पाश्चर ओवन. सूक्ष्मजीवों पर भौतिक कारकों का प्रभाव। जीवाणु फिल्टर का उपयोग करके यांत्रिक नसबंदी

भौतिक एवं रासायनिक कारकों का उपयोग करना।

भौतिक नसबंदी कारकों में उच्च तापमान, पराबैंगनी किरणें, आयनीकरण विकिरण और जीवाणु फिल्टर शामिल हैं।

प्रयोगशाला अभ्यास में, उच्च तापमान का उपयोग करके नसबंदी को लौ में कैल्सीनेशन, शुष्क गर्मी के साथ गर्म करना, उबालना, बहती भाप या दबाव में भाप के साथ उपचार द्वारा प्राप्त किया जाता है।

चावल। 1. बन्सेन बर्नर। चावल। 2. टेकलू बर्नर। चावल। 3. बर्नर लौ में तापमान वितरण।

चावल। 4. सुखाने वाली कैबिनेट।

चावल। 5. जल स्नान: 1 - पानी के निरंतर प्रवाह के साथ; 2 - बेलनाकार; 3 - गोल तली। चावल। 6. प्रवाहित भाप स्टरलाइज़र।

लौ नसबंदी विभिन्न गर्मी प्रतिरोधी वस्तुओं के प्रसंस्करण के लिए एक सरल और विश्वसनीय तरीका है: सुई, जीवाणु लूप, सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्पैटुला, पिपेट, स्लाइड और कवर ग्लास, चिमटी, आदि। इस उद्देश्य के लिए, बन्सेन प्रणाली के गैस बर्नर (चित्र 1) या टेकलू (चित्र 2)। बन्सेन बर्नर एक चल धारक से सुसज्जित है, जिसे घुमाकर आप हवा की पहुंच को समायोजित कर सकते हैं। टेकलू बर्नर में, आने वाली हवा की मात्रा को डिस्क को घुमाकर नियंत्रित किया जाता है (चित्र 2,1), गैस की मात्रा को एक स्क्रू द्वारा नियंत्रित किया जाता है (चित्र 2, 2)। हवा की अनुपस्थिति या अपर्याप्त पहुंच में, धुएँ वाली लौ बनती है। बर्नर तक हवा की पहुंच को तब तक समायोजित किया जाता है नीले रंग की लौ. बर्नर लौ में अनुमानित तापमान वितरण चित्र में दिखाया गया है। 3.

सूखी गर्मी नसबंदी एक सुखाने वाले ओवन (पाश्चर ओवन) में की जाती है। इस विधि का उपयोग केवल सूखी वस्तुओं - प्रयोगशाला कांच के बर्तन, आदि को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। सुखाने वाली कैबिनेट (छवि 4) दोहरी दीवारों वाली एक छोटी लोहे की कैबिनेट है, जिसके बीच एक गर्मी-इन्सुलेट सामग्री (एस्बेस्टस, ग्लास ऊन) डाली जाती है। साफ-सुथरी धुली हुई टेस्ट ट्यूब और बोतलों को कॉटन स्टॉपर्स से सील कर दिया जाता है; पिपेट, रूई, धुंध को कागज में लपेटा जाता है और कैबिनेट की अलमारियों पर रखा जाता है ताकि निष्फल की जाने वाली वस्तुएं उपकरण की गर्म दीवारों को न छूएं और गर्म हवा उनके बीच स्वतंत्र रूप से प्रवेश कर सके। सुखाने वाले कैबिनेट में स्टरलाइज़ेशन t° 160-170° पर 45 मिनट - 1 घंटा तक चलता है। 175° से ऊपर के तापमान पर, कागज और रूई जल जाते हैं।

पानी में उबालने से 1-3 मिनट में रोगाणुओं के गैर-बीजाणु रूप नष्ट हो जाते हैं। , सुई, चाकू, छोटे उपकरण इत्यादि को धातु स्टेरलाइज़र और यहां तक ​​कि एक नियमित सॉस पैन में भी उबाला जा सकता है। पानी में थोड़ी मात्रा में सोडियम बाइकार्बोनेट (सोडियम बाइकार्बोनेट) मिलाना

सूक्ष्मजीवों पर तापमान का प्रभाव.

तापमान - महत्वपूर्ण कारक, सूक्ष्मजीवों के जीवन को प्रभावित कर रहा है। सूक्ष्मजीवों के लिए न्यूनतम, इष्टतम और अधिकतम तापमान होते हैं। इष्टतम- वह तापमान जिस पर रोगाणुओं का सर्वाधिक तीव्र प्रसार होता है। न्यूनतम- वह तापमान जिसके नीचे सूक्ष्मजीव महत्वपूर्ण गतिविधि प्रदर्शित नहीं करते हैं। अधिकतम- वह तापमान जिसके ऊपर सूक्ष्मजीवों की मृत्यु हो जाती है।

तापमान के संबंध में, सूक्ष्मजीवों के 3 समूह प्रतिष्ठित हैं:

2. मेसोफाइल।अनुकूलतम - 30-37°С. न्यूनतम - 15-20°C.अधिकतम - 43-45°C.वे गर्म खून वाले जानवरों के शरीर में रहते हैं। इनमें अधिकांश रोगजनक और अवसरवादी सूक्ष्मजीव शामिल हैं।

3. थर्मोफाइल।अनुकूलतम - 50-60°से.न्यूनतम - 45°से.अधिकतम - 75°С. वे गर्म झरनों में रहते हैं और खाद और अनाज को स्वयं गर्म करने की प्रक्रियाओं में भाग लेते हैं। वे गर्म रक्त वाले जानवरों के शरीर में प्रजनन करने में सक्षम नहीं हैं, इसलिए उनका कोई चिकित्सीय महत्व नहीं है।

अनुकूल कार्यवाहीइष्टतम तापमान सूक्ष्मजीवों को बढ़ाने में उपयोग किया जाता है प्रयोगशाला निदान, टीके और अन्य दवाओं की तैयारी के उद्देश्य से।

ब्रेक लगाने की क्रियाकम तामपान भंडारण के लिए उपयोग किया जाता है रेफ्रिजरेटर में सूक्ष्मजीवों के उत्पाद और संवर्धन। कम तापमान सड़न और किण्वन प्रक्रियाओं को रोक देता है। कम तापमान की क्रिया का तंत्र कोशिका में चयापचय प्रक्रियाओं का निषेध और निलंबित एनीमेशन की स्थिति में संक्रमण है।

अपचायक दोषउच्च तापमान (अधिकतम से ऊपर) नसबंदी के लिए उपयोग किया जाता है . तंत्रक्रियाएँ - प्रोटीन (एंजाइम) का विकृतीकरण, राइबोसोम को नुकसान, आसमाटिक बाधा का विघटन। साइकोफाइल और मेसोफाइल उच्च तापमान के प्रति सबसे अधिक संवेदनशील होते हैं। विशेष वहनीयतादिखाओ विवादोंबैक्टीरिया.

सूक्ष्मजीवों पर दीप्तिमान ऊर्जा और अल्ट्रासाउंड का प्रभाव।

गैर-आयनीकरण (सूरज की रोशनी की पराबैंगनी और अवरक्त किरणें) और आयनीकरण विकिरण (जी-किरणें और उच्च-ऊर्जा इलेक्ट्रॉन) हैं।

आयनीकरण विकिरण का एक शक्तिशाली मर्मज्ञ प्रभाव होता है और सेलुलर जीनोम को नुकसान पहुंचाता है। तंत्रहानिकारक प्रभाव: आयनीकरण मैक्रोमोलेक्युलस, जो उत्परिवर्तन या कोशिका मृत्यु के विकास के साथ होता है। इसके अलावा, सूक्ष्मजीवों के लिए घातक खुराक जानवरों और पौधों की तुलना में अधिक है।

तंत्रहानिकारक प्रभाव यूवी किरणें: डीएनए अणु में थाइमिन डिमर का निर्माण , जो कोशिका विभाजन को रोकता है और उनकी मृत्यु का मुख्य कारण है। जानवरों और पौधों की तुलना में सूक्ष्मजीवों पर यूवी किरणों का हानिकारक प्रभाव अधिक स्पष्ट होता है।

अल्ट्रासाउंड(ध्वनि तरंगें 20 हजार हर्ट्ज) में जीवाणुनाशक प्रभाव होता है। तंत्र: शिक्षा कोशिका के कोशिकाद्रव्य में गुहिकायन गुहाएँ जो तरल वाष्प से भरे होते हैं और उनमें 10 हजार एटीएम तक का दबाव उत्पन्न होता है। इससे अत्यधिक प्रतिक्रियाशील हाइड्रॉक्सिल रेडिकल्स का निर्माण होता है, सेलुलर संरचनाओं का विनाश और ऑर्गेनेल का डीपोलाइमराइजेशन, अणुओं का विकृतीकरण होता है।

आयोनाइजिंग विकिरण, यूवी किरणें और अल्ट्रासाउंड का उपयोग किया जाता है नसबंदी के लिए.

सूक्ष्मजीवों पर सूखने का प्रभाव.

सूक्ष्मजीवों के सामान्य कामकाज के लिए पानी आवश्यक है। पर्यावरणीय आर्द्रता में कमी से कोशिकाएं आराम की स्थिति में चली जाती हैं और फिर मृत्यु की ओर ले जाती हैं। तंत्रसुखाने के हानिकारक प्रभाव: साइटोप्लाज्म का निर्जलीकरण और प्रोटीन का विकृतीकरण।

रोगजनक सूक्ष्मजीव सूखने के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं: गोनोरिया, मेनिनजाइटिस, टाइफाइड बुखार, पेचिश, सिफलिस आदि के रोगजनक। बैक्टीरियल बीजाणु, प्रोटोजोअन सिस्ट, थूक बलगम (तपेदिक बेसिली) द्वारा संरक्षित बैक्टीरिया अधिक प्रतिरोधी होते हैं।

व्यवहार मेंसुखाने का प्रयोग किया जाता है डिब्बाबंदी के लिए मांस, मछली, सब्जियाँ, फल, खरीद के दौरान औषधीय जड़ी बूटियाँ .

जमी हुई अवस्था से वैक्यूम के तहत सुखाना - लियोफिलाइजेशन या फ्रीज सुखाने।उसका उपयोग किया जा रहा है फसल संरक्षण के लिएसूक्ष्मजीव जो इस अवस्था में वर्षों (10-20 वर्ष) तक अपनी व्यवहार्यता नहीं खोते हैं और अपने गुणों को नहीं बदलते हैं। सूक्ष्मजीव निलंबित एनीमेशन की स्थिति में हैं। लियोफिलाइजेशन का उपयोग किया जाता है दवाओं के उत्पादन मेंजीवित सूक्ष्मजीवों से: यूबायोटिक्स, फेज, जीवित टीकेतपेदिक, प्लेग, टुलारेमिया, ब्रुसेलोसिस, इन्फ्लूएंजा, आदि के खिलाफ।

सूक्ष्मजीवों पर रासायनिक कारकों का प्रभाव।

रसायन सूक्ष्मजीवों को विभिन्न तरीकों से प्रभावित करते हैं। यह रसायनों की प्रकृति, सांद्रता और क्रिया के समय पर निर्भर करता है। वे कर सकते हैं विकास को प्रोत्साहित करें(ऊर्जा स्रोतों के रूप में प्रयुक्त), प्रदान करें माइक्रोबायिसाइडल, माइक्रोबोस्टैटिक, उत्परिवर्ती प्रभावया महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं के प्रति उदासीन हो सकते हैं

उदाहरण के लिए: 0.5-2% ग्लूकोज समाधान रोगाणुओं के लिए पोषण का एक स्रोत है, और 20-40% समाधान में निरोधात्मक प्रभाव होता है।

सूक्ष्मजीवों के लिए यह आवश्यक है पर्यावरण का इष्टतम पीएच मान. मानव रोगों के अधिकांश सहजीवन और रोगजनकों के लिए - एक तटस्थ, थोड़ा क्षारीय या थोड़ा अम्लीय वातावरण। जैसे-जैसे पीएच बढ़ता है, यह अक्सर अम्लीय पक्ष में स्थानांतरित हो जाता है और सूक्ष्मजीवों का विकास रुक जाता है। और फिर मौत आती है. तंत्र:हाइड्रॉक्सिल आयनों द्वारा एंजाइमों का विकृतीकरण, कोशिका झिल्ली के आसमाटिक अवरोध का विघटन।

रसायन जो है रोगाणुरोधी प्रभाव, कीटाणुशोधन, नसबंदी और संरक्षण के लिए उपयोग किया जाता है।

सूक्ष्मजीवों पर जैविक कारकों का प्रभाव।

जैविक कारक एक दूसरे पर रोगाणुओं के प्रभाव के विभिन्न रूप हैं, साथ ही मैक्रोऑर्गेनिज्म में रहने के दौरान सूक्ष्मजीवों पर प्रतिरक्षा कारकों (लाइसोजाइम, एंटीबॉडी, अवरोधक, फागोसाइटोसिस) का प्रभाव भी है। विभिन्न जीवों का सह-अस्तित्व - सिम्बायोसिस. निम्नलिखित प्रतिष्ठित हैं: फार्मसहजीविता.

पारस्परिक आश्रय का सिद्धांत- सहवास का एक रूप जहां दोनों भागीदारों को पारस्परिक लाभ प्राप्त होता है (उदाहरण के लिए, नोड्यूल बैक्टीरिया और फलियां)।

विरोध- संबंध का एक रूप जब एक जीव अपने चयापचय उत्पादों (एसिड, एंटीबायोटिक्स, बैक्टीरियोसिन) के साथ दूसरे जीव को नुकसान पहुंचाता है (यहां तक ​​कि मृत्यु भी), पर्यावरणीय परिस्थितियों के लिए बेहतर अनुकूलनशीलता के कारण, सीधे विनाश के माध्यम से (उदाहरण के लिए, सामान्य आंतों के माइक्रोफ्लोरा और रोगजनकों के) आंतों में संक्रमण)।

मेटाबायोसिस- सहवास का एक रूप जब एक जीव दूसरे के कारण होने वाली प्रक्रिया को जारी रखता है (अपने अपशिष्ट उत्पादों का उपयोग करता है) और पर्यावरण को इन उत्पादों से मुक्त करता है। इसलिए, आगे के विकास (नाइट्रिफाइंग और अमोनिफाइंग बैक्टीरिया) के लिए स्थितियां बनाई जाती हैं।

उपग्रहवाद- सहवासियों में से एक दूसरे के विकास को उत्तेजित करता है (उदाहरण के लिए, यीस्ट और सार्सिना ऐसे पदार्थ उत्पन्न करते हैं जो अन्य, अधिक पोषक तत्व की मांग करने वाले बैक्टीरिया के विकास को बढ़ावा देते हैं)।

Commensalism– एक जीव दूसरे जीव (लाभ) की कीमत पर उसे नुकसान पहुंचाए बिना रहता है (उदाहरण के लिए, ई. कोलाई और मानव शरीर)।

शिकार- जीवों के बीच विरोधी संबंध, जब एक दूसरे को पकड़ता है, अवशोषित करता है और पचाता है (उदाहरण के लिए, आंतों का अमीबा आंतों के बैक्टीरिया को खाता है)।

बंध्याकरण।

नसबंदीकिसी वस्तु में बीजाणुओं सहित रोगाणुओं के सभी व्यवहार्य रूपों के पूर्ण विनाश की प्रक्रिया है।

नसबंदी विधियों के 3 समूह हैं: भौतिक, रासायनिक और भौतिक-रासायनिक।भौतिक विधियाँ:उच्च तापमान द्वारा बंध्याकरण, यूवी विकिरण, आयनीकरण विकिरण, अल्ट्रासाउंड, बाँझ फिल्टर के माध्यम से निस्पंदन। रासायनिक विधियाँ- रसायनों का उपयोग, साथ ही गैस नसबंदी। भौतिक-रासायनिक विधियाँ– भौतिक एवं रासायनिक विधियों का संयुक्त उपयोग। उदाहरण के लिए, उच्च तापमान और एंटीसेप्टिक्स।

उच्च तापमान नसबंदी .

इस विधि में शामिल हैं: 1) सूखी गर्मी नसबंदी; 2) दबाव में भाप नसबंदी; 3) प्रवाहित भाप नसबंदी; 4) टिंडियलाइजेशन और पाश्चराइजेशन; 5) पकाना; 6) उबलना.

सूखी गर्मी नसबंदी.

