У дома · Осветление · Ефектът на физичните фактори върху микроорганизмите. Режим на работа на сушилнята Контролен номер...

Ефектът на физичните фактори върху микроорганизмите. Режим на работа на сушилнята Контролен номер...

В лабораторната практика при работа с микроорганизми е необходимо постоянно да се вземат мерки, за да се гарантира, че съдовете, хранителната среда и металните инструменти, използвани по време на работа, не съдържат микроби. За тази цел се използват следните методи за стерилизация:

Стерилизация прегрята парапод напрежение;

Стерилизация с течаща пара;

Стерилизация с горещ въздух;

Дезинфекция.

Най-добрият метод за стерилизация е обработката на различни предмети с прегрята пара специални устройства- автоклави.

Автоклав и стерилизация с прегрята пара под налягане

Автоклавите са метални (стоманени, чугунени или медни) котли с двойни стени и масивен капак, който е херметически затворен с болтове и гумено уплътнение. В зависимост от отоплителната система автоклавите биват парни, електрически и огневи (фиг. 42). Произвеждането на високо налягане и прегрята пара при температура 115-120°C в автоклав ви позволява да унищожите както вегетативните клетки, така и микробните спори в рамките на 20-30 минути.

В автоклав се стерилизират всички предмети, които не се развалят при високи температури: различни течности (вода, хранителни среди, които не съдържат въглехидратни компоненти), стъклария, метални инструменти, памучна вата, марля, хартия и др.

В случаите, когато някои вещества не издържат на нормалния режим на стерилизация в автоклав (по-специално хранителни среди, съдържащи захари), те се стерилизират в автоклав при температура 112 ° C за 20 минути, както и при по-меки условия.

При високи наляганияпрегрята пара в автоклава, температурата на нагряване се повишава съответно; Това причинява карамелизиране на захарите, добавени към някои хранителни среди, което прави средата неподходяща за определяне на физиологичните свойства на микробите.

Налягането вътре в автоклава се измерва с помощта на манометър, монтиран в капака или тялото на автоклава. Ако налягането се повиши прекомерно, автоматично се активира предпазен клапан, разположен, в зависимост от конструкцията, на капака или на страничната повърхност на стената на автоклава. Струя пара, излизаща от предпазния клапан със свирене, предупреждава за необходимостта от спиране на отоплението. Ако нагряването не бъде спряно, автоклавът може да експлодира.

Понякога в специален джоб на капака на автоклава се поставя термометър, с който се измерва температурата на стерилизация. Вътре в автоклава има стойка, под която се налива вода през тръба с фуния, разположена извън автоклава. Освен това автоклавите са оборудвани с кран за изпускане на пара и въздух и кран за изливане на вода.

Правилата за работа с автоклав по време на стерилизация са следните: устройството се пълни с вода през фуния и тръба, чието ниво трябва да е под стойката. Предметите за стерилизация се поставят в специални метални бутилки и се зареждат в автоклав. Капакът на автоклава се завинтва.

При отваряне на крана, за да може парата и въздухът да излязат, нагряването започва. Веднага след като водата заври, получената пара започва да измества въздуха от автоклава. Изпускателният вентил за пара се държи отворен, докато сухата пара изтече от него в непрекъснат поток. Това означава пълно отстраняване на въздуха от автоклава. След това кранът се затваря. Парата, която се натрупва при по-нататъшно нагряване във все по-големи количества, повишава налягането в автоклава и в същото време температурата. Когато работите с автоклав, можете да се ръководите от таблицата на връзките между налягането на парата и нейната температура (Таблица 4).

След като стрелката на манометъра достигне необходимия индикаторналягане (температурата в автоклава ще съответства на приетата температура на стерилизация), регулирайте нагряването на автоклава така, че налягането да остане на същото ниво за необходимото време. В края на стерилизацията спрете нагряването. Когато температурата в автоклава спадне и стрелката на манометъра падне до нула (налягането в автоклава е равно на атмосферното налягане), внимателно отворете вентила за изпускане на пара, изпуснете парата и, отваряйки капака на автоклава, отстранете материала. Невъзможно е вентилът за освобождаване на пара да се отвори преждевременно, преди налягането в автоклава да падне. Рязкото понижаване на налягането в камерата на автоклава ще предизвика бурно кипене на течности, загряти до по-високи температури от 100 °C, т.е. над точката на кипене при нормално атмосферно налягане. Силно кипящите течности ще намокрят или дори ще изтласкат памучните тапи от съдовете - работата ще бъде напразна. Хранителната среда ще се влоши, тъй като микрофлората, идваща от въздуха, лесно се развива върху мокри тапи, прониква вътре и заразява средата. Освен това отварянето на автоклав с повишено налягане е опасно за работника.

