Sterilisasi suhu tinggi. Sterilisasi peralatan gelas laboratorium Metode sterilisasi kimia

Sterilisasi diwakili oleh metode fisik, kimia, mekanik dan biologis serta berbagai metode. Kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu dan metodenya tergantung pada karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya. Lamanya sterilisasi tergantung pada benda yang disterilkan, bahan sterilisasi dan dosisnya, suhu dan kelembaban lingkungan.

Metode sterilisasi fisik Metode sterilisasi fisik meliputi pengeringan, pembakaran dan kalsinasi, perebusan, pasteurisasi dan tindisasi, udara panas (panas kering), ultrasound, radiasi ultraviolet dan radioaktif, arus frekuensi tinggi, sinar matahari. Metode sterilisasi barang yang paling umum yang dapat terkena suhu tinggi adalah sterilisasi dengan api, udara panas, dan uap jenuh di bawah tekanan. Api digunakan untuk membakar benda-benda yang terinfeksi yang tidak bernilai apa pun (kertas yang tidak perlu, kertas dinding tua, kain perca, sampah), untuk mendisinfeksi dahak pasien TBC, mayat manusia dan hewan yang mati karena infeksi yang sangat berbahaya, serta untuk membakar dan mengalsinasi berbagai benda. Pembakaran dan kalsinasi banyak digunakan dalam praktik mikrobiologi untuk desinfeksi instrumen, laboratorium, dan peralatan gelas farmasi. Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah suatu metode sterilisasi dimana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel-sel vegetatif, kista dan spora mikroorganisme mati. Biasanya, loop, spatula, pipet, kaca objek dan kaca penutup, instrumen kecil dan benda terkontaminasi lainnya disterilkan dengan kalsinasi jika tidak dapat direbus. Tidak disarankan mensterilkan gunting dan pisau bedah dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam jika terkena api. Salah satu metode sterilisasi fisik yang paling sederhana dan umum digunakan dalam praktik medis adalah sterilisasi udara panas (panas kering). Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven pengering (oven Pasteur). Udara panas kering memiliki efek bakterisidal, virusisidal, sporisidal dan digunakan terutama untuk sterilisasi produk kaca (peralatan gelas laboratorium - cawan Petri, labu, pipet, tabung reaksi, dll.), serta produk logam yang dapat disterilkan dengan uap dibawah tekanan. Selain itu, panas kering digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang terbuat dari porselen dan bahan tahan panas (bedak, tanah liat putih), serta minyak mineral dan nabati, lemak, petroleum jelly, lanolin, dan lilin. Cara paling efektif untuk metode sterilisasi ini, yang menjamin kematian bentuk vegetatif dan spora, adalah suhu 160 - 180 derajat selama 15 menit. Anda tidak dapat mensterilkan bahan makanan, larutan isotonik, atau bahan yang terbuat dari karet dan bahan sintetis dengan panas kering, karena cairan akan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis akan meleleh. Sterilisasi dengan uap jenuh di bawah tekanan adalah metode yang paling andal dan paling sering digunakan untuk mensterilkan pembalut, air, beberapa obat, media kultur, peralatan lunak, instrumen, serta untuk mendisinfeksi bahan limbah yang terkontaminasi. Dalam praktik bedah, pembalut, pakaian ahli bedah, dan pakaian dalam untuk pasien yang dioperasi didesinfeksi menggunakan uap dalam autoklaf. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan di perangkat khusus - autoklaf. Autoklaf sepenuhnya menghancurkan semua mikroorganisme dan spora. Metode sterilisasi tekanan uap didasarkan pada pemanasan bahan dengan uap air jenuh pada tekanan di atas tekanan atmosfer. Kombinasi suhu tinggi dan uap menjadikan metode ini sangat efektif. Dalam hal ini, sel vegetatif dan spora mikroba mati. Spora mikroba mati dalam waktu 10 menit di bawah pengaruh uap air jenuh, dan bentuk vegetatif mati dalam waktu 1 hingga 4 menit. Kekuatan bakterisida yang tinggi dari uap jenuh disebabkan oleh fakta bahwa, di bawah pengaruh uap air di bawah tekanan, protein sel mikroba membengkak dan menggumpal, akibatnya sel mikroba mati. Efek bakterisida dari uap air jenuh ditingkatkan dengan tekanan berlebih. Sterilisasi dalam autoklaf dilakukan dalam mode yang berbeda. Jadi, media nutrisi sederhana (daging - pepton agar dan daging - kaldu pepton) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120 derajat (1 atm). Namun dengan mode ini tidak mungkin mensterilkan media yang mengandung protein, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah oleh pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan dalam autoklaf pada suhu 0,5 atm. 10 – 15 menit atau uap yang mengalir secara fraksional. Dengan menggunakan suhu tinggi, Anda dapat menghancurkan bentuk mikroorganisme patogen yang paling persisten (termasuk yang membentuk spora) tidak hanya pada permukaan benda yang didesinfeksi, tetapi juga pada kedalamannya. Inilah keuntungan besar dari suhu tinggi sebagai alat sterilisasi yang andal. Namun, beberapa barang menjadi rusak karena pengaruh suhu tinggi dan dalam kasus ini perlu menggunakan metode dan cara desinfeksi lain. Sterilisasi lengkap bahan dan benda yang tidak memungkinkan penggunaan sterilisasi suhu tinggi dicapai dengan sterilisasi berulang dengan uap air dalam peralatan Koch pada suhu tidak melebihi 100 derajat. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Intinya adalah bahwa sisa bentuk mikroba spora yang tidak terbunuh, setelah seharian dalam termostat pada suhu 37 derajat, berkecambah menjadi sel vegetatif, yang kematiannya terjadi selama sterilisasi selanjutnya dari benda ini dengan uap yang mengalir. Perawatan dengan uap cairan dilakukan tiga kali selama 30-40 menit. Memanaskan bahan satu kali pada suhu di bawah 100 derajat disebut pasteurisasi. Pasteurisasi diusulkan oleh Pasteur dan dimaksudkan terutama untuk menghancurkan sebagian besar mikroorganisme non-spora. Pasteurisasi dilakukan pada suhu 60 - 70 derajat selama 15 hingga 30 menit, pada suhu 80 derajat selama 10 hingga 15 menit. Dalam praktik mikrobiologi, pasteurisasi bahan benih sering digunakan untuk mengisolasi kultur murni mikroorganisme pembentuk spora dan untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme membentuk spora. Untuk cairan yang kehilangan rasa dan kualitas berharga lainnya bila terkena suhu tinggi (susu, jus beri dan buah, bir, media nutrisi yang mengandung karbohidrat atau urea, dll.), sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan pada suhu 50 - 60 derajat selama 15 - 33333330 menit atau pada suhu 70 - 80 derajat selama 5 - 10 menit. Dalam hal ini, mikroba dengan resistensi rata-rata mati, sementara mikroba dan spora yang lebih resisten tetap bertahan. Sterilisasi fraksional 5-6 kali lipat pada suhu 60 derajat selama 1 jam disebut tyndalisasi. Banyak produk medis yang terbuat dari bahan polimer, tidak tahan terhadap sterilisasi metode uap menurut mode yang diterima secara umum. Untuk banyak produk, karena karakteristik cairan yang dikandungnya (pengawet, obat-obatan, dan produk lainnya), tidak mungkin untuk mensterilkan menggunakan metode dan metode yang berlaku umum. Untuk produk tersebut, sistem sterilisasi individual dikembangkan untuk memastikan sterilisasi objek yang andal. Oleh karena itu, sterilisasi rotor untuk memisahkan darah menjadi fraksi-fraksi dilakukan dengan uap air pada suhu 120 derajat selama 45 menit. Sterilitas wadah pengawet dicapai pada suhu 110 derajat selama 60 menit. Perebusan adalah metode sterilisasi yang digunakan untuk menghilangkan sterilisasi jarum suntik yang dapat digunakan kembali, instrumen bedah, tabung karet, peralatan kaca dan logam. Sterilisasi dengan cara direbus dilakukan dalam alat sterilisasi. Bentuk spora dalam air mendidih akan mati setelah 20 - 30 menit. Merebus selama 45 menit banyak digunakan untuk mendisinfeksi sekret dan bahan infeksius lainnya, linen, piring, mainan, dan barang perawatan pasien. Air panas (60 - 100 derajat) dengan deterjen digunakan saat mencuci dan membersihkan untuk menghilangkan kotoran dan mikroorganisme secara mekanis. Kebanyakan sel vegetatif mati pada suhu 70 derajat setelah 30 menit. Sterilisasi filtrasi digunakan dalam kasus di mana substrat tidak tahan terhadap pemanasan, khususnya untuk media yang mengandung protein, serum, beberapa antibiotik, vitamin, dan zat yang mudah menguap. Teknik ini cukup banyak digunakan untuk mensterilkan cairan kultur, bila diperlukan untuk membebaskannya dari sel mikroba, namun untuk menjaga semua produk metabolisme yang dikandungnya tidak berubah. Metode ini melibatkan penyaringan cairan melalui filter khusus yang memiliki partisi berpori halus sehingga dapat mempertahankan sel mikroba. Dua jenis filter yang paling banyak digunakan adalah filter membran dan filter Seitz. Filter membran dibuat dari collodion, asetat, selulosa dan bahan lainnya. Filter Seitz terbuat dari campuran asbes dan selulosa. Selain itu, filter yang terbuat dari kaolin dengan campuran pasir kuarsa, tanah infusor dan bahan lainnya (“lilin” oleh Chamberlan, Berkfeld) digunakan untuk sterilisasi. Filter membran dan asbes dirancang untuk penggunaan satu kali. Dengan penyinaran ultraviolet, efek bakterisida diberikan oleh sinar dengan panjang 200 - 450 nm, yang sumbernya adalah lampu bakterisida. Dengan bantuan lampu bakterisida, udara disterilkan dengan sinar ultraviolet di institusi medis dan pencegahan, kotak laboratorium mikrobiologi, dan perusahaan Industri makanan, di kotak produksi vaksin dan serum, di ruang operasi, ruang manipulasi, fasilitas penitipan anak, dll. Sinar ultraviolet memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya dapat menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga sporanya. Sinar matahari menyebabkan matinya mikroorganisme akibat tindakannya iradiasi ultraviolet dan pengeringan. Pengeringan dengan sinar matahari mempunyai efek merugikan pada banyak jenis mikroorganisme, namun pengaruhnya hanya dangkal dan oleh karena itu sinar matahari memainkan peran pendukung dalam praktik sterilisasi. Baru-baru ini, dalam pengobatan luka dan luka bakar, pelapis yang terbuat dari polimer sintetik dan alami dalam bentuk gel telah digunakan. Film antiseptik polimer banyak digunakan untuk pengobatan luka dan luka bakar lokal. Mereka mengandung agen antimikroba spektrum luas seperti katapol, dioksidan, yodium biru, serta sorbitol yang mengandung glutaraldehid. Untuk mensterilkan film tersebut digunakan radiasi pengion dengan dosis 20,0 kGy. Selama produksi industri film dan sorben antiseptik polimer, sterilitasnya di bawah sistem sterilisasi ini dijamin sepenuhnya. Radiasi radioaktif membunuh semua jenis mikroorganisme, baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Ini banyak digunakan untuk sterilisasi di perusahaan yang memproduksi produk steril dan peralatan medis sekali pakai yang steril, untuk desinfeksi air limbah dan bahan mentah yang berasal dari hewan.

Metode sterilisasi mekanis Metode sterilisasi mekanis menghilangkan kuman dari permukaan benda. Ini termasuk mencuci, mengguncang, menyapu, menyeka basah, mengudara, ventilasi, menyedot debu, mencuci.

Metode kimia sterilisasi Plastik kini semakin banyak digunakan dalam praktik medis. Mereka digunakan dalam kedokteran gigi, bedah maksilofasial, traumatologi, ortopedi, dan bedah. Kebanyakan plastik tidak tahan terhadap metode sterilisasi panas uap di bawah tekanan dan panas kering (udara panas kering). Larutan alkohol, diosida, dan larutan terner yang digunakan untuk mensterilkan benda-benda tersebut tidak menjamin sterilitas produk yang diproses. Oleh karena itu, metode gas dan radiasi, serta larutan bahan kimia, digunakan untuk mensterilkan produk plastik. Pengenalan sejumlah besar produk yang terbuat dari bahan termolabil ke dalam praktik institusi medis berkontribusi pada pengenalan radiasi, metode gas desinfeksi dan sterilisasi dengan larutan desinfektan. Selama sterilisasi kimia, gas dan bahan dari berbagai kelompok kimia digunakan (peroksida, fenolik, mengandung halogen, aldehida, basa dan asam, surfaktan, dll.). Untuk penggunaan sehari-hari, diproduksi deterjen, pembersih, pemutihan dan sediaan lainnya yang memiliki efek antimikroba karena masuknya berbagai bahan kimia ke dalam komposisinya. Sediaan ini digunakan untuk membersihkan dan mendisinfeksi peralatan sanitasi, piring, linen, dll. Uap formaldehida (bentuk uap) dapat digunakan dalam institusi medis untuk sterilisasi produk logam keperluan medis (pisau bedah, jarum, pinset, probe, klem, kait, pemotong kawat, dll.). Sebelum disterilkan dengan uap formaldehida, produk harus dibersihkan terlebih dahulu dan dikeringkan secara menyeluruh. Saat disterilkan dengan cara apa pun secara kimia Peraturan pengolahan suatu benda tertentu tergantung pada karakteristik benda yang didisinfeksi, ketahanan mikroba, dan karakteristik sifat-sifatnya. persiapan kimia, suhu lingkungan, kelembaban dan faktor lainnya. Dengan demikian, sterilitas instrumen logam dicapai setelah lima jam penyimpanan dalam ruang tertutup dengan uap pada suhu minimal 20 derajat dan kelembaban relatif 95 - 98%; pada suhu 15 derajat, sterilitas lengkap dari benda-benda ini dicapai hanya setelah 16 jam. Aktivitas sporisidal glutaraldehid bergantung pada suhu. Tindakan optimalnya terjadi pada suhu 15 – 25 derajat. Ketika suhu naik, aktivitas sporisidal obat ini menurun. Sterilisasi kimia digunakan sampai batas tertentu. Paling sering, metode ini digunakan untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum). Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 derajat dan bahan pengawet tersebut diuapkan. Untuk mengawetkan vaksin atau serum, digunakan merthiolate, asam borat, dan formalin.

