Pasteurofen. Sterilisation mit trockener Hitze. B. Detaillierte Technologie zur Herstellung von Rindermolke in den Schlachthöfen von Lyon

Das Leben von Mikroorganismen hängt stark von den Bedingungen ab Umfeld. Alle Umweltfaktoren, die Mikroorganismen beeinflussen, lassen sich in drei Gruppen einteilen: physikalische, chemische und biologische, deren positive oder schädliche Wirkung sowohl von der Natur des Faktors selbst als auch von den Eigenschaften des Mikroorganismus abhängt.

Physische Faktoren

Von den physikalischen Faktoren haben Temperatur, Trocknung, Strahlungsenergie und Ultraschall den größten Einfluss auf die Entwicklung von Mikroorganismen.

Temperatur. Die Lebensaktivität jedes Mikroorganismus ist durch bestimmte Temperaturgrenzen begrenzt. Diese Temperaturabhängigkeit wird normalerweise durch drei Hauptpunkte ausgedrückt: Minimum – die Temperatur, unterhalb derer die Vermehrung mikrobieller Zellen aufhört; optimal - beste Temperatur für das Wachstum und die Entwicklung von Mikroorganismen; Maximum - die Temperatur, oberhalb derer die lebenswichtige Aktivität der Zellen schwächer wird oder aufhört. Optimale Temperatur entspricht normalerweise den Temperaturbedingungen natürlichen Umgebung ein Lebensraum.

Alle Mikroorganismen werden in Bezug auf die Temperatur in Psychrophile, Mesophile und Thermophile unterteilt.

Psychrophile (von griechisch psychros – Kälte, phileo – Liebe) oder kälteliebende Mikroorganismen wachsen relativ schnell niedrige Temperaturen: minimale Temperatur - 0° C, optimal - 10-20° C, maximal - 30° C. Zu dieser Gruppe gehören Mikroorganismen, die in leben nördliche Meere und Ozeane, Boden, Abwasser. Hierzu zählen auch Leucht- und Eisenbakterien sowie Mikroben. Schaden verursachen Produkte in der Kälte (unter 0° C) aufbewahren.

Mesophile (von griech. mesos – Mitte) sind die umfangreichste Gruppe, zu der die meisten Saprophyten und alle pathogenen Mikroorganismen gehören. Die optimale Temperatur für sie liegt bei 28–37 °C, das Minimum bei 10 °C und das Maximum bei 45 °C.

Thermophile (von griech. termos – Hitze, Hitze) oder wärmeliebende Mikroorganismen entwickeln sich bei Temperaturen über 55 °C, das Temperaturminimum liegt für sie bei 30 °C, das Optimum bei 50-60 °C und das Maximum bei 70 -75 ° C. Sie treffen sich in heiß Mineralquellen, Oberflächenschicht des Bodens, selbsterhitzende Substrate (Mist, Heu, Getreide), Eingeweide von Menschen und Tieren. Unter Thermophilen gibt es viele Sporenformen.

Hohe und niedrige Temperaturen haben unterschiedliche Auswirkungen auf Mikroorganismen. Manche reagieren empfindlicher auf hohe Temperaturen. Darüber hinaus kommt es umso schneller zum Absterben mikrobieller Zellen, je höher die Temperatur über dem Maximum liegt, was auf die Denaturierung (Koagulation) von Zellproteinen zurückzuführen ist.

Vegetative Formen mesophiler Bakterien sterben bei einer Temperatur von 60 °C innerhalb von 30–60 Minuten und bei 80–100 °C nach 1–2 Minuten ab. Bakteriensporen sind viel resistenter gegen hohe Temperaturen. Beispielsweise können Sporen von Milzbrandbakterien dem Kochen 10 bis 20 Minuten und Sporen von Clostridium-Botulismus 6 Stunden lang standhalten. Alle Mikroorganismen, einschließlich der Sporen, sterben eine Stunde lang bei einer Temperatur von 165 bis 170 ° C ab (bei trockener Hitze). Ofen) oder wenn es 30 Minuten lang Dampf unter einem Druck von 1 atm (in einem Autoklaven) ausgesetzt wird.

Die Wirkung hoher Temperaturen auf Mikroorganismen ist die Grundlage der Sterilisation – der vollständigen Befreiung verschiedener Gegenstände von Mikroorganismen und ihren Sporen (siehe unten).

Viele Mikroorganismen sind äußerst resistent gegen niedrige Temperaturen. Salmonella typhus und Vibrio cholerae überleben lange Zeit im Eis. Einige Mikroorganismen bleiben bei Temperaturen flüssiger Luft (-190 °C) lebensfähig und Bakteriensporen können Temperaturen bis zu -250 °C standhalten.

Nur bestimmte Arten pathogener Bakterien reagieren empfindlich auf niedrige Temperaturen (z. B. Bordetella pertussis und parapertussis, Neisseria meningococcus usw.). Diese Eigenschaften von Mikroorganismen werden berücksichtigt Labordiagnostik und beim Transport des Untersuchungsmaterials wird es vor Kühlung geschützt an das Labor geliefert.

Durch die Einwirkung niedriger Temperaturen werden Fäulnis- und Gärungsprozesse gestoppt, was häufig zur Konservierung eingesetzt wird Lebensmittel V Kühlaggregate, Keller, Gletscher. Bei Temperaturen unter 0° C verfallen Mikroben in einen Ruhezustand – Stoffwechselvorgänge verlangsamen sich und die Fortpflanzung kommt zum Stillstand. Allerdings bei geeigneten Temperaturbedingungen und Nährmedium Lebensfunktionen Mikrobenzellen werden wiederhergestellt. Diese Eigenschaft von Mikroorganismen wird in der Laborpraxis genutzt, um mikrobielle Kulturen bei niedrigen Temperaturen zu konservieren. Auch schnelle Wechsel von hohen und niedrigen Temperaturen (Gefrieren und Auftauen) wirken sich nachteilig auf Mikroorganismen aus – dies führt zum Bruch der Zellmembranen.

Trocknen. Wasser ist für das normale Funktionieren von Mikroorganismen notwendig. Das Trocknen führt zu einer Dehydrierung des Zytoplasmas und einer Störung der Integrität der Zytoplasmamembran, wodurch die Ernährung mikrobieller Zellen gestört wird und es zu deren Tod kommt.

Frist zum Sterben verschiedene Typen Mikroorganismen unter dem Einfluss der Trocknung unterscheiden sich erheblich. Beispielsweise sterben pathogene Neisseria (Meningokokken, Gonokokken), Leptospira, Treponema pallidum und andere beim Trocknen nach wenigen Minuten ab. Vibrio cholerae hält dem Trocknen 2 Tage stand, Salmonella typhoid – 70 Tage und Mycobacterium tuberculosis – 90 Tage. Doch der getrocknete Auswurf von Tuberkulosepatienten, bei dem die Erreger durch eine trockene Eiweißhülle geschützt sind, bleibt 10 Monate lang infektiös.

Sporen sind besonders resistent gegen Austrocknung, aber auch gegen andere Umwelteinflüsse. Sporen von Milzbrandbakterien behalten ihre Keimfähigkeit 10 Jahre lang, Sporen von Schimmelpilzen bis zu 20 Jahre.

Die ungünstige Wirkung der Trocknung auf Mikroorganismen wird seit langem zur Konservierung von Gemüse, Obst, Fleisch, Fisch usw. genutzt Heilkräuter. Gleichzeitig verderben solche Produkte bei hoher Luftfeuchtigkeit aufgrund der Wiederherstellung der mikrobiellen Aktivität schnell.

Die Gefriertrocknungsmethode wird häufig zur Lagerung von Kulturen von Mikroorganismen, Impfstoffen und anderen biologischen Präparaten eingesetzt. Der Kern der Methode besteht darin, dass Mikroorganismen oder Präparate zunächst eingefroren und dann unter Vakuumbedingungen getrocknet werden. In diesem Fall geraten mikrobielle Zellen in einen Zustand der Schwebe und behalten ihre biologischen Eigenschaften für mehrere Monate oder Jahre.

Strahlungsenergie. In der Natur sind Mikroorganismen ständig ausgesetzt Sonnenstrahlung. Direkte Sonneneinstrahlung führt zum Absterben vieler Mikroorganismen innerhalb weniger Stunden, mit Ausnahme von photosynthetischen Bakterien (grüne und violette Schwefelbakterien). Die schädlichen Auswirkungen des Sonnenlichts werden durch die Aktivität ultravioletter Strahlen (UV-Strahlen) verursacht. Sie inaktivieren Zellenzyme und schädigen die DNA. Pathogene Bakterien reagieren empfindlicher auf die Einwirkung von UV-Strahlen als Saprophyten. Daher ist es besser, mikrobielle Kulturen im Labor im Dunkeln aufzubewahren. In dieser Hinsicht ist Buchners Erfahrung bezeichnend.

Eine reichlich vorhandene Bakterienkultur wird mit einer dünnen Schicht Agar in eine Petrischale geimpft. Auf die Außenfläche des Samenbechers werden aus schwarzem Papier ausgeschnittene Buchstaben geklebt, die beispielsweise das Wort „Typhus“ ergeben. Der Becher wird mit dem Boden nach oben 1 Stunde lang direktem Sonnenlicht ausgesetzt. Anschließend werden die Papiere entfernt und der Becher einen Tag lang in einen Thermostaten bei 37° C gestellt. Bakterienwachstum wird nur an diesen Stellen beobachtet Agar, die durch Aufkleberbuchstaben vor UV-Strahlen geschützt waren. Der Rest des Agars bleibt transparent, d. h. es findet kein Wachstum von Mikroorganismen statt (Abb. 11).

Die Bedeutung des Sonnenlichts als natürlicher Faktor für die Verbesserung der Gesundheit der äußeren Umgebung ist groß. Es befreit die Luft, das Wasser natürlicher Reservoirs und die oberen Bodenschichten von pathogenen Bakterien.

Zur Entkeimung der Luft wird die bakterizide (bakterienzerstörende) Wirkung der UV-Strahlen genutzt geschlossene Räumlichkeiten(Operationssäle, Umkleidekabinen, Boxen usw.) sowie Wasser und Milch. Die Quelle dieser Strahlen sind UV-Strahlungslampen und bakterizide Lampen.