Въпреки това, веднага щом стрелката на манометъра спре на нула, автоклавът трябва да се отвори незабавно, в противен случай ще започне да тече конденз върху щепселите и ще ги намокри. За да се избегне намокряне на тапите с кондензирана вода, те се покриват с хартия преди стерилизация.

Материалите, поставени в автоклав, ще бъдат надеждно стерилизирани за 20-30 минути, ако температурата се поддържа на 120°C, което съответства на налягане от 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) или на манометър с 1 atm над нормалното. Автоклав също може успешно да се използва за стерилизиране на среда с течаща пара; в този случай капакът на автоклава не се завинтва.

Котел Кох и течаща парна стерилизация

Котелът на Кох е цилиндър от поцинкована ламарина или мед с двойни стени и коничен капак с форма на шлем (фиг. 43). В средата на капака има отвор за термометър. Външната страна на котела на Кох е покрита със слой топлоизолационен материал: азбест, линолеум и др.

Вътре в котела е поставена преграда (стойка), която разделя вътрешното пространство на котела на две части: горна и долна. Долната част се напълва с вода, чието ниво се определя от стъклото на водомера: водата не трябва да покрива горната част на стойката. Предметите за стерилизация се поставят в горната част на котела в решетъчни кофи, поставени една върху друга. След като затвориха котела с капак, те започват да загряват водата в него. За начало на стерилизация се счита моментът, когато термометърът покаже 98-100°C. При липса на термометър за начало на стерилизацията се счита моментът, в който парата започне енергично да излиза от отвора в капака на котела. По този начин обектите за стерилизация винаги ще бъдат в поток от течаща пара, докато котелът работи.

Методът на стерилизация с течаща пара, поради своята простота и достъпност, се използва широко в лабораторната практика. Течаща пара се използва за стерилизиране главно на хранителни среди, чиито свойства се променят при нагряване над 100°C: протеини, въглехидрати и желатин. За тези среди най-подходящ е методът за стерилизация с течаща пара.

Недостатъкът на метода за стерилизация с течаща пара е неговата продължителност, тъй като за пълната стерилизация на средата е необходимо многократно нагряване в котел за определено време - от 20 минути до 1,5 часа (средно 30-45 минути) в зависимост от обема на течността на интервали от 24 ч. Препоръчва се целият период от време между нагряването на средата да се поддържа в термостат при 25-30 °C.

Еднократно нагряване в котел на Кох причинява смъртта само на вегетативни микробни клетки, но спорите могат да оцелеят. При съхраняване на стерилизираната хранителна среда в благоприятни условия(при стайна температура, или дори по-добре в термостат), някои от останалите спори ще покълнат и ще се превърнат във вегетативни клетки до следващия ден. Повтарящото се нагряване ще причини смъртта на тези новоразвити клетки. И накрая, трето нагряване след един ден на съхранение на средата в термостат ще осигури пълна стерилност. Този метод се нарича фракционна стерилизация. IN практическа работаВместо стерилизация с течаща пара в котел на Кох, често се използва конвенционална стерилизация в автоклави при 112 °C с обратно налягане от 0,5 atm за 15-20 минути.

Сушилен шкаф и стерилизация с горещ въздух

В лабораторната практика за стерилизиране на микробиологична стъклария е необходимо наличието на сушилен шкаф или така наречената пещ на Пастьор. Принципът на проектиране на сушилния шкаф и пещта на Пастьор са еднакви. Изработват се само печки правоъгълна форма, а сушилните шкафове могат да имат не само правоъгълна, но и цилиндрична форма (фиг. 44 и 45). В тези устройства стерилизацията се извършва с горещ въздух (суха топлина) при температура 160 °C за 1 час или при температура 150 °C за 2 часа.

Както фурните на Пастьор, така и сушилните са кухи отвътре устройства с двойни стени, с двойни врати, които се затварят плътно. Отвън те са покрити със слой азбест за топлоизолация. Циркулира между стените горещ въздух, чието нагряване се извършва или с електрически спирали, или с газови горелки. Вътре в шкафа има няколко (обикновено два или три) рафта с дупки. В горната част на шкафа има два отвора: единият е за термометъра, а другият е за вентилация. Най-удобни са електрическите сушилни шкафове.

Сушилните шкафове с последен дизайн имат четири степени на нагряване, които се активират от специален регулатор, поставен на страничната стена на шкафа. Желаната степен на нагряване се постига чрез включване на един, два, три или четирите електрически спирали, а последователността на включване на спиралите може да бъде всяка.

В допълнение към стъклените съдове можете да стерилизирате марля и памучна вата в сушилни шкафове, но все още е по-добре да ги обработвате в автоклав, тъй като те пожълтяват при температура от 160 ° C. Не може да се стерилизира в сушилен шкафкаучуковите продукти, тъй като не могат да издържат на високи температури, стават крехки и се развалят. Течностите кипят при 150-160 °C и променят химичния си състав.

