Aspirationsmethode der Luftprobenahme-Mikrobiologie. Luftmikroflora. Sanitäre und bakteriologische Untersuchung der Luft. Instrumente und Geräte für die Sanitärmikrobiologie

Luft ist ein besonderes Umweltobjekt, das visuell nicht bestimmt werden kann, daher weist seine Probenahme einige Besonderheiten auf. Für eine hygienische Beurteilung der bakteriellen Luftbelastung ist es notwendig zu wissen, wie viel Luft mit dem Nährmedium in Kontakt war, denn Standards regeln eine bestimmte Anzahl von Mikroorganismenkolonien, die wachsen, wenn 1 m 3 (1000 l) Luft beimpft wird.

Abhängig vom Prinzip der Erfassung von Mikroorganismen werden folgende Methoden der Luftprobenahme für die bakteriologische Forschung unterschieden:

Sedimentation;

Filtration;

Basierend auf dem Prinzip der Aufprallwirkung eines Luftstrahls. Das einfachste ist Sedimentationsmethode(Sedimentationsmethode), mit der Sie den sich spontan absetzenden Anteil des mikrobiellen Aerosols erfassen können. Die Beimpfung erfolgt auf Petrischalen mit dichtem Nährmedium, die an mehreren Stellen im Raum aufgestellt und 5-10 Minuten offen gelassen werden, anschließend 48 Stunden bei 37 °C inkubiert und die Anzahl der gewachsenen Kolonien gezählt wird.

Diese Methode erfordert keinen Einsatz von Geräten während der Aussaat, ihr Nachteil ist jedoch der geringe Informationsgehalt, da es unmöglich ist, genaue Daten über die Anzahl der Mikroorganismen zu erhalten, da ihre Ansiedlung spontan erfolgt und ihre Intensität von der Richtung abhängt und Geschwindigkeit der Luftströme. Darüber hinaus ist das Luftvolumen, das mit dem Nährmedium in Kontakt kommt, unbekannt. Mit dieser Methode werden feine Fraktionen von Bakterienaerosol nur schlecht erfasst. Daher wird empfohlen, die Sedimentationsmethode nur zu verwenden, um Vergleichsdaten zur Sauberkeit der Raumluft zu verschiedenen Tageszeiten zu erhalten und die Wirksamkeit von Hygiene- und Hygienemaßnahmen zu beurteilen ( Belüftung, Nassreinigung, Bestrahlung mit UV-Lampen usw.).

Luftkeimfiltrationsmethode besteht darin, ein bestimmtes Luftvolumen durch ein flüssiges Nährmedium zu leiten. Die einfachste Methode ist Dyakonovs Methode, bei der Luft (10-12 l) durch einen elektrischen Aspirator durch einen mit einer sterilen Kochsalzlösung gefüllten Drexel-Kolben geleitet wird. Dann werden 0,1-1 ml physiologische Lösung aus dem Kolben entnommen und mit einem dichten Nährmedium auf eine Petrischale geimpft. Nach der Inkubation werden die gewachsenen Kolonien gezählt und pro 1 m 3 Luft neu berechnet.

Das Prinzip der Aufprallwirkung des Luftstrahls Ich habe eine Implementierung in Krotovs Gerät gefunden. An der Basis des zylindrischen Gerätekörpers befindet sich ein Elektromotor mit Radialventilator und im oberen Teil eine rotierende Scheibe, auf der eine Petrischale mit einem dichten sterilen Nährmedium installiert ist. Der Gerätekörper ist mit einem Deckel mit einem radial angeordneten keilförmigen Schlitz hermetisch verschlossen, durch den von einem Ventilator angesaugte Luft eintritt, der Luftstrom auf den Agar trifft, wodurch mikrobielle Aerosolpartikel daran haften bleiben. Die Drehung der Scheibe mit der Petrischale bei eingestecktem Gerät und der keilförmige Schlitz sorgen für eine gleichmäßige Aussaat auf der Agaroberfläche.

Um die durch das Gerät strömende Luftmenge zu erfassen, ist an der vorderen Außenfläche ein Rheometer installiert, mit dem Sie die Luftansaugrate von 20 bis 40 Liter pro Minute regulieren können. Kenntnis der Zeit (Dauer) der Probenahme und der Geschwindigkeit der Luftübertragung, Bestimmung der Menge der angesaugten Luft. Im letzten Schritt wird die Menge der bakteriellen Luftverschmutzung pro 1 m 3 neu berechnet.

Entwicklung der Fähigkeiten der Studierenden in der Organisation und Durchführung vorbeugender (hygienischer) Maßnahmen, der Aufrechterhaltung und Förderung eines gesunden Lebensstils sowie in diesem Fall der Fähigkeit, Umweltfaktoren zu nutzen physikalische Eigenschaften Luft (die chemische Zusammensetzung der Luft) für Gesundheitszwecke basiert auf einem bewussten Verständnis des Zusammenhangs zwischen menschlicher Gesundheit und Umwelt, Faktoren und Lebensbedingungen sowie Arbeitstätigkeit. Daher müssen die Studierenden über Informationen zur Beherrschung der Methodik der Präventivmedizin verfügen Erwerben Sie hygienische Kenntnisse und Fähigkeiten zur Beurteilung des Einflusses von Lebensraumfaktoren auf die menschliche Gesundheit und die Bevölkerung. Thema: « Sanitäre und hygienische Beurteilung des Mikroklimas in Innenräumen (chemische Zusammensetzung der Luft) » deckt Fragen im Zusammenhang mit den Grundkonzepten des Mikroklimas sowie seinen bestimmenden und regulierenden Faktoren auf. Hygienische Anforderungen an chemische Zusammensetzung Innenluft. Indikatoren, Standards.

