oven pasteur. Pengaruh faktor fisik terhadap mikroorganisme. Nomor kontrol…

Sterilisasi

Sterilisasi adalah sterilisasi, yaitu pelepasan benda secara menyeluruh lingkungan dari mikroorganisme dan sporanya.

Sterilisasi dilakukan dengan berbagai cara:

1) fisik (dampak suhu tinggi, sinar UV, penggunaan filter bakteri);

2) bahan kimia (penggunaan berbagai disinfektan, antiseptik);

3) biologis (penggunaan antibiotik).

Dalam praktik laboratorium, metode sterilisasi fisik biasanya digunakan.

Kemungkinan dan kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu ditentukan oleh karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya.

Metode fisik

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah metode sterilisasi di mana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel vegetatif dan spora mikroba mati. Biasanya, loop bakteriologis, spatula, pipet, slide dan kaca penutup, serta instrumen kecil dikalsinasi. Gunting dan pisau bedah tidak boleh disterilkan dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam saat terkena api.

Sterilisasi panas kering

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (pengeringan oven panas kering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet dengan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan regulator yang menjamin suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Cairan (media nutrisi, larutan natrium klorida isotonik, dll.), barang yang terbuat dari karet dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering, karena cairan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis meleleh.

Sterilisasi dengan cara direbus

Perebusan merupakan salah satu cara sterilisasi yang menjamin kemandulan asalkan tidak terdapat spora pada bahan yang disterilkan. Digunakan untuk memproses instrumen jarum suntik, kaca dan peralatan logam tabung karet, dll. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan dalam autoklaf. Metode sterilisasi ini didasarkan pada pemaparan bahan yang disterilkan pada uap air jenuh pada tekanan di atas atmosfer. Sebagai hasil dari sterilisasi tersebut, baik mikroorganisme vegetatif maupun spora mati dalam satu kali perawatan. Autoklaf (Gbr. 12) adalah ketel besar, bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam, tertutup rapat dengan penutup, yang disekrup erat ke ketel dengan baut berengsel.

Suhu dan lamanya autoklaf media nutrisi ditentukan oleh komposisinya yang ditentukan dalam resep pembuatan media nutrisi. Misalnya media sederhana (agar pepton daging, kaldu pepton daging) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm). Namun, pada suhu ini tidak mungkin untuk mensterilkan media yang mengandung protein asli, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah dengan pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan secara fraksional pada suhu 100°C atau dalam autoklaf pada suhu 112°C (0,5 atm) selama 10-15 menit. Berbagai cairan, peralatan dengan selang karet, sumbat, lilin bakteri dan filter disterilkan selama 20 menit pada suhu 120°C (1 atm).

Sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan dalam peralatan Koch. Cara ini digunakan bila benda yang disterilkan berubah pada suhu di atas 100°C. Media nutrisi yang mengandung urea, karbohidrat, susu, kentang, agar-agar, dan lain-lain disterilkan dengan uap yang mengalir.

Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi (untuk mengurangi perpindahan panas) dengan kain kempa atau asbes. Silinder ditutup dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang untuk keluarnya uap. Di dalam silinder ada dudukan, setinggi tempat air dituangkan. Sebuah ember berlubang ditempatkan pada dudukan tempat bahan yang akan disterilkan ditempatkan. Peralatan Koch dipanaskan menggunakan gas atau listrik. Waktu sterilisasi dihitung dari saat uap keluar secara kuat di tepi tutup dan dari saluran keluar uap. Sterilkan selama 30-60 menit. Di akhir sterilisasi, pemanasan dihentikan. Keluarkan ember berisi bahan dari peralatan dan biarkan pada suhu kamar hingga keesokan harinya. Pemanasan dilakukan selama 3 hari berturut-turut pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Selama pemanasan pertama, bentuk mikroba vegetatif mati, sedangkan bentuk spora tetap terjaga. Dalam sehari, spora berhasil berkecambah dan berubah menjadi bentuk vegetatif, yang mati pada hari kedua sterilisasi. Karena ada kemungkinan sebagian spora tidak sempat berkecambah, bahan disimpan selama 24 jam lagi, kemudian dilakukan sterilisasi ketiga. Sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam peralatan Koch tidak diperlukan kontrol khusus, karena sterilitas media nutrisi yang disiapkan merupakan indikator pengoperasian perangkat yang benar. Anda juga dapat mensterilkan dengan uap yang mengalir dalam autoklaf dengan tutupnya dibuka dan katup keluarnya terbuka.

Sterilisasi dengan iradiasi ultraviolet

Sterilisasi dengan sinar UV dilakukan dengan menggunakan instalasi khusus - lampu bakterisida. Sinar UV memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga spora. Iradiasi UV digunakan untuk mensterilkan udara di rumah sakit, ruang operasi, fasilitas penitipan anak, dll. Di laboratorium mikrobiologi, sebuah kotak diberi sinar UV sebelum digunakan.

Metode kimia

Jenis sterilisasi ini digunakan sampai batas tertentu, dan berfungsi terutama untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum).

Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56°C (pengawet menguap).

Untuk mengawetkan vaksin dan serum, digunakan merthiolate, asam borat, formaldehida, dll.

Sterilisasi biologis

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini digunakan untuk membudidayakan virus.

B. Teknologi terperinci untuk produksi whey sapi di rumah potong hewan di Lyon

Darah telah diambil dari 1.000 hewan, serumnya telah dikemas dalam botol dan didistribusikan secara gratis kepada hampir 20.000 anak.

Dengan demikian ditunjukkan bahwa produksi industri whey di rumah potong hewan sesuai dengan aturan aseptik dan peraturan sanitasi dimungkinkan.

Perusahaan seroterapi tidak memberikan jaminan tambahan - perusahaan tidak berhak melakukan otopsi pada hewan donor.

Teknologi yang digunakan dalam produksi kami mungkin tampak kurang aseptik dibandingkan metode klasik. Namun keuntungannya besar dalam hal kecepatan, karena serum diproduksi sepenuhnya pada hari pengambilan darah.

Jika keadaan saat ini mendorong kami untuk memproduksi serum di rumah potong hewan, jelas bahwa ini adalah tindakan sementara, karena serum hematogen dan obat hanya dapat diproduksi di lembaga khusus.

Seleksi hewan. Di Lyon, Dr. Guier, kepala dokter hewan di rumah jagal, dan Dr. Fontenay, inspektur dokter hewan, sendiri memilih donor dari antara ternak yang dimaksudkan untuk menyediakan daging bagi kota kami. Hewan yang dipilih diberi merek di bahu kanan untuk memudahkan pengendalian lebih lanjut.

Setelah disembelih, organ hewan diperiksa dengan cermat. Diketahui bahwa otopsi adalah metode yang paling dapat diandalkan untuk mendeteksi tuberkulosis.

Operasi selanjutnya akan menunjukkan bahwa serum hewan yang sakit tidak pernah dikonsumsi.

Mengambil darah dari hewan. Di ruang pengambilan darah, sapi jantan donor dipegang erat dengan kuk otomatis.

Dokter hewan mendisinfeksi kulit dengan yodium setinggi leher hewan dan membuat sayatan di area vena jugularis dengan pisau bedah. Tusukan vena dilakukan dengan trocar yang disterilkan dengan cara direbus dalam waktu lama. Setelah darah muncul, selang karet yang diautoklaf dipasang ke trocar untuk menghubungkannya secara langsung dan secara aseptik ke defibrinator.

Teknologi defibrinasi dan metode sterilisasi defibrinator dijelaskan di bawah ini.

Dari setiap hewan diperoleh 8-10 liter darah, yang ditimbang pada timbangan yang terletak di bawah alat.

Metode sterilisasi

Untuk memudahkan pelaksanaan pengendalian sanitasi, setiap defibrinator memiliki label yang berisi data hewan donor.

Perlu diperhatikan bahwa pengambilan sampel darah dilakukan secara aseptik karena sirkuitnya tertutup semua komponen: trocar, selang karet dan defibrinator, yang telah disterilkan sebelumnya.

Label dengan tanggal pengambilan darah menyertai darah yang dikumpulkan dari saat tusukan vena hingga diubah menjadi serum dan disimpan di lemari es.

Defibrasi darah. Di sebagian besar tempat seroterapi, darah yang dituangkan ke dalam pembuluh kaca memisahkan serum di bawah tekanan beban. Dalam kondisi seperti ini, darah yang pertama kali diperoleh dari sapi mengandung sedikit serum (kurang lebih 10%).

Oleh karena itu, pusat seroterapi di Lyon menggunakan teknologi khusus, memberikan 50% whey, dan juga dalam waktu yang lebih singkat.

Dr Merrier mampu mengembangkan metode ini sebagian setelah temuan yang dibuatnya di Royal Institute di Rotterdam dan di Serotherapeutic Institute di Milan.

Setelah darah diperoleh dari lembaga-lembaga ini, darah tersebut didefibrinasi dalam mesin steril yang menyerupai mesin pengaduk.

Dalam waktu 5 menit, darah dikumpulkan dalam wadah yang terlindung dari udara. Waktu defibrasi harus diperhatikan dengan ketat: jika tidak mencukupi, dapat terjadi koagulasi, dan jika terlalu banyak, dapat terjadi hemolisis (akibat pecahnya sel darah merah). Penting untuk menggunakan jam laboratorium yang memungkinkan Anda menandai tepat 15 menit defibrinasi.

Di bagian atas Gambar. Gambar 4 menunjukkan jumlah pengambilan darah sudah mencapai 1000 yang tercatat pada lambang Pusat.

Sentrifugasi.

Segera setelah defibrasi, alat tersebut dipindahkan ke laboratorium yang terletak beberapa meter dari ruang pengambilan darah. Isi masing-masing defibrinator diolah secara terpisah sehingga serum hewan yang ternyata sakit dapat dikeluarkan.

Darah yang tidak menggumpal setelah defibrinasi dialirkan melalui pemisah Alfa Laval (pemisah susu yang kami adaptasi untuk produksi whey).

Di bawah pengaruh gaya sentrifugal, darah dibagi menjadi beberapa bagian yang sama: bagian merah berisi bola merah, dan bagian transparan membentuk serum (fibrin tetap berada pada bilah defibrinator).

Dari seekor hewan diperoleh 8-10 liter darah atau kurang lebih 4-5 liter serum, yang dituangkan ke dalam botol Pyrex yang disterilkan pada suhu 180°C.

Label defibrinator ditempelkan pada botol, dan kartu diisi dengan nomor yang sama untuk memastikan pengendalian sanitasi.

Antiseptik khusus ditambahkan ke dalam serum, dirancang sedemikian rupa sehingga cukup aktif tanpa mengganggu transparansi dan rasa serum. Untuk 1 liter serum, tambahkan juga 100 ml larutan yang mengandung formaldehida 1:1000 dan syunuxol 1:5000.

(Di sela-sela persiapan, centrifuge didesinfeksi secara menyeluruh dengan antiseptik.)

Pada prinsipnya, fraksi merah darah harus dikembalikan ke tukang daging untuk membuat sosis darah, tetapi paling sering fraksi tersebut tetap tidak terpakai, sehingga sirup dapat dibuat darinya menggunakan teknologi yang dijelaskan di bawah ini.

Kasus khusus menyiapkan sirup darah. Sirup ini memiliki dua keunggulan: dapat memanfaatkan bagian merah darah yang tersisa setelah menerima serum, dan memiliki rasa yang enak yang disukai anak-anak.

Karena kekurangan gliserin, sulit menyiapkan sirup untuk penyimpanan jangka panjang, tetapi Anda dapat membuat produk yang sangat aktif dengan menggunakan air dan memberikannya kepada anak-anak 2-3 sendok makan per hari. Tambahkan 20% pada bagian merah darah air minum dan simpan sirup di gletser sementara pengendalian sanitasi dilakukan.

Lalu tambahkan bagian yang setara Sirup gula 100% (gula dapat diperoleh dari kartu kelompok yang dituju sirup).

Ekstrak lemon atau jeruk ditambahkan ke dalam sirup untuk menetralkan rasa darah dan dituangkan ke dalam botol 250 ml.

Tyndalisasi whey.

Segera setelah sentrifugasi, yaitu kurang dari satu jam setelah pengambilan darah, serum dilisiskan pada suhu 56°C selama satu jam.

Untuk melakukan ini, ia diturunkan ke dalam penangas air dengan suhu yang dijaga secara otomatis. Tyndallisasi pada suhu ini (pada suhu yang lebih tinggi whey menggumpal) diperlukan untuk sterilisasi parsial whey, meskipun kecepatan pembuatannya sendiri merupakan jaminan asepsis.

Perlu diperhatikan bahwa setiap botol berukuran lima liter dilengkapi dengan label defibrinator asli, sehingga penomoran serum sesuai dengan penomoran hewan donor.

File kartu kendali. Kartu ini memungkinkan Anda untuk memeriksa kapan saja asal hewan donor, tahapan persiapan whey, tanggal pembotolan, serta distribusi whey.

Kontrol sanitasi. Sedangkan bejana disimpan di ruang pendingin, pengawas dokter hewan terlibat dalam pengendalian sanitasi hewan donor. Setelah disembelih, otopsi menyeluruh dilakukan untuk mengungkap gejala tuberkulosis sekecil apa pun.

Jika suatu penyakit terdeteksi, serum yang sesuai dapat dengan mudah ditarik. Diketahui bahwa darah setiap hewan diproses secara terpisah dan serumnya disimpan dalam botol terpisah yang diberi nomor.

Pusat seroterapi Komite Publik kebersihan masa kecil di rumah jagal Lyon

Nomor kontrol …

Whey sapi dalam liter

Kartu dan label

Kartu dan label di atas mencegah kebingungan.

Di Lyon, tindakan sanitasi sangat ketat, karena dokter hewan memilih hewan, mengambil darah, dan memeriksa daging.

Sterilisasi peralatan. Serum hewan adalah tempat berkembang biak yang sangat baik bagi mikroba dan hanya dapat disterilkan sebagian. Pada suhu di atas 56° mereka menggumpal dan menjadi keruh jika ditambahkan antiseptik yang kuat. Oleh karena itu, selama semua operasi produksi serum, diperlukan sterilitas maksimum; peralatan harus didekontaminasi sebelum digunakan.

Defibrinator individu disterilkan dengan cara berikut: malam sebelum pengambilan darah, diisi dengan larutan antiseptik, dan beberapa jam sebelum pengambilan darah, dikosongkan dari antiseptik menggunakan keran yang terletak di bagian bawah alat. Mesin sentrifugal yang digunakan untuk memproduksi serum juga diolah dengan antiseptik, termasuk di antara pemrosesan isi setiap defibrinator.

Semua peralatan gelas, termasuk wadah lima liter untuk menyimpan whey, disterilkan dalam oven listrik pada suhu 180°C.

Botol serum 250 ml juga disterilkan pada suhu 180°C. Untuk menyederhanakan pengoperasian, piring ditempatkan di dalam kotak, yang digunakan selama pembotolan dan distribusi ke masyarakat.

pengiriman bunga ke Voskresensk

Sterilisasi diwakili oleh metode fisik, kimia, mekanik dan biologis serta berbagai metode.

Kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu dan cara-caranya tergantung pada karakteristik bahan yang akan disterilkan, fisik dan bahannya. sifat kimia.

Lamanya sterilisasi tergantung pada benda yang disterilkan, bahan sterilisasi dan dosisnya, suhu dan kelembaban lingkungan.

Metode sterilisasi fisik

Untuk cara-caranya metode fisik sterilisasi meliputi pengeringan, pembakaran dan kalsinasi, perebusan, pasteurisasi dan tindisasi, udara panas(panas kering), ultrasound, radiasi ultraviolet dan radioaktif, arus frekuensi tinggi, sinar matahari.

Metode sterilisasi barang yang paling umum yang dapat terkena suhu tinggi adalah sterilisasi dengan api, udara panas, dan uap jenuh di bawah tekanan.

Api digunakan untuk membakar benda-benda yang terinfeksi yang tidak bernilai apa pun (kertas yang tidak perlu, kertas dinding tua, kain perca, sampah), untuk mendisinfeksi dahak pasien TBC, mayat manusia dan hewan yang mati karena infeksi yang sangat berbahaya, serta untuk membakar dan mengalsinasi berbagai benda.

Pembakaran dan kalsinasi banyak digunakan dalam praktik mikrobiologi untuk desinfeksi instrumen, laboratorium, dan peralatan gelas farmasi.

Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah suatu metode sterilisasi dimana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel-sel vegetatif, kista dan spora mikroorganisme mati.

Biasanya, loop, spatula, pipet, kaca objek dan kaca penutup, instrumen kecil dan benda terkontaminasi lainnya disterilkan dengan kalsinasi jika tidak dapat direbus. Tidak disarankan mensterilkan gunting dan pisau bedah dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam jika terkena api.

Salah satu metode sterilisasi fisik yang paling sederhana dan umum digunakan dalam praktik medis adalah sterilisasi udara panas (panas kering). Sterilisasi panas kering dilakukan di lemari pengering(Oven Pasteur). Udara panas kering memiliki efek bakterisidal, virusisidal, sporisidal dan digunakan terutama untuk sterilisasi produk kaca (laboratorium piring - cangkir Labu petri, pipet, tabung reaksi, dll), serta produk logam yang dapat disterilkan dengan uap bertekanan.

Selain itu, panas kering digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang terbuat dari porselen dan bahan tahan panas (bedak, tanah liat putih), serta mineral dan Minyak sayur, lemak, petroleum jelly, lanolin, lilin. Cara paling efektif untuk metode sterilisasi ini, yang menjamin kematian bentuk vegetatif dan spora, adalah suhu 160 - 180 derajat selama 15 menit.

Anda tidak dapat mensterilkan bahan makanan, larutan isotonik, atau bahan yang terbuat dari karet dan bahan sintetis dengan panas kering, karena cairan akan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis akan meleleh.

Sterilisasi uap jenuh di bawah tekanan - ini adalah metode yang paling andal dan paling sering dicoba untuk mensterilkan pembalut, air, dan sebagainya obat, media nutrisi, peralatan lunak, peralatan, serta untuk desinfeksi bahan yang terkontaminasi limbah.

Dalam praktik bedah berpakaian, pakaian ahli bedah, dan pakaian dalam orang yang dioperasi didesinfeksi menggunakan uap dalam autoklaf. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan di perangkat khusus– autoklaf.

Autoklaf sepenuhnya menghancurkan semua mikroorganisme dan spora. Metode sterilisasi tekanan uap didasarkan pada pemanasan bahan dengan uap air jenuh pada tekanan di atas tekanan atmosfer. Kombinasi suhu tinggi dan uap menjadikan metode ini sangat efektif. Dalam hal ini, sel vegetatif dan spora mikroba mati.

Spora mikroba mati dalam waktu 10 menit di bawah pengaruh uap air jenuh, dan bentuk vegetatif mati dalam waktu 1 hingga 4 menit.

Kekuatan bakterisida yang tinggi dari uap jenuh disebabkan oleh fakta bahwa, di bawah pengaruh uap air di bawah tekanan, protein sel mikroba membengkak dan menggumpal, akibatnya sel mikroba mati.

Efek bakterisida dari uap air jenuh ditingkatkan dengan tekanan berlebih.

Sterilisasi dalam autoklaf dilakukan dalam mode yang berbeda.

Jadi, media nutrisi sederhana (daging - pepton agar dan daging - kaldu pepton) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120 derajat (1 atm). Namun dengan mode ini tidak mungkin mensterilkan media yang mengandung protein, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah oleh pemanasan.

Media yang mengandung karbohidrat disterilkan dalam autoklaf pada suhu 0,5 atm. 10 – 15 menit atau uap yang mengalir secara fraksional.

Dengan menggunakan suhu tinggi, Anda dapat menghancurkan bentuk mikroorganisme patogen yang paling persisten (termasuk yang membentuk spora) tidak hanya pada permukaan benda yang didesinfeksi, tetapi juga pada kedalamannya.

Inilah keuntungan besar dari suhu tinggi sebagai alat sterilisasi yang andal. Namun, beberapa barang menjadi rusak karena pengaruh suhu tinggi dan dalam kasus ini perlu menggunakan metode dan cara desinfeksi lain.

Sterilisasi lengkap bahan dan benda yang tidak memungkinkan penggunaan sterilisasi suhu tinggi dicapai dengan sterilisasi berulang dengan uap air dalam peralatan Koch pada suhu tidak melebihi 100 derajat. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Intinya adalah bahwa bentuk spora mikroba yang tidak terbunuh, setelah seharian dalam termostat pada suhu 37 derajat, berkecambah menjadi sel vegetatif, yang kematiannya terjadi selama sterilisasi berikutnya. dari objek ini uap yang mengalir.

Perawatan dengan uap cairan dilakukan tiga kali selama 30-40 menit. Memanaskan bahan satu kali pada suhu di bawah 100 derajat disebut pasteurisasi. Pasteurisasi diusulkan oleh Pasteur dan dimaksudkan terutama untuk menghancurkan sebagian besar mikroorganisme non-spora. Pasteurisasi dilakukan pada suhu 60 - 70 derajat selama 15 hingga 30 menit, pada suhu 80 derajat selama 10 hingga 15 menit.

Dalam praktik mikrobiologi, pasteurisasi bahan benih sering digunakan untuk mengisolasi kultur murni mikroorganisme pembentuk spora dan untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme membentuk spora.

Untuk cairan yang kehilangan rasa dan kualitas berharga lainnya bila terkena suhu tinggi (susu, jus beri dan buah, bir, media nutrisi yang mengandung karbohidrat atau urea, dll.), sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan pada suhu 50 - 60 derajat selama 15 - 33333330 menit atau pada suhu 70 - 80 derajat selama 5 - 10 menit. Dalam hal ini, mikroba dengan resistensi rata-rata mati, sementara mikroba dan spora yang lebih resisten tetap bertahan.

Sterilisasi fraksional 5-6 kali lipat pada suhu 60 derajat selama 1 jam disebut tyndalisasi.

Banyak produk medis yang terbuat dari bahan polimer, tidak tahan terhadap sterilisasi metode uap menurut mode yang diterima secara umum. Untuk banyak produk, karena karakteristik cairan yang dikandungnya (pengawet, obat-obatan, dan produk lainnya), tidak mungkin untuk mensterilkan menggunakan metode dan metode yang berlaku umum. Untuk produk tersebut, sistem sterilisasi individual dikembangkan untuk memastikan sterilisasi objek yang andal.

Oleh karena itu, sterilisasi rotor untuk memisahkan darah menjadi fraksi-fraksi dilakukan dengan uap air pada suhu 120 derajat selama 45 menit.

Sterilitas wadah pengawet dicapai pada suhu 110 derajat selama 60 menit.

Perebusan adalah metode sterilisasi yang digunakan untuk menghilangkan sterilisasi jarum suntik yang dapat digunakan kembali, instrumen bedah, tabung karet, peralatan kaca dan logam.

Sterilisasi dengan cara direbus dilakukan dalam alat sterilisasi. Bentuk spora dalam air mendidih akan mati setelah 20 - 30 menit. Merebus selama 45 menit banyak digunakan untuk mendisinfeksi sekret dan bahan infeksius lainnya, linen, piring, mainan, dan barang perawatan pasien.

Air panas (60 - 100 derajat) dengan deterjen digunakan untuk mencuci dan membersihkan penghapusan mekanis kontaminan dan mikroorganisme.

Kebanyakan sel vegetatif mati pada suhu 70 derajat setelah 30 menit.

Sterilisasi filtrasi digunakan dalam kasus di mana substrat tidak tahan terhadap pemanasan, khususnya untuk media yang mengandung protein, serum, beberapa antibiotik, vitamin, dan zat yang mudah menguap. Teknik ini cukup banyak digunakan untuk mensterilkan cairan kultur, bila diperlukan untuk membebaskannya dari sel mikroba, namun untuk menjaga semua produk metabolisme yang dikandungnya tidak berubah.

Metode ini melibatkan penyaringan cairan melalui filter khusus yang memiliki partisi berpori halus sehingga dapat mempertahankan sel mikroba.

Dua jenis filter yang paling banyak digunakan adalah filter membran dan filter Seitz.

Filter membran dibuat dari collodion, asetat, selulosa dan bahan lainnya.

Filter Seitz terbuat dari campuran asbes dan selulosa.

Selain itu, filter yang terbuat dari kaolin dengan campuran digunakan untuk sterilisasi. pasir kuarsa, dari tanah infusor dan dari bahan lain (“lilin” oleh Chamberlan, Berkfeld).

Filter membran dan asbes dirancang untuk penggunaan satu kali.

Dengan penyinaran ultraviolet, efek bakterisida diberikan oleh sinar dengan panjang 200 - 450 nm, yang sumbernya adalah lampu bakterisida.

Sterilisasi dilakukan dengan menggunakan lampu bakterisida sinar ultraviolet udara dalam pengobatan lembaga pencegahan, kotak laboratorium mikrobiologi, di perusahaan Industri makanan, di kotak produksi vaksin dan serum, di ruang operasi, ruang manipulasi, lembaga anak, dll.

Sinar ultraviolet memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga sporanya.

Sinar matahari menyebabkan matinya mikroorganisme akibat tindakannya iradiasi ultraviolet dan pengeringan.

Pengeringan dengan sinar matahari mempunyai efek merugikan pada banyak jenis mikroorganisme, namun pengaruhnya hanya dangkal dan oleh karena itu sinar matahari memainkan peran pendukung dalam praktik sterilisasi.

DI DALAM Akhir-akhir ini dalam pengobatan luka dan luka bakar, digunakan pelapis yang terbuat dari polimer sintetik dan alami dalam bentuk gel.

Film antiseptik polimer banyak digunakan untuk pengobatan luka dan luka bakar lokal. Mereka mengandung agen antimikroba spektrum luas seperti katapol, dioksidan, yodium biru, serta sorbitol yang mengandung glutaraldehid. Untuk mensterilkan film-film ini digunakan radiasi pengion dengan dosis 20,0 kGy. Selama produksi industri film dan sorben antiseptik polimer, sterilitasnya di bawah sistem sterilisasi ini dijamin sepenuhnya.

Radiasi radioaktif membunuh semua jenis mikroorganisme, baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Ini banyak digunakan untuk sterilisasi di perusahaan yang memproduksi produk steril dan peralatan medis sekali pakai yang steril, untuk desinfeksi Air limbah dan bahan baku asal hewan.

Metode mekanis sterilisasi

Metode sterilisasi mekanis menghilangkan kuman dari permukaan benda. Ini termasuk mencuci, mengguncang, menyapu, menyeka basah, mengudara, ventilasi, menyedot debu, mencuci.

Metode sterilisasi kimia

Plastik kini semakin banyak digunakan dalam praktik medis.

Mereka digunakan dalam kedokteran gigi, bedah maksilofasial, traumatologi, ortopedi, dan bedah. Kebanyakan plastik tidak tahan terhadap metode sterilisasi panas uap di bawah tekanan dan panas kering (udara panas kering). Larutan alkohol, diosida, dan larutan terner yang digunakan untuk mensterilkan benda-benda tersebut tidak menjamin sterilitas produk yang diproses.

Oleh karena itu, metode gas dan radiasi, serta larutan bahan kimia, digunakan untuk mensterilkan produk plastik.

Pengantar praktik institusi medis jumlah besar produk yang terbuat dari bahan termolabil berkontribusi terhadap masuknya radiasi, metode gas desinfeksi dan sterilisasi dengan larutan desinfektan.

Pada sterilisasi kimia gunakan gas dan bahan dari berbagai kelompok kimia (peroksida, fenolik, mengandung halogen, aldehida, basa dan asam, surfaktan, dll.). Untuk penggunaan sehari-hari, diproduksi deterjen, pembersih, pemutih dan sediaan lainnya yang memiliki efek antimikroba karena diperkenalkannya berbagai macam bahan. zat kimia.

Persiapan ini digunakan untuk pembersihan dan desinfeksi sanitasi peralatan teknis, piring, linen, dll.

Uap formaldehida (vaporform) dapat digunakan dalam institusi medis untuk sterilisasi produk logam keperluan medis (pisau bedah, jarum, pinset, probe, klem, kait, pemotong kawat, dll.).

Sebelum disterilkan dengan uap formaldehida, produk harus dibersihkan terlebih dahulu dan dikeringkan secara menyeluruh.

Saat disterilkan dengan cara apa pun secara kimia Peraturan pengolahan suatu benda tertentu tergantung pada karakteristik benda yang didisinfeksi, ketahanan mikroba, dan karakteristik sifat-sifatnya. persiapan kimia, suhu lingkungan, kelembaban dan faktor lainnya.

Dengan demikian, sterilitas instrumen logam dicapai dengan menyimpannya dalam ruang tertutup dengan uap selama lima jam pada suhu minimal 20 derajat dan kelembaban relatif 95 - 98%, pada suhu 15 derajat, sterilitas lengkap dari benda-benda ini hanya tercapai setelah 16 jam.

Aktivitas sporisidal glutaraldehid bergantung pada suhu. Tindakan optimalnya terjadi pada suhu 15 – 25 derajat. Ketika suhu naik, aktivitas sporisidal obat ini menurun.

Sterilisasi metode kimia Penggunaannya agak terbatas. Paling sering, metode ini digunakan untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum). Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 derajat dan bahan pengawet tersebut diuapkan.

Untuk pengawetan vaksin atau serum, digunakan merthiolate, asam borat, formalin.

Metode biologis sterilisasi

Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik.

Metode ini banyak digunakan dalam budidaya virus.

Sterilisasi (dari bahasa Latin sterilis - steril) melibatkan inaktivasi total mikroba pada objek yang sedang diproses.

Oven Pasteur - sterilisasi panas kering.

Ada tiga metode utama sterilisasi: panas, radiasi, kimia.

Yodium.

Sterilisasi panas didasarkan pada sensitivitas mikroba terhadap suhu tinggi.

Pada suhu 60 °C dan adanya air, terjadi denaturasi protein, termasuk enzim, yang mengakibatkan kematian mikroba bentuk vegetatif. Perselisihan yang mengandung sangat sejumlah besar perairan dalam keadaan terikat dan mempunyai cangkang padat diinaktivasi pada suhu 160-170 °C. Untuk sterilisasi panas, terutama digunakan panas kering dan uap bertekanan.
Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven panas kering, atau oven Pasteur. Oven Pasteur merupakan suatu lemari besi yang tertutup rapat, dipanaskan dengan listrik dan dilengkapi dengan termometer.

Disinfeksi bahan di dalamnya terjadi pada suhu 160-170 °C selama 60-120 menit. Kerugian dari metode ini adalah hanya beberapa benda yang dapat disterilkan, seperti kaca laboratorium, yang dapat menahan suhu setinggi itu.
Metode sterilisasi yang paling universal adalah perlakuan uap di bawah tekanan dalam autoklaf, di mana pembalut, linen, banyak instrumen, media kultur, larutan, bahan infeksius, dll. disterilkan.

Autoklaf adalah silinder logam dengan dinding kuat, tertutup rapat, terdiri dari ruang uap air dan ruang sterilisasi. Alat tersebut dilengkapi dengan alat pengukur tekanan, termometer dan alat pemantau lainnya. Peningkatan tekanan terjadi di dalam autoklaf, yang menyebabkan peningkatan titik didih air. Jadi, pada 0,5 atm titik didihnya adalah 80 °C, pada 1 atm - 100 °C, pada 2 atm - 121 °C, dan pada 3 atm - 136 °C.

Karena kenyataan bahwa, selain suhu tinggi, uap juga mempengaruhi mikroorganisme, spora sudah mati pada suhu 120 ° C. Mode pengoperasian autoklaf yang paling umum adalah 2 atm, 121 °C, 15-20 menit. Waktu sterilisasi berkurang seiring bertambahnya waktu tekanan atmosfir, dan karena itu titik didihnya. Mikroorganisme mati dalam beberapa detik, tetapi bahan diproses lebih lama, karena pertama, suhu di dalam bahan yang disterilkan harus tinggi, dan kedua, ada yang disebut bidang pengaman, yang dirancang untuk kemungkinan penyimpangan dari parameter yang ditentukan saat operasi autoklaf.

Tag: tubuh, pertumbuhan, sterilisasi, enzim

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dilakukan dalam oven Pasteur (oven pengering). Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang terbuat dari bahan tahan panas - logam dan asbes. Panaskan kabinet menggunakan pembakar gas atau alat pemanas listrik. Lemari berpemanas listrik dilengkapi dengan pengatur untuk memastikan suhu yang dibutuhkan. Untuk mengontrol suhu, terdapat termometer yang dimasukkan ke dalam lubang di dinding atas lemari.

Panas kering digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas laboratorium. Piring yang disiapkan untuk sterilisasi dimasukkan secara longgar ke dalam oven untuk memastikan pemanasan bahan yang disterilkan secara seragam dan andal. Tutup pintu lemari rapat-rapat, nyalakan alat pemanas, atur suhu menjadi 160-165 ° C dan sterilkan pada suhu tersebut selama 1 jam.Setelah sterilisasi selesai, matikan api, tetapi jangan membuka pintu lemari sampai oven sudah dingin; jika tidak udara dingin, masuk ke dalam lemari dapat menyebabkan keretakan pada peralatan masak yang panas.

Sterilisasi dalam oven Pasteur dapat dilakukan pada suhu dan paparan (waktu sterilisasi) yang berbeda-beda (Tabel 1).

Tabel 1. Cara sterilisasi

Cairan (media nutrisi, larutan natrium klorida isotonik, dll.), barang yang terbuat dari karet dan bahan sintetis tidak dapat disterilkan dengan panas kering, karena cairan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis meleleh.

Untuk mengontrol sterilisasi dalam oven Pasteur, benang sutra dibasahi dalam kultur bakteri pembentuk spora, dikeringkan, ditempatkan dalam cawan Petri steril dan dimasukkan ke dalam oven Pasteur. Sterilisasi dilakukan pada suhu 165°C selama 1 jam (untuk pengendalian sebagian benang dibiarkan pada suhu ruangan). Kemudian benang yang telah disterilkan dan dikontrol diletakkan pada permukaan agar-agar dalam cawan Petri atau dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi kaldu dan diinkubasi dalam termostat pada suhu 37° C selama 2 hari. Pada pengoperasian yang benar Oven pasteur dalam tabung reaksi atau cawan dengan media nutrisi yang ditaruh benang yang sudah disterilkan tidak akan terjadi pertumbuhan, karena spora bakteri akan mati, sedangkan spora bakteri pada benang yang tidak disterilkan (kontrol) akan berkecambah dan akan terlihat pertumbuhan pada media nutrisi. .

Untuk menentukan suhu di dalam oven Pasteur dapat menggunakan sukrosa atau gula pasir yang menjadi karamel pada suhu 165-170°C.

Mempersiapkan peralatan gelas laboratorium untuk sterilisasi dalam oven Pasteur. Sebelum sterilisasi, peralatan gelas laboratorium (cawan petri, pipet ukur dan pasteur, vial, labu, tabung reaksi) harus dicuci bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan kertas, jika tidak setelah sterilisasi dapat terkontaminasi lagi dengan bakteri udara.

Cawan petri dibungkus dengan kertas satu atau lebih potongan sekaligus atau ditempatkan dalam wadah logam khusus.

Penyeka kapas dimasukkan ke ujung atas pipet untuk mencegah bahan uji masuk ke mulut. Pipet ukur dibungkus dengan kertas panjang selebar 4-5 cm, volume pipet yang dibungkus ditandai pada kertas tersebut. Dalam kotak pensil, pipet ukur disterilkan tanpa tambahan kertas pembungkus.

Catatan. Jika garis batas pada pipet tidak terlihat jelas, maka pipet dikembalikan sebelum sterilisasi. Cat minyak dioleskan ke pipet dan, tanpa membiarkan cat mengering, bubuk barium sulfat digosokkan ke dalamnya menggunakan kain. Setelah itu, hilangkan sisa cat dengan lap, yang hanya tersisa di takik kelulusan. Pipet yang dirawat dengan cara ini harus dibilas.

Ujung tajam pipet Pasteur disegel dalam api pembakar dan dibungkus kertas, 3-5 lembar sekaligus. Pipet pasteur harus dibungkus dengan hati-hati agar tidak merusak ujung kapiler yang tertutup rapat.

Botol, labu, tabung reaksi ditutup dengan sumbat kapas. Gabus harus masuk ke dalam leher kapal 2/3 panjangnya, tidak terlalu kencang, tetapi juga tidak longgar. Tutup kertas dipasang di atas sumbat pada setiap wadah (kecuali tabung reaksi). Tabung reaksi diikat menjadi satu dalam kelompok yang terdiri dari 5-50 orang dan dibungkus dengan kertas.

Catatan. Pada suhu tinggi, kertas yang membungkus cangkir dan pipet, serta kapas menjadi kuning dan bahkan mungkin hangus, jadi setiap varietas baru kertas yang diterima oleh laboratorium harus diuji pada kondisi suhu yang diterima.

Pertanyaan kontrol

1. Apa yang dimaksud dengan istilah sterilisasi?

2. Bagaimana sterilisasi dilakukan?

3. Apa yang disterilkan dengan cara kalsinasi di atas api?

4. Jelaskan struktur dan cara pengoperasian oven Pasteur.

5. Apa yang disterilkan dalam oven Pasteur?

6. Bagaimana peralatan gelas disiapkan untuk sterilisasi?

7. Mengapa media nutrisi dan benda karet tidak bisa disterilkan dalam oven Pasteur?

Latihan

Siapkan cawan Petri, pipet ukur, pipet Pasteur, tabung reaksi, labu dan vial untuk sterilisasi.

Sterilisasi- infertilitas; pemusnahan mikroorganisme patogen dan non-patogen dalam bentuk vegetatif dan spora pada bahan apapun.

Mempersiapkan piring untuk sterilisasi. Peralatan gelas laboratorium harus dicuci bersih dan disterilkan. Untuk mencuci, gunakan larutan sabun atau deterjen kimia. Hidangan baru direbus terlebih dahulu dalam larutan 1-2%. dari asam klorida, untuk menghindari pencucian kaca selanjutnya. Piring yang dicuci dengan air mengalir dibilas dengan air suling dan dikeringkan.

Tabung bakteriologis. Labu berbentuk kerucut dan matte ditutup dengan sumbat kapas, terdiri dari gulungan kapas yang dipilin rapat, ditutup dengan lapisan kain kasa. Sumbat logam berupa tutup luar juga telah dikembangkan untuk tabung reaksi bakteriologis. Perlu diingat bahwa mensterilkan sumbat kapas pada suhu tinggi menyebabkan pelepasan zat dari kapas yang menghambat pertumbuhan beberapa bakteri sensitif, seperti Brucella.

Saat memasang pipet, masukkan kapas ke ujung atas. Pipet Pasteur harus memiliki kapiler yang tertutup rapat. Tiap pipet ukur dibungkus dengan selembar kertas panjang selebar 4-5 cm, dimulai dari ceratnya, secara heliks sepanjang keseluruhannya. Pipet pasteur dibungkus kertas masing-masing 10-20 lembar, tabung reaksi masing-masing 15-20 lembar. Semua jenis pipet sebelum dan sesudah sterilisasi sebaiknya disimpan dalam wadah logam khusus. Sumbat pada labu juga ditutup dengan tutup kertas.

Sebelum sterilisasi, cawan Petri yang sudah bersih dan sudah dirakit dibungkus kertas, masing-masing 3 sampai 4 lembar. Setelah sterilisasi, kertas tersebut melindungi peralatan gelas steril dari kontaminasi mikroflora.

Sebelum sterilisasi, piring ditempatkan di lemari pengering tidak terlalu rapat untuk menjamin sirkulasi udara, dan dijaga agar suhu tidak melebihi 180?C, karena pada suhu yang lebih tinggi kertas dan kapas akan hangus. Setelah sterilisasi selesai, lemari pengering tidak dibuka sampai saat itu. Hingga suhu di dalamnya turun menjadi 70-80?C, karena penurunan tajam suhu dapat menyebabkan kaca pecah.

Jika cawan dimaksudkan untuk mensterilkan media nutrisi di dalamnya dengan cara diautoklaf pada tekanan minimal 1 atm, maka cawan tersebut tidak disterilkan terlebih dahulu. Saat mensterilkan media dengan uap yang mengalir atau dalam autoklaf dengan tekanan tidak lebih dari 0,5 atm. Wadah steril harus digunakan.

Sterilisasi dengan udara panas kering. Metode tersebut digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas yang bersih. Untuk tujuan ini, oven Pasteur digunakan - lemari pengering khusus dengan dinding ganda. Bagian luarnya dilapisi bahan tahan panas. Di bagian atas ada termometer. Antara lapisan tahan panas dan bagian dalam tubuh logam Elemen pemanas listrik otomatis ditempatkan di bagian bawah. Saat lemari pengering dihidupkan, udara di dalamnya memanas. Setelah suhu yang disetel tercapai, waktu mulai sterilisasi dicatat. Cara sterilisasi: pada suhu 155-160?C - pemaparan selama 2 jam, pada 165-170?C - 1-1,5 jam, pada 180?C - 1 jam Setelah waktu sterilisasi berakhir, pemanasan dihentikan.

Autoklaf. Ini adalah sterilisasi uap di bawah tekanan yang dikombinasikan dengan suhu tinggi dalam peralatan khusus - autoklaf. Ketika uap jenuh bertemu dengan benda yang lebih dingin, uap tersebut mengembun menjadi air, melepaskan sejumlah besar panas. Selain itu, volume uap berkurang, sehingga memudahkan penetrasi ke bagian dalam bahan yang disterilkan. Prasyaratnya adalah pasokan uap yang benar-benar jenuh, sehingga kontaknya dengan benda dingin langsung menyebabkan kondensasi dan pemanasan. Industri ini memproduksi autoklaf vertikal dan horizontal.

Autoklaf vertikal adalah kuali logam silinder berdinding ganda, ditutup dengan penutup. Air dialirkan ke sela-sela dinding melalui keran khusus dengan corong hingga ketinggian tertentu. Dinding bagian dalam ketel dilengkapi dengan lubang di bagian atas dan keran di bagian bawah, yang melaluinya, ketika air dipanaskan, uap menggantikan udara dari ketel. Bingkai pelindung logam ditempatkan di atas autoklaf, dan harus ada di antara autoklaf dan autoklaf itu sendiri ruang bebas. Autoklaf dipanaskan dengan menghubungkan ke jaringan listrik.

Autoklaf diisi dengan bahan yang akan disterilkan, tutup dan keran tempat menuangkan air ditutup, dan keran bawah dibiarkan terbuka untuk sementara. Air panas di antara dinding autoklaf mendidih, uap yang dihasilkan naik dan melewati lubang atas dinding bagian dalam ke dalam ketel, mendorong udara keluar melalui keran terbuka bawah. Ketika semua udara dipindahkan dan uap mulai keluar secara merata, katup bawah ditutup. Akibatnya tekanan uap di dalam autoklaf meningkat. Awal sterilisasi dianggap saat tekanan mencapai nilai tertentu (menurut pengukur tekanan). Panas disesuaikan selama sterilisasi, menjaga tekanan uap pada tingkat yang sama. Jika tekanan di dalam autoklaf meningkat secara berlebihan, terdapat katup pengaman yang melaluinya kelebihan uap secara otomatis akan keluar.

Ketika tekanan uap meningkat, suhu dalam autoklaf juga meningkat.

Pengukur tekanan menunjukkan tekanan uap tanpa memperhitungkan tekanan atmosfer sekitar (760 mm Hg). Setelah waktu sterilisasi habis, autoklaf dimatikan. Setelah pendinginan, ketika pembacaan pengukur tekanan nol, buka katup untuk mengeluarkan uap.

Autoklaf horizontal berbeda dengan autoklaf vertikal dalam desainnya, namun prinsip pengoperasiannya sama.

sterilisasi virologi hewan patologis

Contoh formulir yang harus diisi pada saat pengiriman bahan patologis ke laboratorium

Ini adalah silinder logam berdinding ganda yang bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam. Itu tertutup rapat dengan penutup besar menggunakan beberapa sekrup. Dilengkapi dengan pengukur tekanan dengan katup pengaman dan katup uap.

Sebelum sterilisasi, air suling dituangkan ke dalam autoklaf melalui corong dengan gelas takar air sampai garis yang tertera pada wadah. Bahan untuk sterilisasi dimasukkan ke dalam ruang sterilisasi, ditutup rapat dengan penutup, disekrup dan sumber pemanas dihidupkan. Dalam hal ini, katup uap dibiarkan terbuka. Uap yang dihasilkan selama perebusan melewati antara dinding autoklaf dan masuk ke dalam ruangan melalui lubang di dinding bagian dalam. Saat dipanaskan, udara pertama-tama keluar dari autoklaf melalui katup uap, lalu uap. Pelepasan aliran uap kering yang terus menerus menunjukkan perpindahan udara sepenuhnya dari autoklaf: keran ditutup, dan sejak saat itu tekanan dalam autoklaf mulai meningkat secara bertahap, jarum pada pengukur tekanan naik. Awal sterilisasi dianggap saat jarum pengukur tekanan mencapai tekanan yang diinginkan.

Gambar.3

Pembacaan pengukur tekanan sesuai dengan suhu tertentu uap dalam autoklaf: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.

Bahan dalam autoklaf paling sering disterilkan pada 0,1 MPa selama 20-30 menit. Di akhir sterilisasi, matikan sumber pemanas (jarum pengukur tekanan secara bertahap mencapai nol). Setelah ini, buka katup uap dan keluarkan sisa uap. Kemudian dengan hati-hati buka tutupnya dan buka. Setelah benar-benar dingin, keluarkan bahan yang telah disterilkan.

Autoklaf dapat digunakan untuk mensterilkan piring, peralatan, media kultur (kecuali agar-agar dan media yang mengandung karbohidrat), dressing, dll. Saat bekerja, aturan keselamatan harus dipatuhi. Orang yang memiliki sertifikat hak penggunaan autoklaf diperbolehkan bekerja. Kemudahan servis autoklaf diperiksa oleh inspektorat ketel uap.

Peralatan Koch (Gbr. 4) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi dengan bahan (linoleum, asbes) yang tidak menghantarkan panas dengan baik. Air dituangkan ke bagian bawah dan bahan sterilisasi ditempatkan di atas dudukan. Perangkat ditutup dengan penutup berbentuk kerucut, yang memiliki lubang untuk termometer dan saluran keluar uap. Di bagian bawah terdapat keran untuk mengalirkan air. Sterilisasi dilakukan dengan uap yang mengalir pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Dalam mode ini, sel-sel vegetatif mikroba pembentuk spora dan non-pembentuk spora mati. Sterilisasi fraksional (tiga kali) selama 30-60 menit selama tiga hari dengan interval 18-20 jam memungkinkan Anda menciptakan kondisi untuk perkecambahan spora ke dalam sel vegetatif dan membuangnya. Dalam interval waktu antara sterilisasi, spora berkecambah dan mati selama pemanasan berikutnya. Peralatan Koch mensterilkan bahan-bahan yang tidak tahan suhu di atas 100 °C (agar-agar, susu, media karbohidrat, dll.).

Media protein dan serum darah yang tidak tahan suhu 100 °C disterilkan secara fraksional pada suhu 56-58 °C dalam penangas air.

Lemari pengering(Oven Pasteur) (Gbr. 5) adalah lemari logam berdinding ganda yang dilapisi asbes di atasnya. Dinding atas memiliki lubang untuk termometer dan ventilasi. Udara panas naik dari bawah di antara dinding dan melalui bukaan atas masuk ke lemari, tempat bahan yang akan disterilkan diletakkan di rak. Sterilisasi dilakukan dengan panas kering suhu 150°C selama 2 jam, suhu 165-170°C - 45 menit, suhu 180°C - 15 menit. Peralatan gelas disterilkan dalam oven Pasteur. Setelah sterilisasi, kabinet dilepas dari oven. sumber pemanas dan dibuka hanya setelah pendinginan sempurna.

Filter bakteri digunakan untuk mensterilkan cairan tanpa pemanasan. Ini termasuk Chamberlant, lilin Berkefeld dan filter asbes Seitz (pelat).

Lilin filter (Gbr. 6) adalah silinder berongga yang terbuat dari bahan berpori halus: kaolin dengan campuran pasir kuarsa (lilin Chamberlan) dan tanah infusor (lilin Berkefeld). Lilin Chamberlant punya berbagai ukuran pori-pori yang dilalui mikroba. Lilin yang dapat dilewati bakteri besar ditandai dengan huruf L9, L1(bis), L3, sedang - L5, L7, terkecil - L9, L11 , L13 Lilin Berkefeld ditentukan berdasarkan porositas W, N, V(lilin merk U mempunyai pori-pori paling besar).

Filter Seitz adalah pelat asbes dengan berbagai ukuran. Saat memasang perangkat untuk sterilisasi, pelat ditempatkan pada jaring di antaranya cakram logam(dengan lubang di tengahnya), yang ditekan rapat dengan sekrup. Filter yang sudah terpasang dimasukkan melalui sumbat ke dalam labu dengan saluran keluar samping (labu Bunsen) dan tabung karet, dibungkus kertas dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 120 °C selama 20-30 menit.

Untuk menyaring bahan, buatlah ruang hampa di dalam labu Bunsen dengan menyambungkan tabung karet yang berisi minyak yang telah dijernihkan ke dalamnya. pompa tangan Komovsky atau pompa vakum listrik.

Penyelesaian pekerjaan. Mikroba dibudidayakan secara optimal kondisi suhu. Untuk tujuan ini, laboratorium menggunakan termostat udara atau air.

(Gbr. 7) adalah lemari logam dengan dinding ganda, di antaranya terdapat lapisan air atau udara. Bagian luar termostat dilapisi dengan bahan yang menghantarkan panas dengan buruk (asbes, linoleum).

Beras. 4, 5, 6.

Di dalam termostat terdapat rak untuk menempatkan benih mikroorganisme yang tumbuh. Suhu konstan dalam termostat dipertahankan menggunakan termostat, yang terpasang pada penutup atas termostat. Perangkat termostat didasarkan pada prinsip ekspansi linier zat. Termoregulasi adalah paduan dua logam dengan koefisien muai panas berbeda (kuningan, seng) atau “bantalan” logam yang diisi dengan alkohol, campuran alkohol dan eter, merkuri atau zat lain yang mengubah volumenya pada suhu tertentu. Ketika termostat memanas di atas norma yang ditetapkan, logam memuai, kontak terbuka dan aliran panas lebih lanjut secara otomatis tertunda. Setelah suhu turun, lampu menyala listrik dan aliran panas berlanjut.

Sterilisasi diwakili oleh metode fisik, kimia, mekanik dan biologis serta berbagai metode. Kelayakan penggunaan metode sterilisasi tertentu dan metodenya tergantung pada karakteristik bahan yang akan disterilkan, sifat fisik dan kimianya. Lamanya sterilisasi tergantung pada benda yang disterilkan, bahan sterilisasi dan dosisnya, suhu dan kelembaban lingkungan.

Metode sterilisasi fisik Metode sterilisasi metode fisik meliputi pengeringan, pembakaran dan kalsinasi, perebusan, pasteurisasi dan tindalisasi, udara panas (panas kering), ultrasound, radiasi ultraviolet dan radioaktif, arus frekuensi tinggi, sinar matahari. Metode sterilisasi barang yang paling umum yang dapat terkena suhu tinggi adalah sterilisasi dengan api, udara panas, dan uap jenuh di bawah tekanan. Api digunakan untuk membakar benda-benda yang terinfeksi yang tidak bernilai apa pun (kertas yang tidak perlu, kertas dinding tua, kain perca, sampah), untuk mendisinfeksi dahak pasien TBC, mayat manusia dan hewan yang mati karena infeksi yang sangat berbahaya, serta untuk membakar dan mengalsinasi berbagai benda. Pembakaran dan kalsinasi banyak digunakan dalam praktik mikrobiologi untuk desinfeksi instrumen, laboratorium, dan peralatan gelas farmasi. Kalsinasi dalam nyala api pembakar atau flambéing adalah suatu metode sterilisasi dimana suatu benda disterilkan secara menyeluruh, karena sel-sel vegetatif, kista dan spora mikroorganisme mati. Biasanya, loop, spatula, pipet, kaca objek dan kaca penutup, instrumen kecil dan benda terkontaminasi lainnya disterilkan dengan kalsinasi jika tidak dapat direbus. Tidak disarankan mensterilkan gunting dan pisau bedah dengan cara dipanaskan, karena permukaan pemotongan menjadi kusam jika terkena api. Salah satu metode sterilisasi fisik yang paling sederhana dan umum digunakan dalam praktik medis adalah sterilisasi udara panas (panas kering). Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven pengering (oven Pasteur). Udara panas kering memiliki efek bakterisidal, virusisidal, sporisidal dan digunakan terutama untuk sterilisasi produk kaca (peralatan gelas laboratorium - cawan Petri, labu, pipet, tabung reaksi, dll.), serta produk logam yang dapat disterilkan dengan uap dibawah tekanan. Selain itu, panas kering digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang terbuat dari porselen dan bahan tahan panas (bedak, tanah liat putih), serta minyak mineral dan nabati, lemak, petroleum jelly, lanolin, dan lilin. Cara paling efektif untuk metode sterilisasi ini, yang menjamin kematian bentuk vegetatif dan spora, adalah suhu 160 - 180 derajat selama 15 menit. Anda tidak dapat mensterilkan bahan makanan, larutan isotonik, atau bahan yang terbuat dari karet dan bahan sintetis dengan panas kering, karena cairan akan mendidih dan keluar, serta karet dan bahan sintetis akan meleleh. Sterilisasi dengan uap jenuh di bawah tekanan adalah metode yang paling andal dan paling sering digunakan untuk mensterilkan pembalut, air, beberapa obat, media kultur, peralatan lunak, instrumen, serta untuk mendisinfeksi bahan limbah yang terkontaminasi. Dalam praktik bedah, pembalut, pakaian ahli bedah, dan pakaian dalam untuk pasien yang dioperasi didesinfeksi menggunakan uap dalam autoklaf. Sterilisasi uap di bawah tekanan dilakukan di perangkat khusus - autoklaf. Autoklaf sepenuhnya menghancurkan semua mikroorganisme dan spora. Metode sterilisasi tekanan uap didasarkan pada pemanasan bahan dengan uap air jenuh pada tekanan di atas tekanan atmosfer. Kombinasi suhu tinggi dan uap menjadikan metode ini sangat efektif. Dalam hal ini, sel vegetatif dan spora mikroba mati. Spora mikroba mati dalam waktu 10 menit di bawah pengaruh uap air jenuh, dan bentuk vegetatif mati dalam waktu 1 hingga 4 menit. Kekuatan bakterisida yang tinggi dari uap jenuh disebabkan oleh fakta bahwa, di bawah pengaruh uap air di bawah tekanan, protein sel mikroba membengkak dan menggumpal, akibatnya sel mikroba mati. Efek bakterisida dari uap air jenuh ditingkatkan dengan tekanan berlebih. Sterilisasi dalam autoklaf dilakukan dalam mode yang berbeda. Jadi, media nutrisi sederhana (daging - pepton agar dan daging - kaldu pepton) disterilkan selama 20 menit pada suhu 120 derajat (1 atm). Namun dengan mode ini tidak mungkin mensterilkan media yang mengandung protein, karbohidrat dan zat lain yang mudah diubah oleh pemanasan. Media yang mengandung karbohidrat disterilkan dalam autoklaf pada suhu 0,5 atm. 10 – 15 menit atau uap yang mengalir secara fraksional. Dengan menggunakan suhu tinggi, Anda dapat menghancurkan bentuk mikroorganisme patogen yang paling persisten (termasuk yang membentuk spora) tidak hanya pada permukaan benda yang didesinfeksi, tetapi juga pada kedalamannya. Inilah keuntungan besar dari suhu tinggi sebagai alat sterilisasi yang andal. Namun, beberapa barang menjadi rusak karena pengaruh suhu tinggi dan dalam kasus ini perlu menggunakan metode dan cara desinfeksi lain. Sterilisasi lengkap bahan dan benda yang tidak memungkinkan penggunaan sterilisasi suhu tinggi dicapai dengan sterilisasi berulang dengan uap air dalam peralatan Koch pada suhu tidak melebihi 100 derajat. Metode ini disebut sterilisasi fraksional. Intinya adalah bahwa sisa bentuk mikroba spora yang tidak terbunuh, setelah seharian dalam termostat pada suhu 37 derajat, berkecambah menjadi sel vegetatif, yang kematiannya terjadi selama sterilisasi selanjutnya dari benda ini dengan uap yang mengalir. Perawatan dengan uap cairan dilakukan tiga kali selama 30-40 menit. Memanaskan bahan satu kali pada suhu di bawah 100 derajat disebut pasteurisasi. Pasteurisasi diusulkan oleh Pasteur dan dimaksudkan terutama untuk menghancurkan sebagian besar mikroorganisme non-spora. Pasteurisasi dilakukan pada suhu 60 - 70 derajat selama 15 hingga 30 menit, pada suhu 80 derajat selama 10 hingga 15 menit. Dalam praktik mikrobiologi, pasteurisasi bahan benih sering digunakan untuk mengisolasi kultur murni mikroorganisme pembentuk spora dan untuk mengidentifikasi kemampuan mikroorganisme dalam membentuk spora. Untuk cairan yang kehilangan rasa dan kualitas berharga lainnya bila terkena suhu tinggi (susu, jus beri dan buah, bir, media nutrisi yang mengandung karbohidrat atau urea, dll.), sterilisasi dengan uap yang mengalir dilakukan pada suhu 50 - 60 derajat selama 15 - 33333330 menit atau pada suhu 70 - 80 derajat selama 5 - 10 menit. Dalam hal ini, mikroba dengan resistensi rata-rata mati, sementara mikroba dan spora yang lebih resisten tetap bertahan. Sterilisasi fraksional 5-6 kali lipat pada suhu 60 derajat selama 1 jam disebut tyndalisasi. Banyak produk medis yang terbuat dari bahan polimer tidak tahan terhadap sterilisasi uap menurut aturan yang berlaku umum. Untuk banyak produk, karena karakteristik cairan yang dikandungnya (pengawet, obat-obatan, dan produk lainnya), tidak mungkin untuk mensterilkan menggunakan metode dan metode yang berlaku umum. Untuk produk tersebut, sistem sterilisasi individual dikembangkan untuk memastikan sterilisasi objek yang andal. Oleh karena itu, sterilisasi rotor untuk memisahkan darah menjadi fraksi-fraksi dilakukan dengan uap air pada suhu 120 derajat selama 45 menit. Sterilitas wadah pengawet dicapai pada suhu 110 derajat selama 60 menit. Perebusan adalah metode sterilisasi yang digunakan untuk menghilangkan sterilisasi jarum suntik yang dapat digunakan kembali, instrumen bedah, tabung karet, peralatan kaca dan logam. Sterilisasi dengan cara direbus dilakukan dalam alat sterilisasi. Bentuk spora dalam air mendidih akan mati setelah 20 - 30 menit. Merebus selama 45 menit banyak digunakan untuk mendisinfeksi sekret dan bahan infeksius lainnya, linen, piring, mainan, dan barang perawatan pasien. Air panas (60 - 100 derajat) dengan deterjen digunakan saat mencuci dan membersihkan untuk menghilangkan kotoran dan mikroorganisme secara mekanis. Kebanyakan sel vegetatif mati pada suhu 70 derajat setelah 30 menit. Sterilisasi filtrasi digunakan dalam kasus di mana substrat tidak tahan terhadap pemanasan, khususnya untuk media yang mengandung protein, serum, beberapa antibiotik, vitamin, dan zat yang mudah menguap. Teknik ini cukup banyak digunakan untuk mensterilkan cairan kultur, bila diperlukan untuk membebaskannya dari sel mikroba, namun untuk menjaga semua produk metabolisme yang dikandungnya tidak berubah. Metode ini melibatkan penyaringan cairan melalui filter khusus yang memiliki partisi berpori halus sehingga dapat mempertahankan sel mikroba. Dua jenis filter yang paling banyak digunakan adalah filter membran dan filter Seitz. Filter membran dibuat dari collodion, asetat, selulosa dan bahan lainnya. Filter Seitz terbuat dari campuran asbes dan selulosa. Selain itu, filter yang terbuat dari kaolin dengan campuran pasir kuarsa, tanah infusor dan bahan lainnya (“lilin” oleh Chamberlan, Berkfeld) digunakan untuk sterilisasi. Filter membran dan asbes dirancang untuk penggunaan satu kali. Dengan penyinaran ultraviolet, efek bakterisida diberikan oleh sinar dengan panjang 200 - 450 nm, yang sumbernya adalah lampu bakterisida. Dengan bantuan lampu bakterisida, udara disterilkan dengan sinar ultraviolet di lembaga medis dan pencegahan, kotak laboratorium mikrobiologi, perusahaan industri makanan, dalam kotak produksi vaksin dan serum, di ruang operasi, ruang manipulasi, lembaga anak, dll. Sinar ultraviolet memiliki aktivitas antimikroba yang tinggi dan tidak hanya menyebabkan kematian sel vegetatif, tetapi juga sporanya. Sinar matahari menyebabkan kematian mikroorganisme akibat penyinaran dan pengeringan ultraviolet. Pengeringan dengan sinar matahari mempunyai efek merugikan pada banyak jenis mikroorganisme, namun pengaruhnya hanya dangkal dan oleh karena itu sinar matahari memainkan peran pendukung dalam praktik sterilisasi. Baru-baru ini, dalam pengobatan luka dan luka bakar, pelapis yang terbuat dari polimer sintetik dan alami dalam bentuk gel telah digunakan. Film antiseptik polimer banyak digunakan untuk pengobatan luka dan luka bakar lokal. Mereka mengandung agen antimikroba spektrum luas seperti katapol, dioksidan, yodium biru, serta sorbitol yang mengandung glutaraldehid. Untuk mensterilkan film tersebut digunakan radiasi pengion dengan dosis 20,0 kGy. Selama produksi industri film dan sorben antiseptik polimer, sterilitasnya di bawah sistem sterilisasi ini dijamin sepenuhnya. Radiasi radioaktif membunuh semua jenis mikroorganisme, baik dalam bentuk vegetatif maupun spora. Ini banyak digunakan untuk sterilisasi di perusahaan yang memproduksi produk steril dan peralatan medis sekali pakai yang steril, untuk desinfeksi air limbah dan bahan mentah yang berasal dari hewan.

Metode sterilisasi mekanis Metode sterilisasi mekanis menghilangkan kuman dari permukaan benda. Ini termasuk mencuci, mengguncang, menyapu, menyeka basah, mengudara, ventilasi, menyedot debu, mencuci.

Metode sterilisasi kimia Plastik kini semakin banyak digunakan dalam praktik medis. Mereka digunakan dalam kedokteran gigi, bedah maksilofasial, traumatologi, ortopedi, dan bedah. Kebanyakan plastik tidak tahan terhadap metode sterilisasi panas uap di bawah tekanan dan panas kering (udara panas kering). Larutan alkohol, diosida, dan larutan terner yang digunakan untuk mensterilkan benda-benda tersebut tidak menjamin sterilitas produk yang diproses. Oleh karena itu, metode gas dan radiasi, serta larutan bahan kimia, digunakan untuk mensterilkan produk plastik. Pengenalan sejumlah besar produk yang terbuat dari bahan termolabil ke dalam praktik institusi medis berkontribusi pada pengenalan metode desinfeksi dan sterilisasi radiasi dan gas dengan larutan disinfektan. Selama sterilisasi kimia, gas dan bahan dari berbagai kelompok kimia digunakan (peroksida, fenolik, mengandung halogen, aldehida, basa dan asam, surfaktan, dll.). Untuk penggunaan sehari-hari, diproduksi deterjen, pembersih, pemutihan dan sediaan lainnya yang memiliki efek antimikroba karena masuknya berbagai bahan kimia ke dalam komposisinya. Sediaan ini digunakan untuk membersihkan dan mendisinfeksi peralatan sanitasi, piring, linen, dll. Uap formaldehida (bentuk uap) dapat digunakan di institusi medis untuk mensterilkan produk medis logam (pisau bedah, jarum, pinset, probe, klem, kait, pemotong kawat, dll. .). Sebelum disterilkan dengan uap formaldehida, produk harus dibersihkan terlebih dahulu dan dikeringkan secara menyeluruh. Ketika mensterilkan dengan metode kimia apa pun, tata cara pengolahan suatu benda tertentu bergantung pada karakteristik benda yang didesinfeksi, ketahanan mikroba, karakteristik sifat kimia, suhu lingkungan, kelembaban dan faktor lainnya. Dengan demikian, sterilitas instrumen logam dicapai setelah lima jam penyimpanan dalam ruang tertutup dengan uap pada suhu minimal 20 derajat dan kelembaban relatif 95 - 98%; pada suhu 15 derajat, sterilitas lengkap dari benda-benda ini dicapai hanya setelah 16 jam. Aktivitas sporisidal glutaraldehid bergantung pada suhu. Tindakan optimalnya terjadi pada suhu 15 – 25 derajat. Ketika suhu naik, aktivitas sporisidal obat ini menurun. Sterilisasi kimia digunakan sampai batas tertentu. Paling sering, metode ini digunakan untuk mencegah kontaminasi bakteri pada media kultur dan sediaan imunobiologis (vaksin dan serum). Zat seperti kloroform, toluena, dan eter paling sering ditambahkan ke media nutrisi. Jika media perlu dibebaskan dari bahan pengawet ini, media dipanaskan dalam penangas air pada suhu 56 derajat dan bahan pengawet tersebut diuapkan. Untuk mengawetkan vaksin atau serum, digunakan merthiolate, asam borat, dan formalin.

Metode sterilisasi biologis Sterilisasi biologis didasarkan pada penggunaan antibiotik. Metode ini banyak digunakan dalam budidaya virus.