За да се избегне последващо замърсяване на стерилизираните предмети от микроби от въздуха, те се опаковат в хартия преди стерилизация. Петриевите панички се опаковат в хартия по 2 бр., за да няма пропуски в опаковката. Стъклените тръби и пипети също се опаковат в хартия, първо всяка отделно, а след това в опаковки от 10-20 броя. Опаковането на епруветките и пипетите трябва да бъде изключително внимателно, за да ги защити напълно външна повърхностот комуникация с въздуха. Преди стерилизация с горещ въздух колбите, епруветките, бутилките се затварят с памучни тапи и хартиени капачки.

Не позволявайте температурата в сушилнята да се повишава над 170 °C, тъй като при тази температура памучните тампони покафеняват, а хартиените опаковки стават крехки и дори овъглени. За начало на стерилизация се счита моментът, когато термометърът покаже 150-160 °C. След като изтече необходимото време за стерилизация, нагряването се спира. За да предпазите съдовете от напукване, трябва само да стерилизирате сухи съдове и да отворите шкафа след стерилизация само когато температурата в него падне до 50-70 ° C. Малки лабораторни предмети, като платинени примки, игли, пинсети, ножици и др., могат да бъдат стерилизирани чрез просто нагряване на пламък газов котлон(или алкохолни лампи).

Дезинфекция

Много често се налага да се прибягва до дезинфекция в микробиологична лаборатория. Най-често използваните дезинфектанти са следните: 3-5% разтвор на карболова киселина и разтвори на други висши феноли, 50-70% разтвор етилов алкохол, същата концентрация на бутилов алкохол, 4% разтвор на формалдехид, 1-2% разтвори на хлороформ и толуен, 0,5% разтвор на хлорамин и др.

В микробиологичните лаборатории на консервните фабрики се дезинфекцират повърхности на маси, съдове, подове и стени на помещения. За дезинфекция на повърхностите на масите можете да използвате не само разтвори на етилов алкохол, но и разтвори на карболова киселина.

Дезинфекция канализационни устройствав консервни заводи и др хранителни предприятияпроизведени от 5-10% разтвор на белина. За дезинфекция на циркул стъклени съдовеизползвани в консервните фабрики хлорна вода, съдържащ най-малко 100 mg активен хлор на литър. За да приготвите такъв разтвор, вземете белина и я смесете с малко количество вода, докато се получи гъста маса. млечен. Тази смес се добавя към вода, разбърква се добре и се оставя за един ден. Избелващ прахреагира, за да образува калциев оксид хидрат - Ca(OH)2 - и активен хлор. Ca (OH) 2 се утаява на дъното, разтворът над утайката след избистряне се оказва прозрачен и зеленикав на цвят. Накисването на съда в този разтвор продължава 10 минути. След хлориране контейнерът трябва да се измие обилно в течаща вода.

Термостат– устройство за поддържане на постоянна температура – ​​използва се за отглеждане на култури от микроорганизми. Това е шкаф (Фигура 1), в който се поддържа дълго време определена температура. Оптимална температураза размножаване на много микроорганизми 37 ºС. Предлагат се термостати за сух въздух и вода.

Сушилен шкаф (фурна Пастьор)използва се за стерилизация със суха топлина на съдове, оборудване и сухи материали, като нишесте, креда (Фигура 2). Материалът за стерилизация се увива предварително в хартия и се поставя в шкаф, така че да не се допира до стените. Стерилизацията се извършва при температура 160 ºС за два часа. Повишаването на температурата над 180 ºС не се препоръчва: памучните тапи и хартията започват да се развалят (стават кафяви, стават крехки). Стерилизираният материал се отстранява, след като шкафът е изключен и охладен, за предпочитане когато температурата в шкафа е равна на стайната.

Апарат за преброяване на колонии(Фигура 3) - полуавтоматичен брояч, оборудван с електрическа писалка с пружинно устройство, предназначен за преброяване на бактериални колонии в петриеви панички. Чаша
Петри с бактериални колонии се поставя с главата надолу върху сканиращо стъкло. Лекият натиск на електрическата писалка върху областта на дъното на петриевото блюдо, съответстваща на позицията на колонията, оставя следа върху стъклото. В този случай държачът се издига, веригата се затваря и показанията на измервателния уред се увеличават с единица. Броят на бактериалните колонии се преброява чрез изчисляване на разликата в показанията на импулсния брояч преди началото на броенето и след края му.

Автоклав(Фигура 4) е дебелостенен апарат, предназначен за стерилизиране на съдове и хранителна среда с пара под налягане. Това е запечатан котел с двойни метални стени и капак. Пространството между стените (камерата за водна пара) се запълва с вода. Интериор(стерилизационна камера) е оборудвана с манометър, предпазни клапани и кран за източване на вода и пара. За да се създаде плътно уплътнение, автоклавът е плътно затворен с капак с гумено уплътнение. Използва се за стерилизиране на хранителна среда под налягане от 0,5 до 1,0 MPa за 20...30 минути.

