Termal sterilizasyon yöntemleri. Sterilizasyon yöntemleri ve yöntemleri Otoklav ve basınç altında aşırı ısıtılmış buharla sterilizasyon

Sterilizasyon fiziksel, kimyasal, mekanik ve biyolojik yöntemlerle ve çeşitli şekillerde temsil edilmektedir. Belirli bir sterilizasyon yöntemini ve yöntemlerini kullanmanın uygunluğu, sterilize edilecek malzemenin özelliklerine, fiziksel ve kimyasal özellikler. Sterilizasyon süresi sterilize edilecek nesneye, sterilizasyon maddesine ve dozuna, sıcaklığına ve nemine bağlıdır. çevre.

Fiziksel sterilizasyon yöntemi yollara fiziksel yöntem sterilizasyon, kurutma, yakma ve kalsinasyon, kaynatma, pastörizasyon ve tyndallization'ı içerir, sıcak hava(kuru ısı), ultrason, ultraviyole ve radyoaktif radyasyon, yüksek frekanslı akım, güneş ışığı. Kullanılabilecek öğeleri sterilize etmenin en yaygın yolu Yüksek sıcaklık, ateş, sıcak hava ve basınçlı doymuş buhar ile sterilizasyondur. Ateş, herhangi bir değeri temsil etmeyen enfekte olmuş nesneleri (atık kağıtlar, eski duvar kağıtları, paçavralar, çöpler) yakmak, verem hastalarının balgamlarını, özellikle tüberkülozdan ölen insan ve hayvanların cesetlerini dezenfekte etmek için kullanılır. tehlikeli enfeksiyonlar, ayrıca çeşitli nesneleri yakmak ve kireçlemek için. Kavurma ve kalsinasyon, aletlerin, laboratuvar ve eczane cam malzemelerinin dezenfeksiyonu için mikrobiyolojik uygulamada yaygın olarak kullanılmaktadır. Brülör veya alev alevinde tutuşturma, mikroorganizmaların bitkisel hücreleri, kistleri ve sporları da öldüğü için nesnenin tamamen ayrıştığı bir sterilizasyon yöntemidir. Genel olarak özeler, spatulalar, pipetler, cam lamlar, lameller, küçük aletler ve diğer kontamine nesneler kaynatılamıyorlarsa kalsinasyon ile sterilize edilirler. Makas ve neşterlerin kalsinasyon ile sterilize edilmesi tavsiye edilmez, çünkü kesme yüzeyi ateşin etkisi altında donuklaşır. Tıbbi uygulamada kullanılan en basit ve en yaygın fiziksel sterilizasyon yöntemlerinden biri sıcak hava sterilizasyonudur (kuru ısı). Kuru ısı sterilizasyonu kurutma kabinlerinde (Pastör fırınlarında) gerçekleştirilir. Kuru sıcak hava bakterisidal, virüsidal, sporocidal etkiye sahiptir ve esas olarak cam ürünleri (laboratuvar cam malzemeleri - Petri kapları, şişeler, pipetler, test tüpleri vb.) ve ayrıca basınç altında buharla sterilize edilebilen metal ürünleri sterilize etmek için kullanılır. Ayrıca kuru ısı, porselen ve ısıya dayanıklı maddelerden (talk, beyaz kil), mineral ve bitkisel yağları, katı yağları, vazelin, lanolin ve balmumu sterilize etmek için kullanılır. Vejetatif formların ve sporların ölmesini sağlayan bu sterilizasyon yöntemi için en etkili mod 160 - 180 derece sıcaklıkta 15 dakikadır. Besin ortamı, izotonik çözelti, kauçuk ve sentetik malzemeler, sıvılar kaynayıp döküldüğü ve kauçuk ve sentetik malzemeler eridiği için kuru ısı ile sterilize edilemez. Sterilizasyon doymuş buhar basınç altında - bu, pansumanları, suyu, bazı ilaçları, besleyici ortamları, yumuşak ekipmanı, aletleri sterilize etmenin yanı sıra kontamine atık malzemeyi dekontamine etmek için en güvenilir ve en sık denenen yöntemdir. Cerrahi pratikte pansuman, ameliyat olan kişinin önlükleri, iç çamaşırları otoklavlarda buharla dezenfekte edilmektedir. Basınç altında buharla sterilizasyon, özel cihazlarda - otoklavlarda gerçekleştirilir. Otoklavlama, tüm mikroorganizmaları ve sporları tamamen yok eder. Buhar basınçlı sterilizasyon yöntemi, malzemenin atmosferik basıncın üzerinde bir basınçta doymuş su buharı ile ısıtılmasına dayanır. Yüksek sıcaklık ve buharın birleşik etkisi, bu yöntemi özellikle etkili kılar. Bu durumda hem vejetatif hücreler hem de mikroorganizmaların sporları ölür. Doymuş su buharının etkisi altındaki mikrobiyal sporlar 10 dakika içinde ölür ve bitkisel formlar - 1 ila 4 dakika arasında. Doymuş buharın yüksek bakterisit gücü, basınç altındaki su buharının etkisi altında, mikrobiyal hücrenin proteinlerinin şişmesi ve pıhtılaşması ve bunun sonucunda mikrobiyal hücrelerin ölmesi gerçeğinden kaynaklanmaktadır. Doymuş su buharının bakterisidal etkisi, aşırı basınçla artar. Otoklavda sterilizasyon farklı modlarda gerçekleştirilir. Bu nedenle, basit besin ortamları (et - pepton agar ve et - pepton suyu) 120 derecede (1 atm.) 20 dakika sterilize edilir. Ancak bu mod ile proteinler, karbonhidratlar ve ısıtmadan kolayca değişen diğer maddeleri içeren ortamları sterilize etmek imkansızdır. Karbonhidratlı ortamlar 0,5 atm'de otoklavda sterilize edilir. 