Andere Arten von Strahlungsenergie – Röntgenstrahlen, α-, β-, γ-Strahlen – haben nur in hohen Dosen, in der Größenordnung von 440–280 J/kg, eine schädliche Wirkung auf Mikroorganismen. Der Tod von Mikroben wird durch die Zerstörung von Kernstrukturen und zellulärer DNA verursacht. Niedrige Strahlungsdosen stimulieren das Wachstum mikrobieller Zellen. Mikroorganismen sind gegenüber radioaktiver Strahlung wesentlich resistenter als höhere Organismen. Es ist bekannt, dass thionische Bakterien in Ablagerungen leben Uranerze. Im Wasser wurden Bakterien gefunden Kernreaktoren bei einer Konzentration ionisierender Strahlung von 20-30 kJ/kg.

Die bakterizide Wirkung ionisierender Strahlung wird zur Konservierung bestimmter Lebensmittel und zur Sterilisation biologischer Präparate (Seren, Impfstoffe usw.) genutzt, wobei sich die Eigenschaften des sterilisierten Materials nicht ändern.

IN letzten Jahren Die Strahlenmethode sterilisiert Produkte für den einmaligen Gebrauch – Styroporpipetten, Petrischalen, Vertiefungen für serologische Reaktionen, Spritzen usw Nahtmaterial- Katgut usw.

Ultraschall verursacht erhebliche Schäden an mikrobiellen Zellen. Unter dem Einfluss von Ultraschall werden Gase, die sich in der flüssigen Umgebung des Zytoplasmas befinden, aktiviert und es entsteht ein hoher Druck im Inneren der Zelle (bis zu 10.000 atm). Dies führt zum Bruch der Zellmembran und zum Zelltod. Ultraschall wird zur Sterilisation von Lebensmitteln (Milch, Fruchtsäfte) und Trinkwasser eingesetzt.

Hoher Drück. Bakterien und insbesondere ihre Sporen sind resistent gegen mechanischen Druck. In der Natur kommen Bakterien vor, die in Meeren und Ozeanen in einer Tiefe von 1000-10000 m unter einem Druck von 100 bis 900 atm leben. Einige Arten von Bakterien können Drücken von bis zu 3000–5000 atm und Bakteriensporen sogar 20.000 atm standhalten.

Chemische Faktoren

Die Wirkung von Chemikalien auf Mikroorganismen hängt von der Art der chemischen Verbindung, ihrer Konzentration und der Dauer der Exposition gegenüber mikrobiellen Zellen ab. Abhängig von der Konzentration kann ein chemischer Stoff eine Nahrungsquelle sein oder eine hemmende Wirkung auf die lebenswichtige Aktivität von Mikroorganismen haben. Beispielsweise stimuliert eine 0,5–2 %ige Glucoselösung das Wachstum von Mikroben, und 20–40 %ige Glucoselösungen hemmen die Proliferation mikrobieller Zellen.

Viele chemische Verbindungen, die sich schädlich auf Mikroorganismen auswirken, werden in der medizinischen Praxis als Desinfektionsmittel und Antiseptika eingesetzt.

Zur Desinfektion verwendete Chemikalien werden Desinfektionsmittel genannt. Unter Desinfektion versteht man Maßnahmen zur Zerstörung pathogener Mikroorganismen in verschiedenen Umweltobjekten. Zu den Desinfektionsmitteln zählen Halogenidverbindungen, Phenole und deren Derivate, Salze von Schwermetallen, einige Säuren, Laugen, Alkohole usw. Sie verursachen den Tod mikrobieller Zellen und wirken in optimalen Konzentrationen für eine bestimmte Zeit. Viele Desinfektionsmittel haben schädliche Auswirkungen auf dem Gewebe des Makroorganismus.

Sie werden Antiseptika genannt Chemikalien, die zum Absterben von Mikroorganismen führen oder deren Wachstum und Vermehrung hemmen können. Sie werden zu therapeutischen Zwecken (Chemotherapie) sowie zur Desinfektion von Wunden, Haut und menschlichen Schleimhäuten eingesetzt. Wasserstoffperoxid, alkoholische Lösungen von Jod, Brillantgrün, Lösungen von Kaliumpermanganat usw. haben antiseptische Eigenschaften. Einige antiseptische Substanzen (Essigsäure, Schwefelsäure, Benzoesäure usw.) werden in für den Menschen ungefährlichen Dosen zur Lebensmittelkonservierung verwendet.

Je nach Wirkungsmechanismus lassen sich chemische Substanzen mit antimikrobieller Wirkung in mehrere Gruppen einteilen.

1. Tenside (Fettsäuren, Seifen und andere Reinigungsmittel) bewirken eine Verringerung der Oberflächenspannung, was zu Fehlfunktionen führt Zellenwand und die Zytoplasmamembran von Mikroorganismen.

2. Phenol, Kresol und ihre Derivate bewirken die Koagulation mikrobieller Proteine. Sie werden zur Desinfektion von infektiösem Material in mikrobiologischen Praxen und Krankenhäusern für Infektionskrankheiten eingesetzt.

3. Oxidationsmittel, die mit mikrobiellen Proteinen interagieren, stören die Aktivität von Enzymen und verursachen eine Proteindenaturierung. Aktive Oxidationsmittel sind Chlor und Ozon, die zur Desinfektion von Trinkwasser eingesetzt werden. Zu Desinfektionszwecken werden häufig Chlorderivate (Bleichmittel, Chloramin) eingesetzt. Wasserstoffperoxid, Kaliumpermanganat, Jod usw. haben oxidierende Eigenschaften.

4. Formaldehyd wird in Form einer 40 %igen Lösung (Formalin) zur Desinfektion eingesetzt. Es tötet vegetative und sporenförmige Mikroorganismen ab. Formalin blockiert die Aminogruppen mikrobieller Zellproteine ​​und bewirkt deren Denaturierung.

5. Salze von Schwermetallen (Quecksilber, Blei, Zink, Gold usw.) koagulieren die Proteine ​​der mikrobiellen Zelle und führen dadurch zu deren Tod. Eine Reihe von Metallen (Silber, Gold, Quecksilber usw.) wirken in vernachlässigbaren Konzentrationen bakterizid auf Mikroorganismen. Diese Eigenschaft wird als oligodynamische Wirkung bezeichnet (von lateinisch oligos – klein, dinamys – Stärke). Es ist erwiesen, dass Wasser in Silbergefäßen aufgrund der bakteriziden Wirkung von Silberionen nicht verrottet. Zur Vorbeugung von Blenorrhoe* bei Neugeborenen lange Zeit Es wurde eine 1%ige Silbernitratlösung verwendet. Als lokale Antiseptika werden auch kolloidale Lösungen organischer Silberverbindungen (Protargol, Collargol) eingesetzt.

* (Blennorea ist eine durch Gonokokken verursachte Entzündung der Bindehaut des Auges.)

Quecksilberpräparate haben eine starke antimikrobielle Wirkung. Seit der Antike wird Quecksilberbichlorid oder Quecksilberchlorid (in einer Verdünnung von 1:1000) zur Desinfektion verwendet. Es hat jedoch eine toxische Wirkung auf das Gewebe des Makroorganismus und seine Verwendung ist begrenzt.

6. Farbstoffe (Diamantgrün, Rivanol etc.) haben die Eigenschaft, das Wachstum von Bakterien zu hemmen. Lösungen einer Reihe von Farbstoffen werden als Antiseptika verwendet und einigen Nährmedien auch zugesetzt, um das Wachstum der begleitenden Mikroflora zu hemmen.

Die zerstörerische Wirkung einer Reihe physikalischer und chemischer Faktoren auf Mikroorganismen bildet die Grundlage aseptischer und antiseptischer Methoden, die in der medizinischen und sanitären Praxis weit verbreitet sind.

Asepsis ist ein System vorbeugender Maßnahmen, die auf der Grundlage physikalischer Methoden eine mikrobielle Kontamination eines Objekts (Wunde, Operationsfeld, Mikroorganismenkulturen usw.) verhindern.

Antiseptika sind eine Reihe von Maßnahmen, die darauf abzielen, Mikroorganismen in einer Wunde, am ganzen Körper oder an Umweltgegenständen mithilfe verschiedener desinfizierender Chemikalien zu zerstören.

Biologische Faktoren

In natürlichen Lebensräumen existieren Mikroorganismen nicht isoliert, sondern stehen in komplexen Beziehungen, die hauptsächlich auf Symbiose, Metabiose und Antagonismus zurückzuführen sind.

Unter Symbiose versteht man das Zusammenleben von Organismen verschiedener Arten, das ihnen gegenseitigen Nutzen bringt. Gleichzeitig entwickeln sie sich gemeinsam besser als jeder einzeln.

Symbiotische Beziehungen bestehen zwischen Knöllchenbakterien und Hülsenfrüchten, zwischen Fadenpilzen und Blaualgen (Flechten): Die Symbiose von Milchsäurebakterien und alkoholischer Hefe wird zur Herstellung einiger Milchsäureprodukte (Kefir, Koumiss) genutzt.

Metabiose ist eine Art Beziehung, bei der die Stoffwechselprodukte einer Art von Mikroorganismen die notwendigen Voraussetzungen für die Entwicklung anderer schaffen. Beispielsweise tragen fäulniserregende Mikroorganismen, die Eiweißstoffe abbauen, zur Anreicherung von Ammoniumverbindungen in der Umwelt bei und erzeugen Bevorzugte Umstände für das Wachstum und die Entwicklung nitrifizierender Bakterien. Und die Entwicklung von Anaerobiern in gut belüfteten Böden wäre ohne Aerobier, die freien Sauerstoff absorbieren, unmöglich.

Metabiotische Beziehungen sind unter Bodenmikroorganismen weit verbreitet und liegen dem Stoffkreislauf in der Natur zugrunde.

Antagonismus ist eine Beziehungsform, bei der ein Mikroorganismus die Entwicklung eines anderen Mikroorganismus hemmt oder dessen vollständigen Tod verursachen kann. Unter den Mikroorganismen haben sich im Kampf ums Dasein antagonistische Beziehungen entwickelt. Überall, wo sie leben, gibt es einen ständigen Kampf zwischen ihnen um Nahrungsquellen, Luftsauerstoff und Lebensraum. So gelangen die meisten pathogenen Bakterien in die Sekrete der Patienten Außenumgebung(Boden, Wasser), halten hier einer langfristigen Konkurrenz durch zahlreiche Saprophyten nicht stand und sterben relativ schnell ab.