Es gibt zwei Hauptmethoden der Luftprobenahme für Forschungszwecke: 1) Sedimentation – basierend auf der mechanischen Ansiedlung von Mikroorganismen; 2) Aspiration – basierend auf dem aktiven Absaugen von Luft (diese Methode ermöglicht es, nicht nur den qualitativen, sondern auch den quantitativen Gehalt an Bakterien zu bestimmen).

Sedimentationsmethode

Es werden Petrischalen mit Nährmedium (MPA) eingelegt offenes Formular horizontal, auf verschiedenen Ebenen vom Boden. Die Methode basiert auf der mechanischen Sedimentation von Bakterien auf der Agaroberfläche in Petrischalen. Abhängig von der zu erwartenden Luftverschmutzung werden die Becher mit dem Medium 10 bis 20 Minuten lang ausgesetzt. Zur Identifizierung der pathogenen Flora werden selektive Medien verwendet. Die Exposition verlängert sich in diesen Fällen auf 2-3 Stunden. Nach der Exposition werden die Schalen verschlossen, ins Labor gebracht und für 24 Stunden in einen Thermostat bei einer Temperatur von 37 °C gestellt. Am nächsten Tag werden die gewachsenen Kolonien untersucht . Diese Methode wird hauptsächlich in geschlossenen Räumen eingesetzt.

(Aspirationsmethode )

Rechmensky-Bakterienfalle. Vor dem Gebrauch wird das Gerät mit steriler Soda gefüllt. Der Betrieb des Geräts basiert auf dem Ansaugen von Luft mithilfe eines Aspirators. Dabei wird die Flüssigkeit im Gerät versprüht. Nach Beendigung des Absaugens wird die mit Luft durchströmte Flüssigkeit mit 0,1–0,2 ml pro MPA in Petrischalen angeimpft. Wenn die Verwendung selektiver Medien erforderlich ist, wird die Saatdosis erhöht (0,3–0,5 ml). Die im Empfänger gewonnene Flüssigkeit kann zur Infektion von Tieren verwendet werden (z. B. in Studien zur Identifizierung von Viren, Rickettsien usw.).

Dyakonovs Gerät basiert ebenfalls darauf, Bakterien in einer Flüssigkeit einzufangen, durch die Luft geleitet wird.

Das Gerät PAB-1 ist für die bakteriologische Untersuchung großer Luftmengen innerhalb kurzer Zeit konzipiert. Luftproben werden mit einer Geschwindigkeit von 125–150 l/min entnommen. Das Funktionsprinzip des Geräts basiert auf dem Einfangen von Mikroorganismen an einer Elektrode mit entgegengesetzter Ladung. Die hohe Geschwindigkeit der Luftprobenahme in diesem Gerät und die Möglichkeit der Beimpfung verschiedener Nährmedien ist wichtig für den Nachweis pathogener und opportunistischer Bakterien (z. B. Pseudomonas aeruginosa in chirurgischen Abteilungen usw.).

Krotovs Apparat. Die Wirkungsweise basiert auf dem Prinzip, dass in Petrischalen ein Luftstrahl auf das Medium trifft. Das Gerät besteht aus drei Teilen: einer Einheit zur Luftprobenahme, einem Rotameter und einem elektrischen Teil des Zufuhrmechanismus.

Mithilfe eines Zentrifugalventilators, der mit einer Drehzahl von 4000–5000 U/min rotiert, wird die zu prüfende Luft in den Schlitz des Geräts gesaugt und trifft mit dem Medium auf die Oberfläche einer offenen Petrischale. In der Luft enthaltene Mikroorganismen siedeln sich auf dem Nähragar an. Um die Mikroorganismen gleichmäßig auf der gesamten Oberfläche zu verteilen, dreht sich der Tisch mit dem darauf befindlichen Becher. Luft wird aus dem Gerät durch einen Luftschlauch entfernt, der mit einem Rotameter verbunden ist, der die Geschwindigkeit der durch das Gerät gesaugten Luft anzeigt.

Der Nachteil von Krotovs Gerät besteht darin, dass es Strom benötigt und daher nicht unter allen Bedingungen verwendet werden kann.

Erster Tag der Studie

Die ausgewählten Proben werden für 18–24 Stunden in einen Thermostat bei 37 °C gestellt.

Zweiter Tag der Studie

Die Schale wird vom Thermostat entfernt und die Kolonien werden gezählt. Die bakterielle Luftverschmutzung wird durch die Gesamtzahl der Mikroben in 1 m 3 Luft ausgedrückt.

Berechnung. Beispielsweise wurden in 10 Minuten 125 Liter Luft durchströmt, 100 Kolonien wuchsen auf der Oberfläche.

Zur Bestimmung von Staphylococcus aureus wird die Probe auf Dotter-Salz-Agar gesammelt. Die beimpften Schalen werden in einem Thermostat 24 Stunden lang bei 37 °C inkubiert und bei gehalten Zimmertemperatur Pigment zu identifizieren. Kolonien, bei denen der Verdacht besteht, dass es sich um S. aureus handelt, sollten weiter identifiziert werden (siehe Kapitel 14).

In Kindereinrichtungen wird die Luft auf Salmonellen untersucht. Dazu wird Luft in eine Schale mit Wismut-Sulfit-Agar-Medium beimpft.

Nachweis pathogener Bakterien und Viren in der Luft geschlossene Räumlichkeiten nach epidemiologischen Indikationen durchgeführt. Zur Identifizierung von Tuberkulose-Erregern kommt ein POV-Gerät zum Einsatz, als Auffangmedium dient Shkolnikovas Medium.