विधि आधारित है 45 मिनट के लिए 165-170 डिग्री सेल्सियस तक गर्म की गई हवा के जीवाणुनाशक प्रभाव पर।

उपकरण: शुष्क ताप ओवन (पाश्चर ओवन). पाश्चर ओवन एक धातु कैबिनेट है जिसमें दोहरी दीवारें होती हैं, जो बाहर की तरफ ऐसी सामग्री से ढकी होती है जो अच्छी तरह से गर्मी का संचालन नहीं करती है (एस्बेस्टस)। गर्म हवा दीवारों के बीच की जगह में घूमती है और विशेष छिद्रों से बाहर निकलती है। काम करते समय, आवश्यक तापमान और नसबंदी समय की सख्ती से निगरानी करना आवश्यक है। यदि तापमान अधिक है, तो रुई के प्लग और कागज, जिसमें बर्तन लपेटे गए हैं, जल जाएंगे और कम तापमान पर लंबे समय तक कीटाणुशोधन की आवश्यकता होगी। स्टरलाइज़ेशन पूरा होने के बाद, कैबिनेट को ठंडा होने के बाद ही खोला जाता है, अन्यथा तापमान में अचानक बदलाव के कारण कांच के बर्तन फट सकते हैं।

ए) कांच, धातु, चीनी मिट्टी के सामान, बर्तन, कागज में लपेटे हुए और बाँझपन बनाए रखने के लिए कपास-धुंध स्टॉपर्स के साथ बंद (165-170 डिग्री सेल्सियस, 45 मिनट);

बी) गर्मी प्रतिरोधी पाउडर वाली दवाएं - तालक, सफेद मिट्टी, जिंक ऑक्साइड (180-200 डिग्री सेल्सियस, 30-60 मिनट);

ग) खनिज और वनस्पति तेल, वसा, लैनोलिन, पेट्रोलियम जेली, मोम (180-200 डिग्री सेल्सियस, 20-40 मिनट)।

दबाव में भाप नसबंदी.

सूक्ष्मजीवविज्ञानी और नैदानिक ​​​​अभ्यास में सबसे प्रभावी और व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधि।

विधि आधारित हैमाइक्रोबियल कोशिका के प्रोटीन पर दबाव के तहत भाप के हाइड्रोलाइजिंग प्रभाव पर। उच्च तापमान और भाप की संयुक्त क्रिया इस नसबंदी की उच्च दक्षता सुनिश्चित करती है, जो सबसे लगातार बने रहने वाले बीजाणु बैक्टीरिया को मार देती है।

उपकरण – आटोक्लेव.आटोक्लेव में 2 धातु सिलेंडर होते हैं जो एक दूसरे में भली भांति बंद करके सील किए गए ढक्कन के साथ डाले जाते हैं। बाहरी बॉयलर एक जल-भाप कक्ष है, आंतरिक बॉयलर एक नसबंदी कक्ष है। इसमें एक दबाव नापने का यंत्र, भाप रिलीज वाल्व, सुरक्षा वाल्व और जल मीटर ग्लास है। स्टरलाइज़ेशन कक्ष के शीर्ष पर एक छेद होता है जिसके माध्यम से भाप जल-भाप कक्ष से गुजरती है। दबाव नापने का यंत्र का उपयोग नसबंदी कक्ष में दबाव निर्धारित करने के लिए किया जाता है। दबाव और तापमान के बीच एक निश्चित संबंध है: 0.5 एटीएम - 112 डिग्री सेल्सियस, 1-01.1 एटीएम - 119-121 डिग्री सेल्सियस, 2 एटीएम - 134 डिग्री सेल्सियस। सुरक्षा वाल्व - अत्यधिक दबाव से बचाने के लिए। जब दबाव निर्धारित मूल्य से ऊपर बढ़ जाता है, तो वाल्व खुल जाता है और अतिरिक्त भाप छोड़ता है। परिचालन प्रक्रिया।पानी को आटोक्लेव में डाला जाता है, जिसके स्तर की निगरानी वॉटर मीटर ग्लास का उपयोग करके की जाती है। सामग्री को स्टरलाइज़ेशन कक्ष में रखा जाता है और ढक्कन को कसकर कस दिया जाता है। भाप वाल्व खुला है. हीटिंग चालू करें. पानी उबलने के बाद, नल तभी बंद किया जाता है जब सारी हवा विस्थापित हो जाती है (भाप एक निरंतर मजबूत सूखी धारा में बहती है)। यदि नल पहले बंद कर दिया गया है, तो दबाव नापने का यंत्र की रीडिंग वांछित तापमान के अनुरूप नहीं होगी। नल बंद करने के बाद बॉयलर में दबाव धीरे-धीरे बढ़ता है। नसबंदी की शुरुआत वह क्षण है जब दबाव नापने का यंत्र सुई निर्धारित दबाव दिखाती है। नसबंदी की अवधि समाप्त होने के बाद, हीटिंग बंद कर दें और आटोक्लेव को तब तक ठंडा करें जब तक कि दबाव गेज सुई 0 पर वापस न आ जाए। यदि आप पहले भाप छोड़ते हैं, तो दबाव में तेजी से बदलाव के कारण तरल उबल सकता है और प्लग को बाहर धकेल सकता है (बांझपन ख़राब होता है)। जब दबाव नापने का यंत्र सुई 0 पर लौट आए, तो भाप रिलीज वाल्व को सावधानीपूर्वक खोलें, भाप छोड़ें और फिर निष्फल की जाने वाली वस्तुओं को हटा दें। यदि सुई के 0 पर लौटने के बाद भाप नहीं निकलती है, तो पानी संघनित हो सकता है और प्लग को गीला कर सकता है और सामग्री को निष्फल किया जा सकता है (बाँझपन क्षीण हो जाएगा)।

सामग्री और नसबंदी मोड:

क) कांच, धातु, चीन, लिनन, रबर और कॉर्क स्टॉपर्स, रबर, सेलूलोज़, लकड़ी से बने उत्पाद, ड्रेसिंग(कपास ऊन, धुंध) (119 - 121 डिग्री सेल्सियस, 20-40 मिनट));

बी) शारीरिक समाधान, इंजेक्शन के लिए समाधान, आई ड्रॉप, आसुत जल, सरल पोषक मीडिया - एमपीबी, एमपीए (119-121 डिग्री सेल्सियस, 20-40 मिनट);

ग) भली भांति बंद करके सील किए गए बर्तनों में खनिज और वनस्पति तेल (119-121 डिग्री सेल्सियस, 120 मिनट);

बहती भाप से बंध्याकरण।

विधि आधारित हैकेवल वनस्पति कोशिकाओं के विरुद्ध भाप (100°C) के जीवाणुनाशक प्रभाव पर।

उपकरण- बिना पेंच वाला ढक्कन वाला एक आटोक्लेव या कोच उपकरण.

कोच उपकरण -यह दोहरे तले वाला धातु का सिलेंडर है, जिसका 2/3 भाग पानी से भरा होता है। ढक्कन में थर्मामीटर और भाप निकलने के लिए छेद होते हैं। बाहरी दीवार ऐसी सामग्री से बनी है जो गर्मी का खराब संचालन करती है (लिनोलियम, एस्बेस्टस)। नसबंदी की शुरुआत पानी के उबलने और भाप के नसबंदी कक्ष में प्रवेश से होने वाला समय है।

सामग्री और नसबंदी मोड.यह विधि सामग्री को कीटाणुरहित करती है जो 100°C से अधिक तापमान सहन नहीं कर सकता: विटामिन, कार्बोहाइड्रेट (हिस, एंडो, प्लॉस्कीरेव, लेविन मीडिया), जिलेटिन, दूध के साथ पोषक तत्व मीडिया।

100°C पर बीजाणु नहीं मरते, इसलिए नसबंदी कई बार की जाती है - आंशिक नसबंदी - 3 दिनों तक प्रतिदिन 20-30 मिनट।

नसबंदी के बीच के अंतराल में, सामग्री को रखा जाता है कमरे का तापमानताकि बीजाणु वानस्पतिक रूपों में अंकुरित हो सकें। बाद में 100°C पर गर्म करने पर वे मर जाएंगे।

टिंडलाइजेशन और पास्चुरीकरण।

टिंडलाइज़ेशन - 100°C से कम तापमान पर आंशिक रोगाणुनाशन की विधि। इसका उपयोग वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है, जो 100°C का सामना नहीं कर सकता: सीरम, जलोदर द्रव, विटामिन . टिंडलाइज़ेशन 56 डिग्री सेल्सियस पर 5-6 दिनों के लिए 1 घंटे के लिए पानी के स्नान में किया जाता है।

pasteurization - आंशिक बंध्याकरण (बीजाणु मारे नहीं जाते), जो अपेक्षाकृत कम तापमान पर किया जाता है एक बार। पाश्चुरीकरण 70-80°C, 5-10 मिनट या 50-60°C, 15-30 मिनट पर किया जाता है। पाश्चरीकरण का उपयोग उन वस्तुओं के लिए किया जाता है जो उच्च तापमान पर अपनी गुणवत्ता खो देते हैं। उदाहरण के लिए, पाश्चरीकरण, उपयोग के लिए कुछ खाद्य उत्पाद: दूध, शराब, बीयर . इससे उनके वाणिज्यिक मूल्य को नुकसान नहीं पहुंचता है, लेकिन बीजाणु व्यवहार्य बने रहते हैं, इसलिए इन उत्पादों को प्रशीतित में संग्रहित किया जाना चाहिए।

यह एक दोहरी दीवार वाला धातु सिलेंडर है जो बाहर से धातु के आवरण से ढका होता है। इसे कई स्क्रू का उपयोग करके एक विशाल ढक्कन के साथ भली भांति बंद करके सील किया गया है। यह एक सुरक्षा वाल्व और एक भाप वाल्व के साथ एक दबाव नापने का यंत्र से सुसज्जित है।

नसबंदी से पहले, आसुत जल को आवरण पर इंगित रेखा तक पानी मापने वाले गिलास के साथ एक फ़नल के माध्यम से आटोक्लेव में डाला जाता है। स्टरलाइज़ेशन के लिए सामग्री को स्टरलाइज़िंग कक्ष में लोड किया जाता है, ढक्कन के साथ कसकर बंद किया जाता है, स्क्रू किया जाता है और हीटिंग स्रोत चालू किया जाता है। इस स्थिति में, भाप वाल्व खुला छोड़ दिया जाता है। उबलने के दौरान उत्पन्न भाप आटोक्लेव की दीवारों के बीच से गुजरती है और आंतरिक दीवार में छेद के माध्यम से कक्ष में प्रवेश करती है। गर्म करते समय, हवा पहले भाप वाल्व के माध्यम से आटोक्लेव से बाहर आती है, और फिर भाप। शुष्क भाप की एक सतत धारा का निकलना आटोक्लेव से हवा के पूर्ण विस्थापन को इंगित करता है: नल बंद है, और उसी क्षण से आटोक्लेव में दबाव धीरे-धीरे बढ़ना शुरू हो जाता है, दबाव नापने का यंत्र पर सुई ऊपर उठ जाती है। नसबंदी की शुरुआत उस क्षण से मानी जाती है जब दबाव नापने का यंत्र सुई वांछित दबाव तक पहुंच जाती है।

चित्र 3

दबाव गेज रीडिंग आटोक्लेव में एक निश्चित भाप तापमान से मेल खाती है: 0.50 एमपीए - 112 डिग्री सेल्सियस, 0.1 एमपीए - 120, 0.15 एमपीए - 127, 0.2 एमपीए - 134 डिग्री सेल्सियस।

आटोक्लेव में सामग्री को अक्सर 0.1 एमपीए पर 20-30 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। नसबंदी के अंत में, हीटिंग स्रोत को बंद कर दें (दबाव नापने का यंत्र सुई धीरे-धीरे शून्य तक पहुंच जाती है)। इसके बाद स्टीम वाल्व खोलें और बची हुई भाप को बाहर निकाल दें। फिर सावधानी से ढक्कन खोलें और खोलें। पूरी तरह ठंडा होने के बाद निष्फल सामग्री को हटा दें।

आटोक्लेव का उपयोग व्यंजन, उपकरण, संस्कृति मीडिया (जिलेटिन और कार्बोहाइड्रेट वाले मीडिया को छोड़कर), ड्रेसिंग आदि को कीटाणुरहित करने के लिए किया जा सकता है। काम करते समय, आपको सुरक्षा नियमों का पालन करना चाहिए। जिन व्यक्तियों के पास आटोक्लेव का उपयोग करने के अधिकार का प्रमाण पत्र है, उन्हें काम करने की अनुमति है। आटोक्लेव की सेवाक्षमता की जाँच बॉयलर निरीक्षणालय द्वारा की जाती है।

कोच उपकरण (चित्र 4) एक धातु सिलेंडर है जो बाहर की तरफ ऐसी सामग्री (लिनोलियम, एस्बेस्टस) से ढका होता है जो अच्छी तरह से गर्मी का संचालन नहीं करता है। नीचे पानी डाला जाता है और स्टरलाइज़िंग सामग्री को स्टैंड के ऊपर रखा जाता है। उपकरण एक शंक्वाकार ढक्कन के साथ बंद है, जिसमें थर्मामीटर और भाप आउटलेट के लिए छेद हैं। नीचे पानी निकालने के लिए एक नल है। 30-60 मिनट के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर बहती भाप के साथ नसबंदी की जाती है। इस मोड में, बीजाणु बनाने वाले और गैर-बीजाणु बनाने वाले सूक्ष्मजीवों की वनस्पति कोशिकाएं मर जाती हैं। 18-20 घंटों के अंतराल के साथ तीन दिनों में 30-60 मिनट के लिए आंशिक नसबंदी (तीन बार) आपको वनस्पति कोशिकाओं में बीजाणुओं के अंकुरण के लिए स्थितियां बनाने और उनसे छुटकारा पाने की अनुमति देती है। नसबंदी के बीच के समय अंतराल में, बीजाणु अंकुरित होते हैं और बाद में गर्म करने के दौरान मर जाते हैं। कोच उपकरण उन सामग्रियों को कीटाणुरहित करता है जो 100 डिग्री सेल्सियस (जिलेटिन, दूध, कार्बोहाइड्रेट मीडिया, आदि) से ऊपर तापमान का सामना नहीं कर सकते हैं।

प्रोटीन मीडिया और रक्त सीरम जो 100 डिग्री सेल्सियस के तापमान को सहन नहीं कर सकते हैं उन्हें पानी के स्नान में 56-58 डिग्री सेल्सियस पर आंशिक रूप से निष्फल किया जाता है।

सुखाने वाली कैबिनेट(पाश्चर ओवन) (चित्र 5) एक धातु की दोहरी दीवार वाली कैबिनेट है जो शीर्ष पर एस्बेस्टस से ढकी होती है। ऊपरी दीवार में थर्मामीटर और वेंटिलेशन के लिए छेद हैं। गर्म हवा दीवारों के बीच से नीचे की ओर उठती है और ऊपरी उद्घाटन के माध्यम से कैबिनेट में प्रवेश करती है, जहां निष्फल की जाने वाली सामग्री को अलमारियों पर रखा जाता है। 150 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए, 165-170 डिग्री सेल्सियस पर - 45 मिनट के लिए, 180 डिग्री सेल्सियस पर - 15 मिनट के लिए सूखी गर्मी के साथ नसबंदी की जाती है। कांच के बर्तनों को पाश्चर ओवन में निष्फल किया जाता है। नसबंदी के बाद, कैबिनेट को अलग कर दिया जाता है हीटिंग स्रोत और पूर्ण शीतलन के बाद ही खोला जाता है।

बैक्टीरियल फिल्टरबिना गरम किए तरल पदार्थों को जीवाणुरहित करने के लिए उपयोग किया जाता है। इनमें चेम्बरलेंट, बर्कफेल्ड मोमबत्तियाँ और सेट्ज़ एस्बेस्टस फिल्टर (प्लेट्स) शामिल हैं।

फ़िल्टर मोमबत्तियाँ (चित्र 6) बारीक छिद्रित पदार्थों से बने खोखले सिलेंडर हैं: काओलिन एक मिश्रण के साथ रेत क्वार्ट्ज(चेम्बरलेंट मोमबत्तियाँ) और इन्फ्यूसोरियल अर्थ (बर्कफेल्ड मोमबत्तियाँ)। चेम्बरलेंट मोमबत्तियाँ हैं कई आकारवे छिद्र जिनसे होकर रोगाणु गुजरते हैं। मोमबत्तियाँ जो बड़े बैक्टीरिया को गुजरने की अनुमति देती हैं उन्हें L9, L1(bis), L3, मध्यम वाले - L5, L7, सबसे छोटे वाले - L9, अक्षरों द्वारा निर्दिष्ट किया जाता है। एल11 , एल13 बर्कफेल्ड मोमबत्तियाँ सरंध्रता द्वारा निर्दिष्ट की जाती हैं डब्ल्यू, एन, वी(यू ब्रांड वाली मोमबत्तियों में सबसे बड़े छिद्र होते हैं)।

सेट्ज़ फ़िल्टर विभिन्न आकारों की एस्बेस्टस प्लेटें हैं। स्टरलाइज़ेशन के लिए डिवाइस को माउंट करते समय, प्लेट को धातु डिस्क (बीच में एक छेद के साथ) के बीच एक जाल पर रखा जाता है, जिसे स्क्रू के साथ कसकर दबाया जाता है। माउंटेड फिल्टर को एक स्टॉपर के माध्यम से एक साइड आउटलेट (बन्सेन फ्लास्क) और एक रबर ट्यूब के साथ फ्लास्क में डाला जाता है, कागज में लपेटा जाता है और 20-30 मिनट के लिए 120 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है।

सामग्री को फ़िल्टर करने के लिए, बुन्सेन फ्लास्क में एक रबर ट्यूब को एक दुर्लभ तेल के साथ जोड़कर उसमें एक वैक्यूम बनाएं हैंड पंपकोमोव्स्की या एक इलेक्ट्रिक वैक्यूम पंप।

काम पूरा करना. सूक्ष्मजीवों की खेती इष्टतम तापमान स्थितियों में की जाती है। इस प्रयोजन के लिए, प्रयोगशालाएँ वायु या जल थर्मोस्टेट का उपयोग करती हैं।

(चित्र 7) दोहरी दीवारों वाली एक धातु कैबिनेट है, जिसके बीच पानी या हवा की एक परत होती है। थर्मोस्टेट का बाहरी भाग एक ऐसी सामग्री से ढका होता है जो गर्मी का खराब संचालन करता है (एस्बेस्टस, लिनोलियम)।

चावल। 4, 5, 6.