1 – тяло; 2 – термометър; 1 – капак; 2 – тяло;

3 – врата; 4 – потенциометър; 3 – скоростна кутия; 4 – блок за управление;

5 – превключвател; 6 – лампа; 5 – маркировка; 6 – термометър

7 – вентилационни отвори

Фигура 1 - Термостат Фигура 2 - Сушилен шкаф

1 – маса за петриево блюдо; 2 – писалка с пружинно устройство;

3 – брояч индикатор; 4 – превключвател за включване на импулсния брояч; 5 – превключвател за включване на лампата за осветление на измервателния уред

Фигура 3 - Устройство за преброяване на колонии от микроорганизми

Стерилизацията е представена от физични, химични, механични и биологични методи и различни методи. Възможността за използване на определен метод за стерилизация и неговите методи зависи от характеристиките на материала, който ще се стерилизира, неговите физически и химични свойства. Продължителността на стерилизацията зависи от обекта, който се стерилизира, стерилизиращия агент и неговата доза, температура и влажност заобикаляща среда.

Физически методстерилизация Методите на физическия метод на стерилизация включват сушене, изгаряне и калциниране, кипене, пастьоризация и тиндализация, горещ въздух (суха топлина), ултразвук, ултравиолетово и радиоактивно лъчение, високочестотен ток, слънчева светлина. Най-разпространеният метод за стерилизиране на предмети, които могат да бъдат изложени на високи температури, е стерилизация с огън, горещ въздух и наситена пара под налягане. Огънят се използва за изгаряне на заразени предмети, които не представляват никаква стойност (ненужни хартии, стари тапети, парцали, боклук), за дезинфекция на храчки на болни от туберкулоза, трупове на хора и животни, умрели от особено опасни инфекции, както и за изгаряне и калциниране на различни предмети. Изгарянето и калцинирането се използват широко в микробиологичната практика за дезинфекция на инструменти, лабораторна и фармацевтична стъклария. Калцинирането в пламъка на горелка или фламбирането е метод на стерилизация, при който обектът се стерилизира напълно, тъй като загиват вегетативни клетки, цисти и спори на микроорганизми. Обикновено примки, шпатули, пипети, предметни стъкла и покривни стъкла, малки инструменти и други замърсени предмети се стерилизират чрез калциниране, ако не могат да се варят. Не се препоръчва да стерилизирате ножици и скалпели чрез нагряване, тъй като режещата повърхност става матова при излагане на огън. Един от най-простите и най-често срещаните методи за физическа стерилизация, използвани в медицинската практика, е стерилизацията с горещ въздух (суха топлина). Стерилизация със суха топлинаизвършва се в сушилни (пещи на Пастьор). Сухият горещ въздух има бактерицидно, вирусоцидно, спороцидно действие и се използва главно за стерилизация на стъклени продукти (лабораторни съдове - чашиПетриеви колби, пипети, епруветки и др.), както и метални изделия, които могат да бъдат стерилизирани с пара под налягане. Освен това сухата топлина се използва за стерилизиране на предмети от порцелан и топлоустойчиви вещества (талк, бяла глина), както и минерални и растителни масла, мазнини, вазелин, ланолин, восък. Най-ефективният режим за този метод на стерилизация, който осигурява смъртта на вегетативните форми и спорите, е температура 160 - 180 градуса за 15 минути. Не можете да стерилизирате хранителни продукти, изотоничен разтвор или предмети от каучук и синтетични материали със суха топлина, тъй като течностите кипят и се изливат, а каучукът и синтетичните материали се топят. Стерилизация наситена парапод налягане - това е най-надеждният и най-често изпробван метод за стерилизиране на превръзки, вода, някои лекарства, хранителни среди, меко оборудване, инструменти, както и за дезинфекция на отпадъчни замърсени материали. В хирургическата практика дресинг, хирургическите престилки и бельото на оперирания се дезинфекцират с пара в автоклави. Парна стерилизация под налягане се извършва в специални устройства - автоклави. Автоклавирането унищожава напълно всички микроорганизми и спори. Методът за стерилизация под налягане с пара се основава на нагряване на материала с наситена водна пара под налягане над атмосферното. Комбинираното действие на висока температура и пара прави този метод особено ефективен. В този случай както вегетативните клетки, така и микробните спори умират. Спорите на микробите умират в рамките на 10 минути под въздействието на наситени водни пари, а вегетативните форми умират в рамките на 1 до 4 минути. Високата бактерицидна сила на наситената пара се дължи на факта, че под въздействието на водни пари под налягане протеините на микробната клетка набъбват и коагулират, в резултат на което микробните клетки умират. Бактерицидният ефект на наситените водни пари се засилва от свръхналягане. Стерилизацията в автоклав се извършва при различни режими. Така прости хранителни среди (месен пептонен агар и месен пептонен бульон) се стерилизират за 20 минути при 120 градуса (1 atm.). Но с този режим е невъзможно да се стерилизират среди, съдържащи протеини, въглехидрати и други вещества, които лесно се променят чрез нагряване. Средата с въглехидрати се стерилизира в автоклав при 0,5 atm. 10 – 15 минути или частично течаща пара. С помощта на висока температура можете да унищожите най-устойчивите форми на патогенни микроорганизми (включително спорообразуващи) не само на повърхността на обектите, които се дезинфекцират, но и в тяхната дълбочина. Това е голямото предимство на високата температура като надеждно средство за стерилизация. Някои предмети обаче се развалят под въздействието на високи температури и в тези случаи е необходимо да се прибегне до други методи и средства за дезинфекция. Пълна стерилизация на материали и предмети, които