Antagonismus kann durch den direkten Einfluss von Mikroorganismen aufeinander oder durch die Wirkung ihrer Stoffwechselprodukte verursacht werden. Beispielsweise fressen Protozoen Bakterien und Phagen lysieren sie. Der Darm von Neugeborenen wird vom Milchsäurebakterium Bifidobacterium bifidum besiedelt. Durch die Freisetzung von Milchsäure unterdrücken sie das Wachstum von Fäulnisbakterien und schützen so den noch fragilen Organismus vor Darmerkrankungen Kleinkinder. Einige Mikroorganismen produzieren im Lebensprozess verschiedene Substanzen, die sich schädlich auf Bakterien und andere Mikroben auswirken. Zu diesen Stoffen zählen Antibiotika (siehe „Antibiotika“).

Kontrollfragen

1. Welche physikalischen Faktoren beeinflussen die Lebensaktivität von Mikroorganismen?

2. Welche Stoffe werden als Desinfektionsmittel eingestuft und wie unterscheiden sie sich in ihrem Wirkmechanismus auf Mikroorganismen?

3. Listen Sie auf, welche Beziehungen zwischen Mikroorganismen bestehen.

Sterilisation

Unter Sterilisation versteht man die Sterilisation, also die vollständige Befreiung von Umweltgegenständen von Mikroorganismen und deren Sporen.

Die Sterilisation wird auf verschiedene Arten durchgeführt:

1) physikalisch (Einwirkung von hohen Temperaturen, UV-Strahlen, Verwendung von Bakterienfiltern);

2) chemisch (Verwendung verschiedener Desinfektionsmittel, Antiseptika);

3) biologisch (Einsatz von Antibiotika).

In der Laborpraxis werden üblicherweise physikalische Sterilisationsmethoden eingesetzt.

Die Möglichkeit und Durchführbarkeit der Anwendung dieser oder jener Sterilisationsmethode wird durch die Eigenschaften des zu sterilisierenden Materials sowie seine physikalischen und chemischen Eigenschaften bestimmt.

Physikalische Methoden

Das Kalzinieren in einer Brennerflamme oder das Flambieren ist eine Sterilisationsmethode, bei der das Objekt vollständig sterilisiert wird, da sowohl vegetative Zellen als auch mikrobielle Sporen absterben. Typischerweise werden bakteriologische Impfösen, Spatel, Pipetten, Objektträger und Deckgläser sowie kleine Instrumente kalziniert. Scheren und Skalpelle sollten nicht durch Erhitzen sterilisiert werden, da unter dem Einfluss von Feuer die Schnittfläche stumpf wird.

Sterilisation mit trockener Hitze

Die Sterilisation mit trockener Hitze oder Heißluft erfolgt in Pasteuröfen (Trocknung). Trockenheizöfen). Der Pasteurofen ist ein doppelwandiger Schrank aus hitzebeständigen Materialien – Metall und Asbest. Beheizen Sie den Schrank mit Gasbrennern oder elektrischen Heizgeräten. Elektrisch beheizte Schränke sind mit Reglern ausgestattet, die dafür sorgen gewünschte Temperatur. Um die Temperatur zu kontrollieren, wird ein Thermometer in das Loch in der oberen Wand des Schranks eingesetzt.

Trockene Hitze wird zum Sterilisieren von Laborglas verwendet. Das zur Sterilisation vorbereitete Geschirr wird lose in den Ofen geladen, um eine gleichmäßige und zuverlässige Erwärmung des Sterilisationsgutes zu gewährleisten. Schließen Sie die Schranktür fest, schalten Sie das Heizgerät ein, bringen Sie die Temperatur auf 160-165 °C und sterilisieren Sie 1 Stunde lang bei dieser Temperatur. Schalten Sie am Ende der Sterilisation die Heizung aus, aber öffnen Sie die Schranktür erst, wenn die Sterilisation abgeschlossen ist Ofen ist abgekühlt; Andernfalls kann die in den Schrank eindringende Kaltluft zu Rissen im heißen Kochgeschirr führen.

Die Sterilisation im Pasteurofen kann bei unterschiedlichen Temperaturen und Expositionen (Sterilisationszeit) durchgeführt werden (Tabelle 1).

Flüssigkeiten (Nährmedien, isotonische Kochsalzlösung etc.), Gegenstände aus Gummi und Kunststoffen können nicht mit trockener Hitze sterilisiert werden, da Flüssigkeiten kochen und auslaufen und Gummi und Kunststoffe schmelzen.

Um die Sterilisation in einem Pasteurofen zu kontrollieren, werden Seidenfäden in einer Kultur sporenbildender Bakterien angefeuchtet, getrocknet, in eine sterile Petrischale gegeben und in einen Pasteurofen gegeben. Die Sterilisation erfolgt bei einer Temperatur von 165° C für 1 Stunde (zur Kontrolle werden einige Fäden bei Raumtemperatur belassen). Anschließend werden die sterilisierten Fäden und die Kontrollfäden auf die Oberfläche des Agars in einer Petrischale oder in Reagenzgläser mit Brühe gelegt und in einem Thermostat bei 37 °C für 2 Tage inkubiert. Bei ordnungsgemäßem Betrieb des Pasteurofens kommt es in Reagenzgläsern oder Schalen mit Nährmedien, in die sterilisierte Fäden eingelegt wurden, zu keinem Wachstum, da Bakteriensporen absterben, während Bakteriensporen auf nicht sterilisierten Fäden (Kontrolle) auf Nährstoffen keimen Medienwachstum wird zu verzeichnen sein.

Um die Temperatur im Pasteurofen zu bestimmen, können Sie Saccharose oder Kristallzucker verwenden, der bei einer Temperatur von 165-170 °C karamellisiert.

Vorbereiten von Laborglaswaren für die Sterilisation in einem Pasteurofen. Vor der Sterilisation müssen Laborglasgeräte (Petrischalen, Mess- und Pasteurpipetten, Fläschchen, Kolben, Reagenzgläser) gründlich gewaschen, getrocknet und in Papier eingewickelt werden, da sie sonst nach der Sterilisation erneut mit Luftbakterien kontaminiert werden können.

Petrischalen werden einzeln oder in mehreren Stücken in Papier eingewickelt oder in spezielle Metallbehälter gelegt.

In die oberen Enden der Pipetten werden Wattestäbchen eingeführt, um zu verhindern, dass das Testmaterial in den Mund gelangt. Messpipetten werden in lange Papierstreifen von 4–5 cm Breite eingewickelt und das Volumen der eingewickelten Pipette auf dem Papier markiert. In Federmäppchen werden Messpipetten ohne zusätzliche Papierverpackung sterilisiert.

Notiz. Wenn die Skala auf den Pipetten schlecht sichtbar ist, wird sie vor der Sterilisation wiederhergestellt. Auf die Pipette wird Ölfarbe aufgetragen und, ohne die Farbe trocknen zu lassen, mit einem Tuch Bariumsulfatpulver eingerieben. Entfernen Sie anschließend mit einem Lappen überschüssige Farbe, die nur in den Graduierungskerben zurückbleibt. Auf diese Weise behandelte Pipetten sollten gespült werden.

Die scharfen Enden von Pasteurpipetten werden in einer Brennerflamme versiegelt und jeweils 3-5 Stück in Papier eingewickelt. Pasteurpipetten müssen sorgfältig verpackt werden, damit die versiegelten Enden der Kapillaren nicht abbrechen.

Fläschchen, Kolben und Reagenzgläser werden mit Baumwollgaze-Stopfen verschlossen. Der Korken sollte zu 2/3 seiner Länge in den Hals des Gefäßes passen, nicht zu fest, aber auch nicht locker. Über die Stopfen jedes Gefäßes (außer Reagenzgläser) wird eine Papierkappe gestülpt. Reagenzgläser werden in Gruppen von 5–50 zusammengebunden und mit Papier umwickelt.

Notiz. Bei hohen Temperaturen verfärben sich das Papier, in das Becher und Pipetten eingewickelt sind, sowie die Watte gelb und können sogar verkohlen. Daher sollte jede neue Papiersorte, die das Labor erhält, bei den zulässigen Temperaturbedingungen getestet werden.

Kontrollfragen

1. Was versteht man unter dem Begriff Sterilisation?

2. Wie erfolgt die Sterilisation?

3. Was wird durch Kalzinierung über Feuer sterilisiert?

4. Beschreiben Sie den Aufbau und die Funktionsweise des Pasteurofens.

5. Was wird in einem Pasteurofen sterilisiert?

6. Wie werden Glaswaren für die Sterilisation vorbereitet?

7. Warum können Nährmedien und Gummigegenstände nicht im Pasteurofen sterilisiert werden?

Übung

Bereiten Sie Petrischalen, Messpipetten, Pasteurpipetten, Reagenzgläser, Kolben und Fläschchen für die Sterilisation vor.

Sterilisation durch Kochen

Kochen ist eine Sterilisationsmethode, die Sterilität gewährleistet, sofern sich im sterilisierten Material keine Sporen befinden. Zur Bearbeitung von Spritzen, Instrumenten, Glas- und Metallutensilien, Gummischläuchen usw.

Die Sterilisation durch Kochen erfolgt üblicherweise in einem Sterilisator - Metall-Box rechteckige Form mit dicht schließendem Deckel. Das zu sterilisierende Material wird auf das im Sterilisator vorhandene Netz gelegt und mit Wasser gefüllt. Um den Siedepunkt zu erhöhen und die Wasserhärte zu beseitigen, fügen Sie 1-2 % Natriumbicarbonat hinzu (besser destilliertes Wasser verwenden). Der Sterilisator wird mit einem Deckel verschlossen und erhitzt. Als Beginn der Sterilisation gilt der Moment des Kochens des Wassers, die Kochzeit beträgt 15-30 Minuten. Am Ende der Sterilisation wird das Netz mit den Instrumenten an den seitlichen Griffen mit speziellen Haken entfernt und die darin befindlichen Instrumente mit einer sterilen Pinzette oder Pinzette entnommen, die zusammen mit den übrigen Instrumenten gekocht wird.

