Kuru fırının çalışma modu. Termal sterilizasyon yöntemleri Mekanik sterilizasyon yöntemi

Mikroorganizmaların yaşamı, koşullara yakından bağlıdır. çevre. Mikroorganizmaları etkileyen tüm çevresel faktörler, yararlı veya yıkıcı etkisi hem faktörün doğasına hem de mikroorganizmanın özelliklerine bağlı olan fiziksel, kimyasal ve biyolojik olmak üzere üç gruba ayrılabilir.

Fiziksel faktörler

Fiziksel faktörlerden en büyük etki sıcaklık, kurutma, radyant enerji ve ultrason mikroorganizmaların gelişimini etkiler.

Sıcaklık. Her mikroorganizmanın hayati aktivitesi belirli sıcaklık limitleri ile sınırlıdır. Bu sıcaklık bağımlılığı genellikle üç ana nokta ile ifade edilir: minimum - altında mikrobiyal hücrelerin çoğalmasının durduğu sıcaklık; optimum - mikroorganizmaların büyümesi ve gelişmesi için en iyi sıcaklık; maksimum - hücrelerin hayati aktivitesinin zayıfladığı veya durduğu sıcaklık. Optimum sıcaklık genellikle doğal yaşam ortamının sıcaklık koşullarına karşılık gelir.

Sıcaklıkla ilgili tüm mikroorganizmalar psikrofillere, mezofillere ve termofillere ayrılır.

Psikrofiller (Yunan psikrosundan - soğuk, phileo - aşk) veya soğuğu seven mikroorganizmalar, nispeten büyür Düşük sıcaklık: minimum sıcaklık- 0 °C, optimal - 10-20 °C, maksimum - 30 °C. Bu grup, içinde yaşayan mikroorganizmaları içerir. kuzey denizleri ve okyanuslar, toprak, atık su Ah. Buna ışık ve demir bakterileri ile soğukta (0°C'nin altında) gıdaların bozulmasına neden olan mikroplar da dahildir.

Mezofiller (Yunan mezosundan - orta) - çoğu saprofit ve tüm patojenik mikroorganizmalar dahil olmak üzere en kapsamlı grup. Onlar için optimum sıcaklık 28-37°C, minimum 10°C, maksimum 45°C'dir.

Termofiller (Yunan termosundan - ısı, ısı) veya ısıyı seven mikroorganizmalar, 55 ° C'nin üzerindeki sıcaklıklarda gelişirler, onlar için minimum sıcaklık 30 ° C, optimum 50-60 ° C ve maksimum 70-75 ° C'dir. Sıcakta bulunurlar. maden suyu kaynakları, toprağın yüzey tabakası, kendiliğinden ısınan substratlar (gübre, saman, tahıl), insan ve hayvanların bağırsakları. Termofiller arasında birçok spor formu vardır.

Yüksek ve düşük sıcaklıkların mikroorganizmalar üzerinde farklı etkileri vardır. Bazıları yüksek sıcaklıklara karşı daha hassastır. Ayrıca, maksimum sıcaklığın üzerindeki sıcaklık ne kadar yüksek olursa, hücre proteinlerinin denatürasyonuna (pıhtılaşmasına) bağlı olarak mikrobiyal hücrelerin ölümü o kadar hızlı gerçekleşir.

Mezofilik bakterilerin vejetatif formları 60°C'de 30-60 dakikada, 80-100°C'de 1-2 dakikada ölürler. Bakteri sporları yüksek sıcaklıklara çok daha dayanıklıdır. Örneğin, şarbon basili sporları 10-20 dakika kaynamaya ve Clostridium botulism sporları 6 saat dayanır Sporlar dahil tüm mikroorganizmalar 165-170 ° C sıcaklıkta bir saat (kuru bir ısı kabininde) veya 1 atm basınçta (otoklavda) 30 dakika buhar etkisi altında ölür.

Yüksek sıcaklıkların mikroorganizmalar üzerindeki etkisi, sterilizasyonun temelidir - çeşitli nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen salınması (aşağıya bakın).

Birçok mikroorganizma düşük sıcaklıklara karşı son derece dirençlidir. Salmonella tifo ve Vibrio cholerae buzda uzun süre hayatta kalır. Bazı mikroorganizmalar sıvı hava sıcaklıklarında (-190°C) canlı kalırken bakteri sporları -250°C'ye kadar sıcaklıklara dayanabilir.

Sadece belirli türler patojenik bakteriler düşük sıcaklıklara karşı hassastır (örneğin bordetella boğmaca ve parapertussis, Neisseria meningococcus, vb.). Mikroorganizmaların bu özellikleri dikkate alınır. laboratuvar teşhisi ve test materyali taşınırken - laboratuvara soğutmadan korunarak teslim edilir.

Düşük sıcaklıkların etkisi, korumak için yaygın olarak kullanılan çürütücü ve fermantasyon işlemlerini durdurur. Gıda Ürünleri V soğutma üniteleri, mahzenler, buzullar. 0 ° C'nin altındaki sıcaklıklarda, mikroplar askıya alınmış bir animasyon durumuna girer - metabolik süreçlerde bir yavaşlama meydana gelir ve üreme durur. Ancak, eğer uygun sıcaklık koşulları ve besin ortamı, mikrobiyal hücrelerin hayati fonksiyonları geri yüklenir. Mikroorganizmaların bu özelliği, laboratuvar uygulamalarında mikrop kültürlerini düşük sıcaklıklarda korumak için kullanılır. Yüksek ve düşük sıcaklıklardaki hızlı değişim (donma ve çözülme) ayrıca mikroorganizmalar üzerinde zararlı bir etkiye sahiptir - bu, hücre zarlarının yırtılmasına yol açar.

Kurutma. Su, mikroorganizmaların normal çalışması için gereklidir. Kurutma, sitoplazmanın dehidrasyonuna, sitoplazmik zarın bütünlüğünün bozulmasına yol açar, bunun sonucunda mikrobiyal hücrelerin beslenmesi bozulur ve ölümleri meydana gelir.

Son teslim tarihi farklı şekiller Kurutma etkisi altındaki mikroorganizmalar önemli ölçüde farklılık gösterir. Örneğin, patojenik Neisseria (meningokok, gonokok), leptospira, soluk treponema ve diğerleri birkaç dakika sonra kurutulduğunda ölürler. Vibrio cholerae kurumaya 2 gün, salmonella tifo - 70 gün ve Mycobacterium tuberculosis - 90 gün dayanır. Ancak tüberküloz hastalarının patojenlerin kuru bir protein kılıfı ile korunduğu kurumuş balgamı 10 ay boyunca bulaşıcı kalır.

Sporlar özellikle kurumaya ve diğer çevresel etkilere karşı dirençlidir. Şarbon basili sporları, 10 yıl boyunca çimlenme kabiliyetini ve 20 yıla kadar küf sporlarını korur.

Kurutmanın mikroorganizmalar üzerindeki olumsuz etkisi uzun süredir sebze, meyve, et, balık ve şifalı otları korumak için kullanılmaktadır. Aynı zamanda, koşullar altında yüksek nem, bu tür ürünler mikropların hayati aktivitesinin restorasyonu nedeniyle hızla bozulur.

Mikroorganizma kültürlerinin, aşıların ve diğer biyolojik preparatların saklanması için dondurarak kurutma yöntemi yaygın olarak kullanılmaktadır. Yöntemin özü, mikroorganizmaların veya müstahzarların önce dondurulması ve ardından vakum altında kurutulması gerçeğinde yatmaktadır. Aynı zamanda, mikrobiyal hücreler askıya alınmış bir animasyon durumuna girerler ve biyolojik özelliklerini birkaç ay veya yıl boyunca korurlar.

radyant enerji. Doğadaki mikroorganizmalar sürekli olarak maruz kalmaktadır. Güneş radyasyonu. Direkt güneş ışığı, fotosentetik bakteriler (yeşil ve mor kükürt bakterileri) dışında birçok mikroorganizmanın birkaç saat içinde ölümüne neden olur. Güneş ışığının yıkıcı etkisi ultraviyole ışınlarının (UV ışınları) aktivitesinden kaynaklanmaktadır. Hücre enzimlerini etkisiz hale getirirler ve DNA'ya zarar verirler. Patojenik bakteriler saprofitlere göre UV ışınlarına karşı daha hassastır. Bu nedenle, mikrobiyal kültürleri laboratuvarda karanlıkta saklamak daha iyidir. Buchner'ın deneyimi bu açıdan aydınlatıcıdır.

İnce bir agar tabakasına sahip bir Petri kabında, herhangi bir bakteri kültürünün bol miktarda aşılanması gerçekleştirilir. Tohumlu bardağın dış yüzeyine siyah kağıttan kesilen harfler yapıştırılarak örneğin "tifüs" kelimesi oluşturulur. Ters çevrilmiş kap 1 saat doğrudan güneş ışığına maruz bırakılır, ardından kağıtlar çıkarılır ve kap 37 ° C'deki termostatta bir gün bekletilir. Agarın sadece yapıştırılmış harflerle UV ışınlarından korunan yerlerinde bakteri üremesi gözlenir. Agarın geri kalanı temiz kalır, yani mikroorganizma üremesi yoktur (Şekil 11).

Dış çevrenin iyileştirilmesinde doğal bir faktör olarak güneş ışığının önemi büyüktür. Havayı, suyu doğal rezervuarlardan, toprağın üst katmanlarını patojenik bakterilerden arındırır.

UV ışınlarının bakterisidal (bakterileri yok eden) etkisi havayı sterilize etmek için kullanılır. kapalı mekanlar(ameliyathaneler, soyunma odaları, kutular vb.) ile su ve süt. Bu ışınların kaynağı ultraviyole radyasyon lambaları, bakteri öldürücü lambalardır.

Diğer radyan enerji türleri - X-ışınları, α-, β-, γ-ışınları, yalnızca büyük dozlarda, yaklaşık 440-280 J / kg'da mikroorganizmalar üzerinde zararlı bir etkiye sahiptir. Mikropların ölümü, nükleer yapıların ve hücresel DNA'nın yok edilmesinden kaynaklanmaktadır. Küçük dozlarda radyasyon, mikrobiyal hücrelerin büyümesini uyarır. Mikroorganizmalar, yüksek organizmalara göre radyoaktif radyasyona karşı çok daha dirençlidir. Uranyum cevheri yataklarında yaşayan bilinen tiyonik bakteriler. Nükleer reaktörlerin suyunda 20–30 kJ/kg iyonlaştırıcı radyasyon konsantrasyonunda bakteri bulundu.

İyonlaştırıcı radyasyonun bakterisidal etkisi, belirli gıda ürünlerini korumak, biyolojik preparatları (serumlar, aşılar vb.) sterilize etmek için kullanılırken, sterilize edilecek malzemenin özellikleri değişmez.

İÇİNDE son yıllar radyasyon yöntemi, tek kullanımlık ürünleri - polistiren pipetler, Petri kapları, serolojik reaksiyonlar için kuyular, şırıngalar ve ayrıca dikiş malzemesi - katgüt vb. sterilize eder.

ultrason Mikrobiyal hücrelerde önemli hasara neden olur. Ultrasonun etkisi altında, sitoplazmanın sıvı ortamındaki gazlar aktive edilir ve hücre içinde yüksek basınç oluşur (10.000 atm'ye kadar). Bu, hücre zarının yırtılmasına ve hücre ölümüne yol açar. Ultrason, gıda ürünlerini (süt, meyve suları), içme sularını sterilize etmek için kullanılır.

Yüksek basınç. Bakteriler ve özellikle sporları mekanik basınca karşı dirençlidir. Doğada 100-900 atm basınç altında 1000-10000 m derinlikte denizlerde ve okyanuslarda yaşayan bakteriler bulunmaktadır. Bazı bakteri türleri 3000-5000 atm'ye kadar basınca ve bakteri sporlarına - hatta 20.000 atm'ye kadar dayanabilir.