не позволяват използването на високотемпературна стерилизация, се постига чрез многократна стерилизация с водна пара в апарат на Кох при температура не по-висока от 100 градуса. Този метод се нарича фракционна стерилизация. Свежда се до факта, че останалите неубити спорови форми на микроби, след един ден в термостат при 37 градуса, покълват във вегетативни клетки, чиято смърт настъпва при последваща стерилизация на този обекттечаща пара. Третирането с течна пара се извършва три пъти в продължение на 30-40 минути. Загряването на материала еднократно при температура под 100 градуса е известно като пастьоризация. Пастьоризацията е предложена от Пастьор и е предназначена главно за унищожаване на предимно неспорови микроорганизми. Пастьоризацията се извършва при 60 - 70 градуса за 15 до 30 минути, при 80 градуса за 10 до 15 минути. В микробиологичната практика пастьоризацията семенен материалчесто се използва за изолиране на чисти култури от спорообразуващи микроорганизми и за определяне на способността на микроорганизмите да образуват спори. За течности, които губят вкус и други ценни качества при излагане на високи температури (мляко, горски плодове и плодови сокове, бира, хранителни среди, съдържащи въглехидрати или урея и др.), Стерилизацията с течаща пара се извършва при 50 - 60 градуса за 15 - 33333330 минути или при 70 - 80 градуса за 5 - 10 минути. В този случай микробите със средна устойчивост умират, докато по-устойчивите микроби и спори се запазват. Фракционната 5-6-кратна стерилизация при 60 градуса за 1 час се нарича тиндализация. Много медицински продукти, направени от полимерни материали, не издържат на стерилизация метод на параспоред общоприетите режими. За много продукти, поради характеристиките на течностите, които съдържат (консерванти, лекарства и други продукти), е невъзможно да се стерилизират по общоприети методи и методи. За такива продукти се разработват индивидуални режими на стерилизация, за да се осигури надеждна стерилизация на обектите. По този начин стерилизацията на ротора за разделяне на кръвта на фракции се извършва с водна пара при температура 120 градуса за 45 минути. Стерилността на контейнерите с консерванти се постига при 110 градуса за 60 минути. Кипенето е метод на стерилизация, използван за дестерилизиране на спринцовки за многократна употреба, хирургически инструменти, гумени тръби, стъклени и метални прибори. Стерилизация чрез кипене се извършва в стерилизатори. Споровите форми във вряща вода умират след 20 - 30 минути. Кипенето в продължение на 45 минути се използва широко за дезинфекция на секрети и други инфекциозни материали, бельо, съдове, играчки и предмети за грижа за пациентите. Топла вода (60 - 100 градуса) с перилни препаратиизползвани за пране и почистване механично отстраняванезамърсители и микроорганизми. Повечето вегетативни клетки умират при 70 градуса след 30 минути. Филтруващата стерилизация се използва в случаите, когато субстратите не могат да издържат на нагряване, по-специално за среди, съдържащи протеини, серуми, някои антибиотици, витамини и летливи вещества. Тази техника се използва доста широко за стерилизиране на културална течност, когато е необходимо тя да се освободи от микробни клетки, но да се запазят непроменени всички метаболитни продукти, които съдържа. Методът включва филтриране на течности през специални филтри, които имат фино порести прегради и следователно задържат микробните клетки. Двата най-широко използвани типа филтри са мембранните филтри и филтрите на Seitz. Мембранните филтри се изготвят от колодий, ацетат, целулоза и други материали. Филтрите Seitz са направени от смес от азбест и целулоза. Освен това за стерилизация се използват филтри от каолин с добавка. кварцов пясък, от почва за инфузор и от други материали („свещи” на Chamberlan, Berkfeld). Мембранните и азбестовите филтри са предназначени за еднократна употреба. При ултравиолетово облъчване бактерицидният ефект се осигурява от лъчи с дължина 200 - 450 nm, чийто източник са бактерицидни лампи. Използвайки бактерицидни лампи, въздухът се стерилизира с ултравиолетови лъчи за терапевтични цели. превантивни институции, кутии на микробиологични лаборатории, в предприятия Хранително-вкусовата промишленост, в кутии за производство на ваксини и серуми, в операционни, манипулационни, детски заведения и др. Ултравиолетовите лъчи имат висока антимикробна активност и могат да причинят смъртта не само на вегетативни клетки, но и на техните спори. Слънчевата светлина причинява смъртта на микроорганизмите в резултат на действието ултравиолетово облъчванеи сушене. Сушенето със слънчева светлина има вредно въздействие върху много видове микроорганизми, но ефектът му е повърхностен и следователно слънчевата светлина играе спомагателна роля в практиката на стерилизация. IN напоследъкпри лечение на рани и изгаряния се използват покрития от синтетични и естествени полимери под формата на гелове. Полимерните антисептични филми се използват широко за локално лечение на рани и изгаряния. Те съдържат такива широкоспектърни антимикробни агенти като катапол, диоксидин, син йод, както и сорбитол, съдържащ глутаралдехид. За стерилизиране на тези филми се използва йонизиращо лъчениепри доза 20,0 kGy. По време на промишленото производство на полимерни антисептични филми и сорбенти, тяхната стерилност при този режим на стерилизация е напълно осигурена. Радиоактивното лъчение убива всички видове микроорганизми, както във вегетативна, така и в спорова форма. Използва се широко за стерилизация в предприятия, произвеждащи стерилни продукти и стерилни медицински изделия за еднократна употреба, за дезинфекция Отпадъчни водии суровини от животински произход.

