oven pasteur. Sterilisasi suhu tinggi. Metode sterilisasi fisik

Kalsinasi terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang dapat diandalkan, namun penggunaannya terbatas karena kualitas barangnya menurun. Loop bakteriologis disterilkan dengan cara ini.

Sterilisasi kering demam. Dilakukan dalam oven Pasteur (tendon ------

oven) pada suhu 160-170°C selama 1 jam. Cara ini digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium, pipet yang dibungkus kertas, dan tabung reaksi yang ditutup dengan sumbat kapas. Pada suhu di atas 170°C, kertas, kapas, dan kain kasa mulai hangus.

Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Metode sterilisasi paling universal. Itu dilakukan dalam autoklaf - alat sterilisasi air-uap. Prinsip pengoperasian autoklaf didasarkan pada ketergantungan titik didih air terhadap tekanan.

Autoklaf adalah kuali logam berdinding ganda dengan tutup yang tertutup rapat. Air dituangkan ke bagian bawah autoklaf, benda yang akan disterilkan ditempatkan di ruang kerja, dan tutupnya ditutup tanpa terlebih dahulu mengencangkannya. Nyalakan api dan didihkan air. Uap yang dihasilkan menggantikan udara dari ruang kerja, yang keluar melalui katup keluar yang terbuka. Ketika semua udara telah dipindahkan dan aliran uap terus menerus keluar dari keran, keran ditutup dan tutupnya ditutup rapat. Uap dibawa ke tekanan yang diinginkan di bawah kendali pengukur tekanan. Suhu uap bergantung pada tekanan: pada tekanan atmosfer normal, jarum pengukur tekanan berada pada 0 atm. - suhu uap 100°C, pada 0,5 atm. - 112°C, pada 1 atm. -121°C, pada 1,5 atm. - 127°C, pada 2 atm. - 134°C. Di akhir sterilisasi, matikan autoklaf, tunggu hingga tekanan turun, keluarkan uap sedikit demi sedikit dan buka tutupnya. Biasanya pada tekanan 1 atm. dalam waktu 20-40 menit, media nutrisi sederhana dan larutan yang tidak mengandung protein dan karbohidrat disterilkan, berpakaian, linen. Bahan yang akan disterilkan harus dapat ditembus uap. Saat mensterilkan bahan dalam volume besar ( bahan bedah) waktu ditingkatkan menjadi 2 jam. Pada tekanan 2 atm. desinfeksi bahan patologis dan kultur mikroba bekas.

Media nutrisi yang mengandung gula tidak dapat disterilkan pada suhu 1 atm, karena menjadi karamel, sehingga dilakukan sterilisasi fraksional dengan uap yang mengalir, atau diautoklaf pada 0,5 atm.

Untuk mengontrol rezim sterilisasi, metode biologis dan fisik digunakan. Metode biologis didasarkan pada fakta bahwa spora Bacillus stearothermophilus ditempatkan bersamaan dengan bahan yang akan disterilkan, yang mati pada suhu 121°C dalam 15 menit. Setelah sterilisasi, spora tidak boleh tumbuh pada media nutrisi. Metode fisik didasarkan pada penggunaan zat yang mempunyai titik leleh tertentu, misalnya belerang (119°C), asam benzoat (120°C). Tabung tertutup berisi bahan campuran pewarna kering (fuchsin) dimasukkan ke dalam autoklaf bersama dengan bahan yang akan disterilkan. Jika suhu dalam autoklaf cukup, zat akan meleleh dan mengubah warna pewarna.

Sterilisasi yang dapat mengalir Uap dilakukan dalam peralatan Koch atau dalam autoklaf dengan penutup dibuka dan katup keluar terbuka. Air dalam peralatan dipanaskan hingga 100°C. Uap yang dihasilkan melewati bahan yang tertanam dan mensterilkannya. Perlakuan tunggal pada suhu 100°C tidak membunuh spora. Oleh karena itu, metode sterilisasi fraksional digunakan - 3 hari berturut-turut selama 30 menit, di sela-sela pendiaman selama sehari di suhu kamar. Pemanasan pada suhu 100°C menyebabkan aktivasi termal pada spora, sehingga spora tersebut berkecambah menjadi bentuk vegetatif hingga keesokan harinya dan mati pada pemanasan kedua dan ketiga. Akibatnya, hanya media nutrisi yang bisa disterilkan dengan uap yang mengalir, karena Agar spora dapat berkecambah, diperlukan adanya nutrisi.

Ini adalah silinder logam berdinding ganda yang bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam. Itu tertutup rapat dengan penutup besar menggunakan beberapa sekrup. Dilengkapi dengan pengukur tekanan dengan katup pengaman dan katup uap.

Sebelum sterilisasi, air suling dituangkan ke dalam autoklaf melalui corong dengan gelas takar air sampai garis yang tertera pada wadah. Bahan untuk sterilisasi dimasukkan ke dalam ruang sterilisasi, ditutup rapat dengan penutup, disekrup dan sumber pemanas dihidupkan. Dalam hal ini, katup uap dibiarkan terbuka. Uap yang dihasilkan selama perebusan melewati antara dinding autoklaf dan masuk ke dalam ruangan melalui lubang di dinding bagian dalam. Saat dipanaskan, udara pertama-tama keluar dari autoklaf melalui katup uap, lalu uap. Pelepasan aliran uap kering yang terus menerus menunjukkan perpindahan udara sepenuhnya dari autoklaf: keran ditutup, dan sejak saat itu tekanan dalam autoklaf mulai meningkat secara bertahap, jarum pada pengukur tekanan naik. Awal sterilisasi dianggap saat jarum pengukur tekanan mencapai tekanan yang diinginkan.

Gambar.3

Pembacaan pengukur tekanan sesuai dengan suhu tertentu uap dalam autoklaf: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.

Bahan dalam autoklaf paling sering disterilkan pada 0,1 MPa selama 20-30 menit. Di akhir sterilisasi, matikan sumber pemanas (jarum pengukur tekanan secara bertahap mencapai nol). Setelah ini, buka katup uap dan keluarkan sisa uap. Kemudian dengan hati-hati buka tutupnya dan buka. Setelah benar-benar dingin, keluarkan bahan yang telah disterilkan.

Autoklaf dapat digunakan untuk mensterilkan piring, peralatan, media kultur (kecuali agar-agar dan media yang mengandung karbohidrat), dressing, dll. Saat bekerja, aturan keselamatan harus dipatuhi. Orang yang memiliki sertifikat hak penggunaan autoklaf diperbolehkan bekerja. Kemudahan servis autoklaf diperiksa oleh inspektorat ketel uap.

Peralatan Koch (Gbr. 4) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi dengan bahan (linoleum, asbes) yang tidak menghantarkan panas dengan baik. Air dituangkan ke bagian bawah dan bahan sterilisasi ditempatkan di atas dudukan. Perangkat ditutup dengan penutup berbentuk kerucut, yang memiliki lubang untuk termometer dan saluran keluar uap. Di bagian bawah terdapat keran untuk mengalirkan air. Sterilisasi dilakukan dengan uap yang mengalir pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Dalam mode ini, sel-sel vegetatif mikroba pembentuk spora dan non-pembentuk spora mati. Sterilisasi fraksional (tiga kali) selama 30-60 menit selama tiga hari dengan interval 18-20 jam memungkinkan Anda menciptakan kondisi untuk perkecambahan spora ke dalam sel vegetatif dan membuangnya. Dalam interval waktu antara sterilisasi, spora berkecambah dan mati selama pemanasan berikutnya. Peralatan Koch mensterilkan bahan-bahan yang tidak tahan suhu di atas 100 °C (agar-agar, susu, media karbohidrat, dll.).