10 - 15 dakika veya fraksiyonel akan buhar. Yüksek sıcaklık sayesinde, sadece dezenfekte edilecek nesnelerin yüzeyinde değil, aynı zamanda derinliklerinde de en kalıcı patojenik mikroorganizma formlarını (spor oluşturanlar dahil) yok etmek mümkündür. Bu, güvenilir bir sterilizasyon aracı olarak yüksek sıcaklığın büyük avantajıdır. Ancak bazı maddeler yüksek sıcaklığın etkisiyle bozulur ve bu durumlarda başka dezenfeksiyon yöntem ve araçlarına başvurmak gerekir. Yüksek sıcaklıkta sterilizasyon kullanımına izin vermeyen malzeme ve öğelerin tam dekontaminasyonu, 100 dereceyi geçmeyen bir sıcaklıkta Koch aparatında tekrarlanan buhar sterilizasyonu ile sağlanır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir. Mikropların kalan öldürülmemiş spor formlarının, 37 derecede bir termostatta bir günden sonra, ölümü müteakip sterilizasyon sırasında meydana gelen bitkisel hücrelere dönüştüğü gerçeğine kadar kaynar. bu nesne akan buhar. Akan buharla işleme, 30 - 40 dakika boyunca üç kez gerçekleştirilir. Malzemenin 100 derecenin altındaki bir sıcaklıkta tek bir ısıtılması pastörizasyon olarak bilinir. Pastörizasyon, Pasteur tarafından önerildi ve esas olarak çoğunlukla sporsuz mikroorganizmaların yok edilmesi amaçlandı. Pastörizasyon 60 - 70 derecede 15 - 30 dakika, 80 derecede 10 - 15 dakika arasında yapılır. Mikrobiyolojik uygulamada, pastörizasyon tohum genellikle spor oluşturan mikroorganizmaların saf kültürlerini izole etmek ve mikroorganizmaların spor oluşturma yeteneklerini belirlemek için kullanılır. Yüksek sıcaklıklara maruz kaldıklarında tatlarını ve diğer değerli niteliklerini kaybeden sıvılar için (süt, meyve ve meyve suları, bira, karbonhidrat veya üre içeren besin ortamları vb.), 50–60 derecede 15–33333330 dakika veya 70–80 derecede 5–10 dakika sıvı buhar sterilizasyonu yapılır. Aynı zamanda, orta dirençli mikroplar ölürken, daha dirençli mikroplar ve sporlar kalır. Fraksiyonel 5 - 6 kat 60 derecede 1 saat sterilizasyona tyndalizasyon denir. yapılan birçok tıbbi cihaz polimer malzemeler, sterilizasyona dayanmaz buhar yolu genel kabul görmüş kurallara göre. Birçok ürün için, içerdikleri sıvıların (koruyucu, ilaç ve diğer ürünler) özelliklerinden dolayı, geleneksel yöntem ve yöntemlerle sterilize edilmesi mümkün değildir. Bu tür ürünler için, nesnelerin güvenilir bir şekilde dekontaminasyonunu sağlamak için bireysel sterilizasyon rejimleri geliştirilmiştir. Böylece kanı fraksiyonlara ayıran rotorun sterilizasyonu 120 derece sıcaklıkta 45 dakika su buharı ile gerçekleştirilir. Koruyucular için kapların sterilitesi 110 derecede 60 dakikada elde edilir. Kaynatma, yeniden kullanılabilir şırıngaları, cerrahi aletleri, lastik tüpleri, cam ve metal kapları kurutmak için kullanılan bir sterilizasyon yöntemidir. Kaynatılarak sterilizasyon sterilizatörlerde gerçekleştirilir. Kaynar sudaki spor formları 20-30 dakikada ölür. 45 dakika kaynatma, salgıları ve diğer bulaşıcı malzemeleri, çarşafları, tabakları, oyuncakları ve hasta bakım malzemelerini dezenfekte etmek için yaygın olarak kullanılır. Yıkama ve temizlik için deterjanlı sıcak su (60 - 100 derece) kullanılır. mekanik kaldırma kirleticiler ve mikroorganizmalar. Çoğu vejetatif hücre 30 dakika sonra 70 derecede ölür. Filtrasyon sterilizasyonu, substratların ısınmaya dayanamadığı durumlarda, özellikle proteinler, serumlar, bazı antibiyotikler, vitaminler, uçucu maddeler içeren besiyerleri için kullanılır. Bu teknik, kültür sıvısını mikroorganizma hücrelerinden arındırmak, ancak içerdiği tüm metabolik ürünleri değişmeden tutmak gerektiğinde sterilize etmek için oldukça yaygın olarak kullanılır. Yöntem, sıvıların ince gözenekli bölmelere sahip olan ve dolayısıyla mikroorganizma hücrelerini tutan özel filtrelerden filtre edilmesinden oluşur. En yaygın olarak iki tür filtre kullanılır: membran filtreler ve Seitz filtreleri. Membran filtreler kolodyum, asetat, selüloz ve diğer malzemelerden yapılır. Seitz filtreleri, asbest ve selüloz karışımından yapılır. Ayrıca kaolen katkılı filtreler kuvars kumu, silisli topraktan ve diğer malzemelerden (Chamberlain, Berkfeld'den “mumlar”). Membran ve asbest filtreleri tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır. Ultraviyole ışınlama ile bakterisit etki, kaynağı bakterisit lambalar olan 200 - 450 nm uzunluğunda ışınlarla sağlanır. Bakterisidal lambalarla sterilizasyon ultraviyole ışınlar tıpta hava önleyici kurumlar, işletmelerde mikrobiyolojik laboratuvar kutuları Gıda endüstrisi, aşı ve serum üretimi için kutularda, ameliyathanelerde, manipülasyonda, çocuk bakımevlerinde vb. Ultraviyole ışınları yüksek antimikrobiyal aktiviteye sahiptir ve sadece vejetatif hücrelerin değil, sporlarının da ölümüne neden olabilir. Güneş ışığının etkisi sonucu mikroorganizmaların ölümüne neden olur. ultraviyole ışınlama ve kurutma. Güneş ışığı yardımıyla kurutmanın birçok mikroorganizma türü üzerinde zararlı etkisi vardır ancak etkisi yüzeyseldir ve bu nedenle sterilizasyon uygulamasında güneş ışığı yardımcı rol oynar. İÇİNDE Son zamanlarda yara ve yanıkların tedavisinde jel formunda sentetik ve doğal polimerlerden kaplamalar kullanılmaktadır. Polimerik antiseptik filmler, yaraların ve yanıkların lokal tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Katapol, dioksidin, mavi iyot ve glutaraldehit içeren sorbitol gibi geniş spektrumlu antimikrobiyal ajanları içerir. Bu filmleri sterilize etmek için 20.0 kGy dozunda iyonlaştırıcı radyasyon kullanılır. Polimerik antiseptik filmlerin ve sorbentlerin endüstriyel üretiminde, sterilizasyonları bu sterilizasyon rejimi altında tamamen sağlanır. Radyoaktif radyasyon, hem bitkisel hem de spor formdaki tüm mikroorganizma türlerini öldürür. Steril ürünler ve steril tek kullanımlık tıbbi ürünler üreten işletmelerde sterilizasyon, dezenfeksiyon için yaygın olarak kullanılmaktadır. atık su ve hayvansal kaynaklı hammaddeler.