Eine große Gruppe von Instrumenten und Geräten dient der Konzentration von Mikroorganismen in Proben von Gegenständen Außenumgebung(Wasser, Luft) sowie in Proben pathologischen Materials von Patienten.

Bekanntermaßen können Umweltobjekte eine Quelle für Masseninfektionen von Menschen und Tieren sein, wenn sie mit pathogenen Mikroorganismen kontaminiert sind. Um das Vorhandensein pathogener Mikroorganismen in Umweltobjekten zu beurteilen, ist deren direkter Nachweis das zuverlässigste Kriterium. Allerdings ist dies mit den Methoden der mikrobiologischen Praxis nicht immer möglich. Pathogene Mikroorganismen sind in Umweltobjekten schwer zu identifizieren, da es deutlich weniger davon gibt als Saprophyten. Aufgrund antagonistischer Wirkungen auf Nährmedien wird daher das Wachstum pathogener Flora häufig durch das Wachstum von Saprophyten unterdrückt. Die Hauptaufgabe bei der Untersuchung eines Umweltobjekts wie der Luft besteht in der Konzentration der darin suspendierten Mikroorganismen in einer kleinen Flüssigkeitsmenge (Nährmedium).

Einer der führenden Indikatoren für die bakterielle Kontamination von Umweltobjekten ist der Mikrobenzahlindikator. Diese Daten Sanitärmikrobiologie werden durch Zählen der auf Petrischalen gewachsenen Kolonien und anschließende Neuberechnung erfasst.

Eine beträchtliche Anzahl von Arbeiten ist den Methoden der Luftprobenahme gewidmet. Empfohlen große Menge alle Arten von Geräten, die bakterielle Aerosole auffangen.

Eines der ersten Instrumente zur Untersuchung der Aeromikroflora, das in unserem Land in die Massenproduktion eingeführt wurde, war das Krotov-Gerät. Trotz der relativ großen Zeitspanne seit Beginn seiner Serienproduktion (in den fünfziger Jahren) hat das Gerät seine Bedeutung für die Untersuchung des hygienischen und bakteriologischen Zustands der Raumluft nicht verloren und wird in der hygienischen und bakteriologischen Praxis immer noch häufig eingesetzt Labore.

Gerät zur bakteriologischen Analyse von Luft(Krotovs Gerät) (Abb. 58) ist ein mit einem Deckel verschlossener Zylinder, unter dem sich ein Tisch zum Aufstellen einer Petrischale mit einem dichten Nährmedium befindet. Im Inneren des Zylinders befindet sich Elektromotor Dabei dreht sich ein Tisch mit einem Becher und einer Turbine, die durch einen Schlitz im Deckel Luft in das Gerät saugt. Die pro Minute angesaugte Luftmenge wird mit einem Schwimmer-Durchflussmesser ermittelt und über ein Ventil reguliert. Das Gerät wird über das Stromnetz mit Strom versorgt Wechselstrom Spannung 220 V. Abmessungen des Geräts im Gehäuse -229X200X280 mm. Gewicht - 8 kg.

Reis. 58. Gerät zur bakteriologischen Analyse von Luft.
1 - Rotameterventil, 2 - Rotameter; 3 - Kappenschlösser; 4 - rotierende Scheibe; 5 - Abdeckung; 6 - Scheibe; 7 - keilförmiger Spalt; 8 - Körper; 9 - Basis.

Um das Gerät für den Betrieb vorzubereiten, müssen Standard-Petrischalen mit einem Durchmesser von 100 mm und einer Höhe von 20 mm ausgewählt und vorab mit Nährmedium in einer Menge von 15 ml gefüllt werden. Das Befüllen und Kühlen der Nährmedien erfolgt streng horizontale Fläche, Trocknung unter normalen Bedingungen.

Ein weiteres Gerät für einen ähnlichen Zweck ist Luftkeimsammler POV-1(Abb. 59).

Reis. 59. Luftkeimsammler POV-1

Luftproben werden in ein flüssiges Nährmedium entnommen, was den Einsatz spezifischer Selektivmedien und die Durchführung spezieller (gezielter) bakteriologischer Untersuchungen ermöglicht.

Technische Spezifikationen Gerät POV-1
Kapazität............ 20 l/min
Wechselstrom..... 127/220 V
Stromverbrauch.........nicht mehr als 18 VA
Abmessungen des Geräts........................170x255x285 mm
» Verlegung........................170X270X350 »
Gewicht (mit Verpackung)........................ nicht mehr als 15 kg

Luftprobensauger Modell 822, erstellt vom Verein Krasnogvardeets, dient der Analyse von in der Luft enthaltenen Verunreinigungen. Auf der Vorderseite des Geräts (Abb. 60) befinden sich: ein Block zum Anschluss des Geräts an das Netzwerk 1, ein Kippschalter zum Ein- und Ausschalten des Geräts 2, eine Sicherungssteckdose 3, ein Entladeventil, das die Elektrik schützt Motor vor Überlastung bei Luftprobenentnahme bei niedrigen Geschwindigkeiten 4, Rotameter (Kegelglasröhrchen mit Schwimmern) zur Bestimmung des Luftdurchsatzes 5, Rotameter-Ventilgriffe zur Einstellung der Probenahmegeschwindigkeit 6, Schrauben zur Befestigung der Platte am Gerätegehäuse 7, Beschläge zum Anschluss von Gummischläuchen mit Filtern 8 und einer Klemme zur Erdung des Gerätes 9.

Reis. 60. Aspirator zur Luftprobenahme. Erläuterungen im Text.