Die Dampfsterilisation wird auf zwei Arten durchgeführt: 1) Dampf unter Druck; 2) fließender Dampf.

Druckdampfsterilisation im Autoklaven hergestellt. Bei dieser Sterilisationsmethode werden die zu sterilisierenden Materialien gesättigtem Wasserdampf bei einem Druck über dem Atmosphärendruck ausgesetzt. Als Ergebnis einer solchen Sterilisation sterben sowohl vegetative als auch sporenförmige Formen von Mikroorganismen mit einer einzigen Behandlung ab.

Ein Autoklav (Abb. 12) ist ein massiver Kessel, der außen mit einem Metallgehäuse abgedeckt und mit einem Deckel hermetisch verschlossen ist, der mit Scharnierschrauben fest mit dem Kessel verschraubt ist. In den Außenkessel wird ein weiterer, kleinerer Durchmesser eingesetzt, der als Sterilisationskammer bezeichnet wird. In dieser Kammer werden die zu sterilisierenden Gegenstände platziert. Zwischen beiden Kesseln gibt es Freiraum, Wasserdampfkammer genannt. In diese Kammer wird durch einen außen angebrachten Trichter Wasser bis zu einem bestimmten, auf einem speziellen Wassermessrohr markierten Füllstand eingefüllt. Beim Kochen von Wasser in einer Wasser-Dampf-Kammer entsteht Dampf. Die Sterilisationskammer ist mit einem Auslasshahn mit Sicherheitsventil ausgestattet, damit der Dampf entweichen kann, wenn der Druck über das erforderliche Niveau ansteigt. Mithilfe eines Manometers wird der in der Sterilisationskammer erzeugte Druck ermittelt.

Reis. 12. Autoklavendiagramm. M - Manometer; PC - Sicherheitsventil; B – Trichter für Wasser; K 2 - Wasserhahn zur Wasserabgabe; K 3 - Ventil zur Dampfabgabe

Der normale Atmosphärendruck (760 mm Hg) wird als Null angenommen. Es besteht ein gewisser Zusammenhang zwischen den Manometerwerten und der Temperatur (Tabelle 2).

Derzeit gibt es Autoklaven mit automatischer Steuerung des Betriebsmodus. Zusätzlich zum üblichen Manometer sind sie ausgestattet elektrisches Kontaktmanometer, der verhindert, dass der Druck über einen bestimmten Wert ansteigt, und dadurch einen konstanten Druck gewährleistet gewünschte Temperatur in einem Autoklaven.

Dampf unter Druck sterilisiert verschiedene Nährmedien (außer solchen, die native Proteine ​​enthalten), Flüssigkeiten (isotonische Natriumchloridlösung, Wasser usw.); Geräte, insbesondere solche mit Gummiteilen.

Die Temperatur und Dauer des Autoklavierens von Nährmedien wird durch deren Zusammensetzung bestimmt, die im Rezept zur Herstellung des Nährmediums angegeben ist. Beispielsweise werden einfache Medien (Fleisch-Pepton-Agar, Fleisch-Pepton-Brühe) 20 Minuten lang bei 120 °C (1 atm) sterilisiert. Bei dieser Temperatur ist es jedoch unmöglich, Medien zu sterilisieren, die native Proteine, Kohlenhydrate und andere Substanzen enthalten, die sich durch Erhitzen leicht verändern. Medien mit Kohlenhydraten werden fraktioniert bei 100 °C oder in einem Autoklaven bei 112 °C (0,5 atm) für 10–15 Minuten sterilisiert. Verschiedene Flüssigkeiten, Geräte mit Gummischläuchen, Stopfen, Bakterienkerzen und Filter werden 20 Minuten lang bei 120 °C (1 atm) sterilisiert.

Aufmerksamkeit! In Autoklaven wird auch infiziertes Material neutralisiert. Becher und Reagenzgläser mit Kulturen von Mikroorganismen werden in spezielle Metalleimer oder Tanks mit Löchern im Deckel für das Eindringen von Dampf gestellt und 1 Stunde lang in einem Autoklaven bei 126 ° C (1,5 atm) sterilisiert. Instrumente werden nach der Arbeit auf die gleiche Weise sterilisiert mit Bakterien, die Streitigkeiten bilden.

Mit dem Autoklav dürfen nur speziell geschulte Personen arbeiten, die sich strikt und genau an die Regeln halten müssen, die in der dem Gerät beiliegenden Anleitung aufgeführt sind.

Autoklaviertechnik. 1. Überprüfen Sie vor der Arbeit die Funktionsfähigkeit aller Teile und den Schliff der Gewindebohrer.

2. Wasser (destilliert oder abgekocht, um Kalkbildung zu vermeiden) wird durch einen außerhalb des Kessels angebrachten Trichter bis zur oberen Markierung des Wasserzählerglases gegossen. Der Hahn unter dem Trichter ist geschlossen.

3. Das zu sterilisierende Material wird auf einem speziellen Netz in die Sterilisationskammer gelegt. Die Gegenstände sollten nicht zu dicht beladen werden, da der Dampf zwischen ihnen ungehindert zirkulieren muss, andernfalls erwärmen sie sich nicht auf die erforderliche Temperatur und bleiben möglicherweise unsteril.

4. Die Gummidichtung am Deckel wird zur besseren Abdichtung mit Kreide eingerieben.

5. Der Deckel wird geschlossen und mit dem Autoklavkörper verschraubt, wobei die Bolzen paarweise über Kreuz verschraubt werden.

6. Öffnen Sie das Auslassventil, das die Sterilisationskammer mit der Außenluft verbindet, vollständig und beginnen Sie mit dem Erhitzen des Autoklaven. Die Beheizung des Autoklaven erfolgt üblicherweise mit Gas oder Strom.

Beim Erhitzen des Autoklaven kocht das Wasser, der entstehende Dampf steigt zwischen den Kesselwänden und durch spezielle Löcher in der Wand des Innenkessels (siehe Abb. 12) in die Sterilisationskammer und tritt durch das geöffnete Auslassventil aus. Zunächst entweicht der Dampf zusammen mit der Luft im Autoklaven. Es ist notwendig, dass die gesamte Luft aus dem Autoklaven verdrängt wird, andernfalls stimmt der Manometerwert nicht mit der Temperatur im Autoklaven überein.

Das Auftreten eines kontinuierlichen starken Dampfstroms weist auf die vollständige Entfernung der Luft aus dem Autoklaven hin; Danach wird das Auslassventil geschlossen und der Druck im Autoklaven beginnt allmählich anzusteigen.

7. Als Beginn der Sterilisation gilt der Zeitpunkt, an dem die Manometerwerte den angegebenen Wert erreichen. Die Heizung wird so eingestellt, dass sich der Druck im Autoklaven über einen bestimmten Zeitraum nicht ändert.

8. Nach Ablauf der Sterilisationszeit wird die Aufheizung des Autoklaven gestoppt und der Dampf über das Auslassventil abgelassen. Wenn die Nadel des Manometers auf Null fällt, öffnen Sie den Deckel. Um Verbrennungen durch im Autoklaven verbliebenen Dampf zu vermeiden, sollte der Deckel zu Ihnen hin geöffnet werden.

Das Temperaturniveau im Autoklaven, also die Richtigkeit der Manometeranzeigen, kann überprüft werden. Hierzu werden verschiedene Substanzen verwendet, die einen bestimmten Schmelzpunkt haben: Antipyrin (113° C), Resorcin und Schwefel (119° C), Benzoesäure (120° C). Eine dieser Substanzen wird mit einer vernachlässigbaren Menge Farbstoff (Muchsin oder Methylenblau) gemischt und in ein Glasröhrchen gegossen, das verschlossen und hineingestellt wird vertikale Position zwischen dem zu sterilisierenden Material. Bei ausreichender Temperatur schmilzt die Substanz und nimmt die Farbe des entsprechenden Farbstoffs an.

Um die Wirksamkeit der Sterilisation zu überprüfen, wird ein Reagenzglas mit einer bekannten Sporenkultur in den Autoklaven gegeben. Nach dem Autoklavieren wird das Röhrchen für 24–48 Stunden in einen Thermostaten überführt und das Fehlen oder Vorhandensein von Wachstum festgestellt. Mangelndes Wachstum weist auf einen ordnungsgemäßen Betrieb des Geräts hin.

Sterilisation mit strömendem Dampf hergestellt im Koch-Apparat. Diese Methode wird verwendet, wenn sich das zu sterilisierende Objekt bei einer Temperatur über 100 °C verändert. Nährmedien, die Harnstoff, Kohlenhydrate, Milch, Kartoffeln, Gelatine usw. enthalten, werden mit fließendem Dampf sterilisiert.

Der Koch-Apparat (Kessel) ist ein Metallzylinder, der außen (um die Wärmeübertragung zu reduzieren) mit Filz oder Asbest ausgekleidet ist. Der Zylinder ist mit einem konischen Deckel verschlossen, der über ein Loch zum Entweichen des Dampfes verfügt. Im Inneren des Zylinders befindet sich ein Ständer, bis zu dessen Höhe Wasser gegossen wird. Auf den Ständer wird ein Eimer mit Loch gestellt, in den das zu sterilisierende Material gegeben wird. Der Koch-Apparat wird mit Gas oder Strom beheizt. Die Sterilisationszeit wird ab dem Moment der kräftigen Dampfabgabe an den Deckelrändern und am Dampfaustritt gezählt. 30-60 Minuten lang sterilisieren. Am Ende der Sterilisation wird das Erhitzen gestoppt. Nehmen Sie den Materialeimer aus dem Gerät und lassen Sie ihn bis zum nächsten Tag bei Raumtemperatur stehen. Die Erwärmung erfolgt 3 Tage hintereinander bei einer Temperatur von 100° C für 30-60 Minuten. Diese Methode wird fraktionierte Sterilisation genannt. Beim ersten Erhitzen sterben vegetative Formen von Mikroben ab, während Sporenformen erhalten bleiben. Innerhalb eines Tages gelingt es den Sporen zu keimen und sich in vegetative Formen zu verwandeln, die am zweiten Tag der Sterilisation absterben. Da es möglich ist, dass einige der Sporen keine Zeit zum Keimen hatten, wird das Material weitere 24 Stunden aufbewahrt und anschließend eine dritte Sterilisation durchgeführt. Eine Sterilisation mit fließendem Dampf in einem Koch-Gerät ist nicht erforderlich besondere Kontrolle, da der Indikator ordnungsgemäße Bedienung Das Gerät gewährleistet die Sterilität der vorbereiteten Kulturmedien. Sie können die Sterilisation auch mit strömendem Dampf in einem Autoklaven bei abgeschraubtem Deckel und geöffnetem Auslassventil durchführen.