Kimyasal Faktörler

Kimyasalların mikroorganizmalar üzerindeki etkisi, kimyasal bileşiğin doğasına, konsantrasyonuna ve mikrobiyal hücrelere maruz kalma süresine bağlı olarak değişir. Konsantrasyona bağlı olarak, bir kimyasal madde bir besin kaynağı olabilir veya mikroorganizmaların hayati aktivitesi üzerinde baskılayıcı bir etkiye sahip olabilir. Örneğin, %0.5-2 glikoz çözeltisi mikropların büyümesini uyarır ve %20-40 glikoz çözeltileri mikrobiyal hücrelerin çoğalmasını geciktirir.

Mikroorganizmalar üzerinde zararlı etkisi olan birçok kimyasal bileşik tıbbi uygulamada dezenfektan ve antiseptik olarak kullanılmaktadır.

Dezenfeksiyon için kullanılan kimyasallara dezenfektan denir. Dezenfeksiyon, çeşitli çevresel nesnelerde patojenik mikroorganizmaların yok edilmesini amaçlayan önlemler olarak anlaşılmaktadır. Dezenfektanlar arasında halojen bileşikleri, fenoller ve türevleri, ağır metallerin tuzları, bazı asitler, alkaliler, alkoller vb. Birçok dezenfektan, makroorganizmanın dokuları üzerinde zararlı etkiye sahiptir.

Antiseptikler, mikroorganizmaların ölümüne neden olabilen veya büyümelerini ve üremelerini geciktirebilen kimyasal maddelerdir. Terapötik amaçlarla (kemoterapi) ve ayrıca bir kişinin yaralarını, cildini ve mukoza zarlarını dezenfekte etmek için kullanılırlar. Hidrojen peroksit, iyodin alkollü çözeltileri, parlak yeşil, potasyum permanganat çözeltileri vb., Antiseptik özelliklere sahiptir.Bazı antiseptik maddeler (asetik, kükürtlü, benzoik asitler vb.) İnsanlara zararsız dozlarda gıda muhafazasında kullanılır.

Etki mekanizmasına göre, antimikrobiyal aktiviteye sahip kimyasallar birkaç gruba ayrılabilir.

1. Yüzey aktif maddeler (yağ asitleri, sabunlar ve diğer deterjanlar) yüzey geriliminde azalmaya neden olarak arızaya neden olur hücre çeperi ve mikroorganizmaların sitoplazmik zarı.

2. Fenol, kresol ve türevleri mikrobiyal proteinlerin pıhtılaşmasına neden olur. Mikrobiyolojik uygulamalarda ve enfeksiyon hastalıkları hastanelerinde bulaşıcı materyalin dezenfeksiyonunda kullanılırlar.

3. Mikrobiyal proteinlerle etkileşime giren oksitleyici maddeler, enzimlerin aktivitesini bozar, protein denatürasyonuna neden olur. Aktif oksitleyici maddeler, içme suyunu dezenfekte etmek için kullanılan klor ve ozondur. Klor türevleri (klor, kloramin) dezenfeksiyon amaçlı yaygın olarak kullanılmaktadır. Oksitleyici özellikler hidrojen peroksit, potasyum permanganat, iyot vb.

4. Formaldehit, dezenfeksiyon için %40 solüsyon (formalin) olarak kullanılır. Mikroorganizmaların bitkisel ve spor formlarını öldürür. Formalin, mikrobiyal hücre proteinlerinin amino gruplarını bloke eder ve denatürasyonlarına neden olur.

5. Ağır metal tuzları (cıva, kurşun, çinko, altın vb.) mikrobiyal hücre proteinlerini pıhtılaştırarak onların ölümüne neden olur. Bazı metaller (gümüş, altın, cıva vb.) mikroorganizmalar üzerinde ihmal edilebilir konsantrasyonlarda bakterisidal etkiye sahiptir. Bu özelliğe oligodinamik etki denir (Latince oligolardan - küçük, dinamys - güç). Gümüş kaplardaki suyun, gümüş iyonlarının bakterisit etkisinden dolayı çürümediği kanıtlanmıştır. Blennore * yenidoğanların önlenmesi için uzun süredir% 1'lik gümüş nitrat çözeltisi kullanılmıştır. kolloidal çözümler organik bileşikler gümüş (protargol, collargol) ayrıca yerel bir antiseptik olarak kullanılır.

* (Blennore, gonokokların neden olduğu göz konjonktivasının iltihaplanmasıdır.)

Cıva preparatlarının güçlü bir antimikrobiyal etkisi vardır. Antik çağlardan beri cıva biklorür veya süblime (1:1000 seyreltmede) dezenfeksiyon için kullanılmıştır. Ancak, o sağlar toksik etki bir makroorganizmanın dokusu üzerindedir ve kullanımı sınırlıdır.

6. Boyalar (parlak yeşil, rivanol vb.) bakteri üremesini engelleme özelliğine sahiptir. Bir dizi boyanın çözeltileri antiseptik olarak kullanılır ve ayrıca ilgili mikrofloranın büyümesini engellemek için bazı besin ortamlarının bileşimine dahil edilir.

Bir dizi fiziksel ve kimyasal faktörün mikroorganizmalar üzerindeki yıkıcı etkisi, tıbbi ve sıhhi uygulamalarda yaygın olarak kullanılan aseptik ve antiseptik yöntemlerin temelini oluşturur.

Asepsis, fiziksel yöntemlere dayalı olarak bir nesnenin (yara, cerrahi alan, mikroorganizma kültürleri, vb.) mikrobiyal kontaminasyonunu önleyen bir önleyici tedbirler sistemidir.

Antiseptikler - çeşitli dezenfekte edici kimyasallar kullanarak yaradaki, tüm organizmadaki veya çevresel nesnelerdeki mikroorganizmaların yok edilmesini amaçlayan bir dizi önlem.

Biyolojik faktörler

Doğal yaşam alanı koşullarında, mikroorganizmalar izole olarak var olmazlar, ancak esas olarak simbiyoz, metabiyoz ve antagonizmaya indirgenen karmaşık ilişkiler içindedirler.

Simbiyoz, farklı türlerin organizmalarının birlikte yaşamasıdır ve onlara karşılıklı fayda sağlar. Aynı zamanda birlikte, ayrı ayrı her birinden daha iyi gelişirler.

Rhizobia ve baklagiller arasında, ipliksi mantarlar ve mavi-yeşil algler (likenler) arasında simbiyotik ilişkiler vardır: Laktik asit bakterileri ve alkol mayasının simbiyozu, bazı laktik asit ürünlerini (kefir, kımız) hazırlamak için kullanılır.

Metabiyoz, bir tür mikroorganizmanın metabolik ürünlerinin diğerlerinin gelişimi için gerekli koşulları yarattığı bir ilişki türüdür. Örneğin, protein maddelerini parçalayan çürütücü mikroorganizmalar, ortamda amonyum bileşiklerinin birikmesine katkıda bulunur ve nitrifikasyon bakterilerinin büyümesi ve gelişmesi için uygun koşullar yaratır. Ve iyi havalandırılmış toprakta anaerobların gelişimi, serbest oksijeni emen aeroblar olmadan imkansız olurdu.

Metabiyotik ilişkiler toprak mikroorganizmaları arasında yaygındır ve doğadaki maddelerin döngüsünün temelini oluşturur.

Antagonizm, bir mikroorganizmanın diğerinin gelişimini engellediği veya tamamen ölümüne neden olabileceği bir ilişki biçimidir. Var olma mücadelesi veren mikroorganizmalar arasında düşmanca ilişkiler gelişmiştir. Nerede yaşarlarsa yaşasınlar, aralarında besin kaynakları, hava oksijeni ve yaşam alanı için sürekli bir mücadele vardır. Bu nedenle, hastaların salgılarıyla dış ortama (toprak, su) giren çoğu patojenik bakteri, çok sayıda saprofit ile uzun süreli rekabete dayanmaz ve nispeten hızlı bir şekilde ölür.

Antagonizm, mikroorganizmaların birbirleri üzerindeki doğrudan etkilerinden veya metabolik ürünlerinin etkilerinden kaynaklanabilir. Örneğin, protozoa bakterileri yerken, fajlar onları parçalamaktadır. Yenidoğanların bağırsaklarında laktik asit bakterileri Bifidobacterium bifidum bulunur. Laktik asit salgılayarak çürütücü bakterilerin büyümesini baskılarlar ve böylece hala kararsız olan organizmayı bağırsak rahatsızlıklarından korurlar. bebekler. Yaşam sürecindeki bazı mikroorganizmalar, bakteri ve diğer mikroplar üzerinde zararlı etkisi olan çeşitli maddeler üretir. Bu maddeler antibiyotikleri içerir (bkz. "Antibiyotikler").

Kontrol soruları

1. Mikroorganizmaların yaşamsal faaliyetlerini hangi fiziksel faktörler etkiler?

2. Hangi maddeler dezenfektan olarak sınıflandırılır ve mikroorganizmalar üzerindeki etki mekanizmasında nasıl farklılık gösterirler?

3. Mikroorganizmalar arasında var olan ilişkileri listeler misiniz?

Sterilizasyon

Sterilizasyon üremenin azalmasıdır, yani çevresel nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen salınmasıdır.

Sterilizasyon çeşitli şekillerde gerçekleştirilir:

1) fiziksel (yüksek sıcaklığa, UV ışınlarına maruz kalma, bakteri filtrelerinin kullanımı);

2) kimyasal (çeşitli dezenfektanların, antiseptiklerin kullanımı);

3) biyolojik (antibiyotik kullanımı).

Laboratuvar uygulamasında genellikle fiziksel sterilizasyon yöntemleri kullanılır.

Belirli bir sterilizasyon yöntemini kullanma olasılığı ve uygunluğu, sterilize edilecek malzemenin özelliklerinden, fiziksel ve kimyasal özelliklerinden kaynaklanmaktadır.

Fiziksel yöntemler

Brülör alevinde veya alevde tutuşturma, hem bitkisel hücreler hem de mikroorganizmaların sporları öldüğü için nesnenin tamamen ayrıştığı bir sterilizasyon yöntemidir. Genellikle kalsine edilmiş bakteriyolojik özeler, spatulalar, pipetler, cam lamlar ve lameller, küçük aletler. Makas ve neşter, ateşin etkisi altında kesme yüzeyi donuklaştığı için kalsinasyon ile sterilize edilmemelidir.

Kuru ısı sterilizasyonu

Kuru ısı veya sıcak hava ile sterilizasyon Pasteur fırınlarında (kurutma fırınları) yapılmaktadır. Pasteur fırını, ısıya dayanıklı malzemelerden (metal ve asbest) yapılmış çift cidarlı bir kabindir. Kabini gaz brülörleri veya elektrikli ısıtıcılarla ısıtın. Elektrikli ısıtmalı dolaplar, gerekli sıcaklığı sağlayan regülatörlerle donatılmıştır. Sıcaklığı kontrol etmek için kabinin üst duvarındaki deliğe yerleştirilmiş bir termometre vardır.

Kuru ısı, esas olarak laboratuvar cam eşyalarını sterilize eder. Sterilizasyon için hazırlanan tabaklar, sterilize edilecek malzemenin eşit ve güvenilir bir şekilde ısıtılmasını sağlamak için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapağı sıkıca kapatılır, ısıtma cihazı açılır, sıcaklık 160-165 °C'ye getirilir ve bu sıcaklıkta 1 saat sterilize edilir.Sterilizasyon sonunda ısıtıcı kapatılır, ancak fırın soğuyana kadar dolap kapağı açılmaz; aksi takdirde soğuk hava dolaba girmek sıcak tabaklarda çatlamalara neden olabilir.

Pastör fırınında sterilizasyon, farklı sıcaklıklarda ve maruziyetlerde (sterilizasyon süresi) gerçekleştirilebilir (Tablo 1).

Sıvılar (besleyici ortam, izotonik sodyum klorür çözeltisi, vb.), kauçuktan ve sentetik malzemelerden yapılmış ürünler, sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için kuru ısı ile sterilize edilemez.