थर्मोस्टेट के अंदर विकसित सूक्ष्मजीवों की बीज सामग्री रखने के लिए अलमारियाँ हैं। थर्मोस्टेट में एक स्थिर तापमान थर्मोस्टेट का उपयोग करके बनाए रखा जाता है, जिसे थर्मोस्टेट के शीर्ष आवरण में बनाया जाता है। थर्मोस्टेट उपकरण पदार्थों के रैखिक विस्तार के सिद्धांत पर आधारित है। थर्मोरेगुलेटर थर्मल विस्तार (पीतल, जस्ता) के विभिन्न गुणांक वाले किन्हीं दो धातुओं का एक मिश्र धातु है या अल्कोहल से भरा एक धातु "कुशन", अल्कोहल और ईथर, पारा या अन्य पदार्थों का मिश्रण है जो एक निश्चित तापमान पर अपनी मात्रा बदलते हैं। जब थर्मोस्टेट स्थापित मानदंड से ऊपर गर्म होता है, तो धातुएं फैलती हैं, संपर्क खुल जाते हैं और आगे गर्मी का प्रवाह स्वचालित रूप से विलंबित हो जाता है। तापमान गिरने के बाद, विद्युत प्रवाह चालू हो जाता है और गर्मी का प्रवाह फिर से शुरू हो जाता है।

बंध्याकरण को भौतिक, रासायनिक, यांत्रिक और जैविक तरीकों और विभिन्न विधियों द्वारा दर्शाया जाता है। किसी विशेष स्टरलाइज़ेशन विधि और उसके तरीकों का उपयोग करने की व्यवहार्यता स्टरलाइज़ की जाने वाली सामग्री की विशेषताओं, उसके भौतिक और रासायनिक गुणों पर निर्भर करती है। स्टरलाइज़ेशन की अवधि स्टरलाइज़ की जा रही वस्तु, स्टरलाइज़िंग एजेंट और उसकी खुराक, तापमान और आर्द्रता पर निर्भर करती है। पर्यावरण.

शारीरिक बंध्याकरण विधि तरीकों के लिए भौतिक विधिबंध्याकरण में सुखाना, जलाना और कैल्सीनेशन, उबालना, पास्चुरीकरण और टिंडाइजेशन शामिल है। गरम हवा(शुष्क ताप), अल्ट्रासाउंड, पराबैंगनी और रेडियोधर्मी विकिरण, उच्च आवृत्ति धारा, सूरज की रोशनी. उच्च तापमान के संपर्क में आने वाली वस्तुओं को स्टरलाइज़ करने का सबसे आम तरीका आग, गर्म हवा और दबाव में संतृप्त भाप से स्टरलाइज़ करना है। आग का उपयोग उन संक्रमित वस्तुओं को जलाने के लिए किया जाता है जिनका कोई मूल्य नहीं है (अनावश्यक कागजात, पुराने वॉलपेपर, लत्ता, कचरा), तपेदिक के रोगियों के थूक को कीटाणुरहित करने के लिए, विशेष रूप से खतरनाक संक्रमण से मरने वाले लोगों और जानवरों की लाशों को कीटाणुरहित करने के लिए, साथ ही साथ विभिन्न वस्तुओं को जलाना और शांत करना। उपकरणों, प्रयोगशाला और फार्मास्युटिकल कांच के बर्तनों के कीटाणुशोधन के लिए सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में जलने और कैल्सीनेशन का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। बर्नर की लौ में कैल्सीनेशन या फ्लेम्बिंग नसबंदी की एक विधि है जिसमें वस्तु पूरी तरह से निष्फल हो जाती है, क्योंकि वनस्पति कोशिकाएं, सिस्ट और सूक्ष्मजीवों के बीजाणु मर जाते हैं। आमतौर पर, लूप, स्पैटुला, पिपेट, स्लाइड और कवरस्लिप, छोटे उपकरण और अन्य दूषित वस्तुओं को कैल्सीनेशन द्वारा निष्फल कर दिया जाता है यदि उन्हें उबाला नहीं जा सकता है। कैंची और स्केलपेल को गर्म करके कीटाणुरहित करने की अनुशंसा नहीं की जाती है, क्योंकि आग के संपर्क में आने पर काटने की सतह सुस्त हो जाती है। चिकित्सा पद्धति में उपयोग की जाने वाली शारीरिक नसबंदी की सबसे सरल और सबसे आम विधियों में से एक गर्म हवा नसबंदी (शुष्क गर्मी) है। सूखी गर्मी नसबंदीसुखाने वाले ओवन (पाश्चर ओवन) में किया जाता है। शुष्क गर्म हवा में जीवाणुनाशक, विषाणुनाशक, बीजाणुनाशक प्रभाव होता है और इसका उपयोग मुख्य रूप से कांच के उत्पादों (प्रयोगशाला कांच के बर्तन - पेट्री डिश, फ्लास्क, पिपेट, टेस्ट ट्यूब, आदि) के नसबंदी के लिए किया जाता है, साथ ही धातु उत्पादों को भाप से कीटाणुरहित किया जा सकता है। दबाव में। इसके अलावा, सूखी गर्मी का उपयोग चीनी मिट्टी के बरतन और गर्मी प्रतिरोधी पदार्थों (तालक, सफेद मिट्टी), साथ ही खनिज और वनस्पति तेल, वसा, पेट्रोलियम जेली, लैनोलिन और मोम से बनी वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। इस नसबंदी विधि के लिए सबसे प्रभावी तरीका, जो वनस्पति रूपों और बीजाणुओं की मृत्यु सुनिश्चित करता है, 15 मिनट के लिए 160 - 180 डिग्री का तापमान है। आप खाद्य पदार्थों, आइसोटोनिक घोल, या रबर और सिंथेटिक सामग्री से बनी वस्तुओं को सूखी गर्मी से कीटाणुरहित नहीं कर सकते, क्योंकि तरल पदार्थ उबल जाते हैं और बाहर निकल जाते हैं, और रबर और सिंथेटिक सामग्री पिघल जाती है। नसबंदी संतृप्त भापड्रेसिंग, पानी, कुछ दवाओं, कल्चर मीडिया, सॉफ्ट उपकरण, यंत्रों को स्टरलाइज़ करने के साथ-साथ अपशिष्ट दूषित सामग्री को कीटाणुरहित करने के लिए दबाव सबसे विश्वसनीय और सबसे अधिक आजमाई गई विधि है। सर्जिकल अभ्यास में, ऑपरेशन किए गए रोगी के लिए ड्रेसिंग, सर्जन के गाउन और अंडरवियर को आटोक्लेव में भाप का उपयोग करके कीटाणुरहित किया जाता है। दबाव में भाप निर्जलीकरण किया जाता है विशेष उपकरण– आटोक्लेव. आटोक्लेविंग सभी सूक्ष्मजीवों और बीजाणुओं को पूरी तरह से नष्ट कर देता है। भाप दबाव नसबंदी विधि वायुमंडलीय दबाव के ऊपर दबाव में संतृप्त जल वाष्प के साथ सामग्री को गर्म करने पर आधारित है। उच्च तापमान और भाप की संयुक्त क्रिया इस विधि को विशेष रूप से प्रभावी बनाती है। इस मामले में, वनस्पति कोशिकाएं और माइक्रोबियल बीजाणु दोनों मर जाते हैं। संतृप्त जल वाष्प के प्रभाव में माइक्रोबियल बीजाणु 10 मिनट के भीतर मर जाते हैं, और वनस्पति रूप 1 से 4 मिनट के भीतर मर जाते हैं। संतृप्त भाप की उच्च जीवाणुनाशक शक्ति इस तथ्य के कारण है कि, दबाव में जल वाष्प के प्रभाव में, माइक्रोबियल कोशिका के प्रोटीन सूज जाते हैं और जम जाते हैं, जिसके परिणामस्वरूप माइक्रोबियल कोशिकाएं मर जाती हैं। संतृप्त जलवाष्प का जीवाणुनाशक प्रभाव अतिरिक्त दबाव से बढ़ जाता है। आटोक्लेव में स्टरलाइज़ेशन विभिन्न तरीकों से किया जाता है। इस प्रकार, सरल पोषक माध्यम (मांस - पेप्टोन अगर और मांस - पेप्टोन शोरबा) को 120 डिग्री (1 एटीएम) पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। लेकिन इस मोड के साथ प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और अन्य पदार्थों वाले मीडिया को स्टरलाइज़ करना असंभव है जो आसानी से गर्म करने पर बदल जाते हैं। कार्बोहाइड्रेट युक्त मीडिया को 0.5 एटीएम पर आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। 10 - 15 मिनट या आंशिक रूप से बहने वाली भाप। उच्च तापमान का उपयोग करके, आप न केवल कीटाणुरहित वस्तुओं की सतह पर, बल्कि उनकी गहराई में भी रोगजनक सूक्ष्मजीवों (बीजाणु बनाने वाले सहित) के सबसे लगातार रूपों को नष्ट कर सकते हैं। बंध्याकरण के विश्वसनीय साधन के रूप में उच्च तापमान का यह बहुत बड़ा लाभ है। हालाँकि, कुछ वस्तुएँ उच्च तापमान के प्रभाव में खराब हो जाती हैं और इन मामलों में कीटाणुशोधन के अन्य तरीकों और साधनों का सहारा लेना आवश्यक है। उन सामग्रियों और वस्तुओं की पूर्ण नसबंदी जो उच्च तापमान नसबंदी के उपयोग की अनुमति नहीं देती है, 100 डिग्री से अधिक नहीं के तापमान पर कोच उपकरण में जल वाष्प के साथ बार-बार नसबंदी द्वारा प्राप्त की जाती है। इस विधि को फ्रैक्शनल स्टरलाइज़ेशन कहा जाता है। यह इस तथ्य पर उबलता है कि रोगाणुओं के शेष अकुशल बीजाणु रूप, थर्मोस्टेट में 37 डिग्री पर एक दिन के बाद, वनस्पति कोशिकाओं में अंकुरित होते हैं, जिनकी मृत्यु बाद के नसबंदी के दौरान होती है इस वस्तु काबहती भाप. तरल भाप से उपचार 30-40 मिनट तक तीन बार किया जाता है। किसी सामग्री को 100 डिग्री से कम तापमान पर एक बार गर्म करना पास्चुरीकरण कहलाता है। पाश्चरीकरण पाश्चर द्वारा प्रस्तावित किया गया था और इसका उद्देश्य मुख्य रूप से ज्यादातर गैर-बीजाणु सूक्ष्मजीवों को नष्ट करना है। पाश्चुरीकरण 60-70 डिग्री पर 15 से 30 मिनट के लिए, 80 डिग्री पर 10 से 15 मिनट के लिए किया जाता है। सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में, बीजाणु बनाने वाले सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने और बीजाणु बनाने के लिए सूक्ष्मजीवों की क्षमता की पहचान करने के लिए बीज सामग्री के पास्चुरीकरण का उपयोग अक्सर किया जाता है। उन तरल पदार्थों के लिए जो उच्च तापमान (दूध, बेरी और फलों के रस, बीयर, कार्बोहाइड्रेट या यूरिया युक्त पोषक माध्यम, आदि) के संपर्क में आने पर स्वाद और अन्य मूल्यवान गुण खो देते हैं, बहती भाप के साथ नसबंदी 15 के लिए 50 - 60 डिग्री पर की जाती है - 33333330 मिनट या 5-10 मिनट के लिए 70-80 डिग्री पर। इस मामले में, औसत प्रतिरोध वाले रोगाणु मर जाते हैं, जबकि अधिक प्रतिरोधी रोगाणु और बीजाणु संरक्षित रहते हैं। 1 घंटे के लिए 60 डिग्री पर फ्रैक्शनल 5 - 6 गुना स्टरलाइज़ेशन को टिंडलाइज़ेशन कहा जाता है। पॉलिमर सामग्री से बने कई चिकित्सा उत्पाद नसबंदी का सामना नहीं कर सकते हैं भाप विधिआम तौर पर स्वीकृत तरीकों के अनुसार। कई उत्पादों के लिए, उनमें मौजूद तरल पदार्थों (परिरक्षकों, दवाओं और अन्य उत्पादों) की विशेषताओं के कारण, आम तौर पर स्वीकृत तरीकों और विधियों का उपयोग करके स्टरलाइज़ करना असंभव है। ऐसे उत्पादों के लिए, वस्तुओं की विश्वसनीय नसबंदी सुनिश्चित करने के लिए व्यक्तिगत नसबंदी व्यवस्था विकसित की जाती है। इस प्रकार, रक्त को अंशों में अलग करने के लिए रोटर की नसबंदी 45 मिनट के लिए 120 डिग्री के तापमान पर जल वाष्प के साथ की जाती है। परिरक्षक कंटेनरों की बाँझपन 60 मिनट के लिए 110 डिग्री पर प्राप्त किया जाता है। उबालना एक निर्जलीकरण विधि है जिसका उपयोग पुन: प्रयोज्य सिरिंजों, शल्य चिकित्सा उपकरणों, रबर ट्यूबों, कांच आदि को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। धातु के बर्तन. स्टरलाइज़र में उबालकर स्टरलाइज़ेशन किया जाता है। उबलते पानी में बीजाणु 20-30 मिनट के बाद मर जाते हैं। 45 मिनट तक उबालने का उपयोग व्यापक रूप से स्राव और अन्य संक्रामक सामग्री, लिनन, व्यंजन, खिलौने और रोगी देखभाल वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। धोने और सफाई के लिए डिटर्जेंट के साथ गर्म पानी (60 - 100 डिग्री) का उपयोग किया जाता है यांत्रिक निष्कासनप्रदूषक और सूक्ष्मजीव। अधिकांश वनस्पति कोशिकाएं 30 मिनट के बाद 70 डिग्री पर मर जाती हैं। निस्पंदन स्टरलाइज़ेशन का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां सब्सट्रेट हीटिंग का सामना नहीं कर सकते हैं, विशेष रूप से प्रोटीन, सीरम, कुछ एंटीबायोटिक्स, विटामिन और वाष्पशील पदार्थों वाले मीडिया के लिए। किसी कल्चर तरल को स्टरलाइज़ करने के लिए इस तकनीक का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जब इसे माइक्रोबियल कोशिकाओं से मुक्त करना आवश्यक होता है, लेकिन इसमें मौजूद सभी चयापचय उत्पादों को अपरिवर्तित बनाए रखना आवश्यक होता है। इस विधि में विशेष फिल्टर के माध्यम से तरल पदार्थ को फ़िल्टर करना शामिल है जिसमें बारीक छिद्रपूर्ण विभाजन होते हैं और इसलिए माइक्रोबियल कोशिकाएं बरकरार रहती हैं। फिल्टर के दो सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्रकार झिल्ली फिल्टर और सेइट्ज फिल्टर हैं। झिल्ली फिल्टर कोलोडियन, एसीटेट, सेलूलोज़ और अन्य सामग्रियों से तैयार किए जाते हैं। सेट्ज़ फिल्टर एस्बेस्टस और सेल्युलोज के मिश्रण से बनाए जाते हैं। इसके अलावा, क्वार्ट्ज रेत, इन्फ्यूसर पृथ्वी और अन्य सामग्रियों (चेम्बरलान, बर्कफेल्ड द्वारा "मोमबत्तियाँ") के मिश्रण के साथ काओलिन से बने फिल्टर का उपयोग नसबंदी के लिए किया जाता है। मेम्ब्रेन और एस्बेस्टस फिल्टर एक बार उपयोग के लिए डिज़ाइन किए गए हैं। पराबैंगनी विकिरण के साथ, जीवाणुनाशक प्रभाव 200 - 450 एनएम की लंबाई वाली किरणों द्वारा प्रदान किया जाता है, जिसका स्रोत जीवाणुनाशक लैंप है। चिकित्सीय प्रयोजनों के लिए जीवाणुनाशक लैंप का उपयोग करके हवा को पराबैंगनी किरणों से निष्फल किया जाता है। निवारक संस्थाएँ, उद्यमों में सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं के बक्से खाद्य उद्योग, टीके और सीरम के उत्पादन के लिए बक्सों में, ऑपरेटिंग रूम, हेरफेर रूम, बच्चों के संस्थानों आदि में। पराबैंगनी किरणों में उच्च रोगाणुरोधी गतिविधि होती है और यह न केवल वनस्पति कोशिकाओं, बल्कि उनके बीजाणुओं की भी मृत्यु का कारण बन सकती है। क्रिया के परिणामस्वरूप सूर्य का प्रकाश सूक्ष्मजीवों की मृत्यु का कारण बनता है पराबैंगनी विकिरणऔर सूखना. धूप में सुखाने से कई प्रकार के सूक्ष्मजीवों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है, लेकिन इसका प्रभाव सतही होता है और इसलिए सूर्य की रोशनी नसबंदी अभ्यास में सहायक भूमिका निभाती है। हाल ही में, घावों और जलने के उपचार में सिंथेटिक और प्राकृतिक पॉलिमर से बने कोटिंग्स का उपयोग जैल के रूप में किया जाने लगा है। घावों और जलने के स्थानीय उपचार के लिए पॉलिमर एंटीसेप्टिक फिल्मों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। इनमें कैटापोल, डाइऑक्साइडिन, ब्लू आयोडीन, साथ ही ग्लूटाराल्डिहाइड युक्त सोर्बिटोल जैसे व्यापक स्पेक्ट्रम रोगाणुरोधी एजेंट होते हैं। इन फिल्मों को स्टरलाइज़ करने के लिए 20.0 kGy की खुराक पर आयनीकृत विकिरण का उपयोग किया जाता है। पॉलिमर एंटीसेप्टिक फिल्मों और सॉर्बेंट्स के औद्योगिक उत्पादन के दौरान, इस नसबंदी व्यवस्था के तहत उनकी बाँझपन पूरी तरह से सुनिश्चित की जाती है। रेडियोधर्मी विकिरण वनस्पति और बीजाणु दोनों रूपों में सभी प्रकार के सूक्ष्मजीवों को मारता है। इसका उपयोग व्यापक रूप से बाँझ उत्पादों और बाँझ डिस्पोजेबल चिकित्सा उपकरणों का उत्पादन करने वाले उद्यमों में, अपशिष्ट जल और पशु मूल के कच्चे माल के कीटाणुशोधन के लिए किया जाता है।