Kontrollfragen

1. Welche Nährmedien werden dampfsterilisiert?

2. Was ist ein Sterilisator und wie funktioniert er?

3. Warum sollte beim Sterilisieren durch Kochen destilliertes Wasser verwendet werden?

4. Beschreiben Sie den Aufbau und die Funktionsweise des Autoklaven.

5. Was wird im Autoklaven sterilisiert?

6. Was dient als Kontrolle für die ordnungsgemäße Sterilisation beim Autoklavieren?

7. Was ist Heißdampfsterilisation?

8. Beschreiben Sie den Aufbau des Koch-Apparats.

9. Was ist der Zweck der fraktionierten Sterilisation?

Übung

Fülle das Formular aus.

Die fraktionierte Sterilisation kann auch in einem Koch-Gerinnungsmittel durchgeführt werden.

Kochs Gerinnungsmittel wird zum Koagulieren von Molke- und Eierkulturmedien verwendet und gleichzeitig mit der Verdichtung des Mediums wird es sterilisiert.

Koch-Gerinnungsmittel ist ein flacher Metallkasten mit Doppelwänden, der außen mit wärmeisolierendem Material beschichtet ist. Durch ein spezielles Loch im oberen Teil der Außenwand wird Wasser in den Raum zwischen den Wänden gegossen. Das Loch wird mit einem Stopfen verschlossen, in den ein Thermometer eingesetzt wird. Das Gerät wird mit zwei Deckeln verschlossen: Glas und Metall. Durch den Glasdeckel können Sie den Gerinnungsprozess beobachten. Reagenzgläser mit Medien werden schräg auf den Boden des Koagulators gestellt.

Der Koagulator wird mit Gas oder Strom beheizt. Die Medien werden einmal bei einer Temperatur von 90 °C für 1 Stunde oder teilweise sterilisiert – 3 Tage hintereinander bei 80 °C für 1 Stunde.

Tyndallisierung* – fraktionierte Sterilisation bei niedrigen Temperaturen – wird für Stoffe verwendet, die bei einer Temperatur von 60 °C leicht zerstört und denaturiert werden (z. B. Proteinflüssigkeiten). Das zu sterilisierende Material wird 5 Tage hintereinander eine Stunde lang in einem Wasserbad oder in speziellen Geräten mit Thermostaten auf eine Temperatur von 56-58 °C erhitzt.

* (Die Sterilisationsmethode ist nach Tyndall benannt, der sie vorgeschlagen hat.)

Pasteurisierung- Sterilisation bei 65-70 °C für 1 Stunde, vorgeschlagen von Pasteur, um Nicht-Sporen-Formen von Mikroben zu zerstören. Milch, Wein, Bier, Fruchtsäfte und andere Produkte werden pasteurisiert. Milch wird pasteurisiert, um Milchsäure und pathogene Bakterien (Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Shigella, Salmonellen, Staphylokokken usw.) zu entfernen. Beim Pasteurisieren von Bier, Fruchtsäften und Wein entstehen Mikroorganismen, die entstehen Verschiedene Arten Fermentation. Pasteurisierte Lebensmittel werden am besten gekühlt aufbewahrt.

Kontrollfragen

1. Was ist der Zweck und Aufbau des Koch-Koagulators?

2. Welche Sterilisationsmethoden gibt es in einer Gerinnungsmaschine?

3. Was ist Tyndalisierung?

4. Was ist Pasteurisierung?

Sterilisation durch ultraviolette Bestrahlung

Die Sterilisation mit UV-Strahlen erfolgt mit Sonderinstallationen- bakterizide Lampen. UV-Strahlen haben eine hohe antimikrobielle Aktivität und können nicht nur zum Absterben vegetativer Zellen, sondern auch von Sporen führen. UV-Bestrahlung wird zur Luftentkeimung in Krankenhäusern, Operationssälen, Kindereinrichtungen etc. eingesetzt. In einem mikrobiologischen Labor wird vor der Arbeit eine Box mit UV-Strahlen behandelt.

Kontrollfragen

1. Welche Eigenschaften haben sie? ultraviolette Strahlung?

2. In welchen Fällen wird eine Sterilisation mit ultravioletter Strahlung eingesetzt?

Mechanische Sterilisation mittels Bakterienfilter

Die Filtrationssterilisation wird dann eingesetzt, wenn sich die zu sterilisierenden Gegenstände durch Erhitzen verändern. Die Filtration erfolgt über Bakterienfilter aus verschiedenen feinporösen Materialien. Die Poren von Filtern müssen klein genug sein (bis zu 1 Mikrometer), um die mechanische Rückhaltung von Bakterien zu gewährleisten. Daher bezeichnen einige Autoren die Filterung als mechanische Methoden Sterilisation.

Die Filtrationsmethode wird zur Sterilisation von proteinhaltigen Nährmedien, Serum und einigen Antibiotika sowie zur Trennung von Bakterien von Viren, Phagen und Exotoxinen eingesetzt.

In der mikrobiologischen Praxis kommen Seitz-Asbestfilter, Membranfilter sowie Chamberlant- und Berkefeld-Filter (Kerzen) zum Einsatz.

Seitz-Filter sind Scheiben aus einer Mischung aus Asbest und Zellulose. Ihre Dicke beträgt 3–5 mm, der Durchmesser 35–140 mm. Die heimische Industrie produziert Filter zweier Marken: „F“ (Filterung) – hält suspendierte Partikel zurück, lässt aber Bakterien durch; „SF“ (sterilisierend) – mit kleineren Poren, die Bakterien zurückhalten, aber Viren durchlassen. Zerknitterte Asbestplatten sowie Platten mit Brüchen und Rissen sind für die Arbeit ungeeignet.

Membranfilter werden aus Nitrozellulose hergestellt. Es handelt sich um weiße Scheiben mit einer Dicke von 0,1 mm und einem Durchmesser von 35 mm. Abhängig von der Porengröße werden sie mit Nr. 1, 2, 3, 4 und 5 bezeichnet (Tabelle 3).

Für die Sterilisation eignet sich am besten Filter Nr. 1. Zusätzlich zu den aufgeführten stellen sie auch einen sogenannten Vorfilter her, der die gefilterte Flüssigkeit von darin enthaltenen großen Partikeln befreien soll.

Chamberlant- und Berkefeld-Filter (Kerzen) sind Hohlzylinder, die an einem Ende geschlossen sind. Chamberlant-Kerzen werden aus Kaolin, gemischt mit Sand und Quarz, hergestellt. Sie sind nach Porengröße standardisiert und mit L 1, L 2, L 3 ... L 13 bezeichnet. Berkefeld-Filter (Kerzen) werden aus Infusorerde hergestellt; entsprechend der Größe ihrer Poren werden sie mit V, N, W bezeichnet, was einem Porendurchmesser von 3-4, 4-7, 8-12 Mikrometer entspricht.

Die Arbeit mit Bakterienfiltern wird wie folgt durchgeführt. Der Filter muss in einer speziellen Halterung befestigt werden, die in die Filteraufnahme eingesetzt wird. Der Auffangbehälter ist üblicherweise ein Bunsenkolben. Die meist aus Edelstahl gefertigten Halter bestehen aus zwei Teilen: dem oberen, der die Form eines Zylinders ohne Boden hat, und dem unteren, einem tragenden Teil, der in einem Rohr endet. Seitz-Filter werden mit der rauen Oberfläche nach oben auf ein Metallgitter gelegt und mit Schrauben zwischen Ober- und Unterseite festgeklemmt unten Halter. Der montierte Filter wird in einem Gummistopfen befestigt, der in den Hals eines Bunsenkolbens eingesetzt wird. Ein Wattestäbchen wird in den Auslassschlauch der Flasche eingeführt, der an die Vakuumpumpe angeschlossen ist. Die vorbereitete Anlage wird in Papier eingewickelt und in einem Autoklaven unter einem Druck von 1 atm 20–30 Minuten lang sterilisiert. Das gesamte zusammengebaute Gerät wird auch Seitz-Filter genannt (Abb. 13).

Unmittelbar vor der Filtration wird das Auslassende des Bunsenkolbens über einen Gummischlauch mit einer Öl- oder Wasserstrahlpumpe verbunden. Die Verbindungsstellen der verschiedenen Teile werden mit Paraffin gefüllt, um eine dichte Abdichtung zu gewährleisten. Die gefilterte Flüssigkeit wird in den Zylinder des Geräts gegossen und die Pumpe eingeschaltet, wodurch im Behälter ein Vakuum entsteht. Durch die entstehende Druckdifferenz gelangt die gefilterte Flüssigkeit durch die Poren des Filters in den Auffangbehälter und die Mikroben verbleiben auf der Oberfläche des Filters.

Membranfilter werden vor der Verwendung durch Kochen in destilliertem Wasser sterilisiert. Um ein Einrollen der Filter zu verhindern, werden sie zunächst in destilliertes Wasser gelegt, auf eine Temperatur von 50–60 °C erhitzt und 30 Minuten bei schwacher Hitze gekocht, wobei das Wasser 2–3 Mal gewechselt wird. Der Filterhalter und die Aufnahme werden vorab sterilisiert und das Gerät unter aseptischen Bedingungen montiert. Um ein Zerreißen des Membranfilters am Metallgitter zu vermeiden, stellen Sie Becher mit sterilem Filterpapier darunter. Nehmen Sie dann mit einer sterilen Pinzette mit glatten Spitzen den Membranfilter aus dem Sterilisator und legen Sie ihn mit der glänzenden Oberfläche nach unten auf das Stützgitter.

In einem Autoklaven sterilisierte Kerzen (Chamberlant) werden über einen Gummischlauch mit einem Empfänger verbunden und in ein Gefäß (normalerweise einen Zylinder) mit einer gefilterten Flüssigkeit abgesenkt. Die Filtration erfolgt mit einer Vakuumpumpe. Ein steriles Filtrat gelangt in den Auffangbehälter und Bakterien werden von den Poren der Kerze zurückgehalten.