Media protein dan serum darah yang tidak tahan suhu 100 °C disterilkan secara fraksional pada suhu 56-58 °C dalam penangas air.

Lemari pengering(Oven Pasteur) (Gbr. 5) adalah lemari logam berdinding ganda yang dilapisi asbes di atasnya. Dinding atas memiliki lubang untuk termometer dan ventilasi. Udara panas naik dari bawah di antara dinding dan melalui bukaan atas masuk ke lemari, tempat bahan yang akan disterilkan diletakkan di rak. Sterilisasi dilakukan dengan panas kering pada suhu 150 °C selama 2 jam, pada suhu 165-170 °C - 45 menit, pada suhu 180 °C - 15 menit. Peralatan gelas disterilkan dalam oven Pasteur sumber pemanas dan dibuka hanya setelah pendinginan sempurna.

Filter bakteri digunakan untuk mensterilkan cairan tanpa pemanasan. Ini termasuk Chamberlant, lilin Berkefeld dan filter asbes Seitz (pelat).

Filter lilin (Gbr. 6) adalah silinder berongga yang terbuat dari bahan berpori halus: kaolin dengan campuran pasir kuarsa(Lilin Chamberlant) dan tanah infusorial (Lilin Berkefeld). Lilin Chamberlant punya berbagai ukuran pori-pori yang dilalui mikroba. Lilin yang dapat dilewati bakteri besar ditandai dengan huruf L9, L1(bis), L3, sedang - L5, L7, terkecil - L9, L11 , L13 Lilin Berkefeld ditentukan berdasarkan porositas W, N, V(lilin merk U mempunyai pori-pori paling besar).

Filter Seitz adalah pelat asbes dengan berbagai ukuran. Saat memasang perangkat untuk sterilisasi, pelat ditempatkan pada jaring di antaranya cakram logam(dengan lubang di tengahnya), yang ditekan rapat dengan sekrup. Filter yang sudah terpasang dimasukkan melalui sumbat ke dalam labu dengan saluran keluar samping (labu Bunsen) dan tabung karet, dibungkus kertas dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 120 °C selama 20-30 menit.

Untuk menyaring bahan, buatlah ruang hampa di dalam labu Bunsen dengan menyambungkan tabung karet yang berisi minyak yang telah dijernihkan ke dalamnya. pompa tangan Komovsky atau pompa vakum listrik.

Penyelesaian pekerjaan. Mikroba dibudidayakan pada kondisi suhu optimal. Untuk tujuan ini, laboratorium menggunakan termostat udara atau air.

(Gbr. 7) adalah lemari logam dengan dinding ganda, di antaranya terdapat lapisan air atau udara. Bagian luar termostat dilapisi dengan bahan yang menghantarkan panas dengan buruk (asbes, linoleum).

Beras. 4, 5, 6.

Di dalam termostat terdapat rak untuk menempatkan benih mikroorganisme yang tumbuh. Suhu konstan dalam termostat dipertahankan menggunakan termostat, yang terpasang pada penutup atas termostat. Perangkat termostat didasarkan pada prinsip ekspansi linier zat. Termoregulasi adalah paduan dua logam dengan koefisien muai panas berbeda (kuningan, seng) atau “bantalan” logam yang diisi dengan alkohol, campuran alkohol dan eter, merkuri atau zat lain yang mengubah volumenya pada suhu tertentu. Ketika termostat memanas di atas norma yang ditetapkan, logam memuai, kontak terbuka dan aliran panas lebih lanjut secara otomatis tertunda. Setelah suhu turun, lampu menyala listrik dan aliran panas berlanjut.

Dalam praktek laboratorium, ketika bekerja dengan mikroorganisme, perlu selalu dilakukan tindakan untuk memastikan bahwa piring, media kultur, dan instrumen logam yang digunakan selama bekerja tidak mengandung mikroba. Untuk tujuan ini, metode sterilisasi berikut digunakan:

Sterilisasi dengan uap super panas di bawah tekanan;

Sterilisasi dengan uap yang mengalir;

sterilisasi udara panas;

Disinfeksi.

Metode sterilisasi terbaik adalah dengan mengolah berbagai benda dengan uap super panas perangkat khusus- autoklaf.

Autoklaf dan sterilisasi uap super panas di bawah tekanan

Autoklaf adalah ketel logam (baja, besi cor atau tembaga) dengan dinding ganda dan penutup besar yang ditutup rapat dengan baut dan paking karet. Tergantung pada sistem pemanasnya, autoklaf bisa berupa uap, listrik, dan api (Gbr. 42). Menghasilkan uap bertekanan tinggi dan panas berlebih pada suhu 115-120°C dalam autoklaf memungkinkan Anda menghancurkan sel vegetatif dan spora mikroba dalam waktu 20-30 menit.

Dalam autoklaf, semua benda yang tidak rusak pada suhu tinggi disterilkan: berbagai cairan (air, media nutrisi yang tidak mengandung komponen karbohidrat), barang pecah belah, instrumen logam, kapas, kain kasa, kertas, dll.

Dalam kasus di mana beberapa zat tidak tahan terhadap aturan sterilisasi normal dalam autoklaf (khususnya, media nutrisi yang mengandung gula), zat tersebut disterilkan dalam autoklaf pada suhu 112°C selama 20 menit, serta dalam kondisi yang lebih ringan.

Pada tekanan tinggi uap super panas dalam autoklaf, suhu pemanasan pun meningkat; Hal ini menyebabkan karamelisasi gula yang ditambahkan pada beberapa media kultur, sehingga media tersebut tidak cocok untuk menentukan sifat fisiologis mikroba.

Tekanan di dalam autoklaf diukur menggunakan alat pengukur tekanan yang dipasang pada tutup atau badan autoklaf. Jika tekanan meningkat secara berlebihan, katup pengaman diaktifkan secara otomatis, yang terletak, tergantung pada desainnya, baik pada tutup atau pada permukaan samping dinding autoklaf. Semburan uap yang keluar dari katup pengaman dengan peluit memperingatkan perlunya menghentikan pemanasan. Jika pemanasan tidak dihentikan, autoklaf bisa meledak.

Termometer kadang-kadang ditempatkan di kantong khusus pada tutup autoklaf, yang digunakan untuk mengukur suhu sterilisasi. Ada dudukan di dalam autoklaf, di mana air dituangkan melalui tabung dengan corong yang terletak di luar autoklaf. Selain itu, autoklaf dilengkapi dengan keran untuk mengeluarkan uap dan udara serta keran untuk mengeluarkan air.

Aturan penanganan autoklaf selama sterilisasi adalah sebagai berikut: alat diisi air melalui corong dan tabung yang ketinggiannya harus di bawah dudukan. Barang-barang yang akan disterilkan ditempatkan dalam botol logam khusus dan dimasukkan ke dalam autoklaf. Tutup autoklaf disekrup.

Dengan membuka keran agar uap dan udara keluar, pemanasan dimulai. Segera setelah air mendidih, uap yang dihasilkan mulai menggantikan udara dari autoklaf. Katup keluar uap tetap terbuka sampai uap kering mengalir keluar secara terus menerus. Hal ini menunjukkan hilangnya udara sepenuhnya dari autoklaf. Kemudian keran ditutup. Uap, yang terakumulasi selama pemanasan lebih lanjut dalam jumlah yang semakin besar, meningkatkan tekanan dalam autoklaf, dan pada saat yang sama suhu. Saat bekerja dengan autoklaf, Anda dapat dipandu oleh tabel hubungan antara tekanan uap dan suhunya (Tabel 4).

