Mode pengoperasian oven pengering. Metode dan metode sterilisasi Sterilisasi dengan penyinaran ultraviolet

Kehidupan mikroorganisme sangat bergantung pada kondisi lingkungan. Semua faktor lingkungan yang mempengaruhi mikroorganisme dapat dibagi menjadi tiga kelompok: fisik, kimia dan biologi, yang pengaruh menguntungkan atau merugikannya bergantung pada sifat faktor itu sendiri dan sifat mikroorganisme.

Faktor fisik

Dari faktor fisik pengaruh terbesar Perkembangan mikroorganisme dipengaruhi oleh suhu, pengeringan, energi radiasi, dan ultrasonografi.

Suhu. Aktivitas kehidupan setiap mikroorganisme dibatasi oleh batasan suhu tertentu. Ketergantungan suhu ini biasanya dinyatakan dalam tiga poin utama: minimum - suhu di bawah mana reproduksi sel mikroba berhenti; optimal - suhu terbaik untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme; maksimum - suhu di mana aktivitas vital sel melemah atau terhenti. Suhu optimal biasanya sesuai dengan kondisi suhu lingkungan alami sebuah habitat.

Semua mikroorganisme dalam kaitannya dengan suhu dibagi menjadi psikrofil, mesofil, dan termofil.

Psikrofil (dari bahasa Yunani psychros - dingin, phileo - cinta), atau mikroorganisme yang menyukai dingin, tumbuh pada suhu yang relatif rendah: suhu minimum- 0° C, optimal - 10-20° C, maksimum - 30° C. Golongan ini mencakup mikroorganisme yang hidup di laut utara dan lautan, tanah, air limbah. Ini juga termasuk bakteri bercahaya dan besi, serta mikroba yang menyebabkan pembusukan makanan dalam suhu dingin (di bawah 0° C).

Mesofil (dari bahasa Yunani mesos - tengah) adalah kelompok yang paling luas, termasuk sebagian besar saprofit dan semua mikroorganisme patogen. Suhu optimal untuk mereka adalah 28-37° C, minimum 10° C, maksimum 45° C.

Termofil (dari bahasa Yunani termos - panas, panas), atau mikroorganisme yang menyukai panas, berkembang pada suhu di atas 55 ° C, suhu minimum untuk mereka adalah 30 ° C, suhu optimal adalah 50-60 ° C, dan maksimum adalah 70 -75 ° C. Mereka ditemukan di mata air mineral panas, lapisan permukaan tanah, substrat yang dapat memanas sendiri (pupuk kandang, jerami, biji-bijian), dan usus manusia dan hewan. Di antara termofil terdapat banyak bentuk spora.

Suhu tinggi dan rendah mempunyai pengaruh yang berbeda terhadap mikroorganisme. Beberapa lebih sensitif terhadap suhu tinggi. Selain itu, semakin tinggi suhu melebihi maksimum maka semakin cepat terjadi kematian sel mikroba yang disebabkan oleh denaturasi (koagulasi) protein sel.

Bentuk vegetatif bakteri mesofilik mati pada suhu 60° C selama 30-60 menit, dan pada 80-100° C - setelah 1-2 menit. Spora bakteri jauh lebih tahan terhadap suhu tinggi. Misalnya spora basil antraks tahan perebusan selama 10-20 menit, dan spora clostridium botulisme - 6 jam.Semua mikroorganisme, termasuk spora, mati pada suhu 165-170 ° C selama satu jam (dalam suhu kering). oven) atau bila terkena uap pada tekanan 1 atm (dalam autoclave) selama 30 menit.

Pengaruh suhu tinggi pada mikroorganisme adalah dasar dari sterilisasi - pelepasan lengkap berbagai benda dari mikroorganisme dan sporanya (lihat di bawah).

Banyak mikroorganisme yang sangat resisten terhadap suhu rendah. Salmonella typhus dan Vibrio cholerae bertahan lama di dalam es. Beberapa mikroorganisme tetap dapat hidup pada suhu udara cair (-190°C), dan spora bakteri dapat bertahan pada suhu hingga -250°C.

Hanya spesies individu bakteri patogen sensitif terhadap suhu rendah (misalnya Bordetella pertussis dan parapertussis, Neisseria meningococcus, dll). Sifat-sifat mikroorganisme ini diperhitungkan dalam diagnostik laboratorium dan pada saat pengangkutan bahan uji, bahan tersebut dikirim ke laboratorium yang terlindung dari pendinginan.

Pengaruh suhu rendah menghentikan proses pembusukan dan fermentasi, yang banyak digunakan untuk pengawetan produk makanan di unit pendingin, ruang bawah tanah, gletser. Pada suhu di bawah 0° C, mikroba mengalami keadaan mati suri - proses metabolisme melambat dan reproduksi terhenti. Namun jika ada yang sesuai kondisi suhu dan media nutrisi, fungsi vital sel mikroba dipulihkan. Sifat mikroorganisme ini digunakan dalam praktik laboratorium untuk mengawetkan kultur mikroba pada suhu rendah. Perubahan cepat pada suhu tinggi dan rendah (pembekuan dan pencairan) juga berdampak buruk pada mikroorganisme - hal ini menyebabkan pecahnya membran sel.

Pengeringan. Air diperlukan untuk berfungsinya mikroorganisme secara normal. Pengeringan menyebabkan dehidrasi sitoplasma, terganggunya integritas membran sitoplasma, akibatnya nutrisi sel mikroba terganggu dan terjadi kematiannya.

Waktu kematian berbagai jenis mikroorganisme di bawah pengaruh pengeringan sangat bervariasi. Misalnya Neisseria patogen (meningokokus, gonokokus), Leptospira, Treponema pallidum dan lain-lain mati jika dikeringkan setelah beberapa menit. Vibrio cholerae tahan pengeringan selama 2 hari, Salmonella tifoid - 70 hari, dan Mycobacterium tuberkulosis - 90 hari. Namun dahak kering pasien tuberkulosis, yang patogennya dilindungi oleh lapisan protein kering, tetap menular selama 10 bulan.

Spora sangat tahan terhadap pengeringan dan pengaruh lingkungan lainnya. Spora basil antraks mempertahankan kemampuan berkecambah selama 10 tahun, dan spora jamur kapang hingga 20 tahun.

Dampak buruk pengeringan terhadap mikroorganisme telah lama digunakan untuk mengawetkan sayuran, buah-buahan, daging, ikan, dan lain-lain jamu. Pada saat yang sama, setelah menemukan diri kita dalam kondisi kelembaban tinggi, produk tersebut dengan cepat rusak karena pemulihan aktivitas mikroba.

Metode pengeringan beku banyak digunakan untuk menyimpan kultur mikroorganisme, vaksin dan sediaan biologis lainnya. Inti dari metode ini adalah mikroorganisme atau sediaan dibekukan terlebih dahulu dan kemudian dikeringkan dalam kondisi vakum. Dalam hal ini, sel mikroba memasuki keadaan mati suri dan mempertahankan sifat biologisnya selama beberapa bulan atau tahun.

Energi Radiasi. Di alam, mikroorganisme selalu terpapar radiasi sinar matahari. Sinar matahari langsung menyebabkan kematian banyak mikroorganisme dalam beberapa jam, kecuali bakteri fotosintetik (bakteri belerang hijau dan ungu). Dampak buruk sinar matahari disebabkan oleh aktivitas sinar ultraviolet (sinar UV). Mereka menonaktifkan enzim sel dan merusak DNA. Bakteri patogen lebih sensitif terhadap sinar UV dibandingkan bakteri saprofit. Oleh karena itu, sebaiknya simpan kultur mikroba di laboratorium di tempat gelap. Dalam hal ini, pengalaman Buchner bersifat demonstratif.

Dalam cawan Petri dengan lapisan tipis agar-agar dihasilkan melalui inokulasi yang melimpah terhadap kultur bakteri apa pun. Huruf-huruf yang dipotong dari kertas hitam ditempelkan pada permukaan luar cangkir yang diunggulkan, misalnya membentuk kata “tifus”. Cangkir dengan bagian bawah menghadap ke atas disinari secara lurus sinar matahari selama 1 jam, kemudian kertas dikeluarkan, dan cawan ditempatkan dalam termostat selama sehari pada suhu 37°C. Pertumbuhan bakteri hanya diamati di tempat-tempat agar-agar yang terlindung dari sinar UV dengan menempelkan huruf-huruf. Sisa agar-agar tetap transparan, yaitu tidak ada pertumbuhan mikroorganisme (Gbr. 11).

Pentingnya sinar matahari sebagai faktor alami dalam meningkatkan kesehatan lingkungan luar sangatlah besar. Ini membebaskan udara, air dari reservoir alami, dan lapisan atas tanah dari bakteri patogen.

Efek bakterisida (penghancur bakteri) dari sinar UV digunakan untuk mensterilkan udara tempat tertutup(ruang operasi, ruang ganti, kotak, dll), serta air dan susu. Sumber sinar tersebut adalah lampu radiasi ultraviolet, lampu bakterisida.