In Abb. 61 dargestellt generelle Form Absauggerät mit Filterhalter.

Die Probenahme erfolgt, indem Luft mit einer bestimmten Geschwindigkeit durch spezielle Filter gesaugt wird. Durch die Filter strömende Luft hinterlässt die darin enthaltenen Verunreinigungen. Wenn Sie die Luftgeschwindigkeit und die Laufzeit kennen, können Sie die Luftmenge bestimmen, die durch den Filter strömt. Durch die Bestimmung der Menge an Verunreinigungen auf dem Filter können Sie die Menge an Verunreinigungen pro Luftvolumeneinheit berechnen.

Luftprobensauger hergestellt von der französischen Firma Baudard. Der Aspirator ist ein versiegeltes Gerät mit einer Vorrichtung zur Verstärkung feinporiger Filter, das nach dem Ansaugen einer bestimmten Luftmenge durch den Aspirator leicht entfernt und je nach Zweck der Studie entweder bakteriologisch (Inkubation des Filters mit Mikroorganismen) untersucht werden kann darauf in Nährmedien) oder mikroskopisch (Bestimmung der Art der vom Filter zurückgehaltenen Partikel, deren Zählung usw.).

Die verwendeten feinporösen Filter können entweder aus Papier oder Glasfaser sein. Der Durchmesser der Filter beträgt 110 mm.

Der Radialventilator verfügt über zwei Geschwindigkeiten und ist für die Stromversorgung aus einer 220-V-Netzspannung ausgelegt; Motorleistung - 50 W; Produktivität des Absauggeräts – von 360 bis 1000 l/min, abhängig vom Widerstand des verwendeten feinporigen Filters.

Bei der Untersuchung von Wasser und anderen Umweltobjekten (Boden) sowie biologischen Flüssigkeiten von Mensch und Tier (Sputum, Exsudate und Transsudate) auf das Vorhandensein pathogener Flora, wie bei der Untersuchung der Luft, ist eine vorläufige Konzentration von Mikroorganismen in einem kleinen Volumen erforderlich Es ist die Herstellung eines Nährmediums erforderlich, das anschließend einer bakteriologischen Untersuchung (Mikroskopie, Kultur, biochemische und serologische Reaktionen usw.) unterzogen wird.

Reis. 61. Aspirator mit Filterhalter.

Allerdings sind die Fortschritte auf dem Gebiet der Methoden zur Konzentration von Mikroorganismen aus Umweltobjekten gering und hauptsächlich Wir müssen uns auf alte Methoden beschränken, die repräsentieren verschiedene Wege Ersparnisse:
- Ablage mit mechanischen Mitteln- Filtration, Zentrifugation, Wasserverdampfung;
- Sedimentation von Mikroben durch physikalische und chemische Methoden unter Verwendung verschiedener Gerinnungsmittel;
- Konzentration von Mikroben durch Flotationsverfahren;
- Ausfällung von Mikroben mit spezifischen agglutinierenden Seren;
- die Verwendung kombinierter Methoden zur Konzentration von Mikroorganismen, bestehend aus einer Kombination von Fällungsmethoden mit anschließender Aussaat auf Nährmedien oder Infektion eines anfälligen Labortiers.

Neue Methoden zur Konzentration von Mikroorganismen basieren auf der Anwendung bestimmter physikalischer Prinzipien. Ein solches physikalisches Prinzip ist die Elektrophorese. Die Verwendung dieser Methode gewährleistet die Bewegung einer mikrobiellen Zelle zu einer der Elektroden, die sich in einem flüssigen Medium unter dem Einfluss von außen befinden elektromotorische Kraft(EMF). Dieses Prinzip bildet die Grundlage des EFM-1-Geräts (Abb. 62). Mit dem Gerät können Sie mikrobielle Zellen mit positiver oder negativer Oberflächenladung in einem kleinen Volumen isolierter Flüssigkeit (0,01–0,02 ml) konzentrieren.

Reis. 62. Gerät zur Elektrophorese von Mykobakterien EFM-1.

Zusätzlich zu Wasseruntersuchungen kann das Gerät für bakteriologische Untersuchungen von wässrigen Suspensionen von Lebensmitteln, verschiedenen Waschungen usw. verwendet werden. Das Gerät kann auch zum Nachweis von Mikroorganismen in verwendet werden Verschiedene Materialien, gewonnen von Patienten, insbesondere zum Nachweis von Mycobacterium tuberculosis in Materialien wie Liquor, Bronchial- und Magenspülungen, Punktaten aller Art und Urin. In Abstrichen, die aus einer Suspension von Mycobacterium tuberculosis in Kochsalzlösung hergestellt und einer elektrophoretischen Konzentration unterzogen wurden, erhöht sich die Anzahl der mikrobiellen Zellen im Vergleich zu Abstrichen aus nativem Material um das 10- bis 15-fache.

Das Gerät ist mit einem Zubehörset ausgestattet, das 20 unzerbrechliche Küvetten mit einem Fassungsvermögen von 12 ml, Elektroden und Pipetten umfasst. Das Gerät wird mit einer Wechselspannung von 220 V ± 10 %, 50 Hz betrieben. Stromverbrauch - nicht mehr als 20 W. Abmessungen - 405X165X205 mm. Das Gewicht des Gerätes mit Zubehör beträgt 6 kg.

