Sterilizasyon ve diğer mikrobiyolojik amaçlar. Sterilizasyon yöntemleri ve yöntemleri Mekanik sterilizasyon yöntemi

Sıcaklığın mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

Sıcaklık - önemli faktör Mikroorganizmaların yaşamını etkiler. Mikroorganizmalar için minimum, optimal ve maksimum sıcaklıklar vardır. En uygun– mikropların en yoğun çoğalmasının meydana geldiği sıcaklık. Asgari– Altında mikroorganizmaların hayati aktivite göstermediği sıcaklık. Maksimum- Mikroorganizmaların ölümünün gerçekleştiği sıcaklık.

Sıcaklıkla ilgili olarak 3 grup mikroorganizma ayırt edilir:

2. Mezofiller. Optimum - 30-37°С. Asgari – 15-20°C. Maksimum – 43-45°C. Sıcakkanlı hayvanların vücutlarında yaşarlar. Bunlar patojenik ve fırsatçı mikroorganizmaların çoğunu içerir.

3. Termofiller. Optimum - 50-60°C. Asgari - 45°C. Maksimum - 75°С. Kaplıcalarda yaşıyorlar ve gübre ve tahılın kendi kendine ısınma süreçlerine katılıyorlar. Sıcakkanlı hayvanların vücudunda üreyemedikleri için tıbbi açıdan bir önemi yoktur.

Olumlu eylem optimum sıcaklık Mikroorganizmaların yetiştirilmesinde kullanılır amacıyla laboratuvar teşhisi, aşıların ve diğer ilaçların hazırlanması.

Frenleme eylemi Düşük sıcaklık depolama için kullanılır buzdolabındaki mikroorganizmaların ürünleri ve kültürleri. Düşük sıcaklık, paslanma ve fermantasyon işlemlerini durdurur. Düşük sıcaklıkların etki mekanizması, hücredeki metabolik süreçlerin engellenmesi ve askıya alınmış bir animasyon durumuna geçiştir.

Zararlı etki Yüksek sıcaklık(maksimumun üstünde) sterilizasyon için kullanılır . Mekanizma eylemler – proteinin (enzimlerin) denatürasyonu, ribozomların hasar görmesi, ozmotik bariyerin bozulması. Psikrofiller ve mezofiller yüksek sıcaklıklara en duyarlı olanlardır. özel Sürdürülebilirlik göstermek anlaşmazlıklar bakteriler.

Radyan enerji ve ultrasonun mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

İyonlaştırıcı olmayan (ultraviyole ve kızılötesi ışınlar) vardır. Güneş ışığı) ve iyonlaştırıcı radyasyon (g ışınları ve yüksek enerjili elektronlar).

İyonlaştırıcı radyasyonun güçlü bir nüfuz edici etkisi vardır ve hücresel genoma zarar verir. Mekanizma Zarar verici etki: iyonlaşma mutasyonların veya hücre ölümünün gelişmesiyle birlikte makromoleküller. Üstelik mikroorganizmalar için öldürücü dozlar hayvanlar ve bitkilere göre daha yüksektir.

Mekanizma zarar verici etki UV ışınları: bir DNA molekülünde timin dimerlerinin oluşumu hücre bölünmesini durdurur ve ölümlerinin ana nedenidir. UV ışınlarının zararlı etkisi, hayvanlar ve bitkilere kıyasla mikroorganizmalar üzerinde daha belirgindir.

ultrason(ses dalgaları 20 bin Hz) bakteri yok edici etkiye sahiptir. Mekanizma: eğitim hücrenin sitoplazmasında kavitasyon boşlukları Sıvı buharla dolu olan ve içlerinde 10 bin atm'ye varan bir basınç ortaya çıkıyor. Bu, yüksek derecede reaktif hidroksil radikallerinin oluşumuna, hücresel yapıların tahrip olmasına ve organellerin depolimerizasyonuna, moleküllerin denatürasyonuna yol açar.

İyonlaştırıcı radyasyon, UV ışınları ve ultrason kullanılır Sterilizasyon için.

Kurutmanın mikroorganizmalar üzerine etkisi.

Mikroorganizmaların normal işleyişi için su gereklidir. Çevresel nemdeki azalma, hücrelerin dinlenme durumuna ve ardından ölüme geçişine yol açar. Mekanizma Kurutmanın zararlı etkileri: sitoplazmanın dehidrasyonu ve proteinlerin denatürasyonu.

Patojenik mikroorganizmalar kurumaya karşı daha duyarlıdır: gonore patojenleri, menenjit, Tifo, dizanteri, sifiliz vb. Bakteri sporları, protozoan kistler ve balgam mukusu (tüberküloz basili) tarafından korunan bakteriler daha dirençlidir.

Uygulamada kurutma kullanılır konserve için et, balık, sebze, meyve, şifalı otlar hazırlarken.

Donmuş halden vakum altında kurutma – Liyofilizasyon veya dondurarak kurutma. O kullanılıyor mahsulün korunması için Yıllarca (10-20 yıl) bu halde kalan mikroorganizmalar canlılıklarını kaybetmezler ve özelliklerini değiştirmezler. Mikroorganizmalar askıya alınmış bir animasyon halindedir. Liyofilizasyon kullanılır uyuşturucu üretiminde yaşayan mikroorganizmalardan: öbiyotikler, fajlar, canlı aşılar tüberküloz, veba, tularemi, bruselloz, grip vb.'ye karşı.

Aksiyon kimyasal faktörler mikroorganizmalara.

Kimyasallar mikroorganizmaları farklı şekillerde etkiler. Bu, kimyasalların doğasına, konsantrasyonuna ve etki zamanına bağlıdır. Yapabilirler büyümeyi teşvik etmek(enerji kaynağı olarak kullanılır), sağlamak mikrop öldürücü, mikrobostatik, mutajenik etki veya hayati süreçlere kayıtsız olabilir

Örneğin: %0,5-2'lik bir glikoz çözeltisi mikroplar için bir besin kaynağıdır ve %20-40'lık bir çözeltinin engelleyici etkisi vardır.