Pasteur fırınında sterilizasyonu kontrol etmek için ipek iplikler, spor oluşturan bakteri kültürü içinde nemlendirilir, kurutulur, steril bir Petri kabına konur ve Pasteur fırınına yerleştirilir. 165°C sıcaklıkta 1 saat sterilizasyon yapılır (kontrol için iplerin bir kısmı oda sıcaklığında bırakılır). Daha sonra sterilize edilen ve kontrol iplikleri, bir Petri kabındaki agar yüzeyine yerleştirilir veya et suyu içeren test tüplerine yerleştirilir ve 2 gün boyunca 37°C sıcaklıkta bir termostatta inkübe edilir. Pastör fırınının doğru çalışmasıyla, steril ipliklerin yerleştirildiği test tüplerinde veya besin ortamlı kaplarda bakteri sporları öleceğinden üreme olmayacak, sterilize edilmemiş (kontrol) ipliklerdeki bakteri sporları ise çimlenecek ve besin ortamlarında büyüme kaydedilecektir.

Pasteur fırınının içindeki sıcaklığı belirlemek için 165-170 ° C sıcaklıkta karamelize edilmiş sükroz veya yenilebilir toz şeker kullanabilirsiniz.

Pasteur fırınında sterilizasyon için laboratuvar cam malzemelerinin hazırlanması. Sterilizasyondan önce laboratuvar cam malzemeleri (Petri kutuları, dereceli ve Pasteur pipetleri, küçük şişeler, şişeler, test tüpleri) iyice yıkanmalı, kurutulmalı ve kağıda sarılmalıdır, aksi takdirde sterilizasyondan sonra tekrar hava bakterileri ile kontamine olabilir.

Petri kutuları, bir veya daha fazla parça kağıda sarılır veya özel metal kutulara yerleştirilir.

Test malzemesinin ağza girmesini önlemek için pipetlerin üst uçlarına pamuklu çubuklar yerleştirilir. Kademeli pipetler 4-5 cm genişliğinde uzun kağıt şeritler halinde sarılır, sarılan pipetin hacmi kağıt üzerine not edilir. Bazı durumlarda, dereceli pipetler ek kağıt sarma olmadan sterilize edilir.

Not. Pipetlerdeki derecelendirme zayıf bir şekilde görünüyorsa, sterilizasyondan önce eski haline getirilir. Pipete yağlı boya sürülür ve boyanın kurumasına izin vermeden baryum sülfat tozu bir bezle sürülür. Bundan sonra, sadece derecelendirme çentiklerinde kalan fazla boya bir bezle çıkarılır. Bu şekilde işlenen pipetler durulanmalıdır.

Pasteur pipetlerinin keskin uçları bir bek alevinde kapatılır ve her biri 3-5 parça olacak şekilde kağıda sarılır. Kılcal damarların kapalı uçlarını kırmamak için Pasteur pipetlerini dikkatlice sarın.

Şişeler, şişeler, test tüpleri pamuklu gazlı bezle kapatılır. Mantar, teknenin boynuna boyunun 2/3'ü kadar oturmalı, çok sıkı olmamalı, ancak çok gevşek olmamalıdır. Her kap için (test tüpleri hariç) mantarların üzerine bir kağıt kapak konur. Test tüpleri 5-50 parça halinde bağlanır ve kağıtla sarılır.

Not. Yüksek sıcaklıklarda, bardakların ve pipetlerin sarıldığı kağıt ve pamuk yünü sararır ve hatta kömürleşebilir, bu nedenle laboratuvar tarafından elde edilen her yeni kağıt türü kabul edilen sıcaklık rejiminde test edilmelidir.

Kontrol soruları

1. Sterilizasyon terimi ile kastedilen nedir?

2. Sterilizasyon yöntemleri nelerdir?

3. Ateşte kızartılarak sterilize edilen nedir?

4. Pasteur fırınının cihazını ve çalışma şeklini tanımlayın.

5. Pasteur fırınında neler sterilize edilir?

6. Cam eşyalar sterilizasyon için nasıl hazırlanır?

7. Kültür ortamını ve kauçuk nesneleri Pasteur fırınında sterilize etmek neden imkansız?

Egzersiz yapmak

Sterilizasyon için Petri kutuları, dereceli pipetler, Pasteur pipetleri, test tüpleri, şişeler ve küçük şişeler hazırlayın.

Kaynatarak sterilizasyon

Kaynatma, sterilize edilen malzemede spor olmaması koşuluyla sterilizasyonu garanti eden bir sterilizasyon yöntemidir. Aletlerin, camın ve şırıngaların işlenmesinde kullanılır. metal mutfak eşyaları kauçuk borular vb.

Kaynatma sterilizasyonu genellikle bir sterilizatörde gerçekleştirilir - metal kutu dar kapaklı dikdörtgen şekil. Sterilize edilecek malzeme sterilizatördeki file üzerine yerleştirilir ve su ile doldurulur. Kaynama noktasını artırmak ve su sertliğini ortadan kaldırmak için %1-2 sodyum bikarbonat ekleyin (damıtılmış su kullanmak daha iyidir). Sterilizatör bir kapakla kapatılır ve ısıtılır Sterilizasyonun başlangıcı suyun kaynama anı olarak kabul edilir, kaynama süresi 15-30 dakikadır. Sterilizasyon sonunda aletli file yan kulplardan özel kancalarla çıkartılır ve içindeki aletler steril cımbız veya forseps ile alınır ve diğer aletlerle birlikte kaynatılır.

Buhar sterilizasyonu iki şekilde gerçekleştirilir: 1) basınç altında buhar; 2) akan buhar.

Buhar basınçlı sterilizasyon otoklavda üretilmiştir. Bu sterilizasyon yöntemi, doymuş su buharının atmosfer basıncının üzerinde bir basınçta sterilize edilmiş malzemeler üzerindeki etkisine dayanır. Bu sterilizasyon sonucunda mikroorganizmaların hem vejetatif hem de spor formları tek bir tedavi sırasında ölür.

Otoklav (Şek. 12) - dıştan metal bir kasa ile kaplanmış, bir kapakla hava geçirmez şekilde kapatılmış, kazana menteşeli cıvatalarla sıkıca vidalanmış büyük bir kazan. Sterilizasyon odası olarak adlandırılan daha küçük çaplı başka bir dış kazan içine yerleştirilir. Sterilize edilecek eşyalar bu hazneye yerleştirilir. Her iki kazan arasında su-buhar odası adı verilen boş bir alan vardır. Bu hazneye, özel bir su ölçüm tüpü üzerinde işaretlenmiş, dışarıya sabitlenmiş bir huniden belirli bir seviyeye kadar su dökülür. Su buhar odasında kaynatıldığında buhar üretilir. Sterilizasyon odası, basınç gerekli seviyenin üzerine çıktığında buharın çıkması için emniyet valfli bir çıkış musluğu ile donatılmıştır. Sterilizasyon haznesinde oluşan basıncı belirlemek için bir manometre kullanılır.

Pirinç. 12. Otoklav şeması. M - basınç göstergesi; PC - emniyet valfi; B - su için huni; K 2 - su tahliyesi için musluk; K 3 - buhar tahliyesi için dokunun

Normal atmosferik basınç (760 mm Hg) sıfır olarak alınır. Manometre okumaları ile sıcaklık arasında belirli bir ilişki vardır (Tablo 2).

Otomatik mod kontrollü otoklavlar şu anda mevcuttur. Alışıldık manometreye ek olarak, basıncın ayarlanan değerin üzerine çıkmasını önleyen ve böylece otoklavda istenen sıcaklığın sabit kalmasını sağlayan bir elektrokontakt manometre ile donatılmıştır.

Çeşitli besin ortamları (doğal protein içerenler hariç), sıvılar (izotonik sodyum klorür çözeltisi, su vb.) basınç altında buharla sterilize edilir; aletler, özellikle kauçuk parçaları olanlar.

Besin ortamının otoklavlanma sıcaklığı ve süresi, besin ortamının hazırlanması için tarifte belirtilen bileşimlerine göre belirlenir. Örneğin basit besiyerleri (et-pepton agar, et-pepton suyu) 120°C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir. Bununla birlikte, bu sıcaklıkta doğal proteinler, karbonhidratlar ve ısıtılarak kolayca değiştirilebilen diğer maddeleri içeren ortamları sterilize etmek imkansızdır. Karbohidratlı ortamlar fraksiyonel olarak 100°C'de veya bir otoklavda 112°C'de (0.5 atm) 10-15 dakika sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, lastik hortumlu cihazlar, tapalar, bakteri mumları ve filtreler 120°C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir.

Dikkat! Otoklavlarda, enfekte olmuş malzeme de nötralize edilir. Mikroorganizma kültürlerini içeren kaplar ve test tüpleri, özel metal kovalara veya kapağında buhar geçişi için delikler bulunan tanklara konur ve otoklavda 126 °C'de (1,5 atm) 1 saat sterilize edilir.Aletler, spor oluşturan bakterilerle çalıştıktan sonra aynı şekilde sterilize edilir.

Yalnızca özel olarak eğitilmiş kişilerin otoklavla çalışmasına izin verilir ve bunlar, cihaza ekli talimatlarda belirtilen kurallara kesinlikle ve doğru bir şekilde uymak zorundadır.

Otoklavlama tekniği. 1. Çalışmadan önce, tüm parçaların servis verilebilirliğini ve kılavuzların alıştırmasını kontrol edin.

2. Kazanın dışına sabitlenmiş bir huniden su (damıtılmış veya kaynatılmış) su göstergesi camının üst işaretine kadar tortu oluşmayacak şekilde dökülür. Huninin altındaki musluk kapatılır.

3. Sterilize edilecek malzeme sterilizasyon haznesinde özel bir ağ üzerine yerleştirilir. Buharın aralarında serbestçe geçmesi gerektiğinden öğeler çok sıkı yüklenmemelidir, aksi takdirde doğru sıcaklığa kadar ısınmazlar ve steril olmayabilirler.

4. Kapak üzerindeki lastik conta daha iyi sızdırmazlık için tebeşirle ovulur.

5. Kapak kapatılarak otoklavın gövdesine cıvatalanır ve cıvatalar çapraz olarak çiftler halinde bükülür.

6. Sterilizasyon odasını dış havaya bağlayan egzoz musluğunu tamamen açın ve otoklavı ısıtmaya başlayın. Otoklav genellikle gaz veya elektrikle ısıtılır.

Otoklav ısıtıldığında su kaynar, ortaya çıkan buhar kazanların duvarları arasında ve kazanın iç duvarındaki özel deliklerden yükselir (bkz. Şekil 12), sterilizasyon odasına girer ve açık çıkış musluğundan çıkar. İlk önce buhar, otoklavda bulunan hava ile birlikte kaçar. Otoklavdaki tüm havanın dışarı atılması önemlidir, aksi takdirde basınç göstergesi otoklavdaki sıcaklığa karşılık gelmeyecektir.

Sürekli güçlü bir buhar jetinin görünümü, havanın otoklavdan tamamen çıkarıldığını gösterir; bundan sonra çıkış musluğu kapatılır ve otoklav içindeki basınç kademeli olarak yükselmeye başlar.

7. Sterilizasyonun başlangıcı, basınç göstergesi okumalarının belirtilen değere ulaştığı an olarak kabul edilir. Isıtma, otoklav içindeki basıncın belirli bir süre değişmeyecek şekilde ayarlanmıştır.

8. Sterilizasyon süresi dolduktan sonra otoklavın ısıtılması durdurulur, çıkış musluğundan buhar dışarı verilir. Manometre iğnesi sıfıra düştüğünde kapağı açın. Otoklavda kalan buharın yanıkları önlemek için kapağı kendinize doğru açın.

Otoklavdaki sıcaklık seviyesi, yani manometrenin doğruluğu kontrol edilebilir. Bunun için belirli bir erime noktasına sahip çeşitli maddeler kullanılır: antipirin (113 °C), resorsinol ve kükürt (119 °C), benzoik asit (120 °C). Bu maddelerden biri önemsiz miktarda boya (macenta veya metilen mavisi) ile karıştırılır ve cam bir tüpe boşaltılır. dikey pozisyon sterilize edilecek malzeme arasında. Sıcaklık yeterli ise madde eriyecek ve ilgili boyanın rengine dönüşecektir.