यांत्रिक बंध्याकरण विधि यांत्रिक नसबंदी विधियाँ वस्तुओं की सतह से कीटाणुओं को हटा देती हैं। इनमें धुलाई, झाड़ना, झाड़ना, गीला पोंछना, हवा देना, वेंटिलेशन, वैक्यूमिंग, धुलाई शामिल है।

रासायनिक बंध्याकरण विधि चिकित्सा पद्धति में प्लास्टिक का अब तेजी से उपयोग हो रहा है। इनका उपयोग दंत चिकित्सा, मैक्सिलोफेशियल सर्जरी, ट्रॉमेटोलॉजी, आर्थोपेडिक्स और सर्जरी में किया जाता है। अधिकांश प्लास्टिक दबाव और शुष्क गर्मी (शुष्क गर्म हवा) के तहत भाप की गर्मी नसबंदी विधियों का सामना नहीं कर सकते हैं। ऐसी वस्तुओं को कीटाणुरहित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले अल्कोहल, डायोसाइड और टर्नरी समाधान के समाधान संसाधित किए जा रहे उत्पादों की बाँझपन सुनिश्चित नहीं करते हैं। इसलिए, प्लास्टिक उत्पादों को कीटाणुरहित करने के लिए गैस और विकिरण विधियों के साथ-साथ रसायनों के समाधान का उपयोग किया जाता है। चिकित्सा संस्थानों के अभ्यास में बड़ी संख्या में थर्मोलैबाइल सामग्रियों से बने उत्पादों की शुरूआत कीटाणुशोधन समाधानों के साथ कीटाणुशोधन और नसबंदी के विकिरण और गैस तरीकों की शुरूआत में योगदान देती है। रासायनिक नसबंदी के दौरान, विभिन्न रासायनिक समूहों (पेरोक्साइड, फेनोलिक, हैलोजन युक्त, एल्डिहाइड, क्षार और एसिड, सर्फेक्टेंट, आदि) से गैसों और एजेंटों का उपयोग किया जाता है। रोजमर्रा के उपयोग के लिए, डिटर्जेंट, सफाई, ब्लीचिंग और अन्य तैयारी का उत्पादन किया जाता है जिनकी संरचना में विभिन्न रसायनों की शुरूआत के कारण रोगाणुरोधी प्रभाव होता है। इन तैयारियों का उपयोग सैनिटरी उपकरण, बर्तन, लिनेन आदि की सफाई और कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। फॉर्मल्डिहाइड स्टीम (स्टीमफॉर्म) का उपयोग किया जा सकता है चिकित्सा संस्थाननसबंदी के लिए धातु उत्पादचिकित्सा प्रयोजन (स्केलपेल, सुई, चिमटी, जांच, क्लैंप, हुक, तार कटर, आदि)। फॉर्मेल्डिहाइड वाष्प के साथ नसबंदी से पहले, उत्पादों को पूर्व-नसबंदी सफाई से गुजरना चाहिए और अच्छी तरह से सूखना चाहिए। जब किसी भी प्रकार से निष्फल कर दिया जाए रासायनिककिसी विशेष वस्तु के प्रसंस्करण के नियम कीटाणुरहित की जाने वाली वस्तु की विशेषताओं, रोगाणुओं के प्रतिरोध और गुणों की विशेषताओं पर निर्भर करते हैं। रासायनिक तैयारी, परिवेश का तापमान, आर्द्रता और अन्य कारक। इस प्रकार, धातु उपकरणों की बाँझपन कम से कम 20 डिग्री के तापमान और 95-98% की सापेक्ष आर्द्रता पर भाप के साथ एक सीलबंद कक्ष में भंडारण के पांच घंटे के बाद हासिल की जाती है; 15 डिग्री के तापमान पर, इन वस्तुओं की पूर्ण बाँझपन 16 घंटे बाद ही प्राप्त हो जाता है। ग्लूटाराल्डिहाइड की स्पोरिसाइडल गतिविधि तापमान पर निर्भर करती है। इसकी सर्वोत्तम क्रिया 15 - 25 डिग्री के तापमान पर होती है। जैसे-जैसे तापमान बढ़ता है, इस दवा की स्पोरिसाइडल गतिविधि कम हो जाती है। रासायनिक बंध्याकरण का उपयोग कुछ हद तक सीमित सीमा तक किया जाता है। अक्सर, इस पद्धति का उपयोग कल्चर मीडिया और इम्युनोबायोलॉजिकल तैयारी (टीके और सीरम) के जीवाणु संदूषण को रोकने के लिए किया जाता है। क्लोरोफॉर्म, टोल्यूनि और ईथर जैसे पदार्थ अक्सर पोषक मीडिया में जोड़े जाते हैं। यदि माध्यम को इन परिरक्षकों से मुक्त करना आवश्यक हो, तो इसे पानी के स्नान में 56 डिग्री पर गर्म किया जाता है और परिरक्षक वाष्पित हो जाते हैं। टीकों या सीरम को संरक्षित करने के लिए मेरथिओलेट, बोरिक एसिड और फॉर्मेलिन का उपयोग किया जाता है।

जैविक बंध्याकरण विधि जैविक नसबंदी एंटीबायोटिक दवाओं के उपयोग पर आधारित है। वायरस की खेती में इस विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

सूक्ष्मजीवों का जीवन पर्यावरणीय परिस्थितियों पर बहुत अधिक निर्भर है। सूक्ष्मजीवों को प्रभावित करने वाले सभी पर्यावरणीय कारकों को तीन समूहों में विभाजित किया जा सकता है: भौतिक, रासायनिक और जैविक, जिसका लाभकारी या हानिकारक प्रभाव कारक की प्रकृति और सूक्ष्मजीव के गुणों दोनों पर निर्भर करता है।

भौतिक कारक

भौतिक कारकों में से तापमान, शुष्कन, दीप्तिमान ऊर्जा और अल्ट्रासाउंड का सूक्ष्मजीवों के विकास पर सबसे अधिक प्रभाव पड़ता है।

तापमान. प्रत्येक सूक्ष्मजीव की जीवन गतिविधि कुछ तापमान सीमाओं द्वारा सीमित होती है। यह तापमान निर्भरता आमतौर पर तीन मुख्य बिंदुओं द्वारा व्यक्त की जाती है: न्यूनतम - वह तापमान जिसके नीचे माइक्रोबियल कोशिकाओं का प्रजनन रुक जाता है; इष्टतम - सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और विकास के लिए सर्वोत्तम तापमान; अधिकतम - वह तापमान जिसके ऊपर कोशिकाओं की महत्वपूर्ण गतिविधि कमजोर हो जाती है या रुक जाती है। इष्टतम तापमानआमतौर पर तापमान की स्थिति से मेल खाता है प्रकृतिक वातावरणएक वास।

तापमान के संबंध में सभी सूक्ष्मजीवों को साइकोफाइल, मेसोफाइल और थर्मोफाइल में विभाजित किया गया है।

साइक्रोफाइल्स (ग्रीक साइक्रोस से - ठंडा, फिलियो - प्यार), या ठंड से प्यार करने वाले सूक्ष्मजीव, अपेक्षाकृत कम तापमान पर बढ़ते हैं: न्यूनतम तापमान - 0 डिग्री सेल्सियस, इष्टतम - 10-20 डिग्री सेल्सियस, अधिकतम - 30 डिग्री सेल्सियस। इस समूह में शामिल हैं उत्तरी समुद्रों और महासागरों, मिट्टी में रहने वाले सूक्ष्मजीव, अपशिष्ट. इसमें चमकदार और लौह बैक्टीरिया के साथ-साथ सूक्ष्म जीव भी शामिल हैं जो ठंड (0 डिग्री सेल्सियस से नीचे) में भोजन को खराब करते हैं।

मेसोफाइल्स (ग्रीक मेसोस से - मध्य) सबसे व्यापक समूह हैं, जिनमें अधिकांश सैप्रोफाइट्स और सभी रोगजनक सूक्ष्मजीव शामिल हैं। उनके लिए इष्टतम तापमान 28-37°C, न्यूनतम 10°C, अधिकतम 45°C है।

थर्मोफाइल (ग्रीक टर्मोस से - गर्मी, गर्मी), या गर्मी-प्रेमी सूक्ष्मजीव, 55 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर विकसित होते हैं, उनके लिए न्यूनतम तापमान 30 डिग्री सेल्सियस, इष्टतम 50-60 डिग्री सेल्सियस और अधिकतम 70 डिग्री सेल्सियस होता है। -75 डिग्री सेल्सियस। वे गर्म खनिज झरनों, मिट्टी की सतह परत, स्व-हीटिंग सब्सट्रेट्स (खाद, घास, अनाज) और मनुष्यों और जानवरों की आंतों में पाए जाते हैं। थर्मोफाइल्स के बीच कई बीजाणु रूप हैं।

उच्च और निम्न तापमान का सूक्ष्मजीवों पर अलग-अलग प्रभाव पड़ता है। कुछ उच्च तापमान के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं। इसके अलावा, अधिकतम तापमान जितना अधिक होता है, माइक्रोबियल कोशिकाओं की मृत्यु उतनी ही तेजी से होती है, जो सेल प्रोटीन के विकृतीकरण (जमावट) के कारण होता है।

मेसोफिलिक बैक्टीरिया के वानस्पतिक रूप 60°C के तापमान पर 30-60 मिनट के लिए और 80-100°C पर 1-2 मिनट के बाद मर जाते हैं। जीवाणु बीजाणु उच्च तापमान के प्रति अधिक प्रतिरोधी होते हैं। उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स बेसिली के बीजाणु 10-20 मिनट तक उबलने का सामना कर सकते हैं, और क्लोस्ट्रीडियम बोटुलिज़्म के बीजाणु - 6 घंटे तक। बीजाणु सहित सभी सूक्ष्मजीव, एक घंटे के लिए 165-170 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर मर जाते हैं (सूखी गर्मी में) ओवन) या 30 मिनट के लिए 1 एटीएम (एक आटोक्लेव में) दबाव में भाप के संपर्क में आने पर।

सूक्ष्मजीवों पर उच्च तापमान का प्रभाव नसबंदी का आधार है - सूक्ष्मजीवों और उनके बीजाणुओं से विभिन्न वस्तुओं की पूर्ण मुक्ति (नीचे देखें)।

कई सूक्ष्मजीव कम तापमान के प्रति बेहद प्रतिरोधी होते हैं। साल्मोनेला टाइफस और विब्रियो कॉलेरी बर्फ में लंबे समय तक जीवित रहते हैं। कुछ सूक्ष्मजीव तरल हवा के तापमान (-190°C) पर व्यवहार्य रहते हैं, और जीवाणु बीजाणु -250°C तक तापमान का सामना कर सकते हैं।

केवल कुछ प्रकार के रोगजनक बैक्टीरिया ही कम तापमान के प्रति संवेदनशील होते हैं (उदाहरण के लिए, बोर्डेटेला पर्टुसिस और पैरापर्टुसिस, निसेरिया मेनिंगोकोकस, आदि)। सूक्ष्मजीवों के इन गुणों को ध्यान में रखा जाता है प्रयोगशाला निदानऔर अध्ययन के तहत सामग्री को परिवहन करते समय, इसे प्रशीतन से संरक्षित प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है।

कम तापमान की क्रिया सड़न और किण्वन प्रक्रियाओं को रोकती है, जिसका व्यापक रूप से खाद्य उत्पादों को संरक्षित करने के लिए उपयोग किया जाता है प्रशीतन इकाइयाँ, तहखाने, ग्लेशियर। 0 डिग्री सेल्सियस से नीचे के तापमान पर, रोगाणु निलंबित एनीमेशन की स्थिति में आ जाते हैं - चयापचय प्रक्रियाएं धीमी हो जाती हैं और प्रजनन रुक जाता है। हालाँकि, यदि उपयुक्त हैं तापमान की स्थितिऔर पोषक माध्यम महत्वपूर्ण कार्यमाइक्रोबियल कोशिकाएं बहाल हो जाती हैं। सूक्ष्मजीवों की इस संपत्ति का उपयोग कम तापमान पर माइक्रोबियल संस्कृतियों को संरक्षित करने के लिए प्रयोगशाला अभ्यास में किया जाता है। उच्च और निम्न तापमान (ठंड और पिघलना) में तेजी से बदलाव का भी सूक्ष्मजीवों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है - इससे कोशिका झिल्ली टूट जाती है।

सुखाने. सूक्ष्मजीवों के सामान्य कामकाज के लिए पानी आवश्यक है। सूखने से साइटोप्लाज्म का निर्जलीकरण होता है, साइटोप्लाज्मिक झिल्ली की अखंडता में व्यवधान होता है, जिसके परिणामस्वरूप माइक्रोबियल कोशिकाओं का पोषण बाधित होता है और उनकी मृत्यु हो जाती है।

सुखाने के प्रभाव में विभिन्न प्रकार के सूक्ष्मजीवों की मृत्यु का समय काफी भिन्न होता है। उदाहरण के लिए, रोगजनक निसेरिया (मेनिंगोकोकी, गोनोकोकी), लेप्टोस्पाइरा, ट्रेपोनेमा पैलिडम और अन्य कुछ मिनटों के बाद सूखने पर मर जाते हैं। विब्रियो कॉलेरी 2 दिनों तक, साल्मोनेला टाइफाइड - 70 दिन, और माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस - 90 दिनों तक सूखने का सामना कर सकता है। लेकिन तपेदिक के रोगियों का सूखा थूक, जिसमें रोगजनकों को सूखे प्रोटीन आवरण द्वारा संरक्षित किया जाता है, 10 महीने तक संक्रामक रहता है।

बीजाणु विशेष रूप से सूखने के साथ-साथ अन्य पर्यावरणीय प्रभावों के प्रति प्रतिरोधी होते हैं। एंथ्रेक्स बेसिली के बीजाणु 10 वर्षों तक अंकुरित होने की क्षमता बनाए रखते हैं, और मोल्ड कवक के बीजाणु 20 वर्षों तक अंकुरित होने की क्षमता बनाए रखते हैं।

सूक्ष्मजीवों पर सूखने के प्रतिकूल प्रभाव का उपयोग लंबे समय से सब्जियों, फलों, मांस, मछली और औषधीय जड़ी बूटियों को संरक्षित करने के लिए किया जाता रहा है। साथ ही, खुद को परिस्थितियों में पाया उच्च आर्द्रता, ऐसे उत्पाद माइक्रोबियल गतिविधि की बहाली के कारण जल्दी खराब हो जाते हैं।

