सूक्ष्मजीवों पर भौतिक कारकों का प्रभाव। सुखाने वाले ओवन का ऑपरेटिंग मोड नियंत्रण संख्या...

प्रयोगशाला अभ्यास में, सूक्ष्मजीवों के साथ काम करते समय, यह सुनिश्चित करने के लिए लगातार उपाय करना आवश्यक है कि काम के दौरान उपयोग किए जाने वाले व्यंजन, संस्कृति मीडिया और धातु उपकरणों में रोगाणु न हों। इस प्रयोजन के लिए, निम्नलिखित नसबंदी विधियों का उपयोग किया जाता है:

नसबंदी अतितापित भापदबाव में;

बहती भाप से बंध्याकरण;

गर्म हवा नसबंदी;

कीटाणुशोधन.

स्टरलाइज़ेशन की सबसे अच्छी विधि विभिन्न वस्तुओं को अत्यधिक गर्म भाप से उपचारित करना है विशेष उपकरण- आटोक्लेव.

दबाव में आटोक्लेव और अत्यधिक गरम भाप नसबंदी

आटोक्लेव धातु (स्टील, कच्चा लोहा या तांबा) बॉयलर हैं जिनमें दोहरी दीवारें और एक विशाल ढक्कन होता है जो बोल्ट और रबर गैसकेट के साथ भली भांति बंद करके सील किया जाता है। हीटिंग सिस्टम के आधार पर, आटोक्लेव भाप, बिजली और आग हैं (चित्र 42)। एक आटोक्लेव में 115-120 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर उच्च दबाव और अत्यधिक गर्म भाप का उत्पादन आपको 20-30 मिनट के भीतर वनस्पति कोशिकाओं और माइक्रोबियल बीजाणुओं दोनों को नष्ट करने की अनुमति देता है।

एक आटोक्लेव में, उन सभी वस्तुओं को निष्फल कर दिया जाता है जो उच्च तापमान पर खराब नहीं होती हैं: विभिन्न तरल पदार्थ (पानी, पोषक तत्व मीडिया जिसमें कार्बोहाइड्रेट घटक नहीं होते हैं), कांच के बर्तन, धातु के उपकरण, कपास ऊन, धुंध, कागज, आदि।

ऐसे मामलों में जहां कुछ पदार्थ आटोक्लेव में सामान्य नसबंदी व्यवस्था का सामना नहीं करते हैं (विशेष रूप से, शर्करा युक्त पोषक तत्व मीडिया), उन्हें आटोक्लेव में 112 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 20 मिनट के लिए और साथ ही हल्की परिस्थितियों में निष्फल किया जाता है।

पर उच्च दबावआटोक्लेव में अत्यधिक गरम भाप, हीटिंग तापमान तदनुसार बढ़ जाता है; इससे कुछ कल्चर मीडिया में मिलाए गए शर्करा का कारमेलाइजेशन हो जाता है, जिससे मीडिया रोगाणुओं के शारीरिक गुणों को निर्धारित करने के लिए अनुपयुक्त हो जाता है।

आटोक्लेव के अंदर का दबाव आटोक्लेव के ढक्कन या बॉडी में लगे दबाव गेज का उपयोग करके मापा जाता है। यदि दबाव अत्यधिक बढ़ जाता है, तो एक सुरक्षा वाल्व स्वचालित रूप से सक्रिय हो जाता है, जो डिज़ाइन के आधार पर, ढक्कन पर या आटोक्लेव दीवार की साइड सतह पर स्थित होता है। सीटी के साथ सुरक्षा वाल्व से निकलने वाली भाप की एक धारा हीटिंग बंद करने की आवश्यकता की चेतावनी देती है। यदि हीटिंग बंद नहीं की गई तो आटोक्लेव फट सकता है।

एक थर्मामीटर को कभी-कभी आटोक्लेव के ढक्कन पर एक विशेष जेब में रखा जाता है, जिसके साथ नसबंदी तापमान मापा जाता है। आटोक्लेव के अंदर एक स्टैंड होता है, जिसके नीचे आटोक्लेव के बाहर स्थित फ़नल वाली ट्यूब के माध्यम से पानी डाला जाता है। इसके अलावा, आटोक्लेव भाप और हवा छोड़ने के लिए एक नल और पानी बाहर निकालने के लिए एक नल से सुसज्जित हैं।

नसबंदी के दौरान आटोक्लेव को संभालने के नियम इस प्रकार हैं: उपकरण को एक फ़नल और ट्यूब के माध्यम से पानी से भर दिया जाता है, जिसका स्तर स्टैंड के नीचे होना चाहिए। कीटाणुरहित की जाने वाली वस्तुओं को विशेष धातु की बोतलों में रखा जाता है और एक आटोक्लेव में लोड किया जाता है। आटोक्लेव का ढक्कन खराब हो गया है।

भाप और हवा को बाहर निकलने की अनुमति देने के लिए नल खोलने से हीटिंग शुरू हो जाती है। जैसे ही पानी उबलता है, परिणामी भाप आटोक्लेव से हवा को विस्थापित करना शुरू कर देती है। स्टीम आउटलेट वाल्व को तब तक खुला रखा जाता है जब तक कि सूखी भाप एक सतत धारा में बाहर न निकल जाए। यह आटोक्लेव से हवा को पूरी तरह हटाने का संकेत देता है। फिर नल बंद कर दिया जाता है. भाप, जो आगे गर्म करने पर अधिक से अधिक मात्रा में जमा हो जाती है, आटोक्लेव में दबाव और साथ ही तापमान बढ़ा देती है। आटोक्लेव के साथ काम करते समय, आपको भाप के दबाव और उसके तापमान (तालिका 4) के बीच संबंधों की तालिका द्वारा निर्देशित किया जा सकता है।

दबाव नापने का यंत्र सुई पहुंचने के बाद आवश्यक सूचकदबाव (आटोक्लेव में तापमान स्वीकृत नसबंदी तापमान के अनुरूप होगा), आटोक्लेव के हीटिंग को समायोजित करें ताकि दबाव आवश्यक समय के लिए समान स्तर पर बना रहे। नसबंदी के अंत में, गर्म करना बंद कर दें। जब आटोक्लेव में तापमान गिर जाता है और दबाव नापने का यंत्र शून्य हो जाता है (आटोक्लेव में दबाव वायुमंडलीय दबाव के बराबर होता है), तो भाप रिलीज वाल्व को ध्यान से खोलें, भाप छोड़ें और, आटोक्लेव का ढक्कन खोलकर, सामग्री को हटा दें। आटोक्लेव में दबाव कम होने से पहले, भाप रिलीज वाल्व को समय से पहले खोलना असंभव है। आटोक्लेव कक्ष में दबाव में तेज कमी से 100 डिग्री सेल्सियस से अधिक तापमान तक गर्म किए गए तरल पदार्थों का हिंसक उबलना होगा, यानी। सामान्यतः क्वथनांक से ऊपर वायु - दाब. तरल पदार्थों को जोर से उबालने से रुई के प्लग गीले हो जाएंगे या यहां तक ​​कि बर्तनों से बाहर निकल जाएंगे - काम व्यर्थ हो जाएगा। पोषक तत्व मीडिया खराब हो जाएगा, क्योंकि हवा से आने वाला माइक्रोफ्लोरा आसानी से गीले प्लग पर विकसित होता है, अंदर प्रवेश करता है और मीडिया को संक्रमित करता है। इसके अलावा, बढ़े हुए दबाव के साथ आटोक्लेव खोलना कर्मचारी के लिए खतरनाक है।

हालाँकि, जैसे ही दबाव नापने का यंत्र शून्य पर रुकता है, आटोक्लेव को तुरंत खोला जाना चाहिए, अन्यथा प्लग पर संघनन प्रवाहित होने लगेगा और वे गीले भी हो जाएंगे। संघनन के पानी से प्लग को गीला होने से बचाने के लिए, उन्हें स्टरलाइज़ेशन से पहले कागज से ढक दिया जाता है।

यदि तापमान 120 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाता है, जो 2 एटीएम (19.61 * 10000 एन/एम2) के दबाव या सामान्य से 1 एटीएम ऊपर दबाव गेज पर होता है, तो आटोक्लेव में रखी गई सामग्री 20-30 मिनट में विश्वसनीय रूप से निष्फल हो जाएगी। बहती भाप से मीडिया को स्टरलाइज़ करने के लिए आटोक्लेव का भी सफलतापूर्वक उपयोग किया जा सकता है; इस मामले में, आटोक्लेव का ढक्कन खराब नहीं होता है।

कोच बॉयलर और बहने वाली भाप नसबंदी

कोच बॉयलर गैल्वेनाइज्ड शीट या तांबे से बना एक सिलेंडर है जिसमें दोहरी दीवारें और शंक्वाकार हेलमेट के आकार का ढक्कन होता है (चित्र 43)। ढक्कन के बीच में थर्मामीटर के लिए एक छेद होता है। कोच बॉयलर का बाहरी भाग एक परत से ढका हुआ है गर्मी-इन्सुलेट सामग्री: एस्बेस्टस, लिनोलियम, आदि।

बॉयलर के अंदर एक विभाजन (स्टैंड) रखा गया है, जो बॉयलर के आंतरिक स्थान को दो खंडों में विभाजित करता है: ऊपरी और निचला। निचला भाग पानी से भरा हुआ है, जिसका स्तर जल मीटर ग्लास द्वारा निर्धारित किया जाता है: पानी को स्टैंड के ऊपरी हिस्से को कवर नहीं करना चाहिए। विसंक्रमित की जाने वाली वस्तुओं को बॉयलर के ऊपरी भाग में जालीदार बाल्टियों में एक के ऊपर एक रखकर रखा जाता है। बॉयलर को ढक्कन से बंद करके, वे उसमें पानी गर्म करना शुरू करते हैं। नसबंदी की शुरुआत उस क्षण को माना जाता है जब थर्मामीटर 98-100 डिग्री सेल्सियस दिखाता है। थर्मामीटर की अनुपस्थिति में, नसबंदी की शुरुआत उस क्षण से मानी जाती है जब बॉयलर के ढक्कन में छेद से भाप तेजी से निकलने लगती है। इस प्रकार, बॉयलर के संचालन के दौरान निष्फल की जाने वाली वस्तुएं हमेशा बहती भाप की धारा में रहेंगी।

बहती भाप से नसबंदी की विधि, इसकी सादगी और उपलब्धता के कारण, प्रयोगशाला अभ्यास में व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। बहने वाली भाप का उपयोग मुख्य रूप से पोषक तत्व मीडिया को स्टरलाइज़ करने के लिए किया जाता है, जिनके गुण 100 डिग्री सेल्सियस से ऊपर गर्म होने पर बदल जाते हैं: प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और जिलेटिन। इन वातावरणों के लिए, प्रवाहित भाप स्टरलाइज़ेशन विधि सबसे उपयुक्त है।

प्रवाहित भाप स्टरलाइज़ेशन विधि का नुकसान इसकी अवधि है, क्योंकि माध्यम को पूरी तरह से स्टरलाइज़ करने के लिए एक निश्चित समय के लिए बॉयलर में बार-बार हीटिंग करना आवश्यक है - 20 मिनट से 1.5 घंटे (औसतन 30-45 मिनट) के आधार पर। 24 घंटे के अंतराल पर तरल की मात्रा। थर्मोस्टेट में माध्यम को गर्म करने के बीच की पूरी अवधि को 25-30 डिग्री सेल्सियस पर रखने की सिफारिश की जाती है।

कोच बॉयलर में एक बार गर्म करने से केवल वनस्पति माइक्रोबियल कोशिकाएं मर जाती हैं, लेकिन बीजाणु जीवित रह सकते हैं। निष्फल पोषक माध्यम को अंदर रखते समय अनुकूल परिस्थितियां(पर कमरे का तापमान, या थर्मोस्टेट में और भी बेहतर), कुछ शेष बीजाणु अंकुरित होंगे और अगले दिन तक वनस्पति कोशिकाओं में बदल जाएंगे। बार-बार गर्म करने से इन नव विकसित कोशिकाओं की मृत्यु हो जाएगी। अंत में, माध्यम को थर्मोस्टेट में रखने के एक दिन बाद तीसरी बार गर्म करने से पूर्ण बाँझपन सुनिश्चित हो जाएगा। इस विधि को फ्रैक्शनल स्टरलाइज़ेशन कहा जाता है। में व्यावहारिक कार्यकोच बॉयलर में बहती भाप के साथ नसबंदी के बजाय, आटोक्लेव में पारंपरिक नसबंदी का उपयोग अक्सर 112 डिग्री सेल्सियस पर 15-20 मिनट के लिए 0.5 एटीएम के बैक प्रेशर के साथ किया जाता है।

सुखाने की कैबिनेट और गर्म हवा नसबंदी

प्रयोगशाला अभ्यास में, सूक्ष्मजीवविज्ञानी कांच के बर्तनों को स्टरलाइज़ करने के लिए, एक सुखाने कैबिनेट या तथाकथित पाश्चर ओवन का होना आवश्यक है। सुखाने वाली कैबिनेट और पाश्चर ओवन का डिज़ाइन सिद्धांत समान है। चूल्हे ही बनते हैं आयत आकार, और सुखाने वाले अलमारियाँ न केवल आयताकार हो सकती हैं, बल्कि बेलनाकार आकार भी हो सकती हैं (चित्र 44 और 45)। इन उपकरणों में 1 घंटे के लिए 160 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर या 2 घंटे के लिए 150 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गर्म हवा (शुष्क गर्मी) के साथ नसबंदी की जाती है।

पाश्चर ओवन और सुखाने वाले ओवन दोनों दोहरी दीवारों वाले उपकरणों के अंदर खोखले होते हैं, जिनमें दोहरे दरवाजे होते हैं जो कसकर बंद होते हैं। बाहर की ओर, वे थर्मल इन्सुलेशन के लिए एस्बेस्टस की एक परत से ढके होते हैं। दीवारों के बीच घूमता है गरम हवा, जिसका ताप विद्युत सर्पिल या गैस बर्नर द्वारा किया जाता है। कैबिनेट के अंदर कई (आमतौर पर दो या तीन) छेद वाली अलमारियां होती हैं। कैबिनेट के शीर्ष पर दो खुले स्थान हैं: एक थर्मामीटर के लिए है, और दूसरा वेंटिलेशन के लिए है। इलेक्ट्रिक सुखाने वाली अलमारियाँ सबसे सुविधाजनक हैं।

नवीनतम डिज़ाइन के सुखाने वाले कैबिनेट में चार हीटिंग चरण होते हैं, जिन्हें कैबिनेट की साइड की दीवार पर लगाए गए एक विशेष नियामक द्वारा सक्रिय किया जा सकता है। हीटिंग की वांछित डिग्री एक, दो, तीन या सभी चार को चालू करके प्राप्त की जाती है विद्युत सर्पिल, और सर्पिलों को चालू करने का क्रम कोई भी हो सकता है।

कांच के बर्तनों के अलावा, आप सुखाने वाले अलमारियाँ में धुंध और कपास ऊन को निर्जलित कर सकते हैं, हालांकि उन्हें आटोक्लेव में संसाधित करना अभी भी बेहतर है, क्योंकि वे 160 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पीले हो जाते हैं। में निष्फल नहीं किया जा सकता सुखाने की कैबिनेटरबर उत्पाद, क्योंकि वे उच्च तापमान का सामना नहीं कर सकते, भंगुर हो जाते हैं और खराब हो जाते हैं। तरल पदार्थ 150-160 डिग्री सेल्सियस पर उबलते हैं और उनकी रासायनिक संरचना बदल जाती है।

हवा से रोगाणुओं द्वारा निष्फल वस्तुओं के बाद के संदूषण से बचने के लिए, उन्हें नसबंदी से पहले कागज में लपेटा जाता है। पेट्री डिश को 2 टुकड़ों में कागज में लपेटा जाता है, ताकि लपेटने में कोई गैप न रहे। ग्लास ट्यूब और पिपेट को भी कागज में लपेटा जाता है, पहले प्रत्येक को अलग से, और फिर 10-20 टुकड़ों के पैक में। ट्यूबों और पिपेटों को पूरी तरह से सुरक्षित रखने के लिए उन्हें लपेटने में बेहद सावधानी बरतनी चाहिए बाहरी सतहहवा के साथ संचार से. गर्म हवा से कीटाणुरहित करने से पहले फ्लास्क, टेस्ट ट्यूब, बोतलों को कॉटन स्टॉपर्स और पेपर कैप से बंद कर दिया जाता है।

सुखाने वाले कैबिनेट में तापमान 170 डिग्री सेल्सियस से ऊपर न बढ़ने दें, क्योंकि इस तापमान पर कपास के प्लग भूरे हो जाते हैं, और कागज के रैपर भंगुर हो जाते हैं और यहां तक ​​कि जल भी जाते हैं। नसबंदी की शुरुआत उस क्षण को माना जाता है जब थर्मामीटर 150-160 डिग्री सेल्सियस दिखाता है। स्टरलाइज़ेशन के लिए आवश्यक समय बीत जाने के बाद, हीटिंग बंद कर दिया जाता है। बर्तनों को टूटने से बचाने के लिए, आपको केवल सूखे बर्तनों को स्टरलाइज़ करना होगा और स्टरलाइज़ेशन के बाद कैबिनेट को तभी खोलना होगा जब उसमें तापमान 50-70 डिग्री सेल्सियस तक गिर जाए। छोटी प्रयोगशाला वस्तुएं, जैसे प्लैटिनम लूप, सुई, चिमटी, कैंची इत्यादि को केवल लौ में जलाकर निष्फल किया जा सकता है गैस बर्नर(या अल्कोहल लैंप)।

कीटाणुशोधन

सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशाला में कीटाणुशोधन का अक्सर सहारा लेना पड़ता है। सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले कीटाणुनाशक निम्नलिखित हैं: कार्बोलिक एसिड का 3-5% घोल और अन्य उच्च फिनोल का घोल, 50-70% घोल एथिल अल्कोहोल, ब्यूटाइल अल्कोहल की समान सांद्रता, 4% फॉर्मेल्डिहाइड घोल, क्लोरोफॉर्म और टोल्यूनि का 1-2% घोल, क्लोरैमाइन का 0.5% घोल, आदि।

कैनिंग कारखानों की सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं में, टेबल की सतहों, बर्तनों, फर्शों और परिसर की दीवारों को कीटाणुरहित किया जाता है। टेबल की सतहों को कीटाणुरहित करने के लिए, आप न केवल एथिल अल्कोहल समाधान, बल्कि कार्बोलिक एसिड समाधान का भी उपयोग कर सकते हैं।

कीटाणुशोधन सीवरेज उपकरणकैनरीज़ और अन्य में खाद्य उद्यमब्लीच के 5-10% घोल से निर्मित। परिसंचरण कीटाणुशोधन के लिए कांच के मर्तबानडिब्बाबंदी कारखानों में उपयोग किया जाता है क्लोरीन पानी, जिसमें प्रति लीटर कम से कम 100 मिलीग्राम सक्रिय क्लोरीन हो। ऐसा समाधान तैयार करने के लिए, ब्लीच लें और इसे थोड़ी मात्रा में पानी के साथ मिलाएं जब तक कि गाढ़ा द्रव्यमान प्राप्त न हो जाए। दूध का. इस मिश्रण को पानी में मिलाया जाता है, अच्छी तरह हिलाया जाता है और एक दिन के लिए छोड़ दिया जाता है। ब्लीचिंग पाउडरकैल्शियम ऑक्साइड हाइड्रेट - Ca(OH)2 - और सक्रिय क्लोरीन बनाने के लिए प्रतिक्रिया करता है। Ca(OH)2 नीचे बैठ जाता है, स्पष्टीकरण के बाद तलछट के ऊपर का घोल पारदर्शी और हरे रंग का हो जाता है। इस घोल में कंटेनर को भिगोने का समय 10 मिनट तक रहता है। क्लोरीनीकरण के बाद, कंटेनर को बहते पानी में अच्छी तरह से धोना चाहिए।

थर्मोस्टेट- स्थिर तापमान बनाए रखने के लिए एक उपकरण - सूक्ष्मजीवों की बढ़ती संस्कृतियों के लिए उपयोग किया जाता है। यह एक कैबिनेट (चित्र 1) है जिसमें इसे लंबे समय तक बनाए रखा जाता है निश्चित तापमान. इष्टतम तापमानकई सूक्ष्मजीवों के प्रजनन के लिए 37 ºС. थर्मोस्टैट शुष्क हवा और पानी के प्रकार में उपलब्ध हैं।

सुखाने की कैबिनेट (पाश्चर ओवन)व्यंजन, उपकरण और सूखी सामग्री, जैसे स्टार्च, चाक (चित्रा 2) की सूखी गर्मी नसबंदी के लिए उपयोग किया जाता है। कीटाणुरहित की जाने वाली सामग्री को पहले कागज में लपेटा जाता है और एक कैबिनेट में रखा जाता है ताकि यह दीवारों को न छुए। नसबंदी दो घंटे के लिए 160 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर की जाती है। तापमान को 180 से ऊपर बढ़ाने की अनुशंसा नहीं की जाती है: कपास के प्लग और कागज खराब होने लगते हैं (भूरा हो जाना, भंगुर हो जाना)। कैबिनेट को बंद करने और ठंडा करने के बाद निष्फल सामग्री को हटा दिया जाता है, अधिमानतः जब कैबिनेट में तापमान कमरे के तापमान के बराबर होता है।

कॉलोनी गिनती उपकरण(चित्र 3) - एक अर्ध-स्वचालित काउंटर जो इलेक्ट्रिक पेन से सुसज्जित है स्प्रिंग डिवाइस, पेट्री डिश में बैक्टीरिया कालोनियों की गिनती के लिए डिज़ाइन किया गया। कप
बैक्टीरिया कालोनियों वाली एक पेट्री को स्कैनिंग ग्लास पर उल्टा रखा जाता है। कॉलोनी की स्थिति के अनुरूप पेट्री डिश के नीचे के क्षेत्र पर इलेक्ट्रिक पेन का हल्का दबाव कांच पर एक निशान छोड़ देता है। इस स्थिति में, धारक ऊपर उठ जाता है, सर्किट बंद हो जाता है और मीटर रीडिंग एक से बढ़ जाती है। गिनती शुरू होने से पहले और खत्म होने के बाद पल्स काउंटर की रीडिंग में अंतर की गणना करके बैक्टीरिया कालोनियों की संख्या की गणना की जाती है।

आटोक्लेव(चित्र 4) एक मोटी दीवार वाला उपकरण है जिसे दबाव में भाप के साथ व्यंजन और कल्चर मीडिया को स्टरलाइज़ करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। यह एक सीलबंद कड़ाही है जिसमें दोहरी धातु की दीवारें और एक ढक्कन है। दीवारों के बीच का स्थान (जलवाष्प कक्ष) पानी से भरा होता है। आंतरिक भाग(नसबंदी कक्ष) एक दबाव नापने का यंत्र, सुरक्षा वाल्व और पानी और भाप निकालने के लिए एक नल से सुसज्जित है। एक टाइट सील बनाने के लिए, आटोक्लेव को रबर गैस्केट वाले ढक्कन से कसकर बंद कर दिया जाता है। 20...30 मिनट के लिए 0.5 से 1.0 एमपीए के दबाव में कल्चर मीडिया को स्टरलाइज़ करने के लिए उपयोग किया जाता है।

1 – शरीर; 2 - थर्मामीटर; 1 - आवरण; 2 - शरीर;

3 - दरवाजा; 4 - पोटेंशियोमीटर; 3 - गियरबॉक्स; 4 - नियंत्रण इकाई;

5 - टॉगल स्विच; 6 - दीपक; 5 - अंकन; 6-थर्मामीटर

7 - वेंटिलेशन छेद

चित्र 1 - थर्मोस्टेट चित्र 2 - सुखाने वाली कैबिनेट

1 - पेट्री डिश के लिए टेबल; 2 - स्प्रिंग डिवाइस के साथ पेन;

3 - काउंटर संकेतक; 4 - पल्स काउंटर चालू करने के लिए टॉगल स्विच; 5 - मीटर लाइटिंग लैंप चालू करने के लिए टॉगल स्विच

चित्र 3 - सूक्ष्मजीवों की कॉलोनियों की गिनती के लिए उपकरण

बंध्याकरण को भौतिक, रासायनिक, यांत्रिक और जैविक तरीकों और विभिन्न विधियों द्वारा दर्शाया जाता है। किसी विशेष स्टरलाइज़ेशन विधि और उसके तरीकों का उपयोग करने की व्यवहार्यता स्टरलाइज़ की जाने वाली सामग्री की विशेषताओं, उसकी भौतिक और पर निर्भर करती है। रासायनिक गुण. स्टरलाइज़ेशन की अवधि स्टरलाइज़ की जा रही वस्तु, स्टरलाइज़िंग एजेंट और उसकी खुराक, तापमान और आर्द्रता पर निर्भर करती है। पर्यावरण.

भौतिक विधिनसबंदी नसबंदी की भौतिक विधि के तरीकों में सुखाना, जलाना और कैल्सीनेशन, उबालना, पास्चुरीकरण और टिंडलाइजेशन, गर्म हवा (शुष्क गर्मी), अल्ट्रासाउंड, पराबैंगनी और रेडियोधर्मी विकिरण, उच्च आवृत्ति धारा, शामिल हैं। सूरज की रोशनी. उच्च तापमान के संपर्क में आने वाली वस्तुओं को स्टरलाइज़ करने का सबसे आम तरीका आग, गर्म हवा और दबाव में संतृप्त भाप से स्टरलाइज़ करना है। आग का उपयोग उन संक्रमित वस्तुओं को जलाने के लिए किया जाता है जिनका कोई मूल्य नहीं है (अनावश्यक कागजात, पुराने वॉलपेपर, लत्ता, कचरा), तपेदिक के रोगियों के थूक, विशेष रूप से मरने वाले लोगों और जानवरों की लाशों को कीटाणुरहित करने के लिए खतरनाक संक्रमण, साथ ही विभिन्न वस्तुओं को जलाने और शांत करने के लिए भी। उपकरणों, प्रयोगशाला और फार्मास्युटिकल कांच के बर्तनों के कीटाणुशोधन के लिए सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में जलने और कैल्सीनेशन का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। बर्नर की लौ में कैल्सीनेशन या फ्लेम्बिंग नसबंदी की एक विधि है जिसमें वस्तु पूरी तरह से निष्फल हो जाती है, क्योंकि वनस्पति कोशिकाएं, सिस्ट और सूक्ष्मजीवों के बीजाणु मर जाते हैं। आमतौर पर, लूप, स्पैटुला, पिपेट, स्लाइड और कवरस्लिप, छोटे उपकरण और अन्य दूषित वस्तुओं को कैल्सीनेशन द्वारा निष्फल कर दिया जाता है यदि उन्हें उबाला नहीं जा सकता है। कैंची और स्केलपेल को गर्म करके कीटाणुरहित करने की अनुशंसा नहीं की जाती है, क्योंकि आग के संपर्क में आने पर काटने की सतह सुस्त हो जाती है। चिकित्सा पद्धति में उपयोग की जाने वाली शारीरिक नसबंदी की सबसे सरल और सबसे आम विधियों में से एक गर्म हवा नसबंदी (शुष्क गर्मी) है। सूखी गर्मी नसबंदीसुखाने वाले ओवन (पाश्चर ओवन) में किया जाता है। शुष्क गर्म हवा में जीवाणुनाशक, विषाणुनाशक, बीजाणुनाशक प्रभाव होता है और इसका उपयोग मुख्य रूप से कांच उत्पादों (प्रयोगशाला) के बंध्याकरण के लिए किया जाता है व्यंजन - कपपेट्री फ्लास्क, पिपेट, टेस्ट ट्यूब, आदि), साथ ही धातु उत्पाद जिन्हें दबाव में भाप से निष्फल किया जा सकता है। इसके अलावा, सूखी गर्मी का उपयोग चीनी मिट्टी के बरतन और गर्मी प्रतिरोधी पदार्थों (तालक, सफेद मिट्टी), साथ ही खनिज और से बनी वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। वनस्पति तेल, वसा, पेट्रोलियम जेली, लैनोलिन, मोम। इस नसबंदी विधि के लिए सबसे प्रभावी तरीका, जो वनस्पति रूपों और बीजाणुओं की मृत्यु सुनिश्चित करता है, 15 मिनट के लिए 160 - 180 डिग्री का तापमान है। आप खाद्य पदार्थों, आइसोटोनिक घोल, या रबर और सिंथेटिक सामग्री से बनी वस्तुओं को सूखी गर्मी से कीटाणुरहित नहीं कर सकते, क्योंकि तरल पदार्थ उबल जाते हैं और बाहर निकल जाते हैं, और रबर और सिंथेटिक सामग्री पिघल जाती है। नसबंदी संतृप्त भापदबाव में - यह ड्रेसिंग, पानी, कुछ को स्टरलाइज़ करने का सबसे विश्वसनीय और सबसे अधिक आजमाया हुआ तरीका है दवाइयाँ, पोषक तत्व मीडिया, नरम उपकरण, उपकरण, साथ ही अपशिष्ट दूषित सामग्री के कीटाणुशोधन के लिए। शल्य चिकित्सा अभ्यास में ड्रेसिंग, सर्जन के गाउन और जिस व्यक्ति का ऑपरेशन किया जा रहा है उसके अंडरवियर को आटोक्लेव में भाप का उपयोग करके कीटाणुरहित किया जाता है। दबाव में भाप की नसबंदी विशेष उपकरणों - आटोक्लेव में की जाती है। आटोक्लेविंग सभी सूक्ष्मजीवों और बीजाणुओं को पूरी तरह से नष्ट कर देता है। भाप दबाव नसबंदी विधि वायुमंडलीय दबाव के ऊपर दबाव में संतृप्त जल वाष्प के साथ सामग्री को गर्म करने पर आधारित है। उच्च तापमान और भाप की संयुक्त क्रिया इस विधि को विशेष रूप से प्रभावी बनाती है। इस मामले में, वनस्पति कोशिकाएं और माइक्रोबियल बीजाणु दोनों मर जाते हैं। संतृप्त जल वाष्प के प्रभाव में माइक्रोबियल बीजाणु 10 मिनट के भीतर मर जाते हैं, और वनस्पति रूप 1 से 4 मिनट के भीतर मर जाते हैं। संतृप्त भाप की उच्च जीवाणुनाशक शक्ति इस तथ्य के कारण है कि, दबाव में जल वाष्प के प्रभाव में, माइक्रोबियल कोशिका के प्रोटीन सूज जाते हैं और जम जाते हैं, जिसके परिणामस्वरूप माइक्रोबियल कोशिकाएं मर जाती हैं। संतृप्त जलवाष्प का जीवाणुनाशक प्रभाव अतिरिक्त दबाव से बढ़ जाता है। आटोक्लेव में स्टरलाइज़ेशन विभिन्न तरीकों से किया जाता है। इस प्रकार, सरल पोषक माध्यम (मांस - पेप्टोन अगर और मांस - पेप्टोन शोरबा) को 120 डिग्री (1 एटीएम) पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। लेकिन इस मोड के साथ प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और अन्य पदार्थों वाले मीडिया को स्टरलाइज़ करना असंभव है जो आसानी से गर्म करने पर बदल जाते हैं। कार्बोहाइड्रेट युक्त मीडिया को 0.5 एटीएम पर आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। 10 - 15 मिनट या आंशिक रूप से बहने वाली भाप। उच्च तापमान का उपयोग करके, आप न केवल कीटाणुरहित वस्तुओं की सतह पर, बल्कि उनकी गहराई में भी रोगजनक सूक्ष्मजीवों (बीजाणु बनाने वाले सहित) के सबसे लगातार रूपों को नष्ट कर सकते हैं। बंध्याकरण के विश्वसनीय साधन के रूप में उच्च तापमान का यह बहुत बड़ा लाभ है। हालाँकि, कुछ वस्तुएँ उच्च तापमान के प्रभाव में खराब हो जाती हैं और इन मामलों में कीटाणुशोधन के अन्य तरीकों और साधनों का सहारा लेना आवश्यक है। उन सामग्रियों और वस्तुओं की पूर्ण नसबंदी जो उच्च तापमान नसबंदी के उपयोग की अनुमति नहीं देती है, 100 डिग्री से अधिक नहीं के तापमान पर कोच उपकरण में जल वाष्प के साथ बार-बार नसबंदी द्वारा प्राप्त की जाती है। इस विधि को फ्रैक्शनल स्टरलाइज़ेशन कहा जाता है। यह इस तथ्य पर उबलता है कि रोगाणुओं के शेष अकुशल बीजाणु रूप, थर्मोस्टेट में 37 डिग्री पर एक दिन के बाद, वनस्पति कोशिकाओं में अंकुरित होते हैं, जिनकी मृत्यु बाद के नसबंदी के दौरान होती है इस वस्तु काबहती भाप. तरल भाप से उपचार 30-40 मिनट तक तीन बार किया जाता है। किसी सामग्री को 100 डिग्री से कम तापमान पर एक बार गर्म करना पास्चुरीकरण कहलाता है। पाश्चरीकरण पाश्चर द्वारा प्रस्तावित किया गया था और इसका उद्देश्य मुख्य रूप से ज्यादातर गैर-बीजाणु सूक्ष्मजीवों को नष्ट करना है। पाश्चुरीकरण 60-70 डिग्री पर 15 से 30 मिनट के लिए, 80 डिग्री पर 10 से 15 मिनट के लिए किया जाता है। सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में, पास्चुरीकरण बीज सामग्रीअक्सर बीजाणु बनाने वाले सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने और बीजाणु बनाने के लिए सूक्ष्मजीवों की क्षमता निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। उन तरल पदार्थों के लिए जो उच्च तापमान (दूध, बेरी और फलों के रस, बीयर, कार्बोहाइड्रेट या यूरिया युक्त पोषक माध्यम, आदि) के संपर्क में आने पर स्वाद और अन्य मूल्यवान गुण खो देते हैं, बहती भाप के साथ नसबंदी 15 के लिए 50 - 60 डिग्री पर की जाती है - 33333330 मिनट या 5-10 मिनट के लिए 70-80 डिग्री पर। इस मामले में, औसत प्रतिरोध वाले रोगाणु मर जाते हैं, जबकि अधिक प्रतिरोधी रोगाणु और बीजाणु संरक्षित रहते हैं। 1 घंटे के लिए 60 डिग्री पर फ्रैक्शनल 5-6 गुना स्टरलाइज़ेशन को टाइन्डलाइज़ेशन कहा जाता है। अनेक चिकित्सा उत्पाद बनाए जाते हैं पॉलिमर सामग्री, नसबंदी का सामना न करें भाप विधिआम तौर पर स्वीकृत तरीकों के अनुसार। कई उत्पादों के लिए, उनमें मौजूद तरल पदार्थों (परिरक्षकों, दवाओं और अन्य उत्पादों) की विशेषताओं के कारण, आम तौर पर स्वीकृत तरीकों और विधियों का उपयोग करके स्टरलाइज़ करना असंभव है। ऐसे उत्पादों के लिए, वस्तुओं की विश्वसनीय नसबंदी सुनिश्चित करने के लिए व्यक्तिगत नसबंदी व्यवस्था विकसित की जाती है। इस प्रकार, रक्त को अंशों में अलग करने के लिए रोटर की नसबंदी 45 मिनट के लिए 120 डिग्री के तापमान पर जल वाष्प के साथ की जाती है। परिरक्षक कंटेनरों की बाँझपन 60 मिनट के लिए 110 डिग्री पर प्राप्त किया जाता है। उबालना एक नसबंदी विधि है जिसका उपयोग पुन: प्रयोज्य सीरिंज, सर्जिकल उपकरणों, रबर ट्यूब, कांच और धातु के बर्तनों को नष्ट करने के लिए किया जाता है। स्टरलाइज़र में उबालकर स्टरलाइज़ेशन किया जाता है। उबलते पानी में बीजाणु 20-30 मिनट के बाद मर जाते हैं। 45 मिनट तक उबालने का उपयोग व्यापक रूप से स्राव और अन्य संक्रामक सामग्री, लिनन, व्यंजन, खिलौने और रोगी देखभाल वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। गर्म पानी (60 - 100 डिग्री) के साथ डिटर्जेंटधोने और सफाई के लिए उपयोग किया जाता है यांत्रिक निष्कासनप्रदूषक और सूक्ष्मजीव। अधिकांश वनस्पति कोशिकाएं 30 मिनट के बाद 70 डिग्री पर मर जाती हैं। निस्पंदन स्टरलाइज़ेशन का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां सब्सट्रेट हीटिंग का सामना नहीं कर सकते हैं, विशेष रूप से प्रोटीन, सीरम, कुछ एंटीबायोटिक्स, विटामिन और वाष्पशील पदार्थों वाले मीडिया के लिए। किसी कल्चर तरल को स्टरलाइज़ करने के लिए इस तकनीक का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जब इसे माइक्रोबियल कोशिकाओं से मुक्त करना आवश्यक होता है, लेकिन इसमें मौजूद सभी चयापचय उत्पादों को अपरिवर्तित बनाए रखना आवश्यक होता है। इस विधि में विशेष फिल्टर के माध्यम से तरल पदार्थ को फ़िल्टर करना शामिल है जिसमें बारीक छिद्रपूर्ण विभाजन होते हैं और इसलिए माइक्रोबियल कोशिकाएं बरकरार रहती हैं। फिल्टर के दो सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्रकार झिल्ली फिल्टर और सेइट्ज फिल्टर हैं। झिल्ली फिल्टर कोलोडियन, एसीटेट, सेलूलोज़ और अन्य सामग्रियों से तैयार किए जाते हैं। सेट्ज़ फिल्टर एस्बेस्टस और सेल्युलोज के मिश्रण से बनाए जाते हैं। इसके अलावा, मिश्रण के साथ काओलिन से बने फिल्टर का उपयोग नसबंदी के लिए किया जाता है। रेत क्वार्ट्ज, इन्फ्यूसर मिट्टी से और अन्य सामग्रियों से (चेम्बरलान, बर्कफेल्ड द्वारा "मोमबत्तियाँ")। मेम्ब्रेन और एस्बेस्टस फिल्टर एक बार उपयोग के लिए डिज़ाइन किए गए हैं। पराबैंगनी विकिरण के साथ, जीवाणुनाशक प्रभाव 200 - 450 एनएम की लंबाई वाली किरणों द्वारा प्रदान किया जाता है, जिसका स्रोत जीवाणुनाशक लैंप है। चिकित्सीय प्रयोजनों के लिए जीवाणुनाशक लैंप का उपयोग करके हवा को पराबैंगनी किरणों से निष्फल किया जाता है। निवारक संस्थाएँ, उद्यमों में सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं के बक्से खाद्य उद्योग, टीके और सीरम के उत्पादन के लिए बक्सों में, ऑपरेटिंग रूम, हेरफेर रूम, बच्चों के संस्थानों आदि में। पराबैंगनी किरणों में उच्च रोगाणुरोधी गतिविधि होती है और यह न केवल वनस्पति कोशिकाओं, बल्कि उनके बीजाणुओं की भी मृत्यु का कारण बन सकती है। क्रिया के परिणामस्वरूप सूर्य का प्रकाश सूक्ष्मजीवों की मृत्यु का कारण बनता है पराबैंगनी विकिरणऔर सूखना. धूप में सुखाने से कई प्रकार के सूक्ष्मजीवों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है, लेकिन इसका प्रभाव सतही होता है और इसलिए सूर्य की रोशनी नसबंदी अभ्यास में सहायक भूमिका निभाती है। में हाल ही मेंघावों और जलने के उपचार में सिंथेटिक और प्राकृतिक पॉलिमर से बनी कोटिंग का उपयोग जैल के रूप में किया जाता है। घावों और जलने के स्थानीय उपचार के लिए पॉलिमर एंटीसेप्टिक फिल्मों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। इनमें कैटापोल, डाइऑक्साइडिन, ब्लू आयोडीन, साथ ही ग्लूटाराल्डिहाइड युक्त सोर्बिटोल जैसे व्यापक स्पेक्ट्रम रोगाणुरोधी एजेंट होते हैं। इन फिल्मों को स्टरलाइज़ करने के लिए इसका उपयोग किया जाता है आयनित विकिरण 20.0 kGy की खुराक पर। पॉलिमर एंटीसेप्टिक फिल्मों और सॉर्बेंट्स के औद्योगिक उत्पादन के दौरान, इस नसबंदी व्यवस्था के तहत उनकी बाँझपन पूरी तरह से सुनिश्चित की जाती है। रेडियोधर्मी विकिरण वनस्पति और बीजाणु दोनों रूपों में सभी प्रकार के सूक्ष्मजीवों को मारता है। कीटाणुशोधन के लिए बाँझ उत्पादों और बाँझ डिस्पोजेबल चिकित्सा उपकरणों का उत्पादन करने वाले उद्यमों में नसबंदी के लिए इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है अपशिष्टऔर पशु मूल के कच्चे माल।

यांत्रिक विधिनसबंदी यांत्रिक नसबंदी विधियाँ वस्तुओं की सतह से कीटाणुओं को हटा देती हैं। इनमें धुलाई, झाड़ना, झाड़ना, गीला पोंछना, हवा देना, वेंटिलेशन, वैक्यूमिंग, धुलाई शामिल है।

रासायनिक बंध्याकरण विधि चिकित्सा पद्धति में प्लास्टिक का अब तेजी से उपयोग हो रहा है। इनका उपयोग दंत चिकित्सा, मैक्सिलोफेशियल सर्जरी, ट्रॉमेटोलॉजी, आर्थोपेडिक्स और सर्जरी में किया जाता है। अधिकांश प्लास्टिक दबाव और शुष्क गर्मी (शुष्क गर्म हवा) के तहत भाप की गर्मी नसबंदी विधियों का सामना नहीं कर सकते हैं। ऐसी वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले अल्कोहल, डायोसाइड और टर्नरी समाधान के समाधान संसाधित किए जा रहे उत्पादों की बाँझपन सुनिश्चित नहीं करते हैं। इसलिए, प्लास्टिक उत्पादों को कीटाणुरहित करने के लिए गैस और विकिरण विधियों के साथ-साथ रसायनों के समाधान का उपयोग किया जाता है। चिकित्सा संस्थानों के अभ्यास में परिचय बड़ी संख्या मेंथर्मोलैबाइल सामग्रियों से बने उत्पाद विकिरण की शुरूआत में योगदान करते हैं, गैस विधियाँकीटाणुनाशक समाधानों के साथ कीटाणुशोधन और नसबंदी। पर रासायनिक बंध्याकरणविभिन्न रासायनिक समूहों (पेरोक्साइड, फेनोलिक, हैलोजन युक्त, एल्डिहाइड, क्षार और एसिड, सर्फेक्टेंट, आदि) से गैसों और एजेंटों का उपयोग करें। रोजमर्रा के उपयोग के लिए, डिटर्जेंट, सफाई, ब्लीचिंग और अन्य तैयारी का उत्पादन किया जाता है जिसमें विभिन्न पदार्थों की शुरूआत के कारण रोगाणुरोधी प्रभाव होता है। रासायनिक पदार्थ. इन तैयारियों का उपयोग सैनिटरी की सफाई और कीटाणुशोधन के लिए किया जाता है तकनीकी उपकरण, व्यंजन, लिनन, आदि में फॉर्मेल्डिहाइड भाप (भाप के रूप में) का उपयोग किया जा सकता है चिकित्सा संस्थाननसबंदी के लिए धातु उत्पादचिकित्सा प्रयोजन (स्केलपेल, सुई, चिमटी, जांच, क्लैंप, हुक, तार कटर, आदि)। फॉर्मेल्डिहाइड वाष्प के साथ नसबंदी से पहले, उत्पादों को पूर्व-नसबंदी सफाई से गुजरना चाहिए और अच्छी तरह से सूखना चाहिए। जब किसी भी प्रकार से निष्फल कर दिया जाए रासायनिककिसी विशेष वस्तु के प्रसंस्करण के नियम कीटाणुरहित की जाने वाली वस्तु की विशेषताओं, रोगाणुओं के प्रतिरोध और गुणों की विशेषताओं पर निर्भर करते हैं। रासायनिक तैयारी, परिवेश का तापमान, आर्द्रता और अन्य कारक। इस प्रकार, धातु उपकरणों की बाँझपन उन्हें कम से कम 20 डिग्री के तापमान पर पांच घंटे तक भाप के साथ एक सीलबंद कक्ष में रखकर प्राप्त की जाती है। सापेक्षिक आर्द्रता 95 - 98%, 15 डिग्री के तापमान पर, इन वस्तुओं की पूर्ण बाँझपन 16 घंटों के बाद ही प्राप्त होती है। ग्लूटाराल्डिहाइड की स्पोरिसाइडल गतिविधि तापमान पर निर्भर करती है। इसकी सर्वोत्तम क्रिया 15 - 25 डिग्री के तापमान पर होती है। जैसे-जैसे तापमान बढ़ता है, इस दवा की स्पोरिसाइडल गतिविधि कम हो जाती है। नसबंदी रासायनिक विधिउपयोग कुछ हद तक सीमित है. अक्सर, इस पद्धति का उपयोग कल्चर मीडिया और इम्युनोबायोलॉजिकल तैयारी (टीके और सीरम) के जीवाणु संदूषण को रोकने के लिए किया जाता है। क्लोरोफॉर्म, टोल्यूनि और ईथर जैसे पदार्थ अक्सर पोषक मीडिया में जोड़े जाते हैं। यदि माध्यम को इन परिरक्षकों से मुक्त करना आवश्यक हो, तो इसे पानी के स्नान में 56 डिग्री पर गर्म किया जाता है और परिरक्षक वाष्पित हो जाते हैं। टीकों या सीरम के संरक्षण के लिए मेरथिओलेट का उपयोग किया जाता है, बोरिक एसिड, फॉर्मेलिन।

जैविक विधिनसबंदी जैविक नसबंदी एंटीबायोटिक दवाओं के उपयोग पर आधारित है। वायरस की खेती में इस विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

आग पर कैल्सीनेशन.यह नसबंदी का एक विश्वसनीय तरीका है, लेकिन वस्तुओं के खराब होने के कारण इसका उपयोग सीमित है। बैक्टीरियोलॉजिकल लूप्स को इस तरह से स्टरलाइज़ किया जाता है।

सूखी नसबंदीबुखार। एक पाश्चर ओवन में आयोजित (कण्डरा ------

ओवन) 1 घंटे के लिए 160-170 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर। इस विधि का उपयोग प्रयोगशाला के कांच के बर्तनों, कागज में लिपटे पिपेट और कपास प्लग से बंद परीक्षण ट्यूबों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। 170 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर, कागज, रूई और धुंध का जलना शुरू हो जाता है।

दबाव में भाप नसबंदी (आटोक्लेविंग)।सबसे सार्वभौमिक नसबंदी विधि। यह एक आटोक्लेव में किया जाता है - एक जल-भाप स्टरलाइज़र। आटोक्लेव के संचालन का सिद्धांत दबाव पर पानी के क्वथनांक की निर्भरता पर आधारित है।

आटोक्लेव एक दोहरी दीवार वाली धातु की कड़ाही है जिसमें भली भांति बंद करके सील किया गया ढक्कन होता है। आटोक्लेव के तल में पानी डाला जाता है, निष्फल की जाने वाली वस्तुओं को कार्य कक्ष में रखा जाता है, और ढक्कन को पहले कसकर पेंच किए बिना बंद कर दिया जाता है। आंच चालू करें और पानी को उबाल लें। परिणामी भाप कार्य कक्ष से हवा को विस्थापित करती है, जो खुले आउटलेट वाल्व के माध्यम से बाहर आती है। जब सारी हवा विस्थापित हो जाती है और भाप की एक सतत धारा नल से निकलती है, तो नल बंद कर दिया जाता है और ढक्कन सील कर दिया जाता है। दबाव नापने का यंत्र के नियंत्रण में भाप को वांछित दबाव में लाया जाता है। भाप का तापमान दबाव पर निर्भर करता है: सामान्य वायुमंडलीय दबाव पर, दबाव नापने का यंत्र सुई 0 एटीएम पर होती है। - भाप का तापमान 100°C, 0.5 एटीएम पर। - 112°C, 1 बजे। -121°C, 1.5 बजे। - 127°सेल्सियस, 2 बजे। - 134°C. नसबंदी के अंत में, आटोक्लेव को बंद कर दें, दबाव कम होने तक प्रतीक्षा करें, धीरे-धीरे भाप छोड़ें और ढक्कन खोलें। आमतौर पर 1 एटीएम के दबाव पर। 20-40 मिनट के भीतर, सरल पोषक मीडिया और समाधान जिनमें प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट नहीं होते हैं, ड्रेसिंग और लिनन को निष्फल कर दिया जाता है। विसंक्रमित की जाने वाली सामग्री भाप के लिए पारगम्य होनी चाहिए। बड़ी मात्रा में सामग्रियों को स्टरलाइज़ करते समय ( शल्य चिकित्सा सामग्री) समय बढ़ाकर 2 घंटे कर दिया गया है। 2 एटीएम के दबाव पर. पैथोलॉजिकल सामग्री और खर्च किए गए माइक्रोबियल संस्कृतियों को कीटाणुरहित करें।

शर्करा युक्त पोषक तत्व मीडिया को 1 एटीएम पर निष्फल नहीं किया जा सकता है, क्योंकि वे कारमेलाइज़ होते हैं, इसलिए उन्हें बहने वाली भाप के साथ आंशिक नसबंदी, या 0.5 एटीएम पर ऑटोक्लेविंग के अधीन किया जाता है।

नसबंदी व्यवस्था को नियंत्रित करने के लिए जैविक और भौतिक तरीकों का उपयोग किया जाता है। जैविक विधि इस तथ्य पर आधारित है कि बैसिलस स्टीयरोथर्मोफिलस बीजाणुओं को निष्फल की जाने वाली सामग्री के साथ एक साथ रखा जाता है, जो 15 मिनट में 121 डिग्री सेल्सियस पर मर जाते हैं। बंध्याकरण के बाद पोषक माध्यम पर बीजाणु नहीं उगने चाहिए। भौतिक विधि उन पदार्थों के उपयोग पर आधारित है जिनका एक निश्चित गलनांक होता है, उदाहरण के लिए, सल्फर (119°C), बेंजोइक एसिड (120°C)। सूखी डाई (फुचिन) के साथ मिश्रित पदार्थ वाली सीलबंद ट्यूबों को निष्फल की जाने वाली सामग्री के साथ एक आटोक्लेव में रखा जाता है। यदि आटोक्लेव में तापमान पर्याप्त है, तो पदार्थ पिघल जाएगा और डाई का रंग बदल देगा।

प्रवाह योग्य नसबंदीभाप को कोच उपकरण में या आटोक्लेव में ढक्कन खोलकर और आउटलेट वाल्व खुला रखकर बाहर निकाला जाता है। उपकरण में पानी को 100°C तक गर्म किया जाता है। परिणामी भाप एम्बेडेड सामग्री से होकर गुजरती है और उसे निष्फल कर देती है। 100°C पर एक भी उपचार बीजाणुओं को नहीं मारता है। इसलिए, आंशिक नसबंदी विधि का उपयोग किया जाता है - 30 मिनट के लिए लगातार 3 दिन, बीच में कमरे के तापमान पर एक दिन के लिए छोड़ दिया जाता है। 100°C पर गर्म करने से बीजाणुओं का तापीय सक्रियण होता है, जिसके परिणामस्वरूप वे अगले दिन तक वानस्पतिक रूप में अंकुरित हो जाते हैं और दूसरे और तीसरे तापन के दौरान मर जाते हैं। परिणामस्वरूप, केवल पोषक माध्यम को बहती भाप से निष्फल किया जा सकता है, क्योंकि बीजाणुओं के अंकुरण के लिए पोषक तत्वों की उपस्थिति आवश्यक है।

1. ज्वलनशील(अक्षांश से। फ्लेम्मा - लौ और फ्र। फ्लेम्ब ई - बर्न) - एक लौ में छोटी धातु या कांच की वस्तुओं को कैल्सीनेशन द्वारा नसबंदी। इस प्रकार, बैक्टीरियोलॉजिकल लूप, धातु चिमटी, ग्लास स्पैटुला और ट्यूब, ग्लास स्लाइड आदि को निष्फल किया जाता है। लौ का तापमान लगभग 1000ºC होता है। जब कैल्सीन किया जाता है, तो सभी सूक्ष्मजीव (वानस्पतिक और बीजाणु रूप) जल जाते हैं। यह नसबंदी का एक तेज़ और विश्वसनीय तरीका है।

2. उबलना. सबमें से अधिक है सरल तरीकेनसबंदी. एक स्टरलाइज़र - धातु में किया जाता है आयताकार बक्सानिष्फल वस्तुओं को रखने के लिए नीचे एक ढक्कन और एक जाली के साथ। इसमें पानी डालें और उबाल आने तक गर्म करें (इलेक्ट्रिक हीटिंग या आग पर)। लगभग 100 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर उबालना 15-30 मिनट से 2 घंटे तक रह सकता है। छोटी धातु या कांच की वस्तुओं - सिरिंज, सुई, कांच की ट्यूब आदि को जीवाणुरहित करें। इस मामले में, सूक्ष्मजीवों के वानस्पतिक रूप और कुछ बीजाणु मर जाते हैं। कीटाणुरहित की जा रही सामग्री को उबलते पानी से जलाने का भी अभ्यास किया जाता है।

3. सूखी गर्मी नसबंदी.पाश्चर ओवन या ओवन में गर्म हवा के साथ उत्पादित। पाश्चर ओवन एक दोहरी दीवार वाली कैबिनेट है जो थर्मल इन्सुलेशन के लिए बाहर एस्बेस्टस से सुसज्जित है। कैबिनेट के अंदर हैं धातु की अलमारियाँउन छिद्रों के साथ जिन पर रोगाणुरहित की जाने वाली सामग्री रखी जाती है। बिजली की हीटिंग। इन तापमानों तक पहुंचने (थर्मामीटर द्वारा नियंत्रित) के क्षण से 1-2 घंटे के लिए 160-180 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर नसबंदी की जाती है। सूखी गर्मी का उपयोग मुख्य रूप से कांच के बर्तनों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है - पेट्री डिश, पिपेट, स्पैटुला (कागज में लपेटा हुआ), साथ ही टेस्ट ट्यूब और फ्लास्क। यह तकनीक विश्वसनीय है - सूक्ष्मजीवों के गैर-बीजाणु और बीजाणु रूप मर जाते हैं। कागज में लपेटकर और कीटाणुरहित करके, सामग्री को संग्रहीत किया जा सकता है।

4. प्रवाहित भाप नसबंदी. गर्म आचरण किया नम हवाकोच तंत्र में. कोच उपकरण (बॉयलर) एक धातु सिलेंडर है, जो पैरों पर हो सकता है और लिनोलियम से ढका हो सकता है। उपकरण में इतना पानी डाला जाता है कि वह कगार तक न पहुंचे, जिस पर छेद वाला एक धातु का घेरा रखा जाता है और उसके ऊपर कीटाणुरहित करने वाली सामग्री रख दी जाती है। उपकरण को शंक्वाकार ढक्कन के साथ कसकर बंद कर दिया जाता है और भाप को बाहर निकालने और आग पर गर्म करने के लिए बीच में एक छेद होता है। जब पानी उबलता है, तो ढक्कन के छेद से लगभग 100 ºС के तापमान के साथ गर्म जल वाष्प एक मजबूत धारा में "प्रवाह" करेगा। इस क्षण से, नसबंदी का प्रारंभ समय नोट किया जाता है। बहती भाप से रोगाणुनाशन 45 मिनट से 1.5 घंटे तक चलता है, जो निर्जलित की जाने वाली सामग्री की मात्रा पर निर्भर करता है। ऐसे पोषक मीडिया को स्टरलाइज़ करें जिसे 100 डिग्री सेल्सियस से ऊपर गर्म नहीं किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, एमपीजी (100 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर यह द्रवीभूत हो जाता है और जमता नहीं है)। नसबंदी की यह विधि पूरी तरह से विश्वसनीय नहीं है - सूक्ष्मजीवों के केवल वानस्पतिक रूप पूरी तरह से नष्ट हो जाते हैं, लेकिन बीजाणु संरक्षित रहते हैं। कोच तंत्र में मीडिया की पूर्ण नसबंदी प्राप्त करने के लिए, आंशिक नसबंदी का उपयोग किया जाता है।

5. दबाव में भाप नसबंदी (आटोक्लेविंग)।यह एक आटोक्लेव में संतृप्त जल वाष्प के साथ किया जाता है। आटोक्लेव हैं विभिन्न डिज़ाइन. ऊर्ध्वाधर आटोक्लेव एक विशाल डबल-दीवार वाला बॉयलर है, जो बाहर की तरफ एक धातु आवरण से घिरा होता है, जिसमें एक भारी टिका हुआ ढक्कन होता है जो बॉयलर से कसकर जुड़ा होता है। बॉयलर के निचले भाग में एक फ़नल और एक नल होता है जिसके माध्यम से पानी डाला जाता है मुक्त स्थानआंतरिक बॉयलर और आवरण के बीच। निष्फल की जाने वाली सामग्री को बॉयलर के निचले भाग में रखा जाता है, ढक्कन को कसकर कस दिया जाता है, और विद्युत ताप चालू कर दिया जाता है। जब पानी उबलता है, तो भाप भीतरी बॉयलर में चली जाती है। आटोक्लेव में दबाव बढ़ जाता है और साथ ही तापमान भी बढ़ जाता है। जब दबाव नापने का यंत्र दिखाता है कि बॉयलर में दबाव निर्दिष्ट मूल्य तक पहुंच गया है, तो नसबंदी के प्रारंभ समय को चिह्नित करें। सुरक्षा वाल्व का उपयोग करके दबाव को एक निश्चित स्तर पर बनाए रखा जाता है।

आमतौर पर प्रयोगशाला अभ्यास में, दबाव नसबंदी 1.5-2 एटीएम और लगभग 115-120 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर की जाती है।

20-30 मि. नसबंदी का समय समाप्त होने के बाद, हीटिंग बंद कर दिया जाता है, भाप वाल्व खोला जाता है और भाप निकल जाती है। दबाव पोषक तत्व मीडिया एमपीबी, एमपीए, पानी के साथ कांच के बर्तन, ड्रेसिंग सामग्री, के तहत भाप के साथ जीवाणुरहित करें। सर्जिकल उपकरणआदि। ऑटोक्लेविंग नसबंदी का एक तेज़ और विश्वसनीय तरीका है, जो सभी प्रकार के सूक्ष्मजीवों, यहां तक ​​कि सबसे प्रतिरोधी बीजाणुओं को भी मार देता है।

6. पाश्चुरीकरण।आंशिक नसबंदी की इस विधि का नाम फ्रांसीसी वैज्ञानिक एल. पाश्चर के नाम पर रखा गया है जिन्होंने इसे प्रस्तावित किया था। विधि यह है कि एक बाँझ कंटेनर में डाला गया तरल पानी के स्नान में 60-90 ºС के तापमान पर गरम किया जाता है

10-30 मिनट. तरल मीडिया के लिए उपयुक्त जो उन्हें बदलता है भौतिक रासायनिक विशेषताएँपर उच्च तापमान. दूध, क्रीम, वाइन, बीयर, जूस आदि को पास्चुरीकृत किया जाता है। साथ ही, विटामिन और भी स्वाद गुणउत्पाद. पाश्चुरीकृत उत्पाद दीर्घावधि संग्रहणके अधीन नहीं हैं, क्योंकि नसबंदी की इस पद्धति से सूक्ष्मजीवों के केवल वानस्पतिक रूप मर जाते हैं, और बीजाणु रह जाते हैं। प्रयोगशाला अभ्यास में, इस विधि का उपयोग मुख्य रूप से बीजाणु बनाने वाली प्रजातियों को गैर-बीजाणु बनाने वाली प्रजातियों से अलग करने के लिए किया जाता है।

7. आंशिक नसबंदी. यह कई चरणों में निष्फल की जाने वाली सामग्री के प्रसंस्करण पर आधारित है। फ्रैक्शनल को कोच उपकरण में बहती भाप के साथ उबालना या निर्जलीकरण किया जा सकता है। आमतौर पर, बताए गए तरीकों में से किसी एक का उपयोग करके प्रतिदिन 3 दिन, 30 मिनट के लिए नसबंदी की जाती है, और ब्रेक के दौरान मीडिया को कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है। ऐसा बीजाणुओं को वानस्पतिक रूपों में विकसित करने और बाद के उपचारों के दौरान उनके विनाश को भड़काने के लिए किया जाता है, जिससे इन तकनीकों की विश्वसनीयता बढ़ जाती है।

8. टिंडलाइज़ेशन।यह एक प्रकार का फ्रैक्शनल स्टरलाइजेशन (फ्रैक्शनल पास्चुरीकरण) है। इस तकनीक का नाम अंग्रेजी वैज्ञानिक डी. टाइन्डल के नाम पर रखा गया है जिन्होंने इसे प्रस्तावित किया था। इसे 1 घंटे के लिए 56-58 ºС के तापमान पर पानी के स्नान में किया जाता है, 24 घंटों के बाद 5-7 बार दोहराया जाता है। हीटिंग के बीच के अंतराल में, सामग्री को कमरे के तापमान पर रखा जाता है। टाइन्डलाइज़ेशन पोषक मीडिया पर किया जाता है जिसमें सूक्ष्मजीवों की कमी होती है और इसमें ऐसे पदार्थ भी होते हैं जो 60 डिग्री सेल्सियस (प्रोटीन, विटामिन) से ऊपर के तापमान पर आसानी से नष्ट हो जाते हैं और विकृत हो जाते हैं। ये रक्त सीरम, अंडे आदि हैं। टाइन्डलाइज़ेशन के परिणामस्वरूप, सूक्ष्मजीवों का पूर्ण विनाश होता है।