Membran- und Asbestfilter sind für den einmaligen Gebrauch konzipiert. Nach Gebrauch werden die Kerzen in Leitungswasser ausgekocht und anschließend im Muffelofen kalziniert.

Vor der weiteren Verwendung werden Kerzen auf Unversehrtheit überprüft. Die Kerze wird in ein Gefäß mit Wasser gesenkt und mit Luft durchströmt. Wenn sich Luftblasen auf der Oberfläche der Kerze bilden, bedeutet das, dass sich Risse in der Kerze gebildet haben und diese unbrauchbar ist.

Kontrollfragen

1. Was ist die Filtersterilisationsmethode? Was wird mit dieser Methode sterilisiert?

2. Welche Bakterienfilter kennen Sie? Wie wird das Filtergerät installiert, welche Bedingungen müssen beachtet werden?

Chemische Methoden

Diese Art der Sterilisation wird in begrenztem Umfang eingesetzt und dient hauptsächlich der Verhinderung einer bakteriellen Kontamination von Kulturmedien und immunbiologischen Präparaten (Impfstoffe und Seren).

Den Nährmedien werden am häufigsten Substanzen wie Chloroform, Toluol und Ether zugesetzt. Ist es erforderlich, das Medium von diesen Konservierungsstoffen zu befreien, wird es im Wasserbad auf 56 °C erhitzt (die Konservierungsstoffe verdampfen).

Um Impfstoffe und Seren zu konservieren, verwenden Sie Merthiolat. Borsäure, Formalin usw.

Biologische Sterilisation

Die biologische Sterilisation basiert auf dem Einsatz von Antibiotika. Diese Methode wird zur Kultivierung von Viren verwendet.

Kontrollfragen

1. Was ist chemische Sterilisation und wann wird es verwendet?

2. Was ist biologische Sterilisation?

Die wichtigsten Sterilisationsmethoden sind in der Tabelle aufgeführt. 4.

1 (Die Sterilisation ist unvollständig: Sporen verbleiben im sterilisierten Material.)

2 (Die Sterilisation ist unvollständig: Viren verbleiben im sterilisierten Material.)

Desinfektion

In der mikrobiologischen Praxis werden verschiedene Desinfektionsmittel verwendet: 3-5 %ige Phenollösungen, 5-10 %ige Lysollösungen, 1-5 %ige Chloraminlösungen, 3-6 %ige Wasserstoffperoxidlösungen, 1-5 %ige Formaldehydlösungen, Quecksilberchloridlösungen in Verdünnung 1: 1000 (0,1%), 70° Alkohol usw.

Verbrauchtes pathologisches Material (Eiter, Kot, Urin, Auswurf, Blut, Liquor) wird desinfiziert, bevor es in die Kanalisation abgeleitet wird. Die Desinfektion erfolgt mit Trockenbleiche oder 3-5 %iger Chloraminlösung.

Pipetten (graduiert und Pasteur), Glasspatel, Objektträger und Deckgläschen, die mit pathologischem Material oder Kulturen von Mikroorganismen kontaminiert sind, werden 24 Stunden lang in Wasser getaucht. Gläser mit einer 3%igen Lösung von Phenol oder Wasserstoffperoxid.

Nach Abschluss der Arbeiten mit infektiösem Material muss der Laborant den Arbeitsplatz und die Hände mit einer Desinfektionslösung behandeln. Die Oberfläche des Arbeitstisches wird mit einem mit einer 3%igen Phenollösung befeuchteten Wattebausch abgewischt. Die Hände werden mit einer 1%igen Chloraminlösung desinfiziert. Verwenden Sie dazu einen Wattebausch o Mulltupfer Befeuchten Sie es mit einer Desinfektionslösung und wischen Sie die linke Hand ab, dann die rechte und waschen Sie dann Ihre Hände mit warmem Wasser und Seife.

Die Wahl eines Desinfektionsmittels, seine Konzentration und Einwirkungsdauer (Exposition) hängen von den biologischen Eigenschaften der Mikrobe und von der Umgebung ab, in der das Desinfektionsmittel mit pathogenen Mikroorganismen in Kontakt kommt. Beispielsweise sind Quecksilberchlorid, Phenol und Alkohole zur Desinfektion von Proteinsubstraten (Eiter, Blut, Sputum) ungeeignet, da unter ihrem Einfluss eine Proteinkoagulation stattfindet und das geronnene Protein Mikroorganismen vor der Wirkung von Desinfektionsmitteln schützt.

Bei der Desinfektion von mit Sporenformen von Mikroorganismen infiziertem Material werden eine 5 %ige Chloraminlösung, 1–2,5 %ige Lösungen von aktiviertem Chloramin, 5–10 %ige Formalinlösungen und andere Substanzen verwendet.

Die Desinfektion, die den ganzen Tag über während der Arbeit durchgeführt wird, wird als aktuelle und am Ende der Arbeit als endgültige Desinfektion bezeichnet.

Desinfektionsmittel und Anleitung zur Herstellung von Gebrauchslösungen daraus. Kalkchlorid ist ein weißes, klumpiges Pulver mit einem stechenden Chlorgeruch; es löst sich nicht vollständig in Wasser auf. Die bakterizide Wirkung hängt vom Gehalt an Aktivchlor ab, dessen Menge zwischen 28 und 36 % liegt. Chlor mit weniger als 25 % Aktivchlor ist zur Desinfektion ungeeignet.

Bei unsachgemäßer Lagerung zersetzt sich Bleichmittel und verliert einen Teil seines aktiven Chlors. Die Zersetzung wird durch Hitze, Feuchtigkeit und Sonnenlicht gefördert, daher sollte Bleichmittel an einem trockenen, dunklen Ort in einem dicht verschlossenen Behälter aufbewahrt werden.

Trockenbleiche wird zur Desinfektion von menschlichen und tierischen Sekreten verwendet (in einer Menge von 200 g pro 1 Liter Kot und 10 g pro 1 Liter Urin).

Herstellung der ursprünglichen 10 %igen geklärten Bleichlösung. Nehmen Sie 1 kg Trockenbleiche, geben Sie es in einen Emailleeimer und mahlen Sie es. Dann gießen kaltes Wasser Auf ein Volumen von 10 Litern auffüllen, gut vermischen, mit einem Deckel verschließen und einen Tag an einem kühlen Ort stehen lassen. Danach wird die resultierende 10 %ige geklärte Lösung vorsichtig abgelassen und durch mehrere Lagen Gaze oder durch ein dickes Tuch filtriert. In dunklen Glasflaschen, verschlossen mit einem Holzstopfen, an einem kühlen Ort nicht länger als 10 Tage aufbewahren. Aus der Stammlösung werden unmittelbar vor der Verwendung Arbeitslösungen der erforderlichen Konzentration hergestellt. Die Menge an basischer Lösung, die zur Herstellung von 0,2–10 %igen geklärten Bleichlösungen benötigt wird, ist in der Tabelle angegeben. 5.

Die Konzentration der geklärten Bleichlösungen von 0,2 bis 10 % wird je nach Art des zu desinfizierenden Objekts und Resistenz des Erregers gewählt.

Chloramin ist eine kristalline Substanz von weißer oder gelblicher Farbe, die 24–28 % aktives Chlor enthält. Es löst sich bei Raumtemperatur gut in Wasser auf, daher werden die Lösungen unmittelbar vor der Desinfektion zubereitet. Verwenden Sie 0,2-10 %ige Chloraminlösungen. Der Zusammenhang zwischen der prozentualen Konzentration der Lösung und der Chloraminmenge in Gramm pro 1 und 10 Liter ist in der Tabelle angegeben. 6.

Chloramin in Glas auflösen oder emailliertes Geschirr. Bei Lagerung von Chloraminlösungen in dunklen Glasbehältern mit Schliffstopfen bleibt ihre Wirkung bis zu 15 Tage bestehen.

Aktiviertes Chloramin. Die desinfizierenden Eigenschaften von Chloramin werden durch die Zugabe eines Aktivators im Verhältnis 1:1 oder 1:2 verstärkt. Als Aktivator werden Ammoniumverbindungen verwendet - Ammoniumchlorid, Sulfat, Ammoniumnitrat. Aktiviertes Chloramin wird in Konzentrationen von 0,5, 1 und 2,5 % verwendet. Sie werden unmittelbar vor der Verwendung zubereitet. Chloramin und Ammoniumsalz werden getrennt gewogen. Zunächst wird Chloramin in Wasser gelöst und dann ein Aktivator hinzugefügt.

Der Vorteil aktivierter Chloraminlösungen gegenüber herkömmlichen Lösungen besteht darin, dass durch die Zugabe eines Aktivators die Freisetzung von Aktivchlor beschleunigt wird. Daher wirkt sich das Medikament nicht nur nachteilig auf vegetative Formen von Mikroorganismen, sondern auch auf deren Sporen aus. Aktiviertes Chloramin wird in geringeren Konzentrationen und mit geringerer Belastung eingesetzt.

Phenol (Karbolsäure) ist ein farbloser, nadelförmiger Kristall mit einem stechenden, charakteristischen Geruch. Unter Einwirkung von Licht, Luft und Feuchtigkeit nehmen die Kristalle eine purpurrote Farbe an. In verschlossenen dunklen Gläsern und an einem lichtgeschützten Ort aufbewahren.

Phenol ist in Wasser, Alkohol, Ether und fetten Ölen löslich. Es besitzt eine große Hygroskopizität, nimmt Feuchtigkeit aus der Umgebung auf und wird flüssig. Flüssige Karbolsäure enthält 90 % kristallines Phenol und 10 % Wasser.

Verwenden Sie 3-5 %ige wässrige Lösungen von Karbolsäure, hergestellt aus kristallinem Phenol und flüssiger Karbolsäure, gemäß dem in der Tabelle angegebenen Schema. 7. Die Aktivität von Phenol nimmt zu, wenn es darin gelöst wird heißes Wasser(40-50°C).

Aufmerksamkeit! Kristallines Phenol oder flüssige Karbolsäure können bei Kontakt mit der Haut Reizungen und in hohen Konzentrationen schwere Verbrennungen verursachen. Daher muss mit Karbolsäure sehr vorsichtig umgegangen werden. Bei der Zubereitung von Lösungen sollten Sie Gummihandschuhe tragen bzw als letztes Schmieren Sie Ihre Hände mit Vaseline.