Metode sterilisasi biologis Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini banyak digunakan dalam budidaya virus.

Sterilisasi

Sterilisasi adalah sterilisasi, yaitu pembebasan menyeluruh benda-benda lingkungan dari mikroorganisme dan sporanya.

Sterilisasi dilakukan dengan berbagai cara:

1) fisik (paparan suhu tinggi, sinar UV, penggunaan filter bakteri);

2) bahan kimia (penggunaan berbagai disinfektan, antiseptik);

3) biologis (penggunaan antibiotik).

Dalam praktik laboratorium, metode sterilisasi fisik biasanya digunakan.

Kemungkinan dan kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu ditentukan oleh karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Metode fisik

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah metode sterilisasi di mana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel vegetatif dan spora mikroba mati. Biasanya, loop bakteriologis, spatula, pipet, slide dan kaca penutup, serta instrumen kecil dikalsinasi. Gunting dan pisau bedah tidak boleh disterilkan dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam saat terkena api.

Sterilisasi panas kering

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (pengeringan oven panas kering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet dengan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan regulator yang menjamin suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Cairan (media nutrisi, larutan natrium klorida isotonik, dll.), barang yang terbuat dari karet dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering, karena cairan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis meleleh.

Sterilisasi dengan cara direbus

Perebusan merupakan salah satu cara sterilisasi yang menjamin kemandulan asalkan tidak terdapat spora pada bahan yang disterilkan. Digunakan untuk memproses jarum suntik, instrumen, peralatan kaca dan logam, tabung karet, dll. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan dalam autoklaf. Metode sterilisasi ini didasarkan pada pemaparan bahan yang disterilkan pada uap air jenuh pada tekanan di atas atmosfer. Sebagai hasil dari sterilisasi tersebut, baik mikroorganisme vegetatif maupun spora mati dalam satu kali perawatan. Autoklaf (Gbr. 12) adalah ketel besar, bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam, tertutup rapat dengan penutup, yang disekrup erat ke ketel dengan baut berengsel.

Suhu dan lamanya autoklaf media nutrisi ditentukan oleh komposisinya yang ditentukan dalam resep pembuatan media nutrisi. Misalnya media sederhana (agar pepton daging, kaldu pepton daging) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm). Namun, pada suhu ini tidak mungkin untuk mensterilkan media yang mengandung protein asli, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah dengan pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan secara fraksional pada suhu 100°C atau dalam autoklaf pada suhu 112°C (0,5 atm) selama 10-15 menit. Berbagai cairan, peralatan dengan selang karet, sumbat, lilin bakteri dan filter disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm).

Sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan dalam peralatan Koch. Cara ini digunakan bila benda yang disterilkan berubah pada suhu di atas 100°C. Media nutrisi yang mengandung urea, karbohidrat, susu, kentang, agar-agar, dan lain-lain disterilkan dengan uap yang mengalir.

Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi (untuk mengurangi perpindahan panas) dengan kain kempa atau asbes. Silinder ditutup dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang untuk keluarnya uap. Di dalam silinder ada dudukan, setinggi tempat air dituangkan. Sebuah ember berlubang ditempatkan pada dudukan tempat bahan yang akan disterilkan ditempatkan. Peralatan Koch dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Waktu sterilisasi dihitung dari saat uap keluar secara kuat di tepi tutup dan dari saluran keluar uap. Sterilkan selama 30-60 menit. Di akhir sterilisasi, pemanasan dihentikan. Keluarkan ember berisi bahan dari peralatan dan biarkan pada suhu kamar hingga keesokan harinya. Pemanasan dilakukan selama 3 hari berturut-turut pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Selama pemanasan pertama, bentuk mikroba vegetatif mati, sedangkan bentuk spora tetap terjaga. Dalam sehari, spora berhasil berkecambah dan berubah menjadi bentuk vegetatif, yang mati pada hari kedua sterilisasi. Karena ada kemungkinan sebagian spora tidak sempat berkecambah, bahan disimpan selama 24 jam lagi, kemudian dilakukan sterilisasi ketiga. Sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam peralatan Koch tidak diperlukan kontrol khusus, karena sterilitas media nutrisi yang disiapkan merupakan indikator pengoperasian perangkat yang benar. Anda juga dapat mensterilkan dengan uap yang mengalir dalam autoklaf dengan tutupnya dibuka dan katup keluarnya terbuka.

Sterilisasi dengan iradiasi ultraviolet

Sterilisasi dengan sinar UV dilakukan dengan menggunakan instalasi khusus - lampu bakterisida. Sinar UV memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga spora. Iradiasi UV digunakan untuk mensterilkan udara di rumah sakit, ruang operasi, fasilitas penitipan anak, dll. Di laboratorium mikrobiologi, sebuah kotak diberi sinar UV sebelum digunakan.

Metode kimia

Jenis sterilisasi ini digunakan sampai batas tertentu, dan berfungsi terutama untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum).

Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 ° C (pengawet menguap).

Untuk mengawetkan vaksin dan serum, gunakan merthiolate. asam borat, formalin, dll.

Sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini digunakan untuk membudidayakan virus.

B. Teknologi terperinci untuk produksi whey sapi di rumah potong hewan di Lyon

Darah telah diambil dari 1.000 hewan, serumnya telah dikemas dalam botol dan didistribusikan secara gratis kepada hampir 20.000 anak.

Dengan demikian ditunjukkan bahwa produksi industri whey di rumah potong hewan sesuai dengan aturan aseptik dan peraturan sanitasi dimungkinkan.

Perusahaan seroterapi tidak memberikan jaminan tambahan - perusahaan tidak berhak melakukan otopsi pada hewan donor.

Teknologi yang digunakan dalam produksi kami mungkin tampak kurang ketat dari sudut pandang aseptik dibandingkan metode klasik. Namun keuntungannya besar dalam hal kecepatan, karena serum diproduksi sepenuhnya pada hari pengambilan darah.

Jika keadaan saat ini mendorong kami untuk memproduksi serum di rumah potong hewan, jelas bahwa ini adalah tindakan sementara, karena serum hematogen dan obat hanya dapat diproduksi di lembaga khusus.

Seleksi hewan. Di Lyon, Dr. Guier, kepala dokter hewan di rumah jagal, dan Dr. Fontenay, inspektur dokter hewan, sendiri memilih donor dari antara ternak yang dimaksudkan untuk menyediakan daging bagi kota kami. Hewan yang dipilih diberi merek di bahu kanan untuk memudahkan pengendalian lebih lanjut.

Setelah disembelih, organ hewan diperiksa dengan cermat. Diketahui bahwa otopsi adalah metode yang paling dapat diandalkan untuk mendeteksi tuberkulosis.

Operasi selanjutnya akan menunjukkan bahwa serum hewan yang sakit tidak pernah dikonsumsi.

Mengambil darah dari hewan. Di ruang pengambilan darah, sapi jantan donor dipegang erat dengan kuk otomatis.

Dokter hewan mendisinfeksi kulit dengan yodium setinggi leher hewan dan membuat sayatan di area vena jugularis dengan pisau bedah. Tusukan vena dilakukan dengan trocar yang disterilkan dengan cara direbus dalam waktu lama. Setelah darah muncul, selang karet yang diautoklaf dipasang ke trocar untuk menghubungkannya secara langsung dan secara aseptik ke defibrinator.

Teknologi defibrinasi dan metode sterilisasi defibrinator dijelaskan di bawah ini.

Dari setiap hewan diperoleh 8-10 liter darah, yang ditimbang pada timbangan yang terletak di bawah alat.

Metode sterilisasi

Untuk memudahkan pelaksanaan pengendalian sanitasi, setiap defibrinator memiliki label yang berisi data hewan donor.

Perlu dicatat bahwa pengambilan sampel darah dilakukan secara aseptik berkat sirkuit tertutup semua komponen: trocar, selang karet dan defibrinator, yang telah disterilkan sebelumnya.

Label dengan tanggal pengambilan darah menyertai darah yang dikumpulkan dari saat tusukan vena hingga diubah menjadi serum dan disimpan di lemari es.

Defibrasi darah. Di sebagian besar tempat seroterapi, darah yang dituangkan ke dalam pembuluh kaca memisahkan serum di bawah tekanan beban. Dalam kondisi seperti ini, darah yang pertama kali diperoleh dari sapi mengandung sedikit serum (kurang lebih 10%).

Oleh karena itu, pusat seroterapi di Lyon menggunakan teknologi khusus, memberikan 50% whey, dan juga dalam waktu yang lebih singkat.

Dr Merrier mampu mengembangkan metode ini sebagian setelah temuan yang dibuatnya di Royal Institute di Rotterdam dan di Serotherapeutic Institute di Milan.

Setelah darah diperoleh dari lembaga-lembaga ini, darah tersebut didefibrinasi dalam mesin steril yang menyerupai mesin pengaduk.

Dalam waktu 5 menit, darah dikumpulkan dalam wadah yang terlindung dari udara. Waktu defibrasi harus diperhatikan dengan ketat: jika tidak mencukupi, dapat terjadi koagulasi, dan jika terlalu banyak, dapat terjadi hemolisis (akibat pecahnya sel darah merah). Penting untuk menggunakan jam laboratorium yang memungkinkan Anda menandai tepat 15 menit defibrinasi.

Di bagian atas Gambar. Gambar 4 menunjukkan jumlah pengambilan darah sudah mencapai 1000 yang tercatat pada lambang Pusat.

Sentrifugasi.

Segera setelah defibrasi, alat tersebut dipindahkan ke laboratorium yang terletak beberapa meter dari ruang pengambilan darah. Isi masing-masing defibrinator diolah secara terpisah sehingga serum hewan yang ternyata sakit dapat dikeluarkan.

Darah yang tidak menggumpal setelah defibrinasi dialirkan melalui pemisah Alfa Laval (pemisah susu yang kami adaptasi untuk produksi whey).

Di bawah pengaruh gaya sentrifugal, darah dibagi menjadi beberapa bagian yang sama: bagian merah berisi bola merah, dan bagian transparan membentuk serum (fibrin tetap berada pada bilah defibrinator).

Dari seekor hewan diperoleh 8-10 liter darah atau kurang lebih 4-5 liter serum, yang dituangkan ke dalam botol Pyrex yang disterilkan pada suhu 180°C.

Label defibrinator ditempelkan pada botol, dan kartu diisi dengan nomor yang sama untuk memastikan pengendalian sanitasi.

Antiseptik khusus ditambahkan ke dalam serum, dirancang sedemikian rupa sehingga cukup aktif tanpa mengganggu transparansi dan rasa serum. Untuk 1 liter serum, tambahkan juga 100 ml larutan yang mengandung formaldehida 1:1000 dan syunuxol 1:5000.

(Di sela-sela persiapan, centrifuge didesinfeksi secara menyeluruh dengan antiseptik.)

Pada prinsipnya, fraksi merah darah harus dikembalikan ke tukang daging untuk membuat sosis darah, tetapi paling sering fraksi tersebut tetap tidak terpakai, sehingga sirup dapat dibuat darinya menggunakan teknologi yang dijelaskan di bawah ini.

Kasus khusus menyiapkan sirup darah. Sirup ini memiliki dua keunggulan: dapat memanfaatkan bagian merah darah yang tersisa setelah menerima serum, dan memiliki rasa yang enak yang disukai anak-anak.

Karena kekurangan gliserin, sulit untuk menyiapkan sirup penyimpanan jangka panjang, tetapi Anda dapat membuat produk yang sangat aktif dalam air dan memberikannya kepada anak-anak 2-3 sendok makan sehari. Tambahkan 20% pada bagian merah darah air minum dan simpan sirup di gletser sementara pengendalian sanitasi dilakukan.

Lalu tambahkan bagian yang setara Sirup gula 100% (gula dapat diperoleh dari kartu kelompok yang dituju sirup).

Ekstrak lemon atau jeruk ditambahkan ke dalam sirup untuk menetralkan rasa darah dan dituangkan ke dalam botol 250 ml.

Tyndalisasi whey.

Segera setelah sentrifugasi, yaitu kurang dari satu jam setelah pengambilan darah, serum dilisiskan pada suhu 56°C selama satu jam.

Untuk melakukan ini, ia diturunkan ke dalam penangas air dengan suhu yang dijaga secara otomatis. Tyndallisasi pada suhu ini (pada suhu yang lebih tinggi whey menggumpal) diperlukan untuk sterilisasi parsial whey, meskipun kecepatan pembuatannya sendiri merupakan jaminan asepsis.

Perlu diperhatikan bahwa setiap botol berukuran lima liter dilengkapi dengan label defibrinator asli, sehingga penomoran serum sesuai dengan penomoran hewan donor.

File kartu kendali. Kartu ini memungkinkan Anda untuk memeriksa kapan saja asal hewan donor, tahapan persiapan whey, tanggal pembotolan, serta distribusi whey.

Kontrol sanitasi. Sementara kapal disimpan di ruang pendingin, pengawas dokter hewan terlibat dalam pengendalian sanitasi hewan donor. Setelah disembelih, otopsi menyeluruh dilakukan untuk mengungkap gejala tuberkulosis sekecil apa pun.

Jika suatu penyakit terdeteksi, serum yang sesuai dapat dengan mudah ditarik. Diketahui bahwa darah setiap hewan diproses secara terpisah dan serumnya disimpan dalam botol terpisah yang diberi nomor.

Pusat seroterapi Komite Publik kebersihan masa kecil di rumah jagal Lyon

Nomor kontrol…

Whey sapi dalam liter

Kartu dan label

Kartu dan label di atas mencegah kebingungan.

Di Lyon, tindakan sanitasi sangat ketat, karena dokter hewan memilih hewan, mengambil darah, dan memeriksa daging.

Sterilisasi peralatan. Serum hewan adalah tempat berkembang biak yang sangat baik bagi mikroba dan hanya dapat disterilkan sebagian. Pada suhu di atas 56° mereka menggumpal dan menjadi keruh jika ditambahkan antiseptik yang kuat. Oleh karena itu, selama semua operasi produksi serum, diperlukan sterilitas maksimum; peralatan harus didekontaminasi sebelum digunakan.

Defibrinator individu disterilkan dengan cara berikut: malam sebelum pengambilan darah, diisi dengan larutan antiseptik, dan beberapa jam sebelum pengambilan darah, dikosongkan dari antiseptik menggunakan keran yang terletak di bagian bawah alat. Mesin sentrifugal yang digunakan untuk memproduksi serum juga diolah dengan antiseptik, termasuk di antara pemrosesan isi setiap defibrinator.

Semua peralatan gelas, termasuk wadah lima liter untuk menyimpan whey, disterilkan dalam oven listrik pada suhu 180°C.

Botol serum 250 ml juga disterilkan pada suhu 180°C. Untuk menyederhanakan pengoperasian, piring ditempatkan di dalam kotak, yang digunakan selama pembotolan dan distribusi ke masyarakat.

pengiriman bunga ke Voskresensk

Sterilisasi diwakili oleh metode fisik, kimia, mekanik dan biologis serta berbagai metode.

Kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu dan metodenya tergantung pada karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Lamanya sterilisasi tergantung pada benda yang disterilkan, bahan sterilisasi dan dosisnya, suhu dan kelembaban lingkungan.

Metode sterilisasi fisik

Metode sterilisasi metode fisik meliputi pengeringan, pembakaran dan kalsinasi, perebusan, pasteurisasi dan tindalisasi, udara panas (panas kering), ultrasound, radiasi ultraviolet dan radioaktif, arus frekuensi tinggi, sinar matahari.

Metode sterilisasi barang yang paling umum yang dapat terkena suhu tinggi adalah sterilisasi dengan api, udara panas, dan uap jenuh di bawah tekanan.

Api digunakan untuk membakar benda-benda yang terinfeksi yang tidak bernilai apa pun (kertas yang tidak perlu, kertas dinding tua, kain perca, sampah), untuk mendisinfeksi dahak pasien TBC, mayat manusia dan hewan yang mati karena infeksi yang sangat berbahaya, serta untuk membakar dan mengalsinasi berbagai benda.

Pembakaran dan kalsinasi banyak digunakan dalam praktik mikrobiologi untuk desinfeksi instrumen, laboratorium, dan peralatan gelas farmasi.

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah suatu metode sterilisasi dimana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel-sel vegetatif, kista dan spora mikroorganisme mati.

Biasanya, loop, spatula, pipet, kaca objek dan kaca penutup, instrumen kecil dan benda terkontaminasi lainnya disterilkan dengan kalsinasi jika tidak dapat direbus. Tidak disarankan mensterilkan gunting dan pisau bedah dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam jika terkena api.

Salah satu metode sterilisasi fisik yang paling sederhana dan umum digunakan dalam praktik medis adalah sterilisasi udara panas (panas kering). Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven pengering (oven Pasteur). Udara panas kering memiliki efek bakterisidal, virusisidal, sporisidal dan digunakan terutama untuk sterilisasi produk kaca (peralatan gelas laboratorium - cawan Petri, labu, pipet, tabung reaksi, dll.), serta produk logam yang dapat disterilkan dengan uap dibawah tekanan.

Selain itu, panas kering digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang terbuat dari porselen dan bahan tahan panas (bedak, tanah liat putih), serta minyak mineral dan nabati, lemak, petroleum jelly, lanolin, dan lilin. Cara paling efektif untuk metode sterilisasi ini, yang menjamin kematian bentuk vegetatif dan spora, adalah suhu 160 - 180 derajat selama 15 menit.

Anda tidak dapat mensterilkan bahan makanan, larutan isotonik, atau bahan yang terbuat dari karet dan bahan sintetis dengan panas kering, karena cairan akan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis akan meleleh.

Sterilisasi dengan uap jenuh di bawah tekanan adalah metode yang paling andal dan paling sering digunakan untuk mensterilkan pembalut, air, beberapa obat, media kultur, peralatan lunak, instrumen, serta untuk mendisinfeksi bahan limbah yang terkontaminasi.

Dalam praktik bedah, pembalut, pakaian ahli bedah, dan pakaian dalam untuk pasien yang dioperasi didesinfeksi menggunakan uap dalam autoklaf. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan di perangkat khusus - autoklaf.

Autoklaf sepenuhnya menghancurkan semua mikroorganisme dan spora. Metode sterilisasi tekanan uap didasarkan pada pemanasan bahan dengan uap air jenuh pada tekanan di atas tekanan atmosfer. Kombinasi suhu tinggi dan uap menjadikan metode ini sangat efektif. Dalam hal ini, sel vegetatif dan spora mikroba mati.

Spora mikroba mati dalam waktu 10 menit di bawah pengaruh uap air jenuh, dan bentuk vegetatif mati dalam waktu 1 hingga 4 menit.

Kekuatan bakterisida yang tinggi dari uap jenuh disebabkan oleh fakta bahwa, di bawah pengaruh uap air di bawah tekanan, protein sel mikroba membengkak dan menggumpal, akibatnya sel mikroba mati.

Efek bakterisida dari uap air jenuh ditingkatkan dengan tekanan berlebih.

Sterilisasi dalam autoklaf dilakukan dalam mode yang berbeda.

Jadi, media nutrisi sederhana (daging - pepton agar dan daging - kaldu pepton) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120 derajat (1 atm). Namun dengan mode ini tidak mungkin mensterilkan media yang mengandung protein, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah oleh pemanasan.

Media yang mengandung karbohidrat disterilkan dalam autoklaf pada suhu 0,5 atm. 10 – 15 menit atau uap yang mengalir secara fraksional.

Dengan menggunakan suhu tinggi, Anda dapat menghancurkan bentuk mikroorganisme patogen yang paling persisten (termasuk yang membentuk spora) tidak hanya pada permukaan benda yang didesinfeksi, tetapi juga pada kedalamannya.

Inilah keuntungan besar dari suhu tinggi sebagai alat sterilisasi yang andal. Namun, beberapa barang menjadi rusak karena pengaruh suhu tinggi dan dalam kasus ini perlu menggunakan metode dan cara desinfeksi lain.

Sterilisasi lengkap bahan dan benda yang tidak memungkinkan penggunaan sterilisasi suhu tinggi dicapai dengan sterilisasi berulang dengan uap air dalam peralatan Koch pada suhu tidak melebihi 100 derajat. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Intinya adalah bahwa sisa bentuk mikroba spora yang tidak terbunuh, setelah seharian dalam termostat pada suhu 37 derajat, berkecambah menjadi sel vegetatif, yang kematiannya terjadi selama sterilisasi selanjutnya dari benda ini dengan uap yang mengalir.

Perawatan dengan uap cairan dilakukan tiga kali selama 30-40 menit. Memanaskan bahan satu kali pada suhu di bawah 100 derajat disebut pasteurisasi. Pasteurisasi diusulkan oleh Pasteur dan dimaksudkan terutama untuk menghancurkan sebagian besar mikroorganisme non-spora. Pasteurisasi dilakukan pada suhu 60 - 70 derajat selama 15 hingga 30 menit, pada suhu 80 derajat selama 10 hingga 15 menit.

Dalam praktik mikrobiologi, pasteurisasi bahan benih sering digunakan untuk mengisolasi kultur murni mikroorganisme pembentuk spora dan untuk mengidentifikasi kemampuan mikroorganisme dalam membentuk spora.

Untuk cairan yang kehilangan rasa dan kualitas berharga lainnya bila terkena suhu tinggi (susu, jus beri dan buah, bir, media nutrisi yang mengandung karbohidrat atau urea, dll.), sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan pada suhu 50 - 60 derajat selama 15 - 33333330 menit atau pada suhu 70 - 80 derajat selama 5 - 10 menit. Dalam hal ini, mikroba dengan resistensi rata-rata mati, sementara mikroba dan spora yang lebih resisten tetap bertahan.

Sterilisasi fraksional 5-6 kali lipat pada suhu 60 derajat selama 1 jam disebut tyndalisasi.

Banyak produk medis yang terbuat dari bahan polimer tidak tahan terhadap sterilisasi uap menurut aturan yang berlaku umum. Untuk banyak produk, karena karakteristik cairan yang dikandungnya (pengawet, obat-obatan, dan produk lainnya), tidak mungkin untuk mensterilkan menggunakan metode dan metode yang berlaku umum. Untuk produk tersebut, sistem sterilisasi individual dikembangkan untuk memastikan sterilisasi objek yang andal.

Oleh karena itu, sterilisasi rotor untuk memisahkan darah menjadi fraksi-fraksi dilakukan dengan uap air pada suhu 120 derajat selama 45 menit.

Sterilitas wadah pengawet dicapai pada suhu 110 derajat selama 60 menit.

Perebusan adalah metode sterilisasi yang digunakan untuk menghilangkan sterilisasi jarum suntik yang dapat digunakan kembali, instrumen bedah, tabung karet, peralatan kaca dan logam.

Sterilisasi dengan cara direbus dilakukan dalam alat sterilisasi. Bentuk spora dalam air mendidih akan mati setelah 20 - 30 menit. Merebus selama 45 menit banyak digunakan untuk mendisinfeksi sekret dan bahan infeksius lainnya, linen, piring, mainan, dan barang perawatan pasien.

Air panas (60 - 100 derajat) dengan deterjen digunakan saat mencuci dan membersihkan untuk menghilangkan kotoran dan mikroorganisme secara mekanis.

Kebanyakan sel vegetatif mati pada suhu 70 derajat setelah 30 menit.

Sterilisasi filtrasi digunakan dalam kasus di mana substrat tidak tahan terhadap pemanasan, khususnya untuk media yang mengandung protein, serum, beberapa antibiotik, vitamin, dan zat yang mudah menguap. Teknik ini cukup banyak digunakan untuk mensterilkan cairan kultur, bila diperlukan untuk membebaskannya dari sel mikroba, namun untuk menjaga semua produk metabolisme yang dikandungnya tidak berubah.

Metode ini melibatkan penyaringan cairan melalui filter khusus yang memiliki partisi berpori halus sehingga dapat mempertahankan sel mikroba.

Dua jenis filter yang paling banyak digunakan adalah filter membran dan filter Seitz.

Filter membran dibuat dari collodion, asetat, selulosa dan bahan lainnya.

Filter Seitz terbuat dari campuran asbes dan selulosa.

Selain itu, filter yang terbuat dari kaolin dengan campuran pasir kuarsa, tanah infusor dan bahan lainnya (“lilin” oleh Chamberlan, Berkfeld) digunakan untuk sterilisasi.

Filter membran dan asbes dirancang untuk penggunaan satu kali.

Dengan penyinaran ultraviolet, efek bakterisida diberikan oleh sinar dengan panjang 200 - 450 nm, yang sumbernya adalah lampu bakterisida.

Dengan bantuan lampu bakterisida, udara disterilkan dengan sinar ultraviolet di institusi medis dan pencegahan, kotak di laboratorium mikrobiologi, di perusahaan industri makanan, di kotak produksi vaksin dan serum, di ruang operasi, ruang manipulasi, lembaga anak, dll. .

Sinar ultraviolet memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga sporanya.

Sinar matahari menyebabkan kematian mikroorganisme akibat penyinaran dan pengeringan ultraviolet.

Pengeringan dengan sinar matahari mempunyai efek merugikan pada banyak jenis mikroorganisme, namun pengaruhnya hanya dangkal dan oleh karena itu sinar matahari memainkan peran pendukung dalam praktik sterilisasi.

Baru-baru ini, dalam pengobatan luka dan luka bakar, pelapis yang terbuat dari polimer sintetik dan alami dalam bentuk gel telah digunakan.

Film antiseptik polimer banyak digunakan untuk pengobatan luka dan luka bakar lokal. Mereka mengandung agen antimikroba spektrum luas seperti katapol, dioksidan, yodium biru, serta sorbitol yang mengandung glutaraldehid. Untuk mensterilkan film tersebut digunakan radiasi pengion dengan dosis 20,0 kGy. Selama produksi industri film dan sorben antiseptik polimer, sterilitasnya di bawah sistem sterilisasi ini dijamin sepenuhnya.

Radiasi radioaktif membunuh semua jenis mikroorganisme, baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Ini banyak digunakan untuk sterilisasi di perusahaan yang memproduksi produk steril dan peralatan medis sekali pakai yang steril, untuk desinfeksi air limbah dan bahan mentah yang berasal dari hewan.

Metode sterilisasi mekanis

Metode sterilisasi mekanis menghilangkan kuman dari permukaan benda. Ini termasuk mencuci, mengguncang, menyapu, menyeka basah, mengudara, ventilasi, menyedot debu, mencuci.

Metode sterilisasi kimia

Plastik kini semakin banyak digunakan dalam praktik medis.

Mereka digunakan dalam kedokteran gigi, bedah maksilofasial, traumatologi, ortopedi, dan bedah. Kebanyakan plastik tidak tahan terhadap metode sterilisasi panas uap di bawah tekanan dan panas kering (udara panas kering). Larutan alkohol, diosida, dan larutan terner yang digunakan untuk mensterilkan benda-benda tersebut tidak menjamin sterilitas produk yang diproses.

Oleh karena itu, metode gas dan radiasi, serta larutan bahan kimia, digunakan untuk mensterilkan produk plastik.

Pengenalan sejumlah besar produk yang terbuat dari bahan termolabil ke dalam praktik institusi medis berkontribusi pada pengenalan metode desinfeksi dan sterilisasi radiasi dan gas dengan larutan disinfektan.

Selama sterilisasi kimia, gas dan bahan dari berbagai kelompok kimia digunakan (peroksida, fenolik, mengandung halogen, aldehida, basa dan asam, surfaktan, dll.). Untuk penggunaan sehari-hari, diproduksi deterjen, pembersih, pemutihan dan sediaan lainnya yang memiliki efek antimikroba karena masuknya berbagai bahan kimia ke dalam komposisinya.

Sediaan ini digunakan untuk membersihkan dan mendisinfeksi peralatan sanitasi, piring, linen, dll.

Uap formaldehida (steamform) dapat digunakan di institusi medis untuk mensterilkan produk medis logam (pisau bedah, jarum, pinset, probe, klem, kait, pemotong kawat, dll.).

Sebelum disterilkan dengan uap formaldehida, produk harus dibersihkan terlebih dahulu dan dikeringkan secara menyeluruh.

Ketika mensterilkan dengan metode kimia apa pun, tata cara pengolahan suatu benda tertentu bergantung pada karakteristik benda yang didesinfeksi, ketahanan mikroba, karakteristik sifat kimia, suhu lingkungan, kelembaban dan faktor lainnya.

Dengan demikian, sterilitas instrumen logam dicapai setelah lima jam penyimpanan dalam ruang tertutup dengan uap pada suhu minimal 20 derajat dan kelembaban relatif 95 - 98%; pada suhu 15 derajat, sterilitas lengkap dari benda-benda ini dicapai hanya setelah 16 jam.

Aktivitas sporisidal glutaraldehid bergantung pada suhu. Tindakan optimalnya terjadi pada suhu 15 – 25 derajat. Ketika suhu naik, aktivitas sporisidal obat ini menurun.

Sterilisasi kimia digunakan sampai batas tertentu. Paling sering, metode ini digunakan untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum). Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 derajat dan bahan pengawet tersebut diuapkan.

Untuk mengawetkan vaksin atau serum, digunakan merthiolate, asam borat, dan formalin.

Metode sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik.

Metode ini banyak digunakan dalam budidaya virus.

Sterilisasi (dari bahasa Latin sterilis - steril) melibatkan inaktivasi total mikroba pada objek yang sedang diproses.

Oven Pasteur - sterilisasi panas kering.

Ada tiga metode utama sterilisasi: panas, radiasi, kimia.

Yodium.

Sterilisasi panas didasarkan pada sensitivitas mikroba terhadap suhu tinggi.

Pada suhu 60 °C dan adanya air, terjadi denaturasi protein, termasuk enzim, yang mengakibatkan kematian mikroba bentuk vegetatif. Spora yang mengandung sedikit air terikat dan memiliki cangkang padat tidak aktif pada suhu 160-170 °C. Untuk sterilisasi panas, terutama digunakan panas kering dan uap bertekanan.
Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven panas kering, atau oven Pasteur. Oven Pasteur merupakan suatu lemari besi yang tertutup rapat, dipanaskan dengan listrik dan dilengkapi dengan termometer.

Disinfeksi bahan di dalamnya terjadi pada suhu 160-170 °C selama 60-120 menit. Kerugian dari metode ini adalah hanya beberapa benda yang dapat disterilkan, seperti kaca laboratorium, yang dapat menahan suhu setinggi itu.
Metode sterilisasi yang paling universal adalah perlakuan uap di bawah tekanan dalam autoklaf, di mana pembalut, linen, banyak instrumen, media kultur, larutan, bahan infeksius, dll. disterilkan.

Autoklaf adalah silinder logam dengan dinding kuat, tertutup rapat, terdiri dari ruang uap air dan ruang sterilisasi. Alat tersebut dilengkapi dengan alat pengukur tekanan, termometer dan alat pemantau lainnya. Peningkatan tekanan terjadi di dalam autoklaf, yang menyebabkan peningkatan titik didih air. Jadi, pada 0,5 atm titik didihnya adalah 80 °C, pada 1 atm - 100 °C, pada 2 atm - 121 °C, dan pada 3 atm - 136 °C.

Karena kenyataan bahwa, selain suhu tinggi, uap juga mempengaruhi mikroorganisme, spora sudah mati pada suhu 120 ° C. Mode pengoperasian autoklaf yang paling umum adalah 2 atm, 121 °C, 15-20 menit. Waktu sterilisasi berkurang seiring bertambahnya waktu tekanan atmosfir, dan karena itu titik didihnya. Mikroorganisme mati dalam beberapa detik, tetapi bahan diproses lebih lama, karena pertama, suhu di dalam bahan yang disterilkan harus tinggi, dan kedua, ada yang disebut bidang pengaman, yang dirancang untuk kemungkinan penyimpangan dari parameter yang ditentukan saat operasi autoklaf.

Tag: tubuh, pertumbuhan, sterilisasi, enzim

Kehidupan mikroorganisme sangat bergantung pada kondisi lingkungan. Semua faktor lingkungan yang mempengaruhi mikroorganisme dapat dibagi menjadi tiga kelompok: fisik, kimia dan biologi, yang pengaruh menguntungkan atau merugikannya bergantung pada sifat faktor itu sendiri dan sifat mikroorganisme.

Faktor fisik

Dari faktor fisik, suhu, pengeringan, energi radiasi, dan USG mempunyai pengaruh paling besar terhadap perkembangan mikroorganisme.

Suhu. Aktivitas kehidupan setiap mikroorganisme dibatasi oleh batasan suhu tertentu. Ketergantungan suhu ini biasanya dinyatakan dalam tiga poin utama: minimum - suhu di bawah mana reproduksi sel mikroba berhenti; optimal - suhu terbaik untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme; maksimum - suhu di mana aktivitas vital sel melemah atau terhenti. Suhu optimal biasanya sesuai dengan kondisi suhu habitat aslinya.

Semua mikroorganisme dalam kaitannya dengan suhu dibagi menjadi psikrofil, mesofil, dan termofil.

Psikrofil (dari bahasa Yunani psychros - dingin, phileo - cinta), atau mikroorganisme yang menyukai dingin, tumbuh pada suhu yang relatif suhu rendah: suhu minimum - 0° C, optimal - 10-20° C, maksimum - 30° C. Golongan ini mencakup mikroorganisme yang hidup di laut utara dan lautan, tanah, air limbah. Ini juga termasuk bakteri bercahaya dan besi, serta mikroba yang menyebabkan pembusukan makanan dalam suhu dingin (di bawah 0° C).

Mesofil (dari bahasa Yunani mesos - tengah) adalah kelompok yang paling luas, termasuk sebagian besar saprofit dan semua mikroorganisme patogen. Suhu optimal untuk mereka adalah 28-37° C, minimum 10° C, maksimum 45° C.

Termofil (dari bahasa Yunani termos - panas, panas), atau mikroorganisme yang menyukai panas, berkembang pada suhu di atas 55 ° C, suhu minimum untuk mereka adalah 30 ° C, suhu optimal adalah 50-60 ° C, dan maksimum adalah 70 -75 ° C. Mereka ditemukan di mata air mineral panas, lapisan permukaan tanah, substrat yang dapat memanas sendiri (pupuk kandang, jerami, biji-bijian), dan usus manusia dan hewan. Di antara termofil terdapat banyak bentuk spora.

Suhu tinggi dan rendah mempunyai pengaruh yang berbeda terhadap mikroorganisme. Beberapa lebih sensitif terhadap suhu tinggi. Selain itu, semakin tinggi suhu melebihi maksimum maka semakin cepat terjadi kematian sel mikroba yang disebabkan oleh denaturasi (koagulasi) protein sel.

Bentuk vegetatif bakteri mesofilik mati pada suhu 60° C selama 30-60 menit, dan pada 80-100° C - setelah 1-2 menit. Spora bakteri jauh lebih tahan terhadap suhu tinggi. Misalnya spora basil antraks tahan perebusan selama 10-20 menit, dan spora clostridium botulisme - 6 jam.Semua mikroorganisme, termasuk spora, mati pada suhu 165-170 ° C selama satu jam (dalam suhu kering). oven) atau bila terkena uap pada tekanan 1 atm (dalam autoclave) selama 30 menit.

Pengaruh suhu tinggi pada mikroorganisme adalah dasar dari sterilisasi - pelepasan lengkap berbagai benda dari mikroorganisme dan sporanya (lihat di bawah).

Banyak mikroorganisme yang sangat resisten terhadap suhu rendah. Salmonella typhus dan Vibrio cholerae bertahan lama di dalam es. Beberapa mikroorganisme tetap dapat hidup pada suhu udara cair (-190°C), dan spora bakteri dapat bertahan pada suhu hingga -250°C.

Hanya spesies individu bakteri patogen sensitif terhadap suhu rendah (misalnya Bordetella pertussis dan parapertussis, Neisseria meningococcus, dll). Sifat-sifat mikroorganisme ini diperhitungkan dalam diagnostik laboratorium dan ketika mengangkut bahan uji - bahan tersebut dikirim ke laboratorium yang terlindung dari pendinginan.

Pengaruh suhu rendah menghentikan proses pembusukan dan fermentasi, yang banyak digunakan untuk mengawetkan makanan di unit pendingin, ruang bawah tanah, dan gletser. Pada suhu di bawah 0° C, mikroba mengalami keadaan mati suri - proses metabolisme melambat dan reproduksi terhenti. Namun jika ada yang sesuai kondisi suhu dan media nutrisi, fungsi vital sel mikroba dipulihkan. Sifat mikroorganisme ini digunakan dalam praktik laboratorium untuk mengawetkan kultur mikroba pada suhu rendah. Perubahan cepat pada suhu tinggi dan rendah (pembekuan dan pencairan) juga berdampak buruk pada mikroorganisme - hal ini menyebabkan pecahnya membran sel.

Pengeringan. Air diperlukan untuk berfungsinya mikroorganisme secara normal. Pengeringan menyebabkan dehidrasi sitoplasma, terganggunya integritas membran sitoplasma, akibatnya nutrisi sel mikroba terganggu dan terjadi kematiannya.

Waktu kematian berbagai jenis mikroorganisme di bawah pengaruh pengeringan sangat bervariasi. Misalnya Neisseria patogen (meningokokus, gonokokus), Leptospira, Treponema pallidum dan lain-lain mati jika dikeringkan setelah beberapa menit. Vibrio cholerae tahan pengeringan selama 2 hari, Salmonella tifoid - 70 hari, dan Mycobacterium tuberkulosis - 90 hari. Namun dahak kering pasien tuberkulosis, yang patogennya dilindungi oleh lapisan protein kering, tetap menular selama 10 bulan.

Spora sangat tahan terhadap pengeringan dan pengaruh lingkungan lainnya. Spora basil antraks mempertahankan kemampuan berkecambah selama 10 tahun, dan spora jamur kapang hingga 20 tahun.

Dampak buruk pengeringan terhadap mikroorganisme telah lama digunakan untuk mengawetkan sayuran, buah-buahan, daging, ikan, dan lain-lain jamu. Pada saat yang sama, ketika terkena kondisi kelembaban tinggi, produk tersebut cepat rusak karena pemulihan aktivitas mikroba.

Metode pengeringan beku banyak digunakan untuk menyimpan kultur mikroorganisme, vaksin dan sediaan biologis lainnya. Inti dari metode ini adalah mikroorganisme atau sediaan dibekukan terlebih dahulu dan kemudian dikeringkan dalam kondisi vakum. Dalam hal ini, sel mikroba memasuki keadaan mati suri dan mempertahankan sifat biologisnya selama beberapa bulan atau tahun.

Energi Radiasi. Di alam, mikroorganisme selalu terpapar radiasi matahari. Sinar matahari langsung menyebabkan kematian banyak mikroorganisme dalam beberapa jam, kecuali bakteri fotosintetik (bakteri belerang hijau dan ungu). Dampak buruk sinar matahari disebabkan oleh aktivitas sinar ultraviolet(Sinar UV). Mereka menonaktifkan enzim sel dan merusak DNA. Bakteri patogen lebih sensitif terhadap sinar UV dibandingkan bakteri saprofit. Oleh karena itu, sebaiknya simpan kultur mikroba di laboratorium di tempat gelap. Dalam hal ini, pengalaman Buchner bersifat demonstratif.

Dalam cawan Petri dengan lapisan tipis agar-agar dihasilkan melalui inokulasi yang melimpah terhadap kultur bakteri apa pun. Huruf-huruf yang dipotong dari kertas hitam ditempelkan pada permukaan luar cangkir yang diunggulkan, misalnya membentuk kata “tifus”. Cawan yang bagian bawahnya menghadap ke atas disinari sinar matahari langsung selama 1 jam, kemudian kertas-kertasnya dikeluarkan, dan cawan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C selama sehari.Pertumbuhan bakteri hanya terlihat di tempat-tempat tersebut. agar-agar yang terlindung dari sinar UV dengan stiker huruf. Sisa agar-agar tetap transparan, yaitu tidak ada pertumbuhan mikroorganisme (Gbr. 11).

Pentingnya sinar matahari sebagai faktor alami dalam meningkatkan kesehatan lingkungan luar sangatlah besar. Ini membebaskan udara, air dari reservoir alami, dan lapisan atas tanah dari bakteri patogen.

Efek bakterisida (penghancur bakteri) dari sinar UV digunakan untuk mensterilkan udara di ruang tertutup (ruang operasi, ruang ganti, kotak, dll), serta air dan susu. Sumber sinar tersebut adalah lampu radiasi ultraviolet dan lampu bakterisida.

Jenis energi radiasi lainnya - sinar-X, sinar α-, β-, γ mempunyai efek merugikan pada mikroorganisme hanya dalam dosis besar, sekitar 440-280 J/kg. Kematian mikroba disebabkan oleh rusaknya struktur inti dan DNA seluler. Radiasi dosis rendah merangsang pertumbuhan sel mikroba. Mikroorganisme jauh lebih tahan terhadap radiasi radioaktif dibandingkan organisme tingkat tinggi. Bakteri thionic diketahui hidup di endapan bijih uranium. Bakteri ditemukan dalam air reaktor nuklir pada konsentrasi radiasi pengion 20-30 kJ/kg.

Efek bakterisida dari radiasi pengion digunakan untuk pengawetan produk makanan tertentu, sterilisasi sediaan biologis (sera, vaksin, dll), sedangkan sifat bahan yang disterilkan tidak berubah.

Dalam beberapa tahun terakhir, produk sekali pakai seperti pipet polistiren, cawan Petri, sumur untuk reaksi serologis, jarum suntik, serta bahan jahitan - catgut, dll. telah disterilkan menggunakan metode radiasi.

USG menyebabkan kerusakan yang signifikan pada sel mikroba. Di bawah pengaruh ultrasound, gas yang terletak di lingkungan cair sitoplasma diaktifkan, dan tekanan tinggi muncul di dalam sel (hingga 10.000 atm). Hal ini menyebabkan pecahnya membran sel dan kematian sel. USG digunakan untuk mensterilkan produk makanan (susu, jus buah) dan air minum.

Tekanan tinggi. Bakteri dan terutama sporanya tahan terhadap tekanan mekanis. Di alam terdapat bakteri yang hidup di laut dan samudera pada kedalaman 1000-10000 m pada tekanan 100 hingga 900 atm. Beberapa jenis bakteri dapat menahan tekanan hingga 3000-5000 atm, dan spora bakteri bahkan hingga 20.000 atm.

Faktor kimia

Pengaruh bahan kimia terhadap mikroorganisme bervariasi tergantung pada sifat senyawa kimia, konsentrasinya, dan lamanya paparan sel mikroba. Tergantung pada konsentrasinya, suatu zat kimia dapat menjadi sumber nutrisi atau mempunyai efek penghambatan terhadap aktivitas vital mikroorganisme. Misalnya, larutan glukosa 0,5-2% merangsang pertumbuhan mikroba, dan larutan glukosa 20-40% menghambat proliferasi sel mikroba.

Banyak senyawa kimia yang mempunyai efek merugikan pada mikroorganisme digunakan dalam praktek medis sebagai desinfektan dan antiseptik.

Bahan kimia yang digunakan untuk disinfeksi disebut desinfektan. Disinfeksi mengacu pada tindakan yang bertujuan untuk menghancurkan mikroorganisme patogen di berbagai objek lingkungan. Disinfektan meliputi senyawa halida, fenol dan turunannya, garam logam berat, beberapa asam, basa, alkohol, dll. Bahan ini menyebabkan kematian sel mikroba, bekerja dalam konsentrasi optimal untuk waktu tertentu. Banyak disinfektan yang mempunyai efek berbahaya pada jaringan makroorganisme.

Mereka disebut antiseptik zat kimia, yang dapat menyebabkan kematian mikroorganisme atau menghambat pertumbuhan dan reproduksinya. Mereka digunakan untuk tujuan terapeutik (kemoterapi), serta untuk desinfeksi luka, kulit, dan selaput lendir manusia. Hidrogen peroksida, larutan alkohol yodium, hijau cemerlang, larutan kalium permanganat, dll memiliki sifat antiseptik.Beberapa zat antiseptik (asetat, belerang, asam benzoat, dll.) dalam dosis yang tidak berbahaya bagi manusia digunakan untuk pengawetan makanan.

Menurut mekanisme kerjanya, zat kimia dengan aktivitas antimikroba dapat dibagi menjadi beberapa kelompok.

1. Surfaktan (asam lemak, sabun dan deterjen lainnya) menyebabkan penurunan tegangan permukaan yang mengakibatkan terganggunya fungsi dinding sel dan membran sitoplasma mikroorganisme.

2. Fenol, kresol dan turunannya menyebabkan koagulasi protein mikroba. Mereka digunakan untuk mendisinfeksi bahan menular dalam praktik mikrobiologi dan rumah sakit penyakit menular.

3. Zat pengoksidasi, berinteraksi dengan protein mikroba, mengganggu aktivitas enzim dan menyebabkan denaturasi protein. Agen pengoksidasi aktif adalah klorin dan ozon, yang digunakan untuk mendisinfeksi air minum. Turunan klorin (pemutih, kloramin) banyak digunakan untuk tujuan desinfeksi. Hidrogen peroksida, kalium permanganat, yodium, dll. memiliki sifat pengoksidasi.

4. Formaldehida digunakan dalam bentuk larutan 40% (formalin) untuk desinfeksi. Ini membunuh mikroorganisme bentuk vegetatif dan spora. Formalin memblokir gugus amino protein sel mikroba dan menyebabkan denaturasinya.

5. Garam logam berat (merkuri, timbal, seng, emas, dll) menggumpal protein sel mikroba, sehingga menyebabkan kematiannya. Sejumlah logam (perak, emas, merkuri, dll.) memiliki efek bakterisidal terhadap mikroorganisme dalam konsentrasi yang dapat diabaikan. Sifat ini disebut aksi oligodinamik (dari bahasa Latin oligos - kecil, dinamys - kekuatan). Telah terbukti bahwa air dalam wadah perak tidak membusuk karena efek bakterisidal ion perak. Untuk pencegahan blenorea* pada bayi baru lahir untuk waktu yang lama larutan perak nitrat 1% digunakan. Solusi koloid senyawa organik perak (protargol, collargol) juga digunakan dalam bentuk antiseptik lokal.

* (Blennorea adalah peradangan pada konjungtiva mata yang disebabkan oleh gonokokus.)

Sediaan merkuri memiliki efek antimikroba yang kuat. Sejak zaman kuno, merkuri biklorida, atau merkuri klorida (dengan pengenceran 1:1000), telah digunakan untuk desinfeksi. Namun, dia punya efek toksik pada jaringan makroorganisme dan penggunaannya terbatas.

6. Pewarna (diamond green, rivanol, dll) mempunyai khasiat menghambat pertumbuhan bakteri. Larutan sejumlah pewarna digunakan sebagai antiseptik, dan juga ditambahkan ke beberapa media nutrisi untuk menghambat pertumbuhan mikroflora yang menyertainya.

Efek destruktif dari sejumlah faktor fisik dan kimia pada mikroorganisme membentuk dasar metode aseptik dan antiseptik, yang banyak digunakan dalam praktik medis dan sanitasi.

Asepsis adalah suatu sistem tindakan preventif untuk mencegah kontaminasi mikroba pada suatu benda (luka, bidang bedah, kultur mikroorganisme, dll.) berdasarkan metode fisik.

Antiseptik adalah serangkaian tindakan yang bertujuan untuk menghancurkan mikroorganisme pada luka, seluruh tubuh atau benda lingkungan, dengan menggunakan berbagai bahan kimia desinfektan.

Faktor biologis

Di habitat alami, mikroorganisme tidak hidup sendiri-sendiri, tetapi berada dalam hubungan yang kompleks, yang terutama bersimbiosis, metabiosis, dan antagonisme.

Simbiosis adalah hidup bersama organisme dari spesies yang berbeda, sehingga saling menguntungkan. Pada saat yang sama, bersama-sama mereka berkembang lebih baik daripada masing-masing secara terpisah.

Hubungan simbiosis terjadi antara bakteri bintil dan tanaman polong-polongan, antara jamur berserabut dan ganggang biru-hijau (lumut): Simbiosis bakteri asam laktat dan ragi alkohol digunakan untuk membuat beberapa produk asam laktat (kefir, koumiss).

Metabiosis adalah jenis hubungan di mana produk metabolisme satu jenis mikroorganisme menciptakan kondisi yang diperlukan untuk perkembangan jenis mikroorganisme lainnya. Misalnya, mikroorganisme pembusuk yang memecah zat protein berkontribusi pada akumulasi senyawa amonium di lingkungan dan menciptakan kondisi yang menguntungkan bagi pertumbuhan dan perkembangan bakteri nitrifikasi. Dan perkembangan anaerobik di tanah yang memiliki aerasi yang baik tidak akan mungkin terjadi tanpa aerob yang menyerap oksigen bebas.

Hubungan metabiotik tersebar luas di antara mikroorganisme tanah dan mendasari siklus zat di alam.

Antagonisme adalah suatu bentuk hubungan di mana satu mikroorganisme menghambat perkembangan mikroorganisme lain atau dapat menyebabkan kematian totalnya. Hubungan antagonis telah berkembang di antara mikroorganisme dalam perjuangan untuk eksistensi. Di mana pun mereka tinggal, selalu terjadi perebutan sumber makanan, oksigen udara, dan habitat. Jadi, sebagian besar bakteri patogen, yang memasuki lingkungan luar (tanah, air) bersama dengan sekresi pasien, tidak dapat bertahan dalam persaingan jangka panjang dengan banyak saprofit dan mati dengan relatif cepat.

Antagonisme dapat disebabkan oleh pengaruh langsung mikroorganisme satu sama lain atau oleh aksi produk metabolismenya. Misalnya, protozoa melahap bakteri, dan fag melisiskannya. Usus bayi baru lahir dijajah oleh bakteri asam laktat Bifidobacterium bifidum. Dengan melepaskan asam laktat, mereka menekan pertumbuhan bakteri pembusuk dan dengan demikian melindungi organisme bayi yang masih rapuh dari gangguan usus. Beberapa mikroorganisme dalam proses hidupnya menghasilkan berbagai zat yang berdampak buruk bagi bakteri dan mikroba lainnya. Zat-zat tersebut termasuk antibiotik (lihat "Antibiotik").

Pertanyaan kontrol

1. Apa faktor fisik mempengaruhi aktivitas kehidupan mikroorganisme?

2. Zat apa saja yang tergolong disinfektan dan apa perbedaan mekanisme kerjanya terhadap mikroorganisme?

3. Sebutkan hubungan apa yang ada antar mikroorganisme?

Sterilisasi

Sterilisasi adalah sterilisasi, yaitu pembebasan menyeluruh benda-benda lingkungan dari mikroorganisme dan sporanya.

Sterilisasi dilakukan dengan berbagai cara:

1) fisik (paparan suhu tinggi, sinar UV, penggunaan filter bakteri);

2) bahan kimia (penggunaan berbagai disinfektan, antiseptik);

3) biologis (penggunaan antibiotik).

Dalam praktik laboratorium, metode sterilisasi fisik biasanya digunakan.

Kemungkinan dan kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu ditentukan oleh karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Metode fisik

Sterilisasi panas kering

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (oven pengering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet menggunakan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan pengatur untuk memastikan suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Panas kering digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Piring yang disiapkan untuk sterilisasi dimasukkan secara longgar ke dalam oven untuk memastikan pemanasan bahan yang disterilkan secara seragam dan andal. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas, atur suhu menjadi 160-165 ° C dan sterilkan pada suhu tersebut selama 1 jam.Setelah sterilisasi selesai, matikan api, tetapi jangan membuka pintu lemari sampai oven sudah dingin; jika tidak udara dingin, masuk ke dalam lemari dapat menyebabkan keretakan pada peralatan masak yang panas.

Sterilisasi dalam oven Pasteur dapat dilakukan dengan cara yang berbeda-beda kondisi suhu dan paparan (waktu sterilisasi) (Tabel 1).

Untuk mengontrol sterilisasi dalam oven Pasteur, benang sutra dibasahi dalam kultur bakteri pembentuk spora, dikeringkan, ditempatkan dalam cawan Petri steril dan dimasukkan ke dalam oven Pasteur. Sterilisasi dilakukan pada suhu 165°C selama 1 jam (untuk pengendalian sebagian benang dibiarkan pada suhu ruangan). Kemudian benang yang telah disterilkan dan dikontrol diletakkan pada permukaan agar-agar dalam cawan Petri atau dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi kaldu dan diinkubasi dalam termostat pada suhu 37° C selama 2 hari. Dengan pengoperasian oven Pasteur yang benar, tidak akan terjadi pertumbuhan pada tabung reaksi atau cawan yang berisi media nutrisi yang di dalamnya terdapat benang yang telah disterilkan, karena spora bakteri akan mati, sedangkan spora bakteri pada benang yang tidak disterilkan (kontrol) akan berkecambah pada nutrisi. pertumbuhan media akan dicatat.

Untuk menentukan suhu di dalam oven Pasteur dapat menggunakan sukrosa atau gula pasir yang menjadi karamel pada suhu 165-170°C.

Mempersiapkan peralatan gelas laboratorium untuk sterilisasi dalam oven Pasteur. Sebelum sterilisasi, peralatan gelas laboratorium (cawan petri, pipet ukur dan pasteur, vial, labu, tabung reaksi) harus dicuci bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan kertas, jika tidak setelah sterilisasi dapat terkontaminasi lagi dengan bakteri udara.

Cawan petri dibungkus dengan kertas satu atau lebih potongan sekaligus atau ditempatkan dalam wadah logam khusus.

Penyeka kapas dimasukkan ke ujung atas pipet untuk mencegah bahan uji masuk ke mulut. Pipet ukur dibungkus dengan kertas panjang selebar 4-5 cm, volume pipet yang dibungkus ditandai pada kertas tersebut. Dalam kotak pensil, pipet ukur disterilkan tanpa tambahan kertas pembungkus.

Catatan. Jika garis batas pada pipet tidak terlihat jelas, maka pipet dikembalikan sebelum sterilisasi. Cat minyak dioleskan ke pipet dan, tanpa membiarkan cat mengering, bubuk barium sulfat digosokkan ke dalamnya menggunakan kain. Setelah itu, hilangkan sisa cat dengan lap, yang hanya tersisa di takik kelulusan. Pipet yang dirawat dengan cara ini harus dibilas.

Ujung tajam pipet Pasteur disegel dalam api pembakar dan dibungkus kertas, 3-5 lembar sekaligus. Pipet pasteur harus dibungkus dengan hati-hati agar tidak merusak ujung kapiler yang tertutup rapat.

Botol, labu, tabung reaksi ditutup dengan sumbat kapas. Gabus harus masuk ke dalam leher kapal 2/3 panjangnya, tidak terlalu kencang, tetapi juga tidak longgar. Tutup kertas dipasang di atas sumbat pada setiap wadah (kecuali tabung reaksi). Tabung reaksi diikat menjadi satu dalam kelompok yang terdiri dari 5-50 orang dan dibungkus dengan kertas.

Catatan. Pada suhu tinggi, kertas yang membungkus cangkir dan pipet, serta kapas menjadi kuning dan bahkan mungkin hangus, jadi setiap varietas baru kertas yang diterima oleh laboratorium harus diuji pada kondisi suhu yang diterima.

Pertanyaan kontrol

1. Apa yang dimaksud dengan istilah sterilisasi?

2. Bagaimana sterilisasi dilakukan?

3. Apa yang disterilkan dengan cara kalsinasi di atas api?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian oven Pasteur.

5. Apa yang disterilkan dalam oven Pasteur?

6. Bagaimana peralatan gelas disiapkan untuk sterilisasi?

7. Mengapa media nutrisi dan benda karet tidak bisa disterilkan dalam oven Pasteur?

Latihan

Siapkan cawan Petri, pipet ukur, pipet Pasteur, tabung reaksi, labu dan vial untuk sterilisasi.

Sterilisasi dengan cara direbus

Sterilisasi dengan cara direbus biasanya dilakukan dalam alat sterilisasi - kotak logam bentuk persegi panjang dengan penutup yang rapat. Bahan yang akan disterilkan diletakkan pada jaring yang tersedia pada alat sterilisasi dan diisi air. Untuk meningkatkan titik didih dan menghilangkan kesadahan air, tambahkan 1-2% natrium bikarbonat (lebih baik menggunakan air suling). Alat sterilisasi ditutup dengan penutup dan dipanaskan.Permulaan sterilisasi dianggap saat air mendidih, waktu perebusan 15-30 menit. Pada akhir sterilisasi, jaring dengan instrumen dilepas dengan pegangan samping dengan kait khusus, dan instrumen di dalamnya diambil dengan pinset atau penjepit steril, yang direbus bersama dengan instrumen lainnya.

Sterilisasi uap dilakukan dengan dua cara: 1) uap di bawah tekanan; 2) uap yang mengalir.

Sterilisasi uap bertekanan diproduksi dalam autoklaf. Metode sterilisasi ini didasarkan pada pemaparan bahan yang disterilkan pada uap air jenuh pada tekanan di atas atmosfer. Sebagai hasil dari sterilisasi tersebut, baik mikroorganisme vegetatif maupun spora mati dalam satu kali perawatan.

Autoklaf (Gbr. 12) adalah ketel besar, bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam, tertutup rapat dengan penutup, yang disekrup erat ke ketel dengan baut berengsel. Diameter lain yang lebih kecil, yang disebut ruang sterilisasi, dimasukkan ke dalam ketel bagian luar. Benda-benda yang akan disterilkan ditempatkan pada ruangan ini. Di antara kedua boiler ada ruang bebas, disebut ruang uap air. Air dialirkan ke dalam ruangan ini melalui corong yang dipasang di bagian luar sampai ketinggian tertentu yang ditandai pada tabung pengukur air khusus. Ketika air direbus dalam ruang uap air, uap dihasilkan. Ruang sterilisasi dilengkapi dengan keran keluar dengan katup pengaman yang memungkinkan uap keluar ketika tekanan meningkat di atas tingkat yang diperlukan. Pengukur tekanan digunakan untuk menentukan tekanan yang dibuat di ruang sterilisasi.

Beras. 12. Diagram autoklaf. M - pengukur tekanan; PC - katup pengaman; B - corong untuk air; K 2 - keran untuk mengeluarkan air; K 3 - katup untuk pelepasan uap

Tekanan atmosfer normal (760 mm Hg) dianggap nol. Ada hubungan tertentu antara pembacaan pengukur tekanan dan suhu (Tabel 2).

Saat ini, terdapat autoklaf dengan kontrol otomatis mode pengoperasian. Selain pengukur tekanan biasa, mereka juga dilengkapi pengukur tekanan kontak listrik, yang mencegah tekanan meningkat di atas nilai tertentu dan dengan demikian memastikan konstan suhu yang diinginkan dalam autoklaf.

Uap bertekanan mensterilkan berbagai media nutrisi (kecuali yang mengandung protein asli), cairan (larutan natrium klorida isotonik, air, dll.); perangkat, terutama yang memiliki bagian karet.

Perhatian! Bahan yang terinfeksi juga dinetralkan dalam autoklaf. Gelas dan tabung reaksi yang berisi kultur mikroorganisme ditempatkan dalam ember atau tangki logam khusus yang tutupnya berlubang untuk penetrasi uap dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 126 ° C (1,5 atm) selama 1 jam.Instrumen disterilkan dengan cara yang sama setelah bekerja dengan bakteri , membentuk perselisihan.

Hanya orang yang terlatih khusus yang diperbolehkan bekerja dengan autoklaf, yang harus secara ketat dan akurat mengikuti aturan yang ditentukan dalam petunjuk yang disertakan dengan perangkat.

Teknik autoklaf. 1. Sebelum bekerja, periksa kemudahan servis semua bagian dan penggilingan keran.

2. Air (disuling atau direbus untuk mencegah pembentukan kerak) dialirkan melalui corong yang dipasang di luar ketel hingga tanda paling atas pada gelas meteran air. Keran di bawah corong ditutup.

3. Bahan yang akan disterilkan ditempatkan dalam ruang sterilisasi pada jaring khusus. Barang-barang tidak boleh dimuat terlalu rapat, karena uap harus mengalir dengan bebas di antara barang-barang tersebut, jika tidak maka barang-barang tersebut tidak akan memanas hingga mencapai suhu yang diperlukan dan mungkin tetap tidak steril.

4. Gasket karet pada tutupnya digosok dengan kapur agar penyegelannya lebih baik.

5. Tutupnya ditutup dan dibaut ke badan autoklaf, dan bautnya disekrup berpasangan melintang.

6. Buka sepenuhnya katup keluar yang menghubungkan ruang sterilisasi dengan udara luar, dan mulailah memanaskan autoklaf. Autoklaf biasanya dipanaskan menggunakan gas atau listrik.

Ketika autoklaf dipanaskan, air mendidih, uap yang dihasilkan naik di antara dinding ketel dan melalui lubang khusus di dinding ketel bagian dalam (lihat Gambar 12), memasuki ruang sterilisasi dan keluar melalui katup keluar yang terbuka. Pertama, uap keluar bersama udara di dalam autoklaf. Semua udara harus dikeluarkan dari autoklaf, jika tidak, pembacaan pengukur tekanan tidak akan sesuai dengan suhu di dalam autoklaf.

Munculnya aliran uap yang kuat dan terus menerus menunjukkan pembuangan udara sepenuhnya dari autoklaf; Setelah itu, katup keluar ditutup dan tekanan di dalam autoklaf mulai meningkat secara bertahap.

7. Awal sterilisasi dianggap saat pembacaan pengukur tekanan mencapai nilai yang ditentukan. Pemanasan diatur agar tekanan dalam autoklaf tidak berubah dalam jangka waktu tertentu.

8. Setelah waktu sterilisasi habis, pemanasan autoklaf dihentikan, dan uap dikeluarkan melalui katup keluar. Saat jarum pengukur tekanan turun ke nol, buka tutupnya. Untuk menghindari luka bakar akibat sisa uap di dalam autoklaf, tutup autoklaf harus dibuka ke arah Anda.

Tingkat suhu dalam autoklaf, yaitu kebenaran pembacaan pengukur tekanan, dapat diperiksa. Untuk melakukan ini, gunakan berbagai zat yang memiliki titik leleh tertentu: antipirin (113° C), resorsinol dan belerang (119° C), asam benzoat (120° C). Salah satu zat ini dicampur dengan pewarna dalam jumlah yang dapat diabaikan (muchsin atau methylene blue) dan dituangkan ke dalam tabung kaca, yang ditutup rapat dan ditempatkan pada posisi vertikal di antara bahan yang akan disterilkan. Jika suhunya mencukupi, zat akan meleleh dan mengubah warna pewarna yang sesuai.

Untuk memeriksa efektivitas sterilisasi, tabung reaksi dengan kultur spora yang diketahui dimasukkan ke dalam autoklaf. Setelah autoklaf, tabung dipindahkan ke termostat selama 24-48 jam, dicatat ada atau tidaknya pertumbuhan. Kurangnya pertumbuhan menunjukkan pengoperasian perangkat yang benar.

Sterilisasi dengan uap yang mengalir diproduksi di peralatan Koch. Cara ini digunakan bila benda yang disterilkan berubah pada suhu di atas 100°C. Media nutrisi yang mengandung urea, karbohidrat, susu, kentang, agar-agar, dan lain-lain disterilkan dengan uap yang mengalir.

Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi (untuk mengurangi perpindahan panas) dengan kain kempa atau asbes. Silinder ditutup dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang untuk keluarnya uap. Di dalam silinder ada dudukan, setinggi tempat air dituangkan. Sebuah ember berlubang ditempatkan pada dudukan tempat bahan yang akan disterilkan ditempatkan. Peralatan Koch dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Waktu sterilisasi dihitung dari saat uap keluar secara kuat di tepi tutup dan dari saluran keluar uap. Sterilkan selama 30-60 menit. Di akhir sterilisasi, pemanasan dihentikan. Keluarkan ember berisi bahan dari peralatan dan biarkan pada suhu kamar hingga keesokan harinya. Pemanasan dilakukan selama 3 hari berturut-turut pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Selama pemanasan pertama, bentuk mikroba vegetatif mati, sedangkan bentuk spora tetap terjaga. Dalam sehari, spora berhasil berkecambah dan berubah menjadi bentuk vegetatif, yang mati pada hari kedua sterilisasi. Karena ada kemungkinan sebagian spora tidak sempat berkecambah, bahan disimpan selama 24 jam lagi, kemudian dilakukan sterilisasi ketiga. Sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam alat Koch tidak memerlukan pengendalian khusus, karena sterilitas media kultur yang disiapkan merupakan indikator pengoperasian alat yang benar. Anda juga dapat mensterilkan dengan uap yang mengalir dalam autoklaf dengan tutupnya dibuka dan katup keluarnya terbuka.

Pertanyaan kontrol

1. Media nutrisi apa yang disterilkan dengan uap?

2. Apa itu alat sterilisasi dan bagaimana cara kerjanya?

3. Mengapa air sulingan harus digunakan saat mensterilkan dengan cara direbus?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian autoklaf.

5. Apa yang disterilkan dalam autoklaf?

6. Apa yang menjadi kontrol untuk sterilisasi yang benar selama autoklaf?

7. Apa yang dimaksud dengan sterilisasi uap mengalir?

8. Jelaskan struktur peralatan Koch.

9. Apa tujuan sterilisasi fraksional?

Latihan

Isi formulirnya.

Sterilisasi fraksional juga dapat dilakukan dengan koagulan Koch.

Koagulan Koch digunakan untuk mengentalkan whey dan media kultur telur, dan bersamaan dengan pemadatan media, dilakukan sterilisasi.

koagulan Koch adalah kotak logam datar dengan dinding ganda, bagian luarnya dilapisi dengan bahan insulasi panas. Air dialirkan ke ruang antar dinding melalui lubang khusus yang terletak di bagian atas dinding luar. Lubang ditutup dengan sumbat tempat dimasukkannya termometer. Perangkat ditutup dengan dua penutup: kaca dan logam. Melalui tutup kaca Anda dapat mengamati proses koagulasi. Tabung reaksi yang berisi media diletakkan pada bagian bawah koagulator dengan posisi miring.

Koagulator dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Media disterilkan satu kali pada suhu 90°C selama 1 jam atau secara fraksional - 3 hari berturut-turut pada suhu 80°C selama 1 jam.

Tyndallisasi* - sterilisasi fraksional pada suhu rendah - digunakan untuk zat yang mudah hancur dan terdenaturasi pada suhu 60°C (misalnya cairan protein). Bahan yang akan disterilkan dipanaskan dalam penangas air atau di dalam perangkat khusus dengan termostat pada suhu 56-58° C selama satu jam selama 5 hari berturut-turut.

* (Nama metode sterilisasi diambil dari nama Tyndall yang mengusulkannya.)

Pasteurisasi- sterilisasi pada suhu 65-70 ° C selama 1 jam, diusulkan oleh Pasteur untuk menghancurkan mikroba non-spora. Susu, anggur, bir, jus buah, dan produk lainnya dipasteurisasi. Susu dipasteurisasi untuk menghilangkan asam laktat dan bakteri patogen (brucella, mycobacterium tuberkulosis, shigella, salmonella, staphylococcus, dll). Saat mempasteurisasi bir, jus buah, dan anggur, mikroorganisme penyebabnya jenis yang berbeda fermentasi. Makanan yang dipasteurisasi sebaiknya disimpan di lemari es.

Pertanyaan kontrol

1. Apa tujuan dan struktur koagulator Koch?

2. Apa saja metode sterilisasi pada mesin pembekuan?

3. Apa yang dimaksud dengan tyndalisasi?

4. Apa itu pasteurisasi?

Sterilisasi dengan iradiasi ultraviolet

Pertanyaan kontrol

1. Sifat apa yang dimiliki sinar ultraviolet?

2. Dalam kasus apa sterilisasi menggunakan radiasi ultraviolet digunakan?

Sterilisasi mekanis menggunakan filter bakteri

Sterilisasi filtrasi digunakan jika benda yang disterilkan berubah saat dipanaskan. Filtrasi dilakukan dengan menggunakan filter bakteri yang terbuat dari berbagai bahan berpori halus. Pori-pori filter harus cukup kecil (hingga 1 mikron) untuk memastikan retensi mekanis bakteri, oleh karena itu beberapa penulis menyebut filtrasi sebagai metode mekanis sterilisasi.

Metode filtrasi digunakan untuk mensterilkan media nutrisi yang mengandung protein, serum, dan beberapa antibiotik, serta untuk memisahkan bakteri dari virus, fag, dan eksotoksin.

Dalam praktik mikrobiologi, filter asbes Seitz, filter membran, dan filter Chamberlant dan Berkefeld (lilin) digunakan.

Filter Seitz adalah cakram yang terbuat dari campuran asbes dan selulosa. Ketebalannya 3-5 mm, diameter 35-140 mm. Industri dalam negeri memproduksi filter dengan dua merek: “F” (penyaringan) - menahan partikel tersuspensi tetapi memungkinkan bakteri melewatinya; "SF" (sterilisasi) - dengan pori-pori lebih kecil, menahan bakteri, tetapi memungkinkan virus masuk. Pelat asbes yang kusut, serta pelat yang pecah dan retak, tidak cocok untuk pekerjaan.

Filter membran terbuat dari nitroselulosa. Itu adalah disk putih Tebal 0,1 mm dan diameter 35 mm. Tergantung pada ukuran pori-pori, mereka diberi nomor 1, 2, 3, 4 dan 5 (Tabel 3).

Filter No.1 paling cocok untuk sterilisasi.Selain yang terdaftar, mereka juga memproduksi apa yang disebut pra-filter, yang dirancang untuk membebaskan cairan yang disaring dari partikel besar yang terkandung di dalamnya.

Filter Chamberlant dan Berkefeld (lilin) adalah silinder berongga, ditutup di salah satu ujungnya. Lilin Chamberlant terbuat dari kaolin yang dicampur dengan pasir dan kuarsa. Mereka distandarisasi berdasarkan ukuran pori dan diberi nama L 1, L 2, L 3 ... L 13. Filter Berkefeld (lilin) dibuat dari tanah infusor, sesuai dengan ukuran pori-porinya disebut V, N, W, yang sesuai dengan diameter pori 3-4, 4-7, 8-12 mikron.

Pekerjaan dengan filter bakteri dilakukan sebagai berikut. Filter harus diamankan dalam dudukan khusus, yang dimasukkan ke dalam penerima filter. Penerimanya biasanya berupa labu Bunsen. Penahannya, biasanya terbuat dari baja tahan karat, terdiri dari dua bagian: bagian atas, berbentuk silinder tanpa alas, dan bagian bawah, bagian penyangga yang diakhiri dengan tabung. Filter Seitz dengan permukaan kasar menghadap ke atas dipasang jaring logam dan dijepit erat dengan sekrup di antara bagian atas dan bawah dudukannya. Filter yang terpasang dipasang pada sumbat karet yang dimasukkan ke dalam leher labu Bunsen. Sebuah kapas dimasukkan ke dalam tabung keluar labu, yang dihubungkan ke pompa vakum. Instalasi yang telah disiapkan dibungkus kertas dan disterilkan dalam autoklaf pada tekanan 1 atm selama 20-30 menit. Seluruh perangkat yang dirakit juga disebut filter Seitz (Gbr. 13).

Sesaat sebelum penyaringan, ujung keluar labu Bunsen dihubungkan dengan tabung karet ke pompa jet minyak atau air. Persimpangan berbagai bagian diisi dengan parafin untuk membuat segel yang rapat. Cairan yang disaring dituangkan ke dalam silinder peralatan dan pompa dihidupkan, menciptakan ruang hampa di penerima. Akibat perbedaan tekanan yang dihasilkan, cairan yang disaring melewati pori-pori filter menuju penerima, dan mikroba tetap berada di permukaan filter.

Sebelum digunakan, filter membran disterilkan dengan cara direbus dalam air suling. Agar filter tidak menggulung, filter terlebih dahulu dimasukkan ke dalam air suling, dipanaskan hingga suhu 50-60 ° C, dan direbus dengan api kecil selama 30 menit, ganti air 2-3 kali. Penahan filter dan penerima disterilkan terlebih dahulu, dan perangkat dipasang dalam kondisi aseptik. Untuk menghindari robeknya filter membran pada jaring logam, letakkan lingkaran kertas saring steril di bawahnya. Kemudian, dengan menggunakan pinset steril yang ujungnya halus, ambil filter membran dari alat sterilisasi dan letakkan di atas kisi-kisi penyangga dengan permukaan mengkilat menghadap ke bawah.

Lilin (Chamberlant) yang disterilkan dalam autoklaf dihubungkan melalui tabung karet ke penerima dan diturunkan ke dalam bejana (biasanya silinder) dengan cairan yang disaring. Filtrasi terjadi menggunakan pompa vakum. Filtrat steril masuk ke penerima, dan bakteri tertahan di pori-pori lilin.

Filter membran dan asbes dirancang untuk sekali pakai. Setelah digunakan, lilin direbus keran air, kemudian dikalsinasi dalam tungku peredam.

Sebelum digunakan selanjutnya, lilin diperiksa integritasnya. Lilin diturunkan ke dalam bejana berisi air dan udara dilewatkan. Jika muncul gelembung udara pada permukaan lilin, berarti telah terbentuk retakan pada lilin dan tidak dapat digunakan.

Pertanyaan kontrol

1. Apa metode sterilisasi filter? Apa yang disterilkan dengan metode ini?

2. Filter bakteri apa yang anda ketahui? Bagaimana alat penyaringan dipasang, kondisi apa yang harus diperhatikan?

Metode kimia

Jenis sterilisasi ini digunakan sampai batas tertentu, dan berfungsi terutama untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum).

Untuk mengawetkan vaksin dan serum, digunakan merthiolate, asam borat, formaldehida, dll.

Sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini digunakan untuk membudidayakan virus.

Pertanyaan kontrol

1. Apa itu sterilisasi kimia dan kapan digunakan?

2. Apa yang dimaksud dengan sterilisasi biologis?

Metode utama sterilisasi disajikan dalam tabel. 4.

1 (Sterilisasi tidak lengkap: spora tetap berada dalam bahan yang disterilkan.)

2 (Sterilisasi tidak lengkap: virus tetap berada dalam bahan yang disterilkan.)

Disinfeksi

Dalam praktik mikrobiologi, berbagai disinfektan digunakan: larutan fenol 3-5%, larutan Lysol 5-10%, larutan kloramin 1-5%, larutan hidrogen peroksida 3-6%, larutan formaldehida 1-5%, larutan merkuri klorida dalam pengenceran 1: 1000 (0,1%), alkohol 70°, dll.

Bahan patologis bekas (nanah, feses, urin, dahak, darah, cairan serebrospinal) didesinfeksi sebelum dialirkan ke saluran pembuangan. Disinfeksi dilakukan dengan pemutih kering atau larutan kloramin 3-5%.

Pipet (lulus dan Pasteur), spatula kaca, kaca objek dan kaca penutup yang terkontaminasi bahan patologis atau kultur mikroorganisme direndam dalam stoples kaca dengan larutan fenol atau hidrogen peroksida 3% selama sehari.

Setelah selesai bekerja dengan bahan infeksius, teknisi laboratorium harus merawatnya dengan larutan desinfektan. tempat kerja dan tangan. Permukaan meja kerja dilap dengan kapas yang dibasahi dengan larutan fenol 3%. Tangan didesinfeksi dengan larutan kloramin 1%. Caranya, basahi bola kapas atau kain kasa dengan larutan disinfektan dan usap tangan kiri, lalu tangan kanan, lalu cuci tangan dengan air hangat dan sabun.

Pemilihan disinfektan, konsentrasi dan lama pemaparan (exposure) bergantung pada sifat biologis mikroba dan lingkungan di mana disinfektan akan bersentuhan dengan mikroorganisme patogen. Misalnya, merkuri klorida, fenol, dan alkohol tidak cocok untuk mendisinfeksi substrat protein (nanah, darah, dahak), karena di bawah pengaruhnya terjadi koagulasi protein, dan protein yang terkoagulasi melindungi mikroorganisme dari efek disinfektan.

Saat mendisinfeksi bahan yang terinfeksi mikroorganisme bentuk spora, digunakan larutan kloramin 5%, larutan kloramin aktif 1-2,5%, larutan formalin 5-10%, dan zat lainnya.

Disinfeksi yang dilakukan sepanjang hari selama bekerja disebut desinfeksi saat ini, dan pada akhir pekerjaan disebut final.

Disinfektan dan instruksi untuk menyiapkan solusi kerja darinya. Kapur klorida berbentuk bubuk kental berwarna putih dengan bau klorin yang menyengat; tidak larut sempurna dalam air. Efek bakterisida tergantung pada kandungan klorin aktif, yang jumlahnya berkisar antara 28 hingga 36%. Klorin yang mengandung kurang dari 25% klorin aktif tidak cocok untuk disinfeksi.

Jika disimpan dengan tidak benar, pemutih akan terurai dan kehilangan sebagian klorin aktifnya. Dekomposisi didorong oleh panas, kelembapan, sinar matahari, jadi simpanlah pemutih harus disimpan di tempat yang kering dan gelap, dalam wadah tertutup rapat.

Pemutih kering digunakan untuk mendisinfeksi kotoran manusia dan hewan (dengan takaran 200 g per 1 liter tinja dan 10 g per 1 liter urin).

Persiapan larutan pemutih asli 10% yang telah diklarifikasi. Ambil 1 kg pemutih kering, masukkan ke dalam ember enamel dan haluskan. Kemudian tuangkan air dingin hingga volume 10 liter, aduk rata, tutup dengan penutup dan biarkan selama sehari di tempat sejuk. Setelah itu, larutan klarifikasi 10% yang dihasilkan dikeringkan dengan hati-hati dan disaring melalui beberapa lapis kain kasa atau disaring melalui kain tebal. Simpan dalam botol kaca gelap, ditutup dengan sumbat kayu, di tempat sejuk tidak lebih dari 10 hari. Larutan kerja dengan konsentrasi yang diperlukan disiapkan dari larutan stok segera sebelum digunakan. Jumlah larutan basa yang diperlukan untuk menyiapkan larutan pemutih yang diklarifikasi 0,2-10% diberikan dalam tabel. 5.

Konsentrasi larutan pemutih yang diklarifikasi dari 0,2 hingga 10% dipilih tergantung pada sifat objek yang didesinfeksi dan ketahanan patogen.

Kloramin adalah zat kristal berwarna putih atau kekuningan, mengandung 24-28% klorin aktif. Ini larut dengan baik dalam air pada suhu kamar, sehingga larutan disiapkan segera sebelum disinfeksi. Gunakan larutan kloramin 0,2-10%. Hubungan antara persentase konsentrasi larutan dan jumlah kloramin dalam gram per 1 dan 10 liter diberikan dalam tabel. 6.

Larutkan kloramin dalam gelas atau piring berenamel. Saat menyimpan larutan kloramin dalam wadah kaca gelap dengan penutup tanah, aktivitasnya bertahan hingga 15 hari.

Kloramin yang diaktifkan. Sifat desinfektan kloramin ditingkatkan dengan menambahkan aktivator ke dalamnya dengan perbandingan 1:1 atau 1:2. Senyawa amonium digunakan sebagai aktivator - amonium klorida, sulfat, amonium nitrat. Kloramin aktif digunakan pada konsentrasi 0,5, 1 dan 2,5%. Mereka disiapkan segera sebelum digunakan. Kloramin dan garam amonium ditimbang secara terpisah. Pertama, kloramin dilarutkan dalam air, kemudian ditambahkan aktivator.

Keuntungan larutan kloramin teraktivasi dibandingkan larutan konvensional adalah penambahan aktivator mempercepat pelepasan klor aktif. Oleh karena itu, obat tersebut mempunyai efek merugikan tidak hanya pada bentuk vegetatif mikroorganisme, tetapi juga pada sporanya. Kloramin aktif digunakan dalam konsentrasi yang lebih rendah dan paparan yang lebih sedikit.

Fenol (asam karbol) adalah kristal berbentuk jarum tidak berwarna dengan bau khas yang menyengat. Saat terkena cahaya, udara, dan kelembapan, kristal memperoleh warna merah tua. Simpan di bank-bank yang tutup terbuat dari kaca berwarna gelap dan di tempat terlindung dari cahaya.

Fenol larut dalam air, alkohol, eter, dan minyak lemak. Memiliki higroskopisitas yang tinggi, ia menyerap kelembapan dari lingkungan dan menjadi cair. Asam karbolik cair mengandung 90% fenol kristal dan 10% air.

Gunakan larutan asam karbolik 3-5% dalam air yang dibuat dari fenol kristal dan asam karbol cair sesuai dengan skema yang diberikan dalam tabel. 7. Aktivitas fenol meningkat bila dilarutkan dalam air panas (40-50°C).

Perhatian! Fenol kristal atau asam karbol cair, jika mengenai kulit, dapat menyebabkan iritasi, dan dalam konsentrasi tinggi - luka bakar parah. Oleh karena itu, asam karbol harus ditangani dengan sangat hati-hati. Saat menyiapkan solusi, Anda harus mengenakan sarung tangan karet atau sebagai upaya terakhir Lumasi tangan Anda dengan Vaseline.

Jika asam karbolik mengenai kulit Anda, segera bilas dengan air hangat dan sabun atau etil alkohol 40°.

Catatan. Untuk menyiapkan larutan desinfektan fenol, akan lebih mudah dan aman menggunakan asam karbol cair.

Pertanyaan kontrol

1. Disinfektan apa yang digunakan dalam praktik mikrobiologi?

2. Jelaskan penampilan dan sifat dasar pemutih, kloramin, fenol.

3. Larutan disinfektan apa yang digunakan untuk mendisinfeksi bahan yang terinfeksi mikroorganisme berbentuk spora?

Latihan

Siapkan 2 liter larutan pemutih yang berfungsi 5%; 500 ml larutan kloramin 3%, 300 ml larutan kloramin aktif 1%.

Perhatian! Sebelum Anda mulai menyiapkan solusi, buatlah perhitungan.

Sterilisasi- infertilitas; pemusnahan mikroorganisme patogen dan non-patogen dalam bentuk vegetatif dan spora pada bahan apapun.

Mempersiapkan piring untuk sterilisasi. Peralatan gelas laboratorium harus dicuci bersih dan disterilkan. Untuk mencuci, gunakan sabun atau larutan kimia deterjen. Piring baru direbus terlebih dahulu dalam larutan asam klorida 1-2% untuk menghindari pencucian kaca selanjutnya. Piring yang dicuci dengan air mengalir dibilas dengan air suling dan dikeringkan.

Tabung bakteriologis. Labu berbentuk kerucut dan matte ditutup dengan sumbat kapas, terdiri dari gulungan kapas yang dipilin rapat, ditutup dengan lapisan kain kasa. Sumbat logam berupa tutup luar juga telah dikembangkan untuk tabung reaksi bakteriologis. Perlu diingat bahwa mensterilkan sumbat kapas pada suhu tinggi menyebabkan pelepasan zat dari kapas yang menghambat pertumbuhan beberapa bakteri sensitif, seperti Brucella.

Saat memasang pipet, masukkan kapas ke ujung atas. Pipet Pasteur harus memiliki kapiler yang tertutup rapat. Tiap pipet ukur dibungkus dengan selembar kertas panjang selebar 4-5 cm, dimulai dari ceratnya, secara heliks sepanjang keseluruhannya. Pipet pasteur dibungkus kertas masing-masing 10-20 lembar, tabung reaksi masing-masing 15-20 lembar. Semua jenis pipet sebelum dan sesudah sterilisasi sebaiknya disimpan dalam wadah logam khusus. Sumbat pada labu juga ditutup dengan tutup kertas.

Sebelum sterilisasi, cawan Petri yang sudah bersih dan sudah dirakit dibungkus kertas, masing-masing 3 sampai 4 lembar. Setelah sterilisasi, kertas tersebut melindungi peralatan gelas steril dari kontaminasi mikroflora.

Sebelum sterilisasi, piring ditempatkan di lemari pengering tidak terlalu rapat untuk menjamin sirkulasi udara, dan dijaga agar suhu tidak melebihi 180?C, karena pada suhu yang lebih tinggi kertas dan kapas akan hangus. Setelah sterilisasi selesai, lemari pengering tidak dibuka sampai saat itu. Hingga suhu di dalamnya turun menjadi 70-80?C, karena penurunan tajam suhu dapat menyebabkan kaca pecah.

Jika cawan dimaksudkan untuk mensterilkan media nutrisi di dalamnya dengan cara diautoklaf pada tekanan minimal 1 atm, maka cawan tersebut tidak disterilkan terlebih dahulu. Saat mensterilkan media dengan uap yang mengalir atau dalam autoklaf dengan tekanan tidak lebih dari 0,5 atm. Wadah steril harus digunakan.

Sterilisasi dengan udara panas kering. Metode tersebut digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas yang bersih. Untuk tujuan ini, oven Pasteur digunakan - lemari pengering khusus dengan dinding ganda. Bagian luarnya dilapisi bahan tahan panas. Di bagian atas ada termometer. Elemen pemanas listrik otomatis ditempatkan di bagian bawah antara casing tahan panas dan casing logam bagian dalam. Saat lemari pengering dihidupkan, udara di dalamnya memanas. Setelah suhu yang disetel tercapai, waktu mulai sterilisasi dicatat. Cara sterilisasi: pada suhu 155-160?C - pemaparan selama 2 jam, pada 165-170?C - 1-1,5 jam, pada 180?C - 1 jam Setelah waktu sterilisasi berakhir, pemanasan dihentikan.

Autoklaf. Ini adalah sterilisasi uap di bawah tekanan yang dikombinasikan dengan suhu tinggi peralatan khusus- autoklaf. Ketika uap jenuh bertemu dengan benda yang lebih dingin, uap tersebut mengembun menjadi air, melepaskan sejumlah besar panas. Selain itu, volume uap berkurang, sehingga memudahkan penetrasi ke bagian dalam bahan yang disterilkan. Prasyaratnya adalah pasokan uap yang benar-benar jenuh, sehingga kontaknya dengan benda dingin langsung menyebabkan kondensasi dan pemanasan. Industri ini memproduksi autoklaf vertikal dan horizontal.

Autoklaf vertikal adalah kuali logam silinder berdinding ganda, ditutup dengan penutup. Air dialirkan ke sela-sela dinding melalui keran khusus dengan corong hingga ketinggian tertentu. Dinding bagian dalam ketel dilengkapi dengan lubang di bagian atas dan keran di bagian bawah, yang melaluinya, ketika air dipanaskan, uap akan menggantikan udara dari ketel. Bingkai pelindung logam ditempatkan di atas autoklaf, dan harus ada ruang kosong antara autoklaf dan autoklaf itu sendiri. Autoklaf dipanaskan dengan menghubungkan ke jaringan listrik.

Autoklaf diisi dengan bahan yang akan disterilkan, tutup dan keran tempat menuangkan air ditutup, dan keran bawah dibiarkan terbuka untuk sementara. Air panas di antara dinding autoklaf mendidih, uap yang dihasilkan naik dan melewati lubang atas dinding bagian dalam ke dalam ketel, mendorong udara keluar melalui keran terbuka bawah. Ketika semua udara dipindahkan dan uap mulai keluar secara merata, katup bawah ditutup. Akibatnya tekanan uap di dalam autoklaf meningkat. Awal sterilisasi dianggap saat tekanan mencapai nilai tertentu (menurut pengukur tekanan). Panas disesuaikan selama sterilisasi, menjaga tekanan uap pada tingkat yang sama. Jika tekanan di dalam autoklaf meningkat secara berlebihan, terdapat katup pengaman yang melaluinya kelebihan uap secara otomatis akan keluar.

Ketika tekanan uap meningkat, suhu dalam autoklaf juga meningkat.

Pengukur tekanan menunjukkan tekanan uap tanpa memperhitungkan tekanan atmosfer sekitar (760 mm Hg). Setelah waktu sterilisasi habis, autoklaf dimatikan. Setelah pendinginan, ketika pembacaan pengukur tekanan nol, buka katup untuk mengeluarkan uap.

Autoklaf horizontal berbeda dengan autoklaf vertikal dalam desainnya, namun prinsip pengoperasiannya sama.

sterilisasi virologi hewan patologis

Contoh formulir yang harus diisi pada saat pengiriman bahan patologis ke laboratorium

Panas kering digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Piring yang disiapkan untuk sterilisasi dimasukkan secara longgar ke dalam oven untuk memastikan pemanasan bahan yang disterilkan secara seragam dan andal. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas, atur suhu menjadi 160-165 ° C dan sterilkan pada suhu tersebut selama 1 jam.Setelah sterilisasi selesai, matikan api, tetapi jangan membuka pintu lemari sampai oven sudah dingin; Jika tidak, udara dingin yang masuk ke dalam kabinet dapat menyebabkan keretakan pada peralatan masak panas.

Sterilisasi dalam oven Pasteur dapat dilakukan pada suhu dan paparan (waktu sterilisasi) yang berbeda-beda (Tabel 1).

Tabel 1. Cara sterilisasi

Untuk menentukan suhu di dalam oven Pasteur dapat menggunakan sukrosa atau gula pasir yang menjadi karamel pada suhu 165-170°C.

Cawan petri dibungkus dengan kertas satu atau lebih potongan sekaligus atau ditempatkan dalam wadah logam khusus.

Ujung tajam pipet Pasteur disegel dalam api pembakar dan dibungkus kertas, 3-5 lembar sekaligus. Pipet pasteur harus dibungkus dengan hati-hati agar tidak merusak ujung kapiler yang tertutup rapat.

Catatan. Pada suhu tinggi, kertas yang membungkus cangkir dan pipet, serta kapas menjadi kuning dan bahkan dapat hangus, sehingga setiap jenis kertas baru yang diterima di laboratorium harus diuji pada kondisi suhu yang dapat diterima.

Pertanyaan kontrol

1. Apa yang dimaksud dengan istilah sterilisasi?

2. Bagaimana sterilisasi dilakukan?

3. Apa yang disterilkan dengan cara kalsinasi di atas api?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian oven Pasteur.

5. Apa yang disterilkan dalam oven Pasteur?

6. Bagaimana peralatan gelas disiapkan untuk sterilisasi?

7. Mengapa media nutrisi dan benda karet tidak bisa disterilkan dalam oven Pasteur?

Latihan

Siapkan cawan Petri, pipet ukur, pipet Pasteur, tabung reaksi, labu dan vial untuk sterilisasi.