Funktionsprinzip des Gerätes. 10 ml des Testmaterials werden in spezielle, dem Gerät beiliegende Küvetten gefüllt. Über jeder Küvette wird mit einem Klemmhalter eine Pipette befestigt, in der sich eine Graphitelektrode befindet. Ein Teil der zu prüfenden Flüssigkeit steigt 4–5 mm entlang der Kapillare der Pipette nach oben und berührt die Elektrode. Abhängig vom Zweck der Studie wird die Polarität des angelegten EMF festgelegt. Es wird empfohlen, die Elektrophorese 1-3 Stunden lang durchzuführen.

Nach dem Abschalten des Stroms wird die Flüssigkeit aus der Kapillare mit einem Gummiballon in einen Tropfen Serum (normales Pferde- oder Kaninchenserum, verdünnt 1:10) gedrückt, der zuvor auf die Oberfläche eines Glasobjektträgers aufgetragen und gründlich mit a vermischt wurde Mit einer versiegelten Pasteurpipette wird das Präparat getrocknet, über einer Brennerflamme fixiert und nach Gram, Ziehl - Nielsen oder einer anderen Methode gefärbt.

Um diagnostische Fehler auszuschließen, werden alle Manipulationen mit sorgfältig aufbereiteten Küvetten, Pipetten und Objektträgern durchgeführt. Graphitelektroden müssen nach jeder Studie gewechselt werden.

Lösungen von Farben und Säuren müssen sorgfältig bakteriologisch getestet werden.

Erhöhung der Genauigkeit der Zählung gewachsener Mikrobenkolonien im Kiewer Werk medizinische Ausrüstung Es wird ein Gerät zur Zählung von Bakterienkolonien hergestellt. Um Kolonien mit einem elektrischen Stift zu zählen, werden auf dem Boden des Bechers Punkte an der Stelle jeder Kolonie markiert, während die Kontakte des elektrischen Stifts geschlossen sind und ein am Zähler ankommender elektrischer Impuls eine Zählung auslöst. Aussehen Das Gerät ist in Abb. dargestellt. 63.

Reis. 63. Koloniezählgerät.

Um die Anzahl der Kolonien auf einer geschlossenen Schale zu zählen, wird die Rückseite der Schale mit einem Bleistift oder Kugelschreiber markiert, wodurch die Möglichkeit ausgeschlossen wird, dieselbe Kolonie zweimal zu zählen.

Universalzähler zum Zählen von Kolonien auf dem Bactronic-Nährmedium Ausgestattet mit einer elektronischen Spitze zum Zählen der Kolonien auf offenen Platten. Bei Kontakt mit einem Agarmedium aktiviert die Spitze einen elektromagnetischen Zählmechanismus und hinterlässt eine Markierung auf der Oberfläche des Mediums.

Dieses Gerät eliminiert elektrische Entladungen, die bei der Verwendung anderer Systeme auftreten.

Wenn Sie die Anzahl der Kolonien auf Platten mit geringem Wachstum zählen, können Sie die Taste auf dem Instrumentenbrett und bei Bedarf die Fernbedienung verwenden Druckknopfschalter, was die Arbeit erleichtert.

Die Firma Millipore stellt ein besonderes Produkt her Koffer für die mikrobiologische Forschung. Der Koffer, der im Wesentlichen ein tragbares Labor ist (Abb. 64), bietet alles notwendige Materialien und Geräte zur Erforschung der bakteriellen Kontamination von Wasser, zum Nachweis von Mikroorganismen in der Luft und im Boden, zur Überwachung von Temperatur und Bakterienwachstum sowie zur Identifizierung von Hefepilzen Umfeld, Gasbildung durch Hefe, Bestimmung der Wirksamkeit von Desinfektionsmitteln usw.

Reis. 64. Aufbewahrungskoffer für mikrobiologische Untersuchungen.

Zur Bestimmung der Qualität von Lebensmitteln wird ausgestellt Luminoskop LPK-1. Mit seiner Hilfe können Sie die Fleischsorte, den frühen Verderb von Schweinefleisch und Schweinefett sowie das Verhältnis bestimmen Komponenten Hackfleisch, Untersuchung von Speiseölen, Fetten, Honig und anderen Produkten (Abb. 65).

Das Gerät nutzt das Prinzip der visuellen Lumineszenzanalyse. Unter dem Einfluss ultraviolette Strahlung Lebensmittel Je nach Beschaffenheit und Qualität beginnen sie in unterschiedlichen Farben zu leuchten und Lichtfilter heben die entsprechenden Teile des Spektrums hervor. Bei der Arbeit mit dem Gerät muss der Raum nicht abgedunkelt werden, der Forscher ist vor ultravioletten Strahlen geschützt.

Der Betriebsmodus des Geräts ist intermittierend. Arbeitszeit - 1 Stunde, Pause - 25 Minuten. Die Produktrecherche dauert nicht länger als 1 Minute. Das Gerät wird über das Wechselstromnetz mit Strom versorgt – 220 V ±10 %. Stromverbrauch - nicht mehr als 350 W. Maße- 366X185X240 mm. Gewicht - 6 kg.

Reis. 65. Gerät zur Bestimmung der Qualität von Produkten LPK-1.

Die hygienische und mikrobiologische Untersuchung der Luft kann unterteilt werden in 4 Stufen:

1) Probenahme;

2) Verarbeitung, Transport, Lagerung von Proben, Gewinnung eines Konzentrats von Mikroorganismen (falls erforderlich);

3) bakteriologische Aussaat, Kultivierung von Mikroorganismen;

4) Identifizierung der isolierten Kultur.