Wenn Karbolsäure auf Ihre Haut gelangt, waschen Sie sie sofort mit warmem Wasser und Seife oder 40° Ethylalkohol ab.

Notiz. Zur Herstellung von Desinfektionslösungen aus Phenol ist es bequemer und sicherer, flüssige Karbolsäure zu verwenden.

Kontrollfragen

1. Welche Desinfektionsmittel werden in der mikrobiologischen Praxis eingesetzt?

2. Beschreiben Sie das Aussehen und die grundlegenden Eigenschaften von Bleichmittel, Chloramin und Phenol.

3. Welche Desinfektionsmittellösungen werden zur Desinfektion von mit Sporenformen von Mikroorganismen infiziertem Material verwendet?

Übung

Bereiten Sie 2 Liter 5 %ige Arbeitslösung aus geklärtem Bleichmittel vor; 500 ml 3 %ige Chloraminlösung, 300 ml 1 %ige aktivierte Chloraminlösung.

Aufmerksamkeit! Bevor Sie mit der Lösungsvorbereitung beginnen, führen Sie Berechnungen durch.

Nutzung physikalischer und chemischer Faktoren.

Zu den physikalischen Faktoren der Sterilisation gehören hohe Temperaturen, ultraviolette Strahlen, ionisierende Strahlung und durch Bakterienfilter.

In der Laborpraxis wird die Sterilisation bei hoher Temperatur durch Kalzinieren in einer Flamme, Erhitzen mit trockener Hitze, Kochen, Behandlung mit fließendem Dampf oder Dampf unter Druck erreicht.

Reis. 1. Bunsenbrenner. Reis. 2. Teklu-Brenner. Reis. 3. Temperaturverteilung in der Brennerflamme.

Reis. 4. Trockenschrank.

Reis. 5. Wasserbäder: 1 - mit konstantem Wasserfluss; 2 - zylindrisch; 3 - runder Boden. Reis. 6. Fließender Dampfsterilisator.

Die Flammensterilisation ist eine einfache und zuverlässige Methode zur Verarbeitung verschiedener hitzebeständiger Gegenstände: Nadeln, Bakterienschlingen, mikrobiologische Spatel, Pipetten, Objektträger und Deckgläser, Pinzetten usw. Zu diesem Zweck werden Gasbrenner des Bunsensystems (Abb. 1) verwendet. oder Teklu (Abb. 2). Der Bunsenbrenner ist mit einer beweglichen Halterung ausgestattet, durch die Sie den Luftzugang verstellen können. Beim Teklu-Brenner wird die Menge der einströmenden Luft durch Bewegen der Scheibe reguliert (Abb. 2,1), die Gasmenge wird durch eine Schraube reguliert (Abb. 2, 2). Bei fehlender oder unzureichender Luftzufuhr entsteht eine rauchige Flamme. Der Luftzugang zum Brenner wird eingestellt, bis blaue Flamme. Eine ungefähre Temperaturverteilung in der Brennerflamme ist in Abb. dargestellt. 3.

Die Trockenhitzesterilisation wird in einem Trockenofen (Pasteurofen) durchgeführt. Mit dieser Methode werden nur trockene Gegenstände sterilisiert – Laborglas usw. Der Trockenschrank (Abb. 4) ist ein kleiner Eisenschrank mit Doppelwänden, zwischen denen sich ein befindet Wärmedämmmaterial(Asbest, Glaswolle). Sauber gewaschene Reagenzgläser und Flaschen werden mit Baumwollstopfen verschlossen; Pipetten, Watte und Gaze werden in Papier eingewickelt und auf die Regale des Schranks gelegt, damit die zu sterilisierenden Gegenstände die heißen Wände des Geräts nicht berühren und erhitzte Luft ungehindert zwischen ihnen eindringt. Die Sterilisation im Trockenschrank dauert 45 Minuten - 1 Stunde bei einer Temperatur von 160-170°. Bei Temperaturen über 175° verbrennen Papier und Watte.

Das Kochen in Wasser zerstört Nicht-Sporen-Mikroben in 1-3 Minuten. , Nadeln, Messer, kleine Werkzeuge usw. können in Metallsterilisatoren und sogar in einem normalen Topf gekocht werden. Zugabe einer kleinen Menge Natriumbikarbonat (Natriumbikarbonat) zum Wasser

Die Trockenhitzesterilisation wird in Trockenhitzeöfen (Pasteurofen) durchgeführt. Trockene Hitze wird zum Sterilisieren von Laborglas verwendet. Es wird lose in den Ofen geladen, damit das Material gleichmäßig erhitzt wird. Schließen Sie die Schranktür fest, schalten Sie das elektrische Heizgerät ein, bringen Sie die Temperatur auf 160–165 °C und sterilisieren Sie es 1 Stunde lang. Schalten Sie am Ende der Sterilisation die Heizung aus, aber öffnen Sie die Schranktür erst, wenn der Ofen abgekühlt ist (ansonsten verursacht die kalte Luft Risse im Geschirr). Sterilisationsmodus: 160 °C – 60 Min., 180 °C – 15 Min., 200 °C – 5 Min. Flüssigkeiten, Nährmedien, Gummi und Kunststoffe können nicht mit trockener Hitze sterilisiert werden.

Druckdampfsterilisation unterworfen Dressing, OP-Wäsche, chirurgische Instrumente, Nährmedien, Laborglas, infiziertes Material, Injektionslösungen. Das Material wird in Behälter (Kisten) gefüllt. Am Boden des Bix werden Stoffpolster angebracht, um nach der Sterilisation Feuchtigkeit aufzunehmen. Die Sterilität des Materials bleibt 3 Tage lang erhalten. Infiziertes Material in Schalen und Reagenzgläsern wird in Metallbehältern mit Deckel sterilisiert.

Die Dampfsterilisation unter Druck erfolgt im Autoklaven. Mit einer einzigen Behandlung sterben sowohl vegetative als auch sporenförmige Bakterienformen ab. Dampf unter Druck sterilisiert Nährmedien, mit Ausnahme von Medien mit nativen Proteinen, Flüssigkeiten und Geräten mit Gummiteilen. Einfache Medien (MPA, MPB) werden 20 Minuten lang bei 120 °C (1 atm) sterilisiert. Medien, die native Proteine ​​und Kohlenhydrate enthalten, können bei dieser Temperatur nicht sterilisiert werden, da es sich um Substanzen handelt, die sich durch Erhitzen leicht verändern. Medien mit Kohlenhydraten werden fraktioniert bei 100 °C oder im Autoklaven bei 112 °C (5 atm) für 10–15 Minuten sterilisiert. Verschiedene Flüssigkeiten, Geräte mit Gummischläuchen, Stopfen, Bakterienkerzen und Filter werden 20 Minuten lang bei 120 0 C (1 atm) sterilisiert.

Infiziertes Material (in Reagenzgläsern, Bechern) wird in spezielle Metalleimer oder Tanks mit Löchern für das Eindringen von Dampf gegeben und 1 Stunde lang bei 126 °C (1,5 atm) sterilisiert. Instrumente werden auch nach der Arbeit mit Sporenbakterien sterilisiert.

Es gibt 2 Sterilisationsmodi:

1. Strömender Dampf in einem Autoklaven oder in einem Koch-Apparat bei abgeschraubtem Deckel und geöffnetem Auslassventil, wenn sich die antibakterielle Wirkung des Dampfes gegen vegetative Formen zeigt. Auf diese Weise werden Medien mit Vitaminen und Kohlenhydraten, Harnstoff, Milch, Kartoffeln und Gelatine sterilisiert. Zur vollständigen Entsterilisation wird an 3 aufeinanderfolgenden Tagen eine fraktionierte Sterilisation (bei 100 °C) für 20–30 Minuten verwendet. Es tötet auch Sporen ab.
2. Die Druckdampfsterilisation ist die effektivste Entsterilisationsmethode. Verbandsmaterial und Wäsche werden bei 1 atm sterilisiert. 15–20 Minuten, infiziertes Material bei 1,5–2 atm für 20–25 Minuten.

Sterilisation- Unfruchtbarkeit; Zerstörung pathogener und nicht pathogener Mikroorganismen in vegetativer Form und Sporenform in jedem Material.

Vorbereiten des Geschirrs für die Sterilisation. Glaswaren müssen sauber gewaschen und sterilisiert werden. Verwenden Sie zum Waschen Seife oder chemische Lösungen Waschmittel. Neue Gerichte werden in einer 1-2%igen Lösung vorgekocht Salzsäure, um ein späteres Auslaugen des Glases zu vermeiden. Unter fließendem Wasser gewaschenes Geschirr wird mit destilliertem Wasser gespült und getrocknet.

Bakteriologische Röhrchen. Konische, matte Flaschen werden mit Baumwollgaze-Stopfen verschlossen, die aus eng gedrehten Watterollen bestehen und mit einer Gazeschicht bedeckt sind. Auch für bakteriologische Reagenzgläser wurden Metallstopfen in Form von Außenkappen entwickelt. Es ist zu berücksichtigen, dass beim Sterilisieren von Wattestäbchen bei hohen Temperaturen Substanzen aus der Watte freigesetzt werden, die das Wachstum einiger empfindlicher Bakterien, wie z. B. Brucella, hemmen.

Führen Sie beim Einsetzen von Pipetten ein Wattestäbchen in das obere Ende ein. Pasteurpipetten müssen über eine versiegelte Kapillare verfügen. Jede Messpipette ist vom Ausguss ausgehend über die gesamte Länge spiralförmig in einen 4-5 cm breiten langen Papierstreifen eingewickelt. Pasteurpipetten sind in Papier eingewickelt, jeweils 10–20 Stück, Reagenzgläser – jeweils 15–20 Stück. Es ist besser, alle Arten von Pipetten vor und nach der Sterilisation in speziellen Metallbehältern aufzubewahren. Die Stopfen der Kolben sind zusätzlich mit Papierkappen abgedeckt.

Vor der Sterilisation werden saubere, zusammengebaute Petrischalen in Papier eingewickelt, jeweils 3 bis 4 Stück. Nach der Sterilisation schützt das Papier sterile Glaswaren vor Kontamination durch Mikroflora.

