Sterilisasi dan keperluan mikrobiologi lainnya. Sterilisasi panas kering Pengeringan oven dan sterilisasi udara panas

Kalsinasi terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang dapat diandalkan, namun penggunaannya terbatas karena kualitas barangnya menurun. Loop bakteriologis disterilkan dengan cara ini.

Sterilisasi kering demam. Dilakukan dalam oven Pasteur (tendon ------

oven) pada suhu 160-170°C selama 1 jam. Cara ini digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium, pipet yang dibungkus kertas, dan tabung reaksi yang ditutup dengan sumbat kapas. Pada suhu di atas 170°C, kertas, kapas, dan kain kasa mulai hangus.

Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Metode sterilisasi paling universal. Itu dilakukan dalam autoklaf - alat sterilisasi air-uap. Prinsip pengoperasian autoklaf didasarkan pada ketergantungan titik didih air terhadap tekanan.

Autoklaf adalah kuali logam berdinding ganda dengan tutup yang tertutup rapat. Air dituangkan ke bagian bawah autoklaf, benda yang akan disterilkan ditempatkan di ruang kerja, dan tutupnya ditutup tanpa terlebih dahulu mengencangkannya. Nyalakan api dan didihkan air. Uap yang dihasilkan menggantikan udara dari ruang kerja, yang keluar melalui katup keluar yang terbuka. Ketika semua udara telah dipindahkan dan aliran uap terus menerus keluar dari keran, keran ditutup dan tutupnya ditutup rapat. Uap dibawa ke tekanan yang diinginkan di bawah kendali pengukur tekanan. Suhu uap bergantung pada tekanan: pada tekanan atmosfer normal, jarum pengukur tekanan berada pada 0 atm. - suhu uap 100°C, pada 0,5 atm. - 112°C, pada 1 atm. -121°C, pada 1,5 atm. - 127°C, pada 2 atm. - 134°C. Di akhir sterilisasi, matikan autoklaf, tunggu hingga tekanan turun, keluarkan uap sedikit demi sedikit dan buka tutupnya. Biasanya pada tekanan 1 atm. dalam waktu 20-40 menit, media nutrisi sederhana dan larutan yang tidak mengandung protein dan karbohidrat disterilkan, berpakaian, linen. Bahan yang akan disterilkan harus dapat ditembus uap. Saat mensterilkan bahan dalam volume besar ( bahan bedah) waktu ditingkatkan menjadi 2 jam. Pada tekanan 2 atm. desinfeksi bahan patologis dan kultur mikroba bekas.

Media nutrisi yang mengandung gula tidak dapat disterilkan pada suhu 1 atm, karena menjadi karamel, sehingga dilakukan sterilisasi fraksional dengan uap yang mengalir, atau diautoklaf pada 0,5 atm.

Untuk mengontrol rezim sterilisasi, metode biologis dan fisik digunakan. Metode biologis didasarkan pada fakta bahwa spora Bacillus stearothermophilus ditempatkan bersamaan dengan bahan yang akan disterilkan, yang mati pada suhu 121°C dalam 15 menit. Setelah sterilisasi, spora tidak boleh tumbuh pada media nutrisi. Metode fisik didasarkan pada penggunaan zat yang mempunyai titik leleh tertentu, misalnya belerang (119°C), asam benzoat (120°C). Tabung tertutup berisi bahan campuran pewarna kering (fuchsin) dimasukkan ke dalam autoklaf bersama dengan bahan yang akan disterilkan. Jika suhu dalam autoklaf cukup, zat akan meleleh dan mengubah warna pewarna.

Sterilisasi yang dapat mengalir Uap dilakukan dalam peralatan Koch atau dalam autoklaf dengan penutup dibuka dan katup keluar terbuka. Air dalam peralatan dipanaskan hingga 100°C. Uap yang dihasilkan melewati bahan yang tertanam dan mensterilkannya. Perlakuan tunggal pada suhu 100°C tidak membunuh spora. Oleh karena itu, metode sterilisasi fraksional digunakan - 3 hari berturut-turut selama 30 menit, di sela-sela pendiaman selama sehari di suhu kamar. Pemanasan pada suhu 100°C menyebabkan aktivasi termal pada spora, sehingga spora tersebut berkecambah menjadi bentuk vegetatif hingga keesokan harinya dan mati pada pemanasan kedua dan ketiga. Akibatnya, hanya media nutrisi yang bisa disterilkan dengan uap yang mengalir, karena Agar spora dapat berkecambah, diperlukan adanya nutrisi.

Ini adalah silinder logam berdinding ganda yang bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam. Itu tertutup rapat dengan penutup besar menggunakan beberapa sekrup. Dilengkapi dengan pengukur tekanan dengan katup pengaman dan katup uap.

Sebelum sterilisasi, air suling dituangkan ke dalam autoklaf melalui corong dengan gelas takar air sampai garis yang tertera pada wadah. Bahan untuk sterilisasi dimasukkan ke dalam ruang sterilisasi, ditutup rapat dengan penutup, disekrup dan sumber pemanas dihidupkan. Dalam hal ini, katup uap dibiarkan terbuka. Uap yang dihasilkan selama perebusan melewati antara dinding autoklaf dan masuk ke dalam ruangan melalui lubang di dinding bagian dalam. Saat dipanaskan, udara pertama-tama keluar dari autoklaf melalui katup uap, lalu uap. Pelepasan aliran uap kering yang terus menerus menunjukkan perpindahan udara sepenuhnya dari autoklaf: keran ditutup, dan sejak saat itu tekanan dalam autoklaf mulai meningkat secara bertahap, jarum pada pengukur tekanan naik. Awal sterilisasi dianggap saat jarum pengukur tekanan mencapai tekanan yang diinginkan.

Gambar.3

Pembacaan pengukur tekanan sesuai dengan suhu tertentu uap dalam autoklaf: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.

Bahan dalam autoklaf paling sering disterilkan pada 0,1 MPa selama 20-30 menit. Di akhir sterilisasi, matikan sumber pemanas (jarum pengukur tekanan secara bertahap mencapai nol). Setelah ini, buka katup uap dan keluarkan sisa uap. Kemudian dengan hati-hati buka tutupnya dan buka. Setelah benar-benar dingin, keluarkan bahan yang telah disterilkan.

Autoklaf dapat digunakan untuk mensterilkan piring, peralatan, media kultur (kecuali agar-agar dan media yang mengandung karbohidrat), dressing, dll. Saat bekerja, aturan keselamatan harus dipatuhi. Orang yang memiliki sertifikat hak penggunaan autoklaf diperbolehkan bekerja. Kemudahan servis autoklaf diperiksa oleh inspektorat ketel uap.

Peralatan Koch (Gbr. 4) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi dengan bahan (linoleum, asbes) yang tidak menghantarkan panas dengan baik. Air dituangkan ke bagian bawah, dan bahan sterilisasi ditempatkan di atas dudukan. Perangkat ditutup dengan penutup berbentuk kerucut, yang memiliki lubang untuk termometer dan saluran keluar uap. Di bagian bawah terdapat keran untuk mengalirkan air. Sterilisasi dilakukan dengan uap yang mengalir pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Dalam mode ini, sel-sel vegetatif mikroba pembentuk spora dan non-pembentuk spora mati. Sterilisasi fraksional (tiga kali) selama 30-60 menit selama tiga hari dengan interval 18-20 jam memungkinkan Anda menciptakan kondisi untuk perkecambahan spora ke dalam sel vegetatif dan membuangnya. Dalam interval waktu antara sterilisasi, spora berkecambah dan mati selama pemanasan berikutnya. Peralatan Koch mensterilkan bahan-bahan yang tidak tahan suhu di atas 100 °C (agar-agar, susu, media karbohidrat, dll.).

Media protein dan serum darah yang tidak tahan suhu 100 °C disterilkan secara fraksional pada suhu 56-58 °C dalam penangas air.

Lemari pengering (Oven Pasteur) (Gbr. 5) adalah lemari logam berdinding ganda yang dilapisi asbes di atasnya. Dinding atas memiliki lubang untuk termometer dan ventilasi. Udara panas naik dari bawah di antara dinding dan melalui bukaan atas masuk ke lemari, tempat bahan yang akan disterilkan diletakkan di rak. Sterilisasi dilakukan dengan panas kering suhu 150°C selama 2 jam, suhu 165-170°C - 45 menit, suhu 180°C - 15 menit. Peralatan gelas disterilkan dalam oven Pasteur. Setelah sterilisasi, kabinet dilepas dari oven. sumber pemanas dan dibuka hanya setelah pendinginan sempurna.

Filter bakteri digunakan untuk mensterilkan cairan tanpa pemanasan. Ini termasuk Chamberlant, lilin Berkefeld dan filter asbes Seitz (pelat).

Filter lilin (Gbr. 6) adalah silinder berongga yang terbuat dari bahan berpori halus: kaolin dengan campuran pasir kuarsa(Lilin Chamberlant) dan tanah infusorial (Lilin Berkefeld). Lilin Chamberlant punya berbagai ukuran pori-pori yang dilalui mikroba. Lilin yang dapat dilewati bakteri besar ditandai dengan huruf L9, L1(bis), L3, sedang - L5, L7, terkecil - L9, L11 , L13 Lilin Berkefeld ditentukan berdasarkan porositas W, N, V(lilin merk U mempunyai pori-pori paling besar).

Filter Seitz adalah pelat asbes dengan berbagai ukuran. Saat memasang perangkat untuk sterilisasi, pelat ditempatkan pada jaring di antaranya cakram logam(dengan lubang di tengahnya), yang ditekan rapat dengan sekrup. Filter yang sudah terpasang dimasukkan melalui sumbat ke dalam labu dengan saluran keluar samping (labu Bunsen) dan tabung karet, dibungkus kertas dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 120 °C selama 20-30 menit.

Untuk menyaring bahan, buatlah ruang hampa di dalam labu Bunsen dengan menyambungkan tabung karet yang berisi minyak yang telah dijernihkan ke dalamnya. pompa tangan Komovsky atau pompa vakum listrik.

Penyelesaian pekerjaan. Mikroba dibudidayakan pada kondisi suhu optimal. Untuk tujuan ini, laboratorium menggunakan termostat udara atau air.

(Gbr. 7) adalah lemari logam dengan dinding ganda yang di antaranya terdapat lapisan air atau udara. Bagian luar termostat dilapisi dengan bahan yang menghantarkan panas dengan buruk (asbes, linoleum).

Beras. 4, 5, 6.

Di dalam termostat terdapat rak untuk menempatkan benih mikroorganisme yang tumbuh. Suhu konstan dalam termostat dipertahankan menggunakan termostat, yang terpasang pada penutup atas termostat. Perangkat termostat didasarkan pada prinsip ekspansi linier zat. Termoregulasi adalah paduan dua logam dengan koefisien muai panas berbeda (kuningan, seng) atau “bantalan” logam yang diisi dengan alkohol, campuran alkohol dan eter, merkuri atau zat lain yang mengubah volumenya pada suhu tertentu. Ketika termostat memanas di atas norma yang ditetapkan, logam memuai, kontak terbuka dan aliran panas lebih lanjut secara otomatis tertunda. Setelah suhu turun, lampu menyala listrik dan aliran panas berlanjut.

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (pengeringan oven panas kering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet dengan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan regulator yang menjamin suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Panas kering digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Piring yang disiapkan untuk sterilisasi dimasukkan secara longgar ke dalam oven untuk memastikan pemanasan bahan yang disterilkan secara seragam dan andal. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas, atur suhu menjadi 160-165 ° C dan sterilkan pada suhu tersebut selama 1 jam.Setelah sterilisasi selesai, matikan api, tetapi jangan membuka pintu lemari sampai oven sudah dingin; jika tidak udara dingin, masuk ke dalam lemari dapat menyebabkan keretakan pada peralatan masak yang panas.

Sterilisasi dalam oven Pasteur dapat dilakukan dengan cara yang berbeda-beda kondisi suhu dan paparan (waktu sterilisasi) (Tabel 1).

Tabel 1. Cara sterilisasi

Cairan (media nutrisi, larutan natrium klorida isotonik, dll.), barang yang terbuat dari karet dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering, karena cairan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis meleleh.

Untuk mengontrol sterilisasi dalam oven Pasteur, benang sutra dibasahi dalam kultur bakteri pembentuk spora, dikeringkan, ditempatkan dalam cawan Petri steril dan dimasukkan ke dalam oven Pasteur. Sterilisasi dilakukan pada suhu 165°C selama 1 jam (untuk pengendalian sebagian benang dibiarkan pada suhu ruangan). Kemudian benang yang telah disterilkan dan dikontrol diletakkan pada permukaan agar-agar dalam cawan Petri atau dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi kaldu dan diinkubasi dalam termostat pada suhu 37° C selama 2 hari. Pada pengoperasian yang benar Oven pasteur dalam tabung reaksi atau cawan dengan media nutrisi yang ditaruh benang yang sudah disterilkan tidak akan terjadi pertumbuhan, karena spora bakteri akan mati, sedangkan spora bakteri pada benang yang tidak disterilkan (kontrol) akan berkecambah dan akan terlihat pertumbuhan pada media nutrisi. .

Untuk menentukan suhu di dalam oven Pasteur dapat menggunakan sukrosa atau gula pasir yang menjadi karamel pada suhu 165-170°C.

Mempersiapkan peralatan gelas laboratorium untuk sterilisasi dalam oven Pasteur. Sebelum sterilisasi, peralatan gelas laboratorium (cawan petri, pipet ukur dan pasteur, vial, labu, tabung reaksi) harus dicuci bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan kertas, jika tidak setelah sterilisasi dapat terkontaminasi lagi dengan bakteri udara.

Cawan petri dibungkus dengan kertas satu atau lebih potongan sekaligus atau ditempatkan dalam wadah logam khusus.

Penyeka kapas dimasukkan ke ujung atas pipet untuk mencegah bahan uji masuk ke mulut. Pipet ukur dibungkus dengan kertas panjang selebar 4-5 cm, volume pipet yang dibungkus ditandai pada kertas tersebut. Dalam kotak pensil, pipet ukur disterilkan tanpa tambahan kertas pembungkus.

Catatan. Jika garis batas pada pipet tidak terlihat jelas, maka pipet dikembalikan sebelum sterilisasi. Oleskan ke pipet cat minyak dan, tanpa membiarkan cat mengering, bubuk barium sulfat digosokkan ke dalamnya dengan kain. Setelah itu, hilangkan sisa cat dengan lap, yang hanya tersisa di takik kelulusan. Pipet yang dirawat dengan cara ini harus dibilas.

Ujung tajam pipet Pasteur disegel dalam api pembakar dan dibungkus kertas, 3-5 lembar sekaligus. Pipet pasteur harus dibungkus dengan hati-hati agar tidak merusak ujung kapiler yang tertutup rapat.

Botol, labu, tabung reaksi ditutup dengan sumbat kapas. Gabus harus masuk ke dalam leher kapal 2/3 panjangnya, tidak terlalu kencang, tetapi juga tidak longgar. Tutup kertas dipasang di atas sumbat pada setiap wadah (kecuali tabung reaksi). Tabung reaksi diikat menjadi satu dalam kelompok yang terdiri dari 5-50 orang dan dibungkus dengan kertas.

Catatan. Pada suhu tinggi kertas tempat cangkir dan pipet dibungkus, dan kapas menjadi kuning dan bahkan mungkin hangus, jadi semuanya varietas baru kertas yang diterima oleh laboratorium harus diuji pada kondisi suhu yang diterima.

Pertanyaan kontrol

1. Apa yang dimaksud dengan istilah sterilisasi?

2. Bagaimana sterilisasi dilakukan?

3. Apa yang disterilkan dengan cara kalsinasi di atas api?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian oven Pasteur.

5. Apa yang disterilkan dalam oven Pasteur?

6. Bagaimana peralatan gelas disiapkan untuk sterilisasi?

7. Mengapa media nutrisi dan benda karet tidak bisa disterilkan dalam oven Pasteur?

Latihan

Siapkan cawan Petri, pipet ukur, pipet Pasteur, tabung reaksi, labu dan vial untuk sterilisasi.

Sterilisasi- infertilitas; pemusnahan mikroorganisme patogen dan non-patogen dalam bentuk vegetatif dan spora pada bahan apapun.

Mempersiapkan piring untuk sterilisasi. Barang pecah belah harus dicuci bersih dan disterilkan. Untuk mencuci, gunakan sabun atau larutan kimia deterjen. Hidangan baru direbus terlebih dahulu dalam larutan 1-2%. dari asam klorida, untuk menghindari pencucian kaca selanjutnya. Piring yang dicuci dengan air mengalir dibilas dengan air suling dan dikeringkan.

Tabung bakteriologis. Labu berbentuk kerucut dan matte ditutup dengan sumbat kapas, terdiri dari gulungan kapas yang dipilin rapat, ditutup dengan lapisan kain kasa. Sumbat logam berupa tutup luar juga telah dikembangkan untuk tabung reaksi bakteriologis. Perlu diingat bahwa mensterilkan sumbat kapas pada suhu tinggi menyebabkan pelepasan zat dari kapas yang menghambat pertumbuhan beberapa bakteri sensitif, seperti Brucella.

Saat memasang pipet, masukkan kapas ke ujung atas. Pipet pasteur harus memiliki kapiler yang tertutup rapat. Tiap pipet ukur dibungkus dengan selembar kertas panjang selebar 4-5 cm, dimulai dari ceratnya, secara heliks sepanjang keseluruhannya. Pipet pasteur dibungkus kertas masing-masing 10-20 lembar, tabung reaksi masing-masing 15-20 lembar. Semua jenis pipet sebelum dan sesudah sterilisasi sebaiknya disimpan dalam wadah logam khusus. Sumbat pada labu juga ditutup dengan tutup kertas.

Sebelum sterilisasi, cawan Petri yang sudah bersih dan sudah dirakit dibungkus kertas, masing-masing 3 sampai 4 lembar. Setelah sterilisasi, kertas tersebut melindungi peralatan gelas steril dari kontaminasi mikroflora.

Sebelum sterilisasi, piring ditempatkan di lemari pengering tidak terlalu rapat untuk menjamin sirkulasi udara, dan dijaga agar suhu tidak melebihi 180?C, karena pada suhu yang lebih tinggi kertas dan kapas akan hangus. Setelah sterilisasi selesai, lemari pengering tidak dibuka sampai saat itu. Hingga suhu di dalamnya turun menjadi 70-80?C, karena penurunan tajam suhu dapat menyebabkan kaca pecah.

Jika cawan dimaksudkan untuk mensterilkan media nutrisi di dalamnya dengan cara diautoklaf pada tekanan minimal 1 atm, maka cawan tersebut tidak disterilkan terlebih dahulu. Saat mensterilkan media dengan uap yang mengalir atau dalam autoklaf dengan tekanan tidak lebih dari 0,5 atm. Wadah steril harus digunakan.

Sterilisasi dengan udara panas kering. Metode tersebut digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas yang bersih. Untuk tujuan ini, oven Pasteur digunakan - lemari pengering khusus dengan dinding ganda. Bagian luarnya dilapisi bahan tahan panas. Di bagian atas ada termometer. Antara lapisan tahan panas dan bagian dalam tubuh logam Elemen pemanas listrik otomatis ditempatkan di bagian bawah. Saat lemari pengering dihidupkan, udara di dalamnya memanas. Setelah suhu yang disetel tercapai, waktu mulai sterilisasi dicatat. Cara sterilisasi: pada suhu 155-160?C - pemaparan selama 2 jam, pada 165-170?C - 1-1,5 jam, pada 180?C - 1 jam Setelah waktu sterilisasi berakhir, pemanasan dihentikan.

Autoklaf. Ini adalah sterilisasi uap di bawah tekanan yang dikombinasikan dengan suhu tinggi peralatan khusus- autoklaf. Ketika uap jenuh bertemu dengan benda yang lebih dingin, uap tersebut mengembun menjadi air, mengakibatkan pelepasan sejumlah besar panas. Selain itu, volume uap berkurang, sehingga memudahkan penetrasi ke bagian dalam bahan yang disterilkan. Prasyaratnya adalah pasokan uap yang benar-benar jenuh, sehingga kontaknya dengan benda dingin langsung menyebabkan kondensasi dan pemanasan. Industri ini memproduksi autoklaf vertikal dan horizontal.

Autoklaf vertikal adalah kuali logam silinder berdinding ganda, ditutup dengan penutup. Air dialirkan ke sela-sela dinding melalui keran khusus dengan corong hingga ketinggian tertentu. Dinding bagian dalam ketel dilengkapi dengan lubang di bagian atas dan keran di bagian bawah, yang melaluinya, ketika air dipanaskan, uap akan menggantikan udara dari ketel. Bingkai pelindung logam ditempatkan di atas autoklaf, dan harus ada di antara autoklaf dan autoklaf itu sendiri ruang bebas. Autoklaf dipanaskan dengan menghubungkan ke jaringan listrik.

Autoklaf diisi dengan bahan yang akan disterilkan, tutup dan keran tempat menuangkan air ditutup, dan keran bawah dibiarkan terbuka untuk sementara. Air panas di antara dinding autoklaf mendidih, uap yang dihasilkan naik dan melewati lubang atas dinding bagian dalam ke dalam ketel, mendorong udara keluar melalui keran terbuka bawah. Ketika semua udara dipindahkan dan uap mulai keluar secara merata, katup bawah ditutup. Akibatnya tekanan uap di dalam autoklaf meningkat. Awal sterilisasi dianggap saat tekanan mencapai nilai tertentu (menurut pengukur tekanan). Panas disesuaikan selama sterilisasi, menjaga tekanan uap pada tingkat yang sama. Jika tekanan di dalam autoklaf meningkat secara berlebihan, terdapat katup pengaman yang melaluinya kelebihan uap secara otomatis akan keluar.

Ketika tekanan uap meningkat, suhu dalam autoklaf juga meningkat.

Pengukur tekanan menunjukkan tekanan uap tanpa memperhitungkan lingkungan sekitarnya tekanan atmosfir(760 mmHg). Setelah waktu sterilisasi habis, autoklaf dimatikan. Setelah pendinginan, ketika pembacaan pengukur tekanan nol, buka katup untuk mengeluarkan uap.

Autoklaf horizontal berbeda dengan autoklaf vertikal dalam desainnya, namun prinsip pengoperasiannya sama.

sterilisasi virologi hewan patologis

Contoh formulir yang harus diisi pada saat pengiriman bahan patologis ke laboratorium

1. menyala(dari lat. flamma - api dan fr. flamb é - bakar) - sterilisasi dengan mengapur benda logam atau kaca kecil dalam nyala api. Dengan cara ini, loop bakteriologis, pinset logam, spatula dan tabung kaca, slide kaca, dll disterilkan dengan suhu nyala sekitar 1000ºC. Ketika dikalsinasi, semua mikroorganisme (bentuk vegetatif dan spora) terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal.

2. Mendidih. Merupakan salah satu yang paling banyak cara sederhana sterilisasi. Dilakukan dalam alat sterilisasi - logam kotak persegi panjang dengan penutup dan jaring di bagian bawah untuk meletakkan barang-barang yang disterilkan. Tuang air ke dalamnya dan panaskan hingga mendidih (pemanas listrik atau di atas api). Perebusan dapat berlangsung dari 15-30 menit hingga 2 jam pada suhu sekitar 100 ºС. Sterilkan benda logam atau kaca kecil - jarum suntik, jarum suntik, tabung kaca, dll. Dalam hal ini, mikroorganisme bentuk vegetatif dan beberapa spora mati. Dipraktekkan juga untuk melepuh bahan yang disterilkan dengan air mendidih.

3. Sterilisasi panas kering. Diproduksi dengan udara panas dalam oven atau oven Pasteur. Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang dilapisi asbes di bagian luar untuk insulasi termal. Di dalam kabinet ada rak logam dengan lubang untuk meletakkan bahan yang akan disterilkan. Pemanas listrik. Sterilisasi dilakukan pada suhu 160-180 ºС selama 1-2 jam sejak tercapai suhu tersebut (dikontrol dengan termometer). Panas kering terutama digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas - cawan Petri, pipet, spatula (dibungkus kertas), serta tabung reaksi dan labu. Teknik ini dapat diandalkan - mikroorganisme non-spora dan spora mati. Dibungkus kertas dan disterilkan, bahannya bisa disimpan.

4. Sterilisasi uap mengalir. Dilakukan panas udara yang lembab dalam peralatan Koch. Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam, yang dapat berkaki dan ditutup dengan linoleum. Air secukupnya dituangkan ke dalam alat sehingga tidak mencapai langkan, di atasnya ditempatkan lingkaran logam berlubang dan bahan yang akan disterilkan diletakkan di atasnya. Alat ditutup rapat dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang di tengahnya agar uap dapat keluar dan dipanaskan di atas api. Saat air mendidih, uap air panas dengan suhu sekitar 100 ºС akan “mengalir” dalam aliran deras dari lubang di tutupnya. Mulai saat ini, waktu mulai sterilisasi dicatat. Sterilisasi dengan uap yang mengalir berlangsung antara 45 menit hingga 1,5 jam, tergantung volume bahan yang akan disterilkan. Mensterilkan media nutrisi yang tidak dapat dipanaskan di atas 100 ºС, misalnya MPG (pada suhu di atas 100 ºС mencair dan tidak mengeras). Metode sterilisasi ini tidak sepenuhnya dapat diandalkan - hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang terbunuh sepenuhnya, tetapi spora tetap terjaga. Untuk mencapai sterilisasi media yang lengkap dalam peralatan Koch, digunakan sterilisasi fraksional.

5. Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Itu dilakukan dengan uap air jenuh dalam autoklaf. Ada autoklaf desain yang berbeda. Autoklaf vertikal adalah ketel besar berdinding ganda, bagian luarnya dikelilingi oleh selubung logam, dengan penutup berengsel berat yang dibaut erat ke ketel. Di bagian bawah ketel terdapat corong dan keran yang melaluinya air dialirkan ke ruang kosong antara ketel bagian dalam dan selubung. Bahan yang akan disterilkan diletakkan di dasar ketel, tutupnya disekrup rapat, dan pemanas listrik dinyalakan. Saat air mendidih, uap masuk ke dalam ketel bagian dalam. Tekanan dalam autoklaf meningkat, dan pada saat yang sama suhu meningkat. Bila pengukur tekanan menunjukkan bahwa tekanan dalam ketel telah mencapai nilai yang ditentukan, tandai waktu mulai sterilisasi. Tekanan dipertahankan pada tingkat tertentu dengan menggunakan katup pengaman.

Biasanya dalam praktek laboratorium, sterilisasi tekanan dilakukan pada 1,5-2 atm dan suhu sekitar 115-120 ºС untuk

20-30 menit. Setelah waktu sterilisasi habis, pemanasan dihentikan, katup uap dibuka dan uap dikeluarkan. Sterilkan dengan uap di bawah tekanan media nutrisi MPB, MPA, peralatan gelas dengan air, bahan pembalut, peralatan bedah dll. Autoklaf adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal, yang membunuh semua bentuk mikroorganisme, bahkan spora yang paling resisten sekalipun.

6. Pasteurisasi. Metode sterilisasi parsial ini dinamai ilmuwan Perancis L. Pasteur yang mengusulkannya. Caranya, cairan yang dituangkan ke dalam wadah steril dipanaskan dalam penangas air dengan suhu 60-90 ºС selama

10-30 menit. Cocok untuk media cair yang berubah warna karakteristik fisikokimia pada suhu tinggi. Susu, krim, anggur, bir, jus, dll dipasteurisasi, pada saat yang sama, vitamin dan kualitas rasa produk. Produk yang dipasteurisasi penyimpanan jangka panjang tidak dikenakan, karena dengan metode sterilisasi ini hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang mati, dan spora tetap ada. Dalam praktik laboratorium, metode ini digunakan terutama untuk memisahkan spesies pembentuk spora dari spesies yang tidak membentuk spora.

7. Sterilisasi fraksional. Hal ini didasarkan pada pengolahan bahan yang akan disterilkan dalam beberapa tahap. Pecahan dapat berupa perebusan atau sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam alat Koch. Biasanya sterilisasi dilakukan selama 3 hari, 30 menit setiap hari, dengan menggunakan salah satu metode yang ditunjukkan, dan saat istirahat, media dibiarkan pada suhu kamar. Hal ini dilakukan untuk memicu pertumbuhan spora menjadi bentuk vegetatif dan kehancurannya selama perawatan selanjutnya, sehingga meningkatkan keandalan teknik ini.

8. Tyndalisasi. Ini adalah jenis sterilisasi fraksional (fractional pasteurization). Teknik ini dinamai ilmuwan Inggris D. Tyndall yang mengusulkannya. Dilakukan dalam penangas air pada suhu 56-58 ºС selama 1 jam, diulangi 5-7 kali setiap 24 jam.Dalam selang waktu pemanasan, bahan disimpan pada suhu kamar. Tyndallisasi dilakukan pada media nutrisi yang miskin mikroorganisme dan juga mengandung zat yang mudah hancur dan terdenaturasi pada suhu di atas 60 ºC (protein, vitamin). Ini adalah serum darah, telur, dll. Sebagai hasil dari tyndalisasi, penghancuran total mikroorganisme tercapai.