Stichprobenauswahl:

Eine ordnungsgemäße Probenahme gewährleistet die Genauigkeit der Studie. In geschlossenen Räumen werden Probenahmestellen im Verhältnis einer Luftprobe pro 20 m2 Fläche wie bei einer Hülle festgelegt: 4 Punkte in den Ecken des Raums (im Abstand von 0,5 m von den Wänden) und der 5. Punkt in der Raumecke Center. Luftproben werden in einer Höhe von 1,6–1,8 m über dem Boden entnommen – in Wohnräumen auf Atemhöhe. Die Probenentnahme muss tagsüber (in Zeiten aktiver menschlicher Aktivität) nach der Nassreinigung und Belüftung des Raumes erfolgen. Atmosphärische Luft werden in einem Wohngebiet in einer Höhe von 0,5–2 m über dem Boden in der Nähe von Schadstoffquellen sowie in Grünflächen (Parks, Gärten usw.) untersucht, um ihre Wirkung auf die Luftmikroflora zu beurteilen.

Zu beachten ist, dass bei der Entnahme von Luftproben in vielen Fällen ein Nährboden angeimpft wird.

Alle Luftprobenahmemethoden können in Sedimentation und Aspiration unterteilt werden.

Sedimentation- am meisten alte Methode wird aufgrund seiner Einfachheit und Verfügbarkeit häufig verwendet, ist jedoch ungenau. Die Methode wurde von R. Koch vorgeschlagen und besteht in der Fähigkeit von Mikroorganismen, sich unter dem Einfluss der Schwerkraft und unter dem Einfluss der Luftbewegung (zusammen mit Staubpartikeln und Aerosoltröpfchen) auf der Oberfläche des Nährmediums in offenen Petrischalen anzusiedeln. Becher werden an Probenahmestellen auf einer horizontalen Fläche installiert. Bei der Bestimmung der gesamten mikrobiellen Kontamination werden Platten mit Fleischpepton-Agar je nach Grad der vermuteten bakteriellen Kontamination 5–10 Minuten oder länger offen gelassen. Um gesundheitsrelevante Mikroben zu identifizieren, verwenden Sie Garro- oder Turzhetsky-Medium (zum Nachweis von Streptokokken), Milch-Salz- oder Dotter-Salz-Agar (zum Nachweis von Staphylokokken), Würze-Agar oder Sabouraud-Medium (zum Nachweis von Hefen und Pilzen). Bei der Bestimmung von gesundheitsrelevanten Mikroorganismen werden die Becher 40–60 Minuten lang offen gelassen.

Am Ende der Exposition werden alle Schalen verschlossen, einen Tag lang zur Kultivierung bei einer für die Entwicklung des isolierten Mikroorganismus optimalen Temperatur in einen Thermostat gestellt und dann (sofern die Forschung dies erfordert) für die Bildung 48 Stunden bei Raumtemperatur belassen von Pigmenten durch pigmentbildende Mikroorganismen.

Das Sedimentationsverfahren hat eine Reihe von Nachteilen: Nur grobe Anteile des Aerosols setzen sich auf der Oberfläche des Mediums ab; Kolonien werden oft nicht aus einer einzelnen Zelle, sondern aus einer Ansammlung von Mikroben gebildet; Auf den verwendeten Nährböden wächst nur ein Teil der Luftmikroflora. Darüber hinaus ist diese Methode für die Untersuchung der bakteriellen Belastung der Luft völlig ungeeignet.

Fortgeschrittenere Methoden sind Aspiration, basierend auf der erzwungenen Ablagerung von Mikroorganismen aus der Luft auf der Oberfläche eines dichten Nährmediums oder in einer Auffangflüssigkeit (Fleisch-Pepton-Brühe, Pufferlösung, isotonische Natriumchloridlösung usw.). In der Praxis Sanitärdienst Bei der Entnahme von Aspirationsproben werden ein Krotov-Gerät, eine Rechmensky-Bakterienfalle, ein Luftprobenahmegerät (POV-1), ein bakteriologischer Aerosol-Probenehmer (PAB-1), ein bakteriell-viraler Elektropräzipitator (BVEP-1), ein Kiktenko-Gerät, Andersen verwendet , Dyakonov, MB-Geräte werden verwendet. usw. Zur Untersuchung der Atmosphäre können auch Membranfilter Nr. 4 verwendet werden, durch die Luft mit einem Seitz-Gerät gesaugt wird. Die große Vielfalt der Instrumente weist auf das Fehlen eines universellen Apparats und einen mehr oder weniger großen Grad ihrer Unvollkommenheit hin.

Krotovs Gerät. Derzeit wird dieses Gerät häufig zur Untersuchung der Raumluft eingesetzt und ist in Labors erhältlich

Krotovs Apparat

Das Funktionsprinzip des Krotov-Apparats (Abb. 22) beruht darauf, dass Luft, die durch einen keilförmigen Schlitz im Deckel des Geräts angesaugt wird, auf die Oberfläche des Nährmediums trifft, während Staub- und Aerosolpartikel haften bleiben auf das Medium und mit ihnen Mikroorganismen in der Luft.

Bakteriell-viraler Elektropräzipitator (BVEP-1). Das Gerät basiert auf dem Aspirations-Ionisationsprinzip. BVEP-1 besteht aus einer Niederschlagskammer, in der Elektroden angebracht sind: eine negative in Form eines Leitrohrs, durch das Luft eindringt (und die Aerosolpartikel entsprechend negativ geladen werden), und eine positive, auf der sich Bakterien ansiedeln.