फ़्रीज़-सुखाने की विधि का उपयोग सूक्ष्मजीवों, टीकों और अन्य जैविक तैयारियों की संस्कृतियों के भंडारण के लिए व्यापक रूप से किया जाता है। विधि का सार यह है कि सूक्ष्मजीवों या तैयारियों को पहले जमे हुए किया जाता है और फिर वैक्यूम परिस्थितियों में सुखाया जाता है। इस मामले में, माइक्रोबियल कोशिकाएं निलंबित एनीमेशन की स्थिति में प्रवेश करती हैं और कई महीनों या वर्षों तक अपने जैविक गुणों को बरकरार रखती हैं।

दीप्तिमान ऊर्जा. प्रकृति में, सूक्ष्मजीव लगातार सौर विकिरण के संपर्क में रहते हैं। प्रकाश संश्लेषक बैक्टीरिया (हरे और बैंगनी सल्फर बैक्टीरिया) को छोड़कर, सीधी धूप कुछ ही घंटों में कई सूक्ष्मजीवों की मृत्यु का कारण बनती है। सूर्य के प्रकाश के हानिकारक प्रभाव पराबैंगनी किरणों (यूवी किरणों) की गतिविधि के कारण होते हैं। वे कोशिका एंजाइमों को निष्क्रिय कर देते हैं और डीएनए को नुकसान पहुंचाते हैं। सैप्रोफाइट्स की तुलना में रोगजनक बैक्टीरिया यूवी किरणों की क्रिया के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं। इसलिए, माइक्रोबियल कल्चर को प्रयोगशाला में अंधेरे में संग्रहित करना बेहतर है। इस संबंध में, बुचनर का अनुभव प्रदर्शनात्मक है।

प्रचुर मात्रा में बैक्टीरिया के कल्चर को अगर की एक पतली परत के साथ पेट्री डिश में डाला जाता है। काले कागज से काटे गए अक्षरों को बीज वाले कप की बाहरी सतह पर चिपका दिया जाता है, जिससे उदाहरण के लिए, "टाइफस" शब्द बनता है। कप को, जिसका निचला भाग ऊपर की ओर होता है, 1 घंटे के लिए सीधी धूप से विकिरणित किया जाता है। फिर कागज हटा दिए जाते हैं, और कप को एक दिन के लिए 37°C पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। बैक्टीरिया का विकास केवल उन्हीं स्थानों पर देखा जाता है आगर जिन्हें स्टिकर पत्रों द्वारा यूवी किरणों से संरक्षित किया गया था। आगर का शेष भाग पारदर्शी रहता है, अर्थात सूक्ष्मजीवों की वृद्धि नहीं होती है (चित्र 11)।

बाहरी वातावरण के स्वास्थ्य को बेहतर बनाने में प्राकृतिक कारक के रूप में सूर्य के प्रकाश का महत्व बहुत अधिक है। यह प्राकृतिक जलाशयों की हवा, पानी और मिट्टी की ऊपरी परतों को रोगजनक बैक्टीरिया से मुक्त करता है।

यूवी किरणों के जीवाणुनाशक (बैक्टीरिया को नष्ट करने वाले) प्रभाव का उपयोग हवा को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है बंद परिसर(ऑपरेटिंग रूम, ड्रेसिंग रूम, बक्से, आदि), साथ ही पानी और दूध। इन किरणों का स्रोत दीपक हैं पराबैंगनी विकिरण, जीवाणुनाशक लैंप।

अन्य प्रकार की दीप्तिमान ऊर्जा - एक्स-रे, α-, β-, γ-किरणें केवल 440-280 J/kg के क्रम में बड़ी खुराक में सूक्ष्मजीवों पर हानिकारक प्रभाव डालती हैं। रोगाणुओं की मृत्यु परमाणु संरचनाओं और सेलुलर डीएनए के विनाश के कारण होती है। विकिरण की कम खुराक माइक्रोबियल कोशिकाओं के विकास को उत्तेजित करती है। उच्चतर जीवों की तुलना में सूक्ष्मजीव रेडियोधर्मी विकिरण के प्रति अधिक प्रतिरोधी होते हैं। थियोनिक बैक्टीरिया को यूरेनियम अयस्क भंडार में रहने के लिए जाना जाता है। परमाणु रिएक्टरों के पानी में 20-30 kJ/kg की आयनीकरण विकिरण की सांद्रता पर बैक्टीरिया पाए गए।

आयनकारी विकिरण के जीवाणुनाशक प्रभाव का उपयोग कुछ खाद्य उत्पादों के संरक्षण, जैविक तैयारियों (सीरा, टीके, आदि) की नसबंदी के लिए किया जाता है, जबकि निष्फल सामग्री के गुण नहीं बदलते हैं।

हाल के वर्षों में, डिस्पोजेबल उपयोग के लिए उत्पादों को विकिरण विधि द्वारा निष्फल कर दिया गया है - पॉलीस्टीरिन पिपेट, पेट्री डिश, सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के लिए कुएं, सीरिंज, साथ ही सीवन सामग्री- कैटगट, आदि।

अल्ट्रासाउंडमाइक्रोबियल कोशिकाओं को महत्वपूर्ण क्षति पहुंचाता है। अल्ट्रासाउंड के प्रभाव में, साइटोप्लाज्म के तरल वातावरण में स्थित गैसें सक्रिय हो जाती हैं, और कोशिका के अंदर उच्च दबाव (10,000 एटीएम तक) उत्पन्न होता है। इससे कोशिका झिल्ली टूट जाती है और कोशिका मृत्यु हो जाती है। अल्ट्रासाउंड का उपयोग खाद्य उत्पादों (दूध, फलों के रस) और पीने के पानी को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है।

उच्च दबाव. बैक्टीरिया और विशेषकर उनके बीजाणु यांत्रिक दबाव के प्रति प्रतिरोधी होते हैं। प्रकृति में ऐसे बैक्टीरिया पाए जाते हैं जो समुद्र और महासागरों में 100 से 900 एटीएम के दबाव में 1000-10000 मीटर की गहराई पर रहते हैं। कुछ प्रकार के बैक्टीरिया 3000-5000 एटीएम तक के दबाव का सामना कर सकते हैं, और जीवाणु बीजाणु - 20,000 एटीएम तक भी।

रासायनिक कारक

सूक्ष्मजीवों पर रसायनों का प्रभाव रासायनिक यौगिक की प्रकृति, उसकी सांद्रता और माइक्रोबियल कोशिकाओं के संपर्क की अवधि के आधार पर भिन्न होता है। सांद्रता के आधार पर, एक रासायनिक पदार्थ पोषण का स्रोत हो सकता है या सूक्ष्मजीवों की महत्वपूर्ण गतिविधि पर निरोधात्मक प्रभाव डाल सकता है। उदाहरण के लिए, 0.5-2% ग्लूकोज समाधान रोगाणुओं के विकास को उत्तेजित करता है, और 20-40% ग्लूकोज समाधान माइक्रोबियल कोशिकाओं के प्रसार को रोकता है।

कई रासायनिक यौगिक जो सूक्ष्मजीवों पर हानिकारक प्रभाव डालते हैं, चिकित्सा पद्धति में कीटाणुनाशक और एंटीसेप्टिक्स के रूप में उपयोग किए जाते हैं।

कीटाणुशोधन के लिए उपयोग किए जाने वाले रसायनों को कीटाणुनाशक कहा जाता है। कीटाणुशोधन से तात्पर्य विभिन्न पर्यावरणीय वस्तुओं में रोगजनक सूक्ष्मजीवों को नष्ट करने के उपायों से है। निस्संक्रामक में हैलाइड यौगिक, फिनोल और उनके डेरिवेटिव, भारी धातुओं के लवण, कुछ एसिड, क्षार, अल्कोहल आदि शामिल हैं। वे एक निश्चित समय के लिए इष्टतम सांद्रता में कार्य करके माइक्रोबियल कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनते हैं। कई कीटाणुनाशक मैक्रोऑर्गेनिज्म के ऊतकों पर हानिकारक प्रभाव डालते हैं।

एंटीसेप्टिक्स ऐसे रसायन हैं जो सूक्ष्मजीवों की मृत्यु का कारण बन सकते हैं या उनके विकास और प्रजनन को रोक सकते हैं। इनका उपयोग चिकित्सीय उद्देश्यों (कीमोथेरेपी) के साथ-साथ घावों, त्वचा और मानव श्लेष्म झिल्ली के कीटाणुशोधन के लिए किया जाता है। हाइड्रोजन पेरोक्साइड, आयोडीन के अल्कोहल समाधान, ब्रिलियंट ग्रीन, पोटेशियम परमैंगनेट के समाधान आदि में एंटीसेप्टिक गुण होते हैं। कुछ एंटीसेप्टिक पदार्थ (एसिटिक, सल्फ्यूरस, बेंजोइक एसिड, आदि) खुराक में जो मनुष्यों के लिए हानिरहित होते हैं, खाद्य संरक्षण के लिए उपयोग किए जाते हैं।

क्रिया के तंत्र के अनुसार, रोगाणुरोधी गतिविधि वाले रासायनिक पदार्थों को कई समूहों में विभाजित किया जा सकता है।

1. सर्फेक्टेंट (फैटी एसिड, साबुन और अन्य डिटर्जेंट) सतह के तनाव में कमी का कारण बनते हैं, जिससे सूक्ष्मजीवों की कोशिका दीवार और साइटोप्लाज्मिक झिल्ली के कामकाज में व्यवधान होता है।

2. फिनोल, क्रेसोल और उनके डेरिवेटिव माइक्रोबियल प्रोटीन के जमाव का कारण बनते हैं। इनका उपयोग सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास और संक्रामक रोग अस्पतालों में संक्रामक सामग्री को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है।

3. ऑक्सीकरण एजेंट, माइक्रोबियल प्रोटीन के साथ बातचीत करके, एंजाइमों की गतिविधि को बाधित करते हैं और प्रोटीन विकृतीकरण का कारण बनते हैं। सक्रिय ऑक्सीकरण एजेंट क्लोरीन और ओजोन हैं, जिनका उपयोग पीने के पानी को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। कीटाणुशोधन उद्देश्यों के लिए क्लोरीन डेरिवेटिव (ब्लीच, क्लोरैमाइन) का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। हाइड्रोजन पेरोक्साइड, पोटेशियम परमैंगनेट, आयोडीन आदि में ऑक्सीकरण गुण होते हैं।

4. कीटाणुशोधन के लिए फॉर्मेल्डिहाइड का उपयोग 40% घोल (फॉर्मेलिन) के रूप में किया जाता है। यह सूक्ष्मजीवों के वानस्पतिक और बीजाणु रूपों को मारता है। फॉर्मेलिन माइक्रोबियल सेल प्रोटीन के अमीनो समूहों को अवरुद्ध करता है और उनके विकृतीकरण का कारण बनता है।

5. भारी धातुओं (पारा, सीसा, जस्ता, सोना, आदि) के लवण माइक्रोबियल कोशिका के प्रोटीन को जमा देते हैं, जिससे उनकी मृत्यु हो जाती है। कई धातुएं (चांदी, सोना, पारा, आदि) नगण्य सांद्रता में सूक्ष्मजीवों पर जीवाणुनाशक प्रभाव डालती हैं। इस संपत्ति को ऑलिगोडायनामिक क्रिया कहा जाता है (लैटिन ऑलिगोस से - छोटा, डायनामिस - ताकत)। यह सिद्ध हो चुका है कि चाँदी के बर्तनों में रखा पानी चाँदी के आयनों के जीवाणुनाशक प्रभाव के कारण सड़ता नहीं है। ब्लेनोरिया की रोकथाम के लिए * नवजात शिशु कब कासिल्वर नाइट्रेट का 1% घोल इस्तेमाल किया गया। कार्बनिक सिल्वर यौगिकों (प्रोटार्गोल, कॉलरगोल) के कोलाइडल घोल का उपयोग स्थानीय एंटीसेप्टिक्स के रूप में भी किया जाता है।

* (ब्लेनोरिया गोनोकोकी के कारण आंख के कंजंक्टिवा की सूजन है।)

पारा की तैयारी में एक मजबूत रोगाणुरोधी प्रभाव होता है। प्राचीन काल से, कीटाणुशोधन के लिए मरकरी बाइक्लोराइड, या मरक्यूरिक क्लोराइड (1:1000 के तनुकरण पर) का उपयोग किया जाता रहा है। हालाँकि, इसका मैक्रोऑर्गेनिज्म के ऊतकों पर विषाक्त प्रभाव पड़ता है और इसका उपयोग सीमित है।

6. रंगों (डायमंड ग्रीन, रिवेनॉल आदि) में बैक्टीरिया की वृद्धि को रोकने का गुण होता है। कई रंगों के घोल का उपयोग एंटीसेप्टिक्स के रूप में किया जाता है, और माइक्रोफ्लोरा के विकास को रोकने के लिए कुछ पोषक तत्व मीडिया में भी मिलाया जाता है।

सूक्ष्मजीवों पर कई भौतिक और रासायनिक कारकों का विनाशकारी प्रभाव सड़न रोकनेवाला और एंटीसेप्टिक तरीकों का आधार बनता है, जिनका व्यापक रूप से चिकित्सा और स्वच्छता अभ्यास में उपयोग किया जाता है।

एसेप्सिस निवारक उपायों की एक प्रणाली है जो भौतिक तरीकों के आधार पर किसी वस्तु (घाव, शल्य चिकित्सा क्षेत्र, सूक्ष्मजीव संस्कृतियों, आदि) के माइक्रोबियल संदूषण को रोकती है।

एंटीसेप्टिक्स उपायों का एक समूह है जिसका उद्देश्य विभिन्न कीटाणुनाशक रसायनों का उपयोग करके घाव, पूरे शरीर या पर्यावरणीय वस्तुओं पर सूक्ष्मजीवों को नष्ट करना है।

जैविक कारक

प्राकृतिक आवासों में, सूक्ष्मजीव अलगाव में मौजूद नहीं होते हैं, बल्कि जटिल संबंधों में होते हैं, जो मुख्य रूप से सहजीवन, मेटाबायोसिस और विरोध के रूप में सामने आते हैं।

सहजीवन विभिन्न प्रजातियों के जीवों का सहवास है, जिससे उन्हें पारस्परिक लाभ होता है। साथ ही, एक साथ मिलकर उनका विकास अलग-अलग होने की तुलना में बेहतर होता है।

नोड्यूल बैक्टीरिया और फलीदार पौधों के बीच, फिलामेंटस कवक और नीले-हरे शैवाल (लाइकेन) के बीच सहजीवी संबंध मौजूद हैं: लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया और अल्कोहलिक यीस्ट के सहजीवन का उपयोग कुछ लैक्टिक एसिड उत्पादों (केफिर, कौमिस) को तैयार करने के लिए किया जाता है।

मेटाबायोसिस एक प्रकार का संबंध है जिसमें एक प्रकार के सूक्ष्मजीवों के चयापचय उत्पाद दूसरों के विकास के लिए आवश्यक स्थितियां बनाते हैं। उदाहरण के लिए, प्रोटीन पदार्थों को तोड़ने वाले पुटीय सक्रिय सूक्ष्मजीव पर्यावरण में अमोनियम यौगिकों के संचय में योगदान करते हैं और बनाते हैं अनुकूल परिस्थितियांनाइट्रिफाइंग बैक्टीरिया की वृद्धि और विकास के लिए। और अच्छी तरह से वातित मिट्टी में अवायवीय जीवों का विकास उन एरोबिकों के बिना असंभव होगा जो मुक्त ऑक्सीजन को अवशोषित करते हैं।

मेटाबायोटिक संबंध मिट्टी के सूक्ष्मजीवों के बीच व्यापक हैं और प्रकृति में पदार्थों के चक्र का आधार हैं।

विरोध संबंध का एक रूप है जिसमें एक सूक्ष्मजीव दूसरे के विकास को रोकता है या उसकी पूर्ण मृत्यु का कारण बन सकता है। अस्तित्व के संघर्ष में सूक्ष्मजीवों के बीच विरोधी संबंध विकसित हो गए हैं। वे जहां भी रहते हैं, उनके बीच खाद्य स्रोतों, वायु ऑक्सीजन और आवास के लिए निरंतर संघर्ष होता रहता है। इस प्रकार, अधिकांश रोगजनक बैक्टीरिया, रोगियों के स्राव के साथ बाहरी वातावरण (मिट्टी, पानी) में प्रवेश कर चुके हैं, कई सैप्रोफाइट्स के साथ दीर्घकालिक प्रतिस्पर्धा का सामना नहीं कर सकते हैं और अपेक्षाकृत जल्दी मर जाते हैं।

विरोध एक दूसरे पर सूक्ष्मजीवों के सीधे प्रभाव या उनके चयापचय उत्पादों की कार्रवाई के कारण हो सकता है। उदाहरण के लिए, प्रोटोजोआ बैक्टीरिया को निगल जाता है और फेज उन्हें नष्ट कर देता है। नवजात शिशुओं की आंतें लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया बिफीडोबैक्टीरियम बिफिडम द्वारा उपनिवेशित होती हैं। लैक्टिक एसिड जारी करके, वे पुटीय सक्रिय बैक्टीरिया के विकास को रोकते हैं और इस तरह अभी भी नाजुक जीव को आंतों के विकारों से बचाते हैं शिशुओं. जीवन की प्रक्रिया में कुछ सूक्ष्मजीव विभिन्न पदार्थ उत्पन्न करते हैं जिनका बैक्टीरिया और अन्य रोगाणुओं पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है। इन पदार्थों में एंटीबायोटिक्स शामिल हैं (देखें "एंटीबायोटिक्स")।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. कौन से भौतिक कारक सूक्ष्मजीवों की जीवन गतिविधि को प्रभावित करते हैं?