Setelah jarum pengukur tekanan mencapai indikator yang diperlukan tekanan (suhu dalam autoklaf akan sesuai dengan suhu sterilisasi yang diterima), sesuaikan pemanasan autoklaf sehingga tekanan tetap pada tingkat yang sama selama waktu yang diperlukan. Di akhir sterilisasi, hentikan pemanasan. Ketika suhu dalam autoklaf turun dan jarum pengukur tekanan turun menjadi nol (tekanan dalam autoklaf sama dengan tekanan atmosfer), buka katup pelepas uap dengan hati-hati, keluarkan uap dan, buka tutup autoklaf, keluarkan bahan. Tidak mungkin membuka katup pelepas uap sebelum waktunya, sebelum tekanan dalam autoklaf turun. Penurunan tekanan yang tajam dalam ruang autoklaf akan menyebabkan cairan mendidih dengan hebat yang dipanaskan hingga suhu lebih tinggi dari 100 °C, yaitu. di atas titik didih pada tekanan atmosfer normal. Cairan yang sangat mendidih akan membasahi atau bahkan mendorong sumbat kapas keluar dari wadah - pekerjaan akan sia-sia. Media nutrisi akan rusak, karena mikroflora yang berasal dari udara mudah berkembang pada sumbat basah, menembus ke dalam dan menginfeksi media. Selain itu, membuka autoklaf dengan tekanan tinggi juga berbahaya bagi pekerja.

Namun, segera setelah jarum pengukur tekanan berhenti di angka nol, autoklaf harus segera dibuka, jika tidak, kondensasi akan mulai mengalir ke sumbat dan juga menyebabkannya menjadi basah. Untuk menghindari basahnya sumbat dengan air kondensasi, sumbat ditutup dengan kertas sebelum disterilkan.

Bahan yang ditempatkan dalam autoklaf akan disterilkan dengan baik dalam waktu 20-30 menit jika suhu dipertahankan pada 120°C, yang sesuai dengan tekanan 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) atau pada pengukur tekanan 1 atm di atas normal. Autoklaf juga berhasil digunakan untuk mensterilkan media dengan uap yang mengalir; dalam hal ini, tutup autoklaf tidak disekrup.

Ketel Koch dan sterilisasi uap mengalir

Ketel Koch adalah silinder yang terbuat dari lembaran galvanis atau tembaga dengan dinding ganda dan penutup berbentuk helm berbentuk kerucut (Gbr. 43). Terdapat lubang di tengah tutupnya untuk termometer. Bagian luar boiler Koch dilapisi dengan lapisan bahan isolasi panas: asbes, linoleum, dll.

Sebuah partisi (dudukan) ditempatkan di dalam ketel, membagi ruang internal ketel menjadi dua bagian: atas dan bawah. Bagian bawah diisi dengan air, yang ketinggiannya ditentukan oleh gelas meteran air: air tidak boleh menutupi bagian atas dudukan. Barang-barang yang akan disterilkan ditempatkan di bagian atas ketel dalam ember berkisi yang diletakkan satu di atas yang lain. Setelah menutup ketel dengan penutup, mereka mulai memanaskan air di dalamnya. Awal sterilisasi dianggap saat termometer menunjukkan 98-100°C. Dengan tidak adanya termometer, permulaan sterilisasi dianggap sebagai saat uap mulai keluar dengan kuat dari lubang di tutup ketel. Dengan demikian, benda-benda yang akan disterilkan akan selalu berada dalam aliran uap yang mengalir selama boiler beroperasi.

Metode sterilisasi dengan uap yang mengalir, karena kesederhanaan dan ketersediaannya, banyak digunakan dalam praktek laboratorium. Uap yang mengalir terutama digunakan untuk mensterilkan media nutrisi yang sifatnya berubah ketika dipanaskan di atas 100°C: protein, karbohidrat, dan gelatin. Untuk lingkungan seperti ini, metode sterilisasi uap mengalir paling cocok.

Kerugian dari metode sterilisasi uap mengalir adalah durasinya, karena untuk mensterilkan media secara menyeluruh perlu dilakukan pemanasan berulang kali dalam boiler untuk waktu tertentu - dari 20 menit hingga 1,5 jam (rata-rata 30-45 menit) tergantung pada volume cairan dengan interval 24 jam. Disarankan untuk menjaga seluruh periode waktu antara pemanasan media dalam termostat pada 25-30 °C.

Pemanasan tunggal dalam ketel Koch hanya menyebabkan kematian sel mikroba vegetatif, tetapi spora dapat bertahan hidup. Jika media nutrisi yang disterilkan disimpan dalam kondisi yang baik (pada suhu kamar, atau bahkan lebih baik lagi dalam termostat), beberapa spora yang tersisa akan berkecambah dan berubah menjadi sel vegetatif keesokan harinya. Pemanasan yang berulang-ulang akan menyebabkan kematian sel-sel yang baru berkembang ini. Terakhir, pemanasan ketiga setelah seharian menyimpan media dalam termostat akan memastikan sterilitas total. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. DI DALAM kerja praktek Daripada sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam ketel Koch, sterilisasi konvensional dalam autoklaf sering digunakan pada suhu 112 °C dengan tekanan balik 0,5 atm selama 15-20 menit.

Kabinet pengering dan sterilisasi udara panas

Dalam praktik laboratorium, untuk mensterilkan peralatan gelas mikrobiologi diperlukan lemari pengering atau biasa disebut oven Pasteur. Prinsip desain lemari pengering dan oven Pasteur adalah sama. Kompor dibuat saja bentuk persegi panjang, dan lemari pengering tidak hanya berbentuk persegi panjang, tetapi juga silinder (Gbr. 44 dan 45). Pada alat tersebut, sterilisasi dilakukan dengan udara panas (panas kering) pada suhu 160 °C selama 1 jam atau pada suhu 150 °C selama 2 jam.

Baik oven Pasteur maupun oven pengering memiliki bagian dalam berongga dengan dinding ganda, dengan pintu ganda yang tertutup rapat. Di luar, mereka ditutupi dengan lapisan asbes untuk isolasi termal. Bersirkulasi di antara dinding udara panas, pemanasannya dilakukan dengan spiral listrik atau pembakar gas. Di dalam kabinet terdapat beberapa (biasanya dua atau tiga) rak berlubang. Ada dua bukaan di bagian atas kabinet: satu untuk termometer, dan satu lagi untuk ventilasi. Lemari pengering listrik adalah yang paling nyaman.

DI DALAM lemari pengering Desain terbaru menyediakan empat tahap pemanasan, yang dapat diaktifkan dengan pengatur khusus yang ditempatkan di dinding samping kabinet. Tingkat pemanasan yang diinginkan dicapai dengan menyalakan satu, dua, tiga atau keempatnya spiral listrik, dan urutan menyalakan spiral bisa apa saja.

Selain peralatan gelas, Anda dapat mensterilkan kain kasa dan kapas di lemari pengering, meskipun lebih baik mengolahnya dalam autoklaf, karena akan menguning pada suhu 160 °C. Produk karet tidak dapat disterilkan dalam lemari pengering, karena tidak tahan suhu tinggi - menjadi rapuh dan rusak. Cairan mendidih pada suhu 150-160 °C dan mengubah komposisi kimianya.

Untuk menghindari kontaminasi lebih lanjut pada barang-barang yang disterilkan oleh mikroba dari udara, barang-barang tersebut dibungkus dengan kertas sebelum disterilkan. Cawan petri dibungkus dengan kertas masing-masing 2 lembar, sehingga tidak ada celah pada pembungkusnya. Tabung kaca dan pipet juga dibungkus dengan kertas, mula-mula masing-masing terpisah, kemudian dalam kemasan berisi 10-20 lembar. Pembungkusan tabung dan pipet harus sangat hati-hati untuk melindunginya sepenuhnya permukaan luar dari komunikasi dengan udara. Sebelum sterilisasi dengan udara panas, labu, tabung reaksi, botol ditutup dengan sumbat kapas dan tutup kertas.