MB-Gerät. Dieses Gerät dient nicht nur zur Bestimmung der allgemeinen mikrobiellen Belastung, sondern auch zur Entnahme von Luftproben mit Aerosolpartikeln unterschiedlicher Größe. Das MB-Gerät ist nach dem „Sieb“-Prinzip aufgebaut und besteht aus einem Zylinder, der in 6 horizontale Streifen unterteilt ist, auf denen jeweils Petrischalen mit MPA platziert werden. Die Luft wird ausgehend von der obersten Stufe angesaugt, in deren Platte die Löcher am größten sind, und je niedriger die Stufe, desto kleiner die Löcher (durch letztere gelangen nur feine Anteile des Luftaerosols). Das Gerät ist für die Erfassung von Aerosolpartikeln mit einer Größe von mehr als 1 Mikrometer bei einer Luftprobenahmerate von 30 l/min ausgelegt. Die Reduzierung der Lochanzahl sorgt für eine gleichmäßigere Verteilung des Aerosols aus der Luft im gesamten Nährmedium. Um noch kleinere Aerosolpartikel einzufangen, können Sie einen zusätzlichen Filter aus AFA-Filtermaterial hinzufügen.

Bei Verwendung eines der aufgeführten Geräte handelt es sich um ungefähre Ergebnisse, die jedoch im Vergleich zur Sedimentationsmethode eine genauere Beurteilung der Luftverschmutzung ermöglichen. Da sowohl die Probenahme als auch die hygienisch-mikrobiologischen Untersuchungen der Luft nicht durch GOST geregelt sind, kann jedes Gerät zur Beurteilung der bakteriellen Luftverschmutzung verwendet werden. In vielen Fällen wird die Probenahme mit der Inokulationsphase kombiniert.

Um die Anzahl der Mikroorganismen in der Luft geschlossener Räume zu reduzieren, werden folgende Mittel eingesetzt: a) chemisch – Behandlung mit Ozon, Stickstoffdioxid, Versprühen von Milchsäure, b) mechanisch – Luft durch spezielle Filter leiten, c) physikalisch – ultraviolett Bestrahlung.

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Die quantitative und insbesondere qualitative Zusammensetzung der Luftmikroflora ist Hygieneindikator Grad der Luftverschmutzung.
Um den Grad der Luftreinheit zu beurteilen, schlug A. I. Shafir die folgenden Kriterien vor. In unbelüfteten Wohngebieten in Sommerzeit Luft kann als sauber angesehen werden, wenn die Gesamtzahl der Mikroorganismen in 1 m3 Luft weniger als 1500 und Viridans und hämolytische Streptokokken weniger als 16 beträgt, und als verschmutzt, wenn sie mehr als 2500 Mikroorganismen und mehr als 36 Streptokokken enthält. Im Winter nimmt die Zahl der Mikroorganismen in Räumen naturgemäß deutlich zu. Entsprechend. A. I. Shafir, für saubere Luft die Gesamtzahl der Mikroben beträgt weniger als 4500 und die der Streptokokken weniger als 36 pro 1 m3; bei verschmutzten Tieren beträgt die Gesamtzahl der Mikroben mehr als 7000 und die der Streptokokken mehr als 124.
Zur Bestimmung des Luftreinheitsgrades werden folgende mikrobiologische Untersuchungsmethoden eingesetzt.

1. Eine Methode, die auf dem Prinzip der Aufprallwirkung eines Luftstrahls basiert.
2. Sedimentationsmethode.

Für jeden mikrobiologische Methode Die Luftforschung berücksichtigt sowohl die Gesamtzahl der Mikroorganismen in einem bestimmten Luftvolumen als auch deren qualitative Zusammensetzung. Aerobe und anaerobe Mikroflora werden getrennt berücksichtigt.
Um aerobe Saprophyten in der Luft zu identifizieren, erfolgt die Beimpfung auf Fleisch-Pepton-Agar und beim Test auf das Vorhandensein von Streptokokken und Staphylokokken wird die Luft auf spezielle Medien (Zuckeragar, Blutagar) beimpft. Zur Isolierung und Zählung von Staphylo- und Streptokokken wird außerdem Fleisch-Pepton-Agar mit Zusatz von 3 % defibriniertem Schafsblut, 0,25 % Glucose und Enzianviolett 1:50.000-1:500.000 verwendet.
Um das Vorhandensein anaerober Mikroben zu testen, wird die Luft auf ein Eisensulfitmedium (Wilson-Blair-Medium) geimpft. Dieses Medium wird wie folgt hergestellt. Zu 100 ml geschmolzenem und dann auf 80° abgekühltem alkalischem Fleisch-Pepton-Agar werden 1 % sterile Glucose, 10 ml 20 % Natriumsulfat und 1 ml 8 % Eisenchloridlösung hinzugefügt. Eine Eisenchloridlösung wird in sterilem destilliertem Wasser hergestellt. Die Natriumsulfatlösung wird 1 Stunde lang unter fließendem Dampf sterilisiert.
Luftforschungsmethode basierend auf dem Prallstrahlprinzip. Für die Untersuchung von Luft mit der Prallstrahlmethode wurde eine Reihe von Geräten vorgeschlagen. Das vom sowjetischen Wissenschaftler Yu. A. Krotov entworfene Gerät hat einen Vorteil gegenüber anderen (Abb. 124, 125).
Krotovs Gerät ist in einem Kasten montiert und besteht aus drei Teilen: 1) einer Einheit zur Luftprobenahme; 2) Mikromanometer; 3) ein in einer Holzkiste untergebrachter Vorschubmechanismus (elektrischer Teil).

Das Gerät kann sowohl an 127 V als auch an 220 V angeschlossen werden und mit einem speziellen Schalter und Rheostat kann die Geschwindigkeit des durch das Gerät strömenden Luftstroms reguliert werden. Mit dem Krotov-Gerät können Sie innerhalb von 1 Minute 25 bis 50 Liter Luft durchlassen. Der Wirkungsmechanismus des Krotov-Apparats ist wie folgt. Mithilfe eines Zentrifugalgebläses, das mit einer Drehzahl von 4000–5000 U/min rotiert, wird die zu untersuchende Luft energisch durch den Spalt im Gerätedeckel gesaugt und trifft auf die Oberfläche einer offenen, mit Nähragar gefüllten Heidenreich-Schale, die auf einer kleinen Laufradscheibe montiert ist. In der Luft enthaltene Mikroorganismen siedeln sich auf dem Nähragar der Heidenreich-Platte an.

Reis. 124. Krotovs Gerät für mikrobiologische Forschung Luft (Gesamtansicht).

Abb. 125. Krotovs Gerät zur mikrobiologischen Untersuchung der Luft (Diagramm).
1 - zylindrischer Körper; 2 - Körperbasis; 3 - Elektromotor; 4 - Radialventilator; 5 - achtblättriges Laufrad; 6 - Scheibe; 7 - Federn; 8 - Heidenreich-Pokal; 9 - Abdeckungen; 10 - Kappenschlösser; 11 - Plexiglasscheibe; 12 - keilförmiger Spalt; 13 - Spaltring; 14 - Fitting mit Membran; 15 - Auslassrohr.

Um eine gleichmäßige Verteilung der Mikroorganismen über die gesamte Oberfläche des Bechers zu gewährleisten, sollte sich der Tisch mit dem Becher nicht sehr schnell drehen (60 U/min). Die Luft wird über einen Luftschlauch aus dem Gerät entfernt, der mit einem Mikromanometer verbunden ist, das die Geschwindigkeit des Luftdurchgangs durch das Gerät anzeigt. Der Becher wird 10 Minuten lang ausgesetzt, danach wird der Motor gestoppt. Entfernen Sie die Abdeckung des Geräts. Nehmen Sie einen Becher mit Luftimpfung heraus und verschließen Sie ihn mit einem Deckel. Dann machen sie das. Bei der Bestimmung der aeroben Flora wird eine Heidenreich-Schale mit Beimpfung 24 Stunden lang in einen Thermostat bei einer Temperatur von 37° gestellt und dann 24 Stunden lang bei Raumtemperatur belassen und alle gewachsenen Kolonien auf der Oberfläche des Agars gezählt. Anschließend wird der Becher weitere 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen, danach (72 Stunden ab dem Zeitpunkt der Aussaat) erfolgt eine differenzierte Zählung, d.h. Pigmentformen, sporentragende Formen und Schimmelpilze werden getrennt berücksichtigt.
Um die Anzahl der anaeroben Mikroorganismen zu bestimmen, wird eine aus Krotovs Gerät entnommene Platte mit Inokulation zusätzlich mit 10-15 ml Fleisch-Pepton-Agar gefüllt, um anaerobe Bedingungen für das Wachstum von Mikroben zu schaffen, und in einen Thermostat bei einer Temperatur von 37 °C gestellt ° für 24 Stunden.
Auf Sulfitagar, mit dem der Becher vor der Aussaat gefüllt wird, wachsen anaerobe Mikroben in Form geschwärzter Kolonien, anhand derer man den Grad der Luftverschmutzung durch anaerobe Mikroben beurteilen kann.
Die bakterielle Luftverschmutzung wird durch die Gesamtzahl der Mikroben in 1 m3 Luft ausgedrückt.
Beispiel. 125 Liter Luft wurden in 10 Minuten durch Krotovs Apparatur geleitet und auf der Oberfläche des Mediums wuchsen 100 Kolonien.
Anzahl der Mikroben in 1 m3 Luft
Sedimentationsmethode der Luftforschung (Bechermethode). Die Sedimentationsmethode ist am weitesten verbreitet einfache Methode zur Untersuchung der Luftmikroflora, obwohl es keine große Genauigkeit aufweist.
Werden Becher gleichen Durchmessers für den gleichen Expositionszeitraum verwendet, können mit dieser Methode Vergleichsdaten zur bakteriellen Luftbelastung gewonnen werden. Die Technik dieser Methode ist wie folgt. Heidenreich-Petrischalen mit gefrorenem Agar werden offen darauf gestellt verschiedene Höhen drinnen auf verschiedene Begriffe(ab 15 Minuten
bis zu 1,5 Stunden). Anschließend werden die Becher verschlossen und in einen Thermostat gestellt. Die Inkubation der Pflanzen erfolgt nach der oben beschriebenen Methode.
Um die Anzahl der Mikroben pro 1 m3 neu zu berechnen, verwenden Sie die Formel von V. L. Omelyansky, der glaubte, dass sich während einer 10-minütigen Einwirkung so viele Mikroben auf der Oberfläche eines dichten Nährmediums von 100 cm2 ansiedeln wie in 10 Litern Luft . Er hat eine entsprechende Berechnungstabelle erstellt, anhand derer sich die Gesamtzahl der Mikroorganismen in 1 m3 Luft berechnen lässt. Diese Tabelle gibt konstante Faktoren an, mit denen die resultierende Anzahl an Kolonien multipliziert werden muss, abhängig vom Durchmesser und der Fläche der Schale, in der die Inokulation durchgeführt wird. Wir präsentieren ein Diagramm konstanter Multiplikatoren zur Berechnung der Mikrobenzahl nach Omelyansky (Tabelle 34).
Tabelle 34
Berechnung der Anzahl der Mikroben in 1 m3 Luft (nach Omelyansky)

Beispiel. Auf einer 63 cm2 großen Platte wuchsen 25 Kolonien. Die Anzahl der Mikroben in 1 m3 Luft beträgt in diesem Fall 25X80 = 2000.