Sterilizasyonun etkinliğini kontrol etmek için, bilinen bir spor kültürü olan bir test tüpü otoklava yerleştirilir. Otoklavlamadan sonra, tüp 24-48 saat süreyle bir termostata aktarılır, üreme olup olmadığı not edilir. Büyüme olmaması, cihazın doğru çalıştığını gösterir.

Buharlı Sterilizasyon Koch aparatında üretilir. Bu yöntem, sterilize edilecek nesnenin 100 °C'nin üzerindeki bir sıcaklıkta değiştiği durumlarda kullanılır. Sıvı buhar, üre, karbonhidrat, süt, patates, jelatin vb. içeren besin ortamlarını sterilize eder.

Koch aparatı (kazan), dış tarafı keçe veya asbest ile kaplanmış (ısı transferini azaltmak için) metal bir silindirdir. Silindir, buharın çıkması için bir deliği olan konik bir kapakla kapatılmıştır. Silindirin içinde, seviyesine kadar su dökülen bir stand vardır. Standın üzerine sterilize edilecek malzemenin yerleştirildiği delikli bir kova yerleştirilir. Koch cihazı gaz veya elektrikle ısıtılır. Sterilizasyon süresi, buharın kapağın kenarlarından ve buhar çıkışından güçlü bir şekilde salındığı andan itibaren sayılır. 30-60 dakika sterilize edin. Sterilizasyonun sonunda ısıtma durdurulur. Malzemenin bulunduğu kova aparattan çıkarılır ve ertesi güne kadar oda sıcaklığında bekletilir. Isınma 30-60 dakika 100 ° C sıcaklıkta arka arkaya 3 gün yapılır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. İlk ısıtma sırasında mikropların bitkisel formları ölürken spor formları kalır. Gün boyunca sporların çimlenme ve sterilizasyonun ikinci gününde ölen bitkisel formlara dönüşme zamanı vardır. Bazı sporların çimlenmeye vakti olmayabileceğinden, materyal 24 saat daha bekletilir ve ardından üçüncü bir sterilizasyon yapılır. Koch aparatında akan buhar ile sterilizasyon gerektirmez özel kontrol, çünkü gösterge doğru işlem Hazırlanan kültür ortamının steril olması cihaza hizmet eder. Buharlı sterilizasyon, kapak sökülerek ve çıkış musluğu açıkken bir otoklavda da yapılabilir.

Kontrol soruları

1. Hangi kültür besiyerleri buharla sterilize edilebilir?

2. Sterilizatör nedir ve nasıl çalışır?

3. Kaynar sterilizasyon için neden damıtılmış su kullanılmalıdır?

4. Otoklavın cihazını ve çalışma şeklini tanımlayın.

5. Otoklavda ne sterilize edilir?

6. Otoklavlamada doğru sterilizasyonu ne kontrol eder?

7. Buhar sterilizasyonu nedir?

8. Koch aparatının cihazını tanımlayın.

9. Fraksiyonel sterilizasyonun amacı nedir?

Egzersiz yapmak

Formu doldur.

Fraksiyonel sterilizasyon, bir Koch sarıcıda da gerçekleştirilebilir.

Koch Pıhtılaştırıcı, peynir altı suyu ve yumurta besin ortamlarını pıhtılaştırmak için kullanılır ve ortamın sıkıştırılmasıyla eş zamanlı olarak sterilize edilir.

Koch sarıcı dış tarafı kapalı, düz, çift cidarlı metal bir kutudur ısı yalıtım malzemesi. Dış duvarın üst kısmında bulunan özel bir delikten duvarlar arasındaki boşluğa su dökülür. Delik, içine bir termometrenin yerleştirildiği bir tıpa ile kapatılır. Cihazı iki kapakla kapatın: cam ve metal. Cam kapak sayesinde pıhtılaşma sürecini gözlemleyebilirsiniz. Ortamlı test tüpleri, sarıcının altına eğimli bir konumda yerleştirilir.

Sarıcının ısıtılması gaz veya elektrik kullanılarak gerçekleştirilir. Ortamlar bir kez 90 °C sıcaklıkta 1 saat veya fraksiyonel olarak - 3 gün üst üste 80 °C'de 1 saat sterilize edilir.

Tyndallization* - düşük sıcaklıklarda fraksiyonel sterilizasyon - 60 ° C sıcaklıkta kolayca yok edilen ve denatüre olan maddeler (örneğin, protein sıvıları) için kullanılır. Sterilize edilecek malzeme su banyosunda veya özel cihazlar arka arkaya 5 gün boyunca bir saat boyunca 56-58 ° C sıcaklıkta termostatlarla.

* (Sterilizasyon yöntemi, onu öneren Tyndall'ın adını almıştır.)

pastörizasyon- Spor olmayan mikrop formlarının yok edilmesi için Pasteur tarafından önerilen 65-70 ° C'de 1 saat sterilizasyon. Süt, şarap, bira, meyve suları ve diğer ürünleri pastörize edin. Süt, laktik asit ve patojen bakterilerden (Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Shigella, Salmonella, Staphylococcus vb.) kurtulmak için pastörize edilir. Biranın, meyve sularının, şarabın pastörizasyonu, çeşitli fermantasyon türlerine neden olan mikroorganizmaları öldürür. Pastörize gıdalar en iyi buzdolabında saklanır.

Kontrol soruları

1. Koch sarıcının amacı ve cihazı nedir?

2. Sarıcıda sterilizasyon yöntemleri nelerdir?

3. Tyndalizasyon nedir?

4. Pastörizasyon nedir?

Ultraviyole ışınlama ile sterilizasyon

UV ışınları ile sterilizasyon kullanılarak gerçekleştirilir. özel kurulumlar- antiseptik lambalar. UV ışınları yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve sadece vejetatif hücrelerin değil sporların da ölümüne neden olabilir. UV ışınlaması hastanelerde, ameliyathanelerde, çocuk bakımevlerinde vb. havayı sterilize etmek için kullanılır. Bir mikrobiyoloji laboratuvarında, çalışmadan önce bir kutu UV ışınlarıyla işlenir.

Kontrol soruları

1. Ultraviyole ışınlarının özellikleri nelerdir?

2. Ultraviyole radyasyonla sterilizasyon hangi durumlarda kullanılır?

Bakteri filtreleri ile mekanik sterilizasyon

Filtrasyon sterilizasyonu, sterilize edilecek nesnelerin ısıtıldığında değiştiği durumlarda kullanılır. Filtrasyon, çeşitli ince gözenekli malzemelerden yapılmış bakteri filtreleri kullanılarak gerçekleştirilir. Filtrelerin gözenekleri, bakterilerin mekanik olarak tutulmasını sağlamak için yeterince küçük (1 µm'ye kadar) olmalıdır, bu nedenle bazı yazarlar, filtrasyonun mekanik yöntemler sterilizasyon.

Filtrasyon yöntemi, protein, serum, bazı antibiyotikler içeren besin ortamlarını sterilize eder ve ayrıca bakterileri virüslerden, fajlardan ve ekzotoksinlerden ayırır.

Mikrobiyolojik uygulamada Seitz asbest filtreleri, membran filtreler ve Chamberlan ve Berkefeld filtreleri (mumlar) kullanılmaktadır.

Seitz filtreleri, asbest ve selüloz karışımından yapılan disklerdir. Kalınlıkları 3-5 mm, çapları 35-140 mm'dir. Yerli sanayi iki dereceli filtreler üretir: "F" (filtreleme) - asılı parçacıkları tutar, ancak bakterileri geçirir; "SF" (sterilizasyon) - daha küçük gözeneklerle, bakterileri tutarken virüsleri geçirir. Buruşuk asbest levhaların yanı sıra kırık ve çatlak levhalar çalışmaya uygun değildir.

Membran filtreler nitroselülozdan yapılmıştır. Onlar disklerdir. Beyaz renk 0,1 mm kalınlık ve 35 mm çap. Gözenek boyutuna bağlı olarak, 1, 2, 3, 4 ve 5 olarak adlandırılırlar (Tablo 3).

1 numaralı filtre sterilizasyon için en uygundur Listelenenlere ek olarak, filtrelenmiş sıvıyı içinde bulunan büyük parçacıklardan kurtarmak için tasarlanmış sözde ön filtreyi de üretirler.

Chamberlant ve Berkefeld filtreleri (mumlar) bir ucu kapalı içi boş silindirlerdir. Chamberlain mumları, kum ve kuvars ile karıştırılmış kaolinden yapılır. Gözenek boyutuna göre standardize edilirler ve L1, L2, L3...L13 olarak gösterilirler. Berkefeld filtreleri (mumlar) demlik toprağından hazırlanır, 3-4, 4-7, 8-12 mikron gözenek çapına karşılık gelen gözeneklerin boyutuna göre V, N, W olarak adlandırılırlar.

Bakteriyel filtrelerle çalışma aşağıdaki gibi yapılır. Filtre, filtre alıcısına takılan özel bir tutucuya sabitlenmelidir. Alıcı genellikle bir Bunsen şişesidir. Çoğu durumda paslanmaz çelikten yapılmış tutucular iki parçadan oluşur: tabanı olmayan bir silindir şeklindeki üst kısım ve bir boru ile biten destek parçası olan alt kısım. Seitz filtreler pürüzlü yüzeyi yukarı gelecek şekilde yerleştirilir. metal örgü ve üst ve arasında vidalarla sıkıca sıkıştırılmış alt Kulp. Monte edilmiş filtre, Bunsen şişesinin boynuna yerleştirilmiş bir lastik tıpaya sabitlenmiştir. Bir vakum pompasına bağlı olan şişenin çıkış borusuna bir pamuklu çubuk sokulur. Hazırlanan kurulum kağıda sarılır ve otoklavda 1 atm basınçta 20-30 dakika sterilize edilir. Monte edilmiş formdaki tüm cihaza Seitz filtresi de denir (Şek. 13).

Filtrasyondan hemen önce, Bunsen şişesinin çıkış ucu bir lastik boru ile bir yağ veya su püskürtme pompasına bağlanır. Sızdırmazlık oluşturmak için çeşitli parçaların derzleri parafinle doldurulur. Filtrelenecek sıvı aparatın silindirine dökülür ve alıcıda vakum oluşturmak için pompa çalıştırılır. Ortaya çıkan basınç farkı sonucunda filtre edilen sıvı filtre gözeneklerinden geçerek alıcıya geçer ve mikroplar filtre yüzeyinde kalır.

Membran filtreler kullanılmadan önce distile suda kaynatılarak sterilize edilir. Filtrelerin bükülmesini önlemek için önce distile suya konur, 50-60 °C sıcaklığa kadar ısıtılır ve 2-3 kez su değiştirilerek 30 dakika kısık ateşte kaynatılır. Filtre tutucu ve alıcı önceden sterilize edilir, cihaz aseptik koşullarda monte edilir. Metal ağ üzerindeki membran filtrenin yırtılmaması için altına steril filtre kağıdından daireler yerleştirilir. Daha sonra düz uçlu steril cımbızla membran filtreyi sterilizatörden alın ve parlak yüzeyi aşağı gelecek şekilde destek ızgarasının üzerine yerleştirin.

Otoklavda sterilize edilen mumlar (Chamberlant), kauçuk bir tüp vasıtasıyla bir alıcıya bağlanır ve filtrelenmiş bir sıvı ile bir kaba (genellikle bir silindir) indirilir. Filtreleme bir vakum pompası kullanılarak gerçekleştirilir. Alıcıya steril bir filtrat girer ve bakteriler mumun gözenekleri tarafından tutulur.

Membran ve asbest filtreleri tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır. Kullanımdan sonra mumlar kaynatılır. musluk suyu, daha sonra bir mufla fırınında kalsine edilmiştir.

Sonraki kullanımdan önce mumların bütünlüğü kontrol edilir. Mum, su dolu bir kaba indirilir ve içinden hava geçirilir. Mum yüzeyinde hava kabarcıkları oluşursa, mumda çatlaklar oluşmuş ve kullanılamaz hale gelmiştir.