mekanik yöntem sterilizasyon Mekanik sterilizasyon yöntemleri mikropları nesnelerin yüzeyinden uzaklaştırır. Bunlar yıkama, sallama, süpürme, nemli silme, havalandırma, havalandırma, vakumlama, yıkamadır.

Kimyasal sterilizasyon yöntemi Plastikler tıbbi uygulamada giderek daha fazla kullanılmaktadır. Diş hekimliği, çene-yüz cerrahisi, travmatoloji, ortopedi ve cerrahide kullanılırlar. Çoğu plastik, basınçlı buhar ve kuru ısı (kuru ısıtılmış hava) gibi ısıyla sterilizasyon yöntemlerine dayanamaz. Bu tür nesnelerin sterilizasyonu için kullanılan alkol, diosit, üçlü çözelti solüsyonları, işlenen ürünlerin sterilitesini sağlamaz. Bu nedenle plastik ürünlerin sterilizasyonu için gaz ve radyasyon yöntemleri ile kimyasal müstahzarların çözeltileri kullanılmaktadır. Tıbbi kurumların pratiğine giriş Büyük bir sayıısıya dayanıklı malzemelerden yapılmış ürünler radyasyonun girmesine katkıda bulunur, gaz yolları dezenfektan solüsyonları ile dezenfeksiyon ve sterilizasyon. -de kimyasal sterilizasyonçeşitli kimyasal gruplardan gazlar ve ajanlar kullanılmaktadır (peroksit, fenolik, halojen içeren, aldehitler, alkaliler ve asitler, yüzey aktif maddeler vb.). Ev kullanımı için, bileşimlerine çeşitli maddelerin eklenmesi nedeniyle antimikrobiyal etkiye sahip deterjanlar, temizleyiciler, ağartıcılar ve diğer müstahzarlar üretilir. kimyasal maddeler. Bu müstahzarlar sıhhi tesisatların temizliği ve dezenfeksiyonu için kullanılır - teknik ekipman, tabak, çarşaf vb. formaldehit buharı (paroform) kullanılabilir. tıbbi kurumlar sterilizasyon için metal ürünleri tıbbi amaçlı (neşter, iğne, cımbız, sonda, kıskaç, kanca, tel kesici vb.) Formaldehit buharı ile sterilizasyondan önce ürünler sterilizasyon öncesi temizliğe tabi tutulmalı ve iyice kurutulmalıdır. herhangi bir yöntemle sterilize edildiğinde kimyasal yollarla Bir nesneyi işleme prosedürü, dezenfekte edilen nesnenin özelliklerine, mikroplara karşı direncine ve özelliklerin özelliklerine bağlıdır. kimyasal ilaç, ortam sıcaklığı, nem ve diğer faktörler. Böylece, metal aletlerin sterilitesi, en az 20 derecelik bir sıcaklıkta bir buhar banyosu ile kapalı bir odaya beş saat maruz kaldıktan sonra elde edilir ve bağıl nem% 95 - 98, 15 derecelik bir sıcaklıkta, bu nesnelerin tam sterilitesi ancak 16 saat sonra elde edilir. Gluteraldehitin sporisidal aktivitesi sıcaklığa bağlıdır. Etkisinin optimumu 15 - 25 derecelik bir sıcaklıkta gerçekleşir. Artan sıcaklıkla birlikte, bu ilacın spor öldürücü etkisinin aktivitesi azalır. Kimyasal yöntemle sterilizasyon biraz sınırlıdır. Çoğu zaman, bu yöntem besleyici ortamların ve immünobiyolojik preparatların (aşılar ve serumlar) bakteriyel kontaminasyonunu önlemek için kullanılır. Kloroform, toluen ve eter gibi maddeler çoğunlukla besin ortamına eklenir. Ortamı bu koruyuculardan arındırmak gerekirse 56 derecede su banyosunda ısıtılır ve koruyucular buharlaşır. Aşıları veya serumları korumak için mertiolat, borik asit, formalin kullanılır.

biyolojik yöntem sterilizasyon Biyolojik sterilizasyon, antibiyotik kullanımına dayanmaktadır. Bu yöntem virüslerin yetiştirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

Sterilizasyon- biriktirme; vejetatif ve spor formlarındaki patojenik ve patojenik olmayan mikroorganizmaların herhangi bir malzemede yok edilmesi.

Sterilizasyon için bulaşıkların hazırlanması. Laboratuvar cam malzemeleri temiz ve sterilize edilmiş olmalıdır. Yıkamak için sabun çözeltileri veya kimyasal kullanın deterjanlar. Yeni yemekler% 1-2'lik bir solüsyonda önceden kaynatılır hidroklorik asit, daha sonra camın sızmasını önlemek için. Akan suda yıkanan bulaşıklar distile su ile durulanır ve kurutulur.

bakteriyolojik tüpler. Konik, buzlu şişeler, bir gazlı bezle kaplanmış, sıkıca bükülmüş pamuk yünü rulolarından oluşan pamuklu gazlı bez tıpalarla kapatılır. Dış kapak şeklindeki metal tıpalar da bakteriyolojik test tüpleri için geliştirilmiştir. Pamuk tıkaçların yüksek sıcaklıklarda sterilizasyonunun, pamuk yününden Brucella gibi bazı hassas bakterilerin büyümesini engelleyen maddelerin salınmasına yol açtığı dikkate alınmalıdır.

Pipetleri monte ederken, üst uca bir pamuklu çubuk sokulur. Pasteur pipetlerinin kapalı bir kapileri olmalıdır. Ölçülen her bir pipet, ağzından başlayarak tüm uzunluğu boyunca sarmal şeklinde 4-5 cm genişliğinde uzun bir kağıt şeridi ile sarılır. Pastör pipetleri 10-20 parça halinde kağıda, test tüpleri - 15-20 parça halinde sarılır. Her tür pipet en iyi şekilde sterilizasyondan önce ve sonra özel metal kutularda saklanır. Şişelerin üzerindeki tıpalar ayrıca kağıt kapaklarla kapatılmıştır.

Sterilizasyondan önce toplanmış halde temiz Petri kapları 3-4 parça halinde kağıda sarılır. Sterilizasyondan sonra kağıt, steril cam eşyayı mikroflora kontaminasyonundan korur.

Sterilizasyondan önce bulaşıklar, hava sirkülasyonu sağlamak için çok sıkı olmayacak şekilde bir kurutma kabinine yerleştirilir ve kağıt ve pamuk yünü daha yüksek bir sıcaklıkta kömürleşeceğinden sıcaklığın 180 ° C'yi geçmediğinden emin olun. Sterilizasyon tamamlandıktan sonra kurutma kabini o zamana kadar açılmaz. İçindeki sıcaklık 70-80°C'ye düşene kadar, çünkü keskin düşüş sıcaklıklar camı kırabilir.

Züccaciye, içindeki besin ortamının en az 1 atm basınç altında otoklavlanarak sterilize edilmesi amaçlanıyorsa, önceden sterilize edilmez. Ortamı sıvı buharla veya bir otoklavda 0,5 atm'den fazla olmayan bir basınç altında sterilize ederken. steril kaplar kullanılmalıdır.

Kuru ısıtılmış hava ile sterilizasyon. Yöntem, temiz cam eşyaları sterilize etmek için kullanılır. Bunu yapmak için, çift cidarlı özel bir fırın olan Pasteur fırınını kullanın. Dışı ısıya dayanıklı malzeme ile kaplanmıştır. Üstte bir termometre var. Isıya dayanıklı cilt ile iç kısım arasında metal kutu altta otomatik bir elektrikli ısıtma elemanı var. Kurutma kabini elektriğe bağlandığında içindeki hava ısınır. Ayarlanan sıcaklığa ulaşıldığında, sterilizasyonun başlama zamanı not edilir. Sterilizasyon modu: 155-160°C sıcaklıkta - maruz kalma 2 saat, 165-170°C'de - 1-1.5 saat, 180°C'de - 1 saat Sterilizasyon süresinden sonra ısıtma durdurulur.

otoklavlama. Bu, basınç altında yüksek sıcaklık ile birleştirilmiş buhar sterilizasyonudur. özel aparat- otoklav. Doymuş buhar daha soğuk bir cisimle karşılaştığında, buhar yoğunlaşarak suya dönüşür ve çok sayıda sıcaklık. Ek olarak, sterilize edilecek malzemenin iç kısımlarına nüfuz etmesine katkıda bulunan buhar hacmi azalır. Bir ön koşul, gerçekten doymuş buharın sağlanmasıdır, böylece soğuk bir nesneyle teması anında yoğuşmaya ve ısınmaya yol açar. Endüstri, dikey ve yatay otoklavlar üretir.

Dikey bir otoklav, hermetik olarak kapatılmış bir kapakla kapatılmış, çift cidarlı, silindirik bir metal kazandır. Duvarlar arasında hunili özel bir musluktan belirli bir seviyeye kadar su dökülür. Kazanın iç duvarı, üst kısımda delikler ve alt kısımda su ısıtıldığında buharın kazandaki havayı değiştirdiği bir musluk ile donatılmıştır. Otoklavın üstüne metal bir koruyucu çerçeve konur ve bununla otoklavın kendisi arasında olmalıdır. boş alan. Otoklav, güç kaynağı açılarak ısıtılır.

Otoklav sterilize edilecek malzeme ile yüklenir, kapak ve içinden suyun döküldüğü valf kapatılır, alt valf geçici olarak açılır. Isıtılan su, otoklavın duvarları arasında kaynar, ortaya çıkan buhar yükselir ve iç duvarın üst açıklıklarından kazana geçerek havayı alttaki açık musluktan dışarı iter. Tüm hava dışarı atıldığında ve buhar eşit bir akışla dışarı çıkmaya başladığında alt musluk kapatılır. Sonuç olarak, otoklav içindeki buhar basıncı yükselir. Sterilizasyonun başlangıcı, basıncın önceden belirlenmiş bir değere (manometreye göre) ulaştığı an olarak kabul edilir. Isıtma, buhar basıncını aynı seviyede tutarak sterilizasyon boyunca düzenlenir. Otoklav içindeki basıncın aşırı artması durumunda, fazla buharın otomatik olarak dışarı çıkmasını sağlayan bir emniyet valfi bulunmaktadır.

Buhar basıncı arttıkça otoklavdaki sıcaklık da buna bağlı olarak artar.

Manometre, ortam sıcaklığını dikkate almadan buhar basıncını gösterir. atmosferik basınç(760 mm Hg). Sterilizasyon süresi dolduktan sonra otoklav kapatılır. Manometrenin sıfır okumasında soğuduktan sonra, buharı serbest bırakmak için valfi açın.

Yatay bir otoklav, tasarım açısından dikey bir otoklavdan farklıdır, ancak çalışma prensibi aynıdır.

virolojik kısırlaştırma patolojik hayvan

Laboratuvara patolojik materyal gönderilirken doldurulacak örnek formlar

Termostat- sabit bir sıcaklığı korumak için bir cihaz - mikroorganizmaların kültürlerini büyütmek için kullanılır. Uzun süre muhafaza edildiği bir dolaptır (Resim 1). belirli sıcaklık. Birçok mikroorganizmanın üremesi için optimum sıcaklık 37 ºС'dir. Termostatlar kuru hava ve sudur.

Kurutma kabini(Pastör fırını) kapların, aletlerin ve nişasta, tebeşir gibi kuru malzemelerin kuru ısı sterilizasyonu için kullanılır (Şekil 2). Sterilize edilecek malzeme önceden kağıda sarılır ve duvarlara değmeyecek şekilde bir dolaba yerleştirilir. Sterilizasyon, iki saat boyunca 160 ºС sıcaklıkta gerçekleştirilir. Sıcaklığın 180 ºС üzerine çıkarılması önerilmez: pamuk tıkaçlar ve kağıt bozulmaya başlar (kahverengiye döner, kırılgan hale gelir). Sterilize edilen malzeme dolap kapatılıp soğuduktan sonra çıkarılır, dolap içi sıcaklığın oda sıcaklığına eşit olması daha iyidir.

Koloni sayma cihazı(Şekil 3) - elektrikli kalemle donatılmış yarı otomatik bir sayaç yay cihazı Petri kaplarındaki bakteri kolonilerini saymak için. Bardak
Bakteri kolonileri içeren Petri, raster bir cam üzerine baş aşağı yerleştirilir. Petri kabının tabanının koloninin konumuna karşılık gelen bölümü üzerine elektropenin hafif bir basıncı, cam üzerinde bir iz bırakır. Bu durumda tutucu yükselir, devre kapanır ve sayaç okuması bir artar. Bakteri kolonilerinin sayısı, nabız sayacının sayım başlamadan önce ve saydıktan sonra okumaları arasındaki fark hesaplanarak sayılır.

Otoklav(Şekil 4) - tabakları ve besin ortamlarını basınç altında buharla sterilize etmek için tasarlanmış kalın duvarlı bir aparat. Bu, çift metal cidarlı ve kapaklı hermetik bir kazan. Duvarlar arasındaki boşluk (buhar odası) su ile doldurulur. İç kısım(sterilizasyon odası) bir basınç göstergesi, emniyet valfleri ve su ve buharı boşaltmak için bir musluk ile donatılmıştır. Sızdırmazlık oluşturmak için otoklav, lastik contalı bir kapakla sıkıca kapatılır. Besin ortamının 0,5 ila 1,0 MPa basınç altında 20 ... 30 dakika sterilizasyonu için kullanılır.

1 - gövde; 2 - termometre; 1 - kapak; 2 - gövde;

3 - kapı; 4 - potansiyometre; 3 - redüktör; 4 - kontrol ünitesi;

5 - geçiş anahtarı; 6 - lamba; 5 - işaretleme; 6 - termometre

7 - havalandırma delikleri

Şekil 1 - Termostat Şekil 2 - Kurutma kabini

1 - Petri kabı için masa; 2 - yay tertibatlı bir kalem;

3 - sayacın göstergesi; 4 - nabız sayacını açmak için geçiş anahtarı; 5 - sayaç aydınlatma lambasını açmak için geçiş anahtarı

Şekil 3 - Mikroorganizma kolonilerini saymak için cihaz

Kuru ısı ile sterilizasyon kuru ısı kabinlerinde (Pastör fırını) yapılmaktadır. Kuru ısı ile sterilize edilmiştir laboratuvar züccaciye. Malzemenin eşit şekilde ısıtılması için fırına gevşek bir şekilde yüklenir. Dolap kapağı sıkıca kapatılır, elektrikli ısıtıcı çalıştırılır ve sıcaklık 160-165 0C'ye getirilir ve 1 saat sterilize edilir. Sterilizasyonun sonunda ısıtmayı kapatın, ancak fırın soğuyana kadar kabin kapısını açmayın (aksi takdirde soğuk hava tencerede çatlaklara neden olur). Sterilizasyon modu: 160°С - 60 dk, 180°С - 15 dk, 200°С - 5 dk. Sıvılar, kültür ortamı, kauçuk ve sentetik malzemeler kuru ısı ile sterilize edilmemelidir.

Buhar basınçlı sterilizasyon pansumanlara, cerrahi çarşaflara, cerrahi Aletler, besin ortamı, laboratuvar cam malzemeleri, enfekte malzeme, enjeksiyon çözeltileri. Malzeme kaplara (bixes) yerleştirilir. Bixin alt kısmına sterilizasyondan sonra nemi emen kumaş pedler yerleştirilmiştir. Malzemenin sterilitesi 3 gün süreyle muhafaza edilir. Bardak ve test tüplerindeki enfekteli materyal, kapaklı metal kaplarda sterilize edilir.

Basınç altında buhar sterilizasyonu bir otoklavda gerçekleştirilir. Tek bir tedavi ile bakterilerin hem vejetatif hem de spor formları ölür. Besin ortamları, doğal proteinler, sıvılar, kauçuk parçalı cihazlar içeren ortamlar dışında, basınç altında buharla sterilize edilir. Basit ortamlar (MPA, MPB) 120°C'de (1 atm) 20 dakika sterilize edilir. Doğal proteinler ve karbonhidratlar içeren ortamlar bu sıcaklıkta sterilize edilemez çünkü bunlar ısıtıldığında kolayca değişen maddelerdir. Karbonhidratlı ortamlar fraksiyonel olarak 100 0 C'de veya otoklavda 112 0 C'de (5 atm.) 10-15 dakika sterilize edilir. Çeşitli sıvılar, lastik hortumlu cihazlar, tapalar, bakteri mumları ve filtreler 120 0 C'de (1 atm.) 20 dakika sterilize edilir.

Enfekte olan materyal (test tüpleri, kaplar içindekiler) özel metal kovalara veya buharın nüfuz etmesi için delikli tanklara konur ve 126 0 C'de (1,5 atm.) 1 saat sterilize edilir. Aletler ayrıca spor bakterileri ile çalıştıktan sonra sterilize edilir.

2 sterilizasyon modu vardır:

1. Bitkisel formlarla ilgili olarak buharın antibakteriyel etkisi ortaya çıktığında, bir otoklavda veya vidasız bir kapak ve açık bir egzoz valfi olan bir Koch aparatında akan buhar. Vitamin ve karbonhidrat, üre, süt, patates ve jelatin içeren ortamlar bu şekilde sterilize edilir. Tam birikme için, arka arkaya 3 gün boyunca 20-30 dakika fraksiyonel sterilizasyon (100 0 C'de) kullanılır. Tartışmayı da öldürür.
2. Buhar basınçlı sterilizasyon en etkili yöntem ifade. Pansumanlar, çarşaflar 1 atm'de sterilize edilir. 15-20 dk, enfekte materyal 1.5-2 atm'de 20-25 dk.

Sıcaklığın mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

Sıcaklık - önemli faktör mikroorganizmaların aktivitesini etkiler. Mikroorganizmalar için minimum, optimum ve maksimum sıcaklıklar vardır. En uygun mikropların en yoğun üremesinin meydana geldiği sıcaklık. Asgari- mikroorganizmaların hayati aktivite göstermediği sıcaklık. Maksimum- üzerinde mikroorganizmaların ölümünün meydana geldiği sıcaklık.

Sıcaklıkla ilgili olarak, 3 mikroorganizma grubu ayırt edilir:

2. Mezofiller. Optimum - 30-37°С. Asgari - 15-20°C. maksimum - 43-45°C. Sıcakkanlı hayvanların vücudunda yaşarlar. Bunlar, çoğu patojenik ve fırsatçı mikroorganizmaları içerir.

3. Termofiller. Optimum - 50-60°C. Asgari - 45°C. maksimum - 75°С. Kaplıcalarda yaşarlar, gübrenin, tahılın kendi kendine ısınma süreçlerine katılırlar. Sıcakkanlı hayvanların vücudunda üreyemedikleri için tıbbi bir önemleri yoktur.

Olumlu eylem optimal sıcaklık Mikroorganizmaların yetiştirilmesinde kullanılan amacıyla laboratuvar teşhisi, aşıların ve diğer ilaçların hazırlanması.

Frenleme eylemi Düşük sıcaklık depolama için kullanılır ürünler ve mikroorganizmaların kültürleri bir buzdolabında. Düşük sıcaklık, çürütücü ve fermantasyon işlemlerini durdurur. Düşük sıcaklıkların etki mekanizması, hücredeki metabolik süreçlerin inhibisyonu ve bir anabiyoz durumuna geçiştir.

felaket eylemi yüksek sıcaklık (maksimumun üzerinde) sterilizasyonda kullanılır . mekanizma eylemler - proteinin (enzimler) denatürasyonu, ribozomlarda hasar, ozmotik bariyerin ihlali. Yüksek sıcaklığın etkisine en duyarlı olanlar psikrofiller ve mezofillerdir. özel Sürdürülebilirlik göstermek anlaşmazlıklar bakteriler.

Radyant enerji ve ultrasonun mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

İyonlaştırıcı olmayan (morötesi ve kızılötesi güneş ışınları) ve iyonlaştırıcı radyasyon (g-ışınları ve yüksek enerjili elektronlar) vardır.

iyonlaştırıcı radyasyon güçlü bir nüfuz edici etkiye sahiptir ve hücresel genoma zarar verir. mekanizma Zarar verici eylem: iyonlaşma mutasyonların veya hücre ölümünün gelişmesiyle birlikte makromoleküller. Aynı zamanda, mikroorganizmalar için öldürücü dozlar, hayvanlar ve bitkiler için olduğundan daha yüksektir.

mekanizma zarar veren eylem UV ışınları: DNA molekülünde timin dimerlerinin oluşumu , hücre bölünmesini durduran ve ölümlerinin ana nedenidir. UV ışınlarının zararlı etkisi, hayvanlar ve bitkilerden çok mikroorganizmalar için daha belirgindir.

ultrason(ses dalgaları 20 bin Hz) bakterisidal etkiye sahiptir. mekanizma: eğitim hücrenin sitoplazmasında kavitasyon boşlukları 10 bin atm'ye kadar sıvı buhar ve basınçla dolu olan içlerinde ortaya çıkar. Bu, yüksek oranda reaktif hidroksil radikallerinin oluşumuna, hücresel yapıların tahrip olmasına ve organellerin depolimerizasyonuna, moleküllerin denatürasyonuna yol açar.

İyonlaştırıcı radyasyon, UV ışınları ve ultrason kullanılır. sterilizasyon için.

Kurutmanın mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

Su, mikroorganizmaların normal çalışması için gereklidir. Ortamın neminin azalması, hücrelerin dinlenme durumuna ve ardından ölüme geçişine yol açar. mekanizma kurutmanın zararlı etkisi: sitoplazmanın dehidrasyonu ve protein denatürasyonu.

Patojenik mikroorganizmalar kurumaya karşı daha hassastır: gonore, menenjit etkenleri, Tifo, dizanteri, frengi vb. Bakteriyel sporlar, protozoan kistler, balgam mukusuyla korunan bakteriler (tüberküloz basili) daha dirençlidir.

Uygulamada kurutma kullanılır konserve için et, balık, sebze, meyve, şifalı otların hazırlanmasında.

Vakum altında dondurarak kurutma liyofilizasyon veya dondurarak kurutma. O kullanılıyor kültürleri korumak yıllarca (10-20 yıl) bu durumda canlılıklarını kaybetmeyen ve özelliklerini değiştirmeyen mikroorganizmalardır. Mikroorganizmalar bu nedenle bir anabiyoz durumundadır. Liyofilizasyon kullanılır uyuşturucu üretiminde canlı mikroorganizmalardan öbiyotikler, fajlar, canlı aşılar verem, veba, tularemi, bruselloz, grip vb. hastalıklara karşı

Aksiyon kimyasal faktörler mikroorganizmalar üzerinde.

Kimyasallar mikroorganizmaları farklı şekillerde etkiler. Kimyasalların doğasına, konsantrasyonuna ve etki süresine bağlıdır. Yapabilirler büyümeyi teşvik etmek(enerji kaynağı olarak kullanılır), sağlayın mikrop öldürücü, mikrostatik, mutajenik eylem veya yaşam süreçlerine kayıtsız olabilir

Örneğin: %0,5-2'lik glikoz çözeltisi mikroplar için besin kaynağıdır ve %20-40'lık çözeltinin depresif etkisi vardır.

Mikroorganizmalar için, ortamın optimum pH değeri. Simbiyontların ve insan patojenlerinin çoğu için nötr, zayıf alkali veya hafif asidik bir ortamdır. PH'daki artışla, mikroorganizmaların büyümesi dururken, asit tarafına daha sık kayar. Ve sonra ölüm gelir. mekanizma: enzimlerin hidroksil iyonları tarafından denatürasyonu, hücre zarının ozmotik bariyerinin ihlali.

sahip kimyasallar Antimikrobiyal etkinlik, dezenfeksiyon, sterilizasyon ve konservasyon için kullanılır.

Biyolojik faktörlerin mikroorganizmalar üzerindeki etkisi.

Biyolojik faktörler- Bu çeşitli formlar mikropların birbirleri üzerindeki etkisi ve ayrıca makroorganizmada kaldıkları süre boyunca bağışıklık faktörlerinin (lizozim, antikorlar, inhibitörler, fagositoz) mikroorganizmalar üzerindeki etkisi. Farklı organizmaların bir arada yaşaması simbiyoz. Aşağıdakiler var formlar simbiyoz.

Karşılıklılık- her iki partner de karşılıklı fayda sağladığında (örneğin nodül bakterileri ve baklagiller) bu tür birlikte yaşama.

Zıtlık- bir organizmanın, çevresel koşullara daha iyi uyum sağlaması nedeniyle (örneğin, normal bağırsak mikroflorası ve bağırsak enfeksiyonlarının patojenleri) metabolik ürünleriyle (asitler, antibiyotikler, bakteriyosinler) başka bir organizmaya zarar verdiği (ölümüne kadar) bir ilişki biçimi.

Metabiyoz- bir organizmanın diğerinin neden olduğu sürece devam ettiği (atık ürünlerini kullandığı) ve çevreyi bu ürünlerden kurtardığı bir birlikte yaşama şekli. Bu nedenle, daha fazla gelişme için koşullar yaratılır (nitrifikasyon ve amonyak bakterileri).

uyduculuk- birlikte yaşayanlardan biri diğerinin büyümesini uyarır (örneğin, maya ve sarsinler, besin ortamlarına daha fazla ihtiyaç duyan diğer bakterilerin büyümesini destekleyen maddeler üretir).

kommensalizm- bir organizma, zarar vermeden (örneğin, E. coli ve insan vücudu) diğerinin pahasına (faydaları) yaşar.

Predasyon- biri diğerini yakaladığında, emdiğinde ve sindirdiğinde organizmalar arasındaki düşmanca ilişkiler (örneğin, bağırsak amipleri bağırsak bakterileriyle beslenir).

Sterilizasyon.

Sterilizasyon- bu, sporlar da dahil olmak üzere tüm canlı mikrop türlerinin nesnesinde tamamen yok olma sürecidir.

3 grup sterilizasyon yöntemi vardır: fiziksel, kimyasal ve fiziko-kimyasal. Fiziksel yöntemler: yüksek sıcaklık, UV radyasyonu, iyonlaştırıcı radyasyon, ultrason, steril filtrelerden filtrasyon yoluyla sterilizasyon. Kimyasal Yöntemler– kimyasalların kullanımı ve ayrıca gaz sterilizasyonu. Fiziksel ve kimyasal yöntemler – paylaşım fiziksel ve kimyasal yöntemler. Örneğin, yüksek sıcaklık ve antiseptikler.

Yüksek sıcaklıkta sterilizasyon .

Bu yöntem şunları içerir: 1) kuru ısı sterilizasyonu; 2) basınçlı buhar sterilizasyonu; 3) buharlı sterilizasyon; 4) tidalizasyon ve pastörizasyon; 5) kalsinasyon; 6) kaynamak.

Kuru ısı sterilizasyonu.

Yöntem dayanmaktadır 45 dakika boyunca 165-170 ° C'ye ısıtılmış havanın bakterisidal etkisi üzerine.

Teçhizat: kuru fırın (pastör fırın). pastör fırını - metal dolapçift ​​cidarlı, ısıyı iyi iletmeyen bir malzeme (asbest) ile dıştan kaplanmıştır. Isıtılan hava, duvarlar arasındaki boşlukta dolaşır ve özel açıklıklardan çıkar. Çalışırken, istenen sıcaklık ve sterilizasyon süresini kesinlikle izlemek gerekir. Sıcaklık daha yüksekse, pamuklu tıkaçlar, bulaşıkların sarıldığı kağıt kömürleşir ve daha düşük bir sıcaklıkta daha uzun bir sterilizasyon gerekir. Sterilizasyonun sonunda kabin ancak soğuduktan sonra açılır, aksi takdirde ani sıcaklık değişimi nedeniyle cam eşyalar çatlayabilir.

a) steriliteyi korumak için cam, metal, porselen eşyalar, kağıda sarılmış ve pamuklu-tül tıpalarla kapatılmış tabaklar (165-170°C, 45 dk);

b) ısıya dayanıklı toz ilaçlar- talk, beyaz kil, çinko oksit (180-200°C, 30-60 dak);

c) mineral ve sebze yağları, katı yağlar, lanolin, vazelin, mum (180-200°C, 20-40 dk).

Basınç altında buhar sterilizasyonu.

Mikrobiyolojik ve klinik pratikte en etkili ve yaygın olarak kullanılan yöntemdir.

Yöntem dayanmaktadır bir mikrobiyal hücrenin proteinleri üzerinde basınç altında buharın hidrolize edici etkisi üzerine. Isı ve buharın birleşik etkisi, yüksek verim en dirençli spor bakterilerini öldüren bu sterilizasyon.

Ekipman bir otoklavdır. Otoklav, hermetik olarak kapatılmış vidalı bir kapakla birbirine yerleştirilmiş 2 metal silindirden oluşur. Dış kazan bir su-buhar odası, iç kazan bir sterilizasyon odasıdır. Manometre, buhar vanası, emniyet ventili, su göstergesi camı bulunmaktadır. Sterilizasyon odasının üst kısmında, su-buhar odasından buharın geçtiği bir açıklık vardır. Basınç ölçer, sterilizasyon haznesindeki basıncı belirlemek için kullanılır. Basınç ve sıcaklık arasında belirli bir ilişki vardır: 0,5 atm - 112 °C, 1-01,1 atm - 119-121 °C, 2 atm - 134 °C. Emniyet valfi - aşırı basınca karşı korumak için. Basınç ayarlanan değerin üzerine çıktığında valf açılır ve fazla buharı dışarı atar. Çalıştırma prosedürü. Seviyesi bir su göstergesi camı ile kontrol edilen otoklava su dökülür. Malzeme sterilizasyon haznesine yerleştirilir ve kapak sıkıca vidalanır. Buhar valfi açık. Isıtmayı açın. Su kaynadıktan sonra, musluk yalnızca havanın tamamı dışarı atıldığında kapatılır (buhar sürekli güçlü bir kuru akım halinde akar). Musluk çok erken kapatılırsa, basınç göstergesi uyuşmayacaktır. istenen sıcaklık. Vanayı kapattıktan sonra kazandaki basınç kademeli olarak artar. Sterilizasyonun başlangıcı, manometrenin ayarlanan basıncı gösterdiği andır. Sterilizasyon süresinin sonunda, ısıtmayı durdurun ve basınç göstergesi 0'a dönene kadar otoklavı soğutun. Buhar daha önce serbest bırakılırsa, hızlı basınç değişikliği nedeniyle sıvı kaynayabilir ve tapaları dışarı itebilir (sterilite bozulur). Manometrenin ibresi 0'a döndüğünde, buhar çıkış valfini dikkatlice açın, buharı boşaltın ve sterilize edilecek nesneleri çıkarın. İbre 0'a döndükten sonra buhar çıkmazsa, su yoğunlaşabilir ve tıpaları ve sterilize edilecek malzemeyi ıslatabilir (sterilite tehlikeye girer).

Malzeme ve sterilizasyon modu:

a) cam, metal, Çin, iç giyim, lastik ve mantar tıpalar, kauçuktan, selülozdan, tahtadan mamul ürünler, sargılar (pamuk, gazlı bez) (119 - 121 °C, 20-40 dk));

b) fizyolojik salin, enjeksiyon çözeltileri, göz damlaları, damıtılmış su, basit besin ortamı - MPB, MPA (119-121°C, 20-40 dakika);

c) hermetik olarak kapatılmış kaplarda mineral, bitkisel yağlar (119-121°C, 120 dakika);

Buhar sterilizasyonu.

Yöntem dayanmaktadır buharın (100°C) sadece vejetatif hücrelere göre bakterisidal etkisi üzerine.

Teçhizat– vidasız kapaklı otoklav veya Koch aparatı.

Koch aparatı - Bu, 2/3'ü su ile dolu olan çift tabanlı metal bir silindirdir. Kapakta termometre ve buhar çıkışı için delikler vardır. Dış duvar, ısıyı kötü ileten bir malzemeyle (linolyum, asbest) kaplanmıştır. Sterilizasyonun başlangıcı - kaynar su ve buharın sterilizasyon odasına girmesinden itibaren geçen süre.

Malzeme ve sterilizasyon modu. Bu yöntem malzemeyi sterilize eder, 100°C'nin üzerindeki sıcaklıklara dayanamayan: vitaminler, karbonhidratlar (Giess, Endo, Ploskirev, Levin media), jelatin, süt içeren besleyici ortamlar.

100 ° C'de sporlar ölmez, bu nedenle birkaç kez sterilizasyon yapılır - fraksiyonel sterilizasyon - 3 gün boyunca günde 20-30 dakika.

Sterilizasyonlar arasında materyal, oda sıcaklığı sporların bitkisel formlara dönüşmesi için. 100°C'de sonraki ısıtmada öleceklerdir.

Tyndallization ve pastörizasyon.

Tyndalizasyon - 100°C'nin altındaki sıcaklıklarda fraksiyonel sterilizasyon yöntemi. Nesneleri sterilize etmek için kullanılır, 100°C'ye dayanamayan: serum, asit sıvısı, vitaminler . Tyndalizasyon 56°C'deki su banyosunda 1 saat 5-6 gün süreyle gerçekleştirilir.

pastörizasyon - kısmi nispeten düşük bir sıcaklıkta gerçekleştirilen sterilizasyon (sporlar ölmez) bir kere. Pastörizasyon 70-80°C'de 5-10 dakikada veya 50-60°C'de 15-30 dakikada yapılır. Pastörizasyon, yüksek sıcaklıklarda niteliklerini kaybeden nesneler için kullanılır. kullanmak İçin bazı Gıda Ürünleri: süt, şarap, bira . Onlara zarar vermez emtia değeri, ancak sporlar canlı kalır, bu nedenle bu ürünler soğukta saklanmalıdır.