Jenis energi radiasi lainnya - sinar-X, sinar α-, β-, γ mempunyai efek merugikan pada mikroorganisme hanya dalam dosis besar, sekitar 440-280 J/kg. Kematian mikroba disebabkan oleh rusaknya struktur inti dan DNA seluler. Radiasi dosis rendah merangsang pertumbuhan sel mikroba. Mikroorganisme jauh lebih tahan terhadap radiasi radioaktif dibandingkan organisme tingkat tinggi. Bakteri thionic diketahui hidup di deposit bijih uranium. Bakteri ditemukan di air reaktor nuklir pada konsentrasi radiasi pengion 20-30 kJ/kg.

Efek bakterisida dari radiasi pengion digunakan untuk pengawetan produk makanan tertentu, sterilisasi sediaan biologis (sera, vaksin, dll), sedangkan sifat bahan yang disterilkan tidak berubah.

Dalam beberapa tahun terakhir, produk sekali pakai seperti pipet polistiren, cawan Petri, sumur untuk reaksi serologis, jarum suntik, serta bahan jahitan - catgut, dll. telah disterilkan menggunakan metode radiasi.

USG menyebabkan kerusakan yang signifikan pada sel mikroba. Di bawah pengaruh ultrasound, gas yang terletak di lingkungan cair sitoplasma diaktifkan, dan a tekanan tinggi(hingga 10.000 atm). Hal ini menyebabkan pecahnya membran sel dan kematian sel. USG digunakan untuk mensterilkan produk makanan (susu, jus buah), air minum.

Tekanan tinggi. Bakteri dan terutama sporanya tahan terhadap tekanan mekanis. Di alam terdapat bakteri yang hidup di laut dan samudera pada kedalaman 1000-10000 m pada tekanan 100 hingga 900 atm. Beberapa jenis bakteri dapat menahan tekanan hingga 3000-5000 atm, dan spora bakteri bahkan hingga 20.000 atm.

Faktor kimia

Pengaruh bahan kimia terhadap mikroorganisme bervariasi tergantung pada sifat senyawa kimia, konsentrasinya, dan lamanya paparan sel mikroba. Tergantung pada konsentrasinya, suatu zat kimia dapat menjadi sumber nutrisi atau mempunyai efek penghambatan terhadap aktivitas vital mikroorganisme. Misalnya, larutan glukosa 0,5-2% merangsang pertumbuhan mikroba, dan larutan glukosa 20-40% menghambat proliferasi sel mikroba.

Banyak senyawa kimia, yang memiliki efek merugikan pada mikroorganisme, digunakan dalam praktik medis sebagai desinfektan dan antiseptik.

Bahan kimia yang digunakan untuk disinfeksi disebut desinfektan. Disinfeksi mengacu pada tindakan yang bertujuan untuk menghancurkan mikroorganisme patogen di berbagai objek lingkungan. Disinfektan meliputi senyawa halida, fenol dan turunannya, garam logam berat, beberapa asam, basa, alkohol, dll. Bahan ini menyebabkan kematian sel mikroba, bekerja dalam konsentrasi optimal untuk waktu tertentu. Banyak disinfektan yang mempunyai efek berbahaya pada jaringan makroorganisme.

Mereka disebut antiseptik zat kimia, yang dapat menyebabkan kematian mikroorganisme atau menghambat pertumbuhan dan reproduksinya. Mereka digunakan untuk tujuan terapeutik (kemoterapi), serta untuk desinfeksi luka, kulit, dan selaput lendir manusia. Hidrogen peroksida, larutan alkohol yodium, hijau cemerlang, larutan kalium permanganat, dll memiliki sifat antiseptik.Beberapa zat antiseptik (asetat, belerang, asam benzoat, dll.) dalam dosis yang tidak berbahaya bagi manusia digunakan untuk pengawetan makanan.

Menurut mekanisme kerjanya, zat kimia dengan aktivitas antimikroba dapat dibagi menjadi beberapa kelompok.

1. Surfaktan (asam lemak, sabun dan deterjen lainnya) menyebabkan penurunan tegangan permukaan yang mengakibatkan terganggunya fungsi dinding sel dan membran sitoplasma mikroorganisme.

2. Fenol, kresol dan turunannya menyebabkan koagulasi protein mikroba. Mereka digunakan untuk mendisinfeksi bahan menular dalam praktik mikrobiologi dan rumah sakit penyakit menular.

3. Zat pengoksidasi, berinteraksi dengan protein mikroba, mengganggu aktivitas enzim dan menyebabkan denaturasi protein. Agen pengoksidasi aktif adalah klorin dan ozon, yang digunakan untuk mendisinfeksi air minum. Turunan klorin (pemutih, kloramin) banyak digunakan untuk tujuan desinfeksi. Hidrogen peroksida, kalium permanganat, yodium, dll. memiliki sifat pengoksidasi.

4. Formaldehida digunakan dalam bentuk larutan 40% (formalin) untuk desinfeksi. Ini membunuh mikroorganisme bentuk vegetatif dan spora. Formalin memblokir gugus amino protein sel mikroba dan menyebabkan denaturasinya.

5. Garam logam berat (merkuri, timbal, seng, emas, dll) menggumpal protein sel mikroba, sehingga menyebabkan kematiannya. Sejumlah logam (perak, emas, merkuri, dll.) memiliki efek bakterisidal terhadap mikroorganisme dalam konsentrasi yang dapat diabaikan. Sifat ini disebut aksi oligodinamik (dari bahasa Latin oligos - kecil, dinamys - kekuatan). Telah terbukti bahwa air dalam wadah perak tidak membusuk karena efek bakterisidal ion perak. Untuk pencegahan blenorea* pada bayi baru lahir untuk waktu yang lama larutan perak nitrat 1% digunakan. Larutan koloid senyawa perak organik (protargol, collargol) juga digunakan sebagai antiseptik lokal.

* (Blennorea adalah peradangan pada konjungtiva mata yang disebabkan oleh gonokokus.)

Sediaan merkuri memiliki efek antimikroba yang kuat. Sejak zaman kuno, merkuri biklorida, atau merkuri klorida (dengan pengenceran 1:1000), telah digunakan untuk desinfeksi. Namun, dia punya efek toksik pada jaringan makroorganisme dan penggunaannya terbatas.

6. Pewarna (diamond green, rivanol, dll) mempunyai khasiat menghambat pertumbuhan bakteri. Larutan sejumlah pewarna digunakan sebagai antiseptik, dan juga ditambahkan ke beberapa media nutrisi untuk menghambat pertumbuhan mikroflora yang menyertainya.

Efek destruktif dari sejumlah faktor fisik dan kimia pada mikroorganisme membentuk dasar metode aseptik dan antiseptik, yang banyak digunakan dalam praktik medis dan sanitasi.

Asepsis adalah suatu sistem tindakan preventif untuk mencegah kontaminasi mikroba pada suatu benda (luka, bidang bedah, kultur mikroorganisme, dll.) berdasarkan metode fisik.

Antiseptik adalah serangkaian tindakan yang bertujuan untuk menghancurkan mikroorganisme pada luka, seluruh tubuh atau benda lingkungan, dengan menggunakan berbagai bahan kimia desinfektan.

Faktor biologis

Di habitat alami, mikroorganisme tidak hidup sendiri-sendiri, tetapi berada dalam hubungan yang kompleks, yang terutama bermuara pada simbiosis, metabiosis, dan antagonisme.

Simbiosis adalah hidup bersama organisme dari spesies yang berbeda, sehingga saling menguntungkan. Pada saat yang sama, bersama-sama mereka berkembang lebih baik daripada masing-masing secara terpisah.

Hubungan simbiosis terjadi antara bakteri bintil dan tanaman polong-polongan, antara jamur berserabut dan ganggang biru-hijau (lumut): Simbiosis bakteri asam laktat dan ragi alkohol digunakan untuk membuat beberapa produk asam laktat (kefir, koumiss).

Metabiosis adalah jenis hubungan yang menghasilkan produk metabolisme dari satu jenis mikroorganisme kondisi yang diperlukan untuk pengembangan orang lain. Misalnya, mikroorganisme pembusuk yang memecah zat protein berkontribusi pada akumulasi senyawa amonium di lingkungan dan menciptakan kondisi yang menguntungkan bagi pertumbuhan dan perkembangan bakteri nitrifikasi. Dan perkembangan anaerobik di tanah yang memiliki aerasi yang baik tidak akan mungkin terjadi tanpa aerob yang menyerap oksigen bebas.

Hubungan metabiotik tersebar luas di antara mikroorganisme tanah dan mendasari siklus zat di alam.

Antagonisme adalah suatu bentuk hubungan di mana satu mikroorganisme menghambat perkembangan mikroorganisme lain atau dapat menyebabkan kematian totalnya. Hubungan antagonis telah berkembang di antara mikroorganisme dalam perjuangan untuk eksistensi. Di mana pun mereka tinggal, selalu terjadi perebutan sumber makanan, oksigen udara, dan habitat. Dengan demikian, sebagian besar bakteri patogen masuk ke dalam cairan pasien lingkungan luar(tanah, air), tidak tahan terhadap persaingan jangka panjang dengan banyak saprofit di sini dan mati dengan relatif cepat.

