Pastör fırını. Sterilizasyon ve diğer mikrobiyolojik amaçlar. Ultraviyole ışınlamayla sterilizasyon

Mikroorganizmaların yaşamı çevre koşullarına yakından bağlıdır. Mikroorganizmaları etkileyen tüm çevresel faktörler üç gruba ayrılabilir: fiziksel, kimyasal ve biyolojik; bunların yararlı veya zararlı etkisi hem faktörün doğasına hem de mikroorganizmanın özelliklerine bağlıdır.

Fiziksel faktörler

Fiziksel faktörlerden sıcaklık, kurutma, radyant enerji ve ultrason, mikroorganizmaların gelişimi üzerinde en büyük etkiye sahiptir.

Sıcaklık. Her mikroorganizmanın yaşam aktivitesi belirli sıcaklık limitleriyle sınırlıdır. Bu sıcaklık bağımlılığı genellikle üç ana nokta ile ifade edilir: minimum - mikrobiyal hücrelerin üremesinin durduğu sıcaklık; optimum - mikroorganizmaların büyümesi ve gelişmesi için en iyi sıcaklık; maksimum - hücrelerin hayati aktivitesinin zayıfladığı veya durduğu sıcaklık. Optimum sıcaklık genellikle doğal yaşam ortamının sıcaklık koşullarına karşılık gelir.

Sıcaklıkla ilgili tüm mikroorganizmalar psikrofillere, mezofillere ve termofillere ayrılır.

Psikrofiller (Yunanca psychros'tan - soğuk, phileo - aşk) veya soğuğu seven mikroorganizmalar nispeten düşük sıcaklıklarda büyürler: minimum sıcaklık - 0 ° C, optimal - 10-20 ° C, maksimum - 30 ° C. Bu grup şunları içerir: kuzey denizlerinde ve okyanuslarda yaşayan mikroorganizmalar, toprak, atık su. Bu aynı zamanda ışık ve demir bakterilerinin yanı sıra soğukta (0° C'nin altında) gıdanın bozulmasına neden olan mikropları da içerir.

Mezofiller (Yunan mezosundan - orta), çoğu saprofit ve tüm patojenik mikroorganizmaları içeren en kapsamlı gruptur. Onlar için en uygun sıcaklık 28-37° C, minimum 10° C, maksimum 45° C'dir.

Termofiller (Yunan termosundan - ısı, ısı) veya ısıyı seven mikroorganizmalar 55 ° C'nin üzerindeki sıcaklıklarda gelişir, onlar için minimum sıcaklık 30 ° C, optimum 50-60 ° C ve maksimum 70'dir. -75 ° C. Sıcak maden kaynaklarında, toprağın yüzey tabakasında, kendiliğinden ısınan alt tabakalarda (gübre, saman, tahıl), insan ve hayvanların bağırsaklarında bulunurlar. Termofiller arasında birçok spor formu vardır.

Yüksek ve düşük sıcaklıkların mikroorganizmalar üzerinde farklı etkileri vardır. Bazıları yüksek sıcaklıklara daha duyarlıdır. Ayrıca, sıcaklık maksimumun ötesinde ne kadar yüksek olursa, hücre proteinlerinin denatürasyonuna (pıhtılaşmasına) bağlı olarak mikrobiyal hücrelerin ölümü o kadar hızlı gerçekleşir.

Mezofilik bakterilerin bitkisel formları 60° C sıcaklıkta 30-60 dakika ve 80-100° C sıcaklıkta 1-2 dakika sonra ölür. Bakteri sporları yüksek sıcaklıklara çok daha dayanıklıdır. Örneğin, şarbon basili sporları 10-20 dakika kaynamaya ve clostridium botulizm sporları - 6 saat dayanabilir.Sporlar dahil tüm mikroorganizmalar 165-170 ° C sıcaklıkta bir saat boyunca (kuru ısıda) ölürler. fırında) veya 30 dakika boyunca 1 atm basınç altında (otoklavda) buhara maruz bırakıldığında.

Yüksek sıcaklıkların mikroorganizmalar üzerindeki etkisi sterilizasyonun temelidir - çeşitli nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen salınması (aşağıya bakınız).

Birçok mikroorganizma düşük sıcaklıklara son derece dayanıklıdır. Salmonella typhus ve Vibrio cholerae buzda uzun süre hayatta kalır. Bazı mikroorganizmalar sıvı hava sıcaklıklarında (-190°C) canlı kalır ve bakteri sporları -250°C'ye kadar sıcaklıklara dayanabilir.

Sadece bireysel türler patojenik bakteriler düşük sıcaklıklara duyarlıdır (örneğin, Bordetella pertussis ve parapertussis, Neisseria meningococcus, vb.). Mikroorganizmaların bu özellikleri dikkate alınır. laboratuvar teşhisi ve incelenen materyalin taşınması sırasında soğutmadan korunarak laboratuvara teslim edilir.

Düşük sıcaklıkların etkisi, yiyecekleri soğutma ünitelerinde, kilerlerde ve buzullarda korumak için yaygın olarak kullanılan paslanma ve fermantasyon süreçlerini durdurur. 0° C'nin altındaki sıcaklıklarda mikroplar askıya alınmış bir animasyon durumuna düşer; metabolik süreçler yavaşlar ve üreme durur. Ancak uygun sıcaklık koşulları ve besin ortamının varlığında mikrobiyal hücrelerin hayati fonksiyonları yeniden sağlanır. Mikroorganizmaların bu özelliği, mikrobiyal kültürleri düşük sıcaklıklarda korumak için laboratuvar uygulamalarında kullanılır. Yüksek ve düşük sıcaklıklardaki (donma ve çözülme) hızlı değişikliklerin mikroorganizmalar üzerinde de zararlı etkisi vardır; bu, hücre zarlarının yırtılmasına yol açar.

Kurutma. Mikroorganizmaların normal işleyişi için su gereklidir. Kurutma, sitoplazmanın dehidrasyonuna, sitoplazmik zarın bütünlüğünün bozulmasına yol açar, bunun sonucunda mikrobiyal hücrelerin beslenmesi bozulur ve ölümleri meydana gelir.

Kurutmanın etkisi altında farklı mikroorganizma türlerinin ölümünün zamanlaması önemli ölçüde farklılık gösterir. Örneğin patojenik Neisseria (meningokok, gonokok), Leptospira, Treponema pallidum ve diğerleri birkaç dakika sonra kurutulduğunda ölür. Vibrio cholerae 2 gün, Salmonella tifo - 70 gün ve Mycobacterium tuberculosis - 90 gün kurumaya dayanabilir. Ancak patojenlerin kuru bir protein örtüsüyle korunduğu tüberküloz hastalarının kurutulmuş balgamı 10 ay boyunca bulaşıcı kalıyor.

Sporlar kurumaya ve diğer çevresel etkilere karşı özellikle dirençlidir. Şarbon basilinin sporları 10 yıl, küf mantarı sporları ise 20 yıla kadar çimlenme yeteneğini korur.

Kurutmanın mikroorganizmalar üzerindeki olumsuz etkisi uzun süredir sebze, meyve, et, balık ve şifalı bitkilerin korunmasında kullanılmaktadır. Aynı zamanda kendimizi koşullar altında bulduk. yüksek nem Bu tür ürünler mikrobiyal aktivitenin restorasyonu nedeniyle hızla bozulur.

Dondurarak kurutma yöntemi, mikroorganizma kültürlerinin, aşıların ve diğer biyolojik preparatların depolanmasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Yöntemin özü, mikroorganizmaların veya preparatların önce dondurulması ve ardından vakum koşulları altında kurutulmasıdır. Bu durumda mikrobiyal hücreler askıya alınmış bir animasyon durumuna girer ve biyolojik özelliklerini birkaç ay veya yıl boyunca korurlar.

Radyant Enerji. Doğada mikroorganizmalar sürekli olarak maruz kalmaktadır. Güneş radyasyonu. Doğrudan güneş ışığı, fotosentetik bakteriler (yeşil ve mor kükürt bakterileri) dışında birçok mikroorganizmanın birkaç saat içinde ölümüne neden olur. Güneş ışığının zararlı etkileri ultraviyole ışınlarının (UV ışınları) aktivitesinden kaynaklanır. Hücre enzimlerini etkisiz hale getirir ve DNA'ya zarar verirler. Patojenik bakteriler UV ışınlarının etkisine saprofitlerden daha duyarlıdır. Bu nedenle mikrobiyal kültürlerin laboratuvarda karanlıkta saklanması daha iyidir. Bu bakımdan Buchner'in deneyimi açıklayıcıdır.

Bol miktarda bakteri kültürü, ince bir agar tabakası ile bir Petri kabına aşılanır. Siyah kağıttan kesilen harfler tohumlu bardağın dış yüzeyine yapıştırılarak örneğin "tifüs" kelimesi oluşturulur. Bardak, alt kısmı yukarı bakacak şekilde 1 saat boyunca direkt güneş ışığına maruz bırakılır, daha sonra kağıtlar çıkarılır ve bardak 37°C sıcaklıktaki termostatta bir gün bekletilir.Bakteri üremesi sadece bardağın bu yerlerinde gözlemlenir. Çıkartma harfleriyle UV ışınlarından korunan agar. Agarın geri kalanı şeffaf kalır, yani. mikroorganizmaların büyümesi yoktur (Şekil 11).

Güneş ışığının doğal bir faktör olarak dış çevrenin sağlığının iyileştirilmesindeki önemi büyüktür. Havayı, doğal rezervuarların suyunu ve toprağın üst katmanlarını patojen bakterilerden arındırır.

Havayı sterilize etmek için UV ışınlarının bakterisidal (bakteri yok edici) etkisinden yararlanılır. kapalı tesisler(ameliyathaneler, soyunma odaları, kutular vb.) yanı sıra su ve süt. Bu ışınların kaynağı ultraviyole radyasyon lambaları ve bakteri öldürücü lambalardır.

Diğer radyant enerji türleri - X ışınları, α-, β-, γ ışınları, mikroorganizmalar üzerinde yalnızca 440-280 J/kg civarındaki büyük dozlarda zararlı etkiye sahiptir. Mikropların ölümü, nükleer yapıların ve hücresel DNA'nın tahrip edilmesinden kaynaklanır. Düşük dozda radyasyon mikrobiyal hücrelerin büyümesini teşvik eder. Mikroorganizmalar radyoaktif radyasyona karşı yüksek organizmalara göre çok daha dayanıklıdır. Tiyonik bakterilerin uranyum cevheri yataklarında yaşadığı bilinmektedir. Suda bakteri bulundu nükleer reaktörler 20-30 kJ/kg iyonlaştırıcı radyasyon konsantrasyonunda.

İyonlaştırıcı radyasyonun bakterisidal etkisi, belirli gıda ürünlerinin korunmasında, biyolojik preparatların (sera, aşılar vb.) sterilizasyonunda kullanılırken, sterilize edilen malzemenin özellikleri değişmez.

Son yıllarda tek kullanımlık ürünler radyasyon yöntemiyle sterilize edildi - polistiren pipetler, Petri kapları, serolojik reaksiyonlar için kuyucuklar, şırıngalar ve ayrıca dikiş malzemesi- katgüt vb.

ultrason mikrobiyal hücrelere önemli zararlar verir. Ultrasonun etkisi altında sitoplazmanın sıvı ortamında bulunan gazlar aktive edilir ve hücre içinde yüksek basınç oluşur (10.000 atm'ye kadar). Bu, hücre zarının yırtılmasına ve hücre ölümüne yol açar. Ultrason, gıda ürünlerini (süt, meyve suları) ve içme suyunu sterilize etmek için kullanılır.

Yüksek basınç. Bakteriler ve özellikle sporları mekanik basınca dayanıklıdır. Doğada denizlerde ve okyanuslarda 1000-10000 m derinlikte 100 ila 900 atm basınç altında yaşayan bakteriler bulunur. Bazı bakteri türleri 3000-5000 atm'ye kadar basınçlara ve bakteri sporları - hatta 20.000 atm'ye kadar dayanabilir.

Kimyasal faktörler

Kimyasalların mikroorganizmalar üzerindeki etkisi, kimyasal bileşiğin yapısına, konsantrasyonuna ve mikrobiyal hücrelerin maruz kalma süresine bağlı olarak değişmektedir. Konsantrasyona bağlı olarak bir kimyasal madde besin kaynağı olabilir veya mikroorganizmaların yaşamsal faaliyetleri üzerinde engelleyici bir etkiye sahip olabilir. Örneğin %0,5-2'lik bir glikoz çözeltisi mikropların büyümesini uyarır ve %20-40'lık glikoz çözeltileri mikrobiyal hücrelerin çoğalmasını engeller.

Birçok kimyasal bileşikler Mikroorganizmalar üzerinde zararlı etkisi olan, tıbbi uygulamada dezenfektan ve antiseptik olarak kullanılmaktadır.

Dezenfeksiyon amacıyla kullanılan kimyasallara dezenfektan denir. Dezenfeksiyon, çeşitli çevresel nesnelerdeki patojenik mikroorganizmaları yok etmeyi amaçlayan önlemleri ifade eder. Dezenfektanlar halojenür bileşikleri, fenoller ve türevleri, ağır metal tuzları, bazı asitler, alkaliler, alkoller vb. içerir. Belirli bir süre boyunca optimum konsantrasyonlarda etki ederek mikrobiyal hücrelerin ölümüne neden olurlar. Birçok dezenfektanın makroorganizmanın dokuları üzerinde zararlı etkisi vardır.

Antiseptikler, mikroorganizmaların ölümüne neden olabilecek veya büyümelerini ve üremelerini engelleyebilecek kimyasallardır. Tedavi amaçlı (kemoterapi) yanı sıra yaraların, derinin ve insan mukozasının dezenfeksiyonu için kullanılırlar. Hidrojen peroksit, iyotun alkol çözeltileri, parlak yeşil, potasyum permanganat çözeltileri vb. antiseptik özelliklere sahiptir.İnsanlara zararsız dozlarda bazı antiseptik maddeler (asetik, sülfür, benzoik asit vb.) Gıda muhafazasında kullanılır.

Etki mekanizmasına göre antimikrobiyal aktiviteye sahip kimyasal maddeler birkaç gruba ayrılabilir.

1. Yüzey aktif maddeler (yağ asitleri, sabunlar ve diğer deterjanlar) yüzey geriliminde bir azalmaya neden olur, bu da mikroorganizmaların hücre duvarı ve sitoplazmik zarının işleyişinin bozulmasına yol açar.

2. Fenol, kresol ve türevleri mikrobiyal proteinlerin pıhtılaşmasına neden olur. Mikrobiyolojik uygulamalarda ve bulaşıcı hastalıklar hastanelerinde bulaşıcı materyalleri dezenfekte etmek için kullanılırlar.

3. Mikrobiyal proteinlerle etkileşime giren oksitleyici maddeler, enzimlerin aktivitesini bozar ve protein denatürasyonuna neden olur. Aktif oksitleyici maddeler, içme suyunu dezenfekte etmek için kullanılan klor ve ozondur. Klor türevleri (çamaşır suyu, kloramin) dezenfeksiyon amacıyla yaygın olarak kullanılmaktadır. Hidrojen peroksit, potasyum permanganat, iyot vb. oksitleyici özelliklere sahiptir.

4. Formaldehit dezenfeksiyon için %40'lık solüsyon (formalin) formunda kullanılır. Mikroorganizmaların bitkisel ve spor formlarını öldürür. Formalin, mikrobiyal hücre proteinlerinin amino gruplarını bloke eder ve bunların denatürasyonuna neden olur.

5. Ağır metal tuzları (cıva, kurşun, çinko, altın vb.) mikrobiyal hücrenin proteinlerini pıhtılaştırarak ölümlerine neden olur. Bir dizi metalin (gümüş, altın, cıva vb.) ihmal edilebilir konsantrasyonlarda mikroorganizmalar üzerinde bakterisidal etkisi vardır. Bu özelliğe oligodinamik etki denir (Latin oligolardan - küçük, dinamys - güçten). Gümüş iyonlarının bakteri yok edici etkisinden dolayı gümüş kaplardaki suyun çürümediği kanıtlanmıştır. Blenore'nin önlenmesi için * yenidoğanlar uzun zamandır%1'lik gümüş nitrat çözeltisi kullanıldı. Kolloidal çözümler organik bileşikler gümüş (protargol, yakagol) da lokal antiseptik şeklinde kullanılır.

* (Blennorea, gonokokların neden olduğu gözün konjonktiva iltihabıdır.)

Cıva preparatları güçlü bir antimikrobiyal etkiye sahiptir. Antik çağlardan beri dezenfeksiyon için cıva biklorür veya cıva klorür (1:1000 seyreltide) kullanılmıştır. Ancak, o toksik etki makroorganizmanın dokusu üzerinde bulunur ve kullanımı sınırlıdır.

6. Boyalar (elmas yeşili, rivanol vb.) bakteri üremesini engelleme özelliğine sahiptir. Bir dizi boyanın çözeltileri antiseptik olarak kullanılır ve ayrıca eşlik eden mikrofloranın büyümesini engellemek için bazı besin ortamlarına da eklenir.

Bir takım fiziksel ve fiziksel etkenlerin yıkıcı etkileri kimyasal faktörler mikroorganizmalar üzerindeki etkisi, tıbbi ve sıhhi uygulamalarda yaygın olarak kullanılan aseptik ve antiseptik yöntemlerin temelini oluşturur.

Asepsis, bir nesnenin (yara, cerrahi alan, mikroorganizma kültürleri vb.) mikrobiyal kontaminasyonunu fiziksel yöntemlere dayalı olarak önleyen bir önleyici tedbirler sistemidir.

Antiseptikler, çeşitli dezenfekte edici kimyasallar kullanılarak bir yarada, tüm vücutta veya çevresel nesnelerde bulunan mikroorganizmaları yok etmeyi amaçlayan bir dizi önlemdir.

Biyolojik faktörler

Doğal yaşam alanlarında, mikroorganizmalar tek başına bulunmazlar, ancak temel olarak simbiyoz, metabiyoz ve antagonizmadan oluşan karmaşık ilişkiler içindedirler.

Simbiyoz, farklı türlerdeki organizmaların bir arada yaşaması ve onlara karşılıklı fayda sağlamasıdır. Aynı zamanda birlikte, ayrı ayrı her birinden daha iyi gelişirler.

Nodül bakterileri ile baklagiller arasında, filamentli mantarlar ile mavi-yeşil algler (likenler) arasında simbiyotik ilişkiler mevcuttur: Laktik asit bakterileri ile alkollü mayanın simbiyozu, bazı laktik asit ürünlerinin (kefir, kımız) hazırlanmasında kullanılır.

Metabiyoz, bir tür mikroorganizmanın metabolik ürünlerinin diğerlerinin gelişimi için gerekli koşulları yarattığı bir ilişki türüdür. Örneğin, protein maddelerini parçalayan paslandırıcı mikroorganizmalar, ortamda amonyum bileşiklerinin birikmesine katkıda bulunur ve nitrifikasyon bakterilerinin büyümesi ve gelişmesi için uygun koşullar yaratır. Ve iyi havalandırılmış toprakta anaerobların gelişimi, serbest oksijeni emen aeroblar olmadan imkansız olurdu.

Metabiyotik ilişkiler toprak mikroorganizmaları arasında yaygındır ve doğadaki madde döngüsünün temelini oluşturur.

Antagonizm, bir mikroorganizmanın diğerinin gelişimini engellediği veya tamamen ölümüne neden olabileceği bir ilişki biçimidir. Varoluş mücadelesinde mikroorganizmalar arasında düşmanca ilişkiler gelişmiştir. Yaşadıkları her yerde besin kaynakları, hava oksijeni ve yaşam alanı için aralarında sürekli bir mücadele vardır. Bu nedenle, hastaların salgılarıyla dış ortama (toprak, su) giren patojenik bakterilerin çoğu, çok sayıda saprofitle uzun süreli rekabete dayanamaz ve nispeten hızlı bir şekilde ölür.

Antagonizma, mikroorganizmaların birbirleri üzerindeki doğrudan etkisinden veya metabolik ürünlerinin etkisinden kaynaklanabilir. Örneğin protozoalar bakterileri yutar ve fajlar onları parçalar. Yenidoğanların bağırsakları laktik asit bakterileri Bifidobacterium bifidum tarafından kolonize edilir. Laktik asit salgılayarak çürütücü bakterilerin gelişimini baskılarlar ve böylece hala hassas olan organizmayı bağırsak bozukluklarından korurlar. bebekler. Yaşam sürecindeki bazı mikroorganizmalar, bakteri ve diğer mikroplar üzerinde zararlı etkisi olan çeşitli maddeler üretir. Bu maddeler antibiyotikleri içerir (bkz. "Antibiyotikler").

Kontrol soruları

1. Mikroorganizmaların yaşam aktivitesini hangi fiziksel faktörler etkiler?

2. Hangi maddeler dezenfektan olarak sınıflandırılır ve mikroorganizmalar üzerindeki etki mekanizmaları açısından nasıl farklılık gösterirler?

3. Mikroorganizmalar arasında hangi ilişkilerin bulunduğunu listeleyiniz?

Sterilizasyon

Sterilizasyon sterilizasyondur, yani çevresel nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen kurtarılması.

Sterilizasyon çeşitli şekillerde gerçekleştirilir:

1) fiziksel (yüksek sıcaklığa, UV ışınlarına maruz kalma, kullanım bakteriyel filtreler);

2) kimyasal (çeşitli dezenfektanların, antiseptiklerin kullanımı);

3) biyolojik (antibiyotik kullanımı).

Laboratuvar uygulamalarında genellikle fiziksel sterilizasyon yöntemleri kullanılır.

Bir veya başka bir sterilizasyon yönteminin kullanılması olasılığı ve uygulanabilirliği, sterilize edilecek malzemenin özelliklerine, fiziksel ve kimyasal özelliklerine göre belirlenir.

Fiziksel yöntemler

Brülör alevinde veya alevde kalsinasyon, hem bitkisel hücreler hem de mikrobiyal sporlar öldüğü için nesnenin tamamen sterilize edildiği bir sterilizasyon yöntemidir. Tipik olarak bakteriyolojik döngüler, spatulalar, pipetler, slaytlar ve kapak camları ve küçük aletler kalsine edilir. Makas ve neşterler ısıtılarak sterilize edilmemelidir, çünkü ateşin etkisi altında kesme yüzeyi donuklaşır.

Kuru ısı sterilizasyonu

Kuru ısı veya sıcak hava ile sterilizasyon Pasteur fırınlarında (kurutma) yapılır. kuru ısıtmalı fırınlar). Pasteur fırını, ısıya dayanıklı malzemelerden (metal ve asbest) yapılmış çift duvarlı bir dolaptır. Kabini gaz brülörleri veya elektrikli ısıtma cihazları kullanarak ısıtın. Elektrikle ısıtılan dolaplar gerekli sıcaklığı sağlamak için regülatörlerle donatılmıştır. Sıcaklığı kontrol etmek için dolabın üst duvarındaki deliğe yerleştirilmiş bir termometre bulunmaktadır.

Laboratuvar cam malzemelerini sterilize etmek için kuru ısı kullanılır. Sterilizasyon için hazırlanan kaplar, sterilize edilen malzemenin eşit ve güvenilir bir şekilde ısıtılmasını sağlamak için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapağını sıkıca kapatın, ısıtma cihazını açın, sıcaklığı 160-165 °C'ye getirin ve bu sıcaklıkta 1 saat sterilize edin.Sterilizasyon sonunda ısıtmayı kapatın ancak soğuyana kadar dolap kapısını açmayın. fırın soğudu; Aksi halde kabin içine giren soğuk hava, sıcak tencerede çatlaklara neden olabilir.

Pasteur fırınında sterilizasyon farklı sıcaklıklarda yapılabilir. sıcaklık koşulları ve maruz kalma (sterilizasyon süresi) (Tablo 1).

Sıvılar (besleyici ortam, izotonik sodyum klorür çözeltisi vb.), kauçuk ve sentetik malzemelerden yapılmış ürünler, sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için kuru ısıyla sterilize edilemez.

Pasteur fırınında sterilizasyonu kontrol etmek için ipek iplikler spor oluşturan bakteri kültüründe nemlendirilir, kurutulur, steril bir Petri kabına yerleştirilir ve bir Pasteur fırınına yerleştirilir. Sterilizasyon 165°C sıcaklıkta 1 saat süreyle gerçekleştirilir (kontrol için ipliklerin bir kısmı açıkta bırakılır). oda sıcaklığı). Daha sonra sterilize edilen ve kontrol iplikleri bir Petri kabındaki agarın yüzeyine yerleştirilir veya et suyuyla birlikte test tüplerine yerleştirilir ve 2 gün boyunca 37°C'de bir termostatta inkübe edilir. Pasteur fırınının düzgün çalışmasıyla, bakteri sporları öleceğinden, sterilize edilmemiş (kontrol) iplikler üzerindeki bakteri sporları besin maddesi üzerinde filizleneceğinden, içine sterilize edilmiş ipliklerin yerleştirildiği besin ortamına sahip test tüpleri veya tabaklarda büyüme olmayacaktır. Medyada büyüme kaydedilecek.

Pasteur fırınının içindeki sıcaklığı belirlemek için 165-170 ° C sıcaklıkta karamelize olan sakaroz veya toz şeker kullanabilirsiniz.

Pasteur fırınında sterilizasyon için laboratuvar cam malzemelerinin hazırlanması. Sterilizasyondan önce laboratuvar cam malzemeleri (Petri kapları, dereceli ve Pasteur pipetleri, şişeler, şişeler, test tüpleri) iyice yıkanmalı, kurutulmalı ve kağıda sarılmalıdır, aksi takdirde sterilizasyondan sonra tekrar hava bakterileri ile kontamine olabilirler.

Petri kapları tek seferde bir veya daha fazla parça halinde kağıda sarılır veya özel metal kutulara yerleştirilir.

Test materyalinin ağza girmesini önlemek için pipetlerin üst uçlarına pamuklu çubuklar yerleştirilir. Dereceli pipetler 4-5 cm genişliğinde uzun kağıt şeritlerine sarılır, sarılmış pipetin hacmi kağıt üzerinde işaretlenir. Kalem kutularında dereceli pipetler, kağıda ilave ambalajlama yapılmadan sterilize edilir.

Not. Pipetlerdeki mezuniyet yeterince görülemiyorsa, sterilizasyondan önce eski haline getirilir. Bir pipete uygulayın yağlı boya ve boyanın kurumasına izin verilmeden baryum sülfat tozu bir bezle üzerine sürülür. Bundan sonra, yalnızca mezuniyet çentiklerinde kalan fazla boyayı bir bezle çıkarın. Bu şekilde işlenen pipetler durulanmalıdır.

Pasteur pipetlerinin keskin uçları bek alevinde kapatılır ve bir seferde 3-5 parça olacak şekilde kağıda sarılır. Pasteur pipetleri, kılcal damarların kapalı uçlarını kırmayacak şekilde dikkatlice sarılmalıdır.

Şişeler, şişeler, test tüpleri pamuklu gazlı bez tıpalarla kapatılır. Mantar, kabın boynuna uzunluğunun 2 / 3'ü kadar sığmalı, çok sıkı olmamalı, ancak gevşek de olmamalıdır. Her kaptaki (test tüpleri hariç) tıpaların üzerine bir kağıt kapak yerleştirilir. Test tüpleri 5-50'li gruplar halinde birbirine bağlanır ve kağıtla sarılır.

Not. Yüksek sıcaklıklarda, kapların ve pipetlerin sarıldığı kağıtlar ve pamuk yünü sararır ve hatta kömürleşebilir. yeni çeşit Laboratuvara ulaşan kağıtlar kabul edilen sıcaklık koşullarında test edilmelidir.

Kontrol soruları

1. Sterilizasyon terimi ile ne kastedilmektedir?

2. Sterilizasyon nasıl yapılır?

3. Ateşte kalsinasyonla sterilize edilen şey nedir?

4. Pasteur fırınının yapısını ve çalışma şeklini anlatınız.

5. Pasteur fırınında ne sterilize edilir?

6. Cam eşyalar sterilizasyona nasıl hazırlanır?

7. Besleyici ortamlar ve kauçuk nesneler neden bir Pasteur fırınında sterilize edilemiyor?

Egzersiz yapmak

Sterilizasyon için Petri kaplarını, dereceli pipetleri, Pasteur pipetlerini, test tüplerini, şişeleri ve şişeleri hazırlayın.

Kaynatarak sterilizasyon

Kaynatma, sterilize edilmiş malzemede spor olmaması koşuluyla sterilliği garanti eden bir sterilizasyon yöntemidir. Şırıngaların, aletlerin, cam ve metal eşyaların, kauçuk tüplerin vb. işlenmesinde kullanılır.

Kaynatma yoluyla sterilizasyon genellikle bir sterilizatörde gerçekleştirilir - metal kutu Sıkı oturan bir kapakla dikdörtgen şeklindedir. Sterilize edilecek malzeme sterilizatörde bulunan file üzerine yerleştirilip su ile doldurulur. Kaynama noktasını arttırmak ve suyun sertliğini ortadan kaldırmak için% 1-2 sodyum bikarbonat ekleyin (damıtılmış su kullanmak daha iyidir). Sterilizatör bir kapakla kapatılır ve ısıtılır Sterilizasyonun başlangıcı suyun kaynama anı olarak kabul edilir, kaynama süresi 15-30 dakikadır. Sterilizasyon sonunda aletlerin bulunduğu ağ, özel kancalarla yan saplardan çıkarılır ve içindeki aletler, diğer aletlerle birlikte kaynatılan steril cımbız veya forseps ile alınır.

Buhar sterilizasyonu iki şekilde gerçekleştirilir: 1) basınç altında buhar; 2) akan buhar.

Basınçlı buhar sterilizasyonu otoklavda üretilir. Bu sterilizasyon yöntemi, sterilize edilen malzemelerin atmosferik basıncın üzerindeki doymuş su buharına maruz bırakılmasına dayanmaktadır. Bu tür bir sterilizasyon sonucunda mikroorganizmaların hem vejetatif hem de spor formları tek bir işlemle ölür.

Otoklav (Şekil 12), dışarıdan metal bir mahfaza ile kaplanmış, bir kapakla hava geçirmez şekilde kapatılmış ve kazana menteşeli cıvatalarla sıkıca vidalanmış devasa bir kazandır. Dış kazanın içine sterilizasyon odası adı verilen daha küçük çaplı bir başka cihaz yerleştirilir. Sterilize edilecek nesneler bu bölmeye yerleştirilir. Her iki kazan arasında su-buhar odası adı verilen boş bir alan bulunmaktadır. Bu hazneye, dışarıdan sabitlenen bir huni vasıtasıyla, özel bir su ölçüm tüpü üzerinde işaretlenmiş belirli bir seviyeye kadar su dökülür. Su-buhar odasında su kaynatıldığında buhar üretilir. Sterilizasyon odası, basınç gerekli seviyenin üzerine çıktığında buharın kaçmasına izin veren emniyet valfli bir çıkış musluğuyla donatılmıştır. Sterilizasyon odasında oluşan basıncı belirlemek için manometre kullanılır.

Pirinç. 12. Otoklav diyagramı. M - basınç göstergesi; PC - emniyet valfi; B - su için huni; K 2 - su tahliyesi için musluk; K 3 - buhar tahliyesi için valf

Normal atmosfer basıncı (760 mm Hg) sıfır olarak alınır. Manometre okumaları ile sıcaklık arasında belirli bir ilişki vardır (Tablo 2).

Şu anda çalışma modunun otomatik kontrolüne sahip otoklavlar bulunmaktadır. Her zamanki basınç göstergesine ek olarak, basıncın önceden belirlenmiş bir değerin üzerine çıkmasını önleyen ve böylece otoklavda istenen sıcaklığın sabit kalmasını sağlayan elektrikli kontaklı bir basınç göstergesi ile donatılmıştır.

Basınç altındaki buhar, çeşitli besin ortamlarını (doğal proteinler içerenler hariç), sıvıları (izotonik sodyum klorür çözeltisi, su vb.) sterilize eder; özellikle kauçuk parçaları olan cihazlar.

Besleyici ortamın otoklavlanmasının sıcaklığı ve süresi, besin ortamını hazırlama tarifinde belirtilen bileşimlerine göre belirlenir. Örneğin, basit ortamlar (et-pepton agar, et-pepton suyu) 120 ° C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir. Ancak bu sıcaklıkta, doğal proteinler, karbonhidratlar ve ısıtmayla kolaylıkla değiştirilebilen diğer maddeleri içeren ortamın sterilize edilmesi mümkün değildir. Karbonhidrat içeren ortamlar 100°C'de fraksiyonel olarak veya 112°C'de (0,5 atm) bir otoklavda 10-15 dakika süreyle sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, kauçuk hortumlu, tapalı, bakteri mumlu ve filtreli cihazlar 120°C'de (1 atm) 20 dakika süreyle sterilize edilir.

Dikkat! Enfekte olmuş malzeme de otoklavlarda nötralize edilir. Mikroorganizma kültürlerini içeren kaplar ve test tüpleri, buhar penetrasyonu için kapağında delik bulunan özel metal kova veya tanklara konulur ve otoklavda 126°C'de (1,5 atm) 1 saat süreyle sterilize edilir.Aletler çalıştıktan sonra aynı şekilde sterilize edilir. bakterilerle anlaşmazlıklar yaratıyor.

Yalnızca özel eğitimli kişilerin otoklavla çalışmasına izin verilir ve bu kişilerin, cihazla birlikte verilen talimatlarda belirtilen kurallara kesinlikle ve doğru bir şekilde uyması gerekir.

Otoklavlama tekniği. 1. Çalışmadan önce tüm parçaların servis edilebilirliğini ve muslukların taşlanmasını kontrol edin.

2. Kazanın dışına monte edilen bir huniden su sayacı camının üst işaretine kadar su (kireç oluşumunu önlemek için damıtılmış veya kaynatılmış) dökülür. Huninin altındaki musluk kapalı.

3. Sterilize edilecek malzeme özel bir ağ üzerinde sterilizasyon odasına yerleştirilir. Buharın aralarından serbestçe geçmesi gerektiğinden öğeler çok sıkı yüklenmemelidir, aksi takdirde gerekli sıcaklığa ısınmazlar ve steril olmayabilirler.

4. Daha iyi sızdırmazlık sağlamak için kapaktaki lastik conta tebeşirle ovalanır.

5. Kapak kapatılarak otoklav gövdesine cıvatalanır ve cıvatalar çiftler halinde çapraz olarak vidalanır.

6. Sterilizasyon odasını dış hava ile bağlayan çıkış vanasını sonuna kadar açın ve otoklavı ısıtmaya başlayın. Otoklav genellikle gaz veya elektrik kullanılarak ısıtılır.

Otoklav ısıtıldığında su kaynar, ortaya çıkan buhar, kazanların duvarları arasında ve iç kazanın duvarındaki özel deliklerden yükselir (bkz. Şekil 12), sterilizasyon odasına girer ve açık çıkış vanasından çıkar. İlk olarak buhar, otoklavdaki havayla birlikte dışarı çıkar. Tüm havanın otoklavdan dışarı atılması gerekir, aksi takdirde basınç göstergesinin okuması otoklavdaki sıcaklığa karşılık gelmez.

Sürekli güçlü bir buhar akışının ortaya çıkması, havanın otoklavdan tamamen çıkarıldığını gösterir; Bundan sonra çıkış valfi kapatılır ve otoklav içindeki basınç giderek artmaya başlar.

7. Sterilizasyonun başlangıcı, manometre okumalarının belirtilen değere ulaştığı an olarak kabul edilir. Isıtma, otoklavdaki basıncın belirli bir süre boyunca değişmeyeceği şekilde ayarlanır.

8. Sterilizasyon süresi dolduktan sonra otoklavın ısıtılması durdurulur ve çıkış valfinden buhar dışarı verilir. Manometrenin ibresi sıfıra düştüğünde kapağı açın. Otoklavda kalan buhardan kaynaklanan yanmaları önlemek için kapak kendinize doğru açılmalıdır.

Otoklavdaki sıcaklık seviyesi, yani manometre okumalarının doğruluğu kontrol edilebilir. Bunu yapmak için belirli bir erime noktasına sahip çeşitli maddeler kullanın: antipirin (113° C), resorsinol ve kükürt (119° C), benzoik asit (120° C). Bu maddelerden biri ihmal edilebilir miktarda boya (çoksin veya metilen mavisi) ile karıştırılarak bir cam tüp içerisine dökülür ve tüp ağzı kapatılarak içine yerleştirilir. dikey pozisyon Sterilize edilen malzeme arasında. Sıcaklık yeterli ise madde eriyecek ve ilgili boyanın rengine dönüşecektir.

Sterilizasyonun etkinliğini kontrol etmek için, bilinen spor kültürüne sahip bir test tüpü otoklava yerleştirilir. Otoklavlamadan sonra tüp 24-48 saat boyunca bir termostata aktarılır, büyümenin yokluğu veya varlığı not edilir. Büyüme eksikliği cihazın düzgün çalıştığını gösterir.

Akan buharla sterilizasyon Koch aparatında üretilmiştir. Bu yöntem, sterilize edilen nesnenin 100° C'nin üzerindeki sıcaklıkta değiştiği durumlarda kullanılır. Üre, karbonhidrat, süt, patates, jelatin vb. içeren besin ortamları, akan buharla sterilize edilir.

Koch aparatı (kazan), dış tarafı keçe veya asbestle (ısı transferini azaltmak için) kaplanmış metal bir silindirdir. Silindir, buharın çıkması için bir delik bulunan konik bir kapakla kapatılır. Silindirin içinde suyun döküldüğü seviyeye kadar bir stand bulunmaktadır. Sterilize edilecek malzemenin yerleştirildiği standın üzerine delikli bir kova yerleştirilir. Koch aparatı gaz veya elektrik kullanılarak ısıtılır. Sterilizasyon süresi, kapağın kenarlarından ve buhar çıkışından kuvvetli buhar çıktığı andan itibaren sayılır. 30-60 dakika sterilize edin. Sterilizasyon sonunda ısıtma durdurulur. Malzeme kovasını aparattan çıkarın ve ertesi güne kadar oda sıcaklığında bırakın. Isıtma, 30-60 dakika boyunca 100° C sıcaklıkta arka arkaya 3 gün gerçekleştirilir. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. İlk ısıtma sırasında mikropların bitkisel formları ölür, spor formları ise korunur. Sporlar bir gün içinde çimlenmeyi ve bitkisel formlara dönüşmeyi başarır ve bunlar sterilizasyonun ikinci gününde ölür. Sporlardan bazılarının çimlenmeye vakti olmadığından malzeme 24 saat daha bekletilir ve ardından üçüncü bir sterilizasyon gerçekleştirilir. Koch aparatında akan buharla sterilizasyon gerektirmez özel kontrolÇünkü hazırlanan besin ortamının sterilliği cihazın doğru çalıştığının bir göstergesidir. Ayrıca kapak vidasız ve çıkış valfi açıkken otoklavda akan buharla da sterilize edebilirsiniz.

Kontrol soruları

1. Hangi besin ortamları buharla sterilize edilir?

2. Sterilizatör nedir ve nasıl çalışır?

3. Kaynatılarak sterilizasyon yapılırken neden distile su kullanılmalıdır?

4. Otoklavın yapısını ve çalışma modunu açıklayınız.

5. Otoklavda ne sterilize edilir?

6. Otoklavlama sırasında uygun sterilizasyon için kontrol görevi gören şey nedir?

7. Akan buhar sterilizasyonu nedir?

8. Koch aparatının yapısını açıklayınız.

9. Fraksiyonel sterilizasyonun amacı nedir?

Egzersiz yapmak

Formu doldur.

Kesirli sterilizasyon Koch pıhtılaştırıcısında da gerçekleştirilebilir.

Koch'un pıhtılaştırıcısı, peynir altı suyu ve yumurta kültürü ortamını pıhtılaştırmak için kullanılır ve ortamın sıkıştırılmasıyla eş zamanlı olarak sterilize edilir.

Koch'un pıhtılaştırıcısı dışı kaplanmış düz, çift duvarlı metal bir kutudur ısı yalıtım malzemesi. Dış duvarın üst kısmında bulunan özel bir delikten duvarlar arasındaki boşluğa su dökülür. Delik, içine bir termometrenin yerleştirildiği bir tıpa ile kapatılır. Cihaz iki kapakla kapatılmıştır: cam ve metal. Cam kapak sayesinde pıhtılaşma sürecini gözlemleyebilirsiniz. Ortam içeren test tüpleri, pıhtılaştırıcının tabanına eğimli bir konumda yerleştirilir.

Pıhtılaştırıcı gaz veya elektrik kullanılarak ısıtılır. Ortamlar bir kez 90°C sıcaklıkta 1 saat süreyle veya fraksiyonel olarak - 3 gün art arda 80°C'de 1 saat süreyle sterilize edilir.

Tyndallizasyon* - düşük sıcaklıklarda fraksiyonel sterilizasyon - 60 ° C sıcaklıkta kolayca yok edilen ve denatüre olan maddeler (örneğin, protein sıvıları) için kullanılır. Sterilize edilecek malzeme su banyosunda veya özel cihazlar arka arkaya 5 gün boyunca bir saat boyunca 56-58° C sıcaklıkta termostatlarla.

* (Sterilizasyon yöntemi adını, onu öneren Tyndall'dan almıştır.)

Pastörizasyon- Pasteur tarafından spor olmayan mikrop formlarının yok edilmesi için önerilen 65-70 ° C'de 1 saat sterilizasyon. Süt, şarap, bira, meyve suları ve diğer ürünler pastörize edilir. Süt, laktik asit ve patojen bakterilerin (brusella, mycobacterium tuberculosis, shigella, salmonella, stafilokok vb.) uzaklaştırılması için pastörize edilir. Bira, meyve suları ve şarabın pastörize edilmesi sırasında mikroorganizmalara neden olan mikroorganizmalar Farklı türde Fermantasyon. Pastörize gıdalar en iyi şekilde buzdolabında saklanır.

Kontrol soruları

1. Koch pıhtılaştırıcının amacı ve yapısı nedir?

2. Pıhtılaşma makinesinde sterilizasyon yöntemleri nelerdir?

3. Tyndalizasyon nedir?

4. Pastörizasyon nedir?

Ultraviyole ışınlamayla sterilizasyon

UV ışınlarıyla sterilizasyon kullanılarak gerçekleştirilir. özel kurulumlar- bakteri yok edici lambalar. UV ışınları yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve sadece bitkisel hücrelerin değil sporların da ölümüne neden olabilir. UV ışınlaması hastanelerde, ameliyathanelerde, çocuk kurumlarında vb. yerlerde havayı sterilize etmek için kullanılır. Mikrobiyoloji laboratuvarında, çalışmadan önce bir kutu UV ışınlarıyla işlenir.

Kontrol soruları

1. Ultraviyole ışınlarının özellikleri nelerdir?

2. Ultraviyole radyasyon kullanılarak sterilizasyon hangi durumlarda kullanılır?

Bakteriyel filtreler kullanılarak mekanik sterilizasyon

Filtrasyon sterilizasyonu, sterilize edilen nesnelerin ısıtıldığında değiştiği durumlarda kullanılır. Filtrasyon, çeşitli ince gözenekli malzemelerden yapılmış bakteri filtreleri kullanılarak gerçekleştirilir. Bakterilerin mekanik olarak tutulmasını sağlamak için filtrelerin gözenekleri yeterince küçük olmalıdır (1 mikrona kadar), bu nedenle bazı yazarlar filtrelemeyi şu şekilde adlandırır: mekanik yöntemler sterilizasyon.

Filtrasyon yöntemi, protein, serum ve bazı antibiyotikler içeren besin ortamlarını sterilize etmek ve ayrıca bakterileri virüslerden, fajlardan ve ekzotoksinlerden ayırmak için kullanılır.

Mikrobiyolojik uygulamada Seitz asbest filtreleri, membran filtreler ve Chamberlant ve Berkefeld filtreleri (mumlar) kullanılmaktadır.

Seitz filtreleri asbest ve selüloz karışımından yapılmış disklerdir. Kalınlıkları 3-5 mm, çapları 35-140 mm'dir. Yerli sanayi iki markanın filtrelerini üretiyor: “F” (filtreleme) - asılı parçacıkları tutuyor ancak bakterilerin geçmesine izin veriyor; "SF" (sterilizasyon) - daha küçük gözeneklere sahiptir, bakterileri tutar, ancak virüslerin geçmesine izin verir. Buruşuk asbest plakaların yanı sıra kırık ve çatlaklı plakalar da çalışmaya uygun değildir.

Membran filtreler nitroselülozdan yapılır. 0,1 mm kalınlığında ve 35 mm çapında beyaz disklerdir. Gözenek boyutuna bağlı olarak 1, 2, 3, 4 ve 5 numaralı olarak adlandırılırlar (Tablo 3).

1 No'lu Filtre, sterilizasyon için en uygun olanıdır.Listelenenlere ek olarak, filtrelenen sıvıyı içinde bulunan büyük parçacıklardan arındırmak için tasarlanmış ön filtre adı verilen bir filtre de üretirler.

Chamberlant ve Berkefeld filtreleri (mumlar) bir ucu kapalı içi boş silindirlerdir. Chamberlant mumları kum ve kuvarsla karıştırılmış kaolinden yapılır. Gözenek boyutuna göre standartlaştırılırlar ve L 1, L 2, L 3 ... L 13 olarak adlandırılırlar. Berkefeld filtreleri (mumlar) infüzör toprağından hazırlanır; gözeneklerinin büyüklüğüne göre 3-4, 4-7, 8-12 mikron gözenek çapına karşılık gelen V, N, W olarak adlandırılırlar.

Bakteri filtreleriyle çalışma aşağıdaki gibi gerçekleştirilir. Filtre, filtre alıcısına takılan özel bir tutucuya sabitlenmelidir. Alıcı genellikle bir Bunsen şişesidir. Çoğu durumda paslanmaz çelikten yapılmış tutucular iki parçadan oluşur: alt kısmı olmayan bir silindir şeklinde üst kısım ve bir tüple biten destekleyici kısım olan alt kısım. Seitz filtreleri, pürüzlü yüzeyi yukarı bakacak şekilde metal bir ağ üzerine yerleştirilir ve tutucunun üst ve alt kısmı arasına vidalarla sıkıca sıkıştırılır. Monte edilen filtre, Bunsen şişesinin boynuna yerleştirilen lastik bir tıpa ile sabitlenir. Şişenin vakum pompasına bağlı çıkış borusuna pamuklu çubuk yerleştirilir. Hazırlanan tesisat kağıda sarılarak otoklavda 1 atm basınç altında 20-30 dakika sterilize edilir. Monte edilen cihazın tamamına Seitz filtresi de denir (Şek. 13).

Filtrasyondan hemen önce, Bunsen şişesinin çıkış ucu kauçuk bir tüple bir yağ veya su jeti pompasına bağlanır. Çeşitli parçaların birleşim yerleri, sıkı bir sızdırmazlık sağlamak için parafin ile doldurulur. Filtrelenen sıvı aparatın silindirine dökülür ve pompa çalıştırılarak alıcıda vakum oluşturulur. Ortaya çıkan basınç farkı sonucunda filtrelenen sıvı, filtrenin gözeneklerinden geçerek alıcıya geçer ve mikroplar filtre yüzeyinde kalır.

Kullanmadan önce membran filtreler damıtılmış suda kaynatılarak sterilize edilir. Filtrelerin kıvrılmasını önlemek için öncelikle damıtılmış suya konur, 50-60°C sıcaklığa ısıtılır ve 2-3 kez su değiştirilerek 30 dakika kısık ateşte kaynatılır. Filtre tutucu ve alıcı önceden sterilize edilir ve cihaz aseptik koşullar altında monte edilir. Membran filtrenin metal ağ üzerinde yırtılmasını önlemek için altına steril filtre kağıdı kupaları yerleştirin. Daha sonra pürüzsüz uçlu steril cımbız kullanarak membran filtreyi sterilizatörden alın ve parlak yüzeyi aşağı gelecek şekilde destek ızgarasının üzerine yerleştirin.

Otoklavda sterilize edilen mumlar (Chamberlant), kauçuk bir tüp aracılığıyla alıcıya bağlanır ve filtrelenmiş sıvıyla birlikte bir kaba (genellikle bir silindire) indirilir. Filtrasyon bir vakum pompası kullanılarak gerçekleşir. Steril bir süzüntü alıcıya girer ve bakteriler mumun gözenekleri tarafından tutulur.

Membran ve asbest filtreler tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır. Mumlar kullanımdan sonra musluk suyunda kaynatılır ve ardından kül fırınında kalsine edilir.

Daha sonraki kullanımdan önce mumların bütünlüğü kontrol edilir. Mum su dolu bir kaba indirilir ve içinden hava geçirilir. Mumun yüzeyinde hava kabarcıkları oluşuyorsa mumda çatlaklar oluşmuş ve kullanılamaz durumda demektir.

Kontrol soruları

1. Filtre sterilizasyon yöntemi nedir? Bu yöntem kullanılarak ne sterilize edilir?

2. Hangi bakteri filtrelerini biliyorsunuz? Filtreleme cihazı nasıl kurulur, hangi koşullara uyulmalıdır?

Kimyasal yöntemler

Bu tip sterilizasyon sınırlı bir ölçüde kullanılır ve esas olarak kültür ortamının ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemeye yarar.

Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamın bu koruyucu maddelerden arındırılması gerekiyorsa, 56 ° C'lik bir su banyosunda ısıtılır (koruyucular buharlaşır).

Aşıları ve serumları korumak için mertiolat, borik asit, formaldehit vb.

Biyolojik sterilizasyon

Biyolojik sterilizasyon antibiyotik kullanımına dayanmaktadır. Bu yöntem virüs yetiştirmek için kullanılır.

Kontrol soruları

1. Kimyasal sterilizasyon nedir ve ne zaman kullanılır?

2. Biyolojik sterilizasyon nedir?

Ana sterilizasyon yöntemleri tabloda sunulmaktadır. 4.

1 (Sterilizasyon tamamlanmadı: Sporlar sterilize edilmiş materyalde kaldı.)

2 (Sterilizasyon tamamlanmadı: Virüsler sterilize edilmiş malzemede kalıyor.)

Dezenfeksiyon

Mikrobiyolojik uygulamada çeşitli dezenfektanlar kullanılır: %3-5 fenol çözeltileri, %5-10 Lisol çözeltileri, %1-5 kloramin çözeltileri, %3-6 hidrojen peroksit çözeltileri, %1-5 formaldehit çözeltileri, seyreltilmiş cıva klorür çözeltileri. 1: 1000 (%0,1), 70° alkol, vb.

Harcanan patolojik materyal (irin, dışkı, idrar, balgam, kan, beyin omurilik sıvısı) kanalizasyona boşaltılmadan önce dezenfekte edilir. Dezenfeksiyon kuru çamaşır suyu veya %3-5 kloramin solüsyonu ile gerçekleştirilir.

Patolojik materyal veya mikroorganizma kültürleriyle kirlenmiş pipetler (dereceli ve Pasteur), cam spatulalar, slaytlar ve lamelleri bir gün boyunca% 3 fenol veya hidrojen peroksit çözeltisi içeren cam kavanozlara batırılır.

Enfeksiyöz materyalle çalışmayı bitirdikten sonra laboratuvar teknisyeni materyali dezenfektan solüsyonuyla tedavi etmelidir. iş yeri ve eller. Çalışma masasının yüzeyi %3 fenol solüsyonuyla nemlendirilmiş bir parça pamukla silinir. Eller %1’lik kloramin solüsyonu ile dezenfekte edilir. Bunu yapmak için bir pamuk topunu veya gazlı bezi dezenfektan solüsyonuyla nemlendirin ve sol elinizi, ardından sağ elinizi silin ve ardından ellerinizi ılık su ve sabunla yıkayın.

Dezenfektanın seçimi, konsantrasyonu ve maruz kalma (maruz kalma) süresi, mikrobun biyolojik özelliklerine ve dezenfektanın patojenik mikroorganizmalarla temas edeceği ortama bağlıdır. Örneğin, cıva klorür, fenol ve alkoller, protein substratlarının (irin, kan, balgam) dezenfekte edilmesi için uygun değildir, çünkü bunların etkisi altında protein pıhtılaşması meydana gelir ve pıhtılaşmış protein, mikroorganizmaları dezenfektanların etkilerinden korur.

Mikroorganizmaların spor formlarıyla enfekte olmuş materyali dezenfekte ederken,% 5'lik bir kloramin çözeltisi,% 1-2,5'lik aktif kloramin çözeltileri,% 5-10'luk formalin çözeltileri ve diğer maddeler kullanılır.

Gün boyu iş sırasında yapılan dezenfeksiyona mevcut, iş sonunda ise final denir.

Dezenfektanlar ve onlardan çalışma solüsyonları hazırlamak için talimatlar. Kireç klorür, keskin bir klor kokusuna sahip beyaz, topaklı bir tozdur; suda tamamen çözünmez. Bakterisidal etki, miktarı% 28 ila 36 arasında değişen aktif klor içeriğine bağlıdır. %25'ten az aktif klor içeren klor, dezenfeksiyon için uygun değildir.

Uygun şekilde saklanmadığı takdirde çamaşır suyu ayrışır ve aktif klorunun bir kısmını kaybeder. Ayrışma ısı, nem ve güneş ışığı tarafından desteklenir, bu nedenle çamaşır suyu kuru ve karanlık bir yerde, ağzı sıkıca kapatılmış bir kapta saklanmalıdır.

Kuru çamaşır suyu insan ve hayvan salgılarını dezenfekte etmek için kullanılır (1 litre dışkıya 200 gr, 1 litre idrara 10 gr oranında).

Orijinal %10 berraklaştırılmış ağartıcı çözeltisinin hazırlanması. 1 kg kuru çamaşır suyu alın, emaye bir kovaya koyun ve öğütün. Daha sonra 10 litre hacme kadar soğuk su dökün, iyice karıştırın, üzerini örtün ve serin bir yerde bir gün bekletin. Bundan sonra, elde edilen% 10'luk berraklaştırılmış çözelti dikkatlice boşaltılır ve birkaç kat gazlı bezden süzülür veya kalın bir bezden süzülür. Ahşap tıpa ile kapatılmış koyu renkli cam şişelerde, serin bir yerde en fazla 10 gün saklayın. Gerekli konsantrasyondaki çalışma solüsyonları kullanımdan hemen önce stok solüsyondan hazırlanır. %0,2-10 berraklaştırılmış ağartıcı çözeltilerinin hazırlanması için gerekli bazik çözelti miktarı tabloda verilmiştir. 5.

Berraklaştırılmış ağartıcı çözeltilerinin %0,2 ila %10 arasındaki konsantrasyonu, dezenfekte edilen nesnenin doğasına ve patojenin direncine bağlı olarak seçilir.

Kloramin - kristal madde Beyaz veya sarımsı renkli olup, %24-28 oranında aktif klor içerir. Oda sıcaklığında suda iyi çözünür, bu nedenle solüsyonlar dezenfeksiyondan hemen önce hazırlanır. %0,2-10 kloramin solüsyonları kullanın. Çözeltinin yüzde konsantrasyonu ile 1 ve 10 litre başına gram cinsinden kloramin miktarı arasındaki ilişki tabloda verilmiştir. 6.

Kloramini cam veya emaye yemekleri. Kloramin çözeltilerini, tıpalı koyu renkli cam kaplarda sakladığınızda, etkinlikleri 15 güne kadar devam eder.

Aktifleştirilmiş kloramin. Kloraminin dezenfekte edici özellikleri, ona 1:1 veya 1:2 oranında bir aktivatör eklenerek arttırılır. Amonyum bileşikleri aktivatör olarak kullanılır - amonyum klorür, sülfat, amonyum nitrat. Aktifleştirilmiş kloramin %0,5, 1 ve 2,5'lik konsantrasyonlarda kullanılır. Kullanımdan hemen önce hazırlanırlar. Kloramin ve amonyum tuzu ayrı ayrı tartılır. İlk önce kloramin suda eritilir ve ardından bir aktivatör eklenir.

Aktifleştirilmiş kloramin çözeltilerinin geleneksel olanlara göre avantajı, bir aktivatörün eklenmesinin aktif klorin salınımını hızlandırmasıdır. Bu nedenle ilacın sadece mikroorganizmaların bitkisel formları üzerinde değil aynı zamanda sporları üzerinde de zararlı etkisi vardır. Aktifleştirilmiş kloramin daha düşük konsantrasyonlarda ve daha az maruz kalma ile kullanılır.

Fenol (karbolik asit), keskin, karakteristik bir kokuya sahip, renksiz, iğne şeklinde bir kristaldir. Işığa, havaya ve neme maruz kaldığında kristaller koyu kırmızı bir renk alır. Depolamak kapalı bankalar koyu camdan yapılmış ve ışıktan korunan bir yerde.

Fenol su, alkol, eter ve yağlı yağlarda çözünür. Büyük higroskopisiteye sahip olduğundan ortamdaki nemi emer ve sıvı hale gelir. Sıvı karbolik asit %90 kristal fenol ve %10 su içerir.

Tabloda verilen şemaya göre kristal fenol ve sıvı karbolik asitten hazırlanan %3-5 sulu karbolik asit çözeltileri kullanın. 7. Sıcak suda (40-50°C) çözündüğünde fenolün aktivitesi artar.

Dikkat! Kristal fenol veya sıvı karbolik asit cilde temas ederse tahrişe ve yüksek konsantrasyonlarda ciddi yanıklara neden olabilir. Bu nedenle karbolik asitin büyük bir dikkatle kullanılması gerekir. Solüsyon hazırlarken lastik eldiven giymeli veya aşırı durumlarda ellerinizi Vazelin ile yağlamalısınız.

Karbolik asit cildinize temas ederse derhal ılık su ve sabunla veya 40° etil alkolle yıkayın.

Not. Fenolün dezenfektan çözeltilerini hazırlamak için sıvı karbolik asit kullanmak daha uygun ve daha güvenlidir.

Kontrol soruları

1. Mikrobiyolojik uygulamada hangi dezenfektanlar kullanılıyor?

2. Tanımlayın dış görünüş ve çamaşır suyu, kloramin, fenolün temel özellikleri.

3. Mikroorganizmaların spor formlarıyla enfekte olmuş malzemeleri dezenfekte etmek için hangi dezenfektan çözeltileri kullanılıyor?

Egzersiz yapmak

2 litre %5'lik berraklaştırılmış ağartıcı çalışma çözeltisi hazırlayın; 500 ml %3'lük kloramin çözeltisi, 300 ml %1'lik aktif kloramin çözeltisi.

Dikkat! Çözüm hazırlamaya başlamadan önce hesaplamalar yapın.

Aerobları izole etmek için bakteriyolojik yöntemin 1. aşamasının gerçekleştirilmesi:

İncelenen materyalden sabit bir preparat hazırlıyoruz, Gram yöntemini kullanarak lekeliyoruz, mikroskopi yapıyoruz ve tespit edilen mikroorganizmaları morfotinktoryal özelliklere göre belirliyoruz.

İncelenen materyali, "platformlu vuruş" yöntemini kullanarak yoğun besin ortamına sahip yarım tabağa ekiyoruz (materyalini sınırlı bir alanda bir Petri kabındaki yoğun besin ortamının yüzeyine uyguluyoruz ve ardından dağıtıyoruz) sık paralel şeritler halinde ekim)

Fincanlara ekim tarihini belirterek imza atalım ve 37° sıcaklıktaki termostata ters çevirerek 18-24 saat bekletelim.

Buhar sterilizatörü (otoklav) - basınç altında buhar sterilizasyonu.

Tıbbi ve mikrobiyolojik uygulamalarda en güvenilir ve evrensel sterilizasyon yöntemi, basınç altında buhar sterilizasyonudur. Sterilize edilecek nesnelerin ısıtıldığı bir otoklavda üretilir. doymuş buhar atmosferik basıncın üzerinde basınç altında. Manometre okumaları ile doymuş buhar sıcaklığı arasında aşağıdaki ilişki vardır:

Sıfır basınç normal atmosferik basıncı (760 mm Hg) düşünün.

Sterilizasyon yalnızca otoklav tam çalışır durumda olduğunda ve özel eğitimli personel tarafından uygun şekilde çalıştırıldığında elde edilir.Bu nedenle, fiziksel (maksimum termometre vb.), biyolojik (sporlarla biyotest) gerçekleştirilen sterilizasyon rejiminin sürekli izlenmesi gereklidir. mikroorganizmaların test kültürleri) ve kimyasal (kimyasal testler, tip göstergeleri IP) yolları

Otoklavların sterilizasyon rejiminin kontrolü, otoklav her yüklendiğinde kimyasal olarak gerçekleştirilir.Kimyasal test - belirli bir erime noktasına sahip kimyasal madde içeren cam tüp, antipirin, resorsinol - 110±2°, benzoik asit - 120±2°, benzamid - 126+1°, üre, nikotinamid, D (+)-mannoz - 132+2°. Kimyasal testlere, eridiğinde maddeyi eşit şekilde renklendiren bir anilin boyası (fuksin, gentsnan menekşe vb.) eklenir. Şu anda, üzerine bir gösterge karışımı tabakası uygulanmış bir kağıt şeridi olan ve yalnızca sıcaklığın değil aynı zamanda sterilizasyon süresinin de operasyonel görsel izlenmesi için tasarlanan IS tipi göstergeler (Vinar, Rusya) daha sık kullanılmaktadır. (IS-120, IS-132) Sterilizasyon rejimi, Bacillus stearotermophilus BKM B-718 test kültürünün sporları ile bir biyotest kullanılarak üç ayda bir izlenir.

Pastör fırını- kuru ısı sterilizasyonu.

Silikon kauçuğa dayalı cam, metal ve kauçuk ürünler Pasteur fırınında sterilize edilir. Sterilizasyon modu: 160°C - 150 dakika; 180°C - 60 dakika Her döngü sırasında sterilizasyon modunun kontrolü, IS-160, IS-180 sterilizasyon göstergeleri kullanılarak gerçekleştirilir; üç ayda bir - Bacillus licheniformis test kültürünün sporları ile bir biyotest kullanılarak

Sterilizasyon Tablo 1.

Dezenfeksiyon Tablo 2.

Sterilizasyon- kısırlık; Her türlü materyaldeki bitkisel ve spor formdaki patojenik ve patojen olmayan mikroorganizmaların yok edilmesi.

Sterilizasyon için bulaşıkların hazırlanması. Laboratuvar cam malzemeleri temiz bir şekilde yıkanmalı ve sterilize edilmelidir. Yıkamak için sabun solüsyonları veya kimyasal deterjanlar kullanın. Yeni tabaklar, camın daha sonra sızmasını önlemek için% 1-2'lik bir hidroklorik asit çözeltisinde önceden kaynatılır. Akan suda yıkanan bulaşıklar damıtılmış su ile durulanır ve kurutulur.

Bakteriyolojik tüpler. Konik, mat şişeler, sıkıca bükülmüş pamuk yünü rulolarından oluşan, bir gazlı bez tabakasıyla kaplanmış pamuklu gazlı bez tıpalarla kapatılır. Bakteriyolojik test tüpleri için dış kapak şeklindeki metal tıpalar da geliştirilmiştir. Pamuk tıkaçlarının yüksek sıcaklıklarda sterilize edilmesinin, pamuk yününden Brucella gibi bazı hassas bakterilerin büyümesini engelleyen maddelerin salınmasına yol açtığı dikkate alınmalıdır.

Pipetleri takarken üst uca pamuklu çubuk yerleştirin. Pasteur pipetlerinin kapalı bir kılcal damarı olmalıdır. Her ölçüm pipeti, ağızlıktan başlayarak tüm uzunluğu boyunca sarmal bir şekilde 4-5 cm genişliğinde uzun bir kağıt şeridine sarılır. Pasteur pipetleri, her biri 10-20 adet, test tüpleri - her biri 15-20 adet olmak üzere kağıda sarılır. Her türlü pipeti sterilizasyondan önce ve sonra özel metal kutularda saklamak daha iyidir. Şişelerin üzerindeki tıpalar ayrıca kağıt kapaklarla kapatılmıştır.

Sterilizasyondan önce temiz, birleştirilmiş Petri kapları, her biri 3 ila 4 parça olacak şekilde kağıda sarılır. Sterilizasyondan sonra kağıt, steril cam eşyaları mikrofloranın kirlenmesinden korur.

Sterilizasyondan önce bulaşıklar kurutma kabinine hava sirkülasyonunu sağlayacak kadar sıkı olmayacak şekilde yerleştirilir ve sıcaklığın 180°C'yi geçmemesine dikkat edilir, çünkü daha yüksek sıcaklıkta kağıt ve pamuk yünü kömürleşir. Sterilizasyon tamamlandıktan sonra o zamana kadar kurutma kabini açılmaz. Keskin bir sıcaklık değişimi camın tahrip olmasına yol açabileceğinden, içindeki sıcaklık 70-80 ° C'ye düşene kadar.

Bulaşıklar, içindeki besin ortamlarının en az 1 atm basınç altında otoklavlanarak sterilize edilmesi amaçlanıyorsa, önceden sterilize edilmezler. Medyayı akan buharla veya 0,5 atm'den fazla olmayan bir basınç altında bir otoklavda sterilize ederken. Steril kaplar kullanılmalıdır.

Kuru ısıtılmış hava ile sterilizasyon. Yöntem temiz cam eşyaları sterilize etmek için kullanılır. Bu amaçla, çift cidarlı özel bir kurutma kabini olan bir Pasteur fırını kullanılır. Dışı ısıya dayanıklı malzeme ile kaplanmıştır. Üstte bir termometre var. Isıya dayanıklı astar ile iç kısım arasında metal gövde Altta otomatik bir elektrikli ısıtma elemanı yerleştirilmiştir. Kurutma kabini açıldığında içindeki hava ısınır. Ayarlanan sıcaklığa ulaşıldığında sterilizasyonun başlangıç ​​zamanı not edilir. Sterilizasyon modu: 155-160 ° C sıcaklıkta - 2 saat maruz kalma, 165-170 ° C - 1-1,5 saat, 180 ° C - 1 saat Sterilizasyon süresinden sonra ısıtma durdurulur.

Otoklavlama. Bu, özel bir aparatta (otoklav) yüksek sıcaklıkla birlikte basınç altında buhar sterilizasyonudur. Doymuş buhar daha soğuk bir cisimle karşılaştığında buhar yoğunlaşarak suya dönüşür ve büyük miktarda ısı açığa çıkar. Ek olarak, buharın hacmi azaltılarak, sterilize edilen malzemenin iç kısımlarına nüfuz etmesi kolaylaştırılır. Bir ön koşul, gerçekten doymuş buharın sağlanmasıdır, böylece soğuk bir nesneyle teması anında yoğuşmaya ve ısınmaya yol açar. Endüstri dikey ve yatay otoklavlar üretmektedir.

Dikey bir otoklav, bir kapakla kapatılmış, çift duvarlı silindirik bir metal kazandır. Duvarların arasına hunili özel bir musluktan belirli bir seviyeye kadar su dökülür. Kazanın iç duvarı, üst kısımda delikler ve alt kısımda, su ısıtıldığında buharın kazandan havayı çıkardığı bir musluk ile donatılmıştır. Otoklavın üstüne metal koruyucu bir çerçeve yerleştirilir ve bununla otoklavın kendisi arasında boş alan bulunmalıdır. Otoklav elektrik şebekesine bağlanarak ısıtılır.

Otoklav sterilize edilecek malzeme ile doldurulur, kapak ve içinden su dökülen musluk kapatılır ve alt musluk geçici olarak açık bırakılır. Otoklavın duvarları arasında ısıtılan su kaynar, ortaya çıkan buhar yükselir ve iç duvarın üst deliklerinden kazana geçerek havayı alt açık musluktan dışarı iter. Tüm havanın yeri değiştirildiğinde ve buhar eşit bir akışla çıkmaya başladığında alt vana kapatılır. Sonuç olarak otoklav içindeki buhar basıncı artar. Sterilizasyonun başlangıcı, basıncın belirli bir değere ulaştığı an olarak kabul edilir (manometreye göre). Sterilizasyon boyunca ısı ayarlanır ve buhar basıncı aynı seviyede tutulur. Otoklav içindeki basıncın aşırı artması durumunda fazla buharın otomatik olarak dışarı çıkmasını sağlayan bir emniyet valfi bulunmaktadır.

Buhar basıncı arttıkça otoklavdaki sıcaklık da buna bağlı olarak artar.

Manometre, ortamın atmosferik basıncını (760 mm Hg) hesaba katmadan buhar basıncını gösterir. Sterilizasyon süresi dolduktan sonra otoklav kapatılır. Soğuduktan sonra basınç göstergesi sıfır olduğunda buharı boşaltmak için vanayı açın.

Yatay otoklav, tasarım açısından dikey otoklavdan farklıdır ancak çalışma prensibi aynıdır.

virolojik kısırlaştırma patolojik hayvan

Patolojik materyalin laboratuvara gönderilmesinde doldurulması gereken form örnekleri

Kuru ısı sterilizasyonu kuru ısı fırınlarında (Pastör fırını) gerçekleştirilir. Kuru ısı sterilize eder laboratuvar cam eşyaları. Malzemenin eşit şekilde ısınması için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapağını sıkıca kapatın, elektrikli ısıtma cihazını açın ve sıcaklığı 160-165 0 C'ye getirip 1 saat sterilize edin. Sterilizasyon sonunda ısıtmayı kapatın ancak fırın soğuyana kadar dolap kapısını açmayın (aksi takdirde soğuk hava tabaklarda çatlaklara neden olur). Sterilizasyon modu: 160°C - 60 dakika, 180°C - 15 dakika, 200°C - 5 dakika. Sıvılar, kültür ortamları, kauçuk ve sentetik malzemeler kuru ısıyla sterilize edilemez.

Basınçlı buhar sterilizasyonu pansumanlar, cerrahi çamaşırlar, cerrahi aletler, kültür ortamları, laboratuvar cam malzemeleri, enfekte materyal ve enjeksiyon solüsyonları tabi tutulur. Malzeme kaplara (kutulara) yerleştirilir. Sterilizasyon sonrasında nemi emmesi için bix'in alt kısmına kumaş pedler yerleştirilir. Malzemenin sterilitesi 3 gün boyunca korunur. Kaplardaki ve test tüplerindeki enfekte materyal, kapaklı metal tanklarda sterilize edilir.

Basınç altında buhar sterilizasyonu otoklavda gerçekleştirilir. Tek bir tedaviyle bakterilerin hem bitkisel hem de spor formları ölür. Basınç altındaki buhar, doğal proteinler, sıvılar ve kauçuk parçalı cihazlar içeren ortamlar hariç, besin ortamlarını sterilize eder. Basit ortamlar (MPA, MPB) 120°C'de (1 atm) 20 dakika süreyle sterilize edilir. Doğal proteinler ve karbonhidratlar içeren ortamlar bu sıcaklıkta sterilize edilemez çünkü bunlar ısıtılarak kolayca değiştirilebilen maddelerdir. Karbonhidrat içeren ortamlar 100 0 C'de fraksiyonel olarak veya 112 0 C'de (5 atm.) bir otoklavda 10-15 dakika süreyle sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, kauçuk hortumlu, tıkaçlı, bakteri mumlu ve filtreli cihazlar 120 0 C'de (1 atm.) 20 dakika süreyle sterilize edilir.

Enfekte materyal (test tüpleri, kaplar) özel metal kovalara veya buhar nüfuzuna uygun delikli tanklara konulur ve 126 0 C'de (1,5 atm.) 1 saat sterilize edilir. Aletler spor bakterileri ile çalıştıktan sonra da sterilize edilir.

2 sterilizasyon modu vardır:

1. Buharın antibakteriyel etkisi bitkisel formlara karşı ortaya çıktığında, bir otoklavda veya bir Koch aparatında kapağın vidası açılmış ve çıkış valfi açıkken akan buhar. Vitamin ve karbonhidrat, üre, süt, patates ve jelatin içeren ortamlar bu şekilde sterilize edilir. Tam desterilizasyon için, art arda 3 gün boyunca 20-30 dakika boyunca fraksiyonel sterilizasyon (100 0 C'de) kullanılır. Aynı zamanda sporları da öldürür.
2. Basınçlı buhar sterilizasyonu en etkili desterilizasyon yöntemidir. Pansuman malzemeleri ve çarşaflar 1 atm'de sterilize edilir. 15-20 dakika, enfekte olmuş materyal 1,5-2 atm'de 20-25 dakika.

Sterilizasyon

Sterilizasyon sterilizasyondur, yani çevresel nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen kurtarılması.

Sterilizasyon çeşitli şekillerde gerçekleştirilir:

1) fiziksel (yüksek sıcaklığa maruz kalma, UV ışınları, bakteri filtrelerinin kullanımı);

2) kimyasal (çeşitli dezenfektanların, antiseptiklerin kullanımı);

3) biyolojik (antibiyotik kullanımı).

Laboratuvar uygulamalarında genellikle fiziksel sterilizasyon yöntemleri kullanılır.

Bir veya başka bir sterilizasyon yönteminin kullanılması olasılığı ve uygulanabilirliği, sterilize edilecek malzemenin özelliklerine, fiziksel ve kimyasal özelliklerine göre belirlenir.

Fiziksel yöntemler

Brülör alevinde veya alevde kalsinasyon, hem bitkisel hücreler hem de mikrobiyal sporlar öldüğü için nesnenin tamamen sterilize edildiği bir sterilizasyon yöntemidir. Tipik olarak bakteriyolojik döngüler, spatulalar, pipetler, slaytlar ve kapak camları ve küçük aletler kalsine edilir. Makas ve neşterler ısıtılarak sterilize edilmemelidir, çünkü ateşin etkisi altında kesme yüzeyi donuklaşır.

Kuru ısı sterilizasyonu

Kuru ısı veya sıcak hava ile sterilizasyon Pasteur fırınlarında (kurutma fırınları) gerçekleştirilir. Pasteur fırını, ısıya dayanıklı malzemelerden (metal ve asbest) yapılmış çift duvarlı bir dolaptır. Kabini gaz brülörleri veya elektrikli ısıtma cihazları kullanarak ısıtın. Elektrikle ısıtılan dolaplar gerekli sıcaklığı sağlamak için regülatörlerle donatılmıştır. Sıcaklığı kontrol etmek için dolabın üst duvarındaki deliğe yerleştirilmiş bir termometre bulunmaktadır.

Sıvılar (besleyici ortam, izotonik sodyum klorür çözeltisi vb.), kauçuk ve sentetik malzemelerden yapılmış ürünler, sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için kuru ısıyla sterilize edilemez.

Kaynatarak sterilizasyon

Kaynatma, sterilize edilmiş malzemede spor olmaması koşuluyla sterilliği garanti eden bir sterilizasyon yöntemidir. Şırıngaların, aletlerin, cam ve metal kapların, kauçuk tüplerin vb. işlenmesi için kullanılır. Basınç altında buhar sterilizasyonu bir otoklavda gerçekleştirilir. Bu sterilizasyon yöntemi, sterilize edilen malzemelerin atmosferik basıncın üzerindeki doymuş su buharına maruz bırakılmasına dayanmaktadır. Bu tür bir sterilizasyon sonucunda mikroorganizmaların hem vejetatif hem de spor formları tek bir işlemle ölür. Otoklav (Şekil 12), dışarıdan metal bir mahfaza ile kaplanmış, bir kapakla hava geçirmez şekilde kapatılmış ve kazana menteşeli cıvatalarla sıkıca vidalanmış devasa bir kazandır.

Besleyici ortamın otoklavlanmasının sıcaklığı ve süresi, besin ortamını hazırlama tarifinde belirtilen bileşimlerine göre belirlenir. Örneğin, basit ortamlar (et-pepton agar, et-pepton suyu) 120 ° C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir. Ancak bu sıcaklıkta, doğal proteinler, karbonhidratlar ve ısıtmayla kolaylıkla değiştirilebilen diğer maddeleri içeren ortamın sterilize edilmesi mümkün değildir. Karbonhidrat içeren ortamlar 100°C'de fraksiyonel olarak veya 112°C'de (0,5 atm) bir otoklavda 10-15 dakika süreyle sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, kauçuk hortumlu, tapalı, bakteri mumlu ve filtreli cihazlar 120°C'de (1 atm) 20 dakika süreyle sterilize edilir.

Akan buharla sterilizasyon bir Koch aparatında gerçekleştirilir. Bu yöntem, sterilize edilen nesnenin 100° C'nin üzerindeki sıcaklıkta değiştiği durumlarda kullanılır. Üre, karbonhidrat, süt, patates, jelatin vb. içeren besin ortamları, akan buharla sterilize edilir.

Koch aparatı (kazan), dış tarafı keçe veya asbestle (ısı transferini azaltmak için) kaplanmış metal bir silindirdir. Silindir, buharın çıkması için bir delik bulunan konik bir kapakla kapatılır. Silindirin içinde suyun döküldüğü seviyeye kadar bir stand bulunmaktadır. Sterilize edilecek malzemenin yerleştirildiği standın üzerine delikli bir kova yerleştirilir. Koch aparatı gaz veya elektrik kullanılarak ısıtılır. Sterilizasyon süresi, kapağın kenarlarından ve buhar çıkışından kuvvetli buhar çıktığı andan itibaren sayılır. 30-60 dakika sterilize edin. Sterilizasyon sonunda ısıtma durdurulur. Malzeme kovasını aparattan çıkarın ve ertesi güne kadar oda sıcaklığında bırakın. Isıtma, 30-60 dakika boyunca 100° C sıcaklıkta arka arkaya 3 gün gerçekleştirilir. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. İlk ısıtma sırasında mikropların bitkisel formları ölür, spor formları ise korunur. Sporlar bir gün içinde çimlenmeyi ve bitkisel formlara dönüşmeyi başarır ve bunlar sterilizasyonun ikinci gününde ölür. Sporlardan bazılarının çimlenmeye vakti olmadığından malzeme 24 saat daha bekletilir ve ardından üçüncü bir sterilizasyon gerçekleştirilir. Koch aparatında akan buharla sterilizasyon, hazırlanan kültür ortamının sterilitesi cihazın doğru çalıştığının bir göstergesi olduğundan özel kontrol gerektirmez. Ayrıca kapak vidasız ve çıkış valfi açıkken otoklavda akan buharla da sterilize edebilirsiniz.

Ultraviyole ışınlamayla sterilizasyon

UV ışınlarıyla sterilizasyon, özel kurulumlar - bakteri yok edici lambalar kullanılarak gerçekleştirilir. UV ışınları yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve sadece bitkisel hücrelerin değil sporların da ölümüne neden olabilir. UV ışınlaması hastanelerde, ameliyathanelerde, çocuk kurumlarında vb. yerlerde havayı sterilize etmek için kullanılır. Mikrobiyoloji laboratuvarında, çalışmadan önce bir kutu UV ışınlarıyla işlenir.

Kimyasal yöntemler

Bu tip sterilizasyon sınırlı bir ölçüde kullanılır ve esas olarak kültür ortamının ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemeye yarar.

Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamın bu koruyucu maddelerden arındırılması gerekiyorsa, 56 ° C'lik bir su banyosunda ısıtılır (koruyucular buharlaşır).

Aşıları ve serumları korumak için mertiolat, borik asit, formaldehit vb.

Biyolojik sterilizasyon

Biyolojik sterilizasyon antibiyotik kullanımına dayanmaktadır. Bu yöntem virüs yetiştirmek için kullanılır.

B. Lyon mezbahalarında sığır peynir altı suyu üretimi için ayrıntılı teknoloji

Halihazırda 1.000 hayvandan kan alındı, serum şişelenerek 20.000'e yakın çocuğa ücretsiz olarak dağıtıldı.

Böylece bir mezbahada aseptik kurallara ve hijyen kurallarına uygun olarak peynir altı suyunun endüstriyel üretiminin mümkün olduğu gösterilmiştir.

Seroterapi işletmesi ek garanti sağlamaz - donör hayvanına otopsi yapma hakkı yoktur.

Üretimimizde kullanılan teknoloji, aseptik açıdan klasik yönteme göre daha az katı görünebilir. Ancak serumun tamamı kanın alındığı gün üretildiği için hız açısından büyük bir avantajı vardır.

Eğer mevcut koşullar bizi serumu mezbahada üretmeye yöneltmişse, bunun geçici bir önlem olduğu açıktır, çünkü hematojen ve tıbbi serumlar ancak uzmanlaşmış bir enstitüde üretilebilir.

Hayvan seçimi. Lyon'da mezbahanın baş veterineri Dr. Guier ve veteriner müfettişi Dr. Fontenay, şehrimize et sağlamak amacıyla bağışçıları hayvanlar arasından kendileri seçiyor. Seçilen hayvan daha fazla kontrolü kolaylaştırmak için sağ omzuna markalanır.

Kesimden sonra hayvanların organları titizlikle kontrol edilir. Tüberkülozun tespitinde en güvenilir yöntemin otopsi olduğu bilinmektedir.

Daha sonraki operasyonlarda hastalıklı hayvanın serumunun hiç tüketilmediği görülecektir.

Hayvanlardan kan alınması. Kan alma odasında donör boğa otomatik bir boyunduruk tarafından güvenli bir şekilde tutulur.

Veteriner hekim, hayvanın boynu seviyesinde cildi iyotla dezenfekte eder ve şah damarı bölgesinde neşterle bir kesi yapar. Venöz ponksiyon, uzun süre kaynatılarak sterilize edilmiş bir trokar ile gerçekleştirilir. Kan göründüğünde, trokarın doğrudan ve aseptik olarak defibrinatöre bağlanması için otoklavlanmış bir lastik hortum trokara bağlanır.

Defibrinatörün sterilizasyonuna yönelik defibrinasyon teknolojisi ve yöntemi aşağıda açıklanmaktadır.

Her hayvandan 8-10 litre kan alınır ve bu kan aparatın altında bulunan terazilerde tartılır.

Sterilizasyon yöntemleri

Sıhhi kontrol işlemini kolaylaştırmak için her defibrinatörde donör hayvanın verilerinin yer aldığı bir etiket bulunur.

Kan örneklemesinin, önceden sterilize edilmiş trokar, lastik hortum ve defibrinatör gibi tüm bileşenlerin kapalı devresi sayesinde aseptik olarak gerçekleştirildiğine dikkat edilmelidir.

Toplanan kan, venöz ponksiyon anından seruma dönüştürülüp buzdolaplarında saklanıncaya kadar kan alma tarihini gösteren bir etiketle birlikte bulunur.

Kan defibrilasyonu. Çoğu seroterapi kuruluşunda cam kaplara dökülen kan, yükün basıncı altında serumu ayırır. Bu koşullar altında ilk olarak büyük bir dokudan kan alınır. sığırlar, az miktarda peynir altı suyu içerir (yaklaşık %10).

Bu nedenle Lyon'daki seroterapi merkezi kullanıyor özel teknoloji hem peynir altı suyunun %50'sini hem de daha kısa sürede verir.

Dr. Merrier, bu yöntemi kısmen Rotterdam'daki Kraliyet Enstitüsünde ve Milano'daki Seroterapötik Enstitüsünde elde ettiği bulgulardan sonra geliştirmeyi başardı.

Bu enstitülerden kan alındıktan sonra yayık görünümündeki steril makinelerde defibrinasyonu yapılıyor.

5 dakika içerisinde kan havadan korunan bir kapta toplanır. Defibrasyon süresine kesinlikle uymak gerekir: yetersizse pıhtılaşma meydana gelebilir ve çok fazla ise hemoliz meydana gelebilir (kırmızı kan hücrelerinin yırtılması nedeniyle). Defibrinasyonun tam olarak 15 dakikasını işaretlemenize olanak tanıyan bir laboratuvar saati kullanmak gerekir.

Şek. 4, Merkezin ambleminde kayıtlı olan kan alım sayısının 1000'e ulaştığını gösteriyor.

Santrifüjleme.

Defibrasyondan hemen sonra cihazlar kan alma odasından birkaç metre uzakta bulunan laboratuvara nakledilir. Hasta olduğu ortaya çıkan hayvanın serumunun çıkarılabilmesi için her bir defibrinatörün içeriği ayrı ayrı işlenir.

Defibrinasyon sonrası pıhtılaşmayan kan, Alfa Laval separatöründen (peynir altı suyu üretimi için uyarladığımız bir süt separatörü) geçirilir.

Santrifüj kuvvetinin etkisi altında kan eşit parçalara bölünür: kırmızı kısım kırmızı toplar içerir ve şeffaf kısım serumu oluşturur (fibrin, defibrinatör bıçaklarında kalır).

Bir hayvandan 8-10 litre kan veya yaklaşık 4-5 litre serum elde edilir ve 180°C'de sterilize edilmiş Pyrex şişeye dökülür.

Şişenin üzerine defibrinatör etiketi yapıştırılır ve hijyen kontrolünün sağlanması için aynı numara altında kart doldurulur.

Serumun şeffaflığını ve tadını bozmadan yeterince aktif olacak şekilde tasarlanmış özel bir antiseptik seruma eklenir. 1 litre serum için ayrıca 1:1000 formaldehit ve 1:5000 syunuxol içeren 100 ml solüsyon ekleyin.

(Hazırlıkların arasında santrifüj bir antiseptik ile iyice dezenfekte edilir.)

Prensip olarak, kanın kırmızı kısmı kan sosisi yapmak için kasaplara iade edilmelidir, ancak çoğu zaman kullanılmadan kalır, bu nedenle aşağıda açıklanan teknoloji kullanılarak şurup hazırlanabilir.

Kan şurubu hazırlamanın özel durumları. Şurubun iki avantajı vardır: Serumu aldıktan sonra kalan kanın kırmızı kısmının kullanılmasını sağlar ve çocukların hoşuna giden hoş bir tada sahiptir.

Gliserin eksikliği nedeniyle uzun süreli depolama için şurup hazırlamak zordur ancak su kullanarak oldukça aktif bir ürün yapabilir ve bunu çocuklara günde 2-3 yemek kaşığı verebilirsiniz. Kanın kırmızı kısmına içme suyunun %20'si katılarak şurup buzullarda depolanırken hijyen kontrolü de yapılıyor.

Daha sonra eşit miktarda %100 şeker şurubu eklenir (şurubun amaçlandığı grupların kartlarından şeker elde edilebilir).

Şuruba kanın tadını nötralize etmek için limon veya portakal özütü eklenir ve 250 ml'lik şişelere dökülür.

Peynir altı suyunun Tyndallizasyonu.

Santrifüjlemenin hemen ardından, yani kanın alınmasından bir saatten az bir süre sonra serum, bir saat süreyle 56°C'de parçalanır.

Bunu yapmak için sıcaklığı otomatik olarak muhafaza edilen bir su banyosuna indirilir. Bu sıcaklıkta Tyndalizasyon (peynir altı suyunun daha yüksek bir sıcaklıkta pıhtılaşması) peynir altı suyunun kısmi sterilizasyonu için gereklidir, ancak hazırlanma hızı başlı başına bir asepsi garantisidir.

Her beş litrelik şişenin orijinal defibrinatör etiketiyle donatıldığına, dolayısıyla serum numaralandırmasının donör hayvanların numaralandırmasına karşılık geldiğine dikkat edilmelidir.

Kontrol kartı dosyası. Kart, istediğiniz zaman donör hayvanın kökenini, peynir altı suyu hazırlama aşamalarını, şişeleme tarihini ve peynir altı suyunun dağıtımını kontrol etmenize olanak tanır.

Sıhhi kontrol. Gemiler depolanırken soğutma odası Veteriner müfettişleri donör hayvanların sıhhi kontrolüyle ilgilenmektedir. Kesimlerinin ardından tüberkülozun en ufak belirtilerini ortaya çıkarmak için kapsamlı bir otopsi yapılır.

Eğer bir hastalık tespit edilirse ilgili serum kolaylıkla geri çekilebilir. Her hayvanın kanının ayrı ayrı işlendiği ve serumun ayrı, numaralı şişelerde muhafaza edildiği bilinmektedir.

Lyon Mezbahalarındaki Çocuk Hijyeni Kamu Komitesi'nin seroterapötik merkezi

Kontrol numarası …

Litre cinsinden sığır peynir altı suyu

Kart ve etiket

Yukarıdaki kart ve etiket herhangi bir karışıklığı önler.

Lyon'da, hayvanların seçimi, kan alınması ve etin kontrol edilmesinin aynı veteriner hekimler tarafından yapılması nedeniyle hijyen tedbirleri özellikle katıdır.

Ekipmanın sterilizasyonu. Hayvan serumu mikroplar için mükemmel bir üreme alanıdır ve yalnızca kısmen sterilize edilebilir. 56°'nin üzerindeki sıcaklıklarda güçlü bir antiseptik eklenirse pıhtılaşır ve bulanıklaşır. Bu nedenle tüm serum üretim işlemleri sırasında maksimum sterilite gereklidir; ekipman kullanımdan önce dekontamine edilmelidir.

Bireysel defibrinatörler şu şekilde sterilize edilir: Kan alınmadan önceki gece antiseptik solüsyonla doldurulur ve kan alınmadan birkaç saat önce cihazın alt kısmında bulunan bir musluk kullanılarak antiseptik boşaltılır. Serum üretmek için kullanılan santrifüjler, her defibrinatörün içeriğinin işlenmesi arasında da bir antiseptik ile muamele edilir.

Peynir altı suyunu depolamak için kullanılan beş litrelik kaplar da dahil olmak üzere tüm cam eşyalar, 180°C sıcaklıkta elektrikli bir fırında sterilize edilir.

250 ml'lik serum şişeleri de 180°C'de sterilize edilir. İşlemi kolaylaştırmak için tabaklar, şişeleme ve halka dağıtım sırasında kullanılan kutulara yerleştiriliyor.

Voskresensk'e çiçek teslimatı

Sterilizasyon fiziksel, kimyasal, mekanik ve biyolojik yöntemlerle ve çeşitli yöntemlerle temsil edilir.

Belirli bir sterilizasyon yönteminin ve yöntemlerinin kullanılmasının uygulanabilirliği, sterilize edilecek malzemenin özelliklerine, fiziksel ve kimyasal özelliklerine bağlıdır.

Sterilizasyonun süresi, sterilize edilen nesneye, sterilizasyon maddesine ve dozuna, ortamın sıcaklığına ve nemine bağlıdır.

Fiziksel sterilizasyon yöntemi

Yollara fiziksel yöntem Sterilizasyon, kurutmayı, yakmayı ve kalsinasyonu, kaynatmayı, pastörizasyonu ve renklendirmeyi içerir, sıcak hava(kuru ısı), ultrason, ultraviyole ve radyoaktif radyasyon, yüksek frekanslı akım, güneş ışığı.

Yüksek sıcaklıklara maruz kalabilecek eşyaların sterilize edilmesinde en yaygın yöntem ateş, sıcak hava ve basınç altında doymuş buharla sterilizasyondur.

Ateş, herhangi bir değeri temsil etmeyen enfekte nesneleri (gereksiz kağıtlar, eski duvar kağıtları, paçavralar, çöp) yakmak, tüberküloz hastalarının balgamını, özellikle tehlikeli enfeksiyonlardan ölen insan ve hayvanların cesetlerini dezenfekte etmek için kullanılır. çeşitli nesneleri yakar ve kalsine eder.

Yakma ve kalsinasyon, mikrobiyolojik uygulamalarda aletlerin, laboratuvar ve farmasötik cam eşyaların dezenfeksiyonunda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Brülör alevinde veya alevde kalsinasyon, bitkisel hücreler, kistler ve mikroorganizma sporları öldükçe nesnenin tamamen sterilize edildiği bir sterilizasyon yöntemidir.

Tipik olarak özeler, spatulalar, pipetler, lamlar ve lameller, küçük aletler ve diğer kontamine öğeler, eğer kaynatılamazlarsa, kalsinasyonla sterilize edilir. Ateşe maruz kaldığında kesme yüzeyi matlaşacağından makas ve neşterlerin ısıtılarak sterilize edilmesi önerilmez.

Tıbbi uygulamada kullanılan en basit ve en yaygın fiziksel sterilizasyon yöntemlerinden biri sıcak hava sterilizasyonudur (kuru ısı). Kuru ısı sterilizasyonu kurutma fırınlarında (Pastör fırınları) gerçekleştirilir. Kuru sıcak havanın bakteri yok edici, virüs yok edici, spor öldürücü etkisi vardır ve esas olarak cam ürünlerin (laboratuar) sterilizasyonu için kullanılır. tabaklar - bardaklar Petri şişeleri, pipetler, test tüpleri vb.) yanı sıra basınç altında buharla sterilize edilebilen metal ürünler.

Ayrıca kuru ısı, porselen ve ısıya dayanıklı maddelerden (talk, beyaz kil), mineral ve bitkisel yağlar, katı yağlar, vazelin, lanolin ve balmumundan yapılmış eşyaları sterilize etmek için kullanılır. Bitkisel formların ve sporların ölümünü sağlayan bu sterilizasyon yöntemi için en etkili mod, 160 - 180 derece sıcaklıkta 15 dakika süreyle uygulanan sıcaklıktır.

Sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için gıda maddelerini, izotonik solüsyonu veya kauçuk ve sentetik malzemelerden yapılmış eşyaları kuru ısıyla sterilize edemezsiniz.

Basınç altında doymuş buharla sterilizasyon, pansumanların, suyun ve bazı malzemelerin sterilizasyonunda en güvenilir ve en sık denenen yöntemdir. ilaçlar, besin ortamı, yumuşak ekipman, aletlerin yanı sıra atıkla kirlenmiş malzemenin dezenfeksiyonu için.

Cerrahi uygulamada ameliyat edilen hastanın pansumanları, cerrah önlükleri ve iç çamaşırları otoklavlarda buhar kullanılarak dezenfekte edilmektedir. Basınç altında buhar sterilizasyonu gerçekleştirilir özel cihazlar– otoklavlar.

Otoklavlama tüm mikroorganizmaları ve sporları tamamen yok eder. Buhar basınçlı sterilizasyon yöntemi, malzemenin atmosferik basıncın üzerindeki basınç altında doymuş su buharı ile ısıtılmasına dayanmaktadır. Yüksek sıcaklık ve buharın birleşik etkisi bu yöntemi özellikle etkili kılar. Bu durumda hem bitkisel hücreler hem de mikrobiyal sporlar ölür.

Mikrobiyal sporlar doymuş su buharının etkisi altında 10 dakika içinde ölür ve bitkisel formlar 1 ila 4 dakika içinde ölür.

Doymuş buharın yüksek bakteri öldürücü gücü, basınç altındaki su buharının etkisi altında mikrobiyal hücre proteinlerinin şişmesi ve pıhtılaşması ve bunun sonucunda mikrobiyal hücrelerin ölmesidir.

Doymuş su buharının bakteri yok edici etkisi aşırı basınçla artar.

Otoklavda sterilizasyon farklı modlarda gerçekleştirilir.

Böylece basit besin ortamları (et - pepton agar ve et - pepton suyu) 120 derecede (1 atm.) 20 dakika sterilize edilir. Ancak bu modda proteinler, karbonhidratlar ve ısıtılarak kolayca değiştirilebilen diğer maddeleri içeren ortamları sterilize etmek mümkün değildir.

Karbonhidrat içeren ortamlar otoklavda 0,5 atm'de sterilize edilir. 10 – 15 dakika veya kademeli olarak akan buhar.

Yüksek sıcaklık kullanarak, yalnızca dezenfekte edilen nesnelerin yüzeyinde değil, aynı zamanda derinliklerinde de patojenik mikroorganizmaların en kalıcı formlarını (spor oluşturanlar dahil) yok edebilirsiniz.

Bu, güvenilir bir sterilizasyon aracı olarak yüksek sıcaklığın büyük avantajıdır. Ancak bazı eşyalar yüksek sıcaklığın etkisi altında bozulur ve bu durumlarda başka dezenfeksiyon yöntem ve yöntemlerine başvurmak gerekir.

Yüksek sıcaklıkta sterilizasyon kullanımına izin vermeyen malzeme ve nesnelerin tam sterilizasyonu, Koch aparatında 100 dereceyi aşmayan bir sıcaklıkta su buharı ile tekrarlanan sterilizasyonla sağlanır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. Geriye kalan öldürülmemiş spor mikrop formlarının, 37 derecelik bir termostatta bir gün sonra, sonraki sterilizasyon sırasında ölümü meydana gelen bitkisel hücrelere filizlendiği gerçeğine iniyor. bu nesnenin akan buhar.

Sıvı buharla muamele 30-40 dakika boyunca üç kez gerçekleştirilir. Malzemenin 100 derecenin altındaki sıcaklıkta bir kez ısıtılmasına pastörizasyon denir. Pastörizasyon Pasteur tarafından önerilmiştir ve esas olarak spor olmayan mikroorganizmaların yok edilmesi amaçlanmaktadır. Pastörizasyon 60 - 70 derecede 15 - 30 dakika, 80 derecede 10 - 15 dakika gerçekleştirilir.

Mikrobiyolojik uygulamada pastörizasyon tohum malzemesi sıklıkla spor oluşturan mikroorganizmaların saf kültürlerini izole etmek ve mikroorganizmaların spor oluşturma yeteneklerini belirlemek için kullanılır.

Yüksek sıcaklıklara maruz kaldığında tadı ve diğer değerli niteliklerini kaybeden sıvılar için (süt, meyve ve meyve suları, bira, karbonhidrat veya üre içeren besin ortamları vb.), akan buharla sterilizasyon 15 - 50 - 60 derecede gerçekleştirilir. 33333330 dakika veya 70 - 80 derecede 5 - 10 dakika. Bu durumda ortalama dirençli mikroplar ölür, daha dirençli mikroplar ve sporlar korunur.

60 derecede 1 saat süreyle fraksiyonel 5 – 6 kat sterilizasyona tyndalizasyon denir.

Pek çok tıbbi ürün polimer malzemeler, sterilizasyona dayanmaz buhar yöntemi genel kabul görmüş modlara göre. Pek çok ürünün, içerdikleri sıvıların (koruyucular, ilaçlar ve diğer ürünler) özelliklerinden dolayı, genel kabul görmüş yöntem ve yöntemler kullanılarak sterilize edilmesi mümkün değildir. Bu tür ürünler için, nesnelerin güvenilir bir şekilde sterilizasyonunu sağlamak amacıyla bireysel sterilizasyon rejimleri geliştirilmiştir.

Böylece kanı fraksiyonlara ayırmak için rotorun sterilizasyonu 120 derece sıcaklıkta 45 dakika su buharı ile gerçekleştirilir.

Koruyucu kapların sterilitesi 110 derecede 60 dakika süreyle sağlanır.

Kaynatma, yeniden kullanılabilir şırıngaların sterilizasyonunu sağlamak için kullanılan bir sterilizasyon yöntemidir. cerrahi Aletler, kauçuk tüpler, cam ve metal mutfak eşyaları.

Sterilizatörlerde kaynatılarak sterilizasyon yapılır. Kaynayan suda oluşan sporlar 20-30 dakika sonra ölür. 45 dakika kaynatma, salgıları ve diğer bulaşıcı malzemeleri, çamaşırları, tabakları, oyuncakları ve hasta bakım malzemelerini dezenfekte etmek için yaygın olarak kullanılır.

Sıcak su (60 - 100 derece) ile deterjanlar yıkamak ve temizlemek için kullanılır mekanik kaldırma kirleticiler ve mikroorganizmalar.

Bitkisel hücrelerin çoğu 70 derecede 30 dakika sonra ölür.

Filtrasyon sterilizasyonu, substratların ısınmaya dayanamadığı durumlarda, özellikle proteinler, serumlar, bazı antibiyotikler, vitaminler ve uçucu maddeler içeren ortamlar için kullanılır. Bu teknik, bir kültür sıvısının mikrobiyal hücrelerden arındırılması ancak içerdiği tüm metabolik ürünlerin değişmeden korunması gerektiğinde sterilize edilmesi için oldukça yaygın olarak kullanılır.

Yöntem, sıvıların ince gözenekli bölmelere sahip olan ve dolayısıyla mikrobiyal hücreleri tutan özel filtrelerden filtrelenmesini içerir.

En yaygın kullanılan iki filtre türü membran filtreler ve Seitz filtreleridir.

Membran filtreler kolodyum, asetat, selüloz ve diğer malzemelerden hazırlanır.

Seitz filtreleri asbest ve selüloz karışımından yapılır.

Ayrıca sterilizasyon için kaolinden katkılı filtreler kullanılmaktadır. kuvars kumu, demlik toprağından ve diğer malzemelerden (Chamberlan, Berkfeld'in “mumları”).

Membran ve asbest filtreleri tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır.

Ultraviyole ışınlama ile bakteri yok edici etki, kaynağı bakteri yok edici lambalar olan 200 - 450 nm uzunluğunda ışınlar tarafından sağlanır.

Sterilizasyon bakteri yok edici lambalar kullanılarak gerçekleştirilir. ultraviyole ışınlarşifalı hava önleyici kurumlar, mikrobiyoloji laboratuvarlarının kutuları, gıda endüstrisi işletmelerinde, aşı ve serum üretimine yönelik kutularda, ameliyathanelerde, manipülasyon odalarında, çocuk kurumlarında vb.

Ultraviyole ışınları yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve sadece bitkisel hücrelerin değil, aynı zamanda sporlarının da ölümüne neden olabilir.

Güneş ışığı, ultraviyole ışınımı ve kuruması sonucu mikroorganizmaların ölümüne neden olur.

Güneş ışığı ile kurutmanın birçok mikroorganizma türü üzerinde zararlı etkisi vardır ancak etkisi yüzeyseldir ve bu nedenle güneş ışığı sterilizasyon uygulamasında destekleyici rol oynar.

İÇİNDE Son zamanlarda yara ve yanıkların tedavisinde sentetik ve doğal polimerlerden yapılmış jel formundaki kaplamalar kullanılmaktadır.

Polimer antiseptik filmler yara ve yanıkların lokal tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Katapol, dioksidin, mavi iyot gibi geniş spektrumlu antimikrobiyal ajanların yanı sıra glutaraldehit içeren sorbitol içerirler. Bu filmleri sterilize etmek için 20,0 kGy dozunda iyonlaştırıcı radyasyon kullanılır. Polimer antiseptik filmlerin ve sorbentlerin endüstriyel üretimi sırasında, bu sterilizasyon rejimi altında sterillikleri tamamen sağlanır.

Radyoaktif radyasyon hem bitkisel hem de spor formdaki her türlü mikroorganizmayı öldürür. Steril ürünler ve steril tek kullanımlık tıbbi cihazlar üreten işletmelerde sterilizasyon, atık suların ve hayvansal kökenli hammaddelerin dezenfeksiyonunda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Mekanik sterilizasyon yöntemi

Mekanik sterilizasyon yöntemleri mikropları nesnelerin yüzeyinden uzaklaştırır. Bunlar; yıkama, silkeleme, süpürme, ıslak silme, havalandırma, havalandırma, elektrik süpürgesiyle süpürme, yıkamadır.

Kimyasal sterilizasyon yöntemi

Plastikler artık tıbbi uygulamalarda giderek daha fazla kullanılıyor.

Diş hekimliğinde, çene-yüz cerrahisinde, travmatolojide, ortopedide ve cerrahide kullanılırlar. Çoğu plastik, basınç altında buhar ve kuru ısı (kuru ısıtılmış hava) ile yapılan ısı sterilizasyon yöntemlerine dayanamaz. Bu tür nesneleri sterilize etmek için kullanılan alkol, dioksit ve üçlü çözeltiden oluşan çözeltiler, işlenen ürünlerin sterilliğini garanti etmez.

Bu nedenle plastik ürünleri sterilize etmek için gaz ve radyasyon yöntemlerinin yanı sıra kimyasal çözeltiler kullanılmaktadır.

Tıbbi kurumların uygulamalarına giriş çok sayıda Termolabil malzemelerden yapılan ürünler, dezenfektan solüsyonlarla dezenfeksiyon ve sterilizasyon için radyasyon ve gaz yöntemlerinin uygulanmasına katkıda bulunur.

Kimyasal sterilizasyon sırasında çeşitli kimyasal gruplardan gazlar ve ajanlar kullanılır (peroksit, fenolik, halojen içeren, aldehitler, alkaliler ve asitler, yüzey aktif maddeler vb.). Günlük kullanım için, bileşimlerine çeşitli kimyasalların eklenmesi nedeniyle antimikrobiyal etkiye sahip deterjanlar, temizlik, ağartma ve diğer müstahzarlar üretilmektedir.

Bu preparatlar sıhhi tesisatların temizlenmesi ve dezenfeksiyonu için kullanılır. teknik ekipman, tabaklar, çarşaflar vb.

Formaldehit buharı (buhar formu) kullanılabilir tıbbi kurumlar sterilizasyon için metal ürünleri tıbbi amaçlar için (neşter, iğneler, cımbız, sondalar, kelepçeler, kancalar, tel kesiciler vb.).

Formaldehit buharı ile sterilizasyondan önce ürünler, ön sterilizasyon temizliğine tabi tutulmalı ve iyice kurutulmalıdır.

Herhangi bir kimyasal yöntemle sterilize ederken, belirli bir nesneyi işleme kuralları, dezenfekte edilen nesnenin özelliklerine, mikropların direncine ve nesnenin özelliklerine bağlıdır. kimyasal hazırlık, ortam sıcaklığı, nem ve diğer faktörler.

Böylece metal aletlerin sterilliği, kapalı bir odada buharla birlikte en az 20 derece sıcaklıkta beş saat bekletilerek sağlanır ve bağıl nem 15 derecelik bir sıcaklıkta% 95 - 98, bu nesnelerin tam sterilitesi ancak 16 saat sonra elde edilir.

Glutaraldehitin sporisidal aktivitesi sıcaklığa bağlıdır. Optimum etkisi 15 – 25 derecelik bir sıcaklıkta gerçekleşir. Sıcaklık arttıkça bu ilacın sporisidal aktivitesi azalır.

Sterilizasyon kimyasal yöntem Kullanımı biraz sınırlıdır. Çoğu zaman bu yöntem, kültür ortamının ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemek için kullanılır. Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamın bu koruyucu maddelerden arındırılması gerekiyorsa 56 derecelik su banyosunda ısıtılır ve koruyucu maddeler buharlaştırılır.

Aşıların veya serumların korunması için mertiolat kullanılır, borik asit, formalin.

Biyolojik sterilizasyon yöntemi

Biyolojik sterilizasyon antibiyotik kullanımına dayanmaktadır.

Bu yöntem virüslerin yetiştirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

Sterilizasyon (Latince sterilis'ten - steril), işlenen nesneler üzerindeki mikropların tamamen etkisiz hale getirilmesini içerir.

Pasteur fırını - kuru ısı sterilizasyonu.

Üç ana sterilizasyon yöntemi vardır: ısı, radyasyon, kimyasal.

İyot.

Isı sterilizasyonu mikropların yüksek sıcaklığa duyarlılığına dayanır.

60 °C'de ve suyun varlığında, enzimler de dahil olmak üzere proteinlerin denatürasyonu meydana gelir ve bunun sonucunda mikropların bitkisel formları ölür. Çok az miktarda bağlı su içeren ve yoğun kabuklu sporlar 160-170 °C'de inaktive edilir. Isı sterilizasyonu için esas olarak kuru ısı ve basınç altında buhar kullanılır.
Kuru ısıyla sterilizasyon, kuru ısı fırınlarında veya Pasteur fırınlarında gerçekleştirilir. Pasteur fırını, elektrikle ısıtılan ve bir termometre ile donatılmış, sıkıca kapatılmış metal bir dolaptır.

İçerisindeki malzemenin dezenfeksiyonu 160-170 °C'de 60-120 dakika süreyle gerçekleşir. Bu yöntemin dezavantajı, yalnızca laboratuvar camı gibi bazı sterilize edilebilir nesnelerin bu kadar yüksek sıcaklıklara dayanabilmesidir.
Sterilizasyonun en evrensel yöntemi, pansumanların, çamaşırların, birçok aletin, kültür ortamının, solüsyonların, bulaşıcı materyalin vb. sterilize edildiği otoklavlarda basınç altında buhar tedavisidir.

Otoklav, su buharı ve sterilizasyon odasından oluşan, hava geçirmez şekilde kapatılmış, güçlü duvarlara sahip metal bir silindirdir. Cihaz bir manometre, termometre ve diğer izleme cihazlarıyla donatılmıştır. Otoklavda artan basınç yaratılır ve bu da suyun kaynama noktasının artmasına neden olur. Yani 0,5 atm'de kaynama noktası 80 °C, 1 atm'de - 100 °C, 2 atm'de - 121 °C ve 3 atm'de - 136 °C'dir.

Yüksek sıcaklığa ek olarak buharın mikroorganizmalara etki etmesi nedeniyle sporlar zaten 120 ° C'de ölür. En yaygın otoklav çalışma modu 2 atm, 121 °C, 15-20 dakikadır. Sterilizasyon süresi atmosfer basıncının ve dolayısıyla kaynama sıcaklığının artmasıyla azalır. Mikroorganizmalar birkaç saniye içinde ölür, ancak malzeme daha uzun süre işlenir, çünkü ilk olarak sterilize edilen malzemenin içindeki sıcaklığın yüksek olması gerekir ve ikinci olarak, sıcaklıktan olası sapma için tasarlanmış sözde bir güvenlik alanı vardır. Otoklav işlemi sırasında belirtilen parametreler.

Etiketler: vücut, büyüme, sterilizasyon, enzim