Jangan biarkan suhu di dalam lemari pengering melebihi 170 °C, karena pada suhu ini kapas akan berubah warna menjadi coklat, dan pembungkus kertas menjadi rapuh bahkan hangus. Awal sterilisasi dianggap saat termometer menunjukkan 150-160 °C. Setelah waktu sterilisasi yang diperlukan berlalu, pemanasan dihentikan. Untuk melindungi piring agar tidak retak, Anda hanya perlu mensterilkan piring kering dan membuka lemari setelah sterilisasi hanya jika suhu di dalamnya turun hingga 50-70 °C. Barang-barang laboratorium kecil, seperti loop platinum, jarum, pinset, gunting, dll., dapat disterilkan hanya dengan mengkalsinasinya di atas nyala api kompor gas (atau lampu alkohol).

Disinfeksi

Disinfeksi di laboratorium mikrobiologi harus sering dilakukan. Disinfektan yang paling umum digunakan adalah sebagai berikut: larutan asam karbol 3-5% dan larutan fenol lain yang lebih tinggi, larutan 50-70% etil alkohol, konsentrasi butil alkohol yang sama, larutan formaldehida 4%, larutan kloroform dan toluena 1-2%, larutan kloramin 0,5%, dll.

Di laboratorium mikrobiologi pabrik pengalengan, permukaan meja, piring, lantai, dan dinding tempat didesinfeksi. Untuk mendisinfeksi permukaan meja, Anda tidak hanya dapat menggunakan larutan etil alkohol, tetapi juga larutan asam karbol.

Disinfeksi perangkat saluran pembuangan di pabrik pengalengan dan lainnya perusahaan makanan diproduksi oleh larutan pemutih 5-10%. Untuk desinfeksi sirkulasi wadah kaca digunakan di pabrik pengalengan air klorin, mengandung setidaknya 100 mg klorin aktif per liter. Untuk menyiapkan larutan seperti itu, ambil pemutih dan campur dengan sedikit air sampai diperoleh massa yang kental. seperti susu. Campuran ini ditambahkan ke dalam air, diaduk rata dan dibiarkan selama sehari. Bubuk pemutih bereaksi membentuk kalsium oksida hidrat - Ca(OH)2 - dan klorin aktif. Ca(OH)2 mengendap di dasar, larutan di atas sedimen setelah diklarifikasi menjadi transparan dan berwarna kehijauan. Perendaman wadah dalam larutan ini berlangsung 10 menit. Setelah klorinasi, wadah harus dicuci bersih dengan air mengalir.

Sterilisasi panas kering dilakukan di oven panas kering(oven pasteur). Panas kering mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Itu dimasukkan secara longgar ke dalam oven agar bahan memanas secara merata. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas listrik dan atur suhu menjadi 160-165 0 C dan sterilkan selama 1 jam. Di akhir sterilisasi, matikan api, tetapi jangan buka pintu lemari sampai oven menjadi dingin (jika tidak udara dingin akan menyebabkan retakan pada piring). Mode sterilisasi: 160°C - 60 menit, 180°C - 15 menit, 200°C - 5 menit. Cairan, media kultur, karet, dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering.

Sterilisasi uap bertekanan pembalut, linen bedah, instrumen bedah, media kultur, peralatan gelas laboratorium, bahan yang terinfeksi, dan larutan injeksi menjadi sasaran. Bahan tersebut ditempatkan dalam wadah (kotak). Bantalan kain ditempatkan di bagian bawah bix untuk menyerap kelembapan setelah sterilisasi. Sterilitas bahan dijaga selama 3 hari. Bahan yang terinfeksi dalam piring dan tabung reaksi disterilkan dalam wadah logam dengan penutup.

Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan dalam autoklaf. Dengan satu kali pengobatan, bakteri baik vegetatif maupun spora akan mati. Uap bertekanan mensterilkan media nutrisi, kecuali media yang mengandung protein asli, cairan, dan perangkat dengan bagian karet. Media sederhana (MPA, MPB) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm). Media yang mengandung protein dan karbohidrat asli tidak dapat disterilkan pada suhu ini, karena merupakan zat yang mudah diubah dengan pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan secara fraksional pada suhu 100 0 C atau dalam autoklaf pada suhu 112 0 C (5 atm) selama 10-15 menit. Berbagai cairan, peralatan dengan selang karet, sumbat, lilin bakteri dan filter disterilkan pada suhu 120 0 C (1 atm) selama 20 menit.

Bahan yang terinfeksi (dalam tabung reaksi, gelas) ditempatkan dalam ember atau tangki logam khusus yang berlubang untuk penetrasi uap dan disterilkan pada suhu 126 0 C (1,5 atm) selama 1 jam. Instrumen juga disterilkan setelah bekerja dengan bakteri spora.

Ada 2 mode sterilisasi:

1. Mengalirkan uap dalam autoklaf atau dalam peralatan Koch dengan penutup terbuka dan katup keluar terbuka, ketika efek antibakteri dari uap dimanifestasikan dalam bentuk vegetatif. Beginilah cara mensterilkan media yang mengandung vitamin dan karbohidrat, urea, susu, kentang, dan gelatin. Untuk desterilisasi lengkap digunakan sterilisasi fraksional (pada suhu 100 0 C) selama 20-30 menit selama 3 hari berturut-turut. Ini juga membunuh spora.
2. Sterilisasi uap bertekanan adalah yang paling banyak metode yang efektif perampasan. Bahan ganti dan linen disterilkan pada suhu 1 atm. 15-20 menit, bahan diinfeksi pada 1,5-2 atm selama 20-25 menit.

Sterilisasi

Sterilisasi adalah sterilisasi, yaitu pelepasan benda secara menyeluruh lingkungan dari mikroorganisme dan sporanya.

Sterilisasi dilakukan dengan berbagai cara:

1) fisik (paparan suhu tinggi, sinar UV, penggunaan filter bakteri);

2) bahan kimia (penggunaan berbagai disinfektan, antiseptik);

3) biologis (penggunaan antibiotik).

Dalam praktik laboratorium, metode sterilisasi fisik biasanya digunakan.

Kemungkinan dan kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu ditentukan oleh karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Metode fisik

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah metode sterilisasi di mana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel vegetatif dan spora mikroba mati. Biasanya, loop bakteriologis, spatula, pipet, slide dan kaca penutup, serta instrumen kecil dikalsinasi. Gunting dan pisau bedah tidak boleh disterilkan dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam karena pengaruh api.

Sterilisasi panas kering

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (oven pengering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet menggunakan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan pengatur untuk memastikan suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Cairan (media nutrisi, larutan natrium klorida isotonik, dll.), barang yang terbuat dari karet dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering, karena cairan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis meleleh.

Sterilisasi dengan cara direbus

Perebusan merupakan salah satu cara sterilisasi yang menjamin kemandulan asalkan tidak terdapat spora pada bahan yang disterilkan. Digunakan untuk memproses jarum suntik, instrumen, peralatan kaca dan logam, tabung karet, dll. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan dalam autoklaf. Metode sterilisasi ini didasarkan pada pemaparan bahan yang disterilkan pada uap air jenuh pada tekanan di atas atmosfer. Sebagai hasil dari sterilisasi tersebut, baik mikroorganisme vegetatif maupun spora mati dalam satu kali perawatan. Autoklaf (Gbr. 12) adalah ketel besar, bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam, tertutup rapat dengan penutup, yang disekrup erat ke ketel dengan baut berengsel.