Antagonisme dapat disebabkan oleh pengaruh langsung mikroorganisme satu sama lain atau oleh aksi produk metabolismenya. Misalnya, protozoa melahap bakteri, dan fag melisiskannya. Usus bayi baru lahir dijajah oleh bakteri asam laktat Bifidobacterium bifidum. Dengan melepaskan asam laktat, mereka menekan pertumbuhan bakteri pembusuk dan dengan demikian melindungi organisme yang masih rapuh dari gangguan usus bayi. Beberapa mikroorganisme dalam proses hidupnya menghasilkan berbagai zat yang berdampak buruk bagi bakteri dan mikroba lainnya. Zat-zat tersebut termasuk antibiotik (lihat "Antibiotik").

Pertanyaan kontrol

1. Faktor fisik apa saja yang mempengaruhi aktivitas kehidupan mikroorganisme?

2. Zat apa saja yang tergolong disinfektan dan apa perbedaan mekanisme kerjanya terhadap mikroorganisme?

3. Sebutkan hubungan apa yang ada antar mikroorganisme?

Sterilisasi

Sterilisasi adalah sterilisasi, yaitu pembebasan menyeluruh benda-benda lingkungan dari mikroorganisme dan sporanya.

Sterilisasi dilakukan dengan berbagai cara:

1) fisik (paparan suhu tinggi, sinar UV, penggunaan filter bakteri);

2) bahan kimia (penggunaan berbagai disinfektan, antiseptik);

3) biologis (penggunaan antibiotik).

Dalam praktik laboratorium, metode sterilisasi fisik biasanya digunakan.

Kemungkinan dan kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu ditentukan oleh karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Metode fisik

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah metode sterilisasi di mana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel vegetatif dan spora mikroba mati. Biasanya, loop bakteriologis, spatula, pipet, slide dan kaca penutup, serta instrumen kecil dikalsinasi. Gunting dan pisau bedah tidak boleh disterilkan dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam saat terkena api.

Sterilisasi panas kering

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (oven pengering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet dengan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan regulator yang menjamin suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Panas kering digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Piring yang disiapkan untuk sterilisasi dimasukkan secara longgar ke dalam oven untuk memastikan pemanasan bahan yang disterilkan secara seragam dan andal. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas, atur suhu menjadi 160-165 ° C dan sterilkan pada suhu tersebut selama 1 jam.Setelah sterilisasi selesai, matikan api, tetapi jangan membuka pintu lemari sampai oven sudah dingin; jika tidak udara dingin, masuk ke dalam lemari dapat menyebabkan keretakan pada peralatan masak yang panas.

Sterilisasi dalam oven Pasteur dapat dilakukan pada suhu dan paparan (waktu sterilisasi) yang berbeda-beda (Tabel 1).

Cairan (media nutrisi, larutan natrium klorida isotonik, dll.), barang yang terbuat dari karet dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering, karena cairan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis meleleh.

Untuk mengontrol sterilisasi dalam oven Pasteur, benang sutra dibasahi dalam kultur bakteri pembentuk spora, dikeringkan, ditempatkan dalam cawan Petri steril dan dimasukkan ke dalam oven Pasteur. Sterilisasi dilakukan pada suhu 165°C selama 1 jam (untuk pengendalian sebagian benang dibiarkan pada suhu ruangan). Kemudian benang yang telah disterilkan dan dikontrol diletakkan pada permukaan agar-agar dalam cawan Petri atau dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi kaldu dan diinkubasi dalam termostat pada suhu 37° C selama 2 hari. Dengan pengoperasian oven Pasteur yang benar, tidak akan terjadi pertumbuhan pada tabung reaksi atau cawan yang berisi media nutrisi yang di dalamnya terdapat benang yang telah disterilkan, karena spora bakteri akan mati, sedangkan spora bakteri pada benang yang tidak disterilkan (kontrol) akan berkecambah pada nutrisi. pertumbuhan media akan dicatat.

Untuk menentukan suhu di dalam oven Pasteur dapat menggunakan sukrosa atau gula pasir yang menjadi karamel pada suhu 165-170°C.

Mempersiapkan peralatan gelas laboratorium untuk sterilisasi dalam oven Pasteur. Peralatan gelas laboratorium(Cawan petri, pipet ukur dan pasteur, botol, labu, tabung reaksi) sebelum sterilisasi harus dicuci bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan kertas, jika tidak setelah sterilisasi dapat terkontaminasi lagi dengan bakteri udara.

Cawan petri dibungkus dengan kertas satu atau lebih potongan sekaligus atau ditempatkan dalam wadah logam khusus.

Penyeka kapas dimasukkan ke ujung atas pipet untuk mencegah bahan uji masuk ke mulut. Pipet ukur dibungkus dengan kertas panjang selebar 4-5 cm, volume pipet yang dibungkus ditandai pada kertas tersebut. Dalam kotak pensil, pipet ukur disterilkan tanpa tambahan kertas pembungkus.

Catatan. Jika garis batas pada pipet tidak terlihat jelas, maka pipet dikembalikan sebelum sterilisasi. Oleskan ke pipet cat minyak dan, tanpa membiarkan cat mengering, bubuk barium sulfat digosokkan ke dalamnya dengan kain. Setelah itu, hilangkan sisa cat dengan lap, yang hanya tersisa di takik kelulusan. Pipet yang dirawat dengan cara ini harus dibilas.

Ujung tajam pipet Pasteur disegel dalam api pembakar dan dibungkus kertas, 3-5 lembar sekaligus. Pipet pasteur harus dibungkus dengan hati-hati agar tidak merusak ujung kapiler yang tertutup rapat.

Botol, labu, tabung reaksi ditutup dengan sumbat kapas. Gabus harus masuk ke dalam leher kapal 2/3 panjangnya, tidak terlalu kencang, tetapi juga tidak longgar. Tutup kertas dipasang di atas sumbat pada setiap wadah (kecuali tabung reaksi). Tabung reaksi diikat menjadi satu dalam kelompok yang terdiri dari 5-50 orang dan dibungkus dengan kertas.

Catatan. Pada suhu tinggi kertas tempat cangkir dan pipet dibungkus, dan kapas menjadi kuning dan bahkan mungkin hangus, jadi semuanya varietas baru kertas yang diterima oleh laboratorium harus diuji pada kondisi suhu yang diterima.

Pertanyaan kontrol

1. Apa yang dimaksud dengan istilah sterilisasi?

2. Bagaimana sterilisasi dilakukan?

3. Apa yang disterilkan dengan cara kalsinasi di atas api?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian oven Pasteur.

5. Apa yang disterilkan dalam oven Pasteur?

6. Bagaimana peralatan gelas disiapkan untuk sterilisasi?

7. Mengapa media nutrisi dan benda karet tidak bisa disterilkan dalam oven Pasteur?

Latihan

Siapkan cawan Petri, pipet ukur, pipet Pasteur, tabung reaksi, labu dan vial untuk sterilisasi.

Sterilisasi dengan cara direbus

Perebusan merupakan salah satu cara sterilisasi yang menjamin kemandulan asalkan tidak terdapat spora pada bahan yang disterilkan. Digunakan untuk memproses jarum suntik, instrumen, peralatan kaca dan logam, tabung karet, dll.

Sterilisasi dengan cara direbus biasanya dilakukan dalam alat sterilisasi - kotak logam bentuk persegi panjang dengan penutup yang rapat. Bahan yang akan disterilkan diletakkan pada jaring yang tersedia pada alat sterilisasi dan diisi air. Untuk meningkatkan titik didih dan menghilangkan kesadahan air, tambahkan 1-2% natrium bikarbonat (lebih baik menggunakan air suling). Alat sterilisasi ditutup dengan penutup dan dipanaskan.Permulaan sterilisasi dianggap saat air mendidih, waktu perebusan 15-30 menit. Pada akhir sterilisasi, jaring dengan instrumen dilepas dengan pegangan samping dengan kait khusus, dan instrumen di dalamnya diambil dengan pinset atau penjepit steril, yang direbus bersama dengan instrumen lainnya.

Sterilisasi uap dilakukan dengan dua cara: 1) uap di bawah tekanan; 2) uap yang mengalir.

Sterilisasi uap bertekanan diproduksi dalam autoklaf. Metode sterilisasi ini didasarkan pada pemaparan bahan yang disterilkan pada uap air jenuh pada tekanan di atas atmosfer. Sebagai hasil dari sterilisasi tersebut, baik mikroorganisme vegetatif maupun spora mati dalam satu kali perawatan.

Autoklaf (Gbr. 12) adalah ketel besar, bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam, tertutup rapat dengan penutup, yang disekrup erat ke ketel dengan baut berengsel. Diameter lain yang lebih kecil, yang disebut ruang sterilisasi, dimasukkan ke dalam ketel bagian luar. Benda-benda yang akan disterilkan ditempatkan pada ruangan ini. Di antara kedua boiler terdapat ruang kosong yang disebut water-steam chamber. Air dialirkan ke dalam ruangan ini melalui corong yang dipasang di bagian luar sampai ketinggian tertentu yang ditandai pada tabung pengukur air khusus. Ketika air direbus dalam ruang uap air, uap dihasilkan. Ruang sterilisasi dilengkapi dengan keran keluar dengan katup pengaman yang memungkinkan uap keluar ketika tekanan meningkat di atas tingkat yang diperlukan. Pengukur tekanan digunakan untuk menentukan tekanan yang dibuat di ruang sterilisasi.