Механичен методстерилизация Методите за механична стерилизация премахват микробите от повърхността на предметите. Те включват измиване, изтърсване, метене, мокро избърсване, проветряване, проветряване, прахосмукачка, миене.

Метод на химическа стерилизация Сега пластмасите се използват все повече в медицинската практика. Използват се в стоматологията, лицево-челюстната хирургия, травматологията, ортопедията и хирургията. Повечето пластмаси не могат да издържат на методите за топлинна стерилизация на пара под налягане и суха топлина (сух нагрят въздух). Разтворите на алкохол, диоксид и троен разтвор, използвани за стерилизиране на такива предмети, не гарантират стерилността на обработваните продукти. Ето защо за стерилизиране на пластмасови продукти се използват газови и радиационни методи, както и разтвори на химикали. Въвеждане в практиката на лечебните заведения голямо числопродукти, изработени от термолабилни материали, допринасят за въвеждането на радиация, газови методидезинфекция и стерилизация с дезинфекционни разтвори. При химическа стерилизацияизползват газове и агенти от различни химични групи (пероксид, фенол, халоген, алдехиди, основи и киселини, повърхностно активни вещества и др.). За ежедневна употреба се произвеждат детергенти, почистващи, избелващи и други препарати, които имат антимикробен ефект поради въвеждането на различни химически вещества. Тези препарати се използват за почистване и дезинфекция на санитарни помещения техническо оборудване, съдове, бельо и др. Формалдехидна пара (парна форма) може да се използва в лечебни заведенияза стерилизация метални изделияза медицински цели (скалпели, игли, пинсети, сонди, скоби, куки, резачки за тел и др.). Преди стерилизация с формалдехидни пари, продуктите трябва да бъдат подложени на предварително стерилизационно почистване и старателно изсушени. Когато се стерилизира по какъвто и да е начин химическиправилата за обработка на конкретен обект зависят от характеристиките на обекта, който се дезинфекцира, устойчивостта на микробите и характеристиките на свойствата химическа подготовка, околна температура, влажност и други фактори. По този начин стерилността на металните инструменти се постига, като се държат в запечатана камера с пара в продължение на пет часа при температура най-малко 20 градуса и относителна влажност 95 - 98%, при температура 15 градуса, пълна стерилност на тези предмети се постига едва след 16 часа. Спороцидната активност на глутаралдехида зависи от температурата. Оптималното му действие се проявява при температура 15 - 25 градуса. С повишаване на температурата спороцидната активност на това лекарство намалява. Стерилизация химичен методИзползването е малко ограничено. Най-често този метод се използва за предотвратяване на бактериално замърсяване на хранителна среда и имунобиологични препарати (ваксини и серуми). Най-често към хранителните среди се добавят вещества като хлороформ, толуен и етер. Ако е необходимо средата да се освободи от тези консерванти, тя се загрява на водна баня при 56 градуса и консервантите се изпаряват. За консервиране на ваксини или серуми се използва мертиолат, борна киселина, формалин.

Биологичен методстерилизация Биологичната стерилизация се основава на използването на антибиотици. Този метод се използва широко при култивирането на вируси.

Калциниране на огън.Това е надежден метод за стерилизация, но има ограничена употреба поради разваляне на елементите. Бактериологичните бримки се стерилизират по този начин.

