Kuru fırının çalışma modu. Sterilizasyon yöntemleri ve yöntemleri Ultraviyole ışınlama ile sterilizasyon

Mikroorganizmaların yaşamı çevre koşullarına yakından bağlıdır. Mikroorganizmaları etkileyen tüm çevresel faktörler, yararlı veya yıkıcı etkisi hem faktörün doğasına hem de mikroorganizmanın özelliklerine bağlı olan fiziksel, kimyasal ve biyolojik olmak üzere üç gruba ayrılabilir.

Fiziksel faktörler

Fiziksel faktörlerden en büyük etki sıcaklık, kurutma, radyant enerji ve ultrason mikroorganizmaların gelişimini etkiler.

Sıcaklık. Her mikroorganizmanın hayati aktivitesi belirli sıcaklık limitleri ile sınırlıdır. Bu sıcaklık bağımlılığı genellikle üç ana nokta ile ifade edilir: minimum - altında mikrobiyal hücrelerin çoğalmasının durduğu sıcaklık; optimum - mikroorganizmaların büyümesi ve gelişmesi için en iyi sıcaklık; maksimum - hücrelerin hayati aktivitesinin zayıfladığı veya durduğu sıcaklık. Optimum sıcaklık genellikle sıcaklık koşullarına karşılık gelir doğal çevre bir yaşam alanı.

Sıcaklıkla ilgili tüm mikroorganizmalar psikrofillere, mezofillere ve termofillere ayrılır.

Psikrofiller (Yunan psikrosundan - soğuk, phileo - aşk) veya soğuğu seven mikroorganizmalar, nispeten düşük sıcaklıklarda büyür: minimum sıcaklık- 0 °C, optimal - 10-20 °C, maksimum - 30 °C. Bu grup, içinde yaşayan mikroorganizmaları içerir. kuzey denizleri ve okyanuslar, toprak, kanalizasyon. Buna ışık ve demir bakterileri ile soğukta (0°C'nin altında) gıdaların bozulmasına neden olan mikroplar da dahildir.

Mezofiller (Yunan mezosundan - orta) - çoğu saprofit ve tüm patojenik mikroorganizmalar dahil olmak üzere en kapsamlı grup. Onlar için optimum sıcaklık 28-37°C, minimum 10°C, maksimum 45°C'dir.

Termofiller (Yunan termosundan - sıcaklık, ısı) veya ısı seven mikroorganizmalar, 55 ° C'nin üzerindeki sıcaklıklarda gelişirler, onlar için minimum sıcaklık 30 ° C, optimum 50-60 ° C ve maksimum 70-75 ° C'dir. Sıcak mineralli kaynaklarda, toprağın yüzey tabakasında, kendiliğinden ısınan substratlarda (gübre, saman, tahıl), insan ve hayvan bağırsaklarında bulunurlar. Termofiller arasında birçok spor formu vardır.

Yüksek ve düşük sıcaklıkların mikroorganizmalar üzerinde farklı etkileri vardır. Bazıları yüksek sıcaklıklara karşı daha hassastır. Ayrıca, maksimum sıcaklığın üzerindeki sıcaklık ne kadar yüksek olursa, hücre proteinlerinin denatürasyonuna (pıhtılaşmasına) bağlı olarak mikrobiyal hücrelerin ölümü o kadar hızlı gerçekleşir.

Mezofilik bakterilerin vejetatif formları 60°C'de 30-60 dakikada, 80-100°C'de 1-2 dakikada ölürler. Bakteri sporları yüksek sıcaklıklara çok daha dayanıklıdır. Örneğin, şarbon basili sporları 10-20 dakika kaynamaya ve Clostridium botulism sporları 6 saat dayanır Sporlar dahil tüm mikroorganizmalar 165-170 ° C sıcaklıkta bir saat (kuru bir ısı kabininde) veya 1 atm basınçta (otoklavda) 30 dakika buhar etkisi altında ölür.

Yüksek sıcaklıkların mikroorganizmalar üzerindeki etkisi, sterilizasyonun temelidir - çeşitli nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen salınması (aşağıya bakın).

Birçok mikroorganizma düşük sıcaklıklara karşı son derece dirençlidir. Salmonella tifo ve Vibrio cholerae buzda uzun süre hayatta kalır. Bazı mikroorganizmalar sıvı hava sıcaklıklarında (-190°C) canlı kalırken bakteri sporları -250°C'ye kadar sıcaklıklara dayanabilir.

Sadece belirli türler patojenik bakteriler düşük sıcaklıklara karşı hassastır (örneğin bordetella boğmaca ve parapertussis, Neisseria meningococcus, vb.). Mikroorganizmaların bu özellikleri dikkate alınır. laboratuvar teşhisi ve test materyali taşınırken - laboratuvara soğutmadan korunarak teslim edilir.

Düşük sıcaklıkların etkisi, korumak için yaygın olarak kullanılan çürütücü ve fermantasyon işlemlerini durdurur. Gıda Ürünleri soğutma ünitelerinde, mahzenlerde, buzullarda. 0 ° C'nin altındaki sıcaklıklarda, mikroplar askıya alınmış bir animasyon durumuna girer - metabolik süreçlerde bir yavaşlama meydana gelir ve üreme durur. Ancak, eğer uygun sıcaklık koşulları ve besin ortamı, mikrobiyal hücrelerin hayati fonksiyonları geri yüklenir. Mikroorganizmaların bu özelliği, laboratuvar uygulamalarında mikrop kültürlerini düşük sıcaklıklarda korumak için kullanılır. Yüksek ve düşük sıcaklıklardaki hızlı değişim (donma ve çözülme) ayrıca mikroorganizmalar üzerinde zararlı bir etkiye sahiptir - bu, hücre zarlarının yırtılmasına yol açar.

Kurutma. Su, mikroorganizmaların normal çalışması için gereklidir. Kurutma, sitoplazmanın dehidrasyonuna, sitoplazmik zarın bütünlüğünün bozulmasına yol açar, bunun sonucunda mikrobiyal hücrelerin beslenmesi bozulur ve ölümleri meydana gelir.

Kurutma etkisi altındaki farklı mikroorganizma türlerinin ölüm zamanlaması önemli ölçüde farklıdır. Örneğin, patojenik Neisseria (meningokok, gonokok), leptospira, soluk treponema ve diğerleri birkaç dakika sonra kurutulduğunda ölürler. Vibrio cholerae kurumaya 2 gün, salmonella tifo - 70 gün ve Mycobacterium tuberculosis - 90 gün dayanır. Ancak tüberküloz hastalarının patojenlerin kuru bir protein kılıfı ile korunduğu kurumuş balgamı 10 ay boyunca bulaşıcı kalır.

Sporlar özellikle kurumaya ve diğer çevresel etkilere karşı dirençlidir. Şarbon basili sporları, 10 yıl boyunca çimlenme kabiliyetini ve 20 yıla kadar küf sporlarını korur.

Kurutmanın mikroorganizmalar üzerindeki olumsuz etkisi uzun süredir sebze, meyve, et, balık ve şifalı otlar. Aynı zamanda, koşullar altında yüksek nem, bu tür ürünler mikropların hayati aktivitesinin restorasyonu nedeniyle hızla bozulur.

Mikroorganizma kültürlerinin, aşıların ve diğer biyolojik preparatların saklanması için dondurarak kurutma yöntemi yaygın olarak kullanılmaktadır. Yöntemin özü, mikroorganizmaların veya müstahzarların önce dondurulması ve ardından vakum altında kurutulması gerçeğinde yatmaktadır. Aynı zamanda, mikrobiyal hücreler askıya alınmış bir animasyon durumuna girerler ve biyolojik özelliklerini birkaç ay veya yıl boyunca korurlar.

radyant enerji. Doğadaki mikroorganizmalar sürekli olarak maruz kalmaktadır. Güneş radyasyonu. Direkt güneş ışığı, fotosentetik bakteriler (yeşil ve mor kükürt bakterileri) dışında birçok mikroorganizmanın birkaç saat içinde ölümüne neden olur. Güneş ışığının yıkıcı etkisi ultraviyole ışınlarının (UV ışınları) aktivitesinden kaynaklanmaktadır. Hücre enzimlerini etkisiz hale getirirler ve DNA'ya zarar verirler. Patojenik bakteriler saprofitlere göre UV ışınlarına karşı daha hassastır. Bu nedenle, mikrobiyal kültürleri laboratuvarda karanlıkta saklamak daha iyidir. Buchner'ın deneyimi bu açıdan aydınlatıcıdır.

ile bir Petri kabında ince tabaka agar, herhangi bir bakteri kültürünün bol miktarda ekilmesini sağlar. Tohumlu bardağın dış yüzeyine siyah kağıttan kesilen harfler yapıştırılarak örneğin "tifüs" kelimesi oluşturulur. Ters çevrilmiş bir bardak doğrudan ışınlanır. güneş ışınları 1 saat Daha sonra kağıtlar çıkarılır ve kap 37 ° C'deki termostatta bir gün bekletilir. Agarın sadece yapıştırılan harflerle UV ışınlarından korunan yerlerinde bakteri üremesi görülür. Agarın geri kalanı temiz kalır, yani mikroorganizma üremesi yoktur (Şekil 11).

Dış çevrenin iyileştirilmesinde doğal bir faktör olarak güneş ışığının önemi büyüktür. Havayı, suyu doğal rezervuarlardan, toprağın üst katmanlarını patojenik bakterilerden arındırır.

UV ışınlarının bakterisidal (bakterileri yok eden) etkisi havayı sterilize etmek için kullanılır. kapalı mekanlar(ameliyathaneler, soyunma odaları, kutular vb.) ile su ve süt. Lambalar bu ışınların kaynağıdır. morötesi radyasyon, antiseptik lambalar.

Diğer radyan enerji türleri - X-ışınları, α-, β-, γ-ışınları, yalnızca büyük dozlarda, yaklaşık 440-280 J / kg'da mikroorganizmalar üzerinde zararlı bir etkiye sahiptir. Mikropların ölümü, nükleer yapıların ve hücresel DNA'nın yok edilmesinden kaynaklanmaktadır. Küçük dozlarda radyasyon, mikrobiyal hücrelerin büyümesini uyarır. Mikroorganizmalar, yüksek organizmalara göre radyoaktif radyasyona karşı çok daha dirençlidir. Uranyum cevheri yataklarında yaşayan bilinen tiyonik bakteriler. Suda bulunan bakteriler nükleer reaktörler 20-30 kJ/kg iyonlaştırıcı radyasyon konsantrasyonunda.

İyonlaştırıcı radyasyonun bakterisidal etkisi, belirli gıda ürünlerini korumak, biyolojik preparatları (serumlar, aşılar vb.) sterilize etmek için kullanılırken, sterilize edilecek malzemenin özellikleri değişmez.

Son yıllarda, tek kullanımlık ürünler radyasyon yöntemiyle sterilize edilmiştir - polistiren pipetler, Petri kapları, serolojik reaksiyonlar için kuyular, şırıngalar ve dikiş materyali - katgüt vb.

ultrason Mikrobiyal hücrelerde önemli hasara neden olur. Ultrasonun etkisi altında, sitoplazmanın sıvı ortamındaki gazlar aktive edilir ve hücrenin içinde yüksek basınç(10000 atm'ye kadar). Bu, hücre zarının yırtılmasına ve hücre ölümüne yol açar. Ultrason gıdaları (süt, meyve suları) sterilize etmek için kullanılır, içme suyu.

Yüksek basınç. Bakteriler ve özellikle sporları mekanik basınca karşı dirençlidir. Doğada 100-900 atm basınç altında 1000-10000 m derinlikte denizlerde ve okyanuslarda yaşayan bakteriler bulunmaktadır. Bazı bakteri türleri 3000-5000 atm'ye kadar basınca ve bakteri sporlarına - hatta 20.000 atm'ye kadar dayanabilir.

Kimyasal Faktörler

Kimyasalların mikroorganizmalar üzerindeki etkisi, kimyasal bileşiğin doğasına, konsantrasyonuna ve mikrobiyal hücrelere maruz kalma süresine bağlı olarak değişir. Konsantrasyona bağlı olarak, bir kimyasal madde bir besin kaynağı olabilir veya mikroorganizmaların hayati aktivitesi üzerinde baskılayıcı bir etkiye sahip olabilir. Örneğin, %0.5-2 glikoz çözeltisi mikropların büyümesini uyarır ve %20-40 glikoz çözeltileri mikrobiyal hücrelerin çoğalmasını geciktirir.

Birçok kimyasal bileşikler Mikroorganizmalar üzerinde zararlı etkisi olan , tıbbi uygulamada dezenfektan ve antiseptik olarak kullanılır.

Dezenfeksiyon için kullanılan kimyasallara dezenfektan denir. Dezenfeksiyon, çeşitli çevresel nesnelerde patojenik mikroorganizmaların yok edilmesini amaçlayan önlemler olarak anlaşılmaktadır. Dezenfektanlar arasında halojen bileşikleri, fenoller ve türevleri, ağır metallerin tuzları, bazı asitler, alkaliler, alkoller vb. Birçok dezenfektan, makroorganizmanın dokuları üzerinde zararlı etkiye sahiptir.

antiseptik denir kimyasal maddeler, mikroorganizmaların ölümüne neden olabilir veya büyümelerini ve üremelerini geciktirebilir. Terapötik amaçlarla (kemoterapi) ve ayrıca bir kişinin yaralarını, cildini ve mukoza zarlarını dezenfekte etmek için kullanılırlar. Hidrojen peroksit, iyodin alkol çözeltileri, parlak yeşil, potasyum permanganat çözeltileri vb., Antiseptik özelliklere sahiptir.Bazı antiseptik maddeler (asetik, kükürtlü, benzoik asitler vb.) İnsanlara zararsız dozlarda gıda muhafazasında kullanılır.

Etki mekanizmasına göre, antimikrobiyal aktiviteye sahip kimyasallar birkaç gruba ayrılabilir.

1. Yüzey aktif maddeler (yağ asitleri, sabunlar ve diğer deterjanlar) yüzey geriliminde azalmaya neden olarak mikroorganizmaların hücre duvarı ve sitoplazmik zarının işleyişinin bozulmasına yol açar.

2. Fenol, kresol ve türevleri mikrobiyal proteinlerin pıhtılaşmasına neden olur. Mikrobiyolojik uygulamalarda ve enfeksiyon hastalıkları hastanelerinde bulaşıcı materyalin dezenfeksiyonunda kullanılırlar.

3. Mikrobiyal proteinlerle etkileşime giren oksitleyici maddeler, enzimlerin aktivitesini bozar, protein denatürasyonuna neden olur. Aktif oksitleyici maddeler, içme suyunu dezenfekte etmek için kullanılan klor ve ozondur. Klor türevleri (klor, kloramin) dezenfeksiyon amaçlı yaygın olarak kullanılmaktadır. Oksitleyici özellikler hidrojen peroksit, potasyum permanganat, iyot vb.

4. Formaldehit, dezenfeksiyon için %40 solüsyon (formalin) olarak kullanılır. Mikroorganizmaların bitkisel ve spor formlarını öldürür. Formalin, mikrobiyal hücre proteinlerinin amino gruplarını bloke eder ve denatürasyonlarına neden olur.

5. Ağır metal tuzları (cıva, kurşun, çinko, altın vb.) mikrobiyal hücre proteinlerini pıhtılaştırarak onların ölümüne neden olur. Bazı metaller (gümüş, altın, cıva vb.) mikroorganizmalar üzerinde ihmal edilebilir konsantrasyonlarda bakterisidal etkiye sahiptir. Bu özelliğe oligodinamik etki denir (Latince oligolardan - küçük, dinamys - güç). Gümüş kaplardaki suyun, gümüş iyonlarının bakterisit etkisinden dolayı çürümediği kanıtlanmıştır. Blennore * yenidoğanların önlenmesi için uzun zamandır%1 gümüş nitrat solüsyonu kullanıldı. Organik gümüş bileşiklerinin (protargol, collargol) koloidal çözeltileri de lokal antiseptik olarak kullanılır.

* (Blennore, gonokokların neden olduğu göz konjonktivasının iltihaplanmasıdır.)

Cıva preparatlarının güçlü bir antimikrobiyal etkisi vardır. Antik çağlardan beri cıva biklorür veya süblime (1:1000 seyreltmede) dezenfeksiyon için kullanılmıştır. Ancak, o sağlar toksik etki bir makroorganizmanın dokusu üzerindedir ve kullanımı sınırlıdır.

6. Boyalar (parlak yeşil, rivanol vb.) bakteri üremesini engelleme özelliğine sahiptir. Bir dizi boyanın çözeltileri antiseptik olarak kullanılır ve ayrıca ilgili mikrofloranın büyümesini engellemek için bazı besin ortamlarının bileşimine dahil edilir.

Bir dizi fiziksel ve kimyasal faktörün mikroorganizmalar üzerindeki yıkıcı etkisi, tıbbi ve sıhhi uygulamalarda yaygın olarak kullanılan aseptik ve antiseptik yöntemlerin temelini oluşturur.

Asepsis, bir nesnenin mikrobiyal kontaminasyonunu önleyen bir önleyici tedbirler sistemidir (yaralar, operasyon alanı, mikroorganizma kültürleri vb.), fiziksel yöntemlere dayalı.

Antiseptikler - çeşitli dezenfekte edici kimyasallar kullanarak yaradaki, tüm organizmadaki veya çevresel nesnelerdeki mikroorganizmaların yok edilmesini amaçlayan bir dizi önlem.

Biyolojik faktörler

Doğal yaşam alanı koşullarında, mikroorganizmalar izole olarak var olmazlar, ancak esas olarak simbiyoz, metabiyoz ve antagonizmaya indirgenen karmaşık ilişkiler içindedirler.

Simbiyoz, farklı türlerin organizmalarının birlikte yaşamasıdır ve onlara karşılıklı fayda sağlar. Aynı zamanda birlikte, ayrı ayrı her birinden daha iyi gelişirler.

Rhizobia ve baklagiller arasında, ipliksi mantarlar ve mavi-yeşil algler (likenler) arasında simbiyotik ilişkiler vardır: Laktik asit bakterileri ve alkol mayasının simbiyozu, bazı laktik asit ürünlerini (kefir, kımız) hazırlamak için kullanılır.

Metabiyoz, bir tür mikroorganizmanın metabolik ürünlerinin oluşturduğu bir ilişki türüdür. gerekli koşullar başkalarının gelişimi için. Örneğin, protein maddelerini parçalayan çürütücü mikroorganizmalar, ortamda amonyum bileşiklerinin birikmesine katkıda bulunur ve nitrifikasyon bakterilerinin büyümesi ve gelişmesi için uygun koşullar yaratır. Ve iyi havalandırılmış toprakta anaerobların gelişimi, serbest oksijeni emen aeroblar olmadan imkansız olurdu.

Metabiyotik ilişkiler toprak mikroorganizmaları arasında yaygındır ve doğadaki maddelerin döngüsünün temelini oluşturur.

Antagonizm, bir mikroorganizmanın diğerinin gelişimini engellediği veya tamamen ölümüne neden olabileceği bir ilişki biçimidir. Var olma mücadelesi veren mikroorganizmalar arasında düşmanca ilişkiler gelişmiştir. Nerede yaşarlarsa yaşasınlar, aralarında besin kaynakları, hava oksijeni ve yaşam alanı için sürekli bir mücadele vardır. Bu nedenle, patojenik bakterilerin çoğu, hastaların salgıları ile bulaşır. dış ortam(toprak, su), burada çok sayıda saprofit ile uzun süreli rekabete dayanmaz ve nispeten hızlı ölür.

Antagonizm, mikroorganizmaların birbirleri üzerindeki doğrudan etkilerinden veya metabolik ürünlerinin etkilerinden kaynaklanabilir. Örneğin, protozoa bakterileri yerken, fajlar onları parçalamaktadır. Yenidoğanların bağırsaklarında laktik asit bakterileri Bifidobacterium bifidum bulunur. Laktik asit salgılayarak çürütücü bakterilerin büyümesini baskılarlar ve böylece hala kararsız olan organizmayı bağırsak rahatsızlıklarından korurlar. bebekler. Yaşam sürecindeki bazı mikroorganizmalar, bakteri ve diğer mikroplar üzerinde zararlı etkisi olan çeşitli maddeler üretir. Bu maddeler antibiyotikleri içerir (bkz. "Antibiyotikler").

Kontrol soruları

1. Mikroorganizmaların yaşamsal faaliyetlerini hangi fiziksel faktörler etkiler?

2. Hangi maddeler dezenfektan olarak sınıflandırılır ve mikroorganizmalar üzerindeki etki mekanizmasında nasıl farklılık gösterirler?

3. Mikroorganizmalar arasında var olan ilişkileri listeler misiniz?

Sterilizasyon

Sterilizasyon üremenin azalmasıdır, yani çevresel nesnelerin mikroorganizmalardan ve sporlarından tamamen salınmasıdır.

Sterilizasyon çeşitli şekillerde gerçekleştirilir:

1) fiziksel (yüksek sıcaklığa, UV ışınlarına maruz kalma, kullanım bakteri filtreleri);

2) kimyasal (çeşitli dezenfektanların, antiseptiklerin kullanımı);

3) biyolojik (antibiyotik kullanımı).

Laboratuvar uygulamasında genellikle fiziksel sterilizasyon yöntemleri kullanılır.

Belirli bir sterilizasyon yöntemini kullanma olasılığı ve uygunluğu, sterilize edilecek malzemenin özelliklerinden, fiziksel ve kimyasal özelliklerinden kaynaklanmaktadır.

Fiziksel yöntemler

Brülör alevinde veya alevde tutuşturma, hem bitkisel hücreler hem de mikroorganizmaların sporları öldüğü için nesnenin tamamen ayrıştığı bir sterilizasyon yöntemidir. Genellikle kalsine edilmiş bakteriyolojik özeler, spatulalar, pipetler, cam lamlar ve lameller, küçük aletler. Makas ve neşter, ateşin etkisi altında kesme yüzeyi donuklaştığı için kalsinasyon ile sterilize edilmemelidir.

Kuru ısı sterilizasyonu

Kuru ısı veya sıcak hava ile sterilizasyon Pasteur fırınlarında (kurutma fırınları) yapılmaktadır. Pasteur fırını, ısıya dayanıklı malzemelerden (metal ve asbest) yapılmış çift cidarlı bir kabindir. Kabini ısıtın gaz brülörleri veya elektrikli ısıtıcılar. Elektrikli ısıtmalı dolaplar, sağlayan regülatörlerle donatılmıştır. istenen sıcaklık. Sıcaklığı kontrol etmek için kabinin üst duvarındaki deliğe yerleştirilmiş bir termometre vardır.

Kuru ısı, esas olarak laboratuvar cam eşyalarını sterilize eder. Sterilizasyon için hazırlanan tabaklar, sterilize edilecek malzemenin eşit ve güvenilir bir şekilde ısıtılmasını sağlamak için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapısı sıkıca kapatılır, ısıtma cihazı açılır, sıcaklık 160-165 °C'ye getirilir ve bu sıcaklıkta 1 saat sterilize edilir.Sterilizasyon sonunda ısıtıcı kapatılır, ancak fırın soğuyana kadar dolap kapağı açılmaz; aksi takdirde soğuk hava dolaba girmek sıcak tabaklarda çatlamalara neden olabilir.

Pastör fırınında sterilizasyon, farklı sıcaklıklarda ve maruziyetlerde (sterilizasyon süresi) gerçekleştirilebilir (Tablo 1).

Sıvılar (besleyici ortam, izotonik sodyum klorür çözeltisi, vb.), kauçuktan ve sentetik malzemelerden yapılmış ürünler, sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için kuru ısı ile sterilize edilemez.

Pasteur fırınında sterilizasyonu kontrol etmek için ipek iplikler, spor oluşturan bakteri kültürü içinde nemlendirilir, kurutulur, steril bir Petri kabına konur ve Pasteur fırınına yerleştirilir. 165°C sıcaklıkta 1 saat sterilizasyon yapılır (kontrol için iplerin bir kısmı oda sıcaklığında bırakılır). Daha sonra sterilize edilen ve kontrol iplikleri, bir Petri kabındaki agar yüzeyine yerleştirilir veya et suyu içeren test tüplerine yerleştirilir ve 2 gün boyunca 37°C sıcaklıkta bir termostatta inkübe edilir. Pastör fırınının doğru çalışmasıyla, steril ipliklerin yerleştirildiği test tüplerinde veya besin ortamlı kaplarda bakteri sporları öleceğinden üreme olmayacak, sterilize edilmemiş (kontrol) ipliklerdeki bakteri sporları ise çimlenecek ve besin ortamlarında büyüme kaydedilecektir.

Pasteur fırınının içindeki sıcaklığı belirlemek için 165-170 ° C sıcaklıkta karamelize edilmiş sükroz veya yenilebilir toz şeker kullanabilirsiniz.

Pasteur fırınında sterilizasyon için laboratuvar cam malzemelerinin hazırlanması. laboratuvar züccaciye(Petri kutuları, dereceli ve Pasteur pipetleri, flakonlar, şişeler, test tüpleri) sterilizasyondan önce iyice yıkanmalı, kurutulmalı ve kağıda sarılmalıdır, aksi takdirde sterilizasyondan sonra tekrar hava bakterileri ile kontamine olabilir.

Petri kutuları, bir veya daha fazla parça kağıda sarılır veya özel metal kutulara yerleştirilir.

Test malzemesinin ağza girmesini önlemek için pipetlerin üst uçlarına pamuklu çubuklar yerleştirilir. Kademeli pipetler 4-5 cm genişliğinde uzun kağıt şeritler halinde sarılır, sarılan pipetin hacmi kağıt üzerine not edilir. Bazı durumlarda, dereceli pipetler ek kağıt sarma olmadan sterilize edilir.

Not. Pipetlerdeki derecelendirme zayıf bir şekilde görünüyorsa, sterilizasyondan önce eski haline getirilir. Pipete uygula yağlı boya ve boyanın kurumasına izin vermeden baryum sülfat tozunu bir bezle ovalayın. Bundan sonra, sadece derecelendirme çentiklerinde kalan fazla boya bir bezle çıkarılır. Bu şekilde işlenen pipetler durulanmalıdır.

Pasteur pipetlerinin keskin uçları bir bek alevinde kapatılır ve her biri 3-5 parça olacak şekilde kağıda sarılır. Kılcal damarların kapalı uçlarını kırmamak için Pasteur pipetlerini dikkatlice sarın.

Şişeler, şişeler, test tüpleri pamuklu gazlı bezle kapatılır. Mantar, teknenin boynuna boyunun 2/3'ü kadar oturmalı, çok sıkı olmamalı, ancak çok gevşek olmamalıdır. Her kap için (test tüpleri hariç) mantarların üzerine bir kağıt kapak konur. Test tüpleri 5-50 parça halinde bağlanır ve kağıtla sarılır.

Not. -de yüksek sıcaklıklar Bardakların ve pipetlerin sarıldığı kağıt ve pamuk yünü sararır ve hatta kömürleşebilir, böylece her biri yeni çeşit laboratuvar tarafından alınan kağıt, kabul edilen sıcaklık rejiminde test edilmelidir.

Kontrol soruları

1. Sterilizasyon terimi ile kastedilen nedir?

2. Sterilizasyon yöntemleri nelerdir?

3. Ateşte kızartılarak sterilize edilen nedir?

4. Pastör fırınının cihazını ve çalışma şeklini tanımlayınız.

5. Pasteur fırınında neler sterilize edilir?

6. Cam eşyalar sterilizasyon için nasıl hazırlanır?

7. Kültür ortamını ve kauçuk nesneleri Pasteur fırınında sterilize etmek neden imkansız?

Egzersiz yapmak

Sterilizasyon için Petri kutuları, dereceli pipetler, Pasteur pipetleri, test tüpleri, şişeler ve küçük şişeler hazırlayın.

Kaynatılarak sterilizasyon

Kaynatma, sterilize edilen malzemede spor olmaması koşuluyla sterilizasyonu garanti eden bir sterilizasyon yöntemidir. Aletlerin, cam ve metal kapların, kauçuk tüplerin vb. Şırıngalarını işlemek için kullanılırlar.

Kaynatma sterilizasyonu genellikle bir sterilizatörde gerçekleştirilir - metal kutu dikdörtgen şekil sıkı oturan kapaklı. Sterilize edilecek malzeme sterilizatördeki file üzerine yerleştirilir ve su ile doldurulur. Kaynama noktasını artırmak ve su sertliğini ortadan kaldırmak için %1-2 sodyum bikarbonat ekleyin (damıtılmış su kullanmak daha iyidir). Sterilizatör bir kapakla kapatılır ve ısıtılır Sterilizasyonun başlangıcı suyun kaynama anı olarak kabul edilir, kaynama süresi 15-30 dakikadır. Sterilizasyon sonunda aletli file yan kulplardan özel kancalarla çıkartılır ve içindeki aletler steril cımbız veya forseps ile alınır ve diğer aletlerle birlikte kaynatılır.

Buhar sterilizasyonu iki şekilde gerçekleştirilir: 1) basınç altında buhar; 2) akan buhar.

Buhar basınçlı sterilizasyon otoklavda üretilmiştir. Bu sterilizasyon yöntemi, doymuş su buharının atmosfer basıncının üzerinde bir basınçta sterilize edilmiş malzemeler üzerindeki etkisine dayanır. Bu sterilizasyon sonucunda mikroorganizmaların hem vejetatif hem de spor formları tek bir tedavi sırasında ölür.

Otoklav (Şek. 12) - dıştan metal bir kasa ile kaplanmış, bir kapakla hava geçirmez şekilde kapatılmış, kazana menteşeli cıvatalarla sıkıca vidalanmış büyük bir kazan. Sterilizasyon odası olarak adlandırılan daha küçük çaplı başka bir dış kazan içine yerleştirilir. Sterilize edilecek eşyalar bu hazneye yerleştirilir. Her iki kazan arasında su-buhar odası adı verilen boş bir alan vardır. Bu hazneye, özel bir su ölçüm tüpü üzerinde işaretlenmiş, dışarıya sabitlenmiş bir huniden belirli bir seviyeye kadar su dökülür. Su buhar odasında kaynatıldığında buhar üretilir. Sterilizasyon odası, basınç gerekli seviyenin üzerine çıktığında buharın çıkması için emniyet valfli bir çıkış musluğu ile donatılmıştır. Sterilizasyon haznesinde oluşan basıncı belirlemek için bir manometre kullanılır.

Pirinç. 12. Otoklav şeması. M - basınç göstergesi; PC - emniyet valfi; B - su için huni; K 2 - su tahliyesi için musluk; K 3 - buhar tahliyesi için dokunun

Normal atmosferik basınç (760 mm Hg) sıfır olarak alınır. Manometre okumaları ile sıcaklık arasında belirli bir ilişki vardır (Tablo 2).

Otomatik mod kontrollü otoklavlar şu anda mevcuttur. Geleneksel manometreye ek olarak, basıncın ayarlanan değerin üzerine çıkmasını önleyen ve böylece sabit bir basınç sağlayan bir elektrokontakt manometre ile donatılmıştır. istenen sıcaklık bir otoklavda.

Çeşitli besin ortamları (doğal protein içerenler hariç), sıvılar (izotonik sodyum klorür çözeltisi, su vb.) basınç altında buharla sterilize edilir; aletler, özellikle kauçuk parçaları olanlar.

Besin ortamının otoklavlanma sıcaklığı ve süresi, besin ortamının hazırlanması için tarifte belirtilen bileşimlerine göre belirlenir. Örneğin basit besiyerleri (et-pepton agar, et-pepton suyu) 120°C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir. Bununla birlikte, bu sıcaklıkta doğal proteinler, karbonhidratlar ve ısıtılarak kolayca değiştirilebilen diğer maddeleri içeren ortamları sterilize etmek imkansızdır. Karbohidratlı ortamlar fraksiyonel olarak 100°C'de veya bir otoklavda 112°C'de (0.5 atm) 10-15 dakika sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, lastik hortumlu cihazlar, tapalar, bakteri mumları ve filtreler 120°C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir.

Dikkat! Otoklavlarda, enfekte olmuş malzeme de nötralize edilir. Mikroorganizma kültürlerini içeren kaplar ve test tüpleri, özel metal kovalara veya kapağında buhar geçişi için delikler bulunan tanklara konur ve otoklavda 126 °C'de (1,5 atm) 1 saat sterilize edilir.Aletler, spor oluşturan bakterilerle çalıştıktan sonra aynı şekilde sterilize edilir.

Yalnızca özel olarak eğitilmiş kişilerin otoklavla çalışmasına izin verilir ve bunlar, cihaza ekli talimatlarda belirtilen kurallara kesinlikle ve doğru bir şekilde uymak zorundadır.

Otoklavlama tekniği. 1. Çalışmadan önce, tüm parçaların servis verilebilirliğini ve kılavuzların alıştırmasını kontrol edin.

2. Kazanın dışına sabitlenmiş bir huniden su (damıtılmış veya kaynatılmış) su göstergesi camının üst işaretine kadar tortu oluşmayacak şekilde dökülür. Huninin altındaki musluk kapatılır.

3. Sterilize edilecek malzeme sterilizasyon haznesinde özel bir ağ üzerine yerleştirilir. Buharın aralarında serbestçe geçmesi gerektiğinden öğeler çok sıkı yüklenmemelidir, aksi takdirde doğru sıcaklığa kadar ısınmazlar ve steril olmayabilirler.

4. Kapak üzerindeki lastik conta daha iyi sızdırmazlık için tebeşirle ovulur.

5. Kapak kapatılarak otoklavın gövdesine cıvatalanır ve cıvatalar çapraz olarak çiftler halinde bükülür.

6. Sterilizasyon odasını dış havaya bağlayan egzoz musluğunu tamamen açın ve otoklavı ısıtmaya başlayın. Otoklav genellikle gaz veya elektrikle ısıtılır.

Otoklav ısıtıldığında su kaynar, ortaya çıkan buhar kazanların duvarları arasında ve kazanın iç duvarındaki özel deliklerden yükselir (bkz. Şekil 12), sterilizasyon odasına girer ve açık çıkış musluğundan çıkar. İlk önce buhar, otoklavda bulunan hava ile birlikte kaçar. Otoklavdaki tüm havanın dışarı atılması önemlidir, aksi takdirde basınç göstergesi otoklavdaki sıcaklığa karşılık gelmeyecektir.

Sürekli güçlü bir buhar jetinin görünümü, havanın otoklavdan tamamen çıkarıldığını gösterir; bundan sonra çıkış musluğu kapatılır ve otoklav içindeki basınç kademeli olarak yükselmeye başlar.

7. Sterilizasyonun başlangıcı, basınç göstergesi okumalarının belirtilen değere ulaştığı an olarak kabul edilir. Isıtma, otoklav içindeki basıncın belirli bir süre değişmeyecek şekilde ayarlanmıştır.

8. Sterilizasyon süresi dolduktan sonra otoklavın ısıtılması durdurulur, çıkış musluğundan buhar dışarı verilir. Manometre iğnesi sıfıra düştüğünde kapağı açın. Otoklavda kalan buharın yanıkları önlemek için kapağı kendinize doğru açın.

Otoklavdaki sıcaklık seviyesi, yani manometrenin doğruluğu kontrol edilebilir. Bunun için belirli bir erime noktasına sahip çeşitli maddeler kullanılır: antipirin (113 °C), resorsinol ve kükürt (119 °C), benzoik asit (120 °C). Bu maddelerden biri önemsiz miktarda boya (macenta veya metilen mavisi) ile karıştırılır ve sterilize edilecek malzeme arasında dikey bir konuma yerleştirilmiş ve sızdırmaz hale getirilmiş bir cam tüpe dökülür. Sıcaklık yeterli ise madde eriyecek ve ilgili boyanın rengine dönüşecektir.

Sterilizasyonun etkinliğini kontrol etmek için, bilinen bir spor kültürü olan bir test tüpü otoklava yerleştirilir. Otoklavlamadan sonra, tüp 24-48 saat süreyle bir termostata aktarılır, üreme olup olmadığı not edilir. Büyüme olmaması, cihazın doğru çalıştığını gösterir.

Buharlı Sterilizasyon Koch aparatında üretilir. Bu yöntem, sterilize edilecek nesnenin 100 °C'nin üzerindeki bir sıcaklıkta değiştiği durumlarda kullanılır. Sıvı buhar, üre, karbonhidrat, süt, patates, jelatin vb. içeren besin ortamlarını sterilize eder.

Koch aparatı (kazan), dış tarafı keçe veya asbest ile kaplanmış (ısı transferini azaltmak için) metal bir silindirdir. Silindir, buharın çıkması için bir deliği olan konik bir kapakla kapatılmıştır. Silindirin içinde, seviyesine kadar su dökülen bir stand vardır. Standın üzerine sterilize edilecek malzemenin yerleştirildiği delikli bir kova yerleştirilir. Koch cihazı gaz veya elektrikle ısıtılır. Sterilizasyon süresi, buharın kapağın kenarlarından ve buhar çıkışından güçlü bir şekilde salındığı andan itibaren sayılır. 30-60 dakika sterilize edin. Sterilizasyonun sonunda ısıtma durdurulur. Malzemenin bulunduğu kova aparattan çıkarılır ve ertesi güne kadar oda sıcaklığında bekletilir. Isınma 30-60 dakika 100 ° C sıcaklıkta arka arkaya 3 gün yapılır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. İlk ısıtma sırasında mikropların bitkisel formları ölürken spor formları kalır. Gün boyunca sporların çimlenme ve sterilizasyonun ikinci gününde ölen bitkisel formlara dönüşme zamanı vardır. Bazı sporların çimlenmeye vakti olmayabileceğinden, materyal 24 saat daha bekletilir ve ardından üçüncü bir sterilizasyon yapılır. Koch aparatında akan buhar ile sterilizasyon gerektirmez özel kontrol, çünkü cihazın doğru çalıştığının göstergesi hazırlanan besin ortamının sterilliğidir. Buharlı sterilizasyon, kapak sökülerek ve çıkış musluğu açıkken bir otoklavda da yapılabilir.

Kontrol soruları

1. Hangi kültür besiyerleri buharla sterilize edilebilir?

2. Sterilizatör nedir ve nasıl çalışır?

3. Kaynar sterilizasyon için neden damıtılmış su kullanılmalıdır?

4. Otoklavın cihazını ve çalışma şeklini tanımlayın.

5. Otoklavda ne sterilize edilir?

6. Otoklavlamada doğru sterilizasyonu ne kontrol eder?

7. Buhar sterilizasyonu nedir?

8. Koch aparatının cihazını tanımlayın.

9. Fraksiyonel sterilizasyonun amacı nedir?

Egzersiz yapmak

Formu doldur.

Fraksiyonel sterilizasyon, bir Koch sarıcıda da gerçekleştirilebilir.

Koch Pıhtılaştırıcı, peynir altı suyu ve yumurta besin ortamlarını pıhtılaştırmak için kullanılır ve ortamın sıkıştırılmasıyla eş zamanlı olarak sterilize edilir.

Koch sarıcı dış tarafı kapalı, düz, çift cidarlı metal bir kutudur ısı yalıtım malzemesi. Dış duvarın üst kısmında bulunan özel bir delikten duvarlar arasındaki boşluğa su dökülür. Delik, içine bir termometrenin yerleştirildiği bir tıpa ile kapatılır. Cihazı iki kapakla kapatın: cam ve metal. Cam kapak sayesinde pıhtılaşma sürecini gözlemleyebilirsiniz. Ortamlı test tüpleri, sarıcının altına eğimli bir konumda yerleştirilir.

Sarıcının ısıtılması gaz veya elektrik kullanılarak gerçekleştirilir. Ortamlar bir kez 90 °C sıcaklıkta 1 saat veya fraksiyonel olarak - 3 gün üst üste 80 °C'de 1 saat sterilize edilir.

Tyndallization* - düşük sıcaklıklarda fraksiyonel sterilizasyon - 60 ° C sıcaklıkta kolayca yok edilen ve denatüre olan maddeler için kullanılır (örneğin, protein sıvıları). Sterilize edilecek malzeme su banyosunda veya termostatlı özel cihazlarda 56-58°C sıcaklıkta 5 gün üst üste birer saat ısıtılır.

* (Sterilizasyon yöntemi, onu öneren Tyndall'ın adını almıştır.)

pastörizasyon- Spor olmayan mikrop formlarının yok edilmesi için Pasteur tarafından önerilen 65-70 ° C'de 1 saat sterilizasyon. Süt, şarap, bira, meyve suları ve diğer ürünleri pastörize edin. Süt, laktik asit ve patojen bakterilerden (Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Shigella, Salmonella, Staphylococcus vb.) kurtulmak için pastörize edilir. Biranın, meyve sularının, şarabın pastörizasyonu, çeşitli fermantasyon türlerine neden olan mikroorganizmaları öldürür. Pastörize gıdalar en iyi buzdolabında saklanır.

Kontrol soruları

1. Koch sarıcının amacı ve cihazı nedir?

2. Sarıcıda sterilizasyon yöntemleri nelerdir?

3. Tyndalizasyon nedir?

4. Pastörizasyon nedir?

Sterilizasyon ultraviyole ışınlama

UV ışınları ile sterilizasyon kullanılarak gerçekleştirilir. özel kurulumlar- antiseptik lambalar. UV ışınları yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve sadece vejetatif hücrelerin değil sporların da ölümüne neden olabilir. UV ışınlaması hastanelerde, ameliyathanelerde, çocuk bakımevlerinde vb.

Kontrol soruları

1. Ultraviyole ışınlarının özellikleri nelerdir?

2. Ultraviyole radyasyonla sterilizasyon hangi durumlarda kullanılır?

Bakteri filtreleri ile mekanik sterilizasyon

Filtrasyon sterilizasyonu, sterilize edilecek nesnelerin ısıtıldığında değiştiği durumlarda kullanılır. Filtrasyon, çeşitli ince gözenekli malzemelerden yapılmış bakteri filtreleri kullanılarak gerçekleştirilir. Filtrelerin gözenekleri, bakterilerin mekanik olarak tutulmasını sağlamak için yeterince küçük (1 µm'ye kadar) olmalıdır, bu nedenle bazı yazarlar, filtrasyonun mekanik yöntemler sterilizasyon.

Filtrasyon yöntemi, protein, serum, bazı antibiyotikler içeren besin ortamlarını sterilize eder ve ayrıca bakterileri virüslerden, fajlardan ve ekzotoksinlerden ayırır.

Mikrobiyolojik uygulamada Seitz asbest filtreleri, membran filtreler ve Chamberlan ve Berkefeld filtreleri (mumlar) kullanılmaktadır.

Seitz filtreleri, asbest ve selüloz karışımından yapılan disklerdir. Kalınlıkları 3-5 mm, çapları 35-140 mm'dir. Yerli sanayi iki dereceli filtreler üretir: "F" (filtreleme) - asılı parçacıkları tutar, ancak bakterileri geçirir; "SF" (sterilizasyon) - daha küçük gözeneklerle, bakterileri tutarken virüsleri geçirir. Buruşuk asbest levhaların yanı sıra kırık ve çatlak levhalar çalışmaya uygun değildir.

Membran filtreler nitroselülozdan yapılmıştır. Onlar disklerdir. Beyaz renk 0,1 mm kalınlık ve 35 mm çap. Gözenek boyutuna bağlı olarak, 1, 2, 3, 4 ve 5 olarak adlandırılırlar (Tablo 3).

1 numaralı filtre sterilizasyon için en uygundur Listelenenlere ek olarak, filtrelenmiş sıvıyı içinde bulunan büyük parçacıklardan kurtarmak için tasarlanmış sözde ön filtreyi de üretirler.

Chamberlant ve Berkefeld filtreleri (mumlar) bir ucu kapalı içi boş silindirlerdir. Chamberlain mumları, kum ve kuvars ile karıştırılmış kaolinden yapılır. Gözenek boyutuna göre standardize edilirler ve L1, L2, L3...L13 olarak gösterilirler. Berkefeld filtreleri (mumlar) demlik toprağından hazırlanır, 3-4, 4-7, 8-12 mikron gözenek çapına karşılık gelen gözeneklerin boyutuna göre V, N, W olarak adlandırılırlar.

Bakteriyel filtrelerle çalışma aşağıdaki gibi yapılır. Filtre, filtre alıcısına takılan özel bir tutucuya sabitlenmelidir. Alıcı genellikle bir Bunsen şişesidir. Çoğu durumda paslanmaz çelikten yapılmış tutucular iki parçadan oluşur: tabanı olmayan bir silindir şeklindeki üst kısım ve bir boru ile biten destek parçası olan alt kısım. Pürüzlü yüzeyi yukarıya gelecek şekilde Seitz filtreleri metal bir ağ üzerine yerleştirilir ve üst ile üst kısım arasına vidalarla sıkıca sıkıştırılır. alt Kulp. Monte edilmiş filtre, Bunsen şişesinin boynuna yerleştirilmiş bir lastik tıpaya sabitlenmiştir. Bir vakum pompasına bağlı olan şişenin çıkış borusuna bir pamuklu çubuk sokulur. Hazırlanan kurulum kağıda sarılır ve otoklavda 1 atm basınçta 20-30 dakika sterilize edilir. Monte edilmiş formdaki tüm cihaza Seitz filtresi de denir (Şek. 13).

Filtrasyondan hemen önce, Bunsen şişesinin çıkış ucu bir lastik boru ile bir yağ veya su püskürtme pompasına bağlanır. Sızdırmazlık oluşturmak için çeşitli parçaların derzleri parafinle doldurulur. Filtrelenecek sıvı aparatın silindirine dökülür ve alıcıda vakum oluşturmak için pompa çalıştırılır. Ortaya çıkan basınç farkı sonucunda filtre edilen sıvı filtre gözeneklerinden geçerek alıcıya geçer ve mikroplar filtre yüzeyinde kalır.

Membran filtreler kullanılmadan önce distile suda kaynatılarak sterilize edilir. Filtrelerin bükülmesini önlemek için önce distile suya konur, 50-60 °C sıcaklığa kadar ısıtılır ve 2-3 kez su değiştirilerek 30 dakika kısık ateşte kaynatılır. Filtre tutucu ve alıcı önceden sterilize edilir, cihaz aseptik koşullarda monte edilir. Metal ağ üzerindeki membran filtrenin yırtılmaması için altına steril filtre kağıdından daireler yerleştirilir. Daha sonra düz uçlu steril cımbızla membran filtreyi sterilizatörden alın ve parlak yüzeyi aşağı gelecek şekilde destek ızgarasının üzerine yerleştirin.

Otoklavda sterilize edilen mumlar (Chamberlant), kauçuk bir tüp vasıtasıyla bir alıcıya bağlanır ve filtrelenmiş bir sıvı ile bir kaba (genellikle bir silindir) indirilir. Filtreleme bir vakum pompası kullanılarak gerçekleştirilir. Alıcıya steril bir filtrat girer ve bakteriler mumun gözenekleri tarafından tutulur.

Membran ve asbest filtreleri tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır. Kullanımdan sonra mumlar musluk suyunda kaynatılır, ardından bir mufla fırınında kalsine edilir.

Sonraki kullanımdan önce mumların bütünlüğü kontrol edilir. Mum, su dolu bir kaba indirilir ve içinden hava geçirilir. Mum yüzeyinde hava kabarcıkları oluşursa, mumda çatlaklar oluşmuş ve kullanılamaz hale gelmiştir.

Kontrol soruları

1. Filtre sterilizasyon yöntemi nedir? Bu yöntemle sterilize edilen nedir?

2. Hangi bakteri filtrelerini biliyorsunuz? Filtreleme cihazı nasıl monte edilir, hangi şartlara dikkat edilmelidir?

Kimyasal yöntemler

Bu tür bir sterilizasyon sınırlı ölçüde kullanılır ve temel olarak besleyici ortamların ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemeye hizmet eder.

Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamı bu koruyuculardan arındırmak gerekirse, 56 ° C'de bir su banyosunda ısıtılır (koruyucular buharlaşır).

Aşıların muhafazası için serum, mertiolat, borik asit, formalin vb. kullanılmaktadır.

biyolojik sterilizasyon

Biyolojik sterilizasyon, antibiyotik kullanımına dayanmaktadır. Bu yöntem virüslerin yetiştirilmesinde kullanılır.

Kontrol soruları

1. nedir kimyasal sterilizasyon ve ne zaman kullanılır?

2. Biyolojik sterilizasyon nedir?

Ana sterilizasyon yöntemleri tabloda sunulmaktadır. 4.

1 (Sterilizasyon tamamlanmamıştır: sporlar sterilize edilen materyalde kalır.)

2 (Sterilizasyon tamamlanmamıştır: virüsler sterilize edilen malzemede kalır.)

dezenfeksiyon

Mikrobiyolojik uygulamada çeşitli dezenfektanlar kullanılır: %3-5 fenol çözeltileri, %5-10 Lisol çözeltileri, %1-5 kloramin çözeltileri, %3-6 hidrojen peroksit çözeltileri, %1-5 formalin çözeltileri, 1:1000 (%0,1) dilüsyonda cıva klorür çözeltileri, 70° alkol vb.

Harcanan patolojik materyal (irin, dışkı, idrar, balgam, kan, beyin omurilik sıvısı) kanalizasyona verilmeden önce dezenfekte edilir. Kuru ağartıcı veya %3-5 kloramin solüsyonu ile dezenfeksiyon yapılır.

Patolojik materyal veya mikroorganizma kültürleri ile kontamine olmuş pipetler (dereceli ve Pasteur), cam spatulalar, lamlar ve lameller %3 fenol veya hidrojen peroksit çözeltisi içeren cam kavanozlara bir gün süreyle daldırılır.

Enfeksiyöz materyal ile çalışmanın sonunda, laboratuvar asistanı bir dezenfektan solüsyonu ile tedavi etmelidir. iş yeri ve eller. Masaüstünün yüzeyi, %3 fenol solüsyonu ile nemlendirilmiş bir parça pamuk yünü ile silinir. Eller %1'lik kloramin solüsyonu ile dezenfekte edilir. Bunu yapmak için bir pamuk top veya gazlı bez dezenfektan solüsyonla nemlendirin ve sol eli, ardından sağ eli silin ve ardından ellerini ılık su ve sabunla yıkayın.

Dezenfektan seçimi, konsantrasyonu ve maruz kalma süresi (maruz kalma), mikrobun biyolojik özelliklerine ve dezenfektanın patojenik mikroorganizmalarla temasının gerçekleşeceği ortama bağlıdır. Örneğin, süblimat, fenol, alkoller, protein substratlarının (irin, kan, balgam) dezenfeksiyonu için uygun değildir, çünkü bunların etkisi altında protein pıhtılaşması meydana gelir ve pıhtılaşmış protein, mikroorganizmaları dezenfektanlara maruz kalmaktan korur.

Mikroorganizmaların spor formlarıyla enfekte olmuş materyali dezenfekte ederken,% 5'lik bir kloramin çözeltisi,% 1-2,5 aktif kloramin çözeltileri,% 5-10 formalin çözeltileri ve diğer maddeler kullanılır.

Çalışma sırasında gün boyunca gerçekleştirilen dezenfeksiyona akım ve iş sonunda - final denir.

Onlardan çalışma solüsyonlarının hazırlanması için dezenfektanlar ve reçeteler. Klor kireci, güçlü bir klor kokusu olan beyaz topaklı bir tozdur, suda tamamen çözünmez. Bakterisidal etki, miktarı %28 ila %36 arasında değişen aktif klor içeriğine bağlıdır. %25'ten az aktif klor içeren ağartıcılar dezenfeksiyon için uygun değildir.

Uygun olmayan şekilde saklanırsa, çamaşır suyu ayrışır ve aktif klorun bir kısmını kaybeder. Ayrışma ısı, nem, güneş ışığı ile kolaylaştırılır, bu nedenle çamaşır suyu kuru, karanlık bir yerde, sıkıca kapatılmış bir kapta saklanmalıdır.

Kuru ağartıcı, insan ve hayvanların dışkılarını dezenfekte etmek için kullanılır (1 litre dışkıya 200 g ve 1 litre idrara 10 g oranında).

İlk %10'luk berraklaştırılmış ağartma solüsyonunun hazırlanması. 1 kg kuru çamaşır suyu alın, emaye bir kovaya koyun ve öğütün. Sonra döküldü soğuk su 10 l hacme kadar iyice karıştırın, kapağı kapatın ve serin bir yerde bir gün bekletin. Bundan sonra, elde edilen% 10'luk berraklaştırılmış çözelti dikkatlice boşaltılır ve birkaç kat gazlı bezden süzülür veya yoğun bir bezden süzülür. Ahşap tıpa ile kapatılmış koyu renkli cam şişelerde, serin bir yerde 10 günden fazla olmamak üzere saklayın. Gerekli konsantrasyondaki çalışma çözeltileri, kullanımlarından hemen önce ana çözeltiden hazırlanır. %0,2-10 oranında berraklaştırılmış ağartıcı solüsyonlarının hazırlanması için gerekli olan bazik solüsyon miktarı tabloda verilmiştir. 5.

Arıtılmış çamaşır suyu solüsyonlarının konsantrasyonu, dezenfekte edilecek nesnenin doğasına ve patojenin direncine bağlı olarak %0,2 ila %10 arasında seçilir.

Kloramin - beyaz veya sarımsı renkli kristal bir madde, %24-28 aktif klor içerir. Oda sıcaklığında suda iyi çözünür, bu nedenle dezenfeksiyondan hemen önce solüsyonları hazırlanır. %0.2-10 kloramin solüsyonları kullanın. Çözeltinin yüzde derişimi ile 1 ve 10 litre başına gram cinsinden kloramin miktarı arasındaki oran tabloda verilmiştir. 6.

Kloramini cam veya emaye eşya. Kloramin solüsyonlarını zemin tıpası olan koyu cam bir kapta saklarken, aktiviteleri 15 güne kadar devam eder.

aktif kloramin Kloraminin dezenfekte edici özellikleri, 1:1 veya 1:2 oranında bir aktivatör ilave edilerek arttırılır. Amonyum bileşikleri - klorür, sülfat, amonyum nitrat - aktivatör olarak kullanılır. Aktif kloramin %0,5, 1 ve %2,5 konsantrasyonlarında kullanılır. Bunları kullanmadan hemen önce hazırlayın. Kloramin ve amonyum tuzu ayrı ayrı tartılır. Önce kloramin suda eritilir ve ardından aktivatör eklenir.

Aktive edilmiş kloramin çözeltilerinin geleneksel olanlara göre avantajı, bir aktivatör eklendiğinde aktif klorin salınımının hızlanmasıdır. Bu nedenle, ilacın sadece mikroorganizmaların vejetatif formları üzerinde değil, aynı zamanda sporları üzerinde de zararlı bir etkisi vardır. Aktif kloramin daha düşük konsantrasyonlarda ve daha düşük maruziyette kullanılır.

Fenol (karbolik asit), keskin karakteristik bir kokuya sahip, renksiz, iğne şeklinde kristallerdir. Işık, hava ve nemin etkisi altında kristaller koyu kırmızı bir renk alır. saklanan kapalı bankalar koyu camdan ve ışıktan korunan bir yerde.

Fenol suda, alkolde, eterde, katı yağlarda çözünür. Yüksek higroskopisiteye sahip olduğundan ortamdan nemi çeker ve sıvı hale gelir. Sıvı karbolik asit, %90 kristal fenol ve %10 su içerir.

Tabloda gösterilen şemaya göre kristalin fenol ve sıvı karbolik asitten hazırlanan %3-5 sulu karbolik asit solüsyonlarını uygulayın. 7. Fenolün aktivitesi suda çözündüğünde artar. sıcak su(40-50°C).

Dikkat! Cilde bulaşan kristalin fenol veya sıvı karbolik asit, cilt tahrişine ve yüksek konsantrasyonlarda - ciddi yanıklara neden olabilir. Bu nedenle karbolik asit çok dikkatli kullanılmalıdır. Solüsyon hazırlanırken lastik eldiven giyilmeli veya son çare ellerinizi vazelin ile yağlayın.

Karbolik asit cilt ile temas ederse, hemen ılık su ve sabun veya 40 ° etil alkol ile yıkayın.

Not. Fenolün dezenfektan çözeltilerinin hazırlanması için sıvı karbolik asit kullanmak daha uygun ve daha güvenlidir.

Kontrol soruları

1. Mikrobiyolojik uygulamada hangi dezenfektanlar kullanılır?

2. Tanımlayın dış görünüş ve ağartıcı, kloramin, fenolün ana özellikleri.

3. Mikroorganizmaların spor formlarıyla enfekte olmuş materyalleri dezenfekte etmek için hangi dezenfektan solüsyonları kullanılır?

Egzersiz yapmak

2 litre %5 oranında arıtılmış ağartıcı solüsyonu hazırlayın; 500 ml %3 kloramin solüsyonu, 300 ml %1 aktif kloramin solüsyonu.

Dikkat! Çözümleri hazırlamaya başlamadan önce hesaplamaları yapın.

Termostat- sabit bir sıcaklığı korumak için bir cihaz - mikroorganizmaların kültürlerini büyütmek için kullanılır. Belirli bir sıcaklığın uzun süre muhafaza edildiği bir dolaptır (Şekil 1). Birçok mikroorganizmanın üremesi için optimum sıcaklık 37 ºС'dir. Termostatlar kuru hava ve sudur.

Fırın (Pastör fırın) kapların, aletlerin ve nişasta, tebeşir gibi kuru malzemelerin kuru ısı sterilizasyonu için kullanılır (Şekil 2). Sterilize edilecek malzeme önceden kağıda sarılır ve duvarlara değmeyecek şekilde bir dolaba yerleştirilir. Sterilizasyon, iki saat boyunca 160 ºС sıcaklıkta gerçekleştirilir. Sıcaklığın 180 ºС üzerine çıkarılması önerilmez: pamuk tıkaçlar ve kağıt bozulmaya başlar (kahverengiye döner, kırılgan hale gelir). Sterilize edilen malzeme dolap kapatılıp soğuduktan sonra çıkarılır, dolap içi sıcaklığın oda sıcaklığına eşit olması daha iyidir.

Koloni sayma cihazı(Şekil 3) - elektrikli kalemle donatılmış yarı otomatik bir sayaç yay cihazı Petri kaplarındaki bakteri kolonilerini saymak için. Bardak
Bakteri kolonileri içeren Petri, raster bir cam üzerine baş aşağı yerleştirilir. Petri kabının tabanının koloninin konumuna karşılık gelen bölümü üzerine elektropenin hafif bir basıncı, cam üzerinde bir iz bırakır. Bu durumda tutucu yükselir, devre kapanır ve sayaç okuması bir artar. Bakteri kolonilerinin sayısı, nabız sayacının sayım başlamadan önce ve saydıktan sonra okumaları arasındaki fark hesaplanarak sayılır.

Otoklav(Şekil 4) - tabakları ve besin ortamlarını basınç altında buharla sterilize etmek için tasarlanmış kalın duvarlı bir aparat. Bu, çift metal cidarlı ve kapaklı hermetik bir kazan. Duvarlar arasındaki boşluk (buhar odası) su ile doldurulur. İç kısım(sterilizasyon odası) bir basınç göstergesi, emniyet valfleri ve su ve buharı boşaltmak için bir musluk ile donatılmıştır. Sızdırmazlık oluşturmak için otoklav, lastik contalı bir kapakla sıkıca kapatılır. Besin ortamının 0,5 ila 1,0 MPa basınç altında 20 ... 30 dakika sterilizasyonu için kullanılır.

1 - gövde; 2 - termometre; 1 - kapak; 2 - gövde;

3 - kapı; 4 - potansiyometre; 3 - redüktör; 4 - kontrol ünitesi;

5 - geçiş anahtarı; 6 - lamba; 5 - işaretleme; 6 - termometre

7 - havalandırma delikleri

Şekil 1 - Termostat Şekil 2 - Kurutma kabini

1 - Petri kabı için masa; 2 - yay tertibatlı bir kalem;

3 - sayacın göstergesi; 4 - nabız sayacını açmak için geçiş anahtarı; 5 - sayaç aydınlatma lambasını açmak için geçiş anahtarı

Şekil 3 - Mikroorganizma kolonilerini saymak için cihaz

Sterilizasyon- biriktirme; vejetatif ve spor formlarındaki patojenik ve patojenik olmayan mikroorganizmaların herhangi bir malzemede yok edilmesi.

Sterilizasyon için bulaşıkların hazırlanması. Laboratuvar cam malzemeleri temiz ve sterilize edilmiş olmalıdır. Yıkamak için sabun çözeltileri veya kimyasal kullanın deterjanlar. Yeni kaplar, sonradan camın sızmasını önlemek için %1-2 hidroklorik asit çözeltisinde önceden kaynatılır. Akan suda yıkanan bulaşıklar distile su ile durulanır ve kurutulur.

bakteriyolojik tüpler. Konik, buzlu şişeler, bir gazlı bezle kaplanmış, sıkıca bükülmüş pamuk yünü rulolarından oluşan pamuklu gazlı bez tıpalarla kapatılır. Dış kapak şeklindeki metal tıpalar da bakteriyolojik test tüpleri için geliştirilmiştir. Pamuk tıkaçların yüksek sıcaklıklarda sterilizasyonunun, pamuk yününden Brucella gibi bazı hassas bakterilerin büyümesini engelleyen maddelerin salınmasına yol açtığı dikkate alınmalıdır.

Pipetleri monte ederken, üst uca bir pamuklu çubuk sokulur. Pasteur pipetlerinin kapalı bir kapileri olmalıdır. Ölçülen her bir pipet, ağzından başlayarak tüm uzunluğu boyunca sarmal şeklinde 4-5 cm genişliğinde uzun bir kağıt şeridi ile sarılır. Pastör pipetleri 10-20 parça halinde kağıda, test tüpleri - 15-20 parça halinde sarılır. Her tür pipet en iyi şekilde sterilizasyondan önce ve sonra özel metal kutularda saklanır. Şişelerin üzerindeki tıpalar ayrıca kağıt kapaklarla kapatılmıştır.

Sterilizasyondan önce toplanmış halde temiz Petri kapları 3-4 parça halinde kağıda sarılır. Sterilizasyondan sonra kağıt, steril cam eşyayı mikroflora kontaminasyonundan korur.

Sterilizasyondan önce bulaşıklar, hava sirkülasyonu sağlamak için çok sıkı olmayacak şekilde bir kurutma kabinine yerleştirilir ve kağıt ve pamuk yünü daha yüksek bir sıcaklıkta kömürleşeceğinden sıcaklığın 180 ° C'yi geçmediğinden emin olun. Sterilizasyon tamamlandıktan sonra kurutma kabini o zamana kadar açılmaz. İçindeki sıcaklık 70-80°C'ye düşene kadar, çünkü keskin düşüş sıcaklıklar camı kırabilir.

Züccaciye, içindeki besin ortamının en az 1 atm basınç altında otoklavlanarak sterilize edilmesi amaçlanıyorsa, önceden sterilize edilmez. Ortamı sıvı buharla veya bir otoklavda 0,5 atm'den fazla olmayan bir basınç altında sterilize ederken. steril kaplar kullanılmalıdır.

Kuru ısıtılmış hava ile sterilizasyon. Yöntem, temiz cam eşyaları sterilize etmek için kullanılır. Bunu yapmak için, çift cidarlı özel bir fırın olan Pasteur fırınını kullanın. Dışı ısıya dayanıklı malzeme ile kaplanmıştır. Üstte bir termometre var. Isıya dayanıklı cilt ile iç kısım arasında metal kutu altta otomatik bir elektrikli ısıtma elemanı var. Kurutma kabini elektriğe bağlandığında içindeki hava ısınır. Ayarlanan sıcaklığa ulaşıldığında, sterilizasyonun başlama zamanı not edilir. Sterilizasyon modu: 155-160°C sıcaklıkta - maruz kalma 2 saat, 165-170°C'de - 1-1.5 saat, 180°C'de - 1 saat Sterilizasyon süresinden sonra ısıtma durdurulur.

otoklavlama. Bu, basınç altında yüksek sıcaklık ile birleştirilmiş buhar sterilizasyonudur. özel aparat- otoklav. Doymuş buhar daha soğuk bir nesneyle karşılaştığında, buhar yoğunlaşarak büyük miktarda ısı açığa çıkarır. Ek olarak, sterilize edilecek malzemenin iç kısımlarına nüfuz etmesine katkıda bulunan buhar hacmi azalır. Bir ön koşul, gerçekten doymuş buharın sağlanmasıdır, böylece soğuk bir nesneyle teması anında yoğuşmaya ve ısınmaya yol açar. Endüstri, dikey ve yatay otoklavlar üretir.

Dikey bir otoklav, hermetik olarak kapatılmış bir kapakla kapatılmış, çift cidarlı, silindirik bir metal kazandır. Duvarlar arasında hunili özel bir musluktan belirli bir seviyeye kadar su dökülür. Kazanın iç duvarı, üst kısımda delikler ve alt kısımda su ısıtıldığında buharın kazandaki havayı değiştirdiği bir musluk ile donatılmıştır. Otoklavın üzerine metal bir koruyucu çerçeve konur ve bununla otoklavın kendisi arasında boş alan olmalıdır. Otoklav, güç kaynağı açılarak ısıtılır.

Otoklav sterilize edilecek malzeme ile yüklenir, kapak ve içinden suyun döküldüğü valf kapatılır, alt valf geçici olarak açılır. Isıtılan su, otoklavın duvarları arasında kaynar, ortaya çıkan buhar yükselir ve iç duvarın üst açıklıklarından kazana geçerek havayı alttaki açık musluktan dışarı iter. Tüm hava dışarı atıldığında ve buhar eşit bir akışla dışarı çıkmaya başladığında alt musluk kapatılır. Sonuç olarak, otoklav içindeki buhar basıncı yükselir. Sterilizasyonun başlangıcı, basıncın önceden belirlenmiş bir değere (manometreye göre) ulaştığı an olarak kabul edilir. Isıtma, buhar basıncını aynı seviyede tutarak sterilizasyon boyunca düzenlenir. Otoklav içindeki basıncın aşırı artması durumunda, fazla buharın otomatik olarak dışarı çıkmasını sağlayan bir emniyet valfi bulunmaktadır.

Buhar basıncı arttıkça otoklavdaki sıcaklık da buna bağlı olarak artar.

Manometre, ortam sıcaklığını dikkate almadan buhar basıncını gösterir. atmosferik basınç(760 mm Hg). Sterilizasyon süresi dolduktan sonra otoklav kapatılır. Manometrenin sıfır okumasında soğuduktan sonra, buharı serbest bırakmak için valfi açın.

Yatay bir otoklav, tasarım açısından dikey bir otoklavdan farklıdır, ancak çalışma prensibi aynıdır.

virolojik kısırlaştırma patolojik hayvan

Laboratuvara patolojik materyal gönderilirken doldurulacak örnek formlar

Kuru ısı veya sıcak hava ile sterilizasyon Pasteur fırınlarında (kurutma fırınları) yapılmaktadır. Pasteur fırını, ısıya dayanıklı malzemelerden (metal ve asbest) yapılmış çift cidarlı bir kabindir. Kabini gaz brülörleri veya elektrikli ısıtıcılarla ısıtın. Elektrikli ısıtmalı dolaplar, gerekli sıcaklığı sağlayan regülatörlerle donatılmıştır. Sıcaklığı kontrol etmek için kabinin üst duvarındaki deliğe yerleştirilmiş bir termometre vardır.

Kuru ısı, esas olarak laboratuvar cam eşyalarını sterilize eder. Sterilizasyon için hazırlanan tabaklar, sterilize edilecek malzemenin eşit ve güvenilir bir şekilde ısıtılmasını sağlamak için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapısı sıkıca kapatılır, ısıtma cihazı açılır, sıcaklık 160-165 °C'ye getirilir ve bu sıcaklıkta 1 saat sterilize edilir.Sterilizasyon sonunda ısıtıcı kapatılır, ancak fırın soğuyana kadar dolap kapağı açılmaz; Aksi halde dolap içine giren soğuk hava sıcak tabaklarda çatlamalara neden olabilir.

Pastör fırınında sterilizasyon, farklı sıcaklıklarda ve maruziyetlerde (sterilizasyon süresi) gerçekleştirilebilir (Tablo 1).

Tablo 1. Sterilizasyon modu

Pasteur fırınının içindeki sıcaklığı belirlemek için 165-170 ° C sıcaklıkta karamelize edilmiş sükroz veya yenilebilir toz şeker kullanabilirsiniz.

Pasteur fırınında sterilizasyon için laboratuvar cam malzemelerinin hazırlanması. Sterilizasyondan önce laboratuvar cam malzemeleri (Petri kutuları, dereceli ve Pasteur pipetleri, küçük şişeler, şişeler, test tüpleri) iyice yıkanmalı, kurutulmalı ve kağıda sarılmalıdır, aksi takdirde sterilizasyondan sonra tekrar hava bakterileri ile kontamine olabilir.

Petri kutuları, bir veya daha fazla parça kağıda sarılır veya özel metal kutulara yerleştirilir.

Not. Pipetlerdeki derecelendirme zayıf bir şekilde görünüyorsa, sterilizasyondan önce eski haline getirilir. Pipete yağlı boya sürülür ve boyanın kurumasına izin vermeden baryum sülfat tozu bir bezle sürülür. Bundan sonra, sadece derecelendirme çentiklerinde kalan fazla boya bir bezle çıkarılır. Bu şekilde işlenen pipetler durulanmalıdır.

Not. Yüksek sıcaklıklarda, bardakların ve pipetlerin sarıldığı kağıt ve pamuk yünü sararır ve hatta kömürleşebilir, bu nedenle laboratuvar tarafından elde edilen her yeni kağıt türü kabul edilen sıcaklık rejiminde test edilmelidir.

Kontrol soruları

1. Sterilizasyon terimi ile kastedilen nedir?

2. Sterilizasyon yöntemleri nelerdir?

3. Ateşte kızartılarak sterilize edilen nedir?

4. Pastör fırınının cihazını ve çalışma şeklini tanımlayınız.

5. Pasteur fırınında neler sterilize edilir?

6. Cam eşyalar sterilizasyon için nasıl hazırlanır?

7. Kültür ortamını ve kauçuk nesneleri Pasteur fırınında sterilize etmek neden imkansız?

Egzersiz yapmak

Sterilizasyon için Petri kutuları, dereceli pipetler, Pasteur pipetleri, test tüpleri, şişeler ve küçük şişeler hazırlayın.

1. flambe(lat. flamma'dan - alev ve fr. flamb é - yanık) - küçük metal veya cam nesneleri alevde yakarak sterilizasyon. Bakteriyolojik özeler, metal cımbızlar, cam spatulalar ve tüpler, cam slaytlar vb.Bu şekilde sterilize edilir Alev sıcaklığı yaklaşık 1000ºС'dir. Kalsine edildiğinde tüm mikroorganizmalar (bitkisel ve spor formları) yanar. Hızlı ve güvenilir bir sterilizasyon yöntemidir.

2. Kaynamak. En kolay sterilizasyon yöntemlerinden biridir. Bir sterilizatörde - sterilize edilmiş öğeleri yerleştirmek için altta bir kapak ve bir ağ bulunan metal bir dikdörtgen kutu içinde gerçekleştirilir. İçine su dökülür ve kaynama noktasına kadar ısıtılır (ısıtma elektrikle veya ateşte). Kaynama, yaklaşık 100 ºС sıcaklıkta 15-30 dakikadan 2 saate kadar sürebilir. Küçük metal veya cam nesneleri sterilize edin - şırıngalar, iğneler, cam tüpler vb. Aynı zamanda, mikroorganizmaların vejetatif formları ve bazı sporlar ölür. Ayrıca sterilize edilmiş malzemeyi kaynar su ile haşlamayı da uygularlar.

3. Kuru ısı sterilizasyonu. Pasteur fırınında veya fırınında sıcak hava ile üretilir. Pasteur fırını, ısı yalıtımı için dış tarafı asbest astarlı çift cidarlı bir kabindir. Kabinin içinde düzenlenmiş metal raflar sterilize edilmiş malzemenin yerleştirildiği delikler ile. Elektrikli ısıtma. Sterilizasyon, bu sıcaklıklara ulaşıldığı andan itibaren 1-2 saat boyunca 160-180 ºС sıcaklıkta gerçekleştirilir (bir termometre ile kontrol edilir). Kuru ısı, esas olarak cam eşyaları - Petri kapları, pipetler, spatulalar (kağıda sarılmış) ve ayrıca test tüpleri, şişeler sterilize eder. Bu teknik güvenilirdir - mikroorganizmaların spor olmayan ve spor formları ölür. Kağıda sarılı ve sterilize edilmiş malzeme saklanabilir.

4. Buharlı Sterilizasyon. sıcak tutuldu nemli hava Koch aparatında. Koch aparatı (kazan), ayaklar üzerinde olabilen ve muşamba ile kaplanabilen metal bir silindirdir. Aparatın içine delikli metal bir dairenin yerleştirildiği çıkıntıya ulaşmayacak kadar su dökülür ve üzerine sterilize edilecek malzeme yerleştirilir. Aparat, ortasında buharın çıkması için bir delik bulunan konik bir kapakla sıkıca kapatılır ve ateşte ısıtılır. Su kaynadığında, yaklaşık 100 ºС sıcaklıktaki sıcak su buharı, kapağın açıklığından güçlü bir akışla “akacaktır”. Bu andan itibaren sterilizasyonun başlama zamanı not edilir. Akan buhar ile sterilizasyon, sterilize edilecek malzemenin hacmine bağlı olarak 45 dakika ile 1,5 saat arasında sürer. 100 ºº'nin üzerinde ısıtılamayan besin ortamlarını sterilize edin, örneğin NMF (100 ºº'nin üzerindeki sıcaklıklarda sıvılaşır ve katılaşmaz). Bu sterilizasyon yöntemi tamamen güvenilir değildir - sporlar kalırken yalnızca vejetatif mikroorganizma formları tamamen ölür. Koch aparatında ortamın tam sterilizasyonunu sağlamak için fraksiyonel sterilizasyon kullanılır.

5. Basınç altında buhar sterilizasyonu (otoklavlama). Otoklavda doymuş buharla gerçekleştirilir. Otoklavlar çeşitli tasarımlarda gelir. Dikey otoklav, kazana cıvatalarla sıkıca vidalanmış, ağır menteşeli bir kapağı olan, dış tarafı metal bir mahfaza ile çevrili, çift cidarlı devasa bir kazandır. Kazanın alt kısmında, iç kazan ile mahfaza arasındaki boş alana suyun döküldüğü bir huni ve bir musluk vardır. Sterilize edilecek malzeme kazanın dibine konur, kapak sıkıca vidalanır ve elektrikli ısıtma açılır. Su kaynadığında, buhar dahili kazana geçer. Otoklavdaki basınç yükselir, aynı zamanda sıcaklık yükselir. Manometre, kazandaki basıncın ayarlanan değere ulaştığını gösterdiğinde, sterilizasyonun başlama saatini not edin. Basınç, bir emniyet valfi vasıtasıyla belirli bir seviyede tutulur.

Tipik olarak, laboratuvar uygulamasında, basınçlı sterilizasyon 1.5-2 atm'de ve yaklaşık 115-120 ºº sıcaklıkta gerçekleştirilir.

20-30 dk. Sterilizasyon süresi dolduktan sonra ısıtma durdurulur, buhar valfi açılır ve buhar dışarı verilir. Basınçlı besiyeri MPB, MPA, su ile cam eşya altında buharla sterilize edin, pansuman, cerrahi aletler, vb. Otoklavlama, en dirençli sporlar dahil olmak üzere her türlü mikroorganizmayı öldüren hızlı ve güvenilir bir sterilizasyon yöntemidir.

6. pastörizasyon. Bu kısmi sterilizasyon yöntemi, adını onu öneren Fransız bilim adamı L. Pasteur'den almıştır. Yöntem, steril bir kaba dökülen sıvının bir su banyosunda 60-90 ºº sıcaklıkta ısıtılmasından oluşur.

10-30 dk. Özelliklerini değiştiren sıvı ortamlar için kullanılır. fizikokimyasal özellikler yüksek sıcaklıklarda. Süt, krema, şarap, bira, meyve suları vb. pastörize edilir, aynı zamanda ürünlerin vitaminleri ve tat kaliteleri korunur. Pastörize ürünler uzun süreli depolamaya tabi değildir, çünkü bu sterilizasyon yöntemiyle mikroorganizmaların sadece bitkisel formları ölür ve sporlar kalır. Laboratuvar pratiğinde bu yöntem esas olarak spor oluşturan türleri spor oluşturmayan türlerden ayırmak için kullanılır.

7. fraksiyonel sterilizasyon. Sterilize edilen malzemenin birkaç aşamada işlenmesi esasına dayanır. Fraksiyonel, Koch aparatında akan buharla kaynatma veya sterilizasyon olabilir. Tipik olarak sterilizasyon, belirtilen yöntemlerden biri kullanılarak günde 30 dakika süreyle 3 gün süreyle gerçekleştirilir ve arada ortamlar oda sıcaklığında bırakılır. Bu, sporların vejetatif formlara büyümesini ve sonraki tedaviler sırasında yok edilmesini sağlamak için yapılır, bu da bu tekniklerin güvenilirliğini artırır.

8. Tyndalizasyon. Bu bir tür fraksiyonel sterilizasyondur (fraksiyonel pastörizasyon). Tekniğe, onu öneren İngiliz bilim adamı D. Tyndall'ın adı verilmiştir. 24 saat sonra 5-7 tekrar ile 56-58 ºС sıcaklıkta 1 saat su banyosunda yapılır.Isıtma aralarında malzeme oda sıcaklığında bekletilir. Mikroorganizmalar bakımından fakir olan ve ayrıca 60 ºº'nin üzerindeki sıcaklıklarda (proteinler, vitaminler) kolayca yok edilen ve denatüre olan maddeler içeren besin ortamları tyndalizasyona tabi tutulur. Bunlar kan serumu, yumurta vb. Tyndalizasyon sonucunda mikroorganizmaların tamamen yok edilmesi sağlanır.