Suhu dan lamanya autoklaf media nutrisi ditentukan oleh komposisinya yang ditentukan dalam resep pembuatan media nutrisi. Misalnya media sederhana (agar pepton daging, kaldu pepton daging) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm). Namun, pada suhu ini tidak mungkin untuk mensterilkan media yang mengandung protein asli, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah dengan pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan secara fraksional pada suhu 100°C atau dalam autoklaf pada suhu 112°C (0,5 atm) selama 10-15 menit. Berbagai cairan, peralatan dengan selang karet, sumbat, lilin bakteri dan filter disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm).

Sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan dalam peralatan Koch. Cara ini digunakan bila benda yang disterilkan berubah pada suhu di atas 100°C. Media nutrisi yang mengandung urea, karbohidrat, susu, kentang, agar-agar, dan lain-lain disterilkan dengan uap yang mengalir.

Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi (untuk mengurangi perpindahan panas) dengan kain kempa atau asbes. Silinder ditutup dengan penutup berbentuk kerucut yang diberi lubang untuk keluarnya uap. Di dalam silinder ada dudukan, setinggi tempat air dituangkan. Sebuah ember berlubang ditempatkan pada dudukan tempat bahan yang akan disterilkan ditempatkan. Peralatan Koch dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Waktu sterilisasi dihitung dari saat uap keluar secara kuat di tepi tutup dan dari saluran keluar uap. Sterilkan selama 30-60 menit. Di akhir sterilisasi, pemanasan dihentikan. Keluarkan ember berisi bahan dari peralatan dan biarkan pada suhu kamar hingga keesokan harinya. Pemanasan dilakukan selama 3 hari berturut-turut pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Selama pemanasan pertama, bentuk mikroba vegetatif mati, sedangkan bentuk spora tetap terjaga. Dalam sehari, spora berhasil berkecambah dan berubah menjadi bentuk vegetatif, yang mati pada hari kedua sterilisasi. Karena ada kemungkinan sebagian spora tidak sempat berkecambah, bahan disimpan selama 24 jam lagi, kemudian dilakukan sterilisasi ketiga. Sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam peralatan Koch tidak diperlukan kontrol khusus, karena indikatornya pengoperasian yang benar Perangkat ini memastikan sterilitas media kultur yang disiapkan. Anda juga dapat mensterilkan dengan uap yang mengalir dalam autoklaf dengan tutupnya dibuka dan katup keluarnya terbuka.

Sterilisasi dengan iradiasi ultraviolet

Sterilisasi dengan sinar UV dilakukan dengan menggunakan instalasi khusus- lampu bakterisida. Sinar UV memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga spora. Iradiasi UV digunakan untuk mensterilkan udara di rumah sakit, ruang operasi, fasilitas penitipan anak, dll. Di laboratorium mikrobiologi, sebuah kotak diberi sinar UV sebelum digunakan.

Metode kimia

Jenis sterilisasi ini digunakan sampai batas tertentu, dan berfungsi terutama untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum).

Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 ° C (pengawet menguap).

Untuk mengawetkan vaksin dan serum, digunakan merthiolate, asam borat, formaldehida, dll.

Sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini digunakan untuk membudidayakan virus.

B. Teknologi terperinci untuk produksi whey sapi di rumah potong hewan di Lyon

Darah telah diambil dari 1.000 hewan, serumnya telah dikemas dalam botol dan didistribusikan secara gratis kepada hampir 20.000 anak.

Dengan demikian ditunjukkan bahwa produksi industri whey di rumah potong hewan sesuai dengan aturan aseptik dan peraturan sanitasi dimungkinkan.

Perusahaan seroterapi tidak memberikan jaminan tambahan - perusahaan tidak berhak melakukan otopsi pada hewan donor.

Teknologi yang digunakan dalam produksi kami mungkin tampak kurang aseptik dibandingkan metode klasik. Namun keuntungannya besar dalam hal kecepatan, karena serum diproduksi sepenuhnya pada hari pengambilan darah.

Jika keadaan saat ini mendorong kami untuk memproduksi serum di rumah potong hewan, jelas bahwa ini adalah tindakan sementara, karena hematogen dan serum obat hanya dapat diproduksi di lembaga khusus.

Seleksi hewan. Di Lyon, Dr. Guier, kepala dokter hewan di rumah jagal, dan Dr. Fontenay, inspektur dokter hewan, sendiri memilih donor dari antara ternak yang dimaksudkan untuk menyediakan daging bagi kota kami. Hewan yang dipilih diberi merek di bahu kanan untuk memudahkan pengendalian lebih lanjut.

Setelah disembelih, organ hewan diperiksa dengan cermat. Diketahui bahwa otopsi adalah metode yang paling dapat diandalkan untuk mendeteksi tuberkulosis.

Operasi selanjutnya akan menunjukkan bahwa serum hewan yang sakit tidak pernah dikonsumsi.

Mengambil darah dari hewan. Di ruang pengambilan darah, sapi jantan donor dipegang erat dengan kuk otomatis.

Dokter hewan mendisinfeksi kulit dengan yodium setinggi leher hewan dan membuat sayatan di area vena jugularis dengan pisau bedah. Tusukan vena dilakukan dengan trocar yang disterilkan dengan cara direbus dalam waktu lama. Setelah darah muncul, selang karet yang diautoklaf dipasang ke trocar untuk menghubungkannya secara langsung dan secara aseptik ke defibrinator.

Teknologi defibrinasi dan metode sterilisasi defibrinator dijelaskan di bawah ini.

Dari setiap hewan diperoleh 8-10 liter darah, yang ditimbang pada timbangan yang terletak di bawah alat.

Metode sterilisasi

Untuk memudahkan pelaksanaan pengendalian sanitasi, setiap defibrinator memiliki label yang berisi data hewan donor.

Perlu dicatat bahwa pengambilan sampel darah dilakukan secara aseptik berkat sirkuit tertutup semua komponen: trocar, selang karet dan defibrinator, yang telah disterilkan sebelumnya.

Label dengan tanggal pengambilan darah menyertai darah yang dikumpulkan dari saat tusukan vena hingga diubah menjadi serum dan disimpan di lemari es.

Defibrasi darah. Di sebagian besar tempat seroterapi, darah yang dituangkan ke dalam pembuluh kaca memisahkan serum di bawah tekanan beban. Dalam kondisi seperti ini, darah yang pertama kali diperoleh dari sapi mengandung sedikit serum (kurang lebih 10%).

Oleh karena itu, pusat seroterapi di Lyon menggunakan teknologi khusus, memberikan 50% whey, dan juga dalam waktu yang lebih singkat.

Dr Merrier mampu mengembangkan metode ini sebagian setelah temuan yang dibuatnya di Royal Institute di Rotterdam dan di Serotherapeutic Institute di Milan.

Setelah darah diperoleh dari lembaga-lembaga ini, darah tersebut didefibrinasi dalam mesin steril yang menyerupai mesin pengaduk.

Dalam waktu 5 menit, darah dikumpulkan dalam wadah yang terlindung dari udara. Waktu defibrasi harus diperhatikan dengan ketat: jika tidak mencukupi, dapat terjadi koagulasi, dan jika terlalu banyak, dapat terjadi hemolisis (akibat pecahnya sel darah merah). Penting untuk menggunakan jam laboratorium yang memungkinkan Anda menandai tepat 15 menit defibrinasi.

Di bagian atas Gambar. Gambar 4 menunjukkan jumlah pengambilan darah sudah mencapai 1000 yang tercatat pada lambang Pusat.

Sentrifugasi.