2. किन पदार्थों को कीटाणुनाशक के रूप में वर्गीकृत किया गया है और सूक्ष्मजीवों पर उनकी क्रिया के तंत्र में वे कैसे भिन्न हैं?

3. सूचीबद्ध करें कि सूक्ष्मजीवों के बीच क्या संबंध मौजूद हैं?

नसबंदी

बंध्याकरण नसबंदी है, अर्थात सूक्ष्मजीवों और उनके बीजाणुओं से पर्यावरणीय वस्तुओं की पूर्ण मुक्ति।

नसबंदी विभिन्न तरीकों से की जाती है:

1) भौतिक (उच्च तापमान, यूवी किरणों के संपर्क में, उपयोग)। जीवाणु फिल्टर);

2) रासायनिक (विभिन्न कीटाणुनाशक, एंटीसेप्टिक्स का उपयोग);

3) जैविक (एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग)।

प्रयोगशाला अभ्यास में, आमतौर पर नसबंदी के भौतिक तरीकों का उपयोग किया जाता है।

एक या किसी अन्य नसबंदी विधि का उपयोग करने की संभावना और व्यवहार्यता निष्फल की जाने वाली सामग्री की विशेषताओं, उसके भौतिक और रासायनिक गुणों से निर्धारित होती है।

भौतिक तरीके

बर्नर की लौ में कैल्सीनेशन या फ्लेम्बिंग नसबंदी की एक विधि है जिसमें वस्तु पूरी तरह से निष्फल हो जाती है, क्योंकि वनस्पति कोशिकाएं और माइक्रोबियल बीजाणु दोनों मर जाते हैं। आमतौर पर, बैक्टीरियोलॉजिकल लूप, स्पैटुला, पिपेट, स्लाइड और कवर ग्लास और छोटे उपकरणों को कैलक्लाइंड किया जाता है। कैंची और स्केलपेल को गर्म करके निष्फल नहीं किया जाना चाहिए, क्योंकि आग के प्रभाव में काटने की सतह सुस्त हो जाती है।

सूखी गर्मी नसबंदी

सूखी गर्मी या गर्म हवा के साथ नसबंदी पाश्चर ओवन (सुखाने) में की जाती है सूखी-गर्मी वाले ओवन). पाश्चर ओवन एक दोहरी दीवार वाली कैबिनेट है जो गर्मी प्रतिरोधी सामग्री - धातु और एस्बेस्टस से बनी होती है। गैस बर्नर या इलेक्ट्रिक हीटिंग उपकरणों का उपयोग करके कैबिनेट को गर्म करें। आवश्यक तापमान सुनिश्चित करने के लिए विद्युत रूप से गर्म अलमारियाँ नियामकों से सुसज्जित हैं। तापमान को नियंत्रित करने के लिए कैबिनेट की ऊपरी दीवार के छेद में एक थर्मामीटर डाला जाता है।

सूखी गर्मी का उपयोग प्रयोगशाला के कांच के बर्तनों को कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन के लिए तैयार किए गए बर्तनों को स्टरलाइज़ की जा रही सामग्री की एक समान और विश्वसनीय हीटिंग सुनिश्चित करने के लिए ओवन में लोड किया जाता है। कैबिनेट के दरवाज़े को कसकर बंद करें, हीटिंग डिवाइस चालू करें, तापमान को 160-165 डिग्री सेल्सियस पर लाएं और 1 घंटे के लिए इस तापमान पर स्टरलाइज़ करें। स्टरलाइज़ेशन के अंत में, हीटिंग बंद कर दें, लेकिन कैबिनेट का दरवाज़ा तब तक न खोलें जब तक ओवन ठंडा हो गया है; अन्यथा ठंडी हवा, कैबिनेट में प्रवेश करने से गर्म कुकवेयर में दरारें पड़ सकती हैं।

पाश्चर ओवन में स्टरलाइज़ेशन अलग-अलग तरीकों से किया जा सकता है तापमान की स्थितिऔर एक्सपोज़र (नसबंदी समय) (तालिका 1)।

तरल पदार्थ (पोषक तत्व मीडिया, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान, आदि), रबर और सिंथेटिक सामग्री से बनी वस्तुओं को सूखी गर्मी से निष्फल नहीं किया जा सकता है, क्योंकि तरल पदार्थ उबल कर बाहर निकल जाते हैं, और रबर और सिंथेटिक सामग्री पिघल जाती है।

पाश्चर ओवन में नसबंदी को नियंत्रित करने के लिए, रेशम के धागों को बीजाणु बनाने वाले बैक्टीरिया के कल्चर में गीला किया जाता है, सुखाया जाता है, एक बाँझ पेट्री डिश में रखा जाता है और पाश्चर ओवन में रखा जाता है। 1 घंटे के लिए 165 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर स्टरलाइज़ेशन किया जाता है (नियंत्रण के लिए, कुछ धागों को कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है)। फिर निष्फल और नियंत्रण धागों को पेट्री डिश में अगर की सतह पर रखा जाता है या शोरबा के साथ टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और 2 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। पाश्चर ओवन के उचित संचालन के साथ, पोषक तत्व मीडिया वाले टेस्ट ट्यूब या बर्तनों में कोई वृद्धि नहीं होगी जिसमें निष्फल धागे रखे गए थे, क्योंकि जीवाणु बीजाणु मर जाएंगे, जबकि धागे पर जीवाणु बीजाणु जो निष्फल नहीं थे (नियंत्रण) पोषक तत्व पर अंकुरित होंगे मीडिया विकास पर ध्यान दिया जाएगा.

पाश्चर ओवन के अंदर का तापमान निर्धारित करने के लिए, आप सुक्रोज या दानेदार चीनी का उपयोग कर सकते हैं, जो 165-170 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर कारमेलाइज़ होता है।

पाश्चर ओवन में नसबंदी के लिए प्रयोगशाला कांच के बर्तन तैयार करना. नसबंदी से पहले, प्रयोगशाला के कांच के बर्तन (पेट्री डिश, स्नातक और पाश्चर पिपेट, शीशियां, फ्लास्क, टेस्ट ट्यूब) को अच्छी तरह से धोया जाना चाहिए, सुखाया जाना चाहिए और कागज में लपेटा जाना चाहिए, अन्यथा नसबंदी के बाद वे फिर से वायु बैक्टीरिया से दूषित हो सकते हैं।

पेट्री डिश को एक समय में एक या अधिक टुकड़ों में कागज में लपेटा जाता है या विशेष धातु के बक्सों में रखा जाता है।

परीक्षण सामग्री को मुंह में प्रवेश करने से रोकने के लिए पिपेट के ऊपरी सिरों में रुई के फाहे डाले जाते हैं। स्नातक पिपेट को 4-5 सेमी चौड़ी कागज की लंबी पट्टियों में लपेटा जाता है। लपेटे गए पिपेट का आयतन कागज पर अंकित होता है। पेंसिल केस में, स्नातक किए गए पिपेट को कागज में अतिरिक्त लपेटे बिना निष्फल किया जाता है।

टिप्पणी. यदि पिपेट पर ग्रेजुएशन खराब दिखाई देता है, तो इसे नसबंदी से पहले बहाल कर दिया जाता है। पिपेट पर लगाएं ऑइल पेन्टऔर, पेंट को सूखने की अनुमति दिए बिना, बेरियम सल्फेट पाउडर को कपड़े से इसमें रगड़ दिया जाता है। इसके बाद कपड़े से अतिरिक्त पेंट हटा दें, जो केवल ग्रेजुएशन नॉच में ही रह जाता है। इस तरह से उपचारित पिपेट को धोना चाहिए।

पाश्चर पिपेट के नुकीले सिरों को बर्नर की लौ में सील कर दिया जाता है और एक बार में 3-5 टुकड़ों में कागज में लपेट दिया जाता है। पाश्चर पिपेट को सावधानी से लपेटा जाना चाहिए ताकि केशिकाओं के सीलबंद सिरे टूट न जाएं।

शीशियाँ, फ्लास्क, टेस्ट ट्यूब कपास-धुंध स्टॉपर्स के साथ बंद हैं। कॉर्क को बर्तन की गर्दन में उसकी लंबाई का 2/3 भाग फिट होना चाहिए, बहुत तंग नहीं, लेकिन ढीला भी नहीं। प्रत्येक बर्तन (टेस्ट ट्यूब को छोड़कर) पर स्टॉपर्स के ऊपर एक पेपर कैप लगाई जाती है। टेस्ट ट्यूबों को 5-50 के समूह में एक साथ बांधा जाता है और कागज से लपेटा जाता है।

टिप्पणी. पर उच्च तापमानकागज जिसमें कप और पिपेट लपेटे जाते हैं, और रूई पीली हो जाती है और जल भी सकती है, इसलिए हर कोई नई किस्मप्रयोगशाला द्वारा प्राप्त कागज का परीक्षण स्वीकृत तापमान स्थितियों पर किया जाना चाहिए।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. नसबंदी शब्द का क्या अर्थ है?

2. नसबंदी कैसे की जाती है?

3. आग पर कैल्सीनेशन द्वारा क्या निष्फल किया जाता है?

4. पाश्चर ओवन की संरचना और संचालन मोड का वर्णन करें।

5. पाश्चर ओवन में क्या निष्फल किया जाता है?

6. नसबंदी के लिए कांच के बर्तन कैसे तैयार किए जाते हैं?

7. पाश्चर ओवन में पोषक तत्व मीडिया और रबर की वस्तुओं को निष्फल क्यों नहीं किया जा सकता है?

व्यायाम

स्टरलाइज़ेशन के लिए पेट्री डिश, ग्रेजुएटेड पिपेट, पाश्चर पिपेट, टेस्ट ट्यूब, फ्लास्क और शीशियाँ तैयार करें।

उबालकर बंध्याकरण

उबालना एक रोगाणुनाशन विधि है जो बंध्यता की गारंटी देती है बशर्ते कि निष्फल सामग्री में कोई बीजाणु न हों। सीरिंज, उपकरण, कांच और धातु के बर्तन, रबर ट्यूब आदि के प्रसंस्करण के लिए उपयोग किया जाता है।

आमतौर पर उबालकर स्टरलाइज़ेशन एक स्टरलाइज़र में किया जाता है - धातु बॉक्स आयत आकारएक टाइट-फिटिंग ढक्कन के साथ. स्टरलाइज़ की जाने वाली सामग्री को स्टरलाइज़र में उपलब्ध जाली पर रखा जाता है और पानी से भर दिया जाता है। क्वथनांक बढ़ाने और पानी की कठोरता को खत्म करने के लिए, 1-2% सोडियम बाइकार्बोनेट मिलाएं (आसुत जल का उपयोग करना बेहतर है)। स्टरलाइज़र को ढक्कन से बंद करके गर्म किया जाता है। स्टरलाइज़ेशन की शुरुआत पानी के उबलने के क्षण से मानी जाती है, उबलने का समय 15-30 मिनट है। नसबंदी के अंत में, उपकरणों के साथ जाल को विशेष हुक के साथ साइड हैंडल से हटा दिया जाता है, और इसमें लगे उपकरणों को बाँझ चिमटी या संदंश के साथ लिया जाता है, जिन्हें बाकी उपकरणों के साथ उबाला जाता है।

भाप नसबंदी दो तरीकों से की जाती है: 1) दबाव में भाप; 2) बहती हुई भाप।

दबाव भाप नसबंदीएक आटोक्लेव में उत्पादित. यह स्टरलाइज़ेशन विधि स्टरलाइज़ की जा रही सामग्रियों को वायुमंडलीय दबाव से ऊपर संतृप्त जल वाष्प में उजागर करने पर आधारित है। इस तरह की नसबंदी के परिणामस्वरूप, सूक्ष्मजीवों के वानस्पतिक और बीजाणु दोनों रूप एक ही उपचार से मर जाते हैं।

एक आटोक्लेव (चित्र 12) एक विशाल बॉयलर है, जो बाहर की तरफ एक धातु के आवरण से ढका होता है, जिसे एक ढक्कन के साथ भली भांति बंद करके सील किया जाता है, जो हिंग वाले बोल्ट के साथ बॉयलर से कसकर जुड़ा होता है। एक और, छोटे व्यास वाला, जिसे स्टरलाइज़ेशन कक्ष कहा जाता है, बाहरी बॉयलर में डाला जाता है। इस कक्ष में विसंक्रमित की जाने वाली वस्तुओं को रखा जाता है। दोनों बॉयलर के बीच में है मुक्त स्थान, जिसे जलवाष्प कक्ष कहा जाता है। इस कक्ष में पानी को एक विशेष जल-मापने वाली ट्यूब पर अंकित एक निश्चित स्तर तक बाहर की ओर लगे फ़नल के माध्यम से डाला जाता है। जब पानी को जल-भाप कक्ष में उबाला जाता है, तो भाप उत्पन्न होती है। नसबंदी कक्ष एक सुरक्षा वाल्व के साथ एक आउटलेट कॉक से सुसज्जित है ताकि दबाव आवश्यक स्तर से ऊपर बढ़ने पर भाप को बाहर निकलने की अनुमति मिल सके। नसबंदी कक्ष में बनाए गए दबाव को निर्धारित करने के लिए एक दबाव नापने का यंत्र का उपयोग किया जाता है।

चावल। 12. आटोक्लेव आरेख. एम - दबाव नापने का यंत्र; पीसी - सुरक्षा वाल्व; बी - पानी के लिए फ़नल; के 2 - पानी छोड़ने के लिए नल; के 3 - भाप छोड़ने के लिए वाल्व

सामान्य वातावरणीय दबाव(760 mmHg) को शून्य माना जाता है। दबाव गेज रीडिंग और तापमान (तालिका 2) के बीच एक निश्चित संबंध है।

वर्तमान में, ऑपरेटिंग मोड के स्वचालित नियंत्रण वाले आटोक्लेव हैं। सामान्य दबाव नापने का यंत्र के अलावा, वे सुसज्जित हैं विद्युत संपर्क दबाव नापने का यंत्र, जो दबाव को पूर्व निर्धारित मान से ऊपर बढ़ने से रोकता है और इस प्रकार आटोक्लेव में वांछित तापमान की स्थिरता सुनिश्चित करता है।

दबाव में भाप विभिन्न पोषक मीडिया (देशी प्रोटीन युक्त मीडिया को छोड़कर), तरल पदार्थ (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान, पानी, आदि) को निर्जलित करती है; उपकरण, विशेष रूप से रबर भागों वाले।

पोषक तत्व मीडिया के ऑटोक्लेविंग का तापमान और अवधि पोषक माध्यम तैयार करने के लिए नुस्खा में निर्दिष्ट उनकी संरचना द्वारा निर्धारित की जाती है। उदाहरण के लिए, साधारण मीडिया (मीट-पेप्टोन अगर, मीट-पेप्टोन शोरबा) को 120 डिग्री सेल्सियस (1 एटीएम) पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। हालाँकि, इस तापमान पर देशी प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और अन्य पदार्थों से युक्त मीडिया को स्टरलाइज़ करना असंभव है जो गर्म करने पर आसानी से बदल जाते हैं। कार्बोहाइड्रेट युक्त मीडिया को आंशिक रूप से 100°C पर या आटोक्लेव में 112°C (0.5 एटीएम) पर 10-15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। विभिन्न तरल पदार्थ, रबर की नली, प्लग, बैक्टीरियल मोमबत्तियाँ और फिल्टर वाले उपकरणों को 120 डिग्री सेल्सियस (1 एटीएम) पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है।

ध्यान! संक्रमित सामग्री को आटोक्लेव में भी निष्क्रिय कर दिया जाता है। सूक्ष्मजीवों के कल्चर वाले कप और टेस्ट ट्यूब को भाप के प्रवेश के लिए ढक्कन में छेद वाले विशेष धातु की बाल्टियों या टैंकों में रखा जाता है और 1 घंटे के लिए 126 डिग्री सेल्सियस (1.5 एटीएम) पर एक आटोक्लेव में स्टरलाइज़ किया जाता है। काम करने के बाद उपकरणों को उसी तरह से स्टरलाइज़ किया जाता है बैक्टीरिया के साथ, विवाद बनाते हैं।