Vor der Sterilisation wird das Geschirr nicht zu dicht in den Trockenschrank gestellt, um eine Luftzirkulation zu gewährleisten, und es wird darauf geachtet, dass die Temperatur 180 °C nicht überschreitet, da bei höherer Temperatur Papier und Watte verkohlen. Nach Abschluss der Sterilisation wird der Trockenschrank erst dann geöffnet. Bis die Temperatur darin auf 70-80 °C sinkt, weil scharfer Abfall Temperaturen können zum Glasbruch führen.

Wenn die Schalen für die Sterilisation der darin enthaltenen Nährmedien durch Autoklavieren unter einem Druck von mindestens 1 atm vorgesehen sind, werden sie nicht vorsterilisiert. Beim Sterilisieren von Medien mit fließendem Dampf oder im Autoklaven unter einem Druck von nicht mehr als 0,5 atm. Es müssen sterile Behälter verwendet werden.

Sterilisation mit trockener, erhitzter Luft. Die Methode wird zum Sterilisieren sauberer Glaswaren verwendet. Zu diesem Zweck wird ein Pasteurofen verwendet – ein spezieller Trockenschrank mit Doppelwänden. Die Außenseite ist mit hitzebeständigem Material ausgekleidet. Oben befindet sich ein Thermometer. Zwischen dem hitzebeständigen Futter und der Innenseite Metallgehäuse Unten ist ein automatisches elektrisches Heizelement angebracht. Wenn eingeschaltet Trockenschrank in das Stromnetz, die Luft darin erwärmt sich. Sobald die eingestellte Temperatur erreicht ist, wird der Startzeitpunkt der Sterilisation notiert. Sterilisationsmodus: bei einer Temperatur von 155–160 °C – Exposition für 2 Stunden, bei 165–170 °C – 1–1,5 Stunden, bei 180 °C – 1 Stunde. Nach der Sterilisationszeit wird das Erhitzen gestoppt.

Autoklavieren. Dabei handelt es sich um Dampfdrucksterilisation in Kombination mit hohe Temperatur in einem speziellen Apparat - einem Autoklaven. Wenn gesättigter Dampf auf einen kühleren Gegenstand trifft, kondensiert der Dampf zu Wasser, was zur Freisetzung von Wasser führt große Menge Hitze. Darüber hinaus wird die Dampfmenge reduziert, was das Eindringen in die inneren Teile des zu sterilisierenden Materials erleichtert. Voraussetzung ist die Zufuhr von wirklich gesättigtem Dampf, sodass es bei Kontakt mit einem kalten Gegenstand zu einer sofortigen Kondensation und Erwärmung kommt. Die Industrie produziert vertikale und horizontale Autoklaven.

Ein vertikaler Autoklav ist ein doppelwandiger zylindrischer Metallkessel, der mit einem Deckel verschlossen ist. Durch einen speziellen Hahn mit Trichter wird Wasser bis zu einem bestimmten Füllstand zwischen die Wände gegossen. Die Innenwand des Kessels ist im oberen Teil mit Löchern und im unteren Teil mit einem Hahn ausgestattet, durch den beim Erhitzen des Wassers Dampf die Luft aus dem Kessel verdrängt. Auf dem Autoklaven wird ein Metallschutzrahmen angebracht, zwischen dem und dem Autoklaven selbst muss ein Freiraum vorhanden sein. Durch den Anschluss an das Stromnetz wird der Autoklav beheizt.

Der Autoklav wird mit dem zu sterilisierenden Material beladen, der Deckel und der Hahn, durch den Wasser gegossen wurde, werden geschlossen und der untere Hahn vorübergehend geöffnet gelassen. Das erhitzte Wasser zwischen den Wänden des Autoklaven kocht, der entstehende Dampf steigt auf und gelangt durch die oberen Löcher der Innenwand in den Kessel, wobei er die Luft durch den unteren offenen Hahn verdrängt. Wenn die gesamte Luft verdrängt ist und der Dampf in einem gleichmäßigen Strahl austritt, wird das untere Ventil geschlossen. Dadurch erhöht sich der Dampfdruck im Autoklaven. Als Beginn der Sterilisation gilt der Zeitpunkt, an dem der Druck einen bestimmten Wert (laut Manometer) erreicht. Die Hitze wird während der Sterilisation angepasst und der Dampfdruck auf dem gleichen Niveau gehalten. Sollte der Druck im Autoklaven zu stark ansteigen, gibt es ein Sicherheitsventil, durch das der überschüssige Dampf automatisch entweicht.

Mit zunehmendem Dampfdruck erhöht sich entsprechend die Temperatur im Autoklaven.

Das Manometer zeigt den Dampfdruck ohne Berücksichtigung des umgebenden Atmosphärendrucks (760 mm Hg) an. Nach Ablauf der Sterilisationszeit wird der Autoklav abgeschaltet. Wenn der Manometerwert nach dem Abkühlen Null ist, öffnen Sie das Ventil, um Dampf abzulassen.

Ein horizontaler Autoklav unterscheidet sich im Design von einem vertikalen Autoklav, sein Funktionsprinzip ist jedoch dasselbe.

virologische Sterilisation pathologisches Tier

Muster von Formularen, die beim Einsenden von pathologischem Material an das Labor auszufüllen sind

Kalzinierung im Feuer. Dies ist eine zuverlässige Sterilisationsmethode, deren Einsatz jedoch aufgrund der Beschädigung der Gegenstände begrenzt ist. Auf diese Weise werden bakteriologische Schleifen sterilisiert.

Trockensterilisation Fieber. Durchgeführt in einem Pasteurofen (Sehne ------

Backofen) bei einer Temperatur von 160-170°C 1 Stunde lang backen. Mit dieser Methode werden Laborgläser, in Papier eingewickelte Pipetten und mit Wattestopfen verschlossene Reagenzgläser sterilisiert. Bei Temperaturen über 170 °C beginnt die Verkohlung von Papier, Watte und Gaze.

Dampfsterilisation unter Druck (Autoklavieren). Die universellste Sterilisationsmethode. Die Durchführung erfolgt in einem Autoklaven – einem Wasser-Dampf-Sterilisator. Das Funktionsprinzip des Autoklaven basiert auf der Abhängigkeit des Siedepunkts von Wasser vom Druck.

Der Autoklav ist ein doppelwandiger Metallkessel mit hermetisch verschlossenem Deckel. Wasser wird in den Boden des Autoklaven gegossen, die zu sterilisierenden Gegenstände in die Arbeitskammer gelegt und der Deckel geschlossen, ohne ihn vorher festzuschrauben. Schalten Sie die Hitze ein und bringen Sie das Wasser zum Kochen. Der entstehende Dampf verdrängt Luft aus der Arbeitskammer, die durch das geöffnete Auslassventil austritt. Wenn die gesamte Luft verdrängt ist und ein kontinuierlicher Dampfstrom aus dem Wasserhahn austritt, wird der Wasserhahn geschlossen und der Deckel verschlossen. Über ein Manometer wird der Dampf auf den gewünschten Druck gebracht. Die Temperatur des Dampfes hängt vom Druck ab: Bei normalem Atmosphärendruck steht die Nadel des Manometers auf 0 atm. - Dampftemperatur 100°C, bei 0,5 atm. - 112°C, bei 1 atm. -121°C, bei 1,5 atm. - 127°C, bei 2 atm. - 134°C. Schalten Sie am Ende der Sterilisation den Autoklav aus, warten Sie, bis der Druck abfällt, lassen Sie nach und nach Dampf ab und öffnen Sie den Deckel. Typischerweise bei einem Druck von 1 atm. Innerhalb von 20-40 Minuten werden einfache Nährmedien und Lösungen, die keine Proteine ​​und Kohlenhydrate enthalten, Verbände und Wäsche sterilisiert. Zu sterilisierende Materialien müssen dampfdurchlässig sein. Beim Sterilisieren großer Materialmengen ( chirurgische Materialien) Die Zeit wird auf 2 Stunden erhöht. Bei einem Druck von 2 atm. Desinfizieren Sie pathologisches Material und verbrauchte mikrobielle Kulturen.

Zuckerhaltige Nährmedien können nicht bei 1 atm sterilisiert werden, da sie karamellisieren, daher werden sie einer fraktionierten Sterilisation mit fließendem Dampf oder einer Autoklavierung bei 0,5 atm unterzogen.

Zur Kontrolle des Sterilisationsregimes werden biologische und physikalische Methoden eingesetzt. Die biologische Methode basiert darauf, dass gleichzeitig mit dem zu sterilisierenden Material Sporen von Bacillus stearothermophilus eingebracht werden, die bei 121°C in 15 Minuten absterben. Nach der Sterilisation dürfen auf dem Nährmedium keine Sporen mehr wachsen. Physikalische Methode basiert auf der Verwendung von Stoffen, die einen bestimmten Schmelzpunkt haben, zum Beispiel Schwefel (119°C), Benzoesäure (120°C). Verschlossene Röhrchen, die die mit Trockenfarbstoff (Fuchsin) vermischte Substanz enthalten, werden zusammen mit dem zu sterilisierenden Material in einen Autoklaven gegeben. Bei ausreichender Temperatur im Autoklaven schmilzt die Substanz und nimmt die Farbe des Farbstoffs an.

Fließfähige Sterilisation Die Bedampfung erfolgt in einer Koch-Apparatur oder in einem Autoklaven bei abgeschraubtem Deckel und geöffnetem Auslassventil. Das Wasser in der Apparatur wird auf 100°C erhitzt. Der entstehende Dampf durchdringt das eingebettete Material und sterilisiert es. Eine einzige Behandlung bei 100 °C tötet die Sporen nicht ab. Daher wird eine fraktionierte Sterilisationsmethode verwendet – 3 Tage hintereinander für 30 Minuten, dazwischen einen Tag bei Raumtemperatur stehen lassen. Durch die Erwärmung auf 100 °C kommt es zu einer thermischen Aktivierung der Sporen, wodurch diese bis zum nächsten Tag in vegetative Formen keimen und beim zweiten und dritten Erhitzen absterben. Dadurch können nur Nährmedien mit strömendem Dampf sterilisiert werden, denn Damit Sporen keimen können, ist die Anwesenheit von Nährstoffen erforderlich.