Methoden der thermischen Sterilisation. Methoden und Methoden der Sterilisation Autoklav und Sterilisation mit überhitztem Dampf unter Druck

Die Sterilisation wird durch physikalische, chemische, mechanische und biologische Methoden sowie verschiedene Methoden repräsentiert. Die Durchführbarkeit des Einsatzes einer bestimmten Sterilisationsmethode und ihrer Methoden hängt von den Eigenschaften des zu sterilisierenden Materials, seinen physikalischen und physikalischen Eigenschaften ab chemische Eigenschaften. Die Dauer der Sterilisation hängt vom zu sterilisierenden Gegenstand, dem Sterilisationsmittel und dessen Dosis, Temperatur und Luftfeuchtigkeit ab Umfeld.

Physikalische Sterilisationsmethode Zu den Wegen physikalische Methode Die Sterilisation umfasst Trocknen, Brennen und Kalzinieren, Kochen, Pasteurisieren und Tindisieren. heiße Luft(trockene Hitze), Ultraschall, ultraviolette und radioaktive Strahlung, Hochfrequenzstrom, Sonnenlicht. Die gebräuchlichste Methode zum Sterilisieren von Gegenständen, die verwendet werden können hohe Temperatur, ist die Sterilisation durch Feuer, Heißluft und gesättigten Wasserdampf unter Druck. Feuer wird verwendet, um infizierte Gegenstände zu verbrennen, die keinen Wert darstellen (unnötige Papiere, alte Tapeten, Lumpen, Müll), um den Auswurf von Tuberkulosepatienten, insbesondere die Leichen von Menschen und Tieren, die daran gestorben sind, zu desinfizieren gefährliche Infektionen sowie zum Brennen und Kalzinieren verschiedener Gegenstände. Brennen und Kalzinieren werden in der mikrobiologischen Praxis häufig zur Desinfektion von Instrumenten, Labor- und Pharmaglasgeräten eingesetzt. Das Kalzinieren in einer Brennerflamme oder das Flambieren ist eine Sterilisationsmethode, bei der das Objekt vollständig sterilisiert wird, während vegetative Zellen, Zysten und Sporen von Mikroorganismen absterben. Typischerweise werden Ösen, Spatel, Pipetten, Objektträger und Deckgläser, kleine Instrumente und andere kontaminierte Gegenstände durch Kalzinierung sterilisiert, wenn sie nicht gekocht werden können. Es wird nicht empfohlen, Scheren und Skalpelle durch Erhitzen zu sterilisieren, da die Schnittfläche bei Feuereinwirkung stumpf wird. Eine der einfachsten und gebräuchlichsten Methoden der physikalischen Sterilisation in der medizinischen Praxis ist die Heißluftsterilisation (trockene Hitze). Sterilisation mit trockener Hitze erfolgt in Trockenöfen (Pasteuröfen). Trockene Heißluft hat eine bakterizide, viruszide, sporizide Wirkung und wird hauptsächlich zur Sterilisation von Glasprodukten (Laborglaswaren – Petrischalen, Kolben, Pipetten, Reagenzgläser usw.) sowie von Metallprodukten verwendet, die mit Dampf sterilisiert werden können unter Druck. Darüber hinaus werden mit trockener Hitze Gegenstände aus Porzellan und hitzebeständigen Substanzen (Talkum, weißer Ton) sowie mineralische und pflanzliche Öle, Fette, Vaseline, Lanolin und Wachs sterilisiert. Der effektivste Modus für diese Sterilisationsmethode, die den Tod vegetativer Formen und Sporen gewährleistet, ist eine Temperatur von 160 - 180 Grad für 15 Minuten. Sie können Lebensmittel, isotonische Lösungen oder Gegenstände aus Gummi und synthetischen Materialien nicht mit trockener Hitze sterilisieren, da Flüssigkeiten kochen und auslaufen und Gummi und synthetische Materialien schmelzen. Sterilisation gesättigter Dampf Unter Druck ist die zuverlässigste und am häufigsten erprobte Methode zur Sterilisation von Verbänden, Wasser, einigen Medikamenten, Kulturmedien, weichen Geräten und Instrumenten sowie zur Desinfektion von kontaminiertem Abfallmaterial. In der chirurgischen Praxis Dressing, Arztkittel und Unterwäsche der zu operierenden Person werden in Autoklaven mit Dampf desinfiziert. Die Dampfsterilisation unter Druck wird in speziellen Geräten – Autoklaven – durchgeführt. Durch Autoklavieren werden alle Mikroorganismen und Sporen vollständig zerstört. Die Dampfdrucksterilisationsmethode basiert auf der Erhitzung des Materials mit gesättigtem Wasserdampf unter einem Druck über dem Atmosphärendruck. Die kombinierte Wirkung von hoher Temperatur und Dampf macht diese Methode besonders effektiv. Dabei sterben sowohl vegetative Zellen als auch mikrobielle Sporen ab. Mikrobielle Sporen sterben unter dem Einfluss von gesättigtem Wasserdampf innerhalb von 10 Minuten ab, vegetative Formen sterben innerhalb von 1 bis 4 Minuten ab. Die hohe bakterizide Wirkung von Sattdampf beruht darauf, dass unter dem Einfluss von Wasserdampf unter Druck die Proteine ​​der Mikrobenzelle anschwellen und koagulieren, wodurch die Mikrobenzellen absterben. Die bakterizide Wirkung von gesättigtem Wasserdampf wird durch Überdruck verstärkt. Die Sterilisation im Autoklaven wird in verschiedenen Modi durchgeführt. So werden einfache Nährmedien (Fleisch-Pepton-Agar und Fleisch-Pepton-Brühe) 20 Minuten lang bei 120 Grad (1 atm) sterilisiert. Mit diesem Modus ist es jedoch nicht möglich, Medien zu sterilisieren, die Proteine, Kohlenhydrate und andere Substanzen enthalten, die sich durch Erhitzen leicht verändern. Medien mit Kohlenhydraten werden in einem Autoklaven bei 0,5 atm sterilisiert. 10 – 15 Minuten oder portionsweise strömender Dampf. Durch hohe Temperaturen können Sie die hartnäckigsten Formen pathogener Mikroorganismen (einschließlich sporenbildender) nicht nur auf der Oberfläche der zu desinfizierenden Gegenstände, sondern auch in deren Tiefe zerstören. Hier liegt der große Vorteil der hohen Temperatur als zuverlässiges Sterilisationsmittel. Allerdings verschlechtern sich einige Gegenstände unter dem Einfluss hoher Temperaturen, und in diesen Fällen ist es notwendig, auf andere Methoden und Mittel der Desinfektion zurückzugreifen. Eine vollständige Sterilisation von Materialien und Gegenständen, die keine Hochtemperatursterilisation zulassen, wird durch wiederholte Sterilisation mit Wasserdampf in einem Koch-Gerät bei einer Temperatur von nicht mehr als 100 Grad erreicht. Diese Methode wird fraktionierte Sterilisation genannt. Es läuft darauf hinaus, dass die verbleibenden ungetöteten Sporenformen von Mikroben nach einem Tag in einem Thermostat bei 37 Grad zu vegetativen Zellen keimen, deren Tod bei der anschließenden Sterilisation eintritt dieses Objekts fließender Dampf. Die Behandlung mit Flüssigkeitsdampf erfolgt dreimal für 30–40 Minuten. Das einmalige Erhitzen des Materials auf eine Temperatur unter 100 Grad wird als Pasteurisierung bezeichnet. Die Pasteurisierung wurde von Pasteur vorgeschlagen und zielt hauptsächlich darauf ab, überwiegend nicht sporenbildende Mikroorganismen zu zerstören. Die Pasteurisierung erfolgt bei 60 – 70 Grad für 15 bis 30 Minuten, bei 80 Grad für 10 bis 15 Minuten. In der mikrobiologischen Praxis Pasteurisierung Saatgut Wird häufig verwendet, um Reinkulturen sporenbildender Mikroorganismen zu isolieren und die Fähigkeit von Mikroorganismen zur Sporenbildung zu bestimmen. Bei Flüssigkeiten, die bei hohen Temperaturen Geschmack und andere wertvolle Eigenschaften verlieren (Milch, Beeren- und Fruchtsäfte, Bier, kohlenhydrat- oder harnstoffhaltige Nährmedien etc.), erfolgt die Sterilisation mit strömendem Dampf bei 50 - 60 Grad für 15 - 33333330 Minuten oder bei 70 – 80 Grad für 5 – 10 Minuten. In diesem Fall sterben Mikroben mit mittlerer Resistenz ab, während resistentere Mikroben und Sporen erhalten bleiben. Eine fraktionierte 5-6-fache Sterilisation bei 60 Grad für 1 Stunde wird als Tyndalisierung bezeichnet. Viele medizinische Produkte hergestellt aus Polymermaterialien, einer Sterilisation nicht standhalten Dampfmethode nach allgemein anerkannten Modalitäten. Bei vielen Produkten ist eine Sterilisation mit allgemein anerkannten Methoden und Methoden aufgrund der Eigenschaften der darin enthaltenen Flüssigkeiten (Konservierungsstoffe, Medikamente und andere Produkte) nicht möglich. Für solche Produkte werden individuelle Sterilisationsregime entwickelt, um eine zuverlässige Sterilisation der Gegenstände zu gewährleisten. So erfolgt die Sterilisation des Rotors zur Aufteilung des Blutes in Fraktionen mit Wasserdampf bei einer Temperatur von 120 Grad für 45 Minuten. Die Sterilität von Konservierungsbehältern wird bei 110 Grad für 60 Minuten erreicht. Kochen ist eine Sterilisationsmethode, die zum Desterilisieren von wiederverwendbaren Spritzen, chirurgischen Instrumenten, Gummischläuchen, Glas- und Metallutensilien verwendet wird. Die Sterilisation durch Kochen erfolgt in Sterilisatoren. Sporenformen sterben in kochendem Wasser nach 20 - 30 Minuten ab. Das 45-minütige Kochen wird häufig zur Desinfektion von Sekreten und anderen infektiösen Materialien, Wäsche, Geschirr, Spielzeug und Patientenpflegeartikeln verwendet. Zum Waschen und Reinigen wird heißes Wasser (60 - 100 Grad) mit Reinigungsmitteln verwendet mechanische Entfernung Schadstoffe und Mikroorganismen. Die meisten vegetativen Zellen sterben bei 70 Grad nach 30 Minuten. Die Filtrationssterilisation wird in Fällen eingesetzt, in denen Substrate einer Erwärmung nicht standhalten, insbesondere bei Medien, die Proteine, Seren, einige Antibiotika, Vitamine und flüchtige Substanzen enthalten. Diese Technik wird häufig zum Sterilisieren einer Kulturflüssigkeit verwendet, wenn es darum geht, sie von mikrobiellen Zellen zu befreien, aber alle darin enthaltenen Stoffwechselprodukte unverändert zu erhalten. Bei dieser Methode werden Flüssigkeiten durch spezielle Filter gefiltert, die über feinporöse Trennwände verfügen und somit mikrobielle Zellen zurückhalten. Die beiden am weitesten verbreiteten Filtertypen sind Membranfilter und Seitz-Filter. Membranfilter werden aus Kollodium, Acetat, Cellulose und anderen Materialien hergestellt. Seitz-Filter bestehen aus einer Mischung aus Asbest und Zellulose. Darüber hinaus werden zur Sterilisation Filter aus Kaolin mit Beimischung verwendet. Quarzsand, aus Infusorerde und aus anderen Materialien („Kerzen“ von Chamberlan, Berkfeld). Membran- und Asbestfilter sind für den einmaligen Gebrauch konzipiert. Bei ultravioletter Bestrahlung wird die bakterizide Wirkung durch Strahlen mit einer Länge von 200 - 450 nm erzielt, deren Quelle bakterizide Lampen sind. Die Sterilisation erfolgt mit bakteriziden Lampen ultraviolette Strahlung Luft in Arzneimitteln präventive Institutionen, Kästen mikrobiologischer Labore, in Unternehmen Nahrungsmittelindustrie, in Kästen zur Herstellung von Impfstoffen und Seren, in Operationssälen, Manipulationsräumen, Kindereinrichtungen usw. Ultraviolette Strahlen haben eine hohe antimikrobielle Aktivität und können nicht nur zum Tod vegetativer Zellen, sondern auch ihrer Sporen führen. Sonnenlicht führt durch die Einwirkung zum Absterben von Mikroorganismen ultraviolette Bestrahlung und Trocknen. Die Trocknung mit Sonnenlicht wirkt sich nachteilig auf viele Arten von Mikroorganismen aus, ihre Wirkung ist jedoch oberflächlich und daher spielt Sonnenlicht eine unterstützende Rolle in der Sterilisationspraxis. IN In letzter Zeit Bei der Behandlung von Wunden und Verbrennungen werden Beschichtungen aus synthetischen und natürlichen Polymeren in Form von Gelen eingesetzt. Antiseptische Polymerfolien werden häufig zur lokalen Behandlung von Wunden und Verbrennungen eingesetzt. Sie enthalten antimikrobielle Breitbandwirkstoffe wie Katapol, Dioxidin, blaues Jod sowie Sorbit, das Glutaraldehyd enthält. Um diese Filme zu sterilisieren, wird ionisierende Strahlung mit einer Dosis von 20,0 kGy verwendet. Bei der industriellen Herstellung von antiseptischen Polymerfolien und Sorptionsmitteln ist deren Sterilität unter diesem Sterilisationsregime vollständig gewährleistet. Radioaktive Strahlung tötet alle Arten von Mikroorganismen ab, sowohl in vegetativer Form als auch in Sporenform. Es wird häufig zur Sterilisation in Unternehmen, die sterile Produkte und sterile medizinische Einweggeräte herstellen, zur Desinfektion eingesetzt Abwasser und Rohstoffe tierischen Ursprungs.

Mechanische Methode Sterilisation Durch mechanische Sterilisationsverfahren werden Keime von der Oberfläche von Gegenständen entfernt. Dazu gehören Waschen, Ausschütteln, Fegen, Nasswischen, Lüften, Lüften, Staubsaugen, Waschen.

Chemische Sterilisationsmethode In der medizinischen Praxis werden mittlerweile zunehmend Kunststoffe eingesetzt. Sie werden in der Zahnheilkunde, Kiefer- und Gesichtschirurgie, Traumatologie, Orthopädie und Chirurgie eingesetzt. Die meisten Kunststoffe können den Hitzesterilisationsmethoden Dampf unter Druck und trockener Hitze (trockene, erhitzte Luft) nicht standhalten. Die zum Sterilisieren solcher Gegenstände verwendeten Lösungen aus Alkohol, Diozid und ternärer Lösung gewährleisten nicht die Sterilität der verarbeiteten Produkte. Daher werden zur Sterilisation von Kunststoffprodukten Gas- und Strahlungsverfahren sowie chemische Lösungen eingesetzt. Einführung in die Praxis medizinischer Einrichtungen große Zahl Produkte aus thermolabilen Materialien tragen zum Eintrag von Strahlung bei, Gasmethoden Desinfektion und Sterilisation mit Desinfektionslösungen. Bei chemische Sterilisation Verwenden Sie Gase und Wirkstoffe aus verschiedenen chemischen Gruppen (Peroxid, Phenol, Halogen, Aldehyde, Laugen und Säuren, Tenside usw.). Für den täglichen Gebrauch werden Wasch-, Reinigungs-, Bleich- und andere Präparate hergestellt, die durch die Zugabe verschiedener Wirkstoffe eine antimikrobielle Wirkung haben Chemikalien. Diese Präparate werden zur Reinigung und Desinfektion von Sanitäranlagen eingesetzt Technisches Equipment, Geschirr, Wäsche usw. Formaldehyddampf (Dampfform) kann verwendet werden medizinische Einrichtungen zur Sterilisation Metallprodukte medizinische Zwecke (Skalpelle, Nadeln, Pinzetten, Sonden, Klemmen, Haken, Drahtschneider usw.). Vor der Sterilisation mit Formaldehyddampf müssen die Produkte einer Vorsterilisationsreinigung unterzogen und gründlich getrocknet werden. Wenn es auf irgendeine Weise sterilisiert wurde chemisch Die Vorschriften für die Verarbeitung eines bestimmten Gegenstands hängen von den Eigenschaften des zu desinfizierenden Gegenstands, der Widerstandsfähigkeit von Mikroben und den Eigenschaften der Eigenschaften ab chemische Zubereitung, Umgebungstemperatur, Luftfeuchtigkeit und andere Faktoren. So wird die Sterilität von Metallinstrumenten dadurch erreicht, dass sie fünf Stunden lang in einer verschlossenen Kammer mit Dampf bei einer Temperatur von mindestens 20 Grad aufbewahrt werden relative Luftfeuchtigkeit 95 - 98 %, bei einer Temperatur von 15 Grad wird die vollständige Sterilität dieser Gegenstände erst nach 16 Stunden erreicht. Die sporizide Wirkung von Glutaraldehyd hängt von der Temperatur ab. Die optimale Wirkung tritt bei einer Temperatur von 15 – 25 Grad ein. Mit steigender Temperatur nimmt die sporizide Wirkung dieses Arzneimittels ab. Chemische Sterilisation wird in etwas begrenztem Umfang eingesetzt. Am häufigsten wird diese Methode verwendet, um eine bakterielle Kontamination von Kulturmedien und immunbiologischen Präparaten (Impfstoffe und Seren) zu verhindern. Den Nährmedien werden am häufigsten Substanzen wie Chloroform, Toluol und Ether zugesetzt. Ist es notwendig, das Medium von diesen Konservierungsstoffen zu befreien, wird es im Wasserbad auf 56 Grad erhitzt und die Konservierungsstoffe verdampfen. Zur Konservierung von Impfstoffen oder Seren werden Merthiolat, Borsäure und Formalin verwendet.

Biologische Methode Sterilisation Die biologische Sterilisation basiert auf dem Einsatz von Antibiotika. Diese Methode wird häufig bei der Kultivierung von Viren eingesetzt.

Sterilisation- Unfruchtbarkeit; Zerstörung pathogener und nicht pathogener Mikroorganismen in vegetativer Form und Sporenform in jedem Material.

Vorbereiten des Geschirrs für die Sterilisation. Laborglaswaren müssen sauber gewaschen und sterilisiert werden. Verwenden Sie zum Waschen Seife oder chemische Lösungen Waschmittel. Neue Gerichte werden in einer 1-2%igen Lösung vorgekocht Salzsäure, um ein späteres Auslaugen des Glases zu vermeiden. Unter fließendem Wasser gewaschenes Geschirr wird mit destilliertem Wasser gespült und getrocknet.

Bakteriologische Röhrchen. Konische, matte Flaschen werden mit Baumwollgaze-Stopfen verschlossen, die aus eng gedrehten Watterollen bestehen und mit einer Gazeschicht bedeckt sind. Auch für bakteriologische Reagenzgläser wurden Metallstopfen in Form von Außenkappen entwickelt. Es ist zu berücksichtigen, dass beim Sterilisieren von Wattestäbchen bei hohen Temperaturen Substanzen aus der Watte freigesetzt werden, die das Wachstum einiger empfindlicher Bakterien, wie z. B. Brucella, hemmen.

Führen Sie beim Einsetzen von Pipetten ein Wattestäbchen in das obere Ende ein. Pasteurpipetten müssen über eine versiegelte Kapillare verfügen. Jede Messpipette ist vom Ausguss ausgehend über die gesamte Länge spiralförmig in einen 4-5 cm breiten langen Papierstreifen eingewickelt. Pasteurpipetten sind in Papier eingewickelt, jeweils 10–20 Stück, Reagenzgläser – jeweils 15–20 Stück. Es ist besser, alle Arten von Pipetten vor und nach der Sterilisation in speziellen Metallbehältern aufzubewahren. Die Stopfen der Kolben sind zusätzlich mit Papierkappen abgedeckt.

Vor der Sterilisation werden saubere, zusammengebaute Petrischalen in Papier eingewickelt, jeweils 3 bis 4 Stück. Nach der Sterilisation schützt das Papier sterile Glaswaren vor Kontamination durch Mikroflora.

Vor der Sterilisation wird das Geschirr nicht zu dicht in den Trockenschrank gestellt, um eine Luftzirkulation zu gewährleisten, und es wird darauf geachtet, dass die Temperatur 180 °C nicht überschreitet, da bei höherer Temperatur Papier und Watte verkohlen. Nach Abschluss der Sterilisation wird der Trockenschrank erst dann geöffnet. Bis die Temperatur darin auf 70-80 °C sinkt, weil scharfer Abfall Temperaturen können zum Glasbruch führen.

Wenn die Schalen für die Sterilisation der darin enthaltenen Nährmedien durch Autoklavieren unter einem Druck von mindestens 1 atm vorgesehen sind, werden sie nicht vorsterilisiert. Beim Sterilisieren von Medien mit fließendem Dampf oder im Autoklaven unter einem Druck von nicht mehr als 0,5 atm. Es müssen sterile Behälter verwendet werden.

Sterilisation mit trockener, erhitzter Luft. Die Methode wird zum Sterilisieren sauberer Glaswaren verwendet. Zu diesem Zweck wird ein Pasteurofen verwendet – ein spezieller Trockenschrank mit Doppelwänden. Die Außenseite ist mit hitzebeständigem Material ausgekleidet. Oben befindet sich ein Thermometer. Zwischen dem hitzebeständigen Futter und der Innenseite Metallkörper Unten ist ein automatisches elektrisches Heizelement angebracht. Wenn der Trockenschrank eingeschaltet ist, erwärmt sich die Luft im Inneren. Sobald die eingestellte Temperatur erreicht ist, wird der Startzeitpunkt der Sterilisation notiert. Sterilisationsmodus: bei einer Temperatur von 155–160 °C – Exposition für 2 Stunden, bei 165–170 °C – 1–1,5 Stunden, bei 180 °C – 1 Stunde. Nach der Sterilisationszeit wird das Erhitzen gestoppt.

Autoklavieren. Dabei handelt es sich um eine Dampfsterilisation unter Druck kombiniert mit hoher Temperatur Spezialgerät- Autoklav. Wenn gesättigter Dampf auf einen kühleren Gegenstand trifft, kondensiert der Dampf zu Wasser, was zur Freisetzung von Wasser führt große Menge Hitze. Darüber hinaus wird die Dampfmenge reduziert, was das Eindringen in die inneren Teile des zu sterilisierenden Materials erleichtert. Voraussetzung ist die Zufuhr von wirklich gesättigtem Dampf, sodass es bei Kontakt mit einem kalten Gegenstand zu einer sofortigen Kondensation und Erwärmung kommt. Die Industrie produziert vertikale und horizontale Autoklaven.

Ein vertikaler Autoklav ist ein doppelwandiger zylindrischer Metallkessel, der mit einem Deckel verschlossen ist. Durch einen speziellen Hahn mit Trichter wird Wasser bis zu einem bestimmten Füllstand zwischen die Wände gegossen. Die Innenwand des Kessels ist im oberen Teil mit Löchern und im unteren Teil mit einem Hahn ausgestattet, durch den beim Erhitzen des Wassers der Dampf die Luft aus dem Kessel verdrängt. Auf dem Autoklaven wird ein Metallschutzrahmen angebracht, und zwischen diesem und dem Autoklaven selbst sollte sich ein Schutzrahmen befinden Freiraum. Durch den Anschluss an das Stromnetz wird der Autoklav beheizt.

Der Autoklav wird mit dem zu sterilisierenden Material beladen, der Deckel und der Hahn, durch den Wasser gegossen wurde, werden geschlossen und der untere Hahn vorübergehend geöffnet gelassen. Das erhitzte Wasser zwischen den Wänden des Autoklaven kocht, der entstehende Dampf steigt auf und gelangt durch die oberen Löcher der Innenwand in den Kessel, wobei er die Luft durch den unteren offenen Hahn verdrängt. Wenn die gesamte Luft verdrängt ist und der Dampf in einem gleichmäßigen Strahl austritt, wird das untere Ventil geschlossen. Dadurch erhöht sich der Dampfdruck im Autoklaven. Als Beginn der Sterilisation gilt der Zeitpunkt, an dem der Druck einen bestimmten Wert (laut Manometer) erreicht. Die Hitze wird während der Sterilisation angepasst und der Dampfdruck auf dem gleichen Niveau gehalten. Sollte der Druck im Autoklaven zu stark ansteigen, gibt es ein Sicherheitsventil, durch das der überschüssige Dampf automatisch entweicht.

Mit steigendem Dampfdruck erhöht sich entsprechend die Temperatur im Autoklaven.

Das Manometer zeigt den Dampfdruck ohne Berücksichtigung der Umgebung an Luftdruck(760 mmHg). Nach Ablauf der Sterilisationszeit wird der Autoklav abgeschaltet. Wenn der Manometerwert nach dem Abkühlen Null ist, öffnen Sie das Ventil, um Dampf abzulassen.

Ein horizontaler Autoklav unterscheidet sich im Design von einem vertikalen Autoklav, sein Funktionsprinzip ist jedoch dasselbe.

virologische Sterilisation pathologisches Tier

Muster von Formularen, die beim Einsenden von pathologischem Material an das Labor auszufüllen sind

Thermostat– ein Gerät zur Aufrechterhaltung einer konstanten Temperatur – zum Züchten von Kulturen von Mikroorganismen. Es handelt sich um einen Schrank (Abbildung 1), in dem es lange aufbewahrt wird bestimmte Temperatur. Die optimale Temperatur für die Vermehrung vieler Mikroorganismen liegt bei 37 °C. Thermostate sind in den Ausführungen Trockenluft und Wasser erhältlich.

Trockenschrank(Pasteurofen) Wird zur Trockenhitzesterilisation von Geschirr, Geräten und trockenen Materialien wie Stärke und Kreide verwendet (Abbildung 2). Das zu sterilisierende Material wird in Papier vorverpackt und so in einen Schrank gelegt, dass es die Wände nicht berührt. Die Sterilisation erfolgt zwei Stunden lang bei einer Temperatur von 160 °C. Es wird nicht empfohlen, die Temperatur auf über 180 °C zu erhöhen: Wattestäbchen und Papier beginnen sich zu verschlechtern (werden braun, werden brüchig). Das sterilisierte Material wird entnommen, nachdem der Schrank ausgeschaltet und abgekühlt wurde, vorzugsweise wenn die Temperatur im Schrank der Raumtemperatur entspricht.

Gerät zur Kolonienzählung(Abbildung 3) – ein halbautomatischer Zähler, ausgestattet mit einem elektrischen Stift mit Federvorrichtung, konzipiert für die Zählung von Bakterienkolonien in Petrischalen. Tasse
Ein Petri mit Bakterienkolonien wird kopfüber auf ein Scanglas gelegt. Ein leichter Druck des elektrischen Stifts auf den Bereich des Bodens der Petrischale, der der Position der Kolonie entspricht, hinterlässt eine Markierung auf dem Glas. In diesem Fall hebt sich der Halter, der Stromkreis schließt sich und die Zählerstände erhöhen sich um eins. Die Anzahl der Bakterienkolonien wird gezählt, indem die Differenz der Messwerte des Impulszählers vor Beginn und nach Ende der Zählung berechnet wird.

Autoklav(Abbildung 4) ist ein dickwandiges Gerät zum Sterilisieren von Geschirr und Kulturmedien mit Dampf unter Druck. Dies ist ein versiegelter Kessel mit doppelten Metallwänden und einem Deckel. Der Raum zwischen den Wänden (Wasserdampfkammer) ist mit Wasser gefüllt. Innere(Sterilisationskammer) ist mit einem Manometer, Sicherheitsventilen und einem Hahn zum Ablassen von Wasser und Dampf ausgestattet. Um einen dichten Verschluss zu gewährleisten, wird der Autoklav mit einem Deckel mit Gummidichtung dicht verschlossen. Wird zum Sterilisieren von Kulturmedien unter einem Druck von 0,5 bis 1,0 MPa für 20 bis 30 Minuten verwendet.

1 – Körper; 2 – Thermometer; 1 – Abdeckung; 2 – Körper;

3 – Tür; 4 – Potentiometer; 3 – Getriebe; 4 – Steuereinheit;

5 – Kippschalter; 6 – Lampe; 5 – Markierung; 6 – Thermometer

7 – Belüftungslöcher

Abbildung 1 – Thermostat Abbildung 2 – Trockenschrank

1 – Tisch für eine Petrischale; 2 – Stift mit Federvorrichtung;

3 – Zähleranzeige; 4 – Kippschalter zum Einschalten des Impulszählers; 5 – Kippschalter zum Einschalten der Messgerätbeleuchtungslampe

Abbildung 3 – Gerät zum Zählen von Kolonien von Mikroorganismen

Die Trockenhitzesterilisation wird in Trockenhitzeöfen (Pasteurofen) durchgeführt. Trockene Hitze sterilisiert Laborglaswaren. Es wird lose in den Ofen geladen, damit das Material gleichmäßig erhitzt wird. Schließen Sie die Schranktür fest, schalten Sie das elektrische Heizgerät ein, bringen Sie die Temperatur auf 160–165 °C und sterilisieren Sie es 1 Stunde lang. Schalten Sie am Ende der Sterilisation die Heizung aus, aber öffnen Sie die Schranktür erst, wenn der Ofen abgekühlt ist (andernfalls). kalte Luft führt zu Rissen im Geschirr). Sterilisationsmodus: 160 °C – 60 Min., 180 °C – 15 Min., 200 °C – 5 Min. Flüssigkeiten, Nährmedien, Gummi und Kunststoffe können nicht mit trockener Hitze sterilisiert werden.

Druckdampfsterilisation Fachverbandsmaterial, OP-Wäsche, chirurgische Instrumente, Nährmedien, Laborglas, infiziertes Material, Injektionslösungen. Das Material wird in Behälter (Kisten) gefüllt. Am Boden des Bix werden Stoffpolster angebracht, um nach der Sterilisation Feuchtigkeit aufzunehmen. Die Sterilität des Materials bleibt 3 Tage lang erhalten. Infiziertes Material in Schalen und Reagenzgläsern wird in Metallbehältern mit Deckel sterilisiert.

Die Dampfsterilisation unter Druck erfolgt im Autoklaven. Mit einer einzigen Behandlung sterben sowohl vegetative als auch sporenförmige Bakterienformen ab. Dampf unter Druck sterilisiert Nährmedien, mit Ausnahme von Medien mit nativen Proteinen, Flüssigkeiten und Geräten mit Gummiteilen. Einfache Medien (MPA, MPB) werden 20 Minuten lang bei 120 °C (1 atm) sterilisiert. Medien, die native Proteine ​​und Kohlenhydrate enthalten, können bei dieser Temperatur nicht sterilisiert werden, da es sich um Substanzen handelt, die sich durch Erhitzen leicht verändern. Medien mit Kohlenhydraten werden fraktioniert bei 100 °C oder im Autoklaven bei 112 °C (5 atm) für 10–15 Minuten sterilisiert. Verschiedene Flüssigkeiten, Geräte mit Gummischläuchen, Stopfen, Bakterienkerzen und Filter werden 20 Minuten lang bei 120 0 C (1 atm) sterilisiert.

Infiziertes Material (in Reagenzgläsern, Bechern) wird in spezielle Metalleimer oder Tanks mit Löchern für das Eindringen von Dampf gegeben und 1 Stunde lang bei 126 °C (1,5 atm) sterilisiert. Instrumente werden auch nach der Arbeit mit Sporenbakterien sterilisiert.

Es gibt 2 Sterilisationsmodi:

1. Strömender Dampf in einem Autoklaven oder in einem Koch-Apparat bei abgeschraubtem Deckel und geöffnetem Auslassventil, wenn sich die antibakterielle Wirkung des Dampfes gegen vegetative Formen zeigt. Auf diese Weise werden Medien mit Vitaminen und Kohlenhydraten, Harnstoff, Milch, Kartoffeln und Gelatine sterilisiert. Zur vollständigen Entsterilisation wird an 3 aufeinanderfolgenden Tagen eine fraktionierte Sterilisation (bei 100 °C) für 20–30 Minuten verwendet. Es tötet auch Sporen ab.
2. Am häufigsten wird die Druckdampfsterilisation durchgeführt effektive Methode Entbehrung. Verbandsmaterial und Wäsche werden bei 1 atm sterilisiert. 15–20 Minuten, infiziertes Material bei 1,5–2 atm für 20–25 Minuten.

Der Einfluss der Temperatur auf Mikroorganismen.

Temperatur - Wichtiger Faktor, das Leben von Mikroorganismen beeinträchtigen. Für Mikroorganismen gibt es minimale, optimale und maximale Temperaturen. Optimal– die Temperatur, bei der die stärkste Vermehrung von Mikroben stattfindet. Minimum– Temperatur, unterhalb derer Mikroorganismen keine lebenswichtige Aktivität zeigen. Maximal– die Temperatur, oberhalb derer es zum Absterben von Mikroorganismen kommt.

Bezogen auf die Temperatur werden 3 Gruppen von Mikroorganismen unterschieden:

2. Mesophile. Optimal – 30-37°C. Minimum - 15-20°C. Maximal – 43-45°C. Sie leben im Körper warmblütiger Tiere. Hierzu zählen die meisten pathogenen und opportunistischen Mikroorganismen.

3. Thermophile. Optimal – 50-60°C. Minimum - 45°C. Maximal - 75°C. Sie leben in heißen Quellen und nehmen an den Prozessen der Selbsterhitzung von Mist und Getreide teil. Sie können sich im Körper warmblütiger Tiere nicht vermehren und haben daher keine medizinische Bedeutung.

Günstige Aktion optimale Temperatur Wird bei der Züchtung von Mikroorganismen verwendet mit dem Ziel Labordiagnostik, Herstellung von Impfstoffen und anderen Medikamenten.

Bremswirkung niedrige Temperaturen zur Lagerung genutzt Produkte und Kulturen von Mikroorganismen im Kühlschrank. Niedrige Temperaturen stoppen Fäulnis- und Gärungsprozesse. Der Wirkungsmechanismus niedriger Temperaturen ist die Hemmung von Stoffwechselprozessen in der Zelle und der Übergang in einen Zustand der Ruhe.

Schädliche Wirkung hohe Temperatur (über dem Maximum) zur Sterilisation verwendet . Mechanismus Wirkungen – Denaturierung von Proteinen (Enzymen), Schädigung von Ribosomen, Störung der osmotischen Barriere. Psychrophile und Mesophile reagieren am empfindlichsten auf hohe Temperaturen. besonders Nachhaltigkeit zeigen Streitigkeiten Bakterien.

Die Wirkung von Strahlungsenergie und Ultraschall auf Mikroorganismen.

Es gibt nichtionisierende (ultraviolette und infrarote Strahlen des Sonnenlichts) und ionisierende Strahlung (g-Strahlen und hochenergetische Elektronen).

Ionisierende Strahlung hat eine stark durchdringende Wirkung und schädigt das zelluläre Genom. Mechanismus schädigende Wirkung: Ionisation Makromoleküle, die mit der Entwicklung von Mutationen oder dem Zelltod einhergehen. Darüber hinaus sind die tödlichen Dosen für Mikroorganismen höher als für Tiere und Pflanzen.

Mechanismus schädigende Wirkung UV-Strahlen: Bildung von Thymin-Dimeren in einem DNA-Molekül , das die Zellteilung stoppt und die Hauptursache für ihren Tod ist. Die schädliche Wirkung von UV-Strahlen ist für Mikroorganismen stärker ausgeprägt als für Tiere und Pflanzen.

Ultraschall(Schallwellen 20.000 Hz) hat eine bakterizide Wirkung. Mechanismus: Ausbildung im Zytoplasma der Zelle Kavitationshohlräume , die mit Flüssigkeitsdampf gefüllt sind und in denen ein Druck von bis zu 10.000 atm entsteht. Dies führt zur Bildung hochreaktiver Hydroxylradikale, zur Zerstörung zellulärer Strukturen und zur Depolymerisation von Organellen sowie zur Denaturierung von Molekülen.

Zum Einsatz kommen ionisierende Strahlung, UV-Strahlen und Ultraschall zur Sterilisation.

Auswirkung der Trocknung auf Mikroorganismen.

Wasser ist für das normale Funktionieren von Mikroorganismen notwendig. Eine Abnahme der Luftfeuchtigkeit führt dazu, dass Zellen in einen Ruhezustand übergehen und dann absterben. Mechanismus Schädliche Auswirkungen des Trocknens: Dehydrierung des Zytoplasmas und Denaturierung von Proteinen.

Pathogene Mikroorganismen reagieren empfindlicher auf Austrocknung: Erreger von Gonorrhoe, Meningitis, Typhus-Fieber, Ruhr, Syphilis usw. Bakteriensporen, Protozoenzysten und durch Sputumschleim geschützte Bakterien (Tuberkulosebakterien) sind resistenter.

In der Praxis Trocknen wird verwendet zum Einmachen Fleisch, Fisch, Gemüse, Obst, bei der Zubereitung von Heilkräutern.

Trocknen aus gefrorenem Zustand unter Vakuum – Lyophilisierung oder Gefriertrocknung. Sie wird benutzt für den Pflanzenschutz Mikroorganismen, die in diesem Zustand jahrelang (10-20 Jahre) ihre Lebensfähigkeit nicht verlieren und ihre Eigenschaften nicht verändern. Mikroorganismen befinden sich in einem Schwebezustand. Es kommt Lyophilisierung zum Einsatz bei der Herstellung von Arzneimitteln aus lebenden Mikroorganismen: Eubiotika, Phagen, Lebendimpfstoffe gegen Tuberkulose, Pest, Tularämie, Brucellose, Influenza usw.

Aktion chemische Faktoren gegenüber Mikroorganismen.

Chemikalien wirken sich auf unterschiedliche Weise auf Mikroorganismen aus. Dies hängt von der Art, Konzentration und Einwirkungszeit der Chemikalien ab. Sie können das Wachstum anregen(als Energiequellen genutzt), bereitstellen mikrobizid, mikrobostatisch, mutagene Wirkung oder kann gegenüber lebenswichtigen Prozessen gleichgültig sein

Zum Beispiel: Eine 0,5-2 %ige Glucoselösung ist eine Nahrungsquelle für Mikroben und eine 20-40 %ige Lösung hat eine hemmende Wirkung.

Für Mikroorganismen ist es notwendig optimaler pH-Wert der Umgebung. Für die meisten Symbionten und Krankheitserreger menschlicher Krankheiten – eine neutrale, leicht alkalische oder leicht saure Umgebung. Wenn der pH-Wert steigt, verschiebt er sich oft in den sauren Bereich und das Wachstum von Mikroorganismen stoppt. Und dann kommt der Tod. Mechanismus: Denaturierung von Enzymen durch Hydroxylionen, Störung der osmotischen Barriere der Zellmembran.

Chemikalien, die haben antimikrobielle Wirkung, zur Desinfektion, Sterilisation und Konservierung eingesetzt.

Die Wirkung biologischer Faktoren auf Mikroorganismen.

Biologische Faktoren- Das verschiedene Formen der Einfluss von Mikroben aufeinander sowie die Wirkung von Immunfaktoren (Lysozym, Antikörper, Inhibitoren, Phagozytose) auf Mikroorganismen während ihres Aufenthalts im Makroorganismus. Koexistenz verschiedener Organismen - Symbiose. Dabei werden unterschieden: Formen Symbiose.

Gegenseitigkeit– eine Form des Zusammenlebens, bei der beide Partner gegenseitige Vorteile erhalten (zum Beispiel Knöllchenbakterien und Hülsenfrüchte).

Antagonismus- eine Beziehungsform, bei der ein Organismus mit seinen Stoffwechselprodukten (Säuren, Antibiotika, Bakteriozine) einem anderen Organismus Schaden (sogar den Tod) zufügt, aufgrund besserer Anpassungsfähigkeit an Umweltbedingungen, durch direkte Zerstörung (z. B. normale Darmflora und Krankheitserreger). Darminfektionen).

Metabiose– eine Form des Zusammenlebens, bei der ein Organismus den von einem anderen verursachten Prozess fortsetzt (seine Abfallprodukte nutzt) und die Umwelt von diesen Produkten befreit. Dadurch werden Voraussetzungen für die weitere Entwicklung (nitrifizierende und ammonifizierende Bakterien) geschaffen.

Satellitenismus– Einer der Mitbewohner stimuliert das Wachstum des anderen (Hefe und Sarcina produzieren beispielsweise Substanzen, die das Wachstum anderer, nährstoffintensiverer Bakterien fördern).

Kommensalismus– ein Organismus lebt auf Kosten eines anderen (Vorteile), ohne ihm Schaden zuzufügen (z. B. E. coli und der menschliche Körper).

Raub– antagonistische Beziehungen zwischen Organismen, wenn einer einen anderen fängt, absorbiert und verdaut (zum Beispiel ernährt sich die Darmamöbe von Darmbakterien).

Sterilisation.

Sterilisation ist der Prozess der vollständigen Zerstörung aller lebensfähigen Formen von Mikroben in einem Objekt, einschließlich Sporen.

Es gibt 3 Gruppen von Sterilisationsmethoden: physikalisch, chemisch und physikalisch-chemisch. Physikalische Methoden: Sterilisation durch hohe Temperatur, UV-Bestrahlung, ionisierende Strahlung, Ultraschall, Filtration durch Sterilfilter. Chemische Methoden– Einsatz von Chemikalien sowie Gassterilisation. Physikalisch-chemische Methoden – Teilen körperlich und chemische Methoden. Zum Beispiel hohe Temperaturen und Antiseptika.

Hochtemperatursterilisation .

Diese Methode umfasst: 1) Trockenhitzesterilisation; 2) Dampfsterilisation unter Druck; 3) Sterilisation mit fließendem Dampf; 4) Tindialisierung und Pasteurisierung; 5) Kalzinierung; 6) Sieden.

Sterilisation mit trockener Hitze.

Die Methode basiertüber die bakterizide Wirkung von 45 Minuten lang auf 165-170°C erhitzter Luft.

Ausrüstung: Trockenwärmeschrank (Pasteurofen). Pasteurofen - Metallschrank mit Doppelwänden, außen mit einem schlecht wärmeleitenden Material (Asbest) ummantelt. Erhitzte Luft zirkuliert im Raum zwischen den Wänden und tritt durch spezielle Öffnungen aus. Beim Arbeiten ist eine strikte Einhaltung der erforderlichen Temperatur und Sterilisationszeit erforderlich. Bei höheren Temperaturen kommt es zu einer Verkohlung der Wattestäbchen und des Papiers, in das das Geschirr eingewickelt ist. Bei niedrigeren Temperaturen ist eine längere Sterilisation erforderlich. Nach Abschluss der Sterilisation wird der Schrank erst nach dem Abkühlen geöffnet, da es sonst aufgrund einer plötzlichen Temperaturänderung zu Rissen in den Glaswaren kommen kann.

a) Glas, Metall, Porzellangegenstände, Geschirr, in Papier eingewickelt und mit Baumwollgaze-Stopfen verschlossen, um die Sterilität aufrechtzuerhalten (165–170 °C, 45 Minuten);

b) hitzebeständiges Pulver Medikamente- Talk, weißer Ton, Zinkoxid (180-200°C, 30-60 Min.);

c) Mineral und Pflanzenöle, Fette, Lanolin, Vaseline, Wachs (180-200°C, 20-40 Min.).

Dampfsterilisation unter Druck.

Die effektivste und am weitesten verbreitete Methode in der mikrobiologischen und klinischen Praxis.

Die Methode basiertüber die hydrolysierende Wirkung von Dampf unter Druck auf die Proteine ​​der mikrobiellen Zelle. Die kombinierte Wirkung von hoher Temperatur und Dampf sorgt dafür hohe Effizienz Diese Sterilisation tötet die hartnäckigsten Sporenbakterien ab.

Ausrüstung – Autoklav. Der Autoklav besteht aus 2 ineinander gesteckten Metallzylindern mit einem hermetisch verschlossenen Deckel, der mit Schrauben verschraubt ist. Der äußere Kessel ist eine Wasser-Dampf-Kammer, der innere Kessel ist eine Sterilisationskammer. Es gibt ein Manometer, ein Dampfablassventil, ein Sicherheitsventil und ein Wasserzählerglas. An der Oberseite der Sterilisationskammer befindet sich ein Loch, durch das Dampf aus der Wasser-Dampf-Kammer strömt. Mit dem Manometer wird der Druck in der Sterilisationskammer ermittelt. Zwischen Druck und Temperatur besteht ein gewisser Zusammenhang: 0,5 atm – 112°C, 1-01,1 atm – 119-121°C, 2 atm – 134°C. Sicherheitsventil – zum Schutz vor übermäßigem Druck. Steigt der Druck über den eingestellten Wert, öffnet sich das Ventil und lässt überschüssigen Dampf ab. Gebrauchsprozedur. In den Autoklaven wird Wasser gegossen, dessen Füllstand mit einem Wasseruhrglas überwacht wird. Das Material wird in die Sterilisationskammer gegeben und der Deckel fest aufgeschraubt. Das Dampfventil ist geöffnet. Schalten Sie die Heizung ein. Nachdem das Wasser kocht, wird der Wasserhahn erst dann geschlossen, wenn die gesamte Luft verdrängt ist (Dampf strömt in einem kontinuierlichen, starken, trockenen Strom). Wenn der Hahn früher geschlossen wird, stimmen die Manometerwerte nicht überein die richtige Temperatur. Nach dem Schließen des Hahns steigt der Druck im Kessel allmählich an. Der Beginn der Sterilisation ist der Moment, in dem die Manometernadel den eingestellten Druck anzeigt. Stoppen Sie nach Ablauf der Sterilisationszeit das Erhitzen und kühlen Sie den Autoklav ab, bis die Manometernadel auf 0 zurückkehrt. Wenn Sie den Dampf früher ablassen, kann die Flüssigkeit aufgrund einer schnellen Druckänderung kochen und die Stopfen herausdrücken (die Sterilität wird beeinträchtigt). Wenn die Manometernadel auf 0 zurückkehrt, öffnen Sie vorsichtig das Dampfablassventil, lassen Sie den Dampf ab und entnehmen Sie dann die zu sterilisierenden Gegenstände. Wenn der Dampf nicht abgelassen wird, nachdem die Nadel auf 0 zurückgekehrt ist, kann Wasser kondensieren und die Stopfen und das zu sterilisierende Material benetzen (die Sterilität wird beeinträchtigt).

Material und Sterilisationsmodus:

a) Glas, Metall, China, Unterwäsche, Gummi und kortikale Pfropfen, Produkte aus Gummi, Zellulose, Holz, Verbandmittel (Watte, Gaze) (119 - 121°C, 20-40 Min.));

b) physiologische Lösung, Injektionslösungen, Augentropfen, destilliertes Wasser, einfache Nährmedien – MPB, MPA (119–121 °C, 20–40 Min.);

c) Mineral- und Pflanzenöle in hermetisch verschlossenen Gefäßen (119–121 °C, 120 Min.);

Sterilisation mit strömendem Dampf.

Die Methode basiertüber die bakterizide Wirkung von Dampf (100°C) nur gegen vegetative Zellen.

Ausrüstung– ein Autoklav mit abgeschraubtem Deckel oder Koch-Apparat.

Koch-Apparat - Dabei handelt es sich um einen Metallzylinder mit doppeltem Boden, dessen Raum zu 2/3 mit Wasser gefüllt ist. Der Deckel hat Löcher für ein Thermometer und zum Entweichen von Dampf. Die Außenwand ist mit einem schlecht wärmeleitenden Material (Linoleum, Asbest) ausgekleidet. Der Beginn der Sterilisation ist die Zeit vom Kochen des Wassers bis zum Eintritt des Dampfes in die Sterilisationskammer.

Material- und Sterilisationsmodus. Bei dieser Methode wird das Material sterilisiert die Temperaturen über 100°C nicht standhalten: Nährmedien mit Vitaminen, Kohlenhydraten (Hiss-, Endo-, Ploskirev-, Levin-Medien), Gelatine, Milch.

Bei 100°C sterben die Sporen nicht ab, daher wird die Sterilisation mehrmals durchgeführt – fraktionierte Sterilisation - 3 Tage lang täglich 20–30 Minuten.

In den Intervallen zwischen den Sterilisationen wird das Material bei gehalten Zimmertemperatur damit Sporen in vegetative Formen keimen können. Beim anschließenden Erhitzen auf 100 °C sterben sie ab.

Tyndallisierung und Pasteurisierung.

Tyndalisierung - Methode der fraktionierten Sterilisation bei Temperaturen unter 100 °C. Es dient zum Sterilisieren von Gegenständen, die 100°C nicht aushalten: Serum, Aszitesflüssigkeit, Vitamine . Die Tyndallisierung wird in einem Wasserbad bei 56 °C für 1 Stunde über 5–6 Tage durchgeführt.

Pasteurisierung - teilweise Sterilisation (Sporen werden nicht abgetötet), die bei relativ niedriger Temperatur durchgeführt wird einmal. Die Pasteurisierung erfolgt bei 70–80 °C für 5–10 Minuten oder bei 50–60 °C für 15–30 Minuten. Die Pasteurisierung wird bei Gegenständen angewendet, die bei hohen Temperaturen ihre Qualität verlieren. Pasteurisierung beispielsweise verwenden Für manche Lebensmittel: Milch, Wein, Bier . Dies schadet ihnen nicht Warenwert, aber die Sporen bleiben lebensfähig, daher müssen diese Produkte gekühlt aufbewahrt werden.