Beras. 12. Diagram autoklaf. M - pengukur tekanan; PC - katup pengaman; B - corong untuk air; K 2 - keran untuk mengeluarkan air; K 3 - katup untuk pelepasan uap

Tekanan atmosfer normal (760 mm Hg) dianggap nol. Ada hubungan tertentu antara pembacaan pengukur tekanan dan suhu (Tabel 2).

Saat ini, terdapat autoklaf dengan kontrol otomatis mode pengoperasian. Selain pengukur tekanan biasa, mereka dilengkapi dengan pengukur tekanan kontak listrik, yang mencegah peningkatan tekanan di atas nilai yang telah ditentukan dan dengan demikian memastikan konstan suhu yang diinginkan dalam autoklaf.

Uap bertekanan mensterilkan berbagai media nutrisi (kecuali yang mengandung protein asli), cairan (larutan natrium klorida isotonik, air, dll.); perangkat, terutama yang memiliki bagian karet.

Suhu dan lamanya autoklaf media nutrisi ditentukan oleh komposisinya yang ditentukan dalam resep pembuatan media nutrisi. Misalnya media sederhana (agar pepton daging, kaldu pepton daging) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm). Namun, pada suhu ini tidak mungkin untuk mensterilkan media yang mengandung protein asli, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah dengan pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan secara fraksional pada suhu 100°C atau dalam autoklaf pada suhu 112°C (0,5 atm) selama 10-15 menit. Berbagai cairan, peralatan dengan selang karet, sumbat, lilin bakteri dan filter disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm).

Perhatian! Bahan yang terinfeksi juga dinetralkan dalam autoklaf. Gelas dan tabung reaksi yang berisi kultur mikroorganisme ditempatkan dalam ember atau tangki logam khusus yang tutupnya berlubang untuk penetrasi uap dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 126 ° C (1,5 atm) selama 1 jam.Instrumen disterilkan dengan cara yang sama setelah bekerja dengan bakteri , membentuk perselisihan.

Hanya orang yang terlatih khusus yang diperbolehkan bekerja dengan autoklaf, yang harus secara ketat dan akurat mengikuti aturan yang ditentukan dalam petunjuk yang disertakan dengan perangkat.

Teknik autoklaf. 1. Sebelum bekerja, periksa kemudahan servis semua bagian dan penggilingan keran.

2. Air (disuling atau direbus untuk mencegah pembentukan kerak) dialirkan melalui corong yang dipasang di luar ketel hingga tanda paling atas pada gelas meteran air. Keran di bawah corong ditutup.

3. Bahan yang akan disterilkan ditempatkan dalam ruang sterilisasi pada jaring khusus. Barang-barang tidak boleh dimuat terlalu rapat, karena uap harus mengalir bebas di antara barang-barang tersebut, jika tidak maka barang-barang tersebut tidak akan memanas hingga mencapai suhu yang diperlukan dan mungkin tetap tidak steril.

4. Gasket karet pada tutupnya digosok dengan kapur agar penyegelannya lebih baik.

5. Tutupnya ditutup dan dibaut ke badan autoklaf, dan bautnya disekrup berpasangan melintang.

6. Buka sepenuhnya katup keluar yang menghubungkan ruang sterilisasi dengan udara luar, dan mulailah memanaskan autoklaf. Autoklaf biasanya dipanaskan menggunakan gas atau listrik.

Ketika autoklaf dipanaskan, air mendidih, uap yang dihasilkan naik di antara dinding ketel dan melalui lubang khusus di dinding ketel bagian dalam (lihat Gambar 12), memasuki ruang sterilisasi dan keluar melalui katup keluar yang terbuka. Pertama, uap keluar bersama udara di dalam autoklaf. Semua udara harus dikeluarkan dari autoklaf, jika tidak, pembacaan pengukur tekanan tidak akan sesuai dengan suhu di dalam autoklaf.

Munculnya aliran uap yang kuat dan terus menerus menunjukkan pembuangan udara sepenuhnya dari autoklaf; Setelah itu, katup keluar ditutup dan tekanan di dalam autoklaf mulai meningkat secara bertahap.

7. Awal sterilisasi dianggap saat pembacaan pengukur tekanan mencapai nilai yang ditentukan. Pemanasan diatur agar tekanan dalam autoklaf tidak berubah dalam jangka waktu tertentu.

8. Setelah waktu sterilisasi habis, pemanasan autoklaf dihentikan, dan uap dikeluarkan melalui katup keluar. Saat jarum pengukur tekanan turun ke nol, buka tutupnya. Untuk menghindari luka bakar akibat sisa uap di dalam autoklaf, tutup autoklaf harus dibuka ke arah Anda.

Tingkat suhu dalam autoklaf, yaitu kebenaran pembacaan pengukur tekanan, dapat diperiksa. Untuk melakukan ini, gunakan berbagai zat yang memiliki titik leleh tertentu: antipirin (113° C), resorsinol dan belerang (119° C), asam benzoat (120° C). Salah satu zat ini dicampur dengan pewarna dalam jumlah yang dapat diabaikan (muchsin atau methylene blue) dan dituangkan ke dalam tabung kaca, yang ditutup rapat dan ditempatkan pada posisi vertikal di antara bahan yang akan disterilkan. Jika suhunya mencukupi, zat akan meleleh dan mengubah warna pewarna yang sesuai.

Untuk memeriksa efektivitas sterilisasi, tabung reaksi dengan kultur spora yang diketahui dimasukkan ke dalam autoklaf. Setelah autoklaf, tabung dipindahkan ke termostat selama 24-48 jam, dicatat ada atau tidaknya pertumbuhan. Kurangnya pertumbuhan menunjukkan pengoperasian perangkat yang benar.

Sterilisasi dengan uap yang mengalir diproduksi di peralatan Koch. Cara ini digunakan bila benda yang disterilkan berubah pada suhu di atas 100°C. Media nutrisi yang mengandung urea, karbohidrat, susu, kentang, agar-agar, dan lain-lain disterilkan dengan uap yang mengalir.

Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi (untuk mengurangi perpindahan panas) dengan kain kempa atau asbes. Silinder ditutup dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang untuk keluarnya uap. Di dalam silinder ada dudukan, setinggi tempat air dituangkan. Sebuah ember berlubang ditempatkan pada dudukan tempat bahan yang akan disterilkan ditempatkan. Peralatan Koch dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Waktu sterilisasi dihitung dari saat uap keluar secara kuat di tepi tutup dan dari saluran keluar uap. Sterilkan selama 30-60 menit. Di akhir sterilisasi, pemanasan dihentikan. Keluarkan ember berisi bahan dari peralatan dan biarkan pada suhu kamar hingga keesokan harinya. Pemanasan dilakukan selama 3 hari berturut-turut pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Selama pemanasan pertama, bentuk mikroba vegetatif mati, sedangkan bentuk spora tetap terjaga. Dalam sehari, spora berhasil berkecambah dan berubah menjadi bentuk vegetatif, yang mati pada hari kedua sterilisasi. Karena ada kemungkinan sebagian spora tidak sempat berkecambah, bahan disimpan selama 24 jam lagi, kemudian dilakukan sterilisasi ketiga. Sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam peralatan Koch tidak diperlukan kontrol khusus, karena sterilitas media nutrisi yang disiapkan merupakan indikator pengoperasian perangkat yang benar. Anda juga dapat mensterilkan dengan uap yang mengalir dalam autoklaf dengan tutupnya dibuka dan katup keluarnya terbuka.

Pertanyaan kontrol

1. Media nutrisi apa yang disterilkan dengan uap?

2. Apa itu alat sterilisasi dan bagaimana cara kerjanya?

3. Mengapa air sulingan harus digunakan saat mensterilkan dengan cara direbus?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian autoklaf.

5. Apa yang disterilkan dalam autoklaf?

6. Apa yang menjadi kontrol untuk sterilisasi yang benar selama autoklaf?

7. Apa yang dimaksud dengan sterilisasi uap mengalir?

8. Jelaskan struktur peralatan Koch.

9. Apa tujuan sterilisasi fraksional?

Latihan

Isi formulirnya.

Sterilisasi fraksional juga dapat dilakukan dengan koagulan Koch.

Koagulan Koch digunakan untuk mengentalkan whey dan media kultur telur, dan bersamaan dengan pemadatan media, dilakukan sterilisasi.

koagulan Koch adalah kotak logam datar berdinding ganda yang bagian luarnya dilapisi bahan isolasi termal. Air dialirkan ke ruang antar dinding melalui lubang khusus yang terletak di bagian atas dinding luar. Lubang ditutup dengan sumbat tempat dimasukkannya termometer. Perangkat ditutup dengan dua penutup: kaca dan logam. Melalui tutup kaca Anda dapat mengamati proses koagulasi. Tabung reaksi yang berisi media diletakkan pada bagian bawah koagulator dengan posisi miring.

Koagulator dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Media disterilkan satu kali pada suhu 90°C selama 1 jam atau secara fraksional - 3 hari berturut-turut pada suhu 80°C selama 1 jam.

Tyndallisasi* - sterilisasi fraksional pada suhu rendah - digunakan untuk zat yang mudah hancur dan terdenaturasi pada suhu 60°C (misalnya cairan protein). Bahan yang akan disterilkan dipanaskan dalam penangas air atau dalam alat khusus dengan termostat pada suhu 56-58°C selama satu jam selama 5 hari berturut-turut.

* (Nama metode sterilisasi diambil dari nama Tyndall yang mengusulkannya.)

Pasteurisasi- sterilisasi pada suhu 65-70 ° C selama 1 jam, diusulkan oleh Pasteur untuk menghancurkan mikroba non-spora. Susu, anggur, bir, jus buah, dan produk lainnya dipasteurisasi. Susu dipasteurisasi untuk menghilangkan asam laktat dan bakteri patogen (brucella, mycobacterium tuberkulosis, shigella, salmonella, staphylococcus, dll). Saat mempasteurisasi bir, jus buah, dan anggur, mikroorganisme penyebab berbagai jenis fermentasi mati. Makanan yang dipasteurisasi sebaiknya disimpan di lemari es.

Pertanyaan kontrol

1. Apa tujuan dan struktur koagulator Koch?

2. Apa saja metode sterilisasi pada mesin pembekuan?

3. Apa yang dimaksud dengan tyndalisasi?

4. Apa itu pasteurisasi?

Sterilisasi iradiasi ultraviolet

Sterilisasi dengan sinar UV dilakukan dengan menggunakan instalasi khusus- lampu bakterisida. Sinar UV memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga spora. Iradiasi UV digunakan untuk mensterilkan udara di rumah sakit, ruang operasi, fasilitas penitipan anak, dll. Di laboratorium mikrobiologi, sebuah kotak diberi sinar UV sebelum digunakan.

Pertanyaan kontrol

1. Sifat apa yang dimiliki sinar ultraviolet?

2. Dalam kasus apa sterilisasi menggunakan radiasi ultraviolet digunakan?

Sterilisasi mekanis menggunakan filter bakteri

Sterilisasi filtrasi digunakan jika benda yang disterilkan berubah saat dipanaskan. Filtrasi dilakukan dengan menggunakan filter bakteri yang terbuat dari berbagai bahan berpori halus. Pori-pori filter harus cukup kecil (hingga 1 mikron) untuk memastikan retensi mekanis bakteri, oleh karena itu beberapa penulis menyebut filtrasi sebagai metode mekanis sterilisasi.

Metode filtrasi digunakan untuk mensterilkan media nutrisi yang mengandung protein, serum, dan beberapa antibiotik, serta untuk memisahkan bakteri dari virus, fag, dan eksotoksin.

Dalam praktik mikrobiologi, filter asbes Seitz, filter membran, dan filter Chamberlant dan Berkefeld (lilin) digunakan.

Filter Seitz adalah cakram yang terbuat dari campuran asbes dan selulosa. Ketebalannya 3-5 mm, diameter 35-140 mm. Industri dalam negeri memproduksi filter dengan dua merek: “F” (penyaringan) - menahan partikel tersuspensi tetapi memungkinkan bakteri melewatinya; "SF" (sterilisasi) - dengan pori-pori lebih kecil, menahan bakteri, tetapi memungkinkan virus masuk. Pelat asbes yang kusut, serta pelat yang pecah dan retak, tidak cocok untuk pekerjaan.

Filter membran terbuat dari nitroselulosa. Itu adalah disk putih Tebal 0,1 mm dan diameter 35 mm. Tergantung pada ukuran pori-pori, mereka diberi nomor 1, 2, 3, 4 dan 5 (Tabel 3).

Filter No.1 paling cocok untuk sterilisasi.Selain yang terdaftar, mereka juga memproduksi apa yang disebut pra-filter, yang dirancang untuk membebaskan cairan yang disaring dari partikel besar yang terkandung di dalamnya.

Filter Chamberlant dan Berkefeld (lilin) adalah silinder berongga, ditutup di salah satu ujungnya. Lilin Chamberlant terbuat dari kaolin yang dicampur dengan pasir dan kuarsa. Mereka distandarisasi berdasarkan ukuran pori dan diberi nama L 1, L 2, L 3 ... L 13. Filter Berkefeld (lilin) dibuat dari tanah infusor, sesuai dengan ukuran pori-porinya, diberi nama V, N, W, yang sesuai dengan diameter pori 3-4, 4-7, 8-12 mikron.

Pekerjaan dengan filter bakteri dilakukan sebagai berikut. Filter harus diamankan dalam dudukan khusus, yang dimasukkan ke dalam penerima filter. Penerimanya biasanya berupa labu Bunsen. Penahannya, biasanya terbuat dari baja tahan karat, terdiri dari dua bagian: bagian atas, berbentuk silinder tanpa alas, dan bagian bawah, bagian penyangga yang diakhiri dengan tabung. Filter Seitz dengan permukaan kasar menghadap ke atas ditempatkan pada jaring logam dan dijepit erat dengan sekrup di antara bagian atas dan dasar pemegang. Filter yang terpasang dipasang pada sumbat karet yang dimasukkan ke dalam leher labu Bunsen. Sebuah kapas dimasukkan ke dalam tabung keluar labu, yang dihubungkan ke pompa vakum. Instalasi yang telah disiapkan dibungkus kertas dan disterilkan dalam autoklaf pada tekanan 1 atm selama 20-30 menit. Seluruh perangkat yang dirakit juga disebut filter Seitz (Gbr. 13).

Sesaat sebelum penyaringan, ujung keluar labu Bunsen dihubungkan dengan tabung karet ke pompa jet minyak atau air. Persimpangan berbagai bagian diisi dengan parafin untuk membuat segel yang rapat. Cairan yang disaring dituangkan ke dalam silinder peralatan dan pompa dihidupkan, menciptakan ruang hampa di penerima. Akibat perbedaan tekanan yang dihasilkan, cairan yang disaring melewati pori-pori filter menuju penerima, dan mikroba tetap berada di permukaan filter.

Sebelum digunakan, filter membran disterilkan dengan cara direbus dalam air suling. Agar filter tidak menggulung, filter terlebih dahulu dimasukkan ke dalam air suling, dipanaskan hingga suhu 50-60 ° C, dan direbus dengan api kecil selama 30 menit, ganti air 2-3 kali. Penahan filter dan penerima disterilkan terlebih dahulu, dan perangkat dipasang dalam kondisi aseptik. Untuk menghindari robeknya filter membran pada jaring logam, letakkan lingkaran kertas saring steril di bawahnya. Kemudian, dengan menggunakan pinset steril yang ujungnya halus, ambil filter membran dari alat sterilisasi dan letakkan di atas kisi-kisi penyangga dengan permukaan mengkilat menghadap ke bawah.

Lilin (Chamberlant) yang disterilkan dalam autoklaf dihubungkan melalui tabung karet ke penerima dan diturunkan ke dalam bejana (biasanya silinder) dengan cairan yang disaring. Filtrasi terjadi menggunakan pompa vakum. Filtrat steril masuk ke penerima, dan bakteri tertahan di pori-pori lilin.

Filter membran dan asbes dirancang untuk sekali pakai. Setelah digunakan, lilin direbus dalam air keran dan kemudian dikalsinasi dalam tungku peredam.

Sebelum digunakan selanjutnya, lilin diperiksa integritasnya. Lilin diturunkan ke dalam bejana berisi air dan udara dilewatkan. Jika muncul gelembung udara pada permukaan lilin, berarti telah terbentuk retakan pada lilin dan tidak dapat digunakan.

Pertanyaan kontrol

1. Apa metode sterilisasi filter? Apa yang disterilkan dengan metode ini?

2. Filter bakteri apa yang anda ketahui? Bagaimana alat penyaringan dipasang, kondisi apa yang harus diperhatikan?

Metode kimia

Jenis sterilisasi ini digunakan sampai batas tertentu, dan berfungsi terutama untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum).

Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 ° C (pengawet menguap).

Untuk mengawetkan vaksin dan serum, digunakan merthiolate, asam borat, formaldehida, dll.

Sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini digunakan untuk membudidayakan virus.

Pertanyaan kontrol

1. Apa itu sterilisasi kimia dan kapan digunakan?

2. Apa yang dimaksud dengan sterilisasi biologis?

Metode utama sterilisasi disajikan dalam tabel. 4.

1 (Sterilisasi tidak lengkap: spora tetap berada dalam bahan yang disterilkan.)

2 (Sterilisasi tidak lengkap: virus tetap berada dalam bahan yang disterilkan.)

Disinfeksi

Dalam praktik mikrobiologi, berbagai disinfektan digunakan: larutan fenol 3-5%, larutan Lysol 5-10%, larutan kloramin 1-5%, larutan hidrogen peroksida 3-6%, larutan formaldehida 1-5%, larutan merkuri klorida dalam pengenceran 1: 1000 (0,1%), alkohol 70°, dll.

Bahan patologis bekas (nanah, feses, urin, dahak, darah, cairan serebrospinal) didesinfeksi sebelum dialirkan ke saluran pembuangan. Disinfeksi dilakukan dengan pemutih kering atau larutan kloramin 3-5%.

Pipet (lulus dan Pasteur), spatula kaca, kaca objek dan kaca penutup yang terkontaminasi bahan patologis atau kultur mikroorganisme direndam dalam stoples kaca dengan larutan fenol atau hidrogen peroksida 3% selama sehari.

Setelah selesai bekerja dengan bahan infeksius, teknisi laboratorium harus merawatnya dengan larutan desinfektan. tempat kerja dan tangan. Permukaan meja kerja dilap dengan kapas yang dibasahi dengan larutan fenol 3%. Tangan didesinfeksi dengan larutan kloramin 1%. Untuk melakukan ini, gunakan bola kapas atau kain kasa basahi dengan larutan desinfektan dan usap tangan kiri, lalu tangan kanan, lalu cuci tangan dengan air hangat dan sabun.

Pemilihan disinfektan, konsentrasi dan lama pemaparan (exposure) bergantung pada sifat biologis mikroba dan lingkungan di mana disinfektan akan bersentuhan dengan mikroorganisme patogen. Misalnya, merkuri klorida, fenol, dan alkohol tidak cocok untuk mendisinfeksi substrat protein (nanah, darah, dahak), karena di bawah pengaruhnya terjadi koagulasi protein, dan protein yang terkoagulasi melindungi mikroorganisme dari efek disinfektan.

Saat mendisinfeksi bahan yang terinfeksi mikroorganisme bentuk spora, digunakan larutan kloramin 5%, larutan kloramin aktif 1-2,5%, larutan formalin 5-10%, dan zat lainnya.

Disinfeksi yang dilakukan sepanjang hari selama bekerja disebut desinfeksi saat ini, dan pada akhir pekerjaan disebut final.

Disinfektan dan instruksi untuk menyiapkan solusi kerja darinya. Kapur klorida berbentuk bubuk kental berwarna putih dengan bau klorin yang menyengat; tidak larut sempurna dalam air. Efek bakterisida tergantung pada kandungan klorin aktif, yang jumlahnya berkisar antara 28 hingga 36%. Klorin yang mengandung kurang dari 25% klorin aktif tidak cocok untuk disinfeksi.

Jika disimpan dengan tidak benar, pemutih akan terurai dan kehilangan sebagian klorin aktifnya. Penguraian didorong oleh panas, kelembapan, dan sinar matahari, jadi pemutih harus disimpan di tempat yang kering dan gelap, dalam wadah tertutup rapat.

Pemutih kering digunakan untuk mendisinfeksi kotoran manusia dan hewan (dengan takaran 200 g per 1 liter tinja dan 10 g per 1 liter urin).

Persiapan larutan pemutih asli 10% yang telah diklarifikasi. Ambil 1 kg pemutih kering, masukkan ke dalam ember enamel dan haluskan. Lalu tuangkan air dingin hingga volume 10 liter, aduk rata, tutup dan biarkan sehari di tempat sejuk. Setelah itu, larutan klarifikasi 10% yang dihasilkan dikeringkan dengan hati-hati dan disaring melalui beberapa lapis kain kasa atau disaring melalui kain tebal. Simpan dalam botol kaca gelap, ditutup dengan sumbat kayu, di tempat sejuk tidak lebih dari 10 hari. Larutan kerja dengan konsentrasi yang diperlukan disiapkan dari larutan stok segera sebelum digunakan. Jumlah larutan basa yang diperlukan untuk menyiapkan larutan pemutih yang diklarifikasi 0,2-10% diberikan dalam tabel. 5.

Konsentrasi larutan pemutih yang diklarifikasi dari 0,2 hingga 10% dipilih tergantung pada sifat objek yang didesinfeksi dan ketahanan patogen.

Kloramin adalah zat kristal berwarna putih atau kekuningan, mengandung 24-28% klorin aktif. Ini larut dengan baik dalam air pada suhu kamar, sehingga larutan disiapkan segera sebelum disinfeksi. Gunakan larutan kloramin 0,2-10%. Hubungan antara persentase konsentrasi larutan dan jumlah kloramin dalam gram per 1 dan 10 liter diberikan dalam tabel. 6.

Larutkan kloramin dalam gelas atau piring berenamel. Saat menyimpan larutan kloramin dalam wadah kaca gelap dengan penutup tanah, aktivitasnya bertahan hingga 15 hari.

Kloramin yang diaktifkan. Sifat desinfektan kloramin ditingkatkan dengan menambahkan aktivator ke dalamnya dengan perbandingan 1:1 atau 1:2. Senyawa amonium digunakan sebagai aktivator - amonium klorida, sulfat, amonium nitrat. Kloramin aktif digunakan pada konsentrasi 0,5, 1 dan 2,5%. Mereka disiapkan segera sebelum digunakan. Kloramin dan garam amonium ditimbang secara terpisah. Pertama, kloramin dilarutkan dalam air, kemudian ditambahkan aktivator.

Keuntungan larutan kloramin teraktivasi dibandingkan larutan konvensional adalah penambahan aktivator mempercepat pelepasan klor aktif. Oleh karena itu, obat tersebut mempunyai efek merugikan tidak hanya pada bentuk vegetatif mikroorganisme, tetapi juga pada spora mereka. Kloramin aktif digunakan dalam konsentrasi yang lebih rendah dan paparan yang lebih sedikit.

Fenol (asam karbol) adalah kristal berbentuk jarum tidak berwarna dengan bau khas yang menyengat. Saat terkena cahaya, udara, dan kelembapan, kristal memperoleh warna merah tua. Simpan di bank-bank yang tutup terbuat dari kaca berwarna gelap dan di tempat terlindung dari cahaya.

Fenol larut dalam air, alkohol, eter, dan minyak lemak. Memiliki higroskopisitas yang tinggi, ia menyerap kelembapan dari lingkungan dan menjadi cair. Asam karbolik cair mengandung 90% fenol kristal dan 10% air.

Gunakan larutan asam karbolik 3-5% dalam air yang dibuat dari fenol kristal dan asam karbol cair sesuai dengan skema yang diberikan dalam tabel. 7. Aktivitas fenol meningkat bila dilarutkan air panas(40-50°C).

Perhatian! Fenol kristal atau asam karbol cair, jika mengenai kulit, dapat menyebabkan iritasi, dan dalam konsentrasi tinggi - luka bakar parah. Oleh karena itu, asam karbol harus ditangani dengan sangat hati-hati. Saat menyiapkan solusi, Anda harus mengenakan sarung tangan karet atau sebagai upaya terakhir Lumasi tangan Anda dengan Vaseline.

Jika asam karbolik mengenai kulit Anda, segera bilas dengan air hangat dan sabun atau etil alkohol 40°.

Catatan. Untuk menyiapkan larutan desinfektan fenol, akan lebih mudah dan aman menggunakan asam karbol cair.

Pertanyaan kontrol

1. Disinfektan apa yang digunakan dalam praktik mikrobiologi?

2. Jelaskan penampilan dan sifat dasar pemutih, kloramin, fenol.

3. Larutan disinfektan apa yang digunakan untuk mendisinfeksi bahan yang terinfeksi mikroorganisme berbentuk spora?

Latihan

Siapkan 2 liter larutan pemutih yang berfungsi 5%; 500 ml larutan kloramin 3%, 300 ml larutan kloramin aktif 1%.

Perhatian! Sebelum Anda mulai menyiapkan solusi, buatlah perhitungan.

Termostat– alat untuk menjaga suhu konstan - digunakan untuk menumbuhkan kultur mikroorganisme. Ini adalah kabinet (Gambar 1) yang suhunya dipertahankan untuk waktu yang lama. Suhu optimal untuk reproduksi banyak mikroorganisme adalah 37 ºС. Termostat tersedia dalam jenis udara kering dan air.

Lemari pengering (oven Pasteur) digunakan untuk sterilisasi panas kering pada piring, peralatan dan bahan kering, seperti pati, kapur (Gambar 2). Bahan yang akan disterilkan terlebih dahulu dibungkus dengan kertas dan diletakkan di dalam lemari agar tidak menyentuh dinding. Sterilisasi dilakukan pada suhu 160 ºС selama dua jam. Tidak disarankan untuk menaikkan suhu di atas 180 ºС: sumbat kapas dan kertas mulai rusak (berubah menjadi coklat, menjadi rapuh). Bahan yang telah disterilkan dikeluarkan setelah lemari dimatikan dan didinginkan, sebaiknya bila suhu dalam lemari sama dengan suhu ruangan.

Alat penghitung koloni(Gambar 3) - penghitung semi-otomatis yang dilengkapi dengan pena listrik perangkat pegas, dirancang untuk menghitung koloni bakteri dalam cawan Petri. Cangkir
Petri yang berisi koloni bakteri diletakkan terbalik pada kaca pemindai. Tekanan ringan pena listrik pada area dasar cawan Petri yang sesuai dengan posisi koloni meninggalkan bekas pada kaca. Dalam hal ini, dudukannya naik, sirkuit ditutup, dan pembacaan meter bertambah satu. Jumlah koloni bakteri dihitung dengan menghitung selisih pembacaan penghitung denyut nadi sebelum dimulainya penghitungan dan setelah penghitungan berakhir.

Autoklaf(Gambar 4) adalah peralatan berdinding tebal yang dirancang untuk mensterilkan piring dan media kultur dengan uap bertekanan. Ini adalah kuali tertutup dengan dinding logam ganda dan penutup. Ruang antar dinding (ruang uap air) diisi air. Pedalaman(ruang sterilisasi) dilengkapi dengan pengukur tekanan, katup pengaman dan keran untuk mengalirkan air dan uap. Untuk membuat segel yang rapat, autoklaf ditutup rapat dengan penutup yang dilengkapi paking karet. Digunakan untuk mensterilkan media kultur pada tekanan 0,5 hingga 1,0 MPa selama 20...30 menit.

1 – tubuh; 2 – termometer; 1 – penutup; 2 – tubuh;

3 – pintu; 4 – potensiometer; 3 – kotak roda gigi; 4 – unit kendali;

5 – sakelar sakelar; 6 – lampu; 5 – menandai; 6 – termometer

7 – lubang ventilasi

Gambar 1 - Termostat Gambar 2 - Lemari pengering

1 – meja untuk cawan Petri; 2 – pena dengan perangkat pegas;

3 – indikator penghitung; 4 – sakelar sakelar untuk menghidupkan penghitung pulsa; 5 – sakelar sakelar untuk menyalakan lampu penerangan meteran

Gambar 3 - Alat untuk menghitung koloni mikroorganisme

Sterilisasi- infertilitas; pemusnahan mikroorganisme patogen dan non-patogen dalam bentuk vegetatif dan spora pada bahan apapun.

Mempersiapkan piring untuk sterilisasi. Peralatan gelas laboratorium harus dicuci bersih dan disterilkan. Untuk mencuci, gunakan sabun atau larutan kimia deterjen. Piring baru direbus terlebih dahulu dalam larutan asam klorida 1-2% untuk menghindari pencucian kaca selanjutnya. Piring yang dicuci dengan air mengalir dibilas dengan air suling dan dikeringkan.

Tabung bakteriologis. Labu berbentuk kerucut dan matte ditutup dengan sumbat kapas, terdiri dari gulungan kapas yang dipilin rapat, ditutup dengan lapisan kain kasa. Sumbat logam berupa tutup luar juga telah dikembangkan untuk tabung reaksi bakteriologis. Perlu diingat bahwa mensterilkan sumbat kapas pada suhu tinggi menyebabkan pelepasan zat dari kapas yang menghambat pertumbuhan beberapa bakteri sensitif, seperti Brucella.

Saat memasang pipet, masukkan kapas ke ujung atas. Pipet pasteur harus memiliki kapiler yang tertutup rapat. Tiap pipet ukur dibungkus dengan selembar kertas panjang selebar 4-5 cm, dimulai dari ceratnya, secara heliks sepanjang keseluruhannya. Pipet pasteur dibungkus kertas masing-masing 10-20 lembar, tabung reaksi masing-masing 15-20 lembar. Semua jenis pipet sebelum dan sesudah sterilisasi sebaiknya disimpan dalam wadah logam khusus. Sumbat pada labu juga ditutup dengan tutup kertas.

Sebelum sterilisasi, cawan Petri yang sudah bersih dan sudah dirakit dibungkus kertas, masing-masing 3 sampai 4 lembar. Setelah sterilisasi, kertas tersebut melindungi peralatan gelas steril dari kontaminasi mikroflora.

Sebelum sterilisasi, piring ditempatkan di lemari pengering tidak terlalu rapat untuk menjamin sirkulasi udara, dan dijaga agar suhu tidak melebihi 180?C, karena pada suhu yang lebih tinggi kertas dan kapas akan hangus. Setelah sterilisasi selesai, lemari pengering tidak dibuka sampai saat itu. Hingga suhu di dalamnya turun menjadi 70-80?C, karena penurunan tajam suhu dapat menyebabkan kaca pecah.

Jika cawan dimaksudkan untuk mensterilkan media nutrisi di dalamnya dengan cara diautoklaf pada tekanan minimal 1 atm, maka cawan tersebut tidak disterilkan terlebih dahulu. Saat mensterilkan media dengan uap yang mengalir atau dalam autoklaf dengan tekanan tidak lebih dari 0,5 atm. Wadah steril harus digunakan.

Sterilisasi dengan udara panas kering. Metode tersebut digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas yang bersih. Untuk tujuan ini, oven Pasteur digunakan - lemari pengering khusus dengan dinding ganda. Bagian luarnya dilapisi bahan tahan panas. Di bagian atas ada termometer. Antara lapisan tahan panas dan bagian dalam tubuh logam Elemen pemanas listrik otomatis ditempatkan di bagian bawah. Saat lemari pengering dihidupkan, udara di dalamnya memanas. Setelah suhu yang disetel tercapai, waktu mulai sterilisasi dicatat. Cara sterilisasi: pada suhu 155-160?C - pemaparan selama 2 jam, pada 165-170?C - 1-1,5 jam, pada 180?C - 1 jam Setelah waktu sterilisasi berakhir, pemanasan dihentikan.

Autoklaf. Ini adalah sterilisasi uap di bawah tekanan yang dikombinasikan dengan suhu tinggi peralatan khusus- autoklaf. Ketika uap jenuh bertemu dengan benda yang lebih dingin, uap tersebut mengembun menjadi air, melepaskan sejumlah besar panas. Selain itu, volume uap berkurang, sehingga memudahkan penetrasi ke bagian dalam bahan yang disterilkan. Prasyaratnya adalah pasokan uap yang benar-benar jenuh, sehingga kontaknya dengan benda dingin langsung menyebabkan kondensasi dan pemanasan. Industri ini memproduksi autoklaf vertikal dan horizontal.

Autoklaf vertikal adalah kuali logam silinder berdinding ganda, ditutup dengan penutup. Air dialirkan ke sela-sela dinding melalui keran khusus dengan corong hingga ketinggian tertentu. Dinding bagian dalam ketel dilengkapi dengan lubang di bagian atas dan keran di bagian bawah, yang melaluinya, ketika air dipanaskan, uap akan menggantikan udara dari ketel. Bingkai pelindung logam ditempatkan di atas autoklaf, dan harus ada ruang kosong antara autoklaf dan autoklaf itu sendiri. Autoklaf dipanaskan dengan menghubungkan ke jaringan listrik.

Autoklaf diisi dengan bahan yang akan disterilkan, tutup dan keran tempat menuangkan air ditutup, dan keran bawah dibiarkan terbuka untuk sementara. Air panas di antara dinding autoklaf mendidih, uap yang dihasilkan naik dan melewati lubang atas dinding bagian dalam ke dalam ketel, mendorong udara keluar melalui keran terbuka bawah. Ketika semua udara dipindahkan dan uap mulai keluar secara merata, katup bawah ditutup. Akibatnya tekanan uap di dalam autoklaf meningkat. Awal sterilisasi dianggap saat tekanan mencapai nilai tertentu (menurut pengukur tekanan). Panas disesuaikan selama sterilisasi, menjaga tekanan uap pada tingkat yang sama. Jika tekanan di dalam autoklaf meningkat secara berlebihan, terdapat katup pengaman yang melaluinya kelebihan uap secara otomatis akan keluar.

Ketika tekanan uap meningkat, suhu dalam autoklaf juga meningkat.

Pengukur tekanan menunjukkan tekanan uap tanpa memperhitungkan lingkungan sekitarnya tekanan atmosfir(760 mmHg). Setelah waktu sterilisasi habis, autoklaf dimatikan. Setelah pendinginan, ketika pembacaan pengukur tekanan nol, buka katup untuk mengeluarkan uap.

Autoklaf horizontal berbeda dengan autoklaf vertikal dalam desainnya, namun prinsip pengoperasiannya sama.

sterilisasi virologi hewan patologis

Contoh formulir yang harus diisi pada saat pengiriman bahan patologis ke laboratorium

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (oven pengering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet menggunakan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan pengatur untuk memastikan suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Panas kering digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Piring yang disiapkan untuk sterilisasi dimasukkan secara longgar ke dalam oven untuk memastikan pemanasan bahan yang disterilkan secara seragam dan andal. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas, atur suhu menjadi 160-165 ° C dan sterilkan pada suhu tersebut selama 1 jam.Setelah sterilisasi selesai, matikan api, tetapi jangan membuka pintu lemari sampai oven sudah dingin; Jika tidak, udara dingin yang masuk ke dalam kabinet dapat menyebabkan keretakan pada peralatan masak panas.

Sterilisasi dalam oven Pasteur dapat dilakukan pada suhu dan paparan (waktu sterilisasi) yang berbeda-beda (Tabel 1).

Tabel 1. Cara sterilisasi

Untuk menentukan suhu di dalam oven Pasteur dapat menggunakan sukrosa atau gula pasir yang menjadi karamel pada suhu 165-170°C.

Mempersiapkan peralatan gelas laboratorium untuk sterilisasi dalam oven Pasteur. Sebelum sterilisasi, peralatan gelas laboratorium (cawan petri, pipet ukur dan pasteur, vial, labu, tabung reaksi) harus dicuci bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan kertas, jika tidak setelah sterilisasi dapat terkontaminasi lagi dengan bakteri udara.

Cawan petri dibungkus dengan kertas satu atau lebih potongan sekaligus atau ditempatkan dalam wadah logam khusus.

Catatan. Jika garis batas pada pipet tidak terlihat jelas, maka pipet dikembalikan sebelum sterilisasi. Cat minyak dioleskan ke pipet dan, tanpa membiarkan cat mengering, bubuk barium sulfat digosokkan ke dalamnya menggunakan kain. Setelah itu, hilangkan sisa cat dengan lap, yang hanya tersisa di takik kelulusan. Pipet yang dirawat dengan cara ini harus dibilas.

Ujung tajam pipet Pasteur disegel dalam api pembakar dan dibungkus kertas, 3-5 lembar sekaligus. Pipet pasteur harus dibungkus dengan hati-hati agar tidak merusak ujung kapiler yang tertutup rapat.

Catatan. Pada suhu tinggi, kertas yang membungkus cangkir dan pipet, serta kapas menjadi kuning dan bahkan dapat hangus, sehingga setiap jenis kertas baru yang diterima di laboratorium harus diuji pada kondisi suhu yang dapat diterima.

Pertanyaan kontrol

1. Apa yang dimaksud dengan istilah sterilisasi?

2. Bagaimana sterilisasi dilakukan?

3. Apa yang disterilkan dengan cara kalsinasi di atas api?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian oven Pasteur.

5. Apa yang disterilkan dalam oven Pasteur?

6. Bagaimana peralatan gelas disiapkan untuk sterilisasi?

7. Mengapa media nutrisi dan benda karet tidak bisa disterilkan dalam oven Pasteur?

Latihan

Siapkan cawan Petri, pipet ukur, pipet Pasteur, tabung reaksi, labu dan vial untuk sterilisasi.

1. menyala(dari lat. flamma - api dan fr. flamb é - bakar) - sterilisasi dengan mengapur benda logam atau kaca kecil dalam nyala api. Dengan cara ini, loop bakteriologis, pinset logam, spatula dan tabung kaca, slide kaca, dll disterilkan dengan suhu nyala sekitar 1000ºC. Ketika dikalsinasi, semua mikroorganisme (bentuk vegetatif dan spora) terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal.

2. Mendidih. Ini adalah salah satu metode sterilisasi yang paling sederhana. Ini dilakukan dalam alat sterilisasi - kotak logam persegi panjang dengan penutup dan jaring di bagian bawah untuk menempatkan barang-barang yang disterilkan. Tuang air ke dalamnya dan panaskan hingga mendidih (pemanas listrik atau di atas api). Perebusan dapat berlangsung dari 15-30 menit hingga 2 jam pada suhu sekitar 100 ºС. Sterilkan benda logam atau kaca kecil - jarum suntik, jarum suntik, tabung kaca, dll. Dalam hal ini, mikroorganisme bentuk vegetatif dan beberapa spora mati. Dipraktekkan juga untuk melepuh bahan yang disterilkan dengan air mendidih.

3. Sterilisasi panas kering. Diproduksi dengan udara panas dalam oven atau oven Pasteur. Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang dilapisi asbes di bagian luar untuk insulasi termal. Di dalam kabinet ada rak logam dengan lubang untuk meletakkan bahan yang akan disterilkan. Pemanas listrik. Sterilisasi dilakukan pada suhu 160-180 ºС selama 1-2 jam sejak tercapai suhu tersebut (dikontrol dengan termometer). Panas kering terutama digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas - cawan Petri, pipet, spatula (dibungkus kertas), serta tabung reaksi dan labu. Teknik ini dapat diandalkan - mikroorganisme non-spora dan spora mati. Dibungkus kertas dan disterilkan, bahannya bisa disimpan.

4. Sterilisasi uap mengalir. Dilakukan panas udara yang lembab dalam peralatan Koch. Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam, yang dapat berkaki dan ditutup dengan linoleum. Air secukupnya dituangkan ke dalam alat sehingga tidak mencapai langkan, di atasnya ditempatkan lingkaran logam berlubang dan bahan yang akan disterilkan diletakkan di atasnya. Alat ditutup rapat dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang di tengahnya agar uap dapat keluar dan dipanaskan di atas api. Saat air mendidih, uap air panas dengan suhu sekitar 100 ºС akan “mengalir” dalam aliran deras dari lubang di tutupnya. Mulai saat ini, waktu mulai sterilisasi dicatat. Sterilisasi dengan uap yang mengalir berlangsung antara 45 menit hingga 1,5 jam, tergantung volume bahan yang akan disterilkan. Mensterilkan media nutrisi yang tidak dapat dipanaskan di atas 100 ºС, misalnya MPG (pada suhu di atas 100 ºС mencair dan tidak mengeras). Metode sterilisasi ini tidak sepenuhnya dapat diandalkan - hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang terbunuh sepenuhnya, tetapi spora tetap terjaga. Untuk mencapai sterilisasi media yang lengkap dalam peralatan Koch, digunakan sterilisasi fraksional.

5. Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Itu dilakukan dengan uap air jenuh dalam autoklaf. Autoklaf hadir dalam desain yang berbeda. Autoklaf vertikal adalah ketel besar berdinding ganda, bagian luarnya dikelilingi oleh selubung logam, dengan penutup berengsel berat yang dibaut erat ke ketel. Di bagian bawah ketel terdapat corong dan keran yang melaluinya air dialirkan ke ruang kosong antara ketel bagian dalam dan selubung. Bahan yang akan disterilkan diletakkan di dasar ketel, tutupnya disekrup rapat, dan pemanas listrik dinyalakan. Saat air mendidih, uap masuk ke dalam ketel bagian dalam. Tekanan dalam autoklaf meningkat, dan pada saat yang sama suhu meningkat. Bila pengukur tekanan menunjukkan bahwa tekanan dalam ketel telah mencapai nilai yang ditentukan, tandai waktu mulai sterilisasi. Tekanan dipertahankan pada tingkat tertentu dengan menggunakan katup pengaman.

Biasanya dalam praktek laboratorium, sterilisasi tekanan dilakukan pada 1,5-2 atm dan suhu sekitar 115-120 ºС untuk

20-30 menit. Setelah waktu sterilisasi habis, pemanasan dihentikan, katup uap dibuka dan uap dikeluarkan. Media nutrisi MPB, MPA, peralatan gelas dengan air disterilkan dengan uap bertekanan. berpakaian, instrumen bedah, dll. Autoklaf adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal yang membunuh semua bentuk mikroorganisme, bahkan spora yang paling resisten sekalipun.

6. Pasteurisasi. Metode sterilisasi parsial ini dinamai ilmuwan Perancis L. Pasteur yang mengusulkannya. Caranya, cairan yang dituangkan ke dalam wadah steril dipanaskan dalam penangas air dengan suhu 60-90 ºС selama

10-30 menit. Cocok untuk media cair yang berubah warna karakteristik fisikokimia pada suhu tinggi. Mereka mempasteurisasi susu, krim, anggur, bir, jus, dll. Pada saat yang sama, vitamin dan rasa produk tetap terjaga. Produk yang dipasteurisasi tidak dapat disimpan dalam jangka waktu lama, karena dengan metode sterilisasi ini hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang mati, sedangkan spora tetap ada. Dalam praktik laboratorium, metode ini digunakan terutama untuk memisahkan spesies pembentuk spora dari spesies yang tidak membentuk spora.

7. Sterilisasi fraksional. Hal ini didasarkan pada pengolahan bahan yang akan disterilkan dalam beberapa tahap. Pecahan dapat berupa perebusan atau sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam alat Koch. Biasanya sterilisasi dilakukan selama 3 hari, 30 menit setiap hari, dengan menggunakan salah satu metode yang ditunjukkan, dan saat istirahat, media dibiarkan pada suhu kamar. Hal ini dilakukan untuk memicu pertumbuhan spora menjadi bentuk vegetatif dan kehancurannya selama perawatan selanjutnya, sehingga meningkatkan keandalan teknik ini.

8. Tyndalisasi. Ini adalah jenis sterilisasi fraksional (fractional pasteurization). Teknik ini dinamai ilmuwan Inggris D. Tyndall yang mengusulkannya. Dilakukan dalam penangas air pada suhu 56-58 ºС selama 1 jam, diulangi 5-7 kali setiap 24 jam.Dalam selang waktu pemanasan, bahan disimpan pada suhu kamar. Tyndallisasi dilakukan pada media nutrisi yang miskin mikroorganisme dan juga mengandung zat yang mudah hancur dan terdenaturasi pada suhu di atas 60 ºC (protein, vitamin). Ini adalah serum darah, telur, dll. Sebagai hasil dari tyndalisasi, penghancuran total mikroorganisme tercapai.