Segera setelah defibrasi, alat tersebut dipindahkan ke laboratorium yang terletak beberapa meter dari ruang pengambilan darah. Isi masing-masing defibrinator diolah secara terpisah sehingga serum hewan yang ternyata sakit dapat dikeluarkan.

Darah yang tidak menggumpal setelah defibrinasi dialirkan melalui pemisah Alfa Laval (pemisah susu yang kami adaptasi untuk produksi whey).

Di bawah pengaruh gaya sentrifugal, darah dibagi menjadi beberapa bagian yang sama: bagian merah berisi bola merah, dan bagian transparan membentuk serum (fibrin tetap berada pada bilah defibrinator).

Dari seekor hewan diperoleh 8-10 liter darah atau kurang lebih 4-5 liter serum, yang dituangkan ke dalam botol Pyrex yang disterilkan pada suhu 180°C.

Label defibrinator ditempelkan pada botol, dan kartu diisi dengan nomor yang sama untuk memastikan pengendalian sanitasi.

Antiseptik khusus ditambahkan ke dalam serum, dirancang sedemikian rupa sehingga cukup aktif tanpa mengganggu transparansi dan rasa serum. Untuk 1 liter serum, tambahkan juga 100 ml larutan yang mengandung formaldehida 1:1000 dan syunuxol 1:5000.

(Di sela-sela persiapan, centrifuge didesinfeksi secara menyeluruh dengan antiseptik.)

Pada prinsipnya, fraksi merah darah harus dikembalikan ke tukang daging untuk membuat sosis darah, tetapi paling sering fraksi tersebut tetap tidak terpakai, sehingga sirup dapat dibuat darinya menggunakan teknologi yang dijelaskan di bawah ini.

Kasus khusus menyiapkan sirup darah. Sirup ini memiliki dua keunggulan: dapat memanfaatkan bagian merah darah yang tersisa setelah menerima serum, dan memiliki rasa yang enak yang disukai anak-anak.

Karena kekurangan gliserin, sulit untuk menyiapkan sirup penyimpanan jangka panjang, tetapi Anda dapat membuat produk yang sangat aktif dalam air dan memberikannya kepada anak-anak 2-3 sendok makan sehari. Tambahkan 20% pada bagian merah darah air minum dan simpan sirup di gletser sementara pengendalian sanitasi dilakukan.

Lalu tambahkan bagian yang setara Sirup gula 100% (gula dapat diperoleh dari kartu kelompok yang dituju sirup).

Ekstrak lemon atau jeruk ditambahkan ke dalam sirup untuk menetralkan rasa darah dan dikemas dalam botol 250 ml.

Tyndalisasi whey.

Segera setelah sentrifugasi, yaitu kurang dari satu jam setelah pengambilan darah, serum dilisiskan pada suhu 56°C selama satu jam.

Untuk melakukan ini, ia diturunkan ke dalam penangas air dengan suhu yang dijaga secara otomatis. Tyndallisasi pada suhu ini (pada suhu yang lebih tinggi whey menggumpal) diperlukan untuk sterilisasi parsial whey, meskipun kecepatan penyiapannya sendiri merupakan jaminan asepsis.

Perlu diperhatikan bahwa setiap botol berukuran lima liter dilengkapi dengan label defibrinator asli, sehingga penomoran serum sesuai dengan penomoran hewan donor.

File kartu kendali. Kartu ini memungkinkan Anda untuk memeriksa kapan saja asal hewan donor, tahapan persiapan whey, tanggal pembotolan, serta distribusi whey.

Kontrol sanitasi. Sementara kapal disimpan di ruang pendingin, pengawas dokter hewan terlibat dalam pengendalian sanitasi hewan donor. Setelah disembelih, otopsi menyeluruh dilakukan untuk mengungkap gejala tuberkulosis sekecil apa pun.

Jika suatu penyakit terdeteksi, serum yang sesuai dapat dengan mudah ditarik. Diketahui bahwa darah setiap hewan diproses secara terpisah dan serumnya disimpan dalam botol terpisah yang diberi nomor.

Pusat seroterapi Komite Publik kebersihan masa kecil di rumah jagal Lyons

Nomor kontrol…

Bovine whey dalam liter

Kartu dan label

Kartu dan label di atas mencegah kebingungan.

Di Lyon, tindakan sanitasi sangat ketat, karena dokter hewan memilih hewan, mengambil darah, dan memeriksa daging.

Sterilisasi peralatan. Serum hewan adalah tempat berkembang biak yang sangat baik bagi mikroba dan hanya dapat disterilkan sebagian. Pada suhu di atas 56° mereka menggumpal dan menjadi keruh jika ditambahkan antiseptik yang kuat. Oleh karena itu, selama semua operasi produksi serum, diperlukan sterilitas maksimum; peralatan harus didekontaminasi sebelum digunakan.

Defibrinator individu disterilkan dengan cara berikut: malam sebelum pengambilan darah, diisi dengan larutan antiseptik, dan beberapa jam sebelum pengambilan darah, dikosongkan dari antiseptik menggunakan keran yang terletak di bagian bawah alat. Mesin sentrifugal yang digunakan untuk memproduksi serum juga diolah dengan antiseptik, termasuk di antara pemrosesan isi setiap defibrinator.

Semua peralatan gelas, termasuk wadah lima liter untuk menyimpan whey, disterilkan dalam oven listrik pada suhu 180°C.

Botol serum 250 ml juga disterilkan pada suhu 180°C. Untuk menyederhanakan pengoperasian, piring ditempatkan di dalam kotak, yang digunakan selama pembotolan dan distribusi ke masyarakat.

pengiriman bunga ke Voskresensk

Sterilisasi diwakili oleh metode fisik, kimia, mekanik dan biologis serta berbagai metode.

Kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu dan metodenya tergantung pada karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Lamanya sterilisasi tergantung pada benda yang disterilkan, bahan sterilisasi dan dosisnya, suhu dan kelembaban lingkungan.

Metode sterilisasi fisik

Metode sterilisasi metode fisik meliputi pengeringan, pembakaran dan kalsinasi, perebusan, pasteurisasi dan tindalisasi, udara panas (panas kering), ultrasound, radiasi ultraviolet dan radioaktif, arus frekuensi tinggi, sinar matahari.

Metode sterilisasi barang yang paling umum yang dapat terkena suhu tinggi adalah sterilisasi dengan api, udara panas, dan uap jenuh di bawah tekanan.

Api digunakan untuk membakar benda-benda terinfeksi yang tidak bernilai apapun (kertas-kertas yang tidak diperlukan, kertas dinding bekas, kain perca, sampah), untuk mendisinfeksi dahak penderita tuberkulosis, jenazah manusia dan hewan yang meninggal khususnya. infeksi berbahaya, serta untuk membakar dan mengapur berbagai benda.

Pembakaran dan kalsinasi banyak digunakan dalam praktik mikrobiologi untuk desinfeksi instrumen, laboratorium, dan peralatan gelas farmasi.

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah suatu metode sterilisasi dimana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel-sel vegetatif, kista dan spora mikroorganisme mati.

Biasanya, loop, spatula, pipet, kaca objek dan kaca penutup, instrumen kecil dan benda terkontaminasi lainnya disterilkan dengan kalsinasi jika tidak dapat direbus. Tidak disarankan mensterilkan gunting dan pisau bedah dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam jika terkena api.

Salah satu metode sterilisasi fisik yang paling sederhana dan umum digunakan dalam praktik medis adalah sterilisasi udara panas (panas kering). Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven pengering (oven Pasteur). Udara panas kering memiliki efek bakterisidal, virusisidal, sporisidal dan digunakan terutama untuk sterilisasi produk kaca (laboratorium piring - cangkir Labu petri, pipet, tabung reaksi, dll), serta produk logam yang dapat disterilkan dengan uap bertekanan.

Selain itu, panas kering digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang terbuat dari porselen dan bahan tahan panas (bedak, tanah liat putih), serta mineral dan Minyak sayur, lemak, petroleum jelly, lanolin, lilin. Cara paling efektif untuk metode sterilisasi ini, yang menjamin kematian bentuk vegetatif dan spora, adalah suhu 160 - 180 derajat selama 15 menit.

Anda tidak dapat mensterilkan bahan makanan, larutan isotonik, atau bahan yang terbuat dari karet dan bahan sintetis dengan panas kering, karena cairan akan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis akan meleleh.

Sterilisasi uap jenuh di bawah tekanan - ini adalah metode yang paling andal dan paling sering dicoba untuk mensterilkan pembalut, air, dan sebagainya obat, media nutrisi, peralatan lunak, peralatan, serta untuk desinfeksi bahan yang terkontaminasi limbah.

Dalam praktik bedah, pembalut, pakaian ahli bedah, dan pakaian dalam untuk pasien yang dioperasi didesinfeksi menggunakan uap dalam autoklaf. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan di perangkat khusus - autoklaf.

Autoklaf sepenuhnya menghancurkan semua mikroorganisme dan spora. Metode sterilisasi tekanan uap didasarkan pada pemanasan bahan dengan uap air jenuh pada tekanan di atas tekanan atmosfer. Kombinasi suhu tinggi dan uap membuat metode ini sangat efektif. Dalam hal ini, sel vegetatif dan spora mikroba mati.

Spora mikroba mati dalam waktu 10 menit di bawah pengaruh uap air jenuh, dan bentuk vegetatif mati dalam waktu 1 hingga 4 menit.

Kekuatan bakterisida yang tinggi dari uap jenuh disebabkan oleh fakta bahwa, di bawah pengaruh uap air di bawah tekanan, protein sel mikroba membengkak dan menggumpal, akibatnya sel mikroba mati.

Efek bakterisida dari uap air jenuh ditingkatkan dengan tekanan berlebih.

Sterilisasi dalam autoklaf dilakukan dalam mode yang berbeda.

Jadi, media nutrisi sederhana (daging - pepton agar dan daging - kaldu pepton) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120 derajat (1 atm). Namun dengan mode ini tidak mungkin mensterilkan media yang mengandung protein, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah oleh pemanasan.

Media yang mengandung karbohidrat disterilkan dalam autoklaf pada suhu 0,5 atm. 10 – 15 menit atau uap yang mengalir secara fraksional.

Dengan menggunakan suhu tinggi, Anda dapat menghancurkan bentuk mikroorganisme patogen yang paling persisten (termasuk yang membentuk spora) tidak hanya pada permukaan benda yang didesinfeksi, tetapi juga pada kedalamannya.

Inilah keuntungan besar dari suhu tinggi sebagai alat sterilisasi yang andal. Namun, beberapa barang menjadi rusak karena pengaruh suhu tinggi dan dalam kasus ini perlu menggunakan metode dan cara desinfeksi lain.

Sterilisasi lengkap bahan dan barang yang tidak dapat disterilkan suhu tinggi, dicapai dengan sterilisasi berulang dengan uap air dalam peralatan Koch pada suhu tidak melebihi 100 derajat. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Intinya adalah bahwa sisa bentuk mikroba spora yang tidak terbunuh, setelah seharian dalam termostat pada suhu 37 derajat, berkecambah menjadi sel vegetatif, yang kematiannya terjadi selama sterilisasi selanjutnya dari benda ini dengan uap yang mengalir.

Perawatan dengan uap cairan dilakukan tiga kali selama 30-40 menit. Memanaskan bahan satu kali pada suhu di bawah 100 derajat disebut pasteurisasi. Pasteurisasi diusulkan oleh Pasteur dan dimaksudkan terutama untuk menghancurkan sebagian besar mikroorganisme non-spora. Pasteurisasi dilakukan pada suhu 60 - 70 derajat selama 15 hingga 30 menit, pada suhu 80 derajat selama 10 hingga 15 menit.

Dalam praktik mikrobiologi, pasteurisasi bahan benih sering digunakan untuk mengisolasi kultur murni mikroorganisme pembentuk spora dan untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme membentuk spora.

Untuk cairan yang kehilangan rasa dan kualitas berharga lainnya bila terkena suhu tinggi (susu, jus beri dan buah, bir, media nutrisi yang mengandung karbohidrat atau urea, dll.), sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan pada suhu 50 - 60 derajat selama 15 - 33333330 menit atau pada suhu 70 - 80 derajat selama 5 - 10 menit. Dalam hal ini, mikroba dengan resistensi rata-rata mati, sementara mikroba dan spora yang lebih resisten tetap bertahan.

Sterilisasi fraksional 5-6 kali lipat pada suhu 60 derajat selama 1 jam disebut tyndalisasi.

Banyak produk medis yang terbuat dari bahan polimer, tidak tahan terhadap sterilisasi metode uap menurut mode yang diterima secara umum. Untuk banyak produk, karena karakteristik cairan yang dikandungnya (pengawet, obat-obatan, dan produk lainnya), tidak mungkin untuk mensterilkan menggunakan metode dan metode yang berlaku umum. Untuk produk tersebut, sistem sterilisasi individual dikembangkan untuk memastikan sterilisasi objek yang andal.

Oleh karena itu, sterilisasi rotor untuk memisahkan darah menjadi fraksi-fraksi dilakukan dengan uap air pada suhu 120 derajat selama 45 menit.

Sterilitas wadah pengawet dicapai pada suhu 110 derajat selama 60 menit.

Perebusan adalah metode sterilisasi yang digunakan untuk menghilangkan sterilisasi jarum suntik yang dapat digunakan kembali, instrumen bedah, tabung karet, peralatan kaca dan logam.

Sterilisasi dengan cara direbus dilakukan dalam alat sterilisasi. Bentuk spora dalam air mendidih akan mati setelah 20 - 30 menit. Merebus selama 45 menit banyak digunakan untuk mendisinfeksi sekret dan bahan infeksius lainnya, linen, piring, mainan, dan barang perawatan pasien.

Air panas (60 - 100 derajat) dengan deterjen digunakan untuk mencuci dan membersihkan penghapusan mekanis kontaminan dan mikroorganisme.

Kebanyakan sel vegetatif mati pada suhu 70 derajat setelah 30 menit.

Sterilisasi filtrasi digunakan dalam kasus di mana substrat tidak tahan terhadap pemanasan, khususnya untuk media yang mengandung protein, serum, beberapa antibiotik, vitamin, dan zat yang mudah menguap. Teknik ini cukup banyak digunakan untuk mensterilkan cairan kultur, bila diperlukan untuk membebaskannya dari sel mikroba, namun untuk menjaga semua produk metabolisme yang dikandungnya tidak berubah.

Metode ini melibatkan penyaringan cairan melalui filter khusus yang memiliki partisi berpori halus sehingga dapat menahan sel mikroba.

Dua jenis filter yang paling banyak digunakan adalah filter membran dan filter Seitz.

Filter membran dibuat dari collodion, asetat, selulosa dan bahan lainnya.

Filter Seitz terbuat dari campuran asbes dan selulosa.

Selain itu, filter yang terbuat dari kaolin dengan campuran pasir kuarsa, tanah infusor dan bahan lainnya (“lilin” oleh Chamberlan, Berkfeld) digunakan untuk sterilisasi.

Filter membran dan asbes dirancang untuk penggunaan satu kali.

Dengan penyinaran ultraviolet, efek bakterisida diberikan oleh sinar dengan panjang 200 - 450 nm, yang sumbernya adalah lampu bakterisida.

Sterilisasi dilakukan dengan menggunakan lampu bakterisida sinar ultraviolet udara dalam pengobatan lembaga pencegahan, kotak laboratorium mikrobiologi, di perusahaan Industri makanan, di kotak produksi vaksin dan serum, di ruang operasi, ruang manipulasi, penitipan anak, dll.

Sinar ultraviolet memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga sporanya.

Sinar matahari menyebabkan matinya mikroorganisme akibat tindakannya iradiasi ultraviolet dan pengeringan.

Pengeringan dengan sinar matahari mempunyai efek merugikan pada banyak jenis mikroorganisme, namun pengaruhnya hanya dangkal dan oleh karena itu sinar matahari memainkan peran pendukung dalam praktik sterilisasi.

DI DALAM Akhir-akhir ini dalam pengobatan luka dan luka bakar, digunakan pelapis yang terbuat dari polimer sintetik dan alami dalam bentuk gel.

Film antiseptik polimer banyak digunakan untuk pengobatan luka dan luka bakar lokal. Mereka mengandung agen antimikroba spektrum luas seperti katapol, dioksidan, yodium biru, serta sorbitol yang mengandung glutaraldehid. Untuk mensterilkan film-film ini digunakan radiasi pengion dengan dosis 20,0 kGy. Selama produksi industri film dan sorben antiseptik polimer, sterilitasnya di bawah sistem sterilisasi ini dijamin sepenuhnya.

Radiasi radioaktif membunuh semua jenis mikroorganisme, baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Ini banyak digunakan untuk sterilisasi di perusahaan yang memproduksi produk steril dan peralatan medis sekali pakai yang steril, untuk desinfeksi Air limbah dan bahan baku asal hewan.

Metode sterilisasi mekanis

Metode sterilisasi mekanis menghilangkan kuman dari permukaan benda. Ini termasuk mencuci, mengguncang, menyapu, menyeka basah, mengudara, ventilasi, menyedot debu, mencuci.

Metode sterilisasi kimia

Plastik kini semakin banyak digunakan dalam praktik medis.

Mereka digunakan dalam kedokteran gigi, bedah maksilofasial, traumatologi, ortopedi, dan bedah. Kebanyakan plastik tidak tahan terhadap metode sterilisasi panas uap di bawah tekanan dan panas kering (udara panas kering). Larutan alkohol, diosida, dan larutan terner yang digunakan untuk mensterilkan benda-benda tersebut tidak menjamin sterilitas produk yang diproses.

Oleh karena itu, metode gas dan radiasi, serta larutan bahan kimia, digunakan untuk mensterilkan produk plastik.

Pengenalan sejumlah besar produk yang terbuat dari bahan termolabil ke dalam praktik institusi medis berkontribusi pada pengenalan radiasi, metode gas desinfeksi dan sterilisasi dengan larutan desinfektan.

Pada sterilisasi kimia gunakan gas dan bahan dari berbagai kelompok kimia (peroksida, fenolik, mengandung halogen, aldehida, basa dan asam, surfaktan, dll.). Untuk penggunaan sehari-hari, diproduksi deterjen, pembersih, pemutihan dan sediaan lainnya yang memiliki efek antimikroba karena masuknya berbagai bahan kimia ke dalam komposisinya.

Persiapan ini digunakan untuk pembersihan dan desinfeksi sanitasi peralatan teknis, piring, linen, dll.

Uap formaldehida (vaporform) dapat digunakan dalam institusi medis untuk sterilisasi produk logam keperluan medis (pisau bedah, jarum, pinset, probe, klem, kait, pemotong kawat, dll.).

Sebelum disterilkan dengan uap formaldehida, produk harus dibersihkan terlebih dahulu dan dikeringkan secara menyeluruh.

Saat disterilkan dengan cara apa pun secara kimia Ketentuan pengolahan suatu benda tertentu tergantung pada karakteristik benda yang didisinfeksi, ketahanan mikroba, dan karakteristik sifat-sifatnya. persiapan kimia, suhu lingkungan, kelembaban dan faktor lainnya.

Dengan demikian, sterilitas instrumen logam dicapai setelah lima jam penyimpanan dalam ruang tertutup dengan uap pada suhu minimal 20 derajat dan kelembaban relatif 95 - 98% pada suhu 15 derajat, sterilitas lengkap dari benda-benda tersebut dicapai hanya setelah 16 jam.

Aktivitas sporisidal glutaraldehid bergantung pada suhu. Tindakan optimalnya terjadi pada suhu 15 - 25 derajat. Ketika suhu naik, aktivitas sporisidal obat ini menurun.

Sterilisasi metode kimia Penggunaannya agak terbatas. Paling sering, metode ini digunakan untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum). Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 derajat dan bahan pengawet tersebut diuapkan.

Untuk pengawetan vaksin atau serum, digunakan merthiolate, asam borat, formalin.

Metode sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik.

Metode ini banyak digunakan dalam budidaya virus.

Sterilisasi (dari bahasa Latin sterilis - steril) melibatkan inaktivasi total mikroba pada objek yang sedang diproses.

Oven Pasteur - sterilisasi panas kering.

Ada tiga metode utama sterilisasi: panas, radiasi, kimia.

Yodium.

Sterilisasi panas didasarkan pada sensitivitas mikroba terhadap suhu tinggi.

Pada suhu 60 °C dan adanya air, terjadi denaturasi protein, termasuk enzim, yang mengakibatkan kematian mikroba bentuk vegetatif. Spora yang mengandung sedikit air terikat dan memiliki cangkang padat tidak aktif pada suhu 160-170 °C. Untuk sterilisasi panas, terutama digunakan panas kering dan uap bertekanan.
Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven panas kering, atau oven Pasteur. Oven Pasteur merupakan suatu lemari besi yang tertutup rapat, dipanaskan dengan listrik dan dilengkapi dengan termometer.

Disinfeksi bahan di dalamnya terjadi pada suhu 160-170 °C selama 60-120 menit. Kerugian dari metode ini adalah hanya beberapa benda yang dapat disterilkan, seperti kaca laboratorium, yang dapat menahan suhu setinggi itu.
Metode sterilisasi yang paling universal adalah perlakuan uap di bawah tekanan dalam autoklaf, di mana pembalut, linen, banyak instrumen, media kultur, larutan, bahan infeksius, dll. disterilkan.

Autoklaf adalah silinder logam dengan dinding kuat, tertutup rapat, terdiri dari ruang uap air dan ruang sterilisasi. Alat tersebut dilengkapi dengan alat pengukur tekanan, termometer dan alat pemantau lainnya. Peningkatan tekanan terjadi di dalam autoklaf, yang menyebabkan peningkatan titik didih air. Jadi, pada 0,5 atm titik didihnya adalah 80 °C, pada 1 atm - 100 °C, pada 2 atm - 121 °C, dan pada 3 atm - 136 °C.

Karena kenyataan bahwa, selain suhu tinggi, uap juga mempengaruhi mikroorganisme, spora sudah mati pada suhu 120 ° C. Mode pengoperasian autoklaf yang paling umum adalah 2 atm, 121 °C, 15-20 menit. Waktu sterilisasi berkurang seiring bertambahnya waktu tekanan atmosfir, dan karena itu titik didihnya. Mikroorganisme mati dalam beberapa detik, tetapi bahan diproses lebih lama, karena pertama, suhu di dalam bahan yang disterilkan harus tinggi, dan kedua, ada yang disebut bidang pengaman, yang dirancang untuk kemungkinan penyimpangan dari parameter yang ditentukan saat operasi autoklaf.

Tag: tubuh, pertumbuhan, sterilisasi, enzim