केवल विशेष रूप से प्रशिक्षित व्यक्तियों को ही आटोक्लेव के साथ काम करने की अनुमति है, जिन्हें डिवाइस के साथ दिए गए निर्देशों में निर्दिष्ट नियमों का सख्ती से और सटीक रूप से पालन करना होगा।

आटोक्लेविंग तकनीक. 1. काम से पहले, सभी भागों की सेवाक्षमता और नल की ग्राइंडिंग की जांच करें।

2. पानी (पैमाने के गठन को रोकने के लिए आसुत या उबला हुआ) बॉयलर के बाहर लगे फ़नल के माध्यम से पानी के मीटर ग्लास के शीर्ष निशान तक डाला जाता है। फ़नल के नीचे का नल बंद है।

3. स्टरलाइज़ की जाने वाली सामग्री को एक विशेष जाली पर स्टरलाइज़ेशन कक्ष में रखा जाता है। वस्तुओं को बहुत कसकर लोड नहीं किया जाना चाहिए, क्योंकि भाप को उनके बीच स्वतंत्र रूप से गुजरना चाहिए, अन्यथा वे आवश्यक तापमान तक गर्म नहीं होंगे और अस्थिर रह सकते हैं।

4. बेहतर सीलिंग के लिए ढक्कन पर रबर गैसकेट को चाक से रगड़ा जाता है।

5. ढक्कन को बंद कर दिया जाता है और आटोक्लेव बॉडी पर बोल्ट लगा दिया जाता है, और बोल्ट को जोड़े में क्रॉसवर्ड में पेंच कर दिया जाता है।

6. स्टरलाइज़ेशन कक्ष को बाहरी हवा से जोड़ने वाले आउटलेट वाल्व को पूरी तरह से खोलें, और आटोक्लेव को गर्म करना शुरू करें। आटोक्लेव को आमतौर पर गैस या बिजली का उपयोग करके गर्म किया जाता है।

जब आटोक्लेव को गर्म किया जाता है, तो पानी उबलता है, जिसके परिणामस्वरूप भाप बॉयलर की दीवारों के बीच और आंतरिक बॉयलर की दीवार में विशेष छेद के माध्यम से ऊपर उठती है (चित्र 12 देखें), नसबंदी कक्ष में प्रवेश करती है और खुले आउटलेट वाल्व के माध्यम से बाहर निकलती है। सबसे पहले, भाप आटोक्लेव में हवा के साथ निकल जाती है। यह आवश्यक है कि सभी हवा को आटोक्लेव से बाहर निकाला जाए, अन्यथा दबाव नापने का यंत्र की रीडिंग आटोक्लेव में तापमान के अनुरूप नहीं होगी।

भाप की निरंतर मजबूत धारा की उपस्थिति आटोक्लेव से हवा को पूरी तरह से हटाने का संकेत देती है; इसके बाद, आउटलेट वाल्व बंद हो जाता है और आटोक्लेव के अंदर दबाव धीरे-धीरे बढ़ने लगता है।

7. नसबंदी की शुरुआत उस क्षण को माना जाता है जब दबाव गेज की रीडिंग निर्दिष्ट मूल्य तक पहुंच जाती है। हीटिंग को समायोजित किया जाता है ताकि आटोक्लेव में दबाव एक निश्चित अवधि में न बदले।

8. नसबंदी का समय समाप्त होने के बाद, आटोक्लेव का ताप बंद कर दिया जाता है, और भाप को आउटलेट वाल्व के माध्यम से छोड़ दिया जाता है। जब दबाव नापने की सुई शून्य पर गिर जाए, तो ढक्कन खोलें। आटोक्लेव में बची भाप से जलने से बचने के लिए ढक्कन आपकी ओर खुला होना चाहिए।

आटोक्लेव में तापमान स्तर, यानी दबाव गेज रीडिंग की शुद्धता की जांच की जा सकती है। ऐसा करने के लिए, विभिन्न पदार्थों का उपयोग करें जिनका एक निश्चित गलनांक होता है: एंटीपाइरिन (113° C), रेसोरिसिनॉल और सल्फर (119° C), बेंजोइक एसिड (120° C)। इनमें से एक पदार्थ को नगण्य मात्रा में डाई (मचसाइन या मिथाइलीन ब्लू) के साथ मिलाया जाता है और एक ग्लास ट्यूब में डाला जाता है, जिसे सील करके रखा जाता है ऊर्ध्वाधर स्थितिसामग्री के निष्फल होने के बीच। यदि तापमान पर्याप्त है, तो पदार्थ पिघल जाएगा और संबंधित डाई का रंग बदल देगा।

नसबंदी की प्रभावशीलता की जांच करने के लिए, ज्ञात बीजाणु संस्कृति के साथ एक टेस्ट ट्यूब को आटोक्लेव में रखा जाता है। ऑटोक्लेविंग के बाद, ट्यूब को 24-48 घंटों के लिए थर्मोस्टेट में स्थानांतरित कर दिया जाता है, विकास की अनुपस्थिति या उपस्थिति नोट की जाती है। वृद्धि की कमी डिवाइस के उचित संचालन को इंगित करती है।

बहती भाप से बंध्याकरणकोच तंत्र में उत्पादित। इस विधि का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां निर्जलित की जाने वाली वस्तु 100 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर बदल जाती है। यूरिया, कार्बोहाइड्रेट, दूध, आलू, जिलेटिन इत्यादि युक्त पोषक तत्व मीडिया को बहती भाप से निर्जलित किया जाता है।

कोच उपकरण (बॉयलर) एक धातु सिलेंडर है जो बाहर की तरफ (गर्मी हस्तांतरण को कम करने के लिए) फेल्ट या एस्बेस्टस से ढका होता है। सिलेंडर को शंक्वाकार ढक्कन के साथ बंद किया जाता है जिसमें भाप निकलने के लिए एक छेद होता है। सिलेंडर के अंदर एक स्टैंड होता है, जिसके लेवल तक पानी डाला जाता है। स्टैंड पर एक छेद वाली बाल्टी रखी जाती है जिसमें स्टरलाइज़ की जाने वाली सामग्री रखी जाती है। कोच उपकरण को गैस या बिजली का उपयोग करके गर्म किया जाता है। नसबंदी का समय ढक्कन के किनारों पर और भाप आउटलेट से जोरदार भाप निकलने के क्षण से गिना जाता है। 30-60 मिनट के लिए स्टरलाइज़ करें। नसबंदी के अंत में, हीटिंग बंद कर दिया जाता है। उपकरण से सामग्री की बाल्टी निकालें और इसे अगले दिन तक कमरे के तापमान पर छोड़ दें। वार्मिंग को लगातार 3 दिनों तक 100°C के तापमान पर 30-60 मिनट तक किया जाता है। इस विधि को फ्रैक्शनल स्टरलाइज़ेशन कहा जाता है। पहले ताप के दौरान, रोगाणुओं के वानस्पतिक रूप मर जाते हैं, जबकि बीजाणु रूप संरक्षित रहते हैं। एक दिन के भीतर, बीजाणु अंकुरित होकर वानस्पतिक रूपों में बदल जाते हैं, जो नसबंदी के दूसरे दिन मर जाते हैं। चूँकि यह संभव है कि कुछ बीजाणुओं को अंकुरित होने का समय नहीं मिला, सामग्री को अगले 24 घंटों के लिए रखा जाता है, और फिर तीसरी नसबंदी की जाती है। कोच उपकरण में बहती भाप से बंध्याकरण की आवश्यकता नहीं होती है विशेष नियंत्रण, चूंकि तैयार पोषक तत्व मीडिया की बाँझपन डिवाइस के सही संचालन का एक संकेतक है। आप आटोक्लेव में ढक्कन खोलकर और आउटलेट वाल्व खुला रखकर बहती भाप से भी स्टरलाइज़ कर सकते हैं।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. कौन से पोषक माध्यम को भाप से निष्फल किया जाता है?

2. स्टरलाइज़र क्या है और यह कैसे काम करता है?

3. उबालकर रोगाणुनाशन करते समय आसुत जल का उपयोग क्यों करना चाहिए?

4. आटोक्लेव की संरचना और संचालन मोड का वर्णन करें।

5. आटोक्लेव में क्या स्टरलाइज़ किया जाता है?

6. ऑटोक्लेविंग के दौरान उचित स्टरलाइज़ेशन के लिए नियंत्रण के रूप में क्या कार्य करता है?

7. प्रवाहित भाप स्टरलाइज़ेशन क्या है?

8. कोच तंत्र की संरचना का वर्णन करें।

9. फ्रैक्शनल स्टरलाइज़ेशन का उद्देश्य क्या है?

व्यायाम

प्रपत्र भरिये।

कोच कौयगुलांट में आंशिक नसबंदी भी की जा सकती है।

कोच के कौयगुलांट का उपयोग मट्ठा और अंडा संस्कृति मीडिया को जमा करने के लिए किया जाता है, और साथ ही माध्यम के संघनन के साथ, इसे निष्फल किया जाता है।

कोच का कौयगुलांटयह एक सपाट, दोहरी दीवारों वाला धातु का बक्सा है जो बाहर से ढका हुआ है थर्मल इन्सुलेशन सामग्री. बाहरी दीवार के ऊपरी भाग में स्थित एक विशेष छेद के माध्यम से दीवारों के बीच की जगह में पानी डाला जाता है। छेद को एक डाट से बंद किया जाता है जिसमें एक थर्मामीटर डाला जाता है। उपकरण दो ढक्कनों से बंद है: कांच और धातु। कांच के ढक्कन के माध्यम से आप जमावट प्रक्रिया का निरीक्षण कर सकते हैं। मीडिया के साथ टेस्ट ट्यूब को कोगुलेटर के नीचे झुकी हुई स्थिति में रखा जाता है।

कोगुलेटर को गैस या बिजली का उपयोग करके गर्म किया जाता है। मीडिया को एक बार 90°C के तापमान पर 1 घंटे के लिए या आंशिक रूप से - लगातार 3 दिनों में 80°C पर 1 घंटे के लिए निष्फल किया जाता है।

टिंडलाइज़ेशन* - कम तापमान पर आंशिक नसबंदी - उन पदार्थों के लिए उपयोग किया जाता है जो 60 डिग्री सेल्सियस (उदाहरण के लिए, प्रोटीन तरल पदार्थ) के तापमान पर आसानी से नष्ट हो जाते हैं और विकृत हो जाते हैं। निष्फल की जाने वाली सामग्री को पानी के स्नान में या थर्मोस्टैट वाले विशेष उपकरणों में 56-58 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर लगातार 5 दिनों तक एक घंटे तक गर्म किया जाता है।

* (नसबंदी विधि का नाम टाइन्डल के नाम पर रखा गया है, जिन्होंने इसे प्रस्तावित किया था।)

pasteurization- रोगाणुओं के गैर-बीजाणु रूपों को नष्ट करने के लिए पाश्चर द्वारा प्रस्तावित 1 घंटे के लिए 65-70 डिग्री सेल्सियस पर नसबंदी। दूध, वाइन, बीयर, फलों के रस और अन्य उत्पादों को पास्चुरीकृत किया जाता है। लैक्टिक एसिड और रोगजनक बैक्टीरिया (ब्रुसेला, माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस, शिगेला, साल्मोनेला, स्टेफिलोकोकस, आदि) को हटाने के लिए दूध को पास्चुरीकृत किया जाता है। बीयर, फलों के रस और वाइन को पास्चुरीकृत करते समय, सूक्ष्मजीव पैदा होते हैं विभिन्न प्रकारकिण्वन. पाश्चुरीकृत खाद्य पदार्थों को प्रशीतित में रखना सबसे अच्छा है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. कोच कोगुलेटर का उद्देश्य और संरचना क्या है?

2. क्लॉटिंग मशीन में स्टरलाइज़ेशन की क्या विधियाँ हैं?

3. टिंडलाइजेशन क्या है?

4. पास्चुरीकरण क्या है?

पराबैंगनी विकिरण द्वारा बंध्याकरण

यूवी किरणों के साथ नसबंदी विशेष प्रतिष्ठानों - जीवाणुनाशक लैंप का उपयोग करके की जाती है। यूवी किरणों में उच्च रोगाणुरोधी गतिविधि होती है और यह न केवल वनस्पति कोशिकाओं, बल्कि बीजाणुओं की भी मृत्यु का कारण बन सकती है। यूवी विकिरण का उपयोग अस्पतालों, ऑपरेटिंग रूम, बच्चों के संस्थानों आदि में हवा को स्टरलाइज़ करने के लिए किया जाता है। एक सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशाला में, काम से पहले एक बॉक्स को यूवी किरणों से उपचारित किया जाता है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. पराबैंगनी किरणों में क्या गुण होते हैं?

2. पराबैंगनी विकिरण का उपयोग करके नसबंदी का उपयोग किन मामलों में किया जाता है?

जीवाणु फिल्टर का उपयोग करके यांत्रिक नसबंदी

निस्पंदन स्टरलाइज़ेशन का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां विसंक्रमित की जाने वाली वस्तुएं गर्म होने पर बदल जाती हैं। विभिन्न महीन-छिद्रपूर्ण सामग्रियों से बने जीवाणु फिल्टर का उपयोग करके निस्पंदन किया जाता है। बैक्टीरिया की यांत्रिक अवधारण सुनिश्चित करने के लिए फिल्टर के छिद्र काफी छोटे (1 माइक्रोन तक) होने चाहिए, इसलिए कुछ लेखक निस्पंदन को इस प्रकार कहते हैं यांत्रिक तरीकेनसबंदी.

निस्पंदन विधि का उपयोग प्रोटीन, सीरम और कुछ एंटीबायोटिक्स युक्त पोषक मीडिया को स्टरलाइज़ करने के लिए किया जाता है, और वायरस, फ़ेज और एक्सोटॉक्सिन से बैक्टीरिया को अलग करने के लिए भी किया जाता है।

सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में, सेट्ज़ एस्बेस्टस फिल्टर, झिल्ली फिल्टर और चेम्बरलेंट और बर्कफेल्ड फिल्टर (मोमबत्तियाँ) का उपयोग किया जाता है।

सेट्ज़ फिल्टर एस्बेस्टस और सेल्युलोज के मिश्रण से बनी डिस्क हैं। इनकी मोटाई 3-5 मिमी, व्यास 35-140 मिमी है। घरेलू उद्योग दो ब्रांडों के फिल्टर का उत्पादन करता है: "एफ" (फ़िल्टरिंग) - निलंबित कणों को बनाए रखता है लेकिन बैक्टीरिया को गुजरने देता है; "एसएफ" (स्टरलाइज़िंग) - छोटे छिद्रों के साथ, बैक्टीरिया को बनाए रखता है, लेकिन वायरस को अंदर जाने देता है। टूटी हुई एस्बेस्टस प्लेटें, साथ ही टूटी हुई और दरार वाली प्लेटें काम के लिए अनुपयुक्त हैं।

मेम्ब्रेन फिल्टर नाइट्रोसेल्यूलोज से बनाए जाते हैं। वे डिस्क हैं सफ़ेद 0.1 मिमी मोटा और 35 मिमी व्यास। छिद्र के आकार के आधार पर, उन्हें क्रमांक 1, 2, 3, 4 और 5 (तालिका 3) नामित किया गया है।

फ़िल्टर नंबर 1 नसबंदी के लिए सबसे उपयुक्त है। सूचीबद्ध लोगों के अलावा, वे एक तथाकथित प्री-फ़िल्टर भी बनाते हैं, जो फ़िल्टर किए गए तरल को इसमें मौजूद बड़े कणों से मुक्त करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।

चेम्बरलेंट और बर्कफेल्ड फिल्टर (मोमबत्तियाँ) खोखले सिलेंडर हैं, जो एक सिरे पर बंद होते हैं। चेम्बरलेंट मोमबत्तियाँ रेत और क्वार्ट्ज के साथ मिश्रित काओलिन से बनाई जाती हैं। उन्हें छिद्र आकार द्वारा मानकीकृत किया जाता है और एल 1, एल 2, एल 3 ... एल 13 नामित किया जाता है। बर्कफेल्ड फिल्टर (मोमबत्तियाँ) इन्फ्यूसर मिट्टी से तैयार किए जाते हैं; उनके छिद्रों के आकार के अनुसार उन्हें वी, एन, डब्ल्यू नामित किया जाता है, जो 3-4, 4-7, 8-12 माइक्रोन के छिद्र व्यास से मेल खाता है।