Mikroorganizmalar için gereklidir ortamın optimum pH değeri. İnsan hastalıklarının çoğu simbiyontları ve patojenleri için - nötr, hafif alkali veya hafif asidik bir ortam. PH arttıkça sıklıkla asidik tarafa kayar ve mikroorganizmaların büyümesi durur. Ve sonra ölüm gelir. Mekanizma: Enzimlerin hidroksil iyonları tarafından denatürasyonu, hücre zarının ozmotik bariyerinin bozulması.

Kimyasallar olan antimikrobiyal etki, Dezenfeksiyon, sterilizasyon ve muhafaza için kullanılır.

Biyolojik faktörlerin mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

Biyolojik faktörler- Bu çeşitli şekiller mikropların birbirleri üzerindeki etkisinin yanı sıra bağışıklık faktörlerinin (lizozim, antikorlar, inhibitörler, fagositoz) makroorganizmada kaldıkları süre boyunca mikroorganizmalar üzerindeki etkisi. Çeşitli organizmaların bir arada bulunması - simbiyoz. Aşağıdakiler ayırt edilir: formlar simbiyoz.

Karşılıkçılık– her iki partnerin de karşılıklı yarar sağladığı bir birlikte yaşama biçimi (örneğin, nodül bakterileri ve baklagiller).

Zıtlık- Bir organizmanın, çevresel koşullara daha iyi uyum sağlaması nedeniyle, doğrudan yıkım yoluyla (örneğin normal bağırsak mikroflorası ve patojenler) metabolik ürünleriyle (asitler, antibiyotikler, bakteriyosinler) başka bir organizmaya zarar vermesi (hatta ölümüne) neden olduğu bir ilişki şekli. bağırsak enfeksiyonları).

Metabiyoz– bir organizmanın diğerinin neden olduğu süreci devam ettirdiği (atık ürünlerini kullandığı) ve çevreyi bu ürünlerden kurtardığı bir tür birlikte yaşama. Bu nedenle daha fazla gelişme için koşullar yaratılır (nitrifikasyon ve amonifikasyon bakterileri).

Uyduculuk– birlikte yaşayanlardan biri diğerinin büyümesini teşvik eder (örneğin, maya ve sarsina diğer, daha fazla besin gerektiren bakterilerin büyümesini destekleyen maddeler üretir).

Kommensalizm– bir organizma diğerinin pahasına (faydalı olarak) ona zarar vermeden yaşar (örneğin E. coli ve insan vücudu).

yırtıcılık– organizmalar arasındaki antagonistik ilişkiler, biri diğerini yakaladığında, emdiğinde ve sindirdiğinde (örneğin, bağırsak amipleri bağırsak bakterileriyle beslenir).

Sterilizasyon.

Sterilizasyon sporlar da dahil olmak üzere bir nesnedeki tüm canlı mikrop formlarının tamamen yok edilmesi işlemidir.

3 grup sterilizasyon yöntemi vardır: fiziksel, kimyasal ve fiziko-kimyasal. Fiziksel yöntemler: yüksek sıcaklıkla sterilizasyon, UV ışınlaması, iyonlaştırıcı ışınlama, ultrason, steril filtrelerden filtreleme. Kimyasal yöntemler– kimyasalların kullanımı ve gaz sterilizasyonu. Fiziko-kimyasal yöntemler – paylaşım fiziksel ve kimyasal yöntemler. Örneğin, yüksek sıcaklık ve antiseptikler.

Yüksek sıcaklıkta sterilizasyon .

Bu yöntem şunları içerir: 1) kuru ısı sterilizasyonu; 2) basınç altında buhar sterilizasyonu; 3) akan buhar sterilizasyonu; 4) tindializasyon ve pastörizasyon; 5) kalsinasyon; 6) kaynamak.

Kuru ısı sterilizasyonu.

Yöntem dayanmaktadır 45 dakika süreyle 165-170°C'ye ısıtılan havanın bakteri yok edici etkisi üzerine etkisi.

Teçhizat: kuru ısı kabini (Pastör fırını). Pastör fırını - metal dolapçift ​​cidarlı, dış tarafı ısıyı zayıf ileten bir malzeme (asbest) ile kaplanmış. Isıtılan hava, duvarlar arasındaki boşlukta dolaşır ve özel açıklıklardan çıkar. Çalışırken gerekli sıcaklığı ve sterilizasyon süresini sıkı bir şekilde izlemek gerekir. Sıcaklık daha yüksekse, bulaşıkların sarıldığı pamuk tıkaçlarının ve kağıdın kömürleşmesi meydana gelir ve daha düşük bir sıcaklıkta, daha uzun bir sterilizasyon gerekir. Sterilizasyon tamamlandıktan sonra dolap ancak soğuduktan sonra açılır, aksi takdirde cam eşyalar ani sıcaklık değişiminden dolayı çatlayabilir.

a) cam, metal, porselen eşyalar, tabaklar, kağıda sarılı ve steriliteyi korumak için pamuklu gazlı bez tıpalarla kapatılmış (165-170°C, 45 dakika);

b) ısıya dayanıklı toz ilaçlar- talk, beyaz kil, çinko oksit (180-200°C, 30-60 dakika);

c) maden ve sebze yağları, yağlar, lanolin, vazelin, balmumu (180-200°C, 20-40 dk).

Basınç altında buhar sterilizasyonu.

Mikrobiyolojik ve klinik pratikte en etkili ve yaygın olarak kullanılan yöntemdir.

Yöntem dayanmaktadır Basınç altındaki buharın mikrobiyal hücrenin proteinleri üzerindeki hidrolize edici etkisi üzerine. Yüksek sıcaklık ve buharın birleşik etkisi, yüksek verim en kalıcı spor bakterilerini öldüren bu sterilizasyon.

Ekipman – otoklav. Otoklav, vidalarla vidalanmış, hermetik olarak kapatılmış bir kapakla birbirine yerleştirilmiş 2 metal silindirden oluşur. Dış kazan su-buhar odası, iç kazan ise sterilizasyon odasıdır. Manometre, buhar tahliye vanası, emniyet vanası ve su sayacı camı bulunmaktadır. Sterilizasyon odasının üst kısmında, su-buhar odasından buharın geçtiği bir delik bulunmaktadır. Manometre, sterilizasyon odasındaki basıncı belirlemek için kullanılır. Basınç ve sıcaklık arasında belli bir ilişki vardır: 0,5 atm - 112°C, 1-01,1 atm - 119-121°C, 2 atm - 134°C. Emniyet valfi – aşırı basınca karşı koruma sağlar. Basınç ayarlanan değerin üzerine çıktığında vana açılır ve fazla buharı dışarı atar. Çalıştırma prosedürü. Seviyesi bir su sayacı camı kullanılarak izlenen otoklava su dökülür. Malzeme sterilizasyon odasına konulur ve kapağı sıkıca vidalanır. Buhar valfi açık. Isıtmayı açın. Su kaynadıktan sonra, musluk ancak tüm havanın yeri değiştirildiğinde kapatılır (buhar sürekli, güçlü bir kuru akıntı halinde akar). Musluk daha erken kapatılırsa manometre okumaları eşleşmeyecektir. doğru sıcaklık. Musluk kapatıldıktan sonra kazan içindeki basınç giderek artar. Sterilizasyonun başlangıcı, manometre iğnesinin ayarlanan basıncı gösterdiği andır. Sterilizasyon süresi dolduktan sonra ısıtmayı durdurun ve manometre iğnesi 0'a dönene kadar otoklavı soğutun. Buharı daha erken bırakırsanız, basınçtaki hızlı değişim nedeniyle sıvı kaynayıp, tapaları dışarı itebilir (sterillik bozulabilir). Manometrenin iğnesi 0'a döndüğünde, buhar tahliye vanasını dikkatlice açın, buharı serbest bırakın ve ardından sterilize edilecek nesneleri çıkarın. İğne 0'a döndükten sonra buhar çıkmazsa su yoğunlaşabilir ve tıkaçları ve sterilize edilen malzemeyi ıslatabilir (sterilite bozulacaktır).

Malzeme ve sterilizasyon modu:

a) cam, metal, Çin, iç çamaşırı, kauçuk ve kortikal tıkaçlar kauçuk, selüloz, ahşaptan yapılmış ürünler, pansuman(pamuklu, gazlı bez) (119 - 121°C, 20-40 dakika));

b) fizyolojik solüsyon, enjeksiyon solüsyonları, göz damlaları, damıtılmış su, basit besin ortamı - MPB, MPA (119-121°C, 20-40 dakika);

c) hava geçirmez şekilde kapatılmış kaplarda mineral ve bitkisel yağlar (119-121°C, 120 dakika);

Akan buharla sterilizasyon.

Yöntem dayanmaktadır Buharın (100°C) yalnızca bitkisel hücrelere karşı bakterisidal etkisi üzerine.

Teçhizat– vidasız kapağı olan bir otoklav veya Koch aparatı.

Koch aparatı - Bu, boşluğun 2/3'ü suyla dolu, çift tabanlı metal bir silindirdir. Kapakta termometre ve buharın çıkması için delikler bulunur. Dış duvar, ısıyı zayıf ileten bir malzeme (linolyum, asbest) ile kaplanmıştır. Sterilizasyonun başlangıcı, suyun kaynamasından ve buharın sterilizasyon odasına girmesinden itibaren geçen süredir.

Malzeme ve sterilizasyon modu. Bu yöntem materyali sterilize eder 100°C'nin üzerindeki sıcaklıklara dayanamayan: vitaminler, karbonhidratlar (Hiss, Endo, Ploskirev, Levin media), jelatin, süt içeren besin ortamları.

100°C'de sporlar ölmez, dolayısıyla sterilizasyon birkaç kez gerçekleştirilir - fraksiyonel sterilizasyon - 3 gün boyunca günde 20-30 dakika.

Sterilizasyonlar arasındaki aralıklarda malzeme uygun sıcaklıkta tutulur. oda sıcaklığı Sporların bitkisel formlara çimlenmesi için. Daha sonra 100°C'ye ısıtıldıklarında öleceklerdir.

Tyndalizasyon ve pastörizasyon.

Tyndalizasyon - 100°C'nin altındaki sıcaklıklarda fraksiyonel sterilizasyon yöntemi. Nesneleri sterilize etmek için kullanılır, 100°C'ye dayanamayan: serum, asit sıvısı, vitaminler . Tyndallizasyon 5-6 gün boyunca 1 saat süreyle 56°C'deki su banyosunda gerçekleştirilir.

Pastörizasyon - kısmi nispeten düşük bir sıcaklıkta gerçekleştirilen sterilizasyon (sporlar öldürülmez) bir kere. Pastörizasyon 70-80°C'de 5-10 dakikada veya 50-60°C'de 15-30 dakikada gerçekleştirilir. Pastörizasyon, yüksek sıcaklıklarda kalitesini kaybeden nesneler için kullanılır. kullanmak İçin bazı Gıda Ürünleri: süt, şarap, bira . Bu, ticari değerlerine zarar vermez ancak sporlar canlı kalır, bu nedenle bu ürünlerin buzdolabında saklanması gerekir.

Fiziksel ve kimyasal faktörlerin kullanılması.

İLE fiziksel faktörler Sterilizasyon yöntemleri arasında yüksek sıcaklık, ultraviyole ışınları, iyonlaştırıcı radyasyon ve bakteri filtreleri aracılığıyla.

Laboratuvar uygulamalarında yüksek sıcaklık kullanılarak yapılan sterilizasyon, alevde kalsinasyon, kuru ısı ile ısıtma, kaynatma, akan buhar veya basınç altında buhar ile işleme tabi tutularak gerçekleştirilir.

Pirinç. 1. Bunsen beki. Pirinç. 2. Teklu brülör. Pirinç. 3. Brülör alevindeki sıcaklık dağılımı.

Pirinç. 4. Kurutma kabini.

Pirinç. 5. Su banyoları: 1 - sabit su akışıyla; 2 - silindirik; 3 - yuvarlak alt. Pirinç. 6. Akan buhar sterilizatörü.

Alevle sterilizasyon, çeşitli ısıya dayanıklı nesnelerin işlenmesi için basit ve güvenilir bir yöntemdir: iğneler, bakteriyel halkalar, mikrobiyolojik spatulalar, pipetler, slaytlar ve kapak camları, cımbız vb. Bu amaçla Bunsen sisteminin gaz brülörleri (Şekil 1) veya Teklu (Şek. 2). Bunsen brülörü, hava erişimini ayarlayabileceğiniz hareketli bir tutucu ile donatılmıştır. Teklu brülörde, gelen hava miktarı diskin hareket ettirilmesiyle (Şek. 2,1), gaz miktarı ise bir vida ile düzenlenir (Şek. 2, 2). Hava erişiminin olmaması veya yetersiz olması durumunda dumanlı bir alev oluşur. Brülöre hava girişi şu şekilde ayarlanır: Mavi alev. Brülör alevindeki yaklaşık sıcaklık dağılımı Şekil 2'de gösterilmektedir. 3.

Kuru ısı sterilizasyonu şu şekilde gerçekleştirilir: kurutma kabini(Pastör fırını). Bu yöntem yalnızca kuru nesneleri (laboratuvar cam eşyaları vb.) sterilize etmek için kullanılır. Kurutma kabini (Şekil 4), aralarında bir çift duvarlı küçük bir demir kabindir. ısı yalıtım malzemesi(asbest, cam yünü). Temiz bir şekilde yıkanmış test tüpleri ve şişeleri pamuklu tıpalarla kapatılmıştır; pipetler, pamuk yünü, gazlı bez kağıda sarılarak dolabın raflarına yerleştirilir, böylece sterilize edilecek nesneler cihazın sıcak duvarlarına temas etmez ve ısıtılmış hava aralarına serbestçe nüfuz eder. Kurutma kabininde sterilizasyon t° 160-170°'de 45 dakika - 1 saat sürer. 175°'nin üzerindeki sıcaklıklarda kağıt ve pamuk yanar.

Suda kaynatmak, mikropların spor olmayan formlarını 1-3 dakika içinde yok eder. , iğneler, bıçaklar, küçük aletler vb. metal sterilizatörlerde ve hatta normal bir tencerede kaynatılabilir. Suya az miktarda sodyum bikarbonat (sodyum bikarbonat) eklenmesi

Laboratuvar uygulamalarında mikroorganizmalarla çalışırken çalışma sırasında kullanılan tabakların, kültür ortamlarının ve metal aletlerin mikrop içermemesini sağlayacak önlemlerin sürekli alınması gerekir. Bu amaçla aşağıdaki sterilizasyon yöntemleri kullanılır:

Sterilizasyon kızgın buhar baskı altında;

Akan buharla sterilizasyon;

Sıcak hava sterilizasyonu;

Dezenfeksiyon.

Sterilizasyonun en iyi yöntemi, çeşitli nesneleri aşırı ısıtılmış buharla işleme tabi tutmaktır. özel cihazlar- otoklavlar.

Basınç altında otoklav ve aşırı ısıtılmış buhar sterilizasyonu

Otoklavlar, çift cidarlı ve cıvatalarla ve lastik contayla hava geçirmez şekilde kapatılmış büyük bir kapağa sahip metal (çelik, dökme demir veya bakır) kazanlardır. Isıtma sistemine bağlı olarak otoklavlar buharlı, elektrikli ve ateşlidir (Şek. 42). Otoklavda 115-120°C sıcaklıkta yüksek basınçlı ve kızgın buhar üretmek, hem bitkisel hücreleri hem de mikrobiyal sporları 20-30 dakika içinde yok etmenizi sağlar.

Otoklavda, yüksek sıcaklıklarda bozulmayan tüm öğeler sterilize edilir: çeşitli sıvılar (su, karbonhidrat bileşenleri içermeyen besin maddeleri), cam eşyalar, metal aletler, pamuk yünü, gazlı bez, kağıt vb.

Bazı maddelerin otoklavda normal sterilizasyon rejimine dayanamadığı durumlarda (özellikle şeker içeren besin ortamları), otoklavda 112 ° C sıcaklıkta 20 dakika boyunca ve daha hafif koşullar altında sterilize edilir.

Şu tarihte: yüksek basınçlar otoklavda aşırı ısıtılmış buhar, ısıtma sıcaklığı buna göre artar; Bu, bazı kültür ortamlarına eklenen şekerlerin karamelleşmesine neden olarak ortamı mikropların fizyolojik özelliklerinin belirlenmesi için uygunsuz hale getirir.

Otoklavın içindeki basınç, otoklavın kapağına veya gövdesine monte edilen bir basınç göstergesi kullanılarak ölçülür. Basıncın aşırı artması durumunda, tasarıma bağlı olarak kapakta veya otoklav duvarının yan yüzeyinde bulunan bir emniyet valfi otomatik olarak devreye girer. Emniyet valfinden bir düdük ile çıkan buhar jeti, ısıtmanın durdurulması gerektiği konusunda uyarır. Isıtma durdurulmazsa otoklav patlayabilir.

Bazen otoklavın kapağındaki özel bir cebe sterilizasyon sıcaklığının ölçüldüğü bir termometre yerleştirilir. Otoklavın içinde, otoklavın dışında bulunan bir huni ile bir tüpten suyun döküldüğü bir stand bulunmaktadır. Ek olarak otoklavlar, buharı ve havayı serbest bırakmak için bir musluk ve suyu boşaltmak için bir musluk ile donatılmıştır.

Sterilizasyon sırasında otoklavın kullanılmasına ilişkin kurallar aşağıdaki gibidir: Cihaz, seviyesi standın altında olması gereken bir huni ve tüp aracılığıyla suyla doldurulur. Sterilize edilecek malzemeler özel metal şişelere konularak otoklava yüklenir. Otoklavın kapağı vidalanmıştır.

Buhar ve havanın çıkmasını sağlamak için musluğun açılmasıyla ısıtma başlar. Su kaynadığı anda ortaya çıkan buhar, havayı otoklavdan çıkarmaya başlar. Buhar çıkış valfi, sürekli bir akış halinde kuru buhar dışarı akana kadar açık tutulur. Bu, havanın otoklavdan tamamen çıkarıldığını gösterir. Daha sonra musluk kapatılır. Daha fazla ısıtmayla giderek daha fazla miktarda biriken buhar, otoklavdaki basıncı ve aynı zamanda sıcaklığı artırır. Otoklavla çalışırken, buhar basıncı ile sıcaklığı arasındaki ilişkiler tablosuna göre yönlendirilebilirsiniz (Tablo 4).

Manometre iğnesi ulaştıktan sonra gerekli gösterge basıncı (otoklavdaki sıcaklık, kabul edilen sterilizasyon sıcaklığına karşılık gelecektir), otoklavın ısıtmasını, basınç gerekli süre boyunca aynı seviyede kalacak şekilde ayarlayın. Sterilizasyonun sonunda ısıtmayı durdurun. Otoklavdaki sıcaklık düştüğünde ve manometre iğnesi sıfıra düştüğünde (otoklavdaki basınç atmosfer basıncına eşittir), buhar tahliye vanasını dikkatlice açın, buharı serbest bırakın ve otoklavın kapağını açarak malzemeyi çıkarın. Otoklavdaki basınç düşmeden buhar tahliye vanasını zamanından önce açmak mümkün değildir. Otoklav odasındaki basınçta keskin bir düşüş, 100 °C'den daha yüksek sıcaklıklara ısıtılan sıvıların şiddetli kaynamasına neden olacaktır; normal atmosfer basıncında kaynama noktasının üzerindedir. Şiddetle kaynayan sıvılar, pamuklu tıkaçları ıslatacak ve hatta kaplardan dışarı itecektir - iş boşuna yapılacaktır. Havadan gelen mikroflora ıslak tıkaçlarda kolayca gelişip içeriye nüfuz ettiğinden ve ortamı enfekte ettiğinden, besin ortamı bozulacaktır. Ayrıca otoklavın yüksek basınçla açılması işçi açısından tehlikelidir.

Ancak manometre iğnesi sıfırda durduğu anda otoklavın derhal açılması gerekir, aksi takdirde yoğuşma bujilerin üzerine akmaya başlayacak ve onların da ıslanmasına neden olacaktır. Tıpaların yoğuşma suyuyla ıslanmasını önlemek için sterilizasyondan önce kağıtla kaplanır.

Otoklava yerleştirilen malzemeler, sıcaklık 2 atm (19,61 * 10000 N/m2) basınca karşılık gelen 120°C'de tutulursa veya normalin 1 atm üzerinde bir basınç göstergesinde tutulursa 20-30 dakika içinde güvenilir bir şekilde sterilize edilecektir. Ortamı akan buharla sterilize etmek için bir otoklav da başarıyla kullanılabilir; bu durumda otoklavın kapağı vidalanmaz.

Koch kazanı ve akan buhar sterilizasyonu

Koch kazanı, galvanizli sac veya bakırdan yapılmış, çift cidarlı ve konik kask şeklinde kapaklı bir silindirdir (Şek. 43). Kapağın ortasında termometre için bir delik bulunmaktadır. Koch kazanının dış kısmı bir tabaka ile kaplıdır ısı yalıtım malzemesi: asbest, linolyum vb.

Kazanın iç alanını üst ve alt olmak üzere iki bölüme ayıran, kazanın içine bir bölme (stand) yerleştirilmiştir. Alt kısım, seviyesi su sayacı camı tarafından belirlenen suyla doldurulur: su, standın üst kısmını kaplamamalıdır. Sterilize edilecek eşyalar kazanın üst bölümünde üst üste konulan kafesli kovalara yerleştirilir. Kazanı kapakla kapatarak içindeki suyu ısıtmaya başlarlar. Sterilizasyonun başlangıcı, termometrenin 98-100°C'yi gösterdiği an olarak kabul edilir. Termometrenin yokluğunda, sterilizasyonun başlangıcı, buharın kazan kapağındaki delikten kuvvetli bir şekilde çıkmaya başladığı an olarak kabul edilir. Böylece, kazan çalışırken sterilize edilecek nesneler daima akan bir buhar akışı içinde olacaktır.

Akan buharla sterilizasyon yöntemi, basitliği ve kullanılabilirliği nedeniyle laboratuvar uygulamalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Akan buhar, esas olarak 100°C'nin üzerine ısıtıldığında özellikleri değişen besin ortamlarını sterilize etmek için kullanılır: protein, karbonhidrat ve jelatin. Bu ortamlar için akan buhar sterilizasyonu yöntemi en uygun olanıdır.

Akan buhar sterilizasyon yönteminin dezavantajı süresidir, çünkü ortamı tamamen sterilize etmek için, kazanda belirli bir süre boyunca tekrar tekrar ısıtma yapılması gerekir - bağlı olarak 20 dakikadan 1,5 saate kadar (ortalama 30-45 dakika). 24 saatlik aralıklarla sıvı hacminin arttırılması Ortamın bir termostatta ısıtılması arasındaki sürenin tamamının 25-30 °C'de tutulması tavsiye edilir.

Koch kazanında tek bir ısıtma, yalnızca bitkisel mikrobiyal hücrelerin ölümüne neden olur, ancak sporlar hayatta kalabilir. Sterilize edilmiş besin ortamını muhafaza ederken uygun koşullar(oda sıcaklığında veya daha iyisi bir termostatta), kalan sporların bir kısmı ertesi gün filizlenecek ve bitkisel hücrelere dönüşecektir. Tekrarlanan ısıtma, bu yeni gelişen hücrelerin ölümüne neden olacaktır. Son olarak, besiyerinin bir termostatta tutulduğu bir günün ardından üçüncü bir ısıtma, tam bir sterilite sağlayacaktır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. İÇİNDE pratik iş Koch kazanında akan buharla sterilizasyon yerine, otoklavlarda geleneksel sterilizasyon sıklıkla 112 °C'de 0,5 atm karşı basınçla 15-20 dakika süreyle kullanılır.

Kurutma kabini ve sıcak hava sterilizasyonu

Laboratuvar uygulamalarında mikrobiyolojik cam eşyaları sterilize etmek için bir kurutma kabinine veya Pasteur fırınına sahip olmak gerekir. Kurutma kabini ve Pasteur fırınının tasarım prensibi aynıdır. Sobalar sadece yapılır dikdörtgen şekil ve kurutma dolapları sadece dikdörtgen değil aynı zamanda silindirik bir şekle de sahip olabilir (Şek. 44 ve 45). Bu cihazlarda sterilizasyon sıcak hava (kuru ısı) ile 160 °C sıcaklıkta 1 saat veya 150 °C sıcaklıkta 2 saat süreyle yapılmaktadır.

Hem Pasteur fırınları hem de kurutma fırınları, çift kapılı ve sıkıca kapanan çift kapılı, içi boş cihazlardır. Dış tarafta ısı yalıtımı için bir asbest tabakası ile kaplanmıştır. Duvarlar arasında dolaşır sıcak havaısıtılması elektrikli spiraller veya gaz brülörleri ile gerçekleştirilir. Dolabın içinde birkaç (genellikle iki veya üç) delikli raf vardır. Kabinin üst kısmında iki açıklık vardır: biri termometre, diğeri havalandırma içindir. Elektrikli kurutma dolapları en kullanışlı olanıdır.

En yeni tasarım kurutma kabinleri, kabinin yan duvarına yerleştirilen özel bir regülatör ile etkinleştirilebilen dört ısıtma aşamasına sahiptir. İstenilen ısıtma derecesi, bir, iki, üç veya dördünün birden açılmasıyla elde edilir. elektrikli spiraller ve spiralleri açma sırası herhangi bir olabilir.

Züccaciyeye ek olarak, gazlı bez ve pamuk yünü kurutma dolaplarında sterilize edebilirsiniz, ancak 160 ° C sıcaklıkta sararmaya başladıkları için bunları otoklavda işlemek yine de daha iyidir. Kauçuk ürünler, yüksek sıcaklıklara dayanamadıkları için kurutma kabininde sterilize edilemezler - kırılgan hale gelirler ve bozulurlar. Sıvılar 150-160 °C'de kaynar ve kimyasal bileşimleri değişir.

Sterilize edilmiş eşyaların daha sonra havadaki mikroplar tarafından kontaminasyonunu önlemek için, bunlar sterilizasyondan önce kağıda sarılır. Petri kapları her biri 2 parça olacak şekilde kağıda sarılır, böylece ambalajda boşluk kalmaz. Cam tüpler ve pipetler de önce ayrı ayrı, ardından 10-20 adetlik paketler halinde kağıda sarılır. Tüplerin ve pipetlerin tamamen korunması için sarılması son derece dikkatli olmalıdır. dış yüzey hava ile iletişimden. Sıcak hava ile sterilizasyondan önce şişeler, test tüpleri, şişeler pamuklu tıpalar ve kağıt kapaklarla kapatılır.

Kurutma kabinindeki sıcaklığın 170 °C'nin üzerine çıkmasına izin vermeyin, çünkü bu sıcaklıkta pamuklu çubuklar kahverengiye döner ve kağıt ambalajlar kırılgan ve hatta kömürleşmiş hale gelir. Termometrenin 150-160 °C'yi gösterdiği an sterilizasyonun başlangıcı olarak kabul edilir. Sterilizasyon için gerekli süre geçtikten sonra ısıtma durdurulur. Bulaşıkların çatlamasını önlemek için, yalnızca kuru bulaşıkları sterilize etmeniz ve sterilizasyondan sonra kabini yalnızca içindeki sıcaklık 50-70 ° C'ye düştüğünde açmanız gerekir. Platin halkalar, iğneler, cımbız, makas vb. gibi küçük laboratuvar nesneleri, yalnızca alevde ısıtılarak sterilize edilebilir. gaz ocağı(veya alkol lambaları).

Dezenfeksiyon

Mikrobiyoloji laboratuvarında dezenfeksiyona çok sık başvurulması gerekir. En sık kullanılan dezenfektanlar şunlardır: %3-5 karbolik asit çözeltisi ve diğer yüksek fenollerin çözeltileri, %50-70 çözelti etil alkol, aynı konsantrasyonda bütil alkol,% 4 formaldehit çözeltisi,% 1-2 kloroform ve toluen çözeltileri,% 0,5 kloramin çözeltisi vb.

Konserve fabrikalarının mikrobiyoloji laboratuvarlarında masa yüzeyleri, tabaklar, zeminler ve mekan duvarları dezenfekte edilmektedir. Masa yüzeylerini dezenfekte etmek için sadece etil alkol solüsyonlarını değil aynı zamanda karbolik asit solüsyonlarını da kullanabilirsiniz.

Dezenfeksiyon kanalizasyon cihazları konserve fabrikalarında ve diğer yerlerde gıda işletmeleri% 5-10'luk bir ağartıcı çözeltisi ile üretilir. Dolaşımın dezenfeksiyonu için cam kaplar konserve fabrikalarında kullanılır klorlu su Litre başına en az 100 mg aktif klor içeren. Böyle bir çözelti hazırlamak için çamaşır suyu alın ve kalın bir kütle elde edilene kadar az miktarda su ile karıştırın. sütlü. Bu karışım suya eklenir, iyice karıştırılır ve bir gün bekletilir. Beyazlatıcı pudra reaksiyona girerek kalsiyum oksit hidrat - Ca(OH)2 - ve aktif klor oluşturur. Ca(OH)2 dibe çöker, çökelti üzerindeki çözelti berraklaştıktan sonra şeffaf ve yeşilimsi bir renk alır. Kabın bu solüsyonda bekletilmesi 10 dakika sürer. Klorlamadan sonra kap akan suda iyice yıkanmalıdır.

Aerobları izole etmek için bakteriyolojik yöntemin 1. aşamasının gerçekleştirilmesi:

İncelenen materyalden sabit bir preparat hazırlıyoruz, Gram yöntemini kullanarak lekeliyoruz, mikroskopi yapıyoruz ve tespit edilen mikroorganizmaları morfotinktoryal özelliklere göre belirliyoruz.

İncelenen materyali, "platformlu vuruş" yöntemini kullanarak yoğun besin ortamına sahip yarım tabağa ekiyoruz (materyalini sınırlı bir alanda bir Petri kabındaki yoğun besin ortamının yüzeyine uyguluyoruz ve ardından dağıtıyoruz) sık paralel şeritler halinde ekim)

Fincanlara ekim tarihini belirterek imza atalım ve 37° sıcaklıktaki termostata ters çevirerek 18-24 saat bekletelim.

Buhar sterilizatörü (otoklav) - basınç altında buhar sterilizasyonu.

Tıbbi ve mikrobiyolojik uygulamalarda en güvenilir ve evrensel sterilizasyon yöntemi, basınç altında buhar sterilizasyonudur. Sterilize edilecek nesnelerin ısıtıldığı bir otoklavda üretilir. doymuş buhar atmosferik basıncın üzerinde basınç altında. Manometre okumaları ile doymuş buhar sıcaklığı arasında aşağıdaki ilişki vardır:

Sıfır basınç normal atmosferik basıncı (760 mm Hg) düşünün.

Sterilizasyon yalnızca otoklav tam çalışır durumda olduğunda ve özel eğitimli personel tarafından uygun şekilde çalıştırıldığında elde edilir.Bu nedenle, fiziksel (maksimum termometre vb.), biyolojik (sporlarla biyotest) gerçekleştirilen sterilizasyon rejiminin sürekli izlenmesi gereklidir. mikroorganizmaların test kültürleri) ve kimyasal (kimyasal testler, tip göstergeleri IP) yolları

Otoklavların sterilizasyon rejiminin kontrolü yapılır kimyasal olarak otoklav her yüklendiğinde Kimyasal test - cam tüp kimyasal, belirli bir erime noktasına sahip, antipirin, resorsinol - 110±2°, benzoik asit - 120±2°, benzamid - 126+1°, üre, nikotinamid, D(+)-mannoz - 132+2°. Kimyasal testlere, eridiğinde maddeyi eşit şekilde renklendiren bir anilin boyası (fuksin, gentsnan menekşe vb.) eklenir. Şu anda, üzerine bir gösterge karışımı tabakası uygulanmış bir kağıt şeridi olan ve yalnızca sıcaklığın değil aynı zamanda sterilizasyon süresinin de operasyonel görsel izlenmesi için tasarlanan IS tipi göstergeler (Vinar, Rusya) daha sık kullanılmaktadır. (IS-120, IS-132) Sterilizasyon rejimi, Bacillus stearotermophilus BKM B-718 test kültürünün sporları ile bir biyotest kullanılarak üç ayda bir izlenir.

Pastör fırını- kuru ısı sterilizasyonu.

Silikon kauçuğa dayalı cam, metal ve kauçuk ürünler Pasteur fırınında sterilize edilir. Sterilizasyon modu: 160°C - 150 dakika; 180°C - 60 dakika Her döngü sırasında sterilizasyon modunun kontrolü, IS-160, IS-180 sterilizasyon göstergeleri kullanılarak gerçekleştirilir; üç ayda bir - Bacillus licheniformis test kültürünün sporları ile bir biyotest kullanılarak

Sterilizasyon Tablo 1.

Dezenfeksiyon Tablo 2.

Dışı metal bir mahfaza ile kaplanmış, çift duvarlı metal bir silindirdir. Birkaç vida kullanılarak büyük bir kapakla hava geçirmez şekilde kapatılmıştır. Emniyet valfi ve buhar valfi olan bir basınç göstergesi ile donatılmıştır.

Sterilizasyondan önce, su ölçüm camlı bir huni vasıtasıyla otoklavın içine kasa üzerinde belirtilen çizgiye kadar damıtılmış su dökülür. Sterilizasyon malzemesi sterilizasyon odasına yüklenir, bir kapakla sıkıca kapatılır, vidalanır ve ısıtma kaynağı açılır. Bu durumda buhar vanası açık bırakılır. Kaynama sırasında oluşan buhar, otoklavın duvarları arasından geçerek iç duvardaki deliklerden hazneye girer. Isıtma sırasında, önce buhar vanası yoluyla otoklavdan hava, ardından buhar çıkar. Sürekli bir kuru buhar akışının serbest bırakılması, havanın otoklavdan tamamen çıktığını gösterir: musluk kapalıdır ve o andan itibaren otoklavdaki basınç yavaş yavaş artmaya başlar, manometre üzerindeki ibre yükselir. Sterilizasyonun başlangıcı, manometre iğnesinin istenen basınca ulaştığı an olarak kabul edilir.

Şek. 3

Basınç göstergesi okuması şuna karşılık gelir: belirli sıcaklık otoklavda buhar: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.

Otoklavdaki malzeme çoğunlukla 0,1 MPa'da 20-30 dakika süreyle sterilize edilir. Sterilizasyonun sonunda ısıtma kaynağını kapatın (manometrenin iğnesi yavaş yavaş sıfıra ulaşır). Bundan sonra buhar vanasını açın ve kalan buharı boşaltın. Daha sonra kapağı dikkatlice söküp açın. Tamamen soğuduktan sonra sterilize edilmiş malzemeyi çıkarın.

Bulaşıkları, aletleri, kültür ortamlarını (jelatin ve karbonhidrat içeren ortamlar hariç), pansumanları vb. Sterilize etmek için bir otoklav kullanılabilir. Çalışırken güvenlik kurallarına uymalısınız. Otoklav kullanma hakkı belgesine sahip kişilerin çalışmasına izin verilir. Otoklavın servis kolaylığı kazan müfettişliği tarafından kontrol edilir.

Koch aparatı (Şekil 4), ısıyı iyi iletmeyen malzeme (linolyum, asbest) ile dış tarafı kaplanmış metal bir silindirdir. Tabana su dökülür ve sterilizasyon malzemesi standın üstüne yerleştirilir. Cihaz, termometre ve buhar çıkışı için delikleri olan konik bir kapakla kapatılmıştır. Alt kısımda suyun tahliyesi için bir musluk bulunmaktadır. Sterilizasyon, 100°C'de akan buharla 30-60 dakika süreyle gerçekleştirilir. Bu modda, spor oluşturan ve spor oluşturmayan mikropların bitkisel hücreleri ölür. 18-20 saat aralıklarla üç gün boyunca 30-60 dakika boyunca fraksiyonel sterilizasyon (üç kez), sporların bitkisel hücrelere çimlenmesi ve onlardan kurtulması için koşullar yaratmanıza olanak sağlar. Sterilizasyon arasındaki zaman aralıklarında sporlar çimlenir ve sonraki ısıtma sırasında ölür. Koch aparatı, 100 °C'nin üzerindeki sıcaklıklara dayanamayan malzemeleri (jelatin, süt, karbonhidrat ortamı vb.) sterilize eder.

100°C sıcaklığa dayanamayan protein ortamları ve kan serumu, su banyosunda 56-58°C'de fraksiyonel olarak sterilize edilir.

Kurutma kabini(Pastör fırını) (Şek. 5), üstü asbestle kaplı metal çift duvarlı bir dolaptır. Üst duvarda termometre ve havalandırma için delikler bulunur. Isıtılan hava aşağıdan duvarlar arasında yükselir ve üst açıklıktan, sterilize edilecek malzemenin raflara yerleştirildiği kabine girer. Sterilizasyon kuru ısı ile 150 °C'de 2 saat, 165-170 °C - 45 dakika, 180 °C - 15 dakika gerçekleştirilir.Cam eşyalar Pasteur fırınında sterilize edilir.Sterilizasyondan sonra kabinin bağlantısı kesilir. ısıtma kaynağı ve ancak tamamen soğuduktan sonra açılır.

Bakteriyel filtreler Sıvıları ısıtmadan sterilize etmek için kullanılır. Bunlar arasında Chamberlant, Berkefeld mumları ve Seitz asbest filtreleri (plakalar) bulunur.

Filtre mumları (Şekil 6) ince gözenekli maddelerden yapılmış içi boş silindirlerdir: katkılı kaolin kuvars kumu(Chamberlant mumları) ve infusorial toprak (Berkefeld mumları). Chamberlant mumları var çeşitli boyutlar mikropların geçtiği gözenekler. Büyük bakterilerin geçmesine izin veren mumlar L9, L1(bis), L3, orta boy olanlar - L5, L7, en küçükler - L9, L11 , L13 Berkefeld mumları gözeneklilik ile belirlenir W, N, V(U markalı mumlar en büyük gözeneklere sahiptir).

Seitz filtreleri çeşitli boyutlarda asbest plakalardır. Cihaz sterilizasyon için monte edilirken plaka aradaki ağın üzerine yerleştirilir. metal diskler(ortasında bir delik bulunan) vidalarla birbirine sıkıca bastırılır. Monte edilen filtre, bir tıpa aracılığıyla, yandan çıkışlı (Bunsen şişesi) ve kauçuk bir tüpe sahip bir şişeye yerleştirilir, kağıda sarılır ve 120 °C'de bir otoklavda 20-30 dakika sterilize edilir.

Malzemeyi filtrelemek için, Bunsen şişesine seyreltilmiş yağ içeren kauçuk bir tüp bağlayarak bir vakum oluşturun. el pompası Komovsky veya elektrikli vakum pompası.

İşin tamamlanması. Mikroplar optimum düzeyde yetiştirilir sıcaklık koşulları. Laboratuvarlarda bu amaçla hava veya su termostatları kullanılmaktadır.

(Şekil 7), aralarında bir su veya hava tabakası bulunan çift cidarlı metal bir dolaptır. Termostatın dış kısmı ısıyı zayıf ileten bir malzeme (asbest, linolyum) ile kaplanmıştır.

Pirinç. 4, 5, 6.

Termostatın içinde, yetiştirilen mikroorganizmaların tohum materyalini yerleştirmek için raflar bulunmaktadır. Termostatın üst kapağına yerleştirilmiş bir termostat kullanılarak termostattaki sabit sıcaklık korunur. Termostat cihazı maddelerin doğrusal genleşmesi prensibine dayanmaktadır. Termoregülatörler, farklı termal genleşme katsayılarına (pirinç, çinko) sahip herhangi iki metalin veya alkolle doldurulmuş bir metal "yastık", alkol ve eter, cıva veya belirli bir sıcaklıkta hacmini değiştiren diğer maddelerin bir karışımıdır. Termostat belirlenen normun üzerinde ısındığında metaller genleşir, kontaklar açılır ve daha fazla ısı akışı otomatik olarak geciktirilir. Sıcaklık düştükten sonra açılır elektrik ve ısı akışı devam eder.