Kontrol soruları

1. Filtre sterilizasyon yöntemi nedir? Bu yöntemle sterilize edilen nedir?

2. Hangi bakteri filtrelerini biliyorsunuz? Filtreleme cihazı nasıl monte edilir, hangi şartlara dikkat edilmelidir?

Kimyasal yöntemler

Bu tür bir sterilizasyon sınırlı ölçüde kullanılır ve temel olarak besleyici ortamların ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemeye hizmet eder.

Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamı bu koruyuculardan arındırmak gerekirse, 56 ° C'de bir su banyosunda ısıtılır (koruyucular buharlaşır).

Aşıların muhafazası için serum, mertiolat, borik asit, formalin vb. kullanılmaktadır.

biyolojik sterilizasyon

Biyolojik sterilizasyon, antibiyotik kullanımına dayanmaktadır. Bu yöntem virüslerin yetiştirilmesinde kullanılır.

Kontrol soruları

1. Kimyasal sterilizasyon nedir ve ne zaman kullanılır?

2. Biyolojik sterilizasyon nedir?

Ana sterilizasyon yöntemleri tabloda sunulmaktadır. 4.

1 (Sterilizasyon tamamlanmamıştır: sporlar sterilize edilen materyalde kalır.)

2 (Sterilizasyon tamamlanmamıştır: virüsler sterilize edilen malzemede kalır.)

dezenfeksiyon

Mikrobiyolojik uygulamada çeşitli dezenfektanlar kullanılır: %3-5 fenol çözeltileri, %5-10 Lisol çözeltileri, %1-5 kloramin çözeltileri, %3-6 hidrojen peroksit çözeltileri, %1-5 formalin çözeltileri, 1:1000 (%0,1) dilüsyonda cıva klorür çözeltileri, 70° alkol vb.

Harcanan patolojik materyal (irin, dışkı, idrar, balgam, kan, beyin omurilik sıvısı) kanalizasyona verilmeden önce dezenfekte edilir. Kuru ağartıcı veya %3-5 kloramin solüsyonu ile dezenfeksiyon yapılır.

Patolojik materyal veya mikroorganizma kültürleri ile kontamine olmuş pipetler (dereceli ve Pasteur), cam spatulalar, lamlar ve lameller bir gün süreyle cam kavanozlar%3 fenol çözeltisi veya hidrojen peroksit ile.

Enfeksiyöz materyal ile çalışmanın sonunda, laboratuvar asistanı bir dezenfektan solüsyonu ile tedavi etmelidir. iş yeri ve eller. Masaüstünün yüzeyi, %3 fenol solüsyonu ile nemlendirilmiş bir parça pamuk yünü ile silinir. Eller %1'lik kloramin solüsyonu ile dezenfekte edilir. Bunu yapmak için bir pamuk top veya gazlı bez dezenfektan solüsyonla nemlendirin ve sol eli, ardından sağ eli silin ve ardından ellerini ılık su ve sabunla yıkayın.

Dezenfektan seçimi, konsantrasyonu ve maruz kalma süresi (maruz kalma) biyolojik özellikler mikrop ve patojen mikroorganizmalar ile dezenfektanın temas edeceği ortamdan oluşacaktır. Örneğin, süblimat, fenol, alkoller, protein substratlarının (irin, kan, balgam) dezenfeksiyonu için uygun değildir, çünkü bunların etkisi altında protein pıhtılaşması meydana gelir ve pıhtılaşmış protein, mikroorganizmaları dezenfektanlara maruz kalmaktan korur.

Mikroorganizmaların spor formlarıyla enfekte olmuş materyali dezenfekte ederken,% 5'lik bir kloramin çözeltisi,% 1-2,5 aktif kloramin çözeltileri,% 5-10 formalin çözeltileri ve diğer maddeler kullanılır.

Çalışma sırasında gün boyunca gerçekleştirilen dezenfeksiyona akım ve iş sonunda - final denir.

Onlardan çalışma solüsyonlarının hazırlanması için dezenfektanlar ve reçeteler. Beyazlatıcı pudra- keskin bir klor kokusu olan beyaz topaklı toz, suda tamamen çözünmez. Bakterisidal etki, miktarı %28 ila %36 arasında değişen aktif klor içeriğine bağlıdır. %25'ten az aktif klor içeren ağartıcılar dezenfeksiyon için uygun değildir.

Uygun olmayan şekilde saklanırsa, çamaşır suyu ayrışır ve aktif klorun bir kısmını kaybeder. Ayrışma ısı, nem, güneş ışığı ile kolaylaştırılır, bu nedenle çamaşır suyu kuru, karanlık bir yerde, sıkıca kapatılmış bir kapta saklanmalıdır.

Kuru ağartıcı, insan ve hayvanların dışkılarını dezenfekte etmek için kullanılır (1 litre dışkıya 200 g ve 1 litre idrara 10 g oranında).

İlk %10'luk berraklaştırılmış ağartma solüsyonunun hazırlanması. 1 kg kuru çamaşır suyu alın, emaye bir kovaya koyun ve öğütün. Sonra döküldü soğuk su 10 l hacme kadar iyice karıştırın, kapağı kapatın ve serin bir yerde bir gün bekletin. Bundan sonra, elde edilen% 10'luk berraklaştırılmış çözelti dikkatlice boşaltılır ve birkaç kat gazlı bezden süzülür veya yoğun bir bezden süzülür. Ahşap tıpa ile kapatılmış koyu renkli cam şişelerde, serin bir yerde 10 günden fazla olmamak üzere saklayın. Gerekli konsantrasyondaki çalışma çözeltileri, kullanımlarından hemen önce ana çözeltiden hazırlanır. %0,2-10 oranında berraklaştırılmış ağartıcı solüsyonlarının hazırlanması için gerekli olan bazik solüsyon miktarı tabloda verilmiştir. 5.

Arıtılmış çamaşır suyu solüsyonlarının konsantrasyonu, dezenfekte edilecek nesnenin doğasına ve patojenin direncine bağlı olarak %0,2 ila %10 arasında seçilir.

kloramin - kristal madde beyaz veya sarımsı renkte, %24-28 oranında aktif klor içerir. Oda sıcaklığında suda iyi çözünür, bu nedenle dezenfeksiyondan hemen önce solüsyonları hazırlanır. %0.2-10 kloramin solüsyonları kullanın. Çözeltinin yüzde derişimi ile 1 ve 10 litre başına gram cinsinden kloramin miktarı arasındaki oran tabloda verilmiştir. 6.

Kloramini bir cam veya emaye kapta eritin. Kloramin solüsyonlarını zemin tıpası olan koyu cam bir kapta saklarken, aktiviteleri 15 güne kadar devam eder.

aktif kloramin Kloraminin dezenfekte edici özellikleri, 1:1 veya 1:2 oranında bir aktivatör ilave edilerek arttırılır. Amonyum bileşikleri - klorür, sülfat, amonyum nitrat - aktivatör olarak kullanılır. Aktif kloramin %0,5, 1 ve %2,5 konsantrasyonlarında kullanılır. Bunları kullanmadan hemen önce hazırlayın. Kloramin ve amonyum tuzu ayrı ayrı tartılır. Önce kloramin suda eritilir ve ardından aktivatör eklenir.

Aktive edilmiş kloramin çözeltilerinin geleneksel olanlara göre avantajı, bir aktivatör eklendiğinde aktif klorin salınımının hızlanmasıdır. Bu nedenle, ilacın sadece mikroorganizmaların vejetatif formları üzerinde değil, aynı zamanda sporları üzerinde de zararlı bir etkisi vardır. Aktif kloramin daha düşük konsantrasyonlarda ve daha düşük maruziyette kullanılır.

Fenol (karbolik asit), keskin karakteristik bir kokuya sahip, renksiz, iğne şeklinde kristallerdir. Işık, hava ve nemin etkisi altında kristaller koyu kırmızı bir renk alır. saklanan kapalı bankalar koyu camdan ve ışıktan korunan bir yerde.

Fenol suda, alkolde, eterde, katı yağlarda çözünür. Yüksek higroskopisiteye sahip olduğundan ortamdan nemi çeker ve sıvı hale gelir. Sıvı karbolik asit, %90 kristal fenol ve %10 su içerir.

Tabloda gösterilen şemaya göre kristalin fenol ve sıvı karbolik asitten hazırlanan %3-5 sulu karbolik asit solüsyonlarını uygulayın. 7. Fenolün aktivitesi suda çözündüğünde artar. sıcak su(40-50°C).

Dikkat! Cilde bulaşan kristalin fenol veya sıvı karbolik asit, cilt tahrişine ve yüksek konsantrasyonlarda - ciddi yanıklara neden olabilir. Bu nedenle karbolik asit çok dikkatli kullanılmalıdır. Solüsyon hazırlarken lastik eldiven giyin veya aşırı durumlarda ellerinizi vazelinle yağlayın.

Karbolik asit cilt ile temas ederse, hemen ılık su ve sabun veya 40 ° etil alkol ile yıkayın.

Not. Fenolün dezenfektan çözeltilerinin hazırlanması için sıvı karbolik asit kullanmak daha uygun ve daha güvenlidir.

Kontrol soruları

1. Mikrobiyolojik uygulamada hangi dezenfektanlar kullanılır?

2. Tanımlayın dış görünüş ve ağartıcı, kloramin, fenolün ana özellikleri.

3. Mikroorganizmaların spor formlarıyla enfekte olmuş materyalleri dezenfekte etmek için hangi dezenfektan solüsyonları kullanılır?

Egzersiz yapmak

2 litre %5 oranında arıtılmış ağartıcı solüsyonu hazırlayın; 500 ml %3 kloramin solüsyonu, 300 ml %1 aktif kloramin solüsyonu.

Dikkat! Çözümleri hazırlamaya başlamadan önce hesaplamaları yapın.

Aerobların izolasyonu için bakteriyolojik yöntemin 1. aşamasının gerçekleştirilmesi:

incelenen malzemeden sabit bir müstahzar hazırlıyoruz, Gram yöntemine göre lekeliyoruz, mikroskopi yapıyoruz ve tespit edilen mikroorganizmaları morfo-tinktoral özelliklerle tanımlıyoruz.

Test malzemesini yoğun bir besi ortamına sahip yarım tabağa “platform darbesi” yöntemini kullanarak ekiyoruz (malzemeyi sınırlı bir alanda bir Petri kabında yoğun bir besiyerinin yüzeyine uyguluyoruz ve ardından sık paralel darbelerle ekerek dağıtıyoruz)

Ekim tarihini belirten kapları imzalıyoruz ve 18-24 saat boyunca 37 ° sıcaklıkta bir termostatta baş aşağı koyuyoruz.

Buhar sterilizatörü (otoklav) - basınç altında buhar sterilizasyonu.

Tıbbi ve mikrobiyolojik uygulamada en güvenilir ve evrensel sterilizasyon yöntemi basınçlı buhar sterilizasyonudur. Sterilize edilecek nesnelerin ısıtıldığı otoklavda üretilir. doymuş buhar atmosferik basınç altında. Manometre okumaları ile doymuş buharın sıcaklığı arasında aşağıdaki ilişki vardır.

Sıfır basınç, normal atmosfer basıncı (760 mm Hg) olarak kabul edilir.

Sterilizasyon, yalnızca otoklav tamamen çalışır durumda olduğunda ve özel olarak eğitilmiş personel tarafından uygun şekilde çalıştırıldığında sağlanır.Bu nedenle, fiziksel (maksimum termometre vb.), biyolojik (mikroorganizmaların test kültürlerinin sporları ile biyotest) ve kimyasal (kimyasal testler, IP gibi göstergeler) yöntemlerle gerçekleştirilen sterilizasyon rejiminin sürekli izlenmesi gereklidir.