जीवाणु फिल्टर के साथ कार्य निम्नानुसार किया जाता है। फ़िल्टर को एक विशेष धारक में सुरक्षित किया जाना चाहिए, जिसे फ़िल्टर रिसीवर में डाला जाता है। रिसीवर आमतौर पर बन्सेन फ्लास्क होता है। अधिकांश मामलों में स्टेनलेस स्टील से बने धारकों में दो भाग होते हैं: ऊपरी, बिना तली के सिलेंडर के आकार का, और निचला, एक सहायक भाग जो एक ट्यूब में समाप्त होता है। ऊपर की ओर खुरदरी सतह वाले सेट्ज़ फिल्टर को एक धातु की जाली पर रखा जाता है और शीर्ष और के बीच स्क्रू से कसकर बांध दिया जाता है तलधारक। माउंटेड फिल्टर को बुन्सेन फ्लास्क की गर्दन में डाले गए रबर स्टॉपर में सुरक्षित किया गया है। फ्लास्क के आउटलेट ट्यूब में एक कपास झाड़ू डाला जाता है, जो वैक्यूम पंप से जुड़ा होता है। तैयार इंस्टॉलेशन को कागज में लपेटा जाता है और 20-30 मिनट के लिए 1 एटीएम के दबाव में एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। संपूर्ण असेंबल डिवाइस को सेइट्ज़ फ़िल्टर भी कहा जाता है (चित्र 13)।

निस्पंदन से तुरंत पहले, बन्सेन फ्लास्क का आउटलेट सिरा एक रबर ट्यूब द्वारा एक तेल या जल जेट पंप से जुड़ा होता है। एक मजबूत सील बनाने के लिए विभिन्न भागों के जंक्शनों को पैराफिन से भर दिया जाता है। फ़िल्टर किए गए तरल को उपकरण के सिलेंडर में डाला जाता है और पंप चालू कर दिया जाता है, जिससे रिसीवर में एक वैक्यूम बन जाता है। परिणामी दबाव अंतर के परिणामस्वरूप, फ़िल्टर किया गया तरल फ़िल्टर के छिद्रों से होकर रिसीवर में चला जाता है, और रोगाणु फ़िल्टर की सतह पर बने रहते हैं।

उपयोग से पहले, झिल्ली फिल्टर को आसुत जल में उबालकर निष्फल किया जाता है। फिल्टर को मुड़ने से रोकने के लिए, उन्हें पहले आसुत जल में रखा जाता है, 50-60 डिग्री सेल्सियस के तापमान तक गर्म किया जाता है, और 30 मिनट तक कम गर्मी पर उबाला जाता है, पानी को 2-3 बार बदला जाता है। फ़िल्टर होल्डर और रिसीवर को पहले से कीटाणुरहित किया जाता है, और डिवाइस को सड़न रोकने वाली परिस्थितियों में लगाया जाता है। धातु की जाली पर झिल्ली फिल्टर को फटने से बचाने के लिए, इसके नीचे स्टेराइल फिल्टर पेपर के मग रखें। फिर, चिकनी युक्तियों के साथ बाँझ चिमटी का उपयोग करके, स्टेरलाइज़र से झिल्ली फ़िल्टर लें और इसे चमकदार सतह के साथ समर्थन ग्रिड पर रखें।

आटोक्लेव में निष्फल मोमबत्तियाँ (चैम्बरलेंट) एक रबर ट्यूब के माध्यम से एक रिसीवर से जुड़ी होती हैं और फ़िल्टर किए गए तरल के साथ एक बर्तन (आमतौर पर एक सिलेंडर) में उतारी जाती हैं। निस्पंदन एक वैक्यूम पंप का उपयोग करके होता है। एक बाँझ निस्पंद रिसीवर में प्रवेश करता है, और बैक्टीरिया मोमबत्ती के छिद्रों द्वारा बनाए रखा जाता है।

मेम्ब्रेन और एस्बेस्टस फिल्टर एकल उपयोग के लिए डिज़ाइन किए गए हैं। उपयोग के बाद, मोमबत्तियों को नल के पानी में उबाला जाता है और फिर मफल भट्टी में कैलक्लाइंड किया जाता है।

बाद के उपयोग से पहले, मोमबत्तियों की अखंडता की जाँच की जाती है। मोमबत्ती को पानी के एक बर्तन में उतारा जाता है और उसमें से हवा प्रवाहित की जाती है। यदि मोमबत्ती की सतह पर हवा के बुलबुले दिखाई देते हैं, तो इसका मतलब है कि मोमबत्ती में दरारें पड़ गई हैं और यह अनुपयोगी है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. फ़िल्टर स्टरलाइज़ेशन विधि क्या है? इस विधि से क्या निष्फल किया जाता है?

2. आप कौन से जीवाणु फिल्टर जानते हैं? फ़िल्टरिंग उपकरण कैसे स्थापित किया जाता है, किन शर्तों का पालन किया जाना चाहिए?

रासायनिक विधियाँ

इस प्रकार की नसबंदी का उपयोग सीमित सीमा तक किया जाता है, और यह मुख्य रूप से कल्चर मीडिया और इम्युनोबायोलॉजिकल तैयारियों (टीके और सीरम) के जीवाणु संदूषण को रोकने के लिए कार्य करता है।

क्लोरोफॉर्म, टोल्यूनि और ईथर जैसे पदार्थ अक्सर पोषक मीडिया में जोड़े जाते हैं। यदि माध्यम को इन परिरक्षकों से मुक्त करना आवश्यक हो, तो इसे पानी के स्नान में 56°C पर गर्म किया जाता है (परिरक्षक वाष्पित हो जाते हैं)।

टीकों और सीरम को संरक्षित करने के लिए मेरथिओलेट का उपयोग करें। बोरिक एसिड, फॉर्मेलिन, आदि।

जैविक बंध्याकरण

जैविक नसबंदी एंटीबायोटिक दवाओं के उपयोग पर आधारित है। इस विधि का उपयोग वायरस की खेती के लिए किया जाता है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. क्या है रासायनिक बंध्याकरणऔर इसका उपयोग कब किया जाता है?

2. जैविक बंध्याकरण क्या है?

नसबंदी की मुख्य विधियाँ तालिका में प्रस्तुत की गई हैं। 4.

1 (स्टरलाइज़ेशन अधूरा है: स्टरलाइज़ की गई सामग्री में बीजाणु बने रहते हैं।)

2 (स्टरलाइज़ेशन अधूरा है: वायरस स्टरलाइज़ की गई सामग्री में रह जाते हैं।)

कीटाणुशोधन

सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में, विभिन्न कीटाणुनाशकों का उपयोग किया जाता है: 3-5% फिनोल समाधान, 5-10% लाइसोल समाधान, 1-5% क्लोरैमाइन समाधान, 3-6% हाइड्रोजन पेरोक्साइड समाधान, 1-5% फॉर्मेल्डिहाइड समाधान, कमजोर पड़ने में मर्क्यूरिक क्लोराइड समाधान 1:1000 (0.1%), 70° अल्कोहल, आदि।

खर्च की गई पैथोलॉजिकल सामग्री (मवाद, मल, मूत्र, थूक, रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव) को सीवर में बहाने से पहले कीटाणुरहित किया जाता है। कीटाणुशोधन सूखे ब्लीच या 3-5% क्लोरैमाइन घोल से किया जाता है।

पैथोलॉजिकल सामग्री या सूक्ष्मजीवों की संस्कृतियों से दूषित पिपेट (स्नातक और पाश्चर), ग्लास स्पैटुला, स्लाइड और कवरस्लिप को एक दिन के लिए फिनोल या हाइड्रोजन पेरोक्साइड के 3% समाधान के साथ ग्लास जार में डुबोया जाता है।

संक्रामक सामग्री के साथ काम खत्म करने के बाद, प्रयोगशाला तकनीशियन को इसे कीटाणुनाशक समाधान के साथ इलाज करना चाहिए। कार्यस्थलऔर हाथ. कार्य तालिका की सतह को 3% फिनोल घोल में भिगोए रूई के टुकड़े से पोंछा जाता है। हाथों को 1% क्लोरैमाइन घोल से कीटाणुरहित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक कपास की गेंद या धुंध को कीटाणुनाशक घोल से गीला करें और पहले बाएं हाथ को पोंछें, फिर दाएं हाथ को, और फिर अपने हाथों को गर्म पानी और साबुन से धो लें।

कीटाणुनाशक का चुनाव, उसकी सांद्रता और संपर्क (एक्सपोज़र) की अवधि पर निर्भर करती है जैविक गुणसूक्ष्म जीव और वह वातावरण जिसमें कीटाणुनाशक रोगजनक सूक्ष्मजीवों के संपर्क में आएगा। उदाहरण के लिए, मर्क्यूरिक क्लोराइड, फिनोल और अल्कोहल प्रोटीन सब्सट्रेट्स (मवाद, रक्त, थूक) कीटाणुरहित करने के लिए अनुपयुक्त हैं, क्योंकि उनके प्रभाव में प्रोटीन का जमाव होता है, और जमा हुआ प्रोटीन कीटाणुनाशकों के प्रभाव से सूक्ष्मजीवों की रक्षा करता है।

सूक्ष्मजीवों के बीजाणु रूपों से संक्रमित सामग्री को कीटाणुरहित करते समय, क्लोरैमाइन का 5% घोल, सक्रिय क्लोरैमाइन का 1-2.5% घोल, फॉर्मेलिन का 5-10% घोल और अन्य पदार्थों का उपयोग किया जाता है।

कीटाणुशोधन, जो काम के दौरान पूरे दिन किया जाता है, को वर्तमान कहा जाता है, और काम के अंत में - अंतिम।

कीटाणुनाशक और उनसे कार्यशील समाधान तैयार करने के निर्देश. चूने का क्लोराइड एक सफेद, गांठदार पाउडर है जिसमें क्लोरीन की तीखी गंध होती है; यह पानी में पूरी तरह से नहीं घुलता है। जीवाणुनाशक प्रभाव सक्रिय क्लोरीन की सामग्री पर निर्भर करता है, जिसकी मात्रा 28 से 36% तक होती है। 25% से कम सक्रिय क्लोरीन युक्त क्लोरीन कीटाणुशोधन के लिए अनुपयुक्त है।

यदि अनुचित तरीके से संग्रहीत किया जाता है, तो ब्लीच विघटित हो जाता है और अपना कुछ सक्रिय क्लोरीन खो देता है। गर्मी, नमी, धूप से अपघटन को बढ़ावा मिलता है, इसलिए भंडारण करें विरंजित करनाइसे सूखी, अंधेरी जगह, कसकर बंद कंटेनर में रखा जाना चाहिए।

सूखी ब्लीच का उपयोग मानव और पशु स्राव कीटाणुरहित करने के लिए किया जाता है (200 ग्राम प्रति 1 लीटर मल और 10 ग्राम प्रति 1 लीटर मूत्र की दर से)।

मूल 10% स्पष्ट ब्लीच समाधान तैयार करना। 1 किलो सूखा ब्लीच लें, इसे इनेमल बाल्टी में रखें और पीस लें। फिर डालो ठंडा पानी 10 लीटर की मात्रा में, अच्छी तरह मिलाएं, ढक्कन के साथ बंद करें और एक दिन के लिए ठंडे स्थान पर छोड़ दें। इसके बाद, परिणामी 10% स्पष्ट समाधान को सावधानीपूर्वक सूखाया जाता है और धुंध की कई परतों के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है या एक मोटे कपड़े के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। गहरे रंग की कांच की बोतलों में, लकड़ी के डाट से बंद करके, ठंडे स्थान पर 10 दिनों से अधिक न रखें। उपयोग से तुरंत पहले स्टॉक समाधान से आवश्यक एकाग्रता के कार्यशील समाधान तैयार किए जाते हैं। 0.2-10% स्पष्ट ब्लीच समाधान तैयार करने के लिए आवश्यक मूल समाधान की मात्रा तालिका में दी गई है। 5.

0.2 से 10% तक स्पष्ट ब्लीच समाधानों की सांद्रता का चयन कीटाणुरहित वस्तु की प्रकृति और रोगज़नक़ के प्रतिरोध के आधार पर किया जाता है।

क्लोरैमाइन - क्रिस्टलीय पदार्थसफेद या पीले रंग का, इसमें 24-28% सक्रिय क्लोरीन होता है। यह कमरे के तापमान पर पानी में अच्छी तरह से घुल जाता है, इसलिए कीटाणुशोधन से तुरंत पहले घोल तैयार किया जाता है। 0.2-10% क्लोरैमाइन घोल का प्रयोग करें। घोल की प्रतिशत सांद्रता और प्रति 1 और 10 लीटर ग्राम में क्लोरैमाइन की मात्रा के बीच संबंध तालिका में दिया गया है। 6.

एक कांच या इनेमल कंटेनर में क्लोरैमाइन घोलें। ग्राउंड-इन स्टॉपर के साथ गहरे कांच के कंटेनरों में क्लोरैमाइन समाधानों को संग्रहीत करते समय, उनकी गतिविधि 15 दिनों तक बनी रहती है।

सक्रिय क्लोरैमाइन. क्लोरैमाइन के कीटाणुनाशक गुणों को इसमें 1:1 या 1:2 के अनुपात में एक एक्टिवेटर जोड़कर बढ़ाया जाता है। उत्प्रेरक के रूप में अमोनियम यौगिकों का उपयोग किया जाता है - अमोनियम क्लोराइड, सल्फेट, अमोनियम नाइट्रेट। सक्रिय क्लोरैमाइन का उपयोग 0.5, 1 और 2.5% की सांद्रता में किया जाता है। इन्हें उपयोग से तुरंत पहले तैयार किया जाता है। क्लोरैमाइन और अमोनियम नमक को अलग-अलग तौला जाता है। सबसे पहले, क्लोरैमाइन को पानी में घोला जाता है, और फिर एक एक्टिवेटर मिलाया जाता है।

पारंपरिक क्लोरैमाइन समाधानों की तुलना में सक्रिय क्लोरैमाइन समाधानों का लाभ यह है कि एक एक्टिवेटर जोड़ने से सक्रिय क्लोरीन की रिहाई तेज हो जाती है। इसलिए, दवा का न केवल सूक्ष्मजीवों के वानस्पतिक रूपों पर, बल्कि उनके बीजाणुओं पर भी हानिकारक प्रभाव पड़ता है। सक्रिय क्लोरैमाइन का उपयोग कम सांद्रता में और कम एक्सपोज़र के साथ किया जाता है।

फिनोल (कार्बोलिक एसिड) एक रंगहीन, सुई के आकार का क्रिस्टल है जिसमें तीखी, विशिष्ट गंध होती है। प्रकाश, हवा और नमी के संपर्क में आने पर, क्रिस्टल लाल-लाल रंग प्राप्त कर लेते हैं। बंद अंधेरे कांच के जार में और रोशनी से सुरक्षित जगह पर स्टोर करें।

फिनोल पानी, अल्कोहल, ईथर और वसायुक्त तेलों में घुलनशील है। अत्यधिक आर्द्रताग्राही होने के कारण, यह पर्यावरण से नमी को अवशोषित करता है और तरल बन जाता है। तरल कार्बोलिक एसिड में 90% क्रिस्टलीय फिनोल और 10% पानी होता है।

तालिका में दी गई योजना के अनुसार क्रिस्टलीय फिनोल और तरल कार्बोलिक एसिड से तैयार कार्बोलिक एसिड के 3-5% जलीय घोल का उपयोग करें। 7. गर्म पानी (40-50°C) में घोलने पर फिनोल की सक्रियता बढ़ जाती है।

ध्यान! क्रिस्टलीय फिनोल या तरल कार्बोलिक एसिड, अगर यह त्वचा पर लग जाए, तो जलन पैदा कर सकता है, और उच्च सांद्रता में - गंभीर जलन हो सकती है। इसलिए, कार्बोलिक एसिड को बहुत सावधानी से संभालना चाहिए। समाधान बनाते समय, आपको रबर के दस्ताने पहनने चाहिए या चरम मामलों में, अपने हाथों को वैसलीन से चिकना करना चाहिए।

यदि कार्बोलिक एसिड आपकी त्वचा पर लग जाए, तो इसे तुरंत गर्म पानी और साबुन या 40° एथिल अल्कोहल से धो लें।

टिप्पणी। फिनोल का कीटाणुनाशक घोल तैयार करने के लिए तरल कार्बोलिक एसिड का उपयोग करना अधिक सुविधाजनक और सुरक्षित है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में कौन से कीटाणुनाशकों का उपयोग किया जाता है?

2. वर्णन करें उपस्थितिऔर ब्लीच, क्लोरैमाइन, फिनोल के मूल गुण।

3. सूक्ष्मजीवों के बीजाणु रूपों से संक्रमित सामग्री को कीटाणुरहित करने के लिए कीटाणुनाशकों के कौन से समाधान का उपयोग किया जाता है?

व्यायाम

स्पष्टीकृत ब्लीच का 5% कार्यशील घोल 2 लीटर तैयार करें; 3% क्लोरैमाइन घोल का 500 मिली, 1% सक्रिय क्लोरैमाइन घोल का 300 मिली।

ध्यान! इससे पहले कि आप समाधान तैयार करना शुरू करें, गणना करें।