Суха стерилизациятреска. Провежда се в пещ на Пастьор (сухожилие ------

фурна) при температура 160-170°C за 1 час. Този метод се използва за стерилизиране на лабораторни стъклени съдове, пипети, увити в хартия, и епруветки, затворени с памучни тапи. При температури над 170°C започва овъгляване на хартия, вата и марля.

Парна стерилизация под налягане (автоклавиране).Най-универсалният метод за стерилизация. Извършва се в автоклав - водно-парен стерилизатор. Принципът на действие на автоклава се основава на зависимостта на температурата на кипене на водата от налягането.

Автоклавът представлява двустенен метален котел с херметически затворен капак. На дъното на автоклава се налива вода, стерилизиращите се предмети се поставят в работната камера и капакът се затваря, без предварително да се завинтва добре. Включете котлона и оставете водата да заври. Получената пара измества въздуха от работната камера, който излиза през отворения изходен клапан. Когато целият въздух е изместен и от крана излиза непрекъснат поток пара, кранът се затваря и капакът се затваря. Парата се довежда до желаното налягане под контрола на манометър. Температурата на парата зависи от налягането: при нормално атмосферно налягане стрелката на манометъра е на 0 atm. - температура на парата 100°C, при 0,5 атм. - 112°C, при 1 atm. -121°C, при 1,5 atm. - 127°C, при 2 atm. - 134°С. В края на стерилизацията изключете автоклава, изчакайте, докато налягането спадне, постепенно изпускайте пара и отворете капака. Обикновено при налягане от 1 atm. в рамките на 20-40 минути се стерилизират прости хранителни среди и разтвори, които не съдържат протеини и въглехидрати, превръзки и бельо. Материалите, които ще се стерилизират, трябва да са пропускливи за пара. При стерилизиране на материали в големи обеми ( хирургически материали) времето се увеличава до 2 часа. При налягане 2 атм. дезинфекцират патологичен материал и отработени микробни култури.

Хранителните среди, съдържащи захари, не могат да бъдат стерилизирани при 1 atm, тъй като те се карамелизират, така че се подлагат на фракционна стерилизация с течаща пара или автоклавиране при 0,5 atm.

За контрол на режима на стерилизация се използват биологични и физични методи. Биологичният метод се основава на това, че едновременно с материала за стерилизация се поставят спори на Bacillus stearothermophilus, които умират при 121°C за 15 минути. След стерилизация спорите не трябва да растат върху хранителната среда. Физическият метод се основава на използването на вещества, които имат определена точка на топене, например сяра (119 ° C), бензоена киселина (120 ° C). Запечатани епруветки, съдържащи веществото, смесено със сухо багрило (фуксин), се поставят в автоклав заедно с материала за стерилизация. Ако температурата в автоклава е достатъчна, веществото ще се стопи и ще промени цвета на багрилото.

Течна стерилизацияПарата се извършва в апарат на Кох или в автоклав с отвинтен капак и отворен изходен клапан. Водата в апарата се загрява до 100°C. Получената пара преминава през вградения материал и го стерилизира. Еднократно третиране при 100°C не убива спорите. Затова се използва метод на фракционна стерилизация - 3 дни подред за 30 минути, между които се оставя за един ден на стайна температура. Затоплянето при 100°C предизвиква термична активация на спорите, в резултат на което те покълват във вегетативни форми до следващия ден и умират при второто и третото нагряване. В резултат на това само хранителни среди могат да бъдат стерилизирани с течаща пара, т.к За да покълнат спорите, е необходимо наличието на хранителни вещества.

1. Фламбиране(от лат. flamma - пламък и фр. flamb é - изгаряне) - стерилизация чрез калциниране на малки метални или стъклени предмети в пламък. По този начин се стерилизират бактериологични бримки, метални пинсети, стъклени шпатули и тръбички, предметни стъкла и др.Температурата на пламъка е около 1000ºC. При калциниране всички микроорганизми (вегетативни и спорови форми) изгарят. Това е бърз и надежден метод за стерилизация.

2. кипене. Е един от най прости начинистерилизация. Извършва се в стерилизатор - метален правоъгълна кутияс капак и мрежа на дъното за поставяне на стерилизирани предмети. Налейте вода и я загрейте до кипене (на електричество или на огън). Варенето може да продължи от 15-30 минути до 2 часа при температура около 100 ºС. Стерилизирайте малки метални или стъклени предмети - спринцовки, игли, стъклени тръби и др. В този случай загиват вегетативни форми на микроорганизми и някои спори. Практикува се и попарване на стерилизирания материал с вряща вода.

3. Стерилизация със суха топлина.Произвежда се с горещ въздух в пещ или пещ на Пастьор. Фурната на Пастьор е шкаф с двойни стени, облицован с азбест отвън за топлоизолация. Вътре в шкафа има метални рафтовес отвори, върху които се поставя материалът за стерилизация. Електрическо отопление. Стерилизацията се извършва при температура 160-180 ºС за 1-2 часа от момента на достигане на тези температури (контролира се с термометър). Сухата топлина се използва за стерилизиране предимно на стъклени съдове - петриеви панички, пипети, шпатули (увити в хартия), както и епруветки и колби. Тази техника е надеждна - неспоровите и споровите форми на микроорганизмите умират. Опакован в хартия и стерилизиран, материалът може да се съхранява.

4. Стерилизация с течаща пара. Провежда се горещо влажен въздухв апарата на Кох. Апаратът на Кох (котел) е метален цилиндър, който може да бъде на крака и покрит с линолеум. В апарата се налива толкова вода, че да не стига до перваза, върху който се поставя метален кръг с дупки и върху него се поставя материалът за стерилизация. Апаратът се затваря плътно с коничен капак с отвор в средата за излизане на парата и се нагрява на огън. Когато водата заври, гореща водна пара с температура около 100 ºС ще „потече” със силна струя от отвора на капака. От този момент се отбелязва началният час на стерилизацията. Стерилизацията с течаща пара продължава от 45 минути до 1,5 часа в зависимост от обема на материала, който се стерилизира. Стерилизирайте хранителни среди, които не могат да се нагряват над 100 ºС, например MPG (при температури над 100 ºС се втечняват и не се втвърдяват). Този метод на стерилизация не е напълно надежден - напълно се унищожават само вегетативните форми на микроорганизмите, но спорите се запазват. За постигане на пълна стерилизация на средата в апарата на Кох се използва фракционна стерилизация.

5. Парна стерилизация под налягане (автоклавиране).Извършва се с наситена водна пара в автоклав. Има автоклав различни дизайни. Вертикалният автоклав е масивен двустенен котел, обграден отвън с метален корпус, с тежък шарнирен капак, който е здраво завинтен към котела. В долната част на котела има фуния и кран, през който се налива вода свободно пространствомежду вътрешния котел и корпуса. Материалът за стерилизация се поставя на дъното на котела, капакът се завинтва добре и се включва електрическото отопление. Когато водата заври, парата преминава във вътрешния котел. Налягането в автоклава се повишава и в същото време температурата се повишава. Когато манометърът покаже, че налягането в котела е достигнало зададената стойност, отбележете началния час на стерилизацията. Налягането се поддържа на определено ниво с помощта на предпазен клапан.

Обикновено в лабораторната практика стерилизацията под налягане се извършва при 1,5-2 atm и температура около 115-120 ºС за

20-30 мин. След изтичане на времето за стерилизация нагряването се спира, парният клапан се отваря и парата се изпуска. Стерилизирайте с пара под налягане хранителни среди MPB, MPA, стъклени съдове с вода, превързочен материал, хирургически инструментиАвтоклавирането е бърз и надежден метод за стерилизация, който убива всички форми на микроорганизми, дори и най-устойчивите спори.

6. Пастьоризация.Този метод на частична стерилизация е кръстен на френския учен Л. Пастьор, който го предлага. Методът е, че течността, излята в стерилен съд, се нагрява на водна баня при температура 60-90 ºС за

10-30 мин. Подходящ за течни среди, които променят своите физикохимични характеристикипри високи температури. Пастьоризират се мляко, сметана, вино, бира, сокове и др.. В същото време витамините и вкусови качествапродукти. Пастьоризирани продукти дългосрочно съхранениене подлежат, тъй като при този метод на стерилизация умират само вегетативни форми на микроорганизми и остават спори. В лабораторната практика този метод се използва главно за разделяне на спорообразуващите видове от неспорообразуващите.

7. Фракционна стерилизация. Основава се на обработване на материала за стерилизация на няколко етапа. Фракционното може да бъде варене или стерилизация с течаща пара в апарат на Кох. Обикновено стерилизацията се извършва в продължение на 3 дни по 30 минути дневно, като се използва един от посочените методи, като в почивките средата се оставя на стайна температура. Това се прави, за да се провокира растежа на спорите във вегетативни форми и тяхното унищожаване при последващи обработки, което повишава надеждността на тези техники.

8. Тиндализация.Това е вид фракционна стерилизация (фракционна пастьоризация). Техниката е кръстена на английския учен Д. Тиндал, който я предлага. Провежда се на водна баня при температура 56-58 ºС за 1 час, повтаря се 5-7 пъти след 24 ч. В интервалите между нагряванията материалът се поддържа при стайна температура. Тиндализацията се извършва върху хранителни среди, които са бедни на микроорганизми и също така съдържат вещества, които лесно се разрушават и денатурират при температури над 60 ºС (протеини, витамини). Това са кръвен серум, яйца и др. В резултат на тиндализацията се постига пълно унищожаване на микроорганизмите.