Otoklavların sterilizasyon modunun kontrolü yapılır kimyasal yollarla otoklavın her yüklenmesi ile Kimyasal test - belirli bir erime noktasına sahip kimyasal bir maddeye sahip bir cam tüp, antipirin, resorsinol - 110 ± 2 °, benzoik asit - 120 ± 2 °, benzamid - 126 + 1 °, üre, nikotinamid, D (+) -mannoz - 132 + 2 °. Kimyasal testlerin bileşimine, eritildiğinde maddeyi eşit şekilde renklendiren bir anilin boyası (macenta, centilmen menekşesi vb.) eklenir. Şu anda, IS tipi göstergeler (Vinar, Rusya) daha sık kullanılmaktadır ve üzerine bir gösterge karışımı tabakası uygulanmış ve yalnızca sıcaklığın değil, aynı zamanda sterilizasyon süresinin (IS-120, IS-132) operasyonel görsel kontrolü günü için amaçlanan bir kağıt şeridini temsil etmektedir.

pastör fırını- kuru ısı sterilizasyonu.

Pasteur fırınında silikon kauçuğa dayalı cam, metal ve kauçuktan mamul ürünler sterilize edilir. Sterilizasyon modu: 160°С - 150 dk; 180°C - 60 dakika Her döngüde sterilizasyon modunun kontrolü IS-160, IS-180 sterilizasyon göstergeleri kullanılarak gerçekleştirilir; üç ayda bir - Bacillus licheniformis test kültürünün sporları ile bir biyotest kullanılarak

Sterilizasyon Tablo 1.

dezenfeksiyon Tablo 2.

Kuru ısı ile sterilizasyon kuru ısı kabinlerinde (Pastör fırını) yapılmaktadır. Kuru ısı laboratuvar cam eşyalarını sterilize eder. Malzemenin eşit şekilde ısıtılması için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapağı sıkıca kapatılır, elektrikli ısıtıcı çalıştırılır ve sıcaklık 160-165 0C'ye getirilir ve 1 saat sterilize edilir. Sterilizasyonun sonunda ısıtıcıyı kapatın, ancak fırın soğuyana kadar dolap kapağını açmayın (aksi takdirde soğuk hava tabaklarda çatlamalara neden olur). Sterilizasyon modu: 160°С - 60 dk, 180°С - 15 dk, 200°С - 5 dk. Sıvılar, kültür ortamı, kauçuk ve sentetik malzemeler kuru ısı ile sterilize edilmemelidir.

Buhar basınçlı sterilizasyon maruz pansuman, ameliyat bezleri, cerrahi aletler, besleyici ortamlar, laboratuvar cam malzemeleri, enfekte materyaller, enjeksiyon solüsyonları. Malzeme kaplara (bixes) yerleştirilir. Bixin alt kısmına sterilizasyondan sonra nemi emen kumaş pedler yerleştirilmiştir. Malzemenin sterilitesi 3 gün süreyle muhafaza edilir. Bardak ve test tüplerindeki enfekteli materyal, kapaklı metal kaplarda sterilize edilir.

Basınç altında buhar sterilizasyonu bir otoklavda gerçekleştirilir. Tek bir tedavi ile bakterilerin hem vejetatif hem de spor formları ölür. Besin ortamları, doğal proteinler, sıvılar, kauçuk parçalı cihazlar içeren ortamlar dışında, basınç altında buharla sterilize edilir. Basit ortamlar (MPA, MPB) 120°C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir. Doğal proteinler ve karbonhidratlar içeren ortamlar bu sıcaklıkta sterilize edilemez çünkü bunlar ısıtıldığında kolayca değişen maddelerdir. Karbonhidratlı ortamlar fraksiyonel olarak 100 0 C'de veya otoklavda 112 0 C'de (5 atm.) 10-15 dakika sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, lastik hortumlu cihazlar, tapalar, bakteri mumları ve filtreler 120 0 C'de (1 atm.) 20 dakika sterilize edilir.

Enfekte olan materyal (test tüpleri, kaplar içindekiler) özel metal kovalara veya buharın nüfuz etmesi için delikli tanklara konur ve 126 0 C'de (1,5 atm.) 1 saat sterilize edilir. Aletler ayrıca spor bakterileri ile çalıştıktan sonra sterilize edilir.

2 sterilizasyon modu vardır:

1. Bitkisel formlarla ilgili olarak buharın antibakteriyel etkisi ortaya çıktığında, bir otoklavda veya vidasız bir kapak ve açık bir egzoz valfi olan bir Koch aparatında akan buhar. Vitamin ve karbonhidrat, üre, süt, patates ve jelatin içeren ortamlar bu şekilde sterilize edilir. Tam birikme için, arka arkaya 3 gün boyunca 20-30 dakika fraksiyonel sterilizasyon (100 0 C'de) kullanılır. Tartışmayı da öldürür.
2. Buhar basınçlı sterilizasyon en etkili yöntem ifade. Pansumanlar, çarşaflar 1 atm'de sterilize edilir. 15-20 dk, enfekte materyal 1.5-2 atm'de 20-25 dk.

Laboratuvar pratiğinde mikroorganizmalarla çalışırken, çalışma sırasında kullanılan tabakların, besin ortamlarının ve metal aletlerin mikrop içermemesi için sürekli önlem almak gerekir. Bu amaçla aşağıdaki sterilizasyon yöntemleri kullanılmaktadır:

Basınç altında aşırı ısıtılmış buharla sterilizasyon;

Buhar sterilizasyonu;

sıcak hava sterilizasyonu;

dezenfeksiyon.

Sterilize etmenin en iyi yolu, çeşitli nesneleri aşırı ısıtılmış buharla işlemden geçirmektir. özel cihazlar- otoklavlar.

Basınç altında aşırı ısıtılmış buharla otoklav ve sterilizasyon

Otoklavlar, çift cidarlı ve masif kapaklı metal (çelik, dökme demir veya bakır) kazanlardır, cıvatalar ve lastik conta ile hermetik olarak kapatılmıştır. Isıtma sistemine bağlı olarak otoklavlar buharlı, elektrikli ve ateşlidir (Şek. 42). 115-120°C sıcaklıkta yüksek basınçlı ve aşırı ısıtılmış buharın otoklavda elde edilmesi, hem bitkisel hücreleri hem de mikrobiyal sporları 20-30 dakika içinde yok etmenizi sağlar.

Otoklavda, yüksek sıcaklıklarda bozulmayan tüm öğeler sterilize edilir: çeşitli sıvılar (su, karbonhidrat bileşenleri içermeyen besleyici ortamlar), cam eşyalar, metal aletler, pamuk yünü, gazlı bez, kağıt vb.

Bazı maddelerin bir otoklavda (özellikle şeker içeren besleyici ortamlar) normal sterilizasyon moduna dayanmadığı durumlarda, bir otoklavda 112 ° C sıcaklıkta 20 dakika ve ayrıca daha yumuşak modlarda sterilize edilirler.

-de yüksek basınçlar otoklavda aşırı ısıtılmış buhar, ısıtma sıcaklığı buna göre artar; bu, bazı kültür ortamlarına eklenen şekerlerin karamelleşmesine neden olarak ortamı mikropların fizyolojik özelliklerinin belirlenmesi için uygun hale getirmez.

Otoklav içindeki basıncın ölçümü, otoklavın kapağına veya gövdesine monte edilmiş bir manometre kullanılarak yapılır. Basınçta aşırı bir artış olduğunda, tasarıma bağlı olarak kapakta veya otoklav duvarının yan yüzeyinde bulunan bir emniyet valfi otomatik olarak etkinleştirilir. Emniyet valfinden ıslık çalarak çıkan bir buhar jeti, ısıtmanın durdurulması gerektiği konusunda uyarır. Isıtma durdurulmazsa otoklav patlayabilir.

Otoklavın kapağındaki sterilizasyon sıcaklığının ölçüldüğü özel bir cebe bazen bir termometre yerleştirilir. Otoklavın içinde, otoklavın dışında bulunan bir huni ile bir borudan suyun döküldüğü bir stand vardır. Ek olarak, otoklavlar buhar ve havayı serbest bırakmak için bir musluk ve su dökmek için bir musluk ile donatılmıştır.

Otoklavın sterilizasyon sırasında kullanılmasına ilişkin kurallar aşağıdaki gibidir: aparat, seviyesi standın altında olması gereken bir huni ve tüp aracılığıyla suyla doldurulur. Sterilize edilecek ürünler özel metal şişelere konularak otoklava yüklenir. Otoklavın kapağı vidalanmıştır.

Buhar ve havanın tahliyesi için vananın açılması, ısıtma başlar. Su kaynadığı anda ortaya çıkan buhar, otoklavdaki havanın yerini almaya başlar. Buhar çıkış valfi, içinden sürekli bir akım halinde kuru buhar çıkana kadar açık tutulur. Bu, otoklavdaki havanın tamamen boşaltıldığını gösterir. Ardından musluk kapatılır. Daha fazla ısıtma ile giderek daha fazla miktarda biriken buhar, otoklavdaki basıncı ve aynı zamanda sıcaklığı arttırır. Bir otoklavla çalışırken, buhar basıncı ile sıcaklığı arasındaki ilişki tablosu size rehberlik edebilir (Tablo 4).

Manometre iğnesi istenen basınç göstergesine ulaştıktan sonra (otoklavdaki sıcaklık daha sonra kabul edilen sterilizasyon sıcaklığına karşılık gelecektir), otoklavın ısıtması, basıncın gerekli süre boyunca aynı seviyede tutulması için ayarlanır. Sterilizasyonun sonunda ısıtmayı durdurun. Otoklavdaki sıcaklık düştüğünde ve manometre iğnesi sıfıra düştüğünde (otoklavdaki basınç atmosfer basıncına eşit olur), buhar çıkış valfini dikkatlice açın, buharı boşaltın ve otoklav kapağını açarak malzemeyi çıkarın. Otoklavdaki basınç düşmeden önce buhar vanasını zamanından önce açmak mümkün değildir. Otoklav odasındaki basınçta keskin bir düşüş, 100 °C'den daha yüksek sıcaklıklara ısıtılan sıvıların hızla kaynamasına neden olur, yani; normal atmosfer basıncında kaynama noktasının üzerinde. Hızla kaynayan sıvılar, pamuklu tapaları kaplardan nemlendirecek ve hatta itecektir - iş boşuna yapılacaktır. Havadan giren mikroflora ıslak tıkaçlar üzerinde kolayca gelişip besiyerine nüfuz edip enfekte olacağından kültür besiyeri bozulacaktır. Ayrıca otoklavın artan basınçla açılması işçi için tehlikelidir.

Ancak manometre iğnesi sıfırda durur durmaz otoklav hemen açılmalıdır, aksi takdirde yoğuşma suyu tapaların üzerine akmaya başlayacak ve ayrıca ıslanmalarına neden olacaktır. Tıpaların yoğuşma suyu ile ıslanmaması için sterilizasyon öncesi kağıt ile kapatılır.

Otoklava konulan malzemeler 2 atm (19.61*10.000 N/m2) veya normalin 1 atm üzerinde bir basınca karşılık gelen sıcaklık 120°C'de tutulursa 20-30 dakikada güvenli bir şekilde sterilize edilmiş olacaktır. Otoklav, ortamın sıvı buharla sterilizasyonu için de başarıyla kullanılabilir; bu durumda otoklav kapağı vidalanmaz.

Koch Kazanı ve Sıvı Buhar Sterilizasyonu

Koch kazanı, çift cidarlı ve kask şeklinde konik başlıklı galvanizli sac veya bakırdan yapılmış bir silindirdir (Şek. 43). Kapağın ortasında termometre için bir delik vardır. Dışarıda, Koch kazanı bir ısı yalıtım malzemesi tabakası ile kaplanmıştır: asbest, linolyum vb.

Kazanın içine, kazanın iç alanını üst ve alt olmak üzere iki bölüme ayıran bir bölme (taban) yerleştirilmiştir. Alt kısım, seviyesi gösterge camında ayarlanan suyla doldurulur: su, tabanın üstünü kaplamamalıdır. Sterilize edilmiş nesneler, kazanın üst kısmına üst üste yerleştirilmiş kafes kovalara yerleştirilir. Kazanı bir kapakla kapatarak içindeki suyu ısıtmaya başlarlar. Sterilizasyonun başlangıcı, termometrenin 98-100°C'yi gösterdiği an olarak kabul edilir. Bir termometrenin yokluğunda, sterilizasyonun başlangıcı, buharın kazan kapağındaki delikten kuvvetli bir şekilde çıkmaya başladığı an olarak kabul edilir. Böylece kazanın çalışması sırasında sterilize edilecek nesneler her zaman bir sıvı buhar akışı içinde olacaktır.

