Pengaruh faktor fisik terhadap mikroorganisme. Mode pengoperasian oven pengering Nomor kontrol...

Dalam praktek laboratorium, ketika bekerja dengan mikroorganisme, perlu selalu dilakukan tindakan untuk memastikan bahwa piring, media kultur, dan instrumen logam yang digunakan selama bekerja tidak mengandung mikroba. Untuk tujuan ini, metode sterilisasi berikut digunakan:

Sterilisasi uap super panas dibawah tekanan;

Sterilisasi dengan uap yang mengalir;

sterilisasi udara panas;

Disinfeksi.

Metode sterilisasi terbaik adalah dengan mengolah berbagai benda dengan uap super panas perangkat khusus- autoklaf.

Autoklaf dan sterilisasi uap super panas di bawah tekanan

Autoklaf adalah ketel logam (baja, besi cor atau tembaga) dengan dinding ganda dan penutup besar yang ditutup rapat dengan baut dan paking karet. Tergantung pada sistem pemanasnya, autoklaf bisa berupa uap, listrik, dan api (Gbr. 42). Menghasilkan uap bertekanan tinggi dan panas berlebih pada suhu 115-120°C dalam autoklaf memungkinkan Anda menghancurkan sel vegetatif dan spora mikroba dalam waktu 20-30 menit.

Dalam autoklaf, semua benda yang tidak rusak pada suhu tinggi disterilkan: berbagai cairan (air, media nutrisi yang tidak mengandung komponen karbohidrat), barang pecah belah, instrumen logam, kapas, kain kasa, kertas, dll.

Dalam kasus di mana beberapa zat tidak tahan terhadap aturan sterilisasi normal dalam autoklaf (khususnya, media nutrisi yang mengandung gula), zat tersebut disterilkan dalam autoklaf pada suhu 112°C selama 20 menit, serta dalam kondisi yang lebih ringan.

Pada tekanan tinggi uap super panas dalam autoklaf, suhu pemanasan pun meningkat; Hal ini menyebabkan karamelisasi gula yang ditambahkan pada beberapa media kultur, sehingga media tersebut tidak cocok untuk menentukan sifat fisiologis mikroba.

Tekanan di dalam autoklaf diukur menggunakan alat pengukur tekanan yang dipasang pada tutup atau badan autoklaf. Jika tekanan meningkat secara berlebihan, katup pengaman diaktifkan secara otomatis, yang terletak, tergantung pada desainnya, baik pada tutup atau pada permukaan samping dinding autoklaf. Semburan uap yang keluar dari katup pengaman dengan peluit memperingatkan perlunya menghentikan pemanasan. Jika pemanasan tidak dihentikan, autoklaf bisa meledak.

Termometer kadang-kadang ditempatkan di kantong khusus pada tutup autoklaf, yang digunakan untuk mengukur suhu sterilisasi. Ada dudukan di dalam autoklaf, di mana air dituangkan melalui tabung dengan corong yang terletak di luar autoklaf. Selain itu, autoklaf dilengkapi dengan keran untuk mengeluarkan uap dan udara serta keran untuk mengeluarkan air.

Aturan penanganan autoklaf selama sterilisasi adalah sebagai berikut: alat diisi air melalui corong dan tabung yang ketinggiannya harus di bawah dudukan. Barang-barang yang akan disterilkan ditempatkan dalam botol logam khusus dan dimasukkan ke dalam autoklaf. Tutup autoklaf disekrup.

Dengan membuka keran agar uap dan udara keluar, pemanasan dimulai. Segera setelah air mendidih, uap yang dihasilkan mulai menggantikan udara dari autoklaf. Katup keluar uap tetap terbuka sampai uap kering keluar secara terus menerus. Hal ini menunjukkan hilangnya udara sepenuhnya dari autoklaf. Kemudian keran ditutup. Uap, yang terakumulasi selama pemanasan lebih lanjut dalam jumlah yang semakin besar, meningkatkan tekanan dalam autoklaf, dan pada saat yang sama suhu. Saat bekerja dengan autoklaf, Anda dapat dipandu oleh tabel hubungan antara tekanan uap dan suhunya (Tabel 4).

Setelah jarum pengukur tekanan mencapai indikator yang diperlukan tekanan (suhu dalam autoklaf akan sesuai dengan suhu sterilisasi yang diterima), sesuaikan pemanasan autoklaf sehingga tekanan tetap pada tingkat yang sama selama waktu yang diperlukan. Di akhir sterilisasi, hentikan pemanasan. Ketika suhu dalam autoklaf turun dan jarum pengukur tekanan turun menjadi nol (tekanan dalam autoklaf sama dengan tekanan atmosfer), buka katup pelepas uap dengan hati-hati, keluarkan uap dan, buka tutup autoklaf, keluarkan bahan. Tidak mungkin membuka katup pelepas uap sebelum waktunya, sebelum tekanan dalam autoklaf turun. Penurunan tajam tekanan dalam ruang autoklaf akan menyebabkan cairan mendidih dengan hebat yang dipanaskan hingga suhu lebih tinggi dari 100 °C, yaitu. di atas titik didih normal tekanan atmosfir. Cairan yang mendidih dengan hebat akan membasahi atau bahkan mendorong sumbat kapas keluar dari wadah - pekerjaan akan sia-sia. Media nutrisi akan rusak, karena mikroflora yang berasal dari udara mudah berkembang pada sumbat basah, menembus ke dalam dan menginfeksi media. Selain itu, membuka autoklaf dengan tekanan tinggi juga berbahaya bagi pekerja.

Namun, segera setelah jarum pengukur tekanan berhenti di angka nol, autoklaf harus segera dibuka, jika tidak, kondensasi akan mulai mengalir ke sumbat dan juga menyebabkannya menjadi basah. Untuk menghindari basahnya sumbat dengan air kondensasi, sumbat ditutup dengan kertas sebelum disterilkan.

Bahan yang ditempatkan dalam autoklaf akan disterilkan dengan baik dalam waktu 20-30 menit jika suhu dipertahankan pada 120°C, yang sesuai dengan tekanan 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) atau pada pengukur tekanan 1 atm di atas normal. Autoklaf juga berhasil digunakan untuk mensterilkan media dengan uap yang mengalir; dalam hal ini, tutup autoklaf tidak disekrup.

Ketel Koch dan sterilisasi uap mengalir

Ketel Koch adalah silinder yang terbuat dari lembaran galvanis atau tembaga dengan dinding ganda dan tutup berbentuk helm (Gbr. 43). Terdapat lubang di tengah tutupnya untuk termometer. Bagian luar boiler Koch dilapisi dengan lapisan bahan isolasi panas: asbes, linoleum, dll.

Sebuah partisi (dudukan) ditempatkan di dalam ketel, membagi ruang internal ketel menjadi dua bagian: atas dan bawah. Bagian bawah diisi dengan air, yang ketinggiannya ditentukan oleh gelas meteran air: air tidak boleh menutupi bagian atas dudukan. Barang-barang yang akan disterilkan ditempatkan di bagian atas ketel dalam ember berkisi yang diletakkan satu di atas yang lain. Setelah menutup ketel dengan penutup, mereka mulai memanaskan air di dalamnya. Awal sterilisasi dianggap saat termometer menunjukkan 98-100°C. Dengan tidak adanya termometer, permulaan sterilisasi dianggap sebagai saat uap mulai keluar dengan kuat dari lubang di tutup ketel. Dengan demikian, benda-benda yang akan disterilkan akan selalu berada dalam aliran uap yang mengalir selama boiler beroperasi.

Metode sterilisasi dengan uap yang mengalir, karena kesederhanaan dan ketersediaannya, banyak digunakan dalam praktek laboratorium. Uap yang mengalir terutama digunakan untuk mensterilkan media nutrisi yang sifatnya berubah ketika dipanaskan di atas 100°C: protein, karbohidrat, dan gelatin. Untuk lingkungan seperti ini, metode sterilisasi uap mengalir paling cocok.

Kerugian dari metode sterilisasi uap mengalir adalah durasinya, karena untuk mensterilkan media secara menyeluruh perlu dilakukan pemanasan berulang kali dalam boiler untuk waktu tertentu - dari 20 menit hingga 1,5 jam (rata-rata 30-45 menit) tergantung pada volume cairan dengan interval 24 jam Disarankan untuk menjaga seluruh periode waktu antara pemanasan media dalam termostat pada 25-30 °C.

Pemanasan tunggal dalam ketel Koch hanya menyebabkan kematian sel mikroba vegetatif, tetapi spora dapat bertahan hidup. Saat menyimpan media nutrisi yang disterilkan kondisi yang menguntungkan(pada suhu kamar, atau bahkan lebih baik lagi di termostat), beberapa spora yang tersisa akan berkecambah dan berubah menjadi sel vegetatif keesokan harinya. Pemanasan yang berulang-ulang akan menyebabkan kematian sel-sel yang baru berkembang ini. Terakhir, pemanasan ketiga setelah seharian menyimpan media dalam termostat akan memastikan sterilitas total. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. DI DALAM kerja praktek Daripada sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam ketel Koch, sterilisasi konvensional dalam autoklaf sering digunakan pada suhu 112 °C dengan tekanan balik 0,5 atm selama 15-20 menit.

Kabinet pengering dan sterilisasi udara panas

Dalam praktik laboratorium, untuk mensterilkan peralatan gelas mikrobiologi diperlukan lemari pengering atau biasa disebut oven Pasteur. Prinsip desain lemari pengering dan oven Pasteur adalah sama. Kompor dibuat saja bentuk persegi panjang, dan lemari pengering tidak hanya berbentuk persegi panjang, tetapi juga silinder (Gbr. 44 dan 45). Pada alat tersebut, sterilisasi dilakukan dengan udara panas (panas kering) pada suhu 160 °C selama 1 jam atau pada suhu 150 °C selama 2 jam.

Baik oven Pasteur maupun oven pengering memiliki bagian dalam berongga dengan dinding ganda, dengan pintu ganda yang tertutup rapat. Di luar, mereka ditutupi dengan lapisan asbes untuk isolasi termal. Bersirkulasi di antara dinding udara panas, pemanasannya dilakukan dengan spiral listrik atau pembakar gas. Di dalam kabinet terdapat beberapa (biasanya dua atau tiga) rak berlubang. Ada dua bukaan di bagian atas kabinet: satu untuk termometer, dan satu lagi untuk ventilasi. Lemari pengering listrik adalah yang paling nyaman.

Lemari pengering desain terbaru memiliki empat tahap pemanasan yang dapat diaktifkan dengan pengatur khusus yang ditempatkan pada dinding samping lemari. Tingkat pemanasan yang diinginkan dicapai dengan menyalakan satu, dua, tiga atau keempatnya spiral listrik, dan urutan menyalakan spiral bisa apa saja.

Selain peralatan gelas, Anda dapat mensterilkan kain kasa dan kapas di lemari pengering, meskipun lebih baik mengolahnya dalam autoklaf, karena akan menguning pada suhu 160 °C. Tidak dapat disterilkan lemari pengering produk karet, karena tidak tahan suhu tinggi, menjadi rapuh dan rusak. Cairan mendidih pada suhu 150-160 °C dan mengubah komposisi kimianya.

Untuk menghindari kontaminasi lebih lanjut pada barang-barang yang disterilkan oleh mikroba dari udara, barang-barang tersebut dibungkus dengan kertas sebelum disterilkan. Cawan petri dibungkus dengan kertas masing-masing 2 lembar, sehingga tidak ada celah pada pembungkusnya. Tabung kaca dan pipet juga dibungkus dengan kertas, mula-mula masing-masing terpisah, kemudian dalam kemasan berisi 10-20 lembar. Pembungkusan tabung dan pipet harus sangat hati-hati untuk melindunginya sepenuhnya permukaan luar dari komunikasi dengan udara. Sebelum sterilisasi dengan udara panas, labu, tabung reaksi, botol ditutup dengan sumbat kapas dan tutup kertas.

Jangan biarkan suhu di dalam lemari pengering melebihi 170 °C, karena pada suhu ini kapas akan berubah warna menjadi coklat, dan pembungkus kertas menjadi rapuh bahkan hangus. Awal sterilisasi dianggap saat termometer menunjukkan 150-160 °C. Setelah waktu sterilisasi yang diperlukan berlalu, pemanasan dihentikan. Untuk melindungi piring agar tidak retak, Anda hanya perlu mensterilkan piring kering dan membuka lemari setelah sterilisasi hanya jika suhu di dalamnya turun hingga 50-70 °C. Benda-benda laboratorium kecil, seperti simpul platina, jarum, pinset, gunting, dll., dapat disterilkan hanya dengan menyalakannya di dalam nyala api. kompor gas(atau lampu alkohol).

Disinfeksi

Disinfeksi di laboratorium mikrobiologi harus sering dilakukan. Disinfektan yang paling umum digunakan adalah sebagai berikut: larutan asam karbol 3-5% dan larutan fenol lain yang lebih tinggi, larutan 50-70% etil alkohol, konsentrasi butil alkohol yang sama, larutan formaldehida 4%, larutan kloroform dan toluena 1-2%, larutan kloramin 0,5%, dll.

Di laboratorium mikrobiologi pabrik pengalengan, permukaan meja, piring, lantai, dan dinding tempat didesinfeksi. Untuk mendisinfeksi permukaan meja, Anda tidak hanya dapat menggunakan larutan etil alkohol, tetapi juga larutan asam karbol.

Disinfeksi perangkat saluran pembuangan di pabrik pengalengan dan lain-lain perusahaan makanan diproduksi oleh larutan pemutih 5-10%. Untuk desinfeksi sirkulasi wadah kaca digunakan di pabrik pengalengan air klorin, mengandung setidaknya 100 mg klorin aktif per liter. Untuk menyiapkan larutan seperti itu, ambil pemutih dan campur dengan sedikit air sampai diperoleh massa yang kental. seperti susu. Campuran ini ditambahkan ke dalam air, diaduk rata dan dibiarkan selama sehari. Bubuk pemutih bereaksi membentuk kalsium oksida hidrat - Ca(OH)2 - dan klorin aktif. Ca(OH)2 mengendap di dasar, larutan di atas sedimen setelah diklarifikasi menjadi transparan dan berwarna kehijauan. Perendaman wadah dalam larutan ini berlangsung 10 menit. Setelah klorinasi, wadah harus dicuci bersih dengan air mengalir.

Termostat– alat untuk menjaga suhu konstan - digunakan untuk menumbuhkan kultur mikroorganisme. Ini adalah kabinet (Gambar 1) yang disimpan dalam waktu lama suhu tertentu. Suhu optimal untuk reproduksi banyak mikroorganisme 37 ºС. Termostat tersedia dalam jenis udara kering dan air.

Lemari pengering (oven Pasteur) digunakan untuk sterilisasi panas kering pada piring, peralatan dan bahan kering, seperti pati, kapur (Gambar 2). Bahan yang akan disterilkan terlebih dahulu dibungkus dengan kertas dan diletakkan di dalam lemari agar tidak menyentuh dinding. Sterilisasi dilakukan pada suhu 160 ºС selama dua jam. Tidak disarankan untuk menaikkan suhu di atas 180 ºС: sumbat kapas dan kertas mulai rusak (berubah menjadi coklat, menjadi rapuh). Bahan yang telah disterilkan dikeluarkan setelah lemari dimatikan dan didinginkan, sebaiknya bila suhu dalam lemari sama dengan suhu ruangan.

Alat penghitung koloni(Gambar 3) - penghitung semi-otomatis yang dilengkapi dengan pena listrik perangkat pegas, dirancang untuk menghitung koloni bakteri dalam cawan Petri. Cangkir
Petri yang berisi koloni bakteri diletakkan terbalik pada kaca pemindai. Tekanan ringan pena listrik pada area dasar cawan Petri yang sesuai dengan posisi koloni meninggalkan bekas pada kaca. Dalam hal ini, dudukannya naik, sirkuit ditutup, dan pembacaan meter bertambah satu. Jumlah koloni bakteri dihitung dengan menghitung selisih pembacaan penghitung denyut nadi sebelum dimulainya penghitungan dan setelah penghitungan berakhir.

Autoklaf(Gambar 4) adalah peralatan berdinding tebal yang dirancang untuk mensterilkan piring dan media kultur dengan uap bertekanan. Ini adalah kuali tertutup dengan dinding logam ganda dan penutup. Ruang antar dinding (ruang uap air) diisi air. Pedalaman(ruang sterilisasi) dilengkapi dengan pengukur tekanan, katup pengaman dan keran untuk mengalirkan air dan uap. Untuk membuat segel yang rapat, autoklaf ditutup rapat dengan penutup yang dilengkapi paking karet. Digunakan untuk mensterilkan media kultur pada tekanan 0,5 hingga 1,0 MPa selama 20...30 menit.

1 – tubuh; 2 – termometer; 1 – penutup; 2 – tubuh;

3 – pintu; 4 – potensiometer; 3 – kotak roda gigi; 4 – unit kendali;

5 – sakelar sakelar; 6 – lampu; 5 – menandai; 6 – termometer

7 – lubang ventilasi

Gambar 1 - Termostat Gambar 2 - Lemari pengering

1 – meja untuk cawan Petri; 2 – pena dengan perangkat pegas;

3 – indikator penghitung; 4 – sakelar sakelar untuk menghidupkan penghitung pulsa; 5 – sakelar sakelar untuk menyalakan lampu penerangan meteran

Gambar 3 - Alat untuk menghitung koloni mikroorganisme

Sterilisasi diwakili oleh metode fisik, kimia, mekanik dan biologis serta berbagai metode. Kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu dan cara-caranya tergantung pada karakteristik bahan yang akan disterilkan, fisik dan bahannya. sifat kimia. Lamanya sterilisasi tergantung pada benda yang disterilkan, bahan sterilisasi serta dosisnya, suhu dan kelembabannya lingkungan.

Metode fisik sterilisasi Metode sterilisasi metode fisik meliputi pengeringan, pembakaran dan kalsinasi, perebusan, pasteurisasi dan tindalisasi, udara panas (panas kering), ultrasound, radiasi ultraviolet dan radioaktif, arus frekuensi tinggi, sinar matahari. Metode sterilisasi barang yang paling umum yang dapat terkena suhu tinggi adalah sterilisasi dengan api, udara panas, dan uap jenuh di bawah tekanan. Api digunakan untuk membakar benda-benda terinfeksi yang tidak bernilai apapun (kertas-kertas yang tidak diperlukan, kertas dinding bekas, kain perca, sampah), untuk mendisinfeksi dahak penderita tuberkulosis, jenazah manusia dan hewan yang meninggal khususnya. infeksi berbahaya, serta untuk membakar dan mengapur berbagai benda. Pembakaran dan kalsinasi banyak digunakan dalam praktik mikrobiologi untuk desinfeksi instrumen, laboratorium, dan peralatan gelas farmasi. Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah suatu metode sterilisasi dimana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel-sel vegetatif, kista dan spora mikroorganisme mati. Biasanya, loop, spatula, pipet, kaca objek dan kaca penutup, instrumen kecil dan benda terkontaminasi lainnya disterilkan dengan kalsinasi jika tidak dapat direbus. Tidak disarankan mensterilkan gunting dan pisau bedah dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam jika terkena api. Salah satu metode sterilisasi fisik yang paling sederhana dan umum digunakan dalam praktik medis adalah sterilisasi udara panas (panas kering). Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven pengering (oven Pasteur). Udara panas kering memiliki efek bakterisidal, virusisidal, sporisidal dan digunakan terutama untuk sterilisasi produk kaca (laboratorium piring - cangkir Labu petri, pipet, tabung reaksi, dll), serta produk logam yang dapat disterilkan dengan uap bertekanan. Selain itu, panas kering digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang terbuat dari porselen dan bahan tahan panas (bedak, tanah liat putih), serta mineral dan Minyak sayur, lemak, petroleum jelly, lanolin, lilin. Cara paling efektif untuk metode sterilisasi ini, yang menjamin kematian bentuk vegetatif dan spora, adalah suhu 160 - 180 derajat selama 15 menit. Anda tidak dapat mensterilkan bahan makanan, larutan isotonik, atau bahan yang terbuat dari karet dan bahan sintetis dengan panas kering, karena cairan akan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis akan meleleh. Sterilisasi uap jenuh di bawah tekanan - ini adalah metode yang paling andal dan paling sering dicoba untuk mensterilkan pembalut, air, dan sebagainya obat, media nutrisi, peralatan lunak, peralatan, serta untuk desinfeksi bahan limbah yang terkontaminasi. Dalam praktik bedah berpakaian, pakaian ahli bedah, dan pakaian dalam orang yang dioperasi didesinfeksi menggunakan uap dalam autoklaf. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan di perangkat khusus - autoklaf. Autoklaf sepenuhnya menghancurkan semua mikroorganisme dan spora. Metode sterilisasi tekanan uap didasarkan pada pemanasan bahan dengan uap air jenuh pada tekanan di atas tekanan atmosfer. Kombinasi suhu tinggi dan uap menjadikan metode ini sangat efektif. Dalam hal ini, sel vegetatif dan spora mikroba mati. Spora mikroba mati dalam waktu 10 menit di bawah pengaruh uap air jenuh, dan bentuk vegetatif mati dalam waktu 1 hingga 4 menit. Kekuatan bakterisida yang tinggi dari uap jenuh disebabkan oleh fakta bahwa, di bawah pengaruh uap air di bawah tekanan, protein sel mikroba membengkak dan menggumpal, akibatnya sel mikroba mati. Efek bakterisida dari uap air jenuh ditingkatkan dengan tekanan berlebih. Sterilisasi dalam autoklaf dilakukan dalam mode yang berbeda. Jadi, media nutrisi sederhana (daging - pepton agar dan daging - kaldu pepton) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120 derajat (1 atm). Namun dengan mode ini tidak mungkin mensterilkan media yang mengandung protein, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah oleh pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan dalam autoklaf pada suhu 0,5 atm. 10 – 15 menit atau uap yang mengalir secara fraksional. Dengan menggunakan suhu tinggi, Anda dapat menghancurkan bentuk mikroorganisme patogen yang paling persisten (termasuk yang membentuk spora) tidak hanya pada permukaan benda yang didesinfeksi, tetapi juga pada kedalamannya. Inilah keuntungan besar dari suhu tinggi sebagai alat sterilisasi yang andal. Namun, beberapa barang menjadi rusak karena pengaruh suhu tinggi dan dalam kasus ini perlu menggunakan metode dan cara desinfeksi lain. Sterilisasi lengkap bahan dan benda yang tidak memungkinkan penggunaan sterilisasi suhu tinggi dicapai dengan sterilisasi berulang dengan uap air dalam peralatan Koch pada suhu tidak melebihi 100 derajat. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Intinya adalah bahwa sisa bentuk mikroba spora yang tidak terbunuh, setelah seharian dalam termostat pada suhu 37 derajat, berkecambah menjadi sel vegetatif, yang kematiannya terjadi selama sterilisasi berikutnya. dari objek ini uap yang mengalir. Perawatan dengan uap cairan dilakukan tiga kali selama 30-40 menit. Memanaskan bahan satu kali pada suhu di bawah 100 derajat disebut pasteurisasi. Pasteurisasi diusulkan oleh Pasteur dan dimaksudkan terutama untuk menghancurkan sebagian besar mikroorganisme non-spora. Pasteurisasi dilakukan pada suhu 60 - 70 derajat selama 15 hingga 30 menit, pada suhu 80 derajat selama 10 hingga 15 menit. Dalam praktik mikrobiologi, pasteurisasi bahan benih sering digunakan untuk mengisolasi kultur murni mikroorganisme pembentuk spora dan untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme membentuk spora. Untuk cairan yang kehilangan rasa dan kualitas berharga lainnya bila terkena suhu tinggi (susu, jus beri dan buah, bir, media nutrisi yang mengandung karbohidrat atau urea, dll.), sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan pada suhu 50 - 60 derajat selama 15 - 33333330 menit atau pada suhu 70 - 80 derajat selama 5 - 10 menit. Dalam hal ini, mikroba dengan resistensi rata-rata mati, sementara mikroba dan spora yang lebih resisten tetap bertahan. Sterilisasi fraksional 5 - 6 kali lipat pada suhu 60 derajat selama 1 jam disebut tyndalisasi. Banyak produk medis yang terbuat dari bahan polimer, tidak tahan terhadap sterilisasi metode uap menurut mode yang diterima secara umum. Untuk banyak produk, karena karakteristik cairan yang dikandungnya (pengawet, obat-obatan, dan produk lainnya), tidak mungkin untuk mensterilkan menggunakan metode dan metode yang berlaku umum. Untuk produk tersebut, sistem sterilisasi individual dikembangkan untuk memastikan sterilisasi objek yang andal. Oleh karena itu, sterilisasi rotor untuk memisahkan darah menjadi fraksi-fraksi dilakukan dengan uap air pada suhu 120 derajat selama 45 menit. Sterilitas wadah pengawet dicapai pada suhu 110 derajat selama 60 menit. Perebusan adalah metode sterilisasi yang digunakan untuk menghilangkan sterilisasi jarum suntik yang dapat digunakan kembali, instrumen bedah, tabung karet, peralatan kaca dan logam. Sterilisasi dengan cara direbus dilakukan dalam alat sterilisasi. Bentuk spora dalam air mendidih akan mati setelah 20 - 30 menit. Merebus selama 45 menit banyak digunakan untuk mendisinfeksi sekret dan bahan infeksius lainnya, linen, piring, mainan, dan barang perawatan pasien. Air panas (60 - 100 derajat) dengan deterjen digunakan untuk mencuci dan membersihkan penghapusan mekanis kontaminan dan mikroorganisme. Kebanyakan sel vegetatif mati pada suhu 70 derajat setelah 30 menit. Sterilisasi filtrasi digunakan dalam kasus di mana substrat tidak tahan terhadap pemanasan, khususnya untuk media yang mengandung protein, serum, beberapa antibiotik, vitamin, dan zat yang mudah menguap. Teknik ini cukup banyak digunakan untuk mensterilkan cairan kultur, bila diperlukan untuk membebaskannya dari sel mikroba, namun untuk menjaga semua produk metabolisme yang dikandungnya tidak berubah. Metode ini melibatkan penyaringan cairan melalui filter khusus yang memiliki partisi berpori halus sehingga dapat mempertahankan sel mikroba. Dua jenis filter yang paling banyak digunakan adalah filter membran dan filter Seitz. Filter membran dibuat dari collodion, asetat, selulosa dan bahan lainnya. Filter Seitz terbuat dari campuran asbes dan selulosa. Selain itu, filter yang terbuat dari kaolin dengan campuran digunakan untuk sterilisasi. pasir kuarsa, dari tanah infusor dan dari bahan lain (“lilin” oleh Chamberlan, Berkfeld). Filter membran dan asbes dirancang untuk penggunaan satu kali. Dengan penyinaran ultraviolet, efek bakterisida diberikan oleh sinar dengan panjang 200 - 450 nm, yang sumbernya adalah lampu bakterisida. Menggunakan lampu bakterisida, udara disterilkan dengan sinar ultraviolet untuk tujuan terapeutik. lembaga pencegahan, kotak laboratorium mikrobiologi, di perusahaan Industri makanan, di kotak produksi vaksin dan serum, di ruang operasi, ruang manipulasi, fasilitas penitipan anak, dll. Sinar ultraviolet memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya dapat menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga sporanya. Sinar matahari menyebabkan matinya mikroorganisme akibat tindakannya iradiasi ultraviolet dan pengeringan. Pengeringan dengan sinar matahari mempunyai efek merugikan pada banyak jenis mikroorganisme, namun pengaruhnya hanya dangkal dan oleh karena itu sinar matahari memainkan peran pendukung dalam praktik sterilisasi. DI DALAM Akhir-akhir ini dalam pengobatan luka dan luka bakar, digunakan pelapis yang terbuat dari polimer sintetik dan alami dalam bentuk gel. Film antiseptik polimer banyak digunakan untuk pengobatan luka dan luka bakar lokal. Mereka mengandung agen antimikroba spektrum luas seperti katapol, dioksidan, yodium biru, serta sorbitol yang mengandung glutaraldehid. Untuk mensterilkan film-film ini digunakan radiasi pengion dengan dosis 20,0 kGy. Selama produksi industri film dan sorben antiseptik polimer, sterilitasnya di bawah sistem sterilisasi ini dijamin sepenuhnya. Radiasi radioaktif membunuh semua jenis mikroorganisme, baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Ini banyak digunakan untuk sterilisasi di perusahaan yang memproduksi produk steril dan peralatan medis sekali pakai yang steril, untuk desinfeksi Air limbah dan bahan baku asal hewan.

Metode mekanis sterilisasi Metode sterilisasi mekanis menghilangkan kuman dari permukaan benda. Ini termasuk mencuci, mengguncang, menyapu, menyeka basah, mengudara, ventilasi, menyedot debu, mencuci.

Metode sterilisasi kimia Plastik kini semakin banyak digunakan dalam praktik medis. Mereka digunakan dalam kedokteran gigi, bedah maksilofasial, traumatologi, ortopedi, dan bedah. Kebanyakan plastik tidak tahan terhadap metode sterilisasi panas uap di bawah tekanan dan panas kering (udara panas kering). Larutan alkohol, diosida, dan larutan terner yang digunakan untuk mensterilkan benda-benda tersebut tidak menjamin sterilitas produk yang diproses. Oleh karena itu, metode gas dan radiasi, serta larutan bahan kimia, digunakan untuk mensterilkan produk plastik. Pengantar praktik institusi medis jumlah besar produk yang terbuat dari bahan termolabil berkontribusi terhadap masuknya radiasi, metode gas desinfeksi dan sterilisasi dengan larutan desinfektan. Pada sterilisasi kimia gunakan gas dan bahan dari berbagai kelompok kimia (peroksida, fenolik, mengandung halogen, aldehida, basa dan asam, surfaktan, dll.). Untuk penggunaan sehari-hari, diproduksi deterjen, pembersih, pemutih dan sediaan lainnya yang memiliki efek antimikroba karena diperkenalkannya berbagai macam bahan. zat kimia. Persiapan ini digunakan untuk pembersihan dan desinfeksi sanitasi peralatan teknis, piring, linen, dll. Uap formaldehida (bentuk uap) dapat digunakan institusi medis untuk sterilisasi produk logam keperluan medis (pisau bedah, jarum, pinset, probe, klem, kait, pemotong kawat, dll.). Sebelum disterilkan dengan uap formaldehida, produk harus dibersihkan terlebih dahulu dan dikeringkan secara menyeluruh. Saat disterilkan dengan cara apa pun secara kimia Peraturan pengolahan suatu benda tertentu tergantung pada karakteristik benda yang didisinfeksi, ketahanan mikroba, dan karakteristik sifat-sifatnya. persiapan kimia, suhu lingkungan, kelembaban dan faktor lainnya. Dengan demikian, sterilitas instrumen logam dicapai dengan menyimpannya dalam ruang tertutup dengan uap selama lima jam pada suhu minimal 20 derajat dan kelembaban relatif 95 - 98%, pada suhu 15 derajat, sterilitas lengkap dari benda-benda ini hanya tercapai setelah 16 jam. Aktivitas sporisidal glutaraldehid bergantung pada suhu. Tindakan optimalnya terjadi pada suhu 15 - 25 derajat. Ketika suhu naik, aktivitas sporisidal obat ini menurun. Sterilisasi metode kimia Penggunaannya agak terbatas. Paling sering, metode ini digunakan untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum). Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 derajat dan bahan pengawet tersebut diuapkan. Untuk pengawetan vaksin atau serum, digunakan merthiolate, asam borat, formalin.

Metode biologis sterilisasi Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini banyak digunakan dalam budidaya virus.

Kalsinasi terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang dapat diandalkan, namun penggunaannya terbatas karena kualitas barangnya menurun. Loop bakteriologis disterilkan dengan cara ini.

Sterilisasi kering demam. Dilakukan dalam oven Pasteur (tendon ------

oven) pada suhu 160-170°C selama 1 jam. Cara ini digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium, pipet yang dibungkus kertas, dan tabung reaksi yang ditutup dengan sumbat kapas. Pada suhu di atas 170°C, kertas, kapas, dan kain kasa mulai hangus.

Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Metode sterilisasi paling universal. Itu dilakukan dalam autoklaf - alat sterilisasi air-uap. Prinsip pengoperasian autoklaf didasarkan pada ketergantungan titik didih air terhadap tekanan.

Autoklaf adalah kuali logam berdinding ganda dengan tutup yang tertutup rapat. Air dituangkan ke bagian bawah autoklaf, benda yang akan disterilkan ditempatkan di ruang kerja, dan tutupnya ditutup tanpa terlebih dahulu mengencangkannya. Nyalakan api dan didihkan air. Uap yang dihasilkan menggantikan udara dari ruang kerja, yang keluar melalui katup keluar yang terbuka. Ketika semua udara telah dipindahkan dan aliran uap terus menerus keluar dari keran, keran ditutup dan tutupnya ditutup rapat. Uap dibawa ke tekanan yang diinginkan di bawah kendali pengukur tekanan. Suhu uap bergantung pada tekanan: pada tekanan atmosfer normal, jarum pengukur tekanan berada pada 0 atm. - suhu uap 100°C, pada 0,5 atm. - 112°C, pada 1 atm. -121°C, pada 1,5 atm. - 127°C, pada 2 atm. - 134°C. Di akhir sterilisasi, matikan autoklaf, tunggu hingga tekanan turun, keluarkan uap sedikit demi sedikit dan buka tutupnya. Biasanya pada tekanan 1 atm. dalam waktu 20-40 menit, media dan larutan nutrisi sederhana yang tidak mengandung protein dan karbohidrat, dressing, dan linen disterilkan. Bahan yang akan disterilkan harus dapat ditembus uap. Saat mensterilkan bahan dalam volume besar ( bahan bedah) waktu ditingkatkan menjadi 2 jam. Pada tekanan 2 atm. desinfeksi bahan patologis dan kultur mikroba bekas.

Media nutrisi yang mengandung gula tidak dapat disterilkan pada suhu 1 atm, karena menjadi karamel, sehingga dilakukan sterilisasi fraksional dengan uap yang mengalir, atau diautoklaf pada 0,5 atm.

Untuk mengontrol rezim sterilisasi, metode biologis dan fisik digunakan. Metode biologis didasarkan pada fakta bahwa spora Bacillus stearothermophilus ditempatkan bersamaan dengan bahan yang akan disterilkan, yang mati pada suhu 121°C dalam 15 menit. Setelah sterilisasi, spora tidak boleh tumbuh pada media nutrisi. Cara fisika didasarkan pada penggunaan zat yang mempunyai titik leleh tertentu, misalnya belerang (119°C), asam benzoat (120°C). Tabung tertutup berisi bahan campuran pewarna kering (fuchsin) dimasukkan ke dalam autoklaf bersama dengan bahan yang akan disterilkan. Jika suhu dalam autoklaf cukup, zat akan meleleh dan mengubah warna pewarna.

Sterilisasi yang dapat mengalir Uap dilakukan dalam peralatan Koch atau dalam autoklaf dengan penutup dibuka dan katup keluar terbuka. Air dalam peralatan dipanaskan hingga 100°C. Uap yang dihasilkan melewati bahan yang tertanam dan mensterilkannya. Perlakuan tunggal pada suhu 100°C tidak membunuh spora. Oleh karena itu, metode sterilisasi fraksional digunakan - 3 hari berturut-turut selama 30 menit, di sela-sela pendiaman selama sehari pada suhu kamar. Pemanasan pada suhu 100°C menyebabkan aktivasi termal pada spora, sehingga spora tersebut berkecambah menjadi bentuk vegetatif hingga keesokan harinya dan mati pada pemanasan kedua dan ketiga. Akibatnya, hanya media nutrisi yang bisa disterilkan dengan uap yang mengalir, karena Agar spora dapat berkecambah, diperlukan adanya nutrisi.

1. menyala(dari lat. flamma - api dan fr. flamb é - bakar) - sterilisasi dengan mengapur benda logam atau kaca kecil dalam nyala api. Dengan cara ini, loop bakteriologis, pinset logam, spatula dan tabung kaca, slide kaca, dll disterilkan dengan suhu nyala sekitar 1000ºC. Ketika dikalsinasi, semua mikroorganisme (bentuk vegetatif dan spora) terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal.

2. Mendidih. Merupakan salah satu yang paling banyak cara sederhana sterilisasi. Dilakukan dalam alat sterilisasi - logam kotak persegi panjang dengan penutup dan jaring di bagian bawah untuk meletakkan barang-barang yang disterilkan. Tuang air ke dalamnya dan panaskan hingga mendidih (pemanas listrik atau di atas api). Perebusan dapat berlangsung dari 15-30 menit hingga 2 jam pada suhu sekitar 100 ºС. Sterilkan benda logam atau kaca kecil - jarum suntik, jarum suntik, tabung kaca, dll. Dalam hal ini, mikroorganisme bentuk vegetatif dan beberapa spora mati. Dipraktekkan juga untuk melepuh bahan yang disterilkan dengan air mendidih.

3. Sterilisasi panas kering. Diproduksi dengan udara panas dalam oven atau oven Pasteur. Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang dilapisi asbes di bagian luar untuk insulasi termal. Di dalam kabinet ada rak logam dengan lubang untuk meletakkan bahan yang akan disterilkan. Pemanas listrik. Sterilisasi dilakukan pada suhu 160-180 ºС selama 1-2 jam sejak tercapai suhu tersebut (dikontrol dengan termometer). Panas kering terutama digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas - cawan Petri, pipet, spatula (dibungkus kertas), serta tabung reaksi dan labu. Teknik ini dapat diandalkan - mikroorganisme non-spora dan spora mati. Dibungkus kertas dan disterilkan, bahannya bisa disimpan.

4. Sterilisasi uap mengalir. Dilakukan panas udara yang lembab dalam peralatan Koch. Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam, yang dapat berkaki dan ditutup dengan linoleum. Air secukupnya dituangkan ke dalam alat sehingga tidak mencapai langkan, di atasnya ditempatkan lingkaran logam berlubang dan bahan yang akan disterilkan diletakkan di atasnya. Alat ditutup rapat dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang di tengahnya agar uap dapat keluar dan dipanaskan di atas api. Saat air mendidih, uap air panas dengan suhu sekitar 100 ºС akan “mengalir” dalam aliran deras dari lubang di tutupnya. Mulai saat ini, waktu mulai sterilisasi dicatat. Sterilisasi dengan uap yang mengalir berlangsung antara 45 menit hingga 1,5 jam, tergantung volume bahan yang akan disterilkan. Mensterilkan media nutrisi yang tidak dapat dipanaskan di atas 100 ºС, misalnya MPG (pada suhu di atas 100 ºС mencair dan tidak mengeras). Metode sterilisasi ini tidak sepenuhnya dapat diandalkan - hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang mati sepenuhnya, tetapi spora tetap terjaga. Untuk mencapai sterilisasi media yang lengkap dalam peralatan Koch, digunakan sterilisasi fraksional.

5. Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Itu dilakukan dengan uap air jenuh dalam autoklaf. Ada autoklaf desain yang berbeda. Autoklaf vertikal adalah ketel besar berdinding ganda, bagian luarnya dikelilingi oleh selubung logam, dengan penutup berengsel berat yang dibaut erat ke ketel. Di bagian bawah ketel terdapat corong dan keran untuk mengalirkan air ruang bebas antara boiler bagian dalam dan casing. Bahan yang akan disterilkan diletakkan di dasar ketel, tutupnya disekrup rapat, dan pemanas listrik dinyalakan. Saat air mendidih, uap masuk ke dalam ketel bagian dalam. Tekanan dalam autoklaf meningkat, dan pada saat yang sama suhu meningkat. Bila pengukur tekanan menunjukkan bahwa tekanan dalam ketel telah mencapai nilai yang ditentukan, tandai waktu mulai sterilisasi. Tekanan dipertahankan pada tingkat tertentu dengan menggunakan katup pengaman.

Biasanya dalam praktek laboratorium, sterilisasi tekanan dilakukan pada 1,5-2 atm dan suhu sekitar 115-120 ºС untuk

20-30 menit. Setelah waktu sterilisasi habis, pemanasan dihentikan, katup uap dibuka dan uap dikeluarkan. Sterilkan dengan uap di bawah tekanan media nutrisi MPB, MPA, peralatan gelas dengan air, bahan pembalut, peralatan bedah dll. Autoklaf adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal, yang membunuh semua bentuk mikroorganisme, bahkan spora yang paling resisten sekalipun.

6. Pasteurisasi. Metode sterilisasi parsial ini dinamai ilmuwan Perancis L. Pasteur yang mengusulkannya. Caranya, cairan yang dituangkan ke dalam wadah steril dipanaskan dalam penangas air dengan suhu 60-90 ºС selama

10-30 menit. Cocok untuk media cair yang berubah warna karakteristik fisikokimia pada suhu tinggi. Susu, krim, anggur, bir, jus, dll dipasteurisasi, pada saat yang sama, vitamin dan kualitas rasa produk. Produk yang dipasteurisasi penyimpanan jangka panjang tidak dikenakan, karena dengan metode sterilisasi ini hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang mati, dan spora tetap ada. Dalam praktik laboratorium, metode ini digunakan terutama untuk memisahkan spesies pembentuk spora dari spesies yang tidak membentuk spora.

7. Sterilisasi fraksional. Hal ini didasarkan pada pengolahan bahan yang akan disterilkan dalam beberapa tahap. Pecahan dapat berupa perebusan atau sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam alat Koch. Biasanya sterilisasi dilakukan selama 3 hari, 30 menit setiap hari, dengan menggunakan salah satu metode yang ditunjukkan, dan saat istirahat, media dibiarkan pada suhu kamar. Hal ini dilakukan untuk memicu pertumbuhan spora menjadi bentuk vegetatif dan kehancurannya selama perawatan selanjutnya, sehingga meningkatkan keandalan teknik ini.

8. Tyndalisasi. Ini adalah jenis sterilisasi fraksional (fractional pasteurization). Teknik ini dinamai ilmuwan Inggris D. Tyndall yang mengusulkannya. Dilakukan dalam penangas air pada suhu 56-58 ºС selama 1 jam, diulangi 5-7 kali setiap 24 jam.Dalam selang waktu pemanasan, bahan disimpan pada suhu kamar. Tyndallisasi dilakukan pada media nutrisi yang miskin mikroorganisme dan juga mengandung zat yang mudah hancur dan terdenaturasi pada suhu di atas 60 ºC (protein, vitamin). Ini adalah serum darah, telur, dll. Sebagai hasil dari tyndalisasi, penghancuran total mikroorganisme tercapai.