40 मिनट के भीतर, सरल पोषक तत्व मीडिया और समाधान जिनमें प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट नहीं होते हैं, निष्फल हो जाते हैं, ड्रेसिंग, लिनन। विसंक्रमित की जाने वाली सामग्री भाप के लिए पारगम्य होनी चाहिए। बड़ी मात्रा में सामग्रियों को स्टरलाइज़ करते समय ( शल्य चिकित्सा सामग्री) समय बढ़ाकर 2 घंटे कर दिया गया है। 2 एटीएम के दबाव पर. पैथोलॉजिकल सामग्री और खर्च किए गए माइक्रोबियल संस्कृतियों को कीटाणुरहित करें।

शर्करा युक्त पोषक तत्व मीडिया को 1 एटीएम पर निष्फल नहीं किया जा सकता है, क्योंकि वे कारमेलाइज़ होते हैं, इसलिए उन्हें बहने वाली भाप के साथ आंशिक नसबंदी, या 0.5 एटीएम पर ऑटोक्लेविंग के अधीन किया जाता है।

नसबंदी व्यवस्था को नियंत्रित करने के लिए जैविक और भौतिक तरीकों का उपयोग किया जाता है। जैविक विधि इस तथ्य पर आधारित है कि बैसिलस स्टीयरोथर्मोफिलस बीजाणुओं को निष्फल की जाने वाली सामग्री के साथ एक साथ रखा जाता है, जो 15 मिनट में 121 डिग्री सेल्सियस पर मर जाते हैं। बंध्याकरण के बाद पोषक माध्यम पर बीजाणु नहीं उगने चाहिए। भौतिक विधियह उन पदार्थों के उपयोग पर आधारित है जिनका एक निश्चित गलनांक होता है, उदाहरण के लिए, सल्फर (119°C), बेंजोइक एसिड (120°C)। सूखी डाई (फुचिन) के साथ मिश्रित पदार्थ वाली सीलबंद ट्यूबों को निष्फल की जाने वाली सामग्री के साथ एक आटोक्लेव में रखा जाता है। यदि आटोक्लेव में तापमान पर्याप्त है, तो पदार्थ पिघल जाएगा और डाई का रंग बदल देगा।

प्रवाह योग्य नसबंदीभाप को कोच उपकरण में या आटोक्लेव में ढक्कन खोलकर और आउटलेट वाल्व खुला रखकर बाहर निकाला जाता है। उपकरण में पानी को 100°C तक गर्म किया जाता है। परिणामी भाप एम्बेडेड सामग्री से होकर गुजरती है और उसे निष्फल कर देती है। 100°C पर एक भी उपचार बीजाणुओं को नहीं मारता है। इसलिए, आंशिक नसबंदी विधि का उपयोग किया जाता है - 30 मिनट के लिए लगातार 3 दिन, बीच में एक दिन के लिए छोड़ दें कमरे का तापमान. 100°C पर गर्म करने से बीजाणुओं का तापीय सक्रियण होता है, जिसके परिणामस्वरूप वे अगले दिन तक वानस्पतिक रूप में अंकुरित हो जाते हैं और दूसरे और तीसरे तापन के दौरान मर जाते हैं। परिणामस्वरूप, केवल पोषक माध्यम को बहती भाप से निष्फल किया जा सकता है, क्योंकि बीजाणुओं के अंकुरण के लिए पोषक तत्वों की उपस्थिति आवश्यक है।

यह एक दोहरी दीवार वाला धातु सिलेंडर है जो बाहर से धातु के आवरण से ढका होता है। इसे कई स्क्रू का उपयोग करके एक विशाल ढक्कन के साथ भली भांति बंद करके सील किया गया है। यह एक सुरक्षा वाल्व और एक भाप वाल्व के साथ एक दबाव नापने का यंत्र से सुसज्जित है।

नसबंदी से पहले, आसुत जल को आवरण पर इंगित रेखा तक पानी मापने वाले गिलास के साथ एक फ़नल के माध्यम से आटोक्लेव में डाला जाता है। स्टरलाइज़ेशन के लिए सामग्री को स्टरलाइज़िंग कक्ष में लोड किया जाता है, ढक्कन के साथ कसकर बंद किया जाता है, स्क्रू किया जाता है और हीटिंग स्रोत चालू किया जाता है। इस स्थिति में, भाप वाल्व खुला छोड़ दिया जाता है। उबलने के दौरान उत्पन्न भाप आटोक्लेव की दीवारों के बीच से गुजरती है और आंतरिक दीवार में छेद के माध्यम से कक्ष में प्रवेश करती है। गर्म करते समय, हवा पहले भाप वाल्व के माध्यम से आटोक्लेव से बाहर आती है, और फिर भाप। शुष्क भाप की एक सतत धारा का निकलना आटोक्लेव से हवा के पूर्ण विस्थापन को इंगित करता है: नल बंद है, और उसी क्षण से आटोक्लेव में दबाव धीरे-धीरे बढ़ना शुरू हो जाता है, दबाव नापने का यंत्र पर सुई ऊपर उठ जाती है। नसबंदी की शुरुआत उस क्षण से मानी जाती है जब दबाव नापने का यंत्र सुई वांछित दबाव तक पहुंच जाती है।

चित्र 3

दबाव नापने का यंत्र की रीडिंग इससे मेल खाती है निश्चित तापमानआटोक्लेव में भाप: 0.50 एमपीए - 112 डिग्री सेल्सियस, 0.1 एमपीए - 120, 0.15 एमपीए - 127, 0.2 एमपीए - 134 डिग्री सेल्सियस।

आटोक्लेव में सामग्री को अक्सर 0.1 एमपीए पर 20-30 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। नसबंदी के अंत में, हीटिंग स्रोत को बंद कर दें (दबाव नापने का यंत्र सुई धीरे-धीरे शून्य तक पहुंच जाती है)। इसके बाद स्टीम वाल्व खोलें और बची हुई भाप को बाहर निकाल दें। फिर सावधानी से ढक्कन खोलें और खोलें। पूरी तरह ठंडा होने के बाद निष्फल सामग्री को हटा दें।

आटोक्लेव का उपयोग व्यंजन, उपकरण, संस्कृति मीडिया (जिलेटिन और कार्बोहाइड्रेट वाले मीडिया को छोड़कर), ड्रेसिंग आदि को कीटाणुरहित करने के लिए किया जा सकता है। काम करते समय, आपको सुरक्षा नियमों का पालन करना चाहिए। जिन व्यक्तियों के पास आटोक्लेव का उपयोग करने के अधिकार का प्रमाण पत्र है, उन्हें काम करने की अनुमति है। आटोक्लेव की सेवाक्षमता की जाँच बॉयलर निरीक्षणालय द्वारा की जाती है।

कोच उपकरण (चित्र 4) एक धातु सिलेंडर है जो बाहर की तरफ ऐसी सामग्री (लिनोलियम, एस्बेस्टस) से ढका होता है जो अच्छी तरह से गर्मी का संचालन नहीं करता है। नीचे पानी डाला जाता है और स्टरलाइज़िंग सामग्री को स्टैंड के ऊपर रखा जाता है। उपकरण एक शंक्वाकार ढक्कन के साथ बंद है, जिसमें थर्मामीटर और भाप आउटलेट के लिए छेद हैं। नीचे पानी निकालने के लिए एक नल है। 30-60 मिनट के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर बहती भाप के साथ नसबंदी की जाती है। इस मोड में, बीजाणु बनाने वाले और गैर-बीजाणु बनाने वाले सूक्ष्मजीवों की वनस्पति कोशिकाएं मर जाती हैं। 18-20 घंटों के अंतराल के साथ तीन दिनों में 30-60 मिनट के लिए आंशिक नसबंदी (तीन बार) आपको वनस्पति कोशिकाओं में बीजाणुओं के अंकुरण के लिए स्थितियां बनाने और उनसे छुटकारा पाने की अनुमति देती है। नसबंदी के बीच के समय अंतराल में, बीजाणु अंकुरित होते हैं और बाद में गर्म करने के दौरान मर जाते हैं। कोच उपकरण उन सामग्रियों को कीटाणुरहित करता है जो 100 डिग्री सेल्सियस (जिलेटिन, दूध, कार्बोहाइड्रेट मीडिया, आदि) से ऊपर तापमान का सामना नहीं कर सकते हैं।

प्रोटीन मीडिया और रक्त सीरम जो 100 डिग्री सेल्सियस के तापमान को सहन नहीं कर सकते हैं उन्हें पानी के स्नान में 56-58 डिग्री सेल्सियस पर आंशिक रूप से निष्फल किया जाता है।

सुखाने वाली कैबिनेट (पाश्चर ओवन) (चित्र 5) एक धातु की दोहरी दीवार वाली कैबिनेट है जो शीर्ष पर एस्बेस्टस से ढकी होती है। ऊपरी दीवार में थर्मामीटर और वेंटिलेशन के लिए छेद हैं। गर्म हवा दीवारों के बीच से नीचे की ओर उठती है और ऊपरी उद्घाटन के माध्यम से कैबिनेट में प्रवेश करती है, जहां निष्फल की जाने वाली सामग्री को अलमारियों पर रखा जाता है। 150 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए, 165-170 डिग्री सेल्सियस पर - 45 मिनट के लिए, 180 डिग्री सेल्सियस पर - 15 मिनट के लिए सूखी गर्मी के साथ नसबंदी की जाती है। कांच के बर्तनों को पाश्चर ओवन में निष्फल किया जाता है। नसबंदी के बाद, कैबिनेट को अलग कर दिया जाता है हीटिंग स्रोत और पूर्ण शीतलन के बाद ही खोला जाता है।

बैक्टीरियल फिल्टरबिना गरम किए तरल पदार्थों को जीवाणुरहित करने के लिए उपयोग किया जाता है। इनमें चेम्बरलेंट, बर्कफेल्ड मोमबत्तियाँ और सेट्ज़ एस्बेस्टस फिल्टर (प्लेट्स) शामिल हैं।

फ़िल्टर मोमबत्तियाँ (चित्र 6) बारीक छिद्रित पदार्थों से बने खोखले सिलेंडर हैं: काओलिन एक मिश्रण के साथ रेत क्वार्ट्ज(चेम्बरलेंट मोमबत्तियाँ) और इन्फ्यूसोरियल अर्थ (बर्कफेल्ड मोमबत्तियाँ)। चेम्बरलेंट मोमबत्तियाँ हैं कई आकारवे छिद्र जिनसे होकर रोगाणु गुजरते हैं। मोमबत्तियाँ जो बड़े बैक्टीरिया को गुजरने की अनुमति देती हैं उन्हें L9, L1(bis), L3, मध्यम वाले - L5, L7, सबसे छोटे वाले - L9, अक्षरों द्वारा निर्दिष्ट किया जाता है। एल11 , एल13 बर्कफेल्ड मोमबत्तियाँ सरंध्रता द्वारा निर्दिष्ट की जाती हैं डब्ल्यू, एन, वी(यू ब्रांड वाली मोमबत्तियों में सबसे बड़े छिद्र होते हैं)।

सेट्ज़ फ़िल्टर विभिन्न आकारों की एस्बेस्टस प्लेटें हैं। स्टरलाइज़ेशन के लिए उपकरण लगाते समय प्लेट को बीच में जाली पर रखा जाता है धातु डिस्क(बीच में एक छेद के साथ), जिन्हें स्क्रू के साथ कसकर दबाया जाता है। माउंटेड फिल्टर को एक स्टॉपर के माध्यम से एक साइड आउटलेट (बन्सेन फ्लास्क) और एक रबर ट्यूब के साथ फ्लास्क में डाला जाता है, कागज में लपेटा जाता है और 20-30 मिनट के लिए 120 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है।

सामग्री को फ़िल्टर करने के लिए, बुन्सेन फ्लास्क में एक रबर ट्यूब को एक दुर्लभ तेल के साथ जोड़कर उसमें एक वैक्यूम बनाएं हैंड पंपकोमोव्स्की या एक इलेक्ट्रिक वैक्यूम पंप।

काम पूरा करना. सूक्ष्मजीवों की खेती इष्टतम तापमान स्थितियों में की जाती है। इस प्रयोजन के लिए, प्रयोगशालाएँ वायु या जल थर्मोस्टेट का उपयोग करती हैं।

(चित्र 7) है धातु कैबिनेटदोहरी दीवारों वाला, जिसके बीच पानी या हवा की एक परत होती है। थर्मोस्टेट का बाहरी भाग एक ऐसी सामग्री से ढका होता है जो गर्मी का खराब संचालन करता है (एस्बेस्टस, लिनोलियम)।

चावल। 4, 5, 6.

थर्मोस्टेट के अंदर विकसित सूक्ष्मजीवों की बीज सामग्री रखने के लिए अलमारियाँ हैं। थर्मोस्टेट में एक स्थिर तापमान थर्मोस्टेट का उपयोग करके बनाए रखा जाता है, जिसे थर्मोस्टेट के शीर्ष आवरण में बनाया जाता है। थर्मोस्टेट उपकरण पदार्थों के रैखिक विस्तार के सिद्धांत पर आधारित है। थर्मोरेगुलेटर थर्मल विस्तार (पीतल, जस्ता) के विभिन्न गुणांक वाले किन्हीं दो धातुओं का एक मिश्र धातु है या अल्कोहल से भरा एक धातु "कुशन", अल्कोहल और ईथर, पारा या अन्य पदार्थों का मिश्रण है जो एक निश्चित तापमान पर अपनी मात्रा बदलते हैं। जब थर्मोस्टेट स्थापित मानदंड से ऊपर गर्म होता है, तो धातुएं फैलती हैं, संपर्क खुल जाते हैं और आगे गर्मी का प्रवाह स्वचालित रूप से विलंबित हो जाता है। तापमान गिरने के बाद यह चालू हो जाता है बिजलीऔर गर्मी का प्रवाह फिर से शुरू हो जाता है।

सूखी गर्मी या गर्म हवा के साथ नसबंदी पाश्चर ओवन (सुखाने) में की जाती है सूखी-गर्मी वाले ओवन). पाश्चर ओवन एक दोहरी दीवार वाली कैबिनेट है जो गर्मी प्रतिरोधी सामग्री - धातु और एस्बेस्टस से बनी होती है। कैबिनेट को गर्म करें गैस बर्नरया विद्युत ताप उपकरण। विद्युत रूप से गर्म अलमारियाँ नियामकों से सुसज्जित हैं जो सुनिश्चित करती हैं आवश्यक तापमान. तापमान को नियंत्रित करने के लिए कैबिनेट की ऊपरी दीवार के छेद में एक थर्मामीटर डाला जाता है।

सूखी गर्मी का उपयोग प्रयोगशाला के कांच के बर्तनों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन के लिए तैयार किए गए बर्तनों को स्टरलाइज़ की जा रही सामग्री की एक समान और विश्वसनीय हीटिंग सुनिश्चित करने के लिए ओवन में लोड किया जाता है। कैबिनेट के दरवाज़े को कसकर बंद करें, हीटिंग डिवाइस चालू करें, तापमान को 160-165 डिग्री सेल्सियस पर लाएं और 1 घंटे के लिए इस तापमान पर स्टरलाइज़ करें। स्टरलाइज़ेशन के अंत में, हीटिंग बंद कर दें, लेकिन कैबिनेट का दरवाज़ा तब तक न खोलें जब तक ओवन ठंडा हो गया है; अन्यथा ठंडी हवा, कैबिनेट में प्रवेश करने से गर्म कुकवेयर में दरारें पड़ सकती हैं।

पाश्चर ओवन में स्टरलाइज़ेशन अलग-अलग तरीकों से किया जा सकता है तापमान की स्थितिऔर एक्सपोज़र (नसबंदी समय) (तालिका 1)।

तालिका 1. बंध्याकरण मोड

तरल पदार्थ (पोषक तत्व मीडिया, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान, आदि), रबर और सिंथेटिक सामग्री से बनी वस्तुओं को सूखी गर्मी से निष्फल नहीं किया जा सकता है, क्योंकि तरल पदार्थ उबल कर बाहर निकल जाते हैं, और रबर और सिंथेटिक सामग्री पिघल जाती है।

पाश्चर ओवन में नसबंदी को नियंत्रित करने के लिए, रेशम के धागों को बीजाणु बनाने वाले बैक्टीरिया के कल्चर में गीला किया जाता है, सुखाया जाता है, एक बाँझ पेट्री डिश में रखा जाता है और पाश्चर ओवन में रखा जाता है। 1 घंटे के लिए 165 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर स्टरलाइज़ेशन किया जाता है (नियंत्रण के लिए, कुछ धागों को कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है)। फिर निष्फल और नियंत्रण धागों को पेट्री डिश में अगर की सतह पर रखा जाता है या शोरबा के साथ टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और 2 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। पर उचित संचालनपोषक मीडिया के साथ टेस्ट ट्यूब या डिश में पाश्चर ओवन जहां निष्फल धागे रखे गए थे, वहां कोई वृद्धि नहीं होगी, क्योंकि जीवाणु बीजाणु मर जाएंगे, जबकि धागे पर जीवाणु बीजाणु जो निष्फल नहीं थे (नियंत्रण) अंकुरित होंगे और विकास पोषक मीडिया पर नोट किया जाएगा .

पाश्चर ओवन के अंदर का तापमान निर्धारित करने के लिए, आप सुक्रोज या दानेदार चीनी का उपयोग कर सकते हैं, जो 165-170 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर कारमेलाइज़ होता है।

पाश्चर ओवन में नसबंदी के लिए प्रयोगशाला कांच के बर्तन तैयार करना. नसबंदी से पहले, प्रयोगशाला के कांच के बर्तन (पेट्री डिश, स्नातक और पाश्चर पिपेट, शीशियां, फ्लास्क, टेस्ट ट्यूब) को अच्छी तरह से धोया जाना चाहिए, सुखाया जाना चाहिए और कागज में लपेटा जाना चाहिए, अन्यथा नसबंदी के बाद वे फिर से वायु बैक्टीरिया से दूषित हो सकते हैं।

पेट्री डिश को एक समय में एक या अधिक टुकड़ों में कागज में लपेटा जाता है या विशेष धातु के बक्सों में रखा जाता है।

परीक्षण सामग्री को मुंह में प्रवेश करने से रोकने के लिए पिपेट के ऊपरी सिरों में रुई के फाहे डाले जाते हैं। स्नातक पिपेट को 4-5 सेमी चौड़ी कागज की लंबी पट्टियों में लपेटा जाता है। लपेटे गए पिपेट का आयतन कागज पर अंकित होता है। पेंसिल केस में, स्नातक किए गए पिपेट को कागज में अतिरिक्त लपेटे बिना निष्फल किया जाता है।

टिप्पणी. यदि पिपेट पर ग्रेजुएशन खराब दिखाई देता है, तो इसे नसबंदी से पहले बहाल कर दिया जाता है। पिपेट पर लगाएं ऑइल पेन्टऔर, पेंट को सूखने की अनुमति दिए बिना, बेरियम सल्फेट पाउडर को कपड़े से इसमें रगड़ दिया जाता है। इसके बाद कपड़े से अतिरिक्त पेंट हटा दें, जो केवल ग्रेजुएशन नॉच में ही रह जाता है। इस तरह से उपचारित पिपेट को धोना चाहिए।

पाश्चर पिपेट के नुकीले सिरों को बर्नर की लौ में सील कर दिया जाता है और एक बार में 3-5 टुकड़ों में कागज में लपेट दिया जाता है। पाश्चर पिपेट को सावधानी से लपेटा जाना चाहिए ताकि केशिकाओं के सीलबंद सिरे टूट न जाएं।

शीशियाँ, फ्लास्क, टेस्ट ट्यूब कपास-धुंध स्टॉपर्स के साथ बंद हैं। कॉर्क को बर्तन की गर्दन में उसकी लंबाई का 2/3 भाग फिट होना चाहिए, बहुत तंग नहीं, लेकिन ढीला भी नहीं। प्रत्येक बर्तन (टेस्ट ट्यूब को छोड़कर) पर स्टॉपर्स के ऊपर एक पेपर कैप लगाई जाती है। टेस्ट ट्यूबों को 5-50 के समूह में एक साथ बांधा जाता है और कागज से लपेटा जाता है।

टिप्पणी. पर उच्च तापमानकागज जिसमें कप और पिपेट लपेटे जाते हैं, और रूई पीली हो जाती है और जल भी सकती है, इसलिए हर कोई नई किस्मप्रयोगशाला द्वारा प्राप्त कागज का परीक्षण स्वीकृत तापमान स्थितियों पर किया जाना चाहिए।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. नसबंदी शब्द का क्या अर्थ है?

2. नसबंदी कैसे की जाती है?

3. आग पर कैल्सीनेशन द्वारा क्या निष्फल किया जाता है?

4. पाश्चर ओवन की संरचना और संचालन मोड का वर्णन करें।

5. पाश्चर ओवन में क्या निष्फल किया जाता है?

6. नसबंदी के लिए कांच के बर्तन कैसे तैयार किए जाते हैं?

7. पाश्चर ओवन में पोषक तत्व मीडिया और रबर की वस्तुओं को निष्फल क्यों नहीं किया जा सकता है?

व्यायाम

स्टरलाइज़ेशन के लिए पेट्री डिश, ग्रेजुएटेड पिपेट, पाश्चर पिपेट, टेस्ट ट्यूब, फ्लास्क और शीशियाँ तैयार करें।

नसबंदी- बांझपन; किसी भी सामग्री में वनस्पति और बीजाणु रूपों में रोगजनक और गैर-रोगजनक सूक्ष्मजीवों का विनाश।

नसबंदी के लिए व्यंजन तैयार करना। कांच के बने पदार्थसाफ-सुथरा धोना और कीटाणुरहित करना चाहिए। धोने के लिए साबुन या रासायनिक घोल का उपयोग करें डिटर्जेंट. नए व्यंजन 1-2% घोल में पहले से उबाले जाते हैं हाइड्रोक्लोरिक एसिड का, कांच के बाद के लीचिंग से बचने के लिए। बहते पानी में धोए गए बर्तनों को आसुत जल से धोया जाता है और सुखाया जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल ट्यूब. शंक्वाकार, मैट फ्लास्क कपास-धुंध स्टॉपर्स के साथ बंद होते हैं, जिसमें धुंध की एक परत से ढके कपास ऊन के कसकर मुड़े हुए रोल होते हैं। बैक्टीरियोलॉजिकल टेस्ट ट्यूब के लिए बाहरी कैप के रूप में धातु स्टॉपर्स भी विकसित किए गए हैं। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि उच्च तापमान पर कॉटन प्लग को स्टरलाइज़ करने से कॉटन वूल से ऐसे पदार्थ निकलते हैं जो ब्रूसेला जैसे कुछ संवेदनशील बैक्टीरिया के विकास को रोकते हैं।

पिपेट स्थापित करते समय, ऊपरी सिरे में एक कपास झाड़ू डालें। पाश्चर पिपेट में एक सीलबंद केशिका होनी चाहिए। प्रत्येक मापने वाले पिपेट को टोंटी से शुरू करके, उसकी पूरी लंबाई के साथ पेचदार तरीके से, 4-5 सेमी चौड़ी कागज की एक लंबी पट्टी में लपेटा जाता है। पाश्चर पिपेट को कागज में लपेटा जाता है, प्रत्येक 10-20 टुकड़े, टेस्ट ट्यूब - 15-20 टुकड़े प्रत्येक। नसबंदी से पहले और बाद में सभी प्रकार के पिपेट को विशेष धातु के डिब्बों में संग्रहित करना बेहतर होता है। फ्लास्क पर लगे स्टॉपर्स अतिरिक्त रूप से पेपर कैप से ढके होते हैं।

स्टरलाइज़ेशन से पहले, साफ, एकत्रित पेट्री डिश को 3 से 4 टुकड़ों में कागज में लपेटा जाता है। नसबंदी के बाद, कागज रोगाणुहीन कांच के बर्तनों को माइक्रोफ्लोरा द्वारा संदूषण से बचाता है।

स्टरलाइज़ेशन से पहले, हवा के संचार को सुनिश्चित करने के लिए बर्तनों को सुखाने वाले कैबिनेट में बहुत कसकर नहीं रखा जाता है, और इस बात का ध्यान रखा जाता है कि तापमान 180 डिग्री सेल्सियस से अधिक न हो, क्योंकि उच्च तापमान पर कागज और रूई जल जाएगी। स्टरलाइज़ेशन पूरा होने के बाद, तब तक सुखाने वाली कैबिनेट नहीं खोली जाती है। जब तक इसमें तापमान 70-80?C तक न गिर जाए, क्योंकि तेज़ गिरावटतापमान के कारण कांच टूट सकता है।

यदि बर्तनों का उद्देश्य कम से कम 1 एटीएम के दबाव में आटोक्लेविंग द्वारा उनमें पोषक तत्व मीडिया को स्टरलाइज़ करना है, तो वे पूर्व-स्टेरलाइज़ नहीं हैं। मीडिया को बहती भाप से या आटोक्लेव में 0.5 एटीएम से अधिक के दबाव में स्टरलाइज़ करते समय। बाँझ कंटेनरों का उपयोग किया जाना चाहिए।

शुष्क गर्म हवा से बंध्याकरण। इस विधि का उपयोग साफ कांच के बर्तनों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। इस प्रयोजन के लिए, एक पाश्चर ओवन का उपयोग किया जाता है - दोहरी दीवारों वाला एक विशेष सुखाने वाला कैबिनेट। बाहर गर्मी-रोधी सामग्री से सुसज्जित है। सबसे ऊपर एक थर्मामीटर है. तापरोधी अस्तर और भीतरी भाग के बीच धातु शरीरनीचे एक स्वचालित विद्युत ताप तत्व रखा गया है। जब सुखाने वाली कैबिनेट चालू होती है, तो उसके अंदर की हवा गर्म हो जाती है। एक बार निर्धारित तापमान पर पहुंचने के बाद, नसबंदी का प्रारंभ समय नोट किया जाता है। नसबंदी मोड: 155-160 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर - 2 घंटे के लिए एक्सपोज़र, 165-170 डिग्री सेल्सियस पर - 1-1.5 घंटे, 180 डिग्री सेल्सियस पर - 1 घंटा। नसबंदी समय के बाद, हीटिंग बंद कर दिया जाता है।

आटोक्लेविंग। यह उच्च तापमान के साथ संयुक्त दबाव में भाप नसबंदी है विशेष उपकरण- आटोक्लेव. जब संतृप्त भाप किसी ठंडी वस्तु से टकराती है, तो भाप पानी में संघनित हो जाती है, जिसके परिणामस्वरूप पानी निकलता है एक बड़ी संख्या कीगर्मी। इसके अलावा, भाप की मात्रा कम हो जाती है, जिससे निष्फल की जा रही सामग्री के आंतरिक भागों में इसके प्रवेश की सुविधा होती है। एक शर्त वास्तव में संतृप्त भाप की आपूर्ति है, ताकि किसी ठंडी वस्तु के साथ इसके संपर्क से तत्काल संघनन और ताप हो सके। उद्योग ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज आटोक्लेव का उत्पादन करता है।

ऊर्ध्वाधर आटोक्लेव एक दोहरी दीवार वाली बेलनाकार धातु की कड़ाही है, जिसे ढक्कन से सील किया जाता है। एक फ़नल वाले विशेष नल के माध्यम से दीवारों के बीच एक निश्चित स्तर तक पानी डाला जाता है। बॉयलर की आंतरिक दीवार ऊपरी हिस्से में छेद और निचले हिस्से में एक नल से सुसज्जित है, जिसके माध्यम से पानी गर्म होने पर भाप बॉयलर से हवा को विस्थापित करती है। एक धातु सुरक्षात्मक फ्रेम आटोक्लेव के शीर्ष पर रखा गया है, और इसके और आटोक्लेव के बीच ही होना चाहिए मुक्त स्थान. आटोक्लेव को विद्युत नेटवर्क से जोड़कर गर्म किया जाता है।

आटोक्लेव में स्टरलाइज़ की जाने वाली सामग्री भरी हुई है, ढक्कन और नल जिसके माध्यम से पानी डाला गया था, बंद कर दिया गया है, और नीचे का नल अस्थायी रूप से खुला छोड़ दिया गया है। आटोक्लेव की दीवारों के बीच गर्म पानी उबलता है, जिसके परिणामस्वरूप भाप ऊपर उठती है और भीतरी दीवार के ऊपरी छिद्रों से होकर बॉयलर में गुजरती है, निचले खुले नल के माध्यम से हवा को बाहर धकेलती है। जब सारी हवा विस्थापित हो जाती है और भाप एक समान धारा में बाहर आने लगती है, तो निचला वाल्व बंद हो जाता है। परिणामस्वरूप, आटोक्लेव के अंदर भाप का दबाव बढ़ जाता है। नसबंदी की शुरुआत उस क्षण को माना जाता है जब दबाव किसी दिए गए मान (दबाव गेज के अनुसार) तक पहुंच जाता है। नसबंदी के दौरान गर्मी को समायोजित किया जाता है, जिससे भाप का दबाव समान स्तर पर बना रहता है। यदि आटोक्लेव के अंदर दबाव अत्यधिक बढ़ जाता है, तो एक सुरक्षा वाल्व होता है जिसके माध्यम से अतिरिक्त भाप स्वचालित रूप से निकल जाती है।

जैसे-जैसे भाप का दबाव बढ़ता है, आटोक्लेव में तापमान तदनुसार बढ़ता जाता है।

दबाव नापने का यंत्र आसपास को ध्यान में रखे बिना भाप का दबाव दिखाता है वायु - दाब(760 एमएमएचजी)। नसबंदी का समय समाप्त होने के बाद, आटोक्लेव बंद कर दिया जाता है। ठंडा होने के बाद, जब दबाव नापने का यंत्र की रीडिंग शून्य हो, तो भाप छोड़ने के लिए वाल्व खोलें।

क्षैतिज आटोक्लेव डिज़ाइन में ऊर्ध्वाधर आटोक्लेव से भिन्न होता है, लेकिन इसका संचालन सिद्धांत समान होता है।

वायरोलॉजिकल नसबंदी पैथोलॉजिकल जानवर

रोग संबंधी सामग्री को प्रयोगशाला में भेजते समय भरे जाने वाले प्रपत्रों के नमूने

1. ज्वलनशील(अक्षांश से। फ्लेम्मा - लौ और फ्र। फ्लेम्ब ई - बर्न) - एक लौ में छोटी धातु या कांच की वस्तुओं को कैल्सीनेशन द्वारा नसबंदी। इस प्रकार, बैक्टीरियोलॉजिकल लूप, धातु चिमटी, ग्लास स्पैटुला और ट्यूब, ग्लास स्लाइड आदि को निष्फल किया जाता है। लौ का तापमान लगभग 1000ºC होता है। जब कैल्सीन किया जाता है, तो सभी सूक्ष्मजीव (वानस्पतिक और बीजाणु रूप) जल जाते हैं। यह नसबंदी का एक तेज़ और विश्वसनीय तरीका है।

2. उबलना. सबमें से अधिक है सरल तरीकेनसबंदी. एक स्टरलाइज़र - धातु में किया जाता है आयताकार बक्सानिष्फल वस्तुओं को रखने के लिए नीचे एक ढक्कन और एक जाली के साथ। इसमें पानी डालें और उबाल आने तक गर्म करें (इलेक्ट्रिक हीटिंग या आग पर)। लगभग 100 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर उबालना 15-30 मिनट से 2 घंटे तक रह सकता है। छोटी धातु या कांच की वस्तुओं - सिरिंज, सुई, कांच की ट्यूब आदि को जीवाणुरहित करें। इस मामले में, सूक्ष्मजीवों के वानस्पतिक रूप और कुछ बीजाणु मर जाते हैं। कीटाणुरहित की जा रही सामग्री को उबलते पानी से जलाने का भी अभ्यास किया जाता है।

3. सूखी गर्मी नसबंदी.पाश्चर ओवन या ओवन में गर्म हवा के साथ उत्पादित। पाश्चर ओवन एक दोहरी दीवार वाली कैबिनेट है जो थर्मल इन्सुलेशन के लिए बाहर एस्बेस्टस से सुसज्जित है। कैबिनेट के अंदर हैं धातु की अलमारियाँउन छिद्रों के साथ जिन पर रोगाणुरहित की जाने वाली सामग्री रखी जाती है। बिजली की हीटिंग। इन तापमानों तक पहुंचने (थर्मामीटर द्वारा नियंत्रित) के क्षण से 1-2 घंटे के लिए 160-180 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर नसबंदी की जाती है। सूखी गर्मी का उपयोग मुख्य रूप से कांच के बर्तनों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है - पेट्री डिश, पिपेट, स्पैटुला (कागज में लपेटा हुआ), साथ ही टेस्ट ट्यूब और फ्लास्क। यह तकनीक विश्वसनीय है - सूक्ष्मजीवों के गैर-बीजाणु और बीजाणु रूप मर जाते हैं। कागज में लपेटकर और कीटाणुरहित करके, सामग्री को संग्रहीत किया जा सकता है।

4. प्रवाहित भाप नसबंदी. गर्म आचरण किया नम हवाकोच तंत्र में. कोच उपकरण (बॉयलर) एक धातु सिलेंडर है, जो पैरों पर हो सकता है और लिनोलियम से ढका हो सकता है। उपकरण में इतना पानी डाला जाता है कि वह कगार तक न पहुंचे, जिस पर छेद वाला एक धातु का घेरा रखा जाता है और उसके ऊपर कीटाणुरहित करने वाली सामग्री रख दी जाती है। उपकरण को शंक्वाकार ढक्कन के साथ कसकर बंद कर दिया जाता है और भाप को बाहर निकालने और आग पर गर्म करने के लिए बीच में एक छेद होता है। जब पानी उबलता है, तो ढक्कन के छेद से लगभग 100 ºС के तापमान के साथ गर्म जल वाष्प एक मजबूत धारा में "प्रवाह" करेगा। इस क्षण से, नसबंदी का प्रारंभ समय नोट किया जाता है। बहती भाप से रोगाणुनाशन 45 मिनट से 1.5 घंटे तक चलता है, जो निर्जलित की जाने वाली सामग्री की मात्रा पर निर्भर करता है। ऐसे पोषक मीडिया को स्टरलाइज़ करें जिसे 100 डिग्री सेल्सियस से ऊपर गर्म नहीं किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, एमपीजी (100 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर यह द्रवीभूत हो जाता है और जमता नहीं है)। नसबंदी की यह विधि पूरी तरह से विश्वसनीय नहीं है - सूक्ष्मजीवों के केवल वानस्पतिक रूप पूरी तरह से नष्ट हो जाते हैं, लेकिन बीजाणु संरक्षित रहते हैं। कोच तंत्र में मीडिया की पूर्ण नसबंदी प्राप्त करने के लिए, आंशिक नसबंदी का उपयोग किया जाता है।

5. दबाव में भाप नसबंदी (आटोक्लेविंग)।यह एक आटोक्लेव में संतृप्त जल वाष्प के साथ किया जाता है। आटोक्लेव हैं विभिन्न डिज़ाइन. ऊर्ध्वाधर आटोक्लेव एक विशाल दोहरी दीवारों वाला बॉयलर है, जो बाहर की तरफ एक धातु के आवरण से घिरा होता है, जिसमें एक भारी टिका हुआ ढक्कन होता है जो बॉयलर से कसकर बंधा होता है। बॉयलर के निचले भाग में एक फ़नल और एक नल होता है जिसके माध्यम से आंतरिक बॉयलर और आवरण के बीच खाली जगह में पानी डाला जाता है। निष्फल की जाने वाली सामग्री को बॉयलर के निचले भाग में रखा जाता है, ढक्कन को कसकर कस दिया जाता है, और विद्युत ताप चालू कर दिया जाता है। जब पानी उबलता है, तो भाप भीतरी बॉयलर में चली जाती है। आटोक्लेव में दबाव बढ़ जाता है और साथ ही तापमान भी बढ़ जाता है। जब दबाव नापने का यंत्र दिखाता है कि बॉयलर में दबाव निर्दिष्ट मूल्य तक पहुंच गया है, तो नसबंदी के प्रारंभ समय को चिह्नित करें। सुरक्षा वाल्व का उपयोग करके दबाव को एक निश्चित स्तर पर बनाए रखा जाता है।

आमतौर पर प्रयोगशाला अभ्यास में, दबाव नसबंदी 1.5-2 एटीएम और लगभग 115-120 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर की जाती है।

20-30 मि. नसबंदी का समय समाप्त होने के बाद, हीटिंग बंद कर दिया जाता है, भाप वाल्व खोला जाता है और भाप निकल जाती है। दबाव पोषक तत्व मीडिया एमपीबी, एमपीए, पानी के साथ कांच के बर्तन, ड्रेसिंग सामग्री, के तहत भाप के साथ जीवाणुरहित करें। सर्जिकल उपकरणआदि। ऑटोक्लेविंग नसबंदी का एक तेज़ और विश्वसनीय तरीका है, जो सभी प्रकार के सूक्ष्मजीवों, यहां तक ​​कि सबसे प्रतिरोधी बीजाणुओं को भी मार देता है।

6. पाश्चुरीकरण।आंशिक नसबंदी की इस विधि का नाम फ्रांसीसी वैज्ञानिक एल. पाश्चर के नाम पर रखा गया है जिन्होंने इसे प्रस्तावित किया था। विधि यह है कि एक बाँझ कंटेनर में डाला गया तरल पानी के स्नान में 60-90 ºС के तापमान पर गरम किया जाता है

10-30 मिनट. तरल मीडिया के लिए उपयुक्त जो उन्हें बदलता है भौतिक रासायनिक विशेषताएँउच्च तापमान पर. दूध, क्रीम, वाइन, बीयर, जूस आदि को पास्चुरीकृत किया जाता है। साथ ही, विटामिन और भी स्वाद गुणउत्पाद. पाश्चुरीकृत उत्पाद दीर्घावधि संग्रहणके अधीन नहीं हैं, क्योंकि नसबंदी की इस पद्धति से सूक्ष्मजीवों के केवल वानस्पतिक रूप मर जाते हैं, और बीजाणु रह जाते हैं। प्रयोगशाला अभ्यास में, इस विधि का उपयोग मुख्य रूप से बीजाणु बनाने वाली प्रजातियों को गैर-बीजाणु बनाने वाली प्रजातियों से अलग करने के लिए किया जाता है।

7. आंशिक नसबंदी. यह कई चरणों में निष्फल की जाने वाली सामग्री के प्रसंस्करण पर आधारित है। फ्रैक्शनल को कोच उपकरण में बहती भाप के साथ उबालना या निर्जलीकरण किया जा सकता है। आमतौर पर, बताए गए तरीकों में से किसी एक का उपयोग करके प्रतिदिन 3 दिन, 30 मिनट के लिए नसबंदी की जाती है, और ब्रेक के दौरान मीडिया को कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है। ऐसा बीजाणुओं को वानस्पतिक रूपों में विकसित करने और बाद के उपचारों के दौरान उनके विनाश को भड़काने के लिए किया जाता है, जिससे इन तकनीकों की विश्वसनीयता बढ़ जाती है।

8. टिंडलाइज़ेशन।यह एक प्रकार का फ्रैक्शनल स्टरलाइजेशन (फ्रैक्शनल पास्चुरीकरण) है। इस तकनीक का नाम अंग्रेजी वैज्ञानिक डी. टाइन्डल के नाम पर रखा गया है जिन्होंने इसे प्रस्तावित किया था। इसे 1 घंटे के लिए 56-58 ºС के तापमान पर पानी के स्नान में किया जाता है, 24 घंटों के बाद 5-7 बार दोहराया जाता है। हीटिंग के बीच के अंतराल में, सामग्री को कमरे के तापमान पर रखा जाता है। टाइन्डलाइज़ेशन पोषक मीडिया पर किया जाता है जिसमें सूक्ष्मजीवों की कमी होती है और इसमें ऐसे पदार्थ भी होते हैं जो 60 डिग्री सेल्सियस (प्रोटीन, विटामिन) से ऊपर के तापमान पर आसानी से नष्ट हो जाते हैं और विकृत हो जाते हैं। ये रक्त सीरम, अंडे आदि हैं। टाइन्डलाइज़ेशन के परिणामस्वरूप, सूक्ष्मजीवों का पूर्ण विनाश होता है।