Akan buharla sterilizasyon yöntemi, basitliği ve bulunabilirliği nedeniyle laboratuvar pratiğinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Akan buhar, esas olarak 100 ° C'nin üzerinde ısıtıldığında özelliklerini değiştiren besleyici ortamları sterilize eder: protein, karbonhidrat ve jelatin. Bu ortamlar için akan buharla sterilizasyon yöntemi en kabul edilebilir olanıdır.

Akışkan buharlı sterilizasyon yönteminin dezavantajı süresidir, çünkü ortamın tam sterilizasyonu için, 24 saatlik aralıklarla sıvının hacmine bağlı olarak, kazanda belirli bir süre - 20 dakika ila 1,5 saat (ortalama 30-45 dakika) arasında tekrar ısıtma yapılması gerekir.

Koch kazanındaki tek bir ısıtma, yalnızca vejetatif mikrobiyal hücrelerin ölümüne neden olur, ancak sporlar korunabilir. Sterilize edilmiş besin ortamını muhafaza ederken uygun koşullar(oda sıcaklığında ve hatta daha iyisi termostatta), kalan sporların bir kısmı filizlenecek ve ertesi güne kadar bitkisel hücrelere dönüşecektir. Yeniden ısıtma, bu yeni gelişen hücrelerin ölümüne neden olacaktır. Son olarak, besiyerinin bir termostatta tutulduğu bir günün ardından üçüncü ısıtma tam sterilliği sağlayacaktır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. Pratik çalışmada, bir Koch kazanında sıvı buharla sterilizasyon yerine, genellikle 112 ° C'de 15-20 dakika boyunca 0,5 atm'lik bir karşı basınçla otoklavlarda geleneksel sterilizasyon kullanılır.

Kurutma kabini ve sıcak hava sterilizasyonu

Laboratuvar pratiğinde mikrobiyolojik cam eşyaların sterilizasyonu için fırın veya Pasteur fırını diye tabir edilen fırına sahip olmak gerekir. Kurutma kabini cihazı ile Pasteur fırınının çalışma prensibi aynıdır. Fırınlar sadece dikdörtgen şeklinde yapılır ve kurutma dolapları sadece dikdörtgen değil, silindirik bir şekle de sahip olabilir (Şek. 44 ve 45). Bu cihazlarda 160°C sıcaklıkta 1 saat veya 150°C sıcaklıkta 2 saat sıcak hava (kuru ısı) ile sterilizasyon yapılmaktadır.

Hem Pasteur fırınları hem de fırınlar içi boş, çift cidarlı, çift ve sıkıca kapanan kapaklı aparatlardır. Dışarıda, ısı yalıtımı için bir asbest tabakası ile kaplanmıştır. Sıcak hava, elektrik bobinleri veya gaz brülörleri tarafından ısıtılan duvarlar arasında dolaşır. Kabinin içinde birkaç (genellikle iki veya üç) delikli raf vardır. Kabinin üst kısmında iki açıklık vardır: biri termometre için, diğeri havalandırma içindir. En uygun elektrikli kurutma dolapları.

Son tasarım kurutma kabinleri, kabin yan duvarına yerleştirilmiş özel bir regülatör ile açılabilen dört ısıtma kademesine sahiptir. Gerekli ısıtma derecesi, bir, iki, üç veya dört elektrik bobininin tümü açılarak elde edilir ve bobinlerin açılma sırası herhangi biri olabilir.

Kurutma dolaplarında, cam eşyalara ek olarak, gazlı bez, pamuk yünü sterilize etmek mümkündür, ancak 160 ° C sıcaklıkta sarardıkları için otoklavda işlenmesi daha iyidir. Kauçuk ürünleri, yüksek sıcaklıklara dayanamadıkları için bir kurutma kabininde sterilize etmek imkansızdır - kırılgan hale gelir ve bozulurlar. Sıvılar 150-160 °C'de kaynayarak kimyasal bileşimlerini değiştirirler.

Sterilize edilmiş ürünlerin havadaki mikroplarla müteakip kontaminasyonunu önlemek için sterilizasyondan önce kağıda sarılırlar. Petri kapları, ambalajda boşluk kalmayacak şekilde 2 parça halinde kağıda sarılır. Cam tüpler ve pipetler de önce ayrı ayrı, sonra 10-20 adetlik paketler halinde kağıda sarılır. Tüplerin ve pipetlerin sarılması, dış yüzeylerini hava ile temastan tamamen koruyarak son derece dikkatli olmalıdır. Şişeler, test tüpleri, şişeler sıcak hava ile sterilizasyondan önce pamuklu tıpalar ve kağıt kapaklarla kapatılır.

Fırında 170 °C'nin üzerindeki sıcaklıklara izin verilmemelidir, çünkü bu sıcaklıkta pamuk tıkaçlar kahverengiye döner ve kağıt ambalajlar kırılgan ve hatta yanmış hale gelir. Sterilizasyonun başlangıcı, termometrenin 150-160 ° C'yi gösterdiği an olarak kabul edilir. Sterilizasyon için gereken sürenin sonunda ısıtma durdurulur. Tabakların çatlamasını önlemek için sadece kuru tabakları sterilize edin ve sterilizasyondan sonra kabini sadece içindeki sıcaklık 50-70 ° C'ye düştüğünde açın. Platin halkalar, iğneler, cımbızlar, makaslar vb. gibi küçük laboratuvar malzemeleri basit alevle tavlama ile sterilize edilebilir gaz brülörü(veya alkol lambaları).

dezenfeksiyon

Bir mikrobiyoloji laboratuvarında dezenfeksiyona çok sık başvurulmalıdır. En yaygın dezenfektanlar şunlardır: %3-5 karbolik asit solüsyonu ve diğer yüksek fenol solüsyonları, %50-70 solüsyon etil alkol, aynı konsantrasyonda bütil alkol, %4 formalin çözeltisi, %1-2 kloroform ve toluen çözeltileri, %0,5 kloramin çözeltisi vb.

Konserve fabrikalarının mikrobiyoloji laboratuvarlarında masa yüzeyleri, tabaklar, yerler ve duvarlar dezenfekte edilmektedir. Masaların yüzeyini dezenfekte etmek için sadece etil alkol solüsyonlarını değil, karbolik asit solüsyonlarını da kullanabilirsiniz.

dezenfeksiyon kanalizasyon cihazları konserve fabrikalarında ve diğer gıda işletmeleri%5-10 çamaşır suyu çözeltisi ile üretilir. Sirkülasyonun dezenfeksiyonu için cam kaplar konserve fabrikalarında litre başına en az 100 mg aktif klor içeren klorlu su kullanılır. Böyle bir çözelti hazırlamak için ağartıcı alınır, kalın bir süt kütlesi elde edilene kadar az miktarda su ile karıştırılır. Bu karışım suya eklenir, iyice karıştırılır ve bir gün bekletilir. Ağartıcı, kalsiyum oksit hidrat - Ca (OH) 2 - ve aktif klor oluşumu ile reaksiyona girer. Ca (OH) 2 dibe çöker, arıtmadan sonra çökeltinin üzerindeki çözelti şeffaf, yeşilimsi bir renge dönüşür. Kabı bu solüsyona batırmak 10 dakika sürer. Klorlamadan sonra, kap akan suda iyice yıkanmalıdır.

Sterilizasyon fiziksel, kimyasal, mekanik ve biyolojik yöntemlerle ve çeşitli şekillerde temsil edilmektedir. Belirli bir sterilizasyon yöntemini ve yöntemlerini kullanmanın uygunluğu, sterilize edilecek malzemenin özelliklerine, fiziksel ve kimyasal özelliklerine bağlıdır. Sterilizasyon süresi sterilize edilecek nesneye, sterilizasyon maddesine ve dozuna, ortamın sıcaklığına ve nemine bağlıdır.

Fiziksel sterilizasyon yöntemi Fiziksel sterilizasyon yöntemleri arasında kurutma, yakma ve kalsine etme, kaynatma, pastörizasyon ve tidalizasyon, sıcak hava (kuru ısı), ultrason, ultraviyole ve radyoaktif radyasyon, yüksek frekanslı akım, güneş ışığı yer alır. Yüksek sıcaklıklarda kullanılabilen öğeleri sterilize etmenin en yaygın yöntemi ateş, sıcak hava ve basınçlı doymuş buharla sterilizasyondur. Ateş, herhangi bir değeri temsil etmeyen enfekte olmuş nesneleri (atık kağıtlar, eski duvar kağıtları, paçavralar, çöpler) yakmak, verem hastalarının balgamlarını, özellikle tüberkülozdan ölen insan ve hayvanların cesetlerini dezenfekte etmek için kullanılır. tehlikeli enfeksiyonlar, ayrıca çeşitli nesneleri yakmak ve kireçlemek için. Kavurma ve kalsinasyon, aletlerin, laboratuvar ve eczane cam malzemelerinin dezenfeksiyonu için mikrobiyolojik uygulamada yaygın olarak kullanılmaktadır. Brülör veya alev alevinde tutuşturma, mikroorganizmaların bitkisel hücreleri, kistleri ve sporları da öldüğü için nesnenin tamamen ayrıştığı bir sterilizasyon yöntemidir. Genel olarak özeler, spatulalar, pipetler, cam lamlar, lameller, küçük aletler ve diğer kontamine nesneler kaynatılamıyorlarsa kalsinasyon ile sterilize edilirler. Makas ve neşterlerin kalsinasyon ile sterilize edilmesi tavsiye edilmez, çünkü kesme yüzeyi ateşin etkisi altında donuklaşır. Tıbbi uygulamada kullanılan en basit ve en yaygın fiziksel sterilizasyon yöntemlerinden biri sıcak hava sterilizasyonudur (kuru ısı). Kuru ısı sterilizasyonu fırınlarda (Pastör fırınları) yapılmaktadır. Kuru sıcak hava bakterisidal, virüsidal, sporocidal etkiye sahiptir ve esas olarak cam ürünleri (laboratuvar cam malzemeleri - Petri kapları, şişeler, pipetler, test tüpleri vb.) ve ayrıca basınç altında buharla sterilize edilebilen metal ürünleri sterilize etmek için kullanılır. Ek olarak, kuru ısı, porselen ve ısıya dayanıklı maddelerden (talk, beyaz kil) ve ayrıca mineral ve sebze yağları , yağlar, vazelin, lanolin, balmumu. Vejetatif formların ve sporların ölmesini sağlayan bu sterilizasyon yöntemi için en etkili mod 160 - 180 derece sıcaklıkta 15 dakikadır. Besin ortamı, izotonik çözelti, kauçuk ve sentetik malzemeler, sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için kuru ısı ile sterilize edilemez. Basınç altında doymuş buharla sterilizasyon, pansumanları, suyu, bazı ilaçları, besleyici ortamları, yumuşak ekipmanı, aletleri sterilize etmenin yanı sıra kontamine atık malzemeyi dekontamine etmek için en güvenilir ve en sık denenen yöntemdir. Cerrahi uygulamada ameliyat olan kişinin pansumanları, cerrah önlükleri ve iç çamaşırları otoklavlarda buharla dezenfekte edilmektedir. Basınç altında buharla sterilizasyon, özel cihazlarda - otoklavlarda gerçekleştirilir. Otoklavlama, tüm mikroorganizmaları ve sporları tamamen yok eder. Buhar basınçlı sterilizasyon yöntemi, malzemenin atmosferik basıncın üzerinde bir basınçta doymuş su buharı ile ısıtılmasına dayanır. Yüksek sıcaklık ve buharın birleşik etkisi, bu yöntemi özellikle etkili kılar. Bu durumda hem vejetatif hücreler hem de mikroorganizmaların sporları ölür. Doymuş su buharının etkisi altındaki mikrobiyal sporlar 10 dakika içinde ölür ve bitkisel formlar - 1 ila 4 dakika arasında. Doymuş buharın yüksek bakterisit gücü, basınç altındaki su buharının etkisi altında, mikrobiyal hücrenin proteinlerinin şişmesi ve pıhtılaşması ve bunun sonucunda mikrobiyal hücrelerin ölmesi gerçeğinden kaynaklanmaktadır. Doymuş su buharının bakterisidal etkisi, aşırı basınçla artar. Otoklavda sterilizasyon farklı modlarda gerçekleştirilir. Bu nedenle, basit besin ortamları (et - pepton agar ve et - pepton suyu) 120 derecede (1 atm.) 20 dakika sterilize edilir. Ancak bu mod ile proteinler, karbonhidratlar ve ısıtmadan kolayca değişen diğer maddeleri içeren ortamları sterilize etmek imkansızdır. Karbonhidratlı ortamlar 0,5 atm'de otoklavda sterilize edilir. 10 - 15 dakika veya fraksiyonel akan buhar. Yüksek sıcaklık sayesinde, sadece dezenfekte edilecek nesnelerin yüzeyinde değil, aynı zamanda derinliklerinde de en kalıcı patojenik mikroorganizma formlarını (spor oluşturanlar dahil) yok etmek mümkündür. Bu, güvenilir bir sterilizasyon aracı olarak yüksek sıcaklığın büyük avantajıdır. Ancak bazı maddeler yüksek sıcaklığın etkisiyle bozulur ve bu durumlarda başka dezenfeksiyon yöntem ve araçlarına başvurmak gerekir. Yüksek sıcaklıkta sterilizasyon kullanımına izin vermeyen malzeme ve öğelerin tam dekontaminasyonu, 100 dereceyi geçmeyen bir sıcaklıkta Koch aparatında tekrarlanan buhar sterilizasyonu ile sağlanır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. Mikropların kalan öldürülmemiş spor formlarının, 37 derecede bir termostatta bir günden sonra, ölümü müteakip sterilizasyon sırasında meydana gelen bitkisel hücrelere dönüştüğü gerçeğine kadar kaynar. bu nesne akan buhar. Akan buharla işleme, 30 - 40 dakika boyunca üç kez gerçekleştirilir. Malzemenin 100 derecenin altındaki bir sıcaklıkta tek bir ısıtılması pastörizasyon olarak bilinir. Pastörizasyon, Pasteur tarafından önerildi ve esas olarak çoğunlukla sporsuz mikroorganizmaların yok edilmesi amaçlandı. Pastörizasyon 60 - 70 derecede 15 - 30 dakika, 80 derecede 10 - 15 dakika arasında yapılır. Mikrobiyolojik uygulamada, aşılamanın pastörizasyonu genellikle spor oluşturan mikroorganizmaların saf kültürlerini izole etmek ve mikroorganizmaların spor oluşturma yeteneklerini belirlemek için kullanılır. Yüksek sıcaklıklara maruz kaldıklarında tatlarını ve diğer değerli niteliklerini kaybeden sıvılar için (süt, meyve ve meyve suları, bira, karbonhidrat veya üre içeren besin ortamları vb.), 50–60 derecede 15–33333330 dakika veya 70–80 derecede 5–10 dakika sıvı buhar sterilizasyonu yapılır. Aynı zamanda, orta dirençli mikroplar ölürken, daha dirençli mikroplar ve sporlar kalır. Fraksiyonel 5 - 6 kat 60 derecede 1 saat sterilizasyona tyndalizasyon denir. yapılan birçok tıbbi cihaz polimer malzemeler, genel kabul görmüş rejimlere göre buhar sterilizasyonuna dayanmaz. Birçok ürün için, içerdikleri sıvıların (koruyucu, ilaç ve diğer ürünler) özelliklerinden dolayı, geleneksel yöntem ve yöntemlerle sterilize edilmesi mümkün değildir. Bu tür ürünler için, nesnelerin güvenilir bir şekilde dekontaminasyonunu sağlamak için bireysel sterilizasyon rejimleri geliştirilmiştir. Böylece kanı fraksiyonlara ayıran rotorun sterilizasyonu 120 derece sıcaklıkta 45 dakika su buharı ile gerçekleştirilir. Koruyucular için kapların sterilitesi 110 derecede 60 dakikada elde edilir. Kaynatma, yeniden kullanılabilir şırıngaların suyunu kurutmak için kullanılan bir sterilizasyon yöntemidir, cerrahi Aletler, lastik borular, cam ve metal aletler. Kaynatılarak sterilizasyon sterilizatörlerde gerçekleştirilir. Kaynar sudaki spor formları 20-30 dakikada ölür. 45 dakika kaynatma, salgıları ve diğer bulaşıcı malzemeleri, çarşafları, tabakları, oyuncakları ve hasta bakım malzemelerini dezenfekte etmek için yaygın olarak kullanılır. Yıkama ve temizlik için deterjanlı sıcak su (60 - 100 derece) kullanılır. mekanik kaldırma kirleticiler ve mikroorganizmalar. Çoğu vejetatif hücre 30 dakika sonra 70 derecede ölür. Filtrasyon sterilizasyonu, substratların ısınmaya dayanamadığı durumlarda, özellikle proteinler, serumlar, bazı antibiyotikler, vitaminler, uçucu maddeler içeren besiyerleri için kullanılır. Bu teknik, kültür sıvısını mikroorganizmaların hücrelerinden arındırmak, ancak içerdiği tüm metabolik ürünleri değişmeden tutmak gerektiğinde sterilize etmek için oldukça yaygın olarak kullanılır. Yöntem, sıvıların ince gözenekli bölmelere sahip olan ve dolayısıyla mikroorganizma hücrelerini tutan özel filtrelerden filtre edilmesinden oluşur. En yaygın olarak iki tür filtre kullanılır: membran filtreler ve Seitz filtreleri. Membran filtreler kolodyum, asetat, selüloz ve diğer malzemelerden yapılır. Seitz filtreleri, asbest ve selüloz karışımından yapılır. Ayrıca kaolen katkılı filtreler kuvars kumu, silisli topraktan ve diğer malzemelerden (Chamberlain, Berkfeld'den “mumlar”). Membran ve asbest filtreleri tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır. Ultraviyole ışınlama ile bakterisit etki, kaynağı bakterisit lambalar olan 200 - 450 nm uzunluğunda ışınlarla sağlanır. Bakterisidal lambalarla sterilizasyon ultraviyole ışınlar tıbbi ve önleyici kurumlarda, mikrobiyoloji laboratuvar kutuları, gıda endüstrisi işletmeleri, aşı ve serum üretim kutuları, ameliyathaneler, manipülasyon odaları, çocuk bakımevleri vb. Güneş ışığının etkisi sonucu mikroorganizmaların ölümüne neden olur. ultraviyole ışınlama ve kurutma. Güneş ışığı yardımıyla kurutmanın birçok mikroorganizma türü üzerinde zararlı etkisi vardır ancak etkisi yüzeyseldir ve bu nedenle sterilizasyon uygulamasında güneş ışığı yardımcı rol oynar. İÇİNDE Son zamanlarda yara ve yanıkların tedavisinde jel formunda sentetik ve doğal polimerlerden kaplamalar kullanılmaktadır. Polimerik antiseptik filmler, yaraların ve yanıkların lokal tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Katapol, dioksidin, mavi iyot ve glutaraldehit içeren sorbitol gibi geniş spektrumlu antimikrobiyal ajanları içerir. Bu filmleri sterilize etmek için 20.0 kGy dozunda iyonlaştırıcı radyasyon kullanılır. Polimerik antiseptik filmlerin ve sorbentlerin endüstriyel üretiminde, sterilizasyonları bu sterilizasyon rejimi altında tamamen sağlanır. Radyoaktif radyasyon, hem bitkisel hem de spor formdaki tüm mikroorganizma türlerini öldürür. Steril ürünler ve steril tek kullanımlık tıbbi ürünler üreten işletmelerde, atık suların ve hayvansal kaynaklı ham maddelerin dezenfeksiyonunda yaygın olarak sterilizasyon amaçlı kullanılmaktadır.

mekanik yöntem sterilizasyon Mekanik sterilizasyon yöntemleri mikropları nesnelerin yüzeyinden uzaklaştırır. Bunlar yıkama, sallama, süpürme, nemli silme, havalandırma, havalandırma, vakumlama, yıkamadır.

Kimyasal sterilizasyon yöntemi Plastikler tıbbi uygulamada giderek daha fazla kullanılmaktadır. Diş hekimliği, çene-yüz cerrahisi, travmatoloji, ortopedi ve cerrahide kullanılırlar. Çoğu plastik, basınçlı buhar ve kuru ısı (kuru ısıtılmış hava) gibi ısıyla sterilizasyon yöntemlerine dayanamaz. Bu tür nesnelerin sterilizasyonu için kullanılan alkol, diosit, üçlü çözelti solüsyonları, işlenen ürünlerin sterilitesini sağlamaz. Bu nedenle plastik ürünlerin sterilizasyonu için gaz ve radyasyon yöntemleri ile kimyasal müstahzarların çözeltileri kullanılmaktadır. Isıya dayanıklı malzemelerden yapılmış çok sayıda ürünün tıbbi kurumların uygulamasına girmesi, radyasyon, gaz dezenfeksiyon yöntemleri ve dezenfektan solüsyonlarla sterilizasyona katkıda bulunur. Kimyasal sterilizasyonda çeşitli kimyasal gruplardan (peroksit, fenolik, halojen içeren, aldehitler, alkaliler ve asitler, sürfaktanlar vb.) gazlar ve maddeler kullanılır. Ev kullanımı için, bileşimlerine çeşitli kimyasalların eklenmesi nedeniyle antimikrobiyal etkiye sahip deterjanlar, temizleyiciler, ağartıcılar ve diğer müstahzarlar üretilir. Bu müstahzarlar sıhhi tesisatların temizliği ve dezenfeksiyonu için kullanılır - teknik ekipman, tabak, çarşaf vb. formaldehit buharı (paroform) kullanılabilir. tıbbi kurumlar sterilizasyon için metal ürünleri tıbbi amaçlı (neşter, iğne, cımbız, sonda, kıskaç, kanca, tel kesici vb.) Formaldehit buharı ile sterilizasyondan önce ürünler sterilizasyon öncesi temizliğe tabi tutulmalı ve iyice kurutulmalıdır. Herhangi bir kimyasal yöntemle sterilize edildiğinde, bir nesneyi işleme prosedürü, dezenfekte edilen nesnenin özelliklerine, mikroplara karşı direncine, kimyasalın özelliklerinin özelliklerine, ortam sıcaklığına, neme ve diğer faktörlere bağlıdır. Böylece, metal aletlerin sterilitesi, en az 20 derecelik bir sıcaklıkta bir buhar banyosu ile kapalı bir odaya beş saat maruz kaldıktan sonra elde edilir ve bağıl nem% 95 - 98, 15 derecelik bir sıcaklıkta, bu nesnelerin tam sterilitesi ancak 16 saat sonra elde edilir. Gluteraldehitin sporisidal aktivitesi sıcaklığa bağlıdır. Etkisinin optimumu 15 - 25 derecelik bir sıcaklıkta gerçekleşir. Artan sıcaklıkla birlikte, bu ilacın spor öldürücü etkisinin aktivitesi azalır. Kimyasal yöntemle sterilizasyon biraz sınırlıdır. Çoğu zaman, bu yöntem besleyici ortamların ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemek için kullanılır. Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamı bu koruyuculardan arındırmak gerekirse 56 derecede su banyosunda ısıtılır ve koruyucular buharlaşır. Aşıları veya serumları korumak için mertiolat, borik asit, formalin kullanılır.

biyolojik yöntem sterilizasyon Biyolojik sterilizasyon, antibiyotik kullanımına dayanmaktadır. Bu